專利名稱：農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物源生物殺菌劑領(lǐng)域，具體涉及尼可霉素原藥制備方法。
背景技術(shù)：
尼可霉素類(Nikkomycins)抗生素是1976年德國研究者發(fā)現(xiàn)的，多年來國內(nèi)外一直堅(jiān)持研究開發(fā)這種全新型抗真菌藥。尼可霉素又叫新多氧霉素，是一種核苷肽類抗生素，與幾丁質(zhì)合成酶底物UDN-N-乙酰葡萄糖胺有類似的結(jié)構(gòu)，是幾丁質(zhì)合成酶的強(qiáng)競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，能有效抑制細(xì)胞壁中幾丁質(zhì)合成。尼可霉素發(fā)酵液中含有二十多種組分，其中研究較多的生物活性組分為尼可霉素 Z和X。農(nóng)用尼可霉素一般以X組分為有效成分，它具有抗真菌、殺昆蟲和殺螨蟲作用，防治效果好，抗真菌譜廣，選擇毒性強(qiáng)，由于對(duì)哺乳動(dòng)物和蜜蜂及植物均無毒害作用或毒性極低，而且在自然界容易分解，因而是一種較理想的農(nóng)用抗生素，具有良好的推廣應(yīng)用前景。中國科學(xué)院微生物研究所從東北土壤中分離到的圈卷產(chǎn)色鏈霉菌7100是尼可霉素的良好產(chǎn)生菌，它所產(chǎn)生的尼可霉素對(duì)很多植物致病真菌都有很強(qiáng)的抑制作用，田間試驗(yàn)結(jié)果也證明該抗生素對(duì)許多真菌性植物病害有很好的防治效果，同時(shí)對(duì)有害昆蟲、螨類也有一定的防治作用。關(guān)于尼可霉素的提取工藝已有報(bào)道，主要是離子交換樹脂法或減壓濃縮法。如《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2007年，汪志鑫碩士畢業(yè)論文報(bào)道的“尼可霉素提取工藝，HPLC定量分析方法及劑型初步研究”。但作為加工各種類型制劑原料的尼可霉素原藥的制備方法尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供了一種可用于各類制劑加工的尼可霉素原藥制備方法。本發(fā)明提供的一種農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，所述方法包括步驟(1)
調(diào)整唐德鏈霉菌發(fā)酵液的PH值至2-7，(2)控制所述pH的發(fā)酵液中尼可霉素重量百分比含量在O. 1%_12%，(3)以溫度50°C -15CTC在噴干塔內(nèi)對(duì)所述含量的發(fā)酵液進(jìn)行噴霧干燥。進(jìn)一步，所述步驟(I)調(diào)整所述發(fā)酵液pH值為3.0，(2)得到重量百分比含量為
O.1%-2%的所述pH的發(fā)酵液,(3)以溫度85°C在噴干塔內(nèi)對(duì)所述含量發(fā)酵液進(jìn)行噴霧干燥。用33%工業(yè)鹽酸或者90%以上草酸調(diào)整發(fā)酵液的pH值，發(fā)酵液中尼可霉素重量百分比含量一般不高于2%，含量低于O. 1%的發(fā)酵液直接拋棄或用作它用。以上步驟通過調(diào)整發(fā)酵液的pH及其中尼可霉素含量，以及噴霧干燥溫度，使得制備的尼可霉素原藥收率最高達(dá)到80%。尼可霉素原藥純度為30-40%，由于制備的尼可霉素原藥含有菌絲，在加工制劑時(shí)需要經(jīng)過粗粉碎和細(xì)粉碎，工序較復(fù)雜，能耗較高，且加工成的制劑潤濕時(shí)間較長。
進(jìn)一步，所述步驟(2)所述pH的發(fā)酵液過濾后，采用真空薄膜濃縮機(jī)在相對(duì)真空度-O. 09Mpa，溫度50°C -100°C之間濃縮發(fā)酵過濾液至重量百分比含量O. 5%_5%，按重量比濃縮發(fā)酵濾液載體=1 0. 01-1加入載體,楽;葉轉(zhuǎn)速l(Tl20r/min制楽；。優(yōu)選為，所述載體為白炭黑、高齡土、膨潤土、硅藻土、凹凸棒土、輕質(zhì)碳酸鈣、滑石粉、陶土、葉蠟石、蒙脫石、黏土、伊利石、云母粉、珍珠巖、方解石中的一種或多種的組合。較優(yōu)選為，所述步驟(2 )采用真空薄膜濃縮機(jī)濃縮所述發(fā)酵過濾液至尼可霉素含量為重量百分比4%,濃縮溫度為60°C。更優(yōu)選為，所述步驟(2)按重量比 濃縮發(fā)酵過濾液高齡土 =1 0. 05加入載體高齡土制衆(zhòng)，制衆(zhòng)時(shí)衆(zhòng)葉轉(zhuǎn)速為50r/min。以上步驟制備的尼可霉素原藥，其純度提高至50-60%，在加工制劑時(shí)，可直接進(jìn)行細(xì)粉碎，工序簡單，能耗較低。且加工而成的制劑，潤濕時(shí)間短。由于原藥中含有載體，流動(dòng)性良好，利于后續(xù)制劑加工；產(chǎn)品吸潮性降低，有效成分穩(wěn)定性提高，使原藥的儲(chǔ)存期延長。與此同時(shí)，其收率較直接噴霧干燥略有降低，由80%降為75%。進(jìn)一步，所述步驟(2)按照以下分步驟進(jìn)行A.過濾所述pH的發(fā)酵液，B.所述發(fā)酵濾液經(jīng)過001 X 1、001 X 2、001 X 3、001 X 4或001 X 5氫型樹脂吸附，流速為1/10-1/100樹脂體積/分鐘，C.采用濃度O. 01mol/L-lmol/L氨水進(jìn)行洗脫，流速為1/10-1/100樹脂體積/分鐘，D.采用001 X 12、001 X 13或001 X 14樹脂除去洗脫液中銨根離子，流速為1/10-1/100樹脂體積/分鐘，E.采用真空薄膜濃縮機(jī)濃縮所述去銨根離子洗脫液，使尼可霉素含量在重量百分比1°/Γ12%之間，濃縮時(shí)相對(duì)真空度控制在-O. 09Mpa，溫度控制在500C 100°C之間。優(yōu)選為，所述步驟(2)按照以下分步驟進(jìn)行A.過濾所述pH的發(fā)酵液，B.所述發(fā)酵濾液經(jīng)過001 X 3氫型樹脂吸附，流速為1/50樹脂體積/分鐘，C.采用濃度為O. 5mol/l的氨水進(jìn)行洗脫，流速為1/50樹脂體積/分鐘，D.采用001 X 14氫型樹脂除去洗脫液中銨根離子，流速為1/50樹脂體積/分鐘，E.濃縮所述去銨根離子洗脫液，使尼可霉素含量在
重量百分比為8%。更優(yōu)選為，所述步驟(2)采用真空薄膜濃縮機(jī)在60°C對(duì)所述去銨根離子洗脫液進(jìn)行濃縮。上述步驟制備的尼可霉素原藥純度提高到70-80%，由于去除了雜質(zhì)，為全水溶性，既可以加工成固體制劑也可以加工成液體制劑。與此同時(shí),尼可霉素原藥收率降低為60-63%。由于樹脂脫雜和脫銨等復(fù)雜工序，使得原藥生產(chǎn)成本有一定增加。本發(fā)明有益效果在于
I.本發(fā)明提供了尼可霉素原藥純度從低到高(收率從高到低)的一系列制備方法，以及最佳工藝條件，可選擇用于各類尼可霉素農(nóng)藥制劑的加工。且整體收率均高于現(xiàn)有技術(shù)的報(bào)道。2.本發(fā)明采用簡單易行的噴霧干燥工藝，且摸索出最佳的噴霧干燥溫度，噴霧干燥時(shí)溫度若低于50°C，物料會(huì)粘附在塔內(nèi)，不能順利排出，造成長時(shí)間高溫，尼可霉素收率較低；溫度在75V 85°C時(shí)，產(chǎn)品水分含量不能滿足農(nóng)藥產(chǎn)品的要求；而溫度超過85°C時(shí)，會(huì)造成產(chǎn)品高溫烘烤分解，尼可霉素收率再次降低。溫度為85°C時(shí)，尼可霉素收率最高，且干燥減重為3. 0%-3. 5%，符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求。使得工業(yè)生產(chǎn)中高收率尼可霉素原藥生產(chǎn)成為可能。
具體實(shí)施例方式在下面的實(shí)施例中進(jìn)一步說明了本發(fā)明，這并不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I
尼可霉素發(fā)酵液，用33%工業(yè)鹽酸調(diào)整pH為3.0，發(fā)酵液中尼可霉素含量為1%。秤取尼可霉素發(fā)酵液1000kg，進(jìn)入經(jīng)過預(yù)熱的噴霧干燥塔噴霧干燥，調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)溫度，使噴霧干燥時(shí)塔內(nèi)溫度維持在85°C，收集到的粉末，即得本發(fā)明的尼可霉素原藥。實(shí)施例2 尼可霉素發(fā)酵液，用33%工業(yè)鹽酸調(diào)整pH為3. 0，發(fā)酵液中尼可霉素含量為O. 8%。秤取尼可霉素發(fā)酵液1000kg，進(jìn)入經(jīng)過預(yù)熱的噴霧干燥塔噴霧干燥，調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)溫度，使噴霧干燥時(shí)塔內(nèi)溫度維持在85°C，收集到的粉末，即得本發(fā)明的尼可霉素原藥。實(shí)施例3
尼可霉素發(fā)酵液，用33%工業(yè)鹽酸調(diào)整pH為3. 0，發(fā)酵液中尼可霉素含量為1%，秤取尼可霉素發(fā)酵液1000kg，過濾發(fā)酵液，采用真空薄膜濃縮機(jī)在相對(duì)真空度-O. 09Mpa，溫度60°C下濃縮發(fā)酵過濾液使尼可霉素含量為4%。先在敞口攪拌釜中加入上述尼可霉素濃縮濾液，然后開啟攪拌，控制轉(zhuǎn)速為50r/min。按重量比濃縮發(fā)酵過濾液高齡土 =1 0. 05加入載體高齡土，在轉(zhuǎn)速30r/min條件下，以每分鐘Ikg的速度均勻加入高嶺土,制成衆(zhòng)液。衆(zhòng)液進(jìn)入經(jīng)過預(yù)熱的噴霧干燥塔噴霧干燥，調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)溫度，使噴霧干燥時(shí)塔內(nèi)溫度維持在85°C，收集到的粉末，即得本發(fā)明的尼可霉素原藥。實(shí)施例4
尼可霉素發(fā)酵液，用33%工業(yè)鹽酸調(diào)整pH為3. 0，發(fā)酵液中尼可霉素含量為1%，秤取尼可霉素發(fā)酵液1200kg，過濾發(fā)酵液，采用真空薄膜濃縮機(jī)在相對(duì)真空度-O. 09Mpa，溫度60°C下濃縮發(fā)酵過濾液使尼可霉素含量為4%。先在敞口攪拌釜中加入上述尼可霉素濃縮濾液，然后開啟攪拌，控制轉(zhuǎn)速為50r/min。按重量比濃縮發(fā)酵過濾液高齡土 =1 0. 05加入載體高齡土，在轉(zhuǎn)速30r/min條件下，以每分鐘Ikg的速度均勻加入高嶺土,制成衆(zhòng)液。衆(zhòng)液進(jìn)入經(jīng)過預(yù)熱的噴霧干燥塔噴霧干燥，調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)溫度，使噴霧干燥時(shí)塔內(nèi)溫度維持在85°C，收集到的粉末，即得本發(fā)明的尼可霉素原藥。實(shí)施例5
尼可霉素發(fā)酵液，用33%工業(yè)鹽酸調(diào)整pH為3. 0，發(fā)酵液中尼可霉素含量為I. 2%，秤取尼可霉素發(fā)酵液1000kg，過濾發(fā)酵液，濾液經(jīng)過001X3氫型樹脂吸附，流速為1/50樹脂體積/分鐘。吸附完成的樹脂，水洗后采用氨水進(jìn)行洗脫，洗下有效成分，氨水濃度為O. 5mol/L,流速為1/50樹脂體積/分鐘。采用001 X 14樹脂出去銨根離子，流速為1/50樹脂體積/分鐘。采用真空薄膜濃縮機(jī)在相對(duì)真空度-O. 09Mpa，溫度60°C下濃縮去銨根離子的洗脫液使尼可霉素含量為8%。去銨根離子的濃縮洗脫液進(jìn)入經(jīng)過預(yù)熱的噴霧干燥塔噴霧干燥，調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)溫度，使噴霧干燥時(shí)塔內(nèi)溫度維持在85°C，收集到的粉末，即得本發(fā)明的尼可霉素原藥。實(shí)施例6
尼可霉素發(fā)酵液，用33%工業(yè)鹽酸調(diào)整pH為3. 0，發(fā)酵液中尼可霉素含量為1%，秤取尼可霉素發(fā)酵液1300kg，過濾發(fā)酵液，濾液經(jīng)過001X3氫型樹脂吸附，流速為1/50樹脂體積/分鐘。吸附完成的樹脂，水洗后采用氨水進(jìn)行洗脫，洗下有效成分，氨水濃度為O. 5mol/L，流速優(yōu)選1/50樹脂體積/分鐘。采用001 X 14樹脂出去銨根離子，流速為1/50樹脂體積/分鐘。采用真空薄膜濃縮機(jī)進(jìn)行濃縮使尼可霉素含量為8%，濃縮時(shí)相對(duì)真空度控制在-O. 09Mpa，溫度控制在60°C之間。濃縮濾液進(jìn)入經(jīng)過預(yù)熱的噴霧干燥塔噴霧干燥，調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)溫度，使噴霧干燥時(shí)塔內(nèi)溫度維持在85°C，收集到的粉末，即得本發(fā)明的尼可霉素原藥。試驗(yàn)例I :
純度試驗(yàn)對(duì)上述實(shí)施例1-6所得尼可霉素原藥純度測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，其特征在于，所述方法包括步驟(I)調(diào)整唐德鏈霉菌發(fā)酵液的PH值至2-7，(2)控制所述pH的發(fā)酵液中尼可霉素重量百分比含量在O.1%-12%, (3)以溫度50°C -150°C在噴干塔內(nèi)對(duì)所述含量的發(fā)酵液進(jìn)行噴霧干燥。
2.按照權(quán)利要求I所述的農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法 ，其特征在于，所述步驟(I)調(diào)整所述發(fā)酵液PH值為3. O，(2)得到重量百分比含量為O. 1%-2%的所述pH值的發(fā)酵液，(3)以溫度85 °C在噴干塔內(nèi)對(duì)所述含量發(fā)酵液進(jìn)行噴霧干燥。
3.按照權(quán)利要求I所述的農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，其特征在于，所述步驟(2)所述PH的發(fā)酵液過濾后，采用真空薄膜濃縮機(jī)在相對(duì)真空度-O. 09Mpa，溫度50°C _100°C之間濃縮發(fā)酵過濾液至重量百分比含量O. 5%-5%，按重量比濃縮發(fā)酵濾液載體=1 :0. 01-1加入載體，衆(zhòng)葉轉(zhuǎn)速10 120r/min制衆(zhòng)。
4.按照權(quán)利要求3所述的農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，其特征在于，所述載體為白炭黑、高齡土、膨潤土、硅藻土、凹凸棒土、輕質(zhì)碳酸鈣、滑石粉、陶土、葉蠟石、蒙脫石、黏土、伊利石、云母粉、珍珠巖、方解石中的一種或多種的組合。
5.按照權(quán)利要求3所述的農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，其特征在于，所述步驟(2)采用真空薄膜濃縮機(jī)濃縮所述發(fā)酵過濾液至尼可霉素含量為重量百分比4%，濃縮溫度為60°C。
6.按照權(quán)利要求3所述的農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，其特征在于，所述步驟(2)按重量比濃縮發(fā)酵過濾液高齡土 =1 :0. 05加入載體高齡土制漿，制漿時(shí)漿葉轉(zhuǎn)速為50r/min。
7.按照權(quán)利要求I所述的農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，其特征在于，所述步驟(2)按照以下分步驟進(jìn)行A.過濾所述pH的發(fā)酵液，B.所述發(fā)酵濾液經(jīng)過001X1、001X2、001X3、001 X4或001 X 5氫型樹脂吸附，流速為1/10-1/100樹脂體積/分鐘，C.采用濃度O. Olmol/L-ImoI/L氨水進(jìn)行洗脫，流速為1/10-1/100樹脂體積/分鐘，D.采用001 X 12、001 X 13或001X 14樹脂除去洗脫液中銨根離子，流速為1/10-1/100樹脂體積/分鐘，E.采用真空薄膜濃縮機(jī)濃縮所述去銨根離子洗脫液，使尼可霉素含量在重量百分比1°/Γ12%之間，濃縮時(shí)相對(duì)真空度控制在-O. 09Mpa，溫度控制在50°C 100°C之間。
8.按照權(quán)利要求7所述的農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，其特征在于，所述步驟(2)按照以下分步驟進(jìn)行A.過濾所述pH的發(fā)酵液，B.所述發(fā)酵濾液經(jīng)過001 X 3氫型樹脂吸附，流速為1/50樹脂體積/分鐘，C.采用濃度為O. 5mol/l的氨水進(jìn)行洗脫，流速為1/50樹脂體積/分鐘，D.采用001 X 14氫型樹脂除去洗脫液中銨根離子，流速為1/50樹脂體積/分鐘，E.濃縮所述去銨根離子洗脫液，使尼可霉素含量在重量百分比為8%。
9.按照權(quán)利要求7所述的農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，其特征在于，所述步驟(2)采用真空薄膜濃縮機(jī)在60°C對(duì)所述去銨根離子洗脫液進(jìn)行濃縮。
全文摘要
本發(fā)明提供一種農(nóng)用尼可霉素原藥制備方法，所述方法包括步驟(1)調(diào)整唐德鏈霉菌發(fā)酵液的pH值至2-7，(2)控制所述pH的發(fā)酵液中尼可霉素重量百分比含量在0.1%-12%，(3)以溫度50℃-150℃在噴干塔內(nèi)對(duì)所述含量的發(fā)酵液進(jìn)行噴霧干燥。同時(shí)本發(fā)明提供了尼可霉素原藥純度從低到高(收率從高到低)的一系列制備方法，以及最佳工藝條件，可選擇用于各類尼可霉素農(nóng)藥制劑的加工，且整體收率均高于現(xiàn)有技術(shù)的報(bào)道。
文檔編號(hào)C07K1/22GK102633862SQ201210123099
公開日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月25日
發(fā)明者李蒲民, 楊宏勃, 顏瑞莉 申請(qǐng)人:陜西綠盾生物制品有限責(zé)任公司