一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從貫葉連翹中高效提純金絲桃素的方法，包括以下步驟：以堿液為溶劑提取貫葉連翹中的金絲桃素，得到提取液A；將提取液A的pH值調(diào)節(jié)至酸性，得到溶液B；然后離心得上清液C；經(jīng)過(guò)模擬移動(dòng)床色譜上進(jìn)行分離純化，得到富含金絲桃素的洗脫液D；將洗脫液D濃縮，再經(jīng)噴霧干燥得到含金絲桃素5%～6%的終產(chǎn)物；本發(fā)明所述金絲桃素的提取方法，步驟簡(jiǎn)單，產(chǎn)率較高，以本發(fā)明的技術(shù)方案得到的金絲桃素總收率為85%以上。
【專利說(shuō)明】一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從貫葉連翹中提取分離制備金絲桃素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金絲桃素(Hypericin)是貫葉連翹中最具有生物活性的物質(zhì)，除了貫葉連翹外，還廣泛分布于金絲桃屬Euhypericum組其他植物和Campyloporus組植物中。金絲桃素是金絲桃屬植物中一種重要的次生代謝產(chǎn)物，1830年首次被正式報(bào)道，它是一種天然光敏型的二蒽酮類化合物。金絲桃素具有抗病毒，抗抑郁，抗腫瘤，治療失憶，延緩衰老，預(yù)防和治療癡呆癥，抗炎鎮(zhèn)痛，抗禽流感病毒，視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)等功能，并用于光動(dòng)力治療。在過(guò)去的幾十年中越來(lái)越多的證據(jù)表明金絲桃素具有很大的藥用潛力和臨床價(jià)值。但是最新大量研究表明金絲桃素類成分對(duì)RNA類病毒有顯著的抑制作用。其中最熱點(diǎn)的是人體免疫缺陷病毒(HIV)。
[0003]目前現(xiàn)有技術(shù)中，金絲桃素的提取純化工藝有醇提酸沉結(jié)晶法、大孔樹(shù)脂吸附法、醇提萃取層析法、CTAB反膠束萃取法、超聲提取大孔樹(shù)脂吸附法、以及超臨界CO2萃取法等。
[0004]模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)是將模擬移動(dòng)床的設(shè)計(jì)思想引入液相制備色譜中，既保持了液相制備色譜的消耗小、分離純度高，以及可變溫操作等優(yōu)點(diǎn)，又克服了通常液相制備色譜不能連續(xù)操作的缺點(diǎn)，使其具有分離能力強(qiáng)，設(shè)備體積小，投資成本低，并特別有利于分離熱敏性高及難分離的物系等特點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在提供一種能夠從貫葉連翹中高效提純金絲桃素的方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案為:一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，包括以下步驟:
(1)以堿液為提取溶劑，提取貫葉連翹中的金絲桃素，得到提取液A;
(2)將提取液A的pH值調(diào)節(jié)至酸性，得到溶液B;
(3)將溶液B離心，分離得到上清液C；
(4)將上清液C經(jīng)過(guò)模擬移動(dòng)床色譜上進(jìn)行分離純化，得到富含金絲桃素的洗脫液D；
(5)將洗脫液D濃縮，再經(jīng)噴霧干燥得到金絲桃素含量為5%-6%的終產(chǎn)物。
[0007]本發(fā)明所述步驟I M中，所述堿液為1%的氫氧化鈉溶液，提取溶劑體積與原料質(zhì)量之比為20-25L/kg，提取方式可以是加熱浸提、超聲波輔助提取、微波輔助提取。
[0008]本發(fā)明所述步驟[2沖，使用10%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH=3-4。
[0009]本發(fā)明所述步驟[3]中，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/min,離心時(shí)間lOmin。
[0010]本發(fā)明所述步驟(4)中，模擬移動(dòng)床色譜填充的吸附劑為非極性大孔吸附樹(shù)脂(如D101，HPD100)，水洗區(qū)為純化水，解吸劑為80%乙醇，樹(shù)脂吸附再生溶劑為95%乙醇或2-4%氫氧化鈉水溶液；吸附區(qū)流速I-2BV/h ;水洗區(qū)流速I-3BV/h ;解吸區(qū)流速I-3BV/h ;再生區(qū)流速2-3BV/h ;切換時(shí)間為600-800s ;溫度控制在40°C-60°C ;壓力控制在
0.2MPa -0.6MPa。
[0011]本發(fā)明所述步驟I5j中，將洗脫液D濃縮至固形物質(zhì)量百分含量為30-40%，再經(jīng)噴霧干燥得到金絲桃素終產(chǎn)物，噴霧干燥的參數(shù)為:進(jìn)風(fēng)溫度120-140°C，出風(fēng)溫度40-60。。。
[0012]進(jìn)一步地，本發(fā)明所述步驟丨41中，模擬移動(dòng)床色譜的切換時(shí)間優(yōu)選700-800s。
[0013]進(jìn)一步地，本發(fā)明所述步驟[4丨中，模擬移動(dòng)床色譜填充的吸附劑為DlOl或HPD100。
[0014]進(jìn)一步地，本發(fā)明所述步驟[5)中，優(yōu)選將洗脫液D濃縮至固形物質(zhì)量百分含量為30%。
[0015]本發(fā)明所述金絲桃素的提取方法，步驟簡(jiǎn)單，產(chǎn)率較高，以本發(fā)明的技術(shù)方案得到的金絲桃素總收率為85%以上。
【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1
稱取貫葉連翹粗粉5kg，加入125L的1%氫氧化鈉水溶液，在95-100°C浸提2h，得到提取液A。再用10%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)提取液A的pH至3-4，得到溶液B。將溶液B置入離心機(jī)中，設(shè)置離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/min，離心lOmin，得到上清液C。上清液C進(jìn)入模擬移動(dòng)床吸附分離，吸附劑為HPDlOO大孔吸附樹(shù)脂；水洗區(qū)為純化水，水洗除去雜質(zhì)；解吸劑為80%乙醇；樹(shù)脂再生溶劑為95%乙醇；吸附區(qū)流速1.5BV/h ;水洗區(qū)流速1.5BV/h ;解吸區(qū)流速2BV/h ;再生區(qū)流速3BV/h ;切換時(shí)間為8`00s ;溫度45°C ;壓力0.4MPa。將得到富含金絲桃素的洗脫液D濃縮至固形物質(zhì)量百分含量為30%，再經(jīng)噴霧干燥得到29g金絲桃素終產(chǎn)物，純度為5.4%，總收率為88.0%。噴霧干燥的參數(shù)為:進(jìn)風(fēng)溫度130°C，出風(fēng)溫度40°C。
[0017]實(shí)施例2
稱取貫葉連翹粗粉8kg，加入160L的1%氫氧化鈉水溶液，在95-100°C浸提2h，得到提取液A。再用10%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)提取液A的pH至3-4，得到溶液B。將溶液B置入離心機(jī)中，設(shè)置離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/min，離心lOmin，得到上清液C。上清液C進(jìn)入模擬移動(dòng)床吸附分離，吸附劑為DlOl大孔吸附樹(shù)脂；水洗區(qū)為純化水，水洗除去雜質(zhì)；解吸劑為80%乙醇；樹(shù)脂再生溶劑為95%乙醇；吸附區(qū)流速2BV/h ;水洗區(qū)流速2BV/h ;解吸區(qū)流速2BV/h ;再生區(qū)流速3BV/h ;切換時(shí)間為750s ;溫度45°C ;壓力0.4MPa。將得到富含金絲桃素的洗脫液D濃縮至固形物質(zhì)量百分含量為30%，再經(jīng)噴霧干燥得到47.5g金絲桃素終產(chǎn)物，純度為5.2%，總收率為86.7%。噴霧干燥的參數(shù)為:進(jìn)風(fēng)溫度130°C，出風(fēng)溫度40°C。
[0018]實(shí)施例3
稱取貫葉連翹粗粉10kg，加入200L的1%氫氧化鈉水溶液，在95-100°C浸提2h，得到提取液A。再用10%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)提取液A的pH至3-4，得到溶液B。將溶液B置入離心機(jī)中，設(shè)置離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/min，離心lOmin，得到上清液C。上清液C進(jìn)入模擬移動(dòng)床吸附分離，吸附劑為HPDlOO大孔吸附樹(shù)脂；水洗區(qū)為純化水，水洗除去雜質(zhì)；解吸劑為80%乙醇；樹(shù)脂再生溶劑為95%乙醇；吸附區(qū)流速2BV/h ;水洗區(qū)流速3BV/h ;解吸區(qū)流速2BV/h ;再生區(qū)流速3BV/h ;切換時(shí)間為700s ;溫度50°C ;壓力0.4MPa。將得到富含金絲桃素的洗脫液D濃縮至固形物百分含量為30%，再經(jīng)噴霧干燥得到54.4g金絲桃素終產(chǎn)物，純度為5.7%，總收率為87.1%。噴霧干燥的參數(shù)為:進(jìn)風(fēng)溫度130°C，出風(fēng)溫度40°C。
[0019] 實(shí)施例4
用高效液相色譜法檢測(cè)金絲桃素的含量:
(1)色譜條件:
色譜柱:C18,4.6 X 250mm, 5 μ m
流動(dòng)相:甲醇:乙腈:水(含0.3%磷酸)，梯度洗脫
流速:1.0mL/min
進(jìn)樣量:20yL 檢測(cè)波長(zhǎng):588nm
(2)樣品測(cè)定
在上述色譜條件下，進(jìn)樣測(cè)定，以金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)品做對(duì)照，利用峰面積外標(biāo)法計(jì)算樣品中金絲桃素的含量。標(biāo)準(zhǔn)品HPLC譜圖中金絲桃素的保留時(shí)間為44.450min,實(shí)施例4產(chǎn)品HPLC譜圖中金絲桃素的保留時(shí)間為44.452min，二者在546nm和588nm都有特征吸收。
【權(quán)利要求】
1.一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，包括以下步驟: (1)以堿液為提取溶劑，提取貫葉連翹干燥全草及花朵進(jìn)行提取，得到提取液A ; ⑵將步驟I中的提取液A的pH值調(diào)節(jié)至酸性，得到溶液B; (3)將溶液B離心，分離得到上清液C ； ⑷將上清液C經(jīng)過(guò)模擬移動(dòng)床色譜上進(jìn)行分離純化，得到富含金絲桃素的洗脫液D ； (5)將洗脫液D濃縮，再經(jīng)噴霧干燥得到金絲桃素含量為5-6%的終產(chǎn)物。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，其特征在于:所述步驟⑴中，所述堿液為1%的氫氧化鈉溶液，每千克貫葉連翹原料使用20-25L提取溶劑，90-100°C浸提2-3h。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，其特征在于:所述步驟⑵中，使用10%鹽酸溶液調(diào)節(jié)提取液A的pH=3-4。
4.如權(quán)利要求3所述的一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，其特征在于:所述步驟4中，模擬移動(dòng)床色譜填充的吸附劑為非極性大孔吸附樹(shù)脂水洗區(qū)為純化水，解吸劑為80%乙醇，樹(shù)脂吸附再生溶劑為95%乙醇或2-4%氫氧化鈉水溶液；吸附區(qū)流速I-2BV/h ;水洗區(qū)流速I-3BV/h ;解吸區(qū)流速I-3BV/h ;再生區(qū)流速2-3BV/h ;切換時(shí)間為600-800s ;溫度控制在40。。-600C ;壓力控制在0.2MPa-0.6MPa。
5.如權(quán)利要求4所述的一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，其特征在于:所述步m中，模擬移動(dòng)床色譜的切換時(shí)間為700-800s。
6.如權(quán)利要求1、2、4或5所`述的一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，其特征在于:所述步驟?中，將洗脫液D濃縮至固形物質(zhì)量百分含量為30-40%，再經(jīng)噴霧干燥得到金絲桃素終產(chǎn)物；噴霧干燥進(jìn)風(fēng)溫度120-140°C，出風(fēng)溫度40-60°C。
7.如權(quán)利要求6所述的一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，其特征在于:所述步η I中，提取方式可以是超聲波輔助提取、微波輔助提取。
8.如權(quán)利要求6所述的一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，其特征在于:所述步驟?中，優(yōu)選將洗脫液D濃縮至固形物質(zhì)量百分含量為30%。
9.如權(quán)利要求1、2、4、5、7或8所述的一種從貫葉連翹中提取金絲桃素的方法，其特征在于:所述步驟W中，模擬移動(dòng)床色譜填充的吸附劑為DlOl或HPD100。
【文檔編號(hào)】C07C46/10GK103450000SQ201310463115
【公開(kāi)日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年10月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月8日
【發(fā)明者】趙永強(qiáng), 白易, 單晶雨, 廖小雪, 賈洪濤 申請(qǐng)人:白心亮