專利名稱：皮膚穿透及細(xì)胞進(jìn)入(space)肽及其使用方法
皮膚穿透及細(xì)胞進(jìn)入(SPACE)肽及其使用方法相關(guān)申請的交叉引用本申請要求以下美國臨時(shí)專利申請?zhí)柕膬?yōu)先權(quán):2010年11月9日提交的標(biāo)題為 “Peptides to Facilitate Drug Delivery”(促進(jìn)藥物遞送的妝)的 61/411，884;2011 年 8 月 25 日提交的標(biāo)題為 “Skin Permeating and Cell Entering (SPACE)Peptides and Methods of Use Thereof ”(皮膚穿透及細(xì)胞進(jìn)入(SPACE)肽及其使用方法)的 61/527,574;以及 2011 年8 月 26 日提交的標(biāo)題為 “Skin Permeating and CellEntering (SPACE) Peptides and Methods of Use Thereof，，(皮膚穿透及細(xì)胞進(jìn)入(SPACE)肽及其使用方法)的61/528，036，這些專利申請全文且出于所有目以引用方式并入本文。政府權(quán)利本發(fā)明根據(jù)國立衛(wèi)生研究院(National Institutes of Health)授予的聯(lián)邦資助號 1U01 HL080718 以及國家資源研究中心(National Center for Research Resources)授予的聯(lián)邦資助號1S10RR017753-01在政府支持下完成。政府享有本發(fā)明的某些權(quán)利。背景皮膚作為人體最大的器官是許多皮膚疾病的宿主，這些疾病共同地代表了一大類人類健康疾患。因此，將治療劑例如大分子(例如siRNA)成功地遞送至皮膚內(nèi)已成為活躍研發(fā)的課題。然而，實(shí)現(xiàn)局部siRNA遞送這一目標(biāo)極具挑戰(zhàn)性，除了一些例外已經(jīng)非常難以實(shí)現(xiàn)。主要挑戰(zhàn)是大分子的皮膚穿透力差。在人們所提出的增強(qiáng)大分子穿透的多種物理-化學(xué)方法中，肽載體已作為潛在的候選物而出現(xiàn)，原因在于它們的易用性、多樣性以及靶向皮膚內(nèi)細(xì)胞亞型的潛力。人們已對最初被鑒定為可將藥物遞送入細(xì)胞質(zhì)的多種肽(包括TAT、多聚精氨酸、爪蟾抗菌肽(meganin)和果蠅穿膜肽(penetratin))進(jìn)行了跨角質(zhì)層(SC)的穿透測試，少數(shù)已經(jīng)顯示出可將小分子遞送入表皮的一定效果。相比之下，只有一種肽TD-1具體表明可穿透SC，并具有增強(qiáng)局部用藥的全身吸收的能力。雖然已知多種肽可穿透細(xì)胞膜以及少數(shù)可穿透SC，但是需要能同時(shí)增強(qiáng)跨SC和/或跨活表皮和真皮細(xì)胞細(xì)胞膜的大分子穿透及其他活動的肽。發(fā)明概述本公開提供促進(jìn)遞送活性劑或活性劑載體的肽以及肽組合物，其中該組合物能夠穿透SC和/或活細(xì)胞的細(xì)胞膜。在第一方面，本公開提供包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO: 3)、MGPSSML(SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ(SEQ IDNO:5)或STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中該肽偶聯(lián)到活性劑或包含該活性劑的活性劑載體，并且其中該組合物在與角質(zhì)層(SC)接觸時(shí)能夠穿透角質(zhì)層或與細(xì)胞接觸時(shí)穿透細(xì)胞。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透角質(zhì)層(SC)以及穿透細(xì)胞。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括CTGSTQHQC(SEQ ID NO:7)、CHSALTKHC (SEQ ID NO:8)、CKTGSHNQC (SEQ ID NO:9)、CMGPSSMLC (SEQ ID NO:10)、CTDPNQLQC(SEQ ID NO:11)或 CSTHFIDTC(SEQ ID NO:12)。
在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG(SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16),ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO: 18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透活非人類動物細(xì)胞的細(xì)胞膜。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透活人類細(xì)胞的細(xì)胞膜。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透活表皮或真皮細(xì)胞的細(xì)胞膜。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透活免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑包括大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，該大分子包括蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該蛋白質(zhì)包括含有至少一個(gè)互補(bǔ)位(paratope)的抗體或其片段。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，其中活性劑包括大分子，該大分子包括核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，該核酸為DNA。在一個(gè)實(shí)施方案中,該核酸為RNA。在一個(gè)實(shí)施方案中,其中該核酸為RNA，該RNA為干擾RNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該RNA為干擾RNA，該干擾RNA為shRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該RNA為干擾RNA，該干擾RNA為miRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該RNA為干擾RNA，該干擾RNA為siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為IL_10siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為CD86siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為KRT6a siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為TNFRl siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為TACE siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為突變特異性siRNA。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑為藥物化合物。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑包括可檢測劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該活性劑包括可檢測劑，該可檢測劑包括熒光標(biāo)記。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該活性劑包括可檢測劑，該可檢測劑包括放射性標(biāo)記。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑為納米粒子。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑為低分子量化合物。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑為IL-10生物活性抑制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該活性劑為IL-10生物活性抑制劑，該活性劑選自IL-1OsiRNA以及結(jié)合IL-10的抗體或其片段。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該肽偶聯(lián)到該活性劑。在該第一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該肽偶聯(lián)到包含該 活性劑的活性劑載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該肽偶聯(lián)到包含該活性劑的活性劑載體，該活性劑載體為脂質(zhì)體。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該肽偶聯(lián)到包含該活性劑的活性劑載體，該活性劑載體為納米粒子。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該肽偶聯(lián)到包含該活性劑的活性劑載體，該活性劑載體為聚合物膠束。在第二方面，本公開提供包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO:3)、MGPSSML(SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ(SEQ IDNO:5)或STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中該肽與活性劑或包含該活性劑的活性劑載體締合，其中該締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，并且其中該組合物能夠在與角質(zhì)層(SC)接觸時(shí)穿透角質(zhì)層或與細(xì)胞接觸時(shí)穿透細(xì)胞。在該第二方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透角質(zhì)層(SC)以及穿透細(xì)胞。在該第二方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括CTGSTQHQC(SEQ ID NO:7)、CHSALTKHC (SEQ ID NO:8)、CKTGSHNQC (SEQ ID NO:9)、CMGPSSMLC (SEQ ID NO:10)、CTDPNQLQC(SEQ ID NO:11)或 CSTHFIDTC(SEQ ID NO:12)。在該第二方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQ ID NO:
13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17·)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG(SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16),ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在第三方面，本公開提供包含包括這樣的氨基酸序列的肽的組合物，該氨基酸序列包含三個(gè)連續(xù)氨基酸的片段，該連續(xù)氨基酸選自以下氨基酸序列之一:TGSTQHQ(SEQID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或STHFIDT (SEQ ID NO:6)，其中該肽偶聯(lián)到活性劑或包含該活性劑的活性劑載體，并且其中該組合物能夠在與角質(zhì)層(SC)接觸時(shí)穿透角質(zhì)層或與細(xì)胞接觸時(shí)穿透細(xì)胞。在該第三方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透角質(zhì)層(SC)以及穿透細(xì)胞。在該第三方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包含四個(gè)連續(xù)氨基酸的片段，該連續(xù)氨基酸選自以下氨基酸序列之一:TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQID NO:6)。在該第三方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包含五個(gè)連續(xù)氨基酸的片段，該連續(xù)氨基酸選自以下氨基酸序列之一:TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQID NO:6)。在該第三方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包含六個(gè)連續(xù)氨基酸的片段，該連續(xù)氨基酸選自以下氨基酸序列之一:TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQID NO:6)。在第四方面，本公開提供包含包括這樣的氨基酸序列的肽的組合物，該氨基酸序列包含三個(gè)連續(xù)氨基酸的片段，該連續(xù)氨基酸選自以下氨基酸序列之一:TGSTQHQ(SEQID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或STHFIDT (SEQ ID NO:6)，其中該肽與活性劑或包含該活性劑的活性劑載體締合，其中該締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，并且其中該組合物能夠在與角質(zhì)層(SC)接觸時(shí)穿透角質(zhì)層或與細(xì)胞接觸時(shí)穿透細(xì)胞。在該第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透角質(zhì)層(SC)以及穿透細(xì)胞。在該第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包含四個(gè)連續(xù)氨基酸的片段，該連續(xù)氨基酸選自以下氨基酸序列之一:TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQID NO:6)。在該第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包含五個(gè)連續(xù)氨基酸的片段，該連續(xù)氨基酸選自以下氨基酸序列之一:TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQID NO:6)。在該第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包含六個(gè)連續(xù)氨基酸的片段，該連續(xù)氨基酸選自以下氨基酸序列之一:TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQID NO:6)。在第五方面，本公開提供分離肽，其包含選自以下序列之一的氨基酸序列:ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:
15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)和 ACSTHFIDTCG (SEQ IDNO:18)。

在該第五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該肽包含ACTGSTQHQCG(SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO: 14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG (SEQ ID NO:
16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)和 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18) 一者或多者的重復(fù)單元。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該肽包含 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ IDNO:14),ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16),ACTDPNQLQCG(SEQ IDNO:17)和ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18) —者或多者的重復(fù)單元，該單元重復(fù)2至50次。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該肽包含 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:
14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ ID NO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ IDNO:17)和ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18) —者或多者的重復(fù)單元，每個(gè)單元由插入肽序列(intervening peptide sequence)分離。在該第五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在第六方面，本公開提供分離多肽，其包含以下一者或多者的重復(fù)單元:TGSTQHQ(SEQ ID NO:1),HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO:3)、MGPSSML(SEQ IDNO:4)、TDPNQLQ(SEQ ID NO:5)和 STHFIDT(SEQ ID NO:6)。在該第六方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該單元重復(fù)2至50次。在該第六方面的一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)單元由插入肽序列分離。在第七方面，本公開提供分離多肽，其基本上由以下一者或多者的重復(fù)單元組成:TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO:3),MGPSSML(SEQ IDNO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5) STHFIDT (SEQ ID NO:6)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該分離多肽基本上由以下一者或多者的重復(fù)單元組成:TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)和STHFIDT(SEQ ID NO:6)。在第八方面，本公開提供將活性劑遞送至受試者的方法，包括:向受試者施用包含包括氨基酸序列 TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中該肽偶聯(lián)到活性劑或包含該活性劑的活性劑載體，并且其中該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)或穿透受試者的細(xì)胞。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)以及穿透受試者的細(xì)胞。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該施用為局部施用。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括CTGSTQHQC(SEQ ID NO:7)、CHSALTKHC (SEQ ID NO:8)、CKTGSHNQC (SEQ ID NO:9)、CMGPSSMLC (SEQ ID NO:10)、CTDPNQLQC(SEQ ID NO:11)或 CSTHFIDTC(SEQ ID NO:12)。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16),ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO: 18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透活非人類動物細(xì)胞的細(xì)胞膜。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透活人類細(xì)胞的細(xì)胞膜。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透活表皮或真皮細(xì)胞的細(xì)胞膜。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透活免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑包括大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，該大分子包括蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該蛋白質(zhì)包括含有至少一個(gè)互補(bǔ)位的抗體或其片段。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，其中活性劑包括大分子，該大分子包括核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，該核酸為DNA。在一個(gè)實(shí)施方案中,該核酸為RNA。在一個(gè)實(shí)施方案中,其中該核酸為RNA，該RNA為干擾RNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該RNA為干擾RNA，該干擾RNA為shRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該RNA為干擾RNA，該干擾RNA為miRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該RNA為干擾RNA，該干擾RNA為siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為IL_10siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為CD86siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為KRT6a siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為TNFRlsiRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為TACEsiRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該干擾RNA為siRNA，該siRNA為突變特異性siRNA。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑為藥物化合物。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑包括可檢測劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該活性劑包括可檢測劑，該可檢測劑包括熒光標(biāo)記。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該活性劑包括可檢測劑，該可檢測劑包括放射性標(biāo)記。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑為納米粒子。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑為低分子量化合物。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該活性劑為IL-10生物活性抑制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該活性劑為IL-10生物活性抑制劑，該活性劑選自IL-1OsiRNA以及結(jié)合IL-10的抗體或其片段。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該肽偶聯(lián)到該活性劑。在該第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該肽偶聯(lián)到包含該活性劑的活性劑載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該肽偶聯(lián)到包含該活性劑的活性劑載體，該活性劑載體為脂質(zhì)體。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該肽偶聯(lián)到包含該活性劑的活性劑載體，該活性劑載體為納米粒子。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該肽偶聯(lián)到包含該活性劑的活性劑載體，該活性劑載體為聚合物膠束。在第九方面，本公開提供將活性劑遞送至受試者的方法，包括:向受試者施用包含包括氨基酸序列 TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中該肽與活性劑或包含該活性劑的活性劑載體締合，其中該締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，并且其中該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)或穿透受試者的細(xì)胞。在該第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)以及穿透受試者的細(xì)胞。

在該第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該施用為局部施用。在該第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括CTGSTQHQC(SEQ ID NO:7)、CHSALTKHC (SEQ ID NO:8)、CKTGSHNQC (SEQ ID NO:9)、CMGPSSMLC (SEQ ID NO:10)、CTDPNQLQC(SEQ ID NO:11)或 CSTHFIDTC(SEQ ID NO:12)。在該第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在第十方面，本公開提供治療患有皮膚疾病的受試者的方法，包括:向受試者施用包含包括氨基酸序列 TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ IDNO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5) ^ STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中該肽偶聯(lián)到皮膚病活性劑或包含該活性劑的皮膚病活性劑載體，并且其中該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)或穿透受試者的細(xì)胞。在該第十方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)以及穿透受試者的細(xì)胞。在該第十方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該施用為局部施用。在該第十方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在第十一方面，本公開提供治療患有皮膚疾病的受試者的方法，包括:向受試者施用包含包括氨基酸序列 TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ IDNO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5) ^ STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中該肽與皮膚病活性劑或包含該活性劑的皮膚病活性劑載體締合，其中該締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，并且其中該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)或穿透受試者的細(xì)胞。在該第i^一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)以及穿透受試者的細(xì)胞。在該第^ 方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該施用為局部施用。在該第i^一方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在第十二方面，本公開提供治療患有、疑似患有或易患至少部分地由mRNA的表達(dá)所導(dǎo)致的疾病的受試者的方法，包括向受試者施用包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5) ^ STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中該肽偶聯(lián)到靶向該mRNA的干擾RNA或包含該 干擾RNA的載體，其中該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)或受試者的細(xì)胞，并且其中該mRNA的表達(dá)因而得以減弱。在該第十二方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)以及穿透受試者的細(xì)胞。在該第十二方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該施用為局部施用。在該第十二方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在第十三方面，本公開提供治療患有、疑似患有或易患至少部分地由mRNA的表達(dá)所導(dǎo)致的疾病的受試者的方法，包括向受試者施用包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5) ^ STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中該肽與靶向該mRNA的干擾RNA或包含該干擾RNA的載體締合，其中該締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，其中該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)或受試者的細(xì)胞,并且其中該mRNA的表達(dá)因而得以減弱。在該第十三方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)以及穿透受試者的細(xì)胞。在該第十三方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該施用為局部施用。在該第十三方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16),ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO: 18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。 在第十四方面，本公開提供減弱對其有需要的受試者中mRNA表達(dá)的方法，包括向受試者施用包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQID NO:6)的肽的組合物，其中該肽偶聯(lián)到靶向該mRNA的siRNA或包含靶向該mRNA的siRNA的載體，其中該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)或受試者的細(xì)胞，并且其中該mRNA的表達(dá)因而得以減弱。在該第十四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為IL-1OmRNA并且該siRNA為IL-10siRNA。在該第十四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為⑶86mRNA并且該siRNA為CD86siRNA。在該第十四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為KRT6a mRNA并且該siRNA為KRT6aSiRNA0在該第十四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為TNFRlmRNA并且該siRNA為TNFRlsiRNA。在該第十四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為TACE mRNA并且該siRNA為TACESiRNA0在該第十四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)以及穿透受試者的細(xì)胞。在該第十四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該施用為局部施用。在該第十四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在第十五方面，本公開提供減弱對其有需要的受試者中mRNA表達(dá)的方法，包括向受試者施用包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO:3)、MGPSSML (SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT (SEQID NO:6)的肽的組合物，其中該肽與靶向該mRNA的siRNA或包含靶向該mRNA的siRNA的載體締合，其中該締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，其中該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)或受試者的細(xì)胞，并且其中該mRNA的表達(dá)因而得以減弱。在該第十五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為IL-1OmRNA并且該siRNA為IL-10siRNA。
在該第十五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為⑶86mRNA并且該siRNA為CD86siRNA。在該第十五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為KRT6a mRNA并且該siRNA為KRT6aSiRNA0在該第十五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為TNFRlmRNA并且該siRNA為TNFRlsiRNA。在該第十五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該mRNA為TACE mRNA并且該siRNA為TACESiRNA0在該第十五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物能夠穿透受試者的角質(zhì)層(SC)以及穿透受試者的細(xì)胞。在該第十五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該施用為局部施用。在該第十五方面的一個(gè)實(shí)施方案中，該氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO:13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG (SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG (SEQ IDNO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO:18)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其中該氨基酸序列包括 ACTGSTQHQCG (SEQ ID NO: 13)、ACHSALTKHCG (SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO: 15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16),ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO: 18)，該肽為包含Cys-Cys 二硫鍵的環(huán)肽。在第十六方面，本公開提供包含基本上由氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1),HSALTKH(SEQ ID NO: 2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO: 3)、MGPSSML(SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ(SEQ IDNO:5)或STHFIDT (SEQ ID NO:6)組成的肽的組合物，其中該肽偶聯(lián)到活性劑或包含該活性劑的活性劑載體，并且其中該組合物在與角質(zhì)層(SC)接觸時(shí)能夠穿透角質(zhì)層或與細(xì)胞接觸時(shí)穿透細(xì)胞。普通技術(shù)人員在閱讀本說明書后將對其他方面和實(shí)施方案顯而易見。附圖簡述

圖1顯示了在豬皮中通過體外噬菌體展示鑒定皮膚穿透肽。(a)將噬菌體文庫應(yīng)用于FDC的供體室。采集據(jù)發(fā)現(xiàn)可穿透皮膚進(jìn)入受體室的噬菌體，擴(kuò)增，并用于后續(xù)數(shù)輪篩選。通過擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)和共焦顯微術(shù)確認(rèn)了各個(gè)克隆的皮膚穿透能力。為了確認(rèn)肽穿透皮膚的能力，將肽與噬菌體分離，通過共焦顯微術(shù)在視覺上確認(rèn)其穿透進(jìn)入皮膚；(b)噬菌體展示篩選第3至5輪中各高頻肽序列的出現(xiàn)百分比；(c，d)分別為SPACE和對照肽進(jìn)入豬皮的皮膚穿透情況的共焦顯微圖像；(e,f)偶聯(lián)到生物素化SPACE肽的Alexa Fluor488標(biāo)記鏈霉親和素和單獨(dú)的Alexa Fluor488鏈霉親和素的皮膚穿透情況。插圖示出了在主圖像中突出顯示部分的放大視圖。比例尺= 200μηι。圖2顯示了共焦顯微圖像，示出了熒光標(biāo)記分子穿過皮膚。(a，b)熒光標(biāo)記的噬菌體展示肽穿透進(jìn)入豬皮。(C，d)生物素化肽-鏈霉親和素包被量子點(diǎn)穿透進(jìn)入豬皮。(e，f)熒光標(biāo)記肽穿透進(jìn)入人體皮膚。(g，h)人體皮膚中熒光標(biāo)記肽的頂視圖(俯視SC)。(a,c，e, g)代表SPACE肽的圖像,而(b, d, f, h)則代表對照肽的圖像。比例尺=200 μ m。圖3顯示了熒光標(biāo)記肽穿透進(jìn)入活體小鼠皮膚30分鐘后的圖像。三個(gè)代表性圖像針對每種情況而提供。(a-c)為熒光標(biāo)記對照肽的穿透，而(d-f)為熒光標(biāo)記SPACE肽的穿透。比例尺=50 μ m。圖4顯示了熒光標(biāo)記肽穿透進(jìn)入活體小鼠皮膚2小時(shí)后的圖像。三個(gè)代表性圖像針對每種情況而提供。(a-c)為熒光標(biāo)記對照肽的穿透，而(d-f)為熒光標(biāo)記SPACE肽的穿透。比例尺=50 μ m。圖5顯示了熒光標(biāo)記肽結(jié)合到脫脂角質(zhì)層的圖像結(jié)果(a，b)和肽處理前后角質(zhì)層的FTIR光譜(c-f)。在紫外(a)和可見光(不同的樣品)(b)下的脫脂SC圖像。(i，ii，iii)分別代表SPACE肽、對照肽和無肽。比例尺=lcm。注意，上面所示的角質(zhì)層樣品進(jìn)行了脫脂處理，以確保對肽的結(jié)合能力而非轉(zhuǎn)運(yùn)能力進(jìn)行比較。因此，如上所見的對照與SPACE肽之間的差異可能并不直接轉(zhuǎn)化成它們對皮膚穿透的影響。(c，d)分別為SPACE肽和對照肽光譜的HOO-HOOcnT1區(qū)。(e，f)分別為SPACE肽和對照肽光譜的2800-30000^1區(qū)。初始和最終光譜用箭頭表示。圖6提供了無肽處理前后角質(zhì)層的酰胺I和酰胺II區(qū)的FTIR光譜。
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圖7顯示了用對照(CP)和SPACE肽共孵育后豬皮的菊粉穿透性和電導(dǎo)率增強(qiáng)的圖形結(jié)果。圖8顯示了 SPACE肽穿透進(jìn)入多種細(xì)胞系。(a，c，e)無肽處理的細(xì)胞的共焦圖像，(b，d，f)用熒光標(biāo)記SPACE肽孵育24小時(shí)的細(xì)胞的共焦圖像。(a，b)人角質(zhì)形成細(xì)胞，(C，d)人成纖維細(xì)胞，以及(e，f)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)。(g)人角質(zhì)形成細(xì)胞中SPACE肽內(nèi)化的放大圖像。(h)HUVEC、成纖維細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞中對照肽(空心條)和SPACE肽(實(shí)心條)內(nèi)化24小時(shí)后的平均熒光強(qiáng)度。誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)偏差0>或=30)。比例尺=100 μ m(a-f)和 20 μ m(g)。圖9顯示了熒光標(biāo)記肽穿透進(jìn)入MDA-MBA-231人乳腺癌細(xì)胞6小時(shí)后的圖像結(jié)果(a-c)。無肽(a)、對照肽(b)和SPACE肽(c)處理細(xì)胞的圖像。比例尺=50 μ m，圖7還顯示了在用與Lipofectamine絡(luò)合的GFP siRNA處理后GFP表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞的共焦圖像(d-f)。(d)僅用 Lipofectamine (無 siRNA)處理細(xì)胞，(e)用與 GFP siRNA 絡(luò)合的 Lipofectamine處理細(xì)胞，以及(f)用與SPACE-GFP siRNA絡(luò)合的Lipofectamine處理細(xì)胞。比例尺=200 μ m。圖10顯示了細(xì)胞機(jī)制和毒性研究的結(jié)果。(a)4°C下以及采用內(nèi)吞抑制劑脫氧-D-葡萄糖、氯丙嗪、制霉菌素和EIPA時(shí)人角質(zhì)形成細(xì)胞中對照肽和SPACE肽的肽內(nèi)化(對照％ )。(b)在存在0.lmg/mL和1.0mg/mL對照肽(空心條)或SPACE肽(實(shí)心條)的情況下人角質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞增殖。誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)偏差(N = 4)。圖11顯示使用SPACE肽遞送siRNA的結(jié)果。(a) GFP表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞中GPF的敲低百分比。誤差條表示SD(N >或=30)，(b)處理后24小時(shí)小鼠中IL-1O蛋白水平的百分比。誤差條表示SE (N >或=3)，NS表示沒有顯著差異(P > 0.15)，(c)處理后72小時(shí)小鼠中GAPDH蛋白水平的敲低百分比。誤差條表示SE (N >或=3)，(d)局部應(yīng)用siRNA后GAPDH敲低的劑量依賴性。誤差條表示SE(N >或=3)。圖12顯示使用肽偶聯(lián)GAPDH siRN在不同施加時(shí)間時(shí)GAPDH敲低的結(jié)果。SPACE-GAPDH siRNA應(yīng)用后4小時(shí)、24小時(shí)和72小時(shí)GAPDH蛋白水平的降低。定義在進(jìn)一步描述本發(fā)明前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不限于所述的特定實(shí)施方案，因此當(dāng)然可以發(fā)生變化。還應(yīng)當(dāng)理解，本文所用的術(shù)語只是為了描述特定實(shí)施方案，并非旨在進(jìn)行限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將只由所附權(quán)利要求書限定。如果提供了值的范圍，則應(yīng)當(dāng)理解，介于該范圍上限與下限之間的每個(gè)居間值(直至下限單位的十分之一，除非上下文另有明確指出)以及該所述范圍內(nèi)的任何其他所述值或居間值均涵蓋在本發(fā)明內(nèi)。這些較小范圍的上限和下限可獨(dú)立地包含在所述較小范圍內(nèi)，并且也涵蓋在本發(fā)明內(nèi)，受所述范圍內(nèi)任何具體排除的限值的約束。如果所述范圍包含所述限值的一個(gè)或兩個(gè)，則排除這些所含限值一者或兩者的范圍也包括在本發(fā)明內(nèi)。除非另有定義，否則本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的相同含義。雖然類似于或等同于本文所述的那些的任何方法和材料也可用于實(shí)踐或檢驗(yàn)本發(fā)明，但現(xiàn)在描述示例性方法和材料。本文提及的所有出版物和申請以引用方式并入以公開和描述與所引述的出版物相關(guān)的方法和/或材料。在以引用方式并入本文的任何申請或出版物與本公開發(fā)生沖突的情況下，以本公開為準(zhǔn)。必須注意，如本文和所附權(quán)利要求書中所用，單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“該/所述”包括復(fù)數(shù)指代物，除非上下文另有明確指出。因此，例如，提及“一種肽”包括多個(gè)這樣的肽，而提及“該藥劑”包括提及一種或多種藥劑以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其等同物，等
坐寸ο本文所論述的出版物僅針對它們在本申請?zhí)峤蝗罩暗墓_內(nèi)容而提供。此處的任何信息都不應(yīng)解釋為承認(rèn)本發(fā)明不能因?yàn)槭窃谙劝l(fā)明而先于這些出版物。另外，所提供的
公開日可能不同于實(shí)際的
公開日，這可能需要獨(dú)立地進(jìn)行確認(rèn)。應(yīng)理解，在整個(gè)本公開中，根據(jù)單字母或三字母編碼提及氨基酸。為使讀者方便，如下提供單字母和三字母氨基酸代碼:G甘氨酸 Gly P脯氨酸 ProA丙氨酸 Ala V纈氨酸 ValL亮氨酸 Leu I異亮氨酸IleM甲硫氨酸Met C半胱氨酸CysF苯丙氨酸Phe Y酪氨酸 TyrW色氨酸 Trp H組氨酸 HisK賴氨酸 Lys R精氨酸 ArgQ谷氨酰胺Gln N天冬酰胺AsnE谷氨酸 Glu D天冬氨酸AspS絲氨酸 Ser T蘇氨酸 Thr如本文所用，術(shù)語“活性劑”是指單獨(dú)地或聯(lián)合其他活性或惰性組分施用給諸如人或非人動物的受試者后提供所需藥理作用的藥劑，例如蛋白質(zhì)、肽、核酸(包括例如核苷酸、核苷及其類似物)或小分子藥物。以上定義 包括活性劑的前體、衍生物、類似物和前藥。術(shù)語“活性劑”在本文也可用于泛指與本文所述的穿透肽偶聯(lián)或締合或連接到本文所述的活性劑載體或由其包含的任何藥劑，例如蛋白質(zhì)、肽、核酸(包括例如核苷酸、核苷及其類似物)或小分子藥物。在本文所述的穿透肽組合物背景下所用的術(shù)語“偶聯(lián)”是指兩個(gè)實(shí)體(例如分子、化合物或其組合)之間的共價(jià)或離子相互作用。在本文所述的穿透肽組合物背景下所用的術(shù)語“締合”是指由疏水、靜電和范德華相互作用一者或多者介導(dǎo)的兩個(gè)實(shí)體(例如分子、化合物或其組合)之間的非共價(jià)相互作用。本文可互換使用的術(shù)語“多肽”和“蛋白質(zhì)”是指任何長度的氨基酸(可包括編碼和非編碼氨基酸、化學(xué)或生物化學(xué)修飾或衍生的氨基酸)的聚合物形式，以及具有修飾肽主鏈的多肽。該術(shù)語包括融合蛋白質(zhì)，包括但不限于與異源氨基酸序列形成的融合蛋白質(zhì)、與異源和天然前導(dǎo)序列形成的融合體，含或不含N端甲硫氨酸殘基；免疫標(biāo)記蛋白；與可檢測的融合配偶體形成的融合蛋白質(zhì)，例如包含熒光蛋白、β_半乳糖苷酶、螢光素酶等作為融合配偶體的融合蛋白質(zhì)；等等。術(shù)語“抗體”和“免疫球蛋白”包括任何同種型的抗體或免疫球蛋白、保持與抗原特異性結(jié)合的抗體片段(包括但不限于Fab、Fv、SCFv和Fd片段)、嵌合抗體、人源化抗體、單鏈抗體以及包含抗體的抗原結(jié)合部分和非抗體蛋白質(zhì)的融合蛋白質(zhì)?？贵w可例如用放射性同位素、生成可檢測產(chǎn)物 的酶、熒光蛋白等進(jìn)行可檢測標(biāo)記。抗體可進(jìn)一步偶聯(lián)到其他部分，例如特異性結(jié)合對的成員，例如生物素(生物素-親和素特異性結(jié)合對的成員)等。這些術(shù)語還涵蓋Fab’、Fv、F(ab’ )2以及保持與抗原特異性結(jié)合的其他抗體片段?？贵w可以多種其他形式存在，包括例如Fv、Fab和(Fab' )2以及雙官能(即，雙特異性)雜交抗體(如Lanzavecchia等,Eur.J.1mmunol.17,105 (1987))以及以單鏈存在(如 Huston 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.,85, 5879-5883 (1988)和 Bird 等，Science,242,423-426(1988)，這些文獻(xiàn)以引用方式并入本文)。(一般參見Hood等，Immunology，Benjamin, N.Y.,第 2 版(1984)，以及 Hunkapiller 和 Hood, Nature, 323,15-16 (1986))。術(shù)語“核酸”、“核酸分子”和“多核苷酸”可互換使用，并指任何長度的核苷酸(脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其類似物)的聚合物形式。這些術(shù)語涵蓋例如DNA、RNA及其修飾形式。多核苷酸可具有任何三維結(jié)構(gòu)，并可執(zhí)行任何已知或未知的功能。多核苷酸的非限制性實(shí)例包括基因、基因片段、外顯子、內(nèi)含子、信使RNA (mRNA)、轉(zhuǎn)移RNA、核糖體RNA、核糖酶、cDNA、重組多核苷酸、支鏈多核苷酸、質(zhì)粒、載體、分離的任何序列的DNA、控制區(qū)、分離的任何序列的RNA、核酸探針和引物。核酸分子可以為線性或環(huán)狀的。“RNA干擾”(RNAi)是雙鏈RNA(dsRNA)借以用來沉默基因表達(dá)的過程。不希望受任何特定理論的束縛，RNAi以較長dsRNA被RNaseIII樣酶切丁酶(dicer)裂解成小干擾RNA(siRNA)開始。siRNA是長度通常為約19至28個(gè)核苷酸，或20至25個(gè)核苷酸，或21至23個(gè)核苷酸的dsRNA，并通常包含2-3個(gè)核苷酸3'突出端以及5'磷酸和3'羥基末端。siRNA的一條鏈結(jié)合到稱為RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RISC)的核糖核蛋白復(fù)合物中。RISC使用這條siRNA鏈來識別至少部分地與所結(jié)合的siRNA鏈互補(bǔ)的mRNA分子，然后裂解這些目標(biāo)mRNA或抑制它們的翻譯。結(jié)合到RISC中的siRNA鏈稱為引導(dǎo)鏈或反義鏈。稱為過客鏈或有義鏈的另一條siRNA鏈從siRNA中消除，并至少部分地與目標(biāo)mRNA同源。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解，原則上siRNA的任一條鏈均可結(jié)合到RISC中并用作引導(dǎo)鏈。然而，siRNA可以被設(shè)計(jì)(例如，通過在反義鏈5'端使siRNA雙鏈體穩(wěn)定性降低)為有利于反義鏈結(jié)合到RISC 中。RISC介導(dǎo)的序列至少部分地與引導(dǎo)鏈互補(bǔ)的mRNA的裂解導(dǎo)致該mRNA以及mRNA編碼的相應(yīng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)態(tài)水平降低?？蛇x地，RISC還可通過翻譯抑制而不裂解目標(biāo)mRNA使相應(yīng)蛋白質(zhì)的表達(dá)降低。其他RNA分子可與RISC相互作用并沉默基因表達(dá)?？膳cRISC相互作用的其他RNA分子的實(shí)例包括短發(fā)夾RNA(shRNA)、單鏈siRNA、微RNA(miRNA)和切丁酶底物27-mer雙鏈體，即含一個(gè)或多個(gè)化學(xué)修飾核苷酸、一個(gè)或多個(gè)脫氧核糖核苷酸和/或一個(gè)或多個(gè)非磷酸二酯鍵合的RNA分子。如本文所用的術(shù)語“siRNA”是指雙鏈干擾RNA，除非另外指明。為了便于本發(fā)明的討論，將可與RISC相互作用并參與RISC介導(dǎo)的基因表達(dá)變化的所有RNA分子稱為“干擾RNA”。因此，siRNA、shRNA、miRNA和切丁酶底物27_mer雙鏈體是“干擾RNA”的子集。“置換”由與多肽氨基酸序列或核苷酸序列相比時(shí)一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸分別被不同的氨基酸或核苷酸取代而產(chǎn)生。如果置換為保守的，則置換到多肽中的氨基酸具有與其置換的氨基酸相似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)(如，電荷、極性、疏水性等)。天然存在的氨基酸的保守置換通常導(dǎo)致第一氨基酸被與第一氨基酸處于相同組中的第二氨基酸置換，其中示例性氨基酸組如下所示:(I)酸性(帶負(fù)電)氨基酸，例如天冬氨酸和谷氨酸；(2)堿性(帶正電)，例如精氨酸、組氨酸和賴氨酸；(3)中性極性氨基酸，例如甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；以及(4)中性非極性氨基酸，例如丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸。在一些實(shí)施方案中，多肽變體可具有“非保守”變化，其中被置換的氨基酸在結(jié)構(gòu)和/或化學(xué)性質(zhì)方面不同?！叭笔А倍x為氨基酸或核苷酸序列的變化，其中與天然存在的多肽的氨基酸序列或核苷酸序列相比時(shí)一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸殘基分別不存在。在多肽或多核苷酸序列的背景下，考慮到被修飾的多肽或多核苷酸序列的長度，缺失可涉及2個(gè)、5個(gè)、10個(gè)、至多20個(gè)、至多30個(gè)或至多50個(gè)或更多個(gè)氨基酸的缺失?！安迦搿被颉疤砑?”在于與天然存在的多肽的氨基酸序列或核苷酸序列相比時(shí)分別導(dǎo)致添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸殘基的氨基酸或核苷酸序列變化?！安迦搿蓖ǔＪ侵柑砑拥蕉嚯陌被嵝蛄袃?nèi)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基，而“添加”可以是插入或指在N或C末端添加的氨基酸殘基。在多肽或多核苷酸序列的背景下，插入或添加可以具有至多10個(gè)、至多20個(gè)、至多30個(gè)或至多50個(gè)或更多個(gè)氨基酸。在多肽背景下的“非天然”、“非內(nèi)源”和“異源”在本文可互換使用，以指代氨基酸序列與天然存在的不同的多肽，或在表達(dá)系統(tǒng)或病毒顆粒的背景下所處的環(huán)境與天然存在的不同的多肽。在核酸或多肽背景下的“外源”用于指代已引入宿主細(xì)胞的核酸或多肽。“外源”核酸和多肽可以是宿主細(xì)胞天然或非天然的，其中相對于引入外源分子前宿主細(xì)胞中存在的編碼基因產(chǎn)物或多肽水平而言，外源天然核酸或多肽使重組宿主細(xì)胞中的編碼基因產(chǎn)物或多肽水平升高。如本文所用，術(shù)語“測定”、“測量”、“評估”和“分析”可互換使用，并同時(shí)包括定量和定性測定。
如本文所用，術(shù)語“分離的”當(dāng)用在分離化合物的背景下時(shí)是指所處的環(huán)境與該化合物天然存在的環(huán)境不同的所關(guān)注化合物?！胺蛛x的”旨在包括處于大體上富含所關(guān)注化合物和/或其中所關(guān)化合物得以部分或大體上純化的樣品內(nèi)的化合物。如本文所用，術(shù)語“大體上純的”是指從其天然環(huán)境中移除并至少60%不含、75%不含或90%不含與其天然相關(guān)的其他組分的化合物?！熬幋a序列”或“編碼”選定多肽的序列是例如當(dāng)置于合適的調(diào)控序列(或“控制元件”)控制下在體內(nèi)轉(zhuǎn)錄(就DNA而言)和翻譯(就mRNA而言)成多肽的核酸分子。編碼序列的邊界通常由5'(氨基)末端的起始密碼子和3'(羧基)末端的翻譯終止密碼子決定。編碼序列可包括但不限于來自病毒、原核或真核mRNA的cDNA，來自病毒或原核DNA的基因組DNA序列，以及合成的DNA序列。轉(zhuǎn)錄終止序列可位于編碼序列的3'。其他“控制元件”也可與編碼序列相關(guān)。編碼多肽的DNA序列可通過使用選定細(xì)胞所偏好的密碼子進(jìn)行優(yōu)化以在該選定細(xì)胞中表達(dá)，從而代表所需多肽編碼序列的DNA拷貝?！坝?..編碼的”是指編碼基因產(chǎn)物(例如多肽)的核酸序列。如果該基因產(chǎn)物為多肽，則該多肽序列或其部分包含來自由該核酸序列編碼的多肽的至少3至5個(gè)氨基酸、8至10個(gè)氨基酸或至少15至20個(gè)氨基酸的氨基酸序列?！翱刹僮鞯剡B接”是指元件的排列，其中所述組分被構(gòu)造為執(zhí)行它們通常的功能。就啟動子而言，可操作地連接到編碼序列的啟動子將對編碼序列的表達(dá)產(chǎn)生影響。啟動子或其他控制元件不必與編碼序列鄰接，只要它們發(fā)揮作用指導(dǎo)其表達(dá)即可。例如，可以在啟動子序列和編碼序列之間存在插入未翻譯但轉(zhuǎn)錄的序列，而啟動子序列仍可被視為“可操作地連接”到編碼序列。所謂“核酸構(gòu)建體”是指被構(gòu)造成包含一個(gè)或多個(gè)合在一起不存在于自然界中的功能單元的核酸序列。實(shí)例包括環(huán)狀、線性、雙鏈、染色體外DNA分子(質(zhì)粒)、粘粒(包含來自λ噬菌體的COS序列的質(zhì)粒)、包含非天然核酸序列的病毒基因組等等。

“載體”能夠?qū)⒒蛐蛄修D(zhuǎn)移到目標(biāo)細(xì)胞。通常，“載體構(gòu)建體”、“表達(dá)載體”和“基因轉(zhuǎn)移載體”是指能夠指導(dǎo)所關(guān)注基因表達(dá)并可將基因序列轉(zhuǎn)移到目標(biāo)細(xì)胞的任何核酸構(gòu)建體，這可通過載體的全部或一部分的基因組整合或載體作為染色體外元件而瞬時(shí)或可遺傳性維持來實(shí)現(xiàn)。因此，該術(shù)語包括克隆和表達(dá)運(yùn)載體以及整合載體?！氨磉_(dá)盒”包括能夠指導(dǎo)可操作地連接到表達(dá)盒啟動子的所關(guān)注基因/編碼序列表達(dá)的任何核酸構(gòu)建體。此類表達(dá)盒可被構(gòu)建到“載體”、“載體構(gòu)建體”、“表達(dá)載體”或“基因轉(zhuǎn)移載體”中，以便將表達(dá)盒轉(zhuǎn)移到目標(biāo)細(xì)胞中。因此，該術(shù)語包括克隆和表達(dá)運(yùn)載體以及病毒載體。測定核酸和氨基酸“序列同一性”的技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的。通常，此類技術(shù)包括測定基因mRNA的核苷酸序列和/或測定因此編碼的氨基酸序列，并將這些序列與第二核苷酸或氨基酸序列進(jìn)行比較。一般來講，“同一性”分別指兩個(gè)多核苷酸或多肽序列精確的核苷酸與核苷酸或氨基酸與氨基酸對應(yīng)性。兩個(gè)或更多個(gè)序列(多核苷酸或氨基酸)可通過測定它們的“百分比同一性”而進(jìn)行比較。無論核酸還是氨基酸序列，兩個(gè)序列的百分比同一性都是兩比對序列之間的精確匹配數(shù)除以較短序列的長度再乘以100。核酸序列的近似比對由以下文獻(xiàn)中的局部同源性算法提供:Smith和Waterman, Advancesin Applied Mathematics, 2:482-489 (1981)。該算法可通過使用由 Dayhoff, Atlas ofProtein Sequences and Structure,M.0.Dayhoff 編輯，第 5 次增補(bǔ)，3:353-358, NationalBiomedical Research Foundation, Washington, D.C., USA 開發(fā)以及由 Gribskov, Nuc1.Acids Res.14(6):6745-6763(1986)歸一化的評分矩陣而應(yīng)用于氨基酸序列。該算法測定序列百分比同一性的示例性實(shí)施由Genetics ComputerGroup (Madison, WI)在“BestFit”應(yīng)用程序中提供。該方法的默認(rèn)參數(shù)見述于WisconsinSequence Analysis Package Program Manual 第 8 版(1995)(可得自 Genetics ComputerGroup, Madison, WI)。在本發(fā)明背景下確立百分比同一性的另一種方法是使用版權(quán)歸 University of Edinburgh 所有的程序的 MPSRCH 包，其由 John F.Collins 和 ShaneS.Sturrok開發(fā)，并由 IntelliGenetics, Inc.(Mountain View,CA)分銷。通過這套軟件包，可以采用Smith-Waterman算法,其中將默認(rèn)參數(shù)用于評分表(例如,空位開放罰分為12,空位延伸罰分為1，空位為6)。通過生成的數(shù)據(jù)，“匹配”值反映“序列同一性”。其他計(jì)算序列間百分比同一性或相似性的合適程序在本領(lǐng)域中是熟知的，例如，另一比對程序?yàn)锽LAST，使用默認(rèn)參數(shù)。例如，可以通過以下默認(rèn)參數(shù)使用BLASTN和BLASTP:遺傳密碼=標(biāo)準(zhǔn)；過濾器=無；鏈=兩條；截止值=60 ;預(yù)期值=10 ;矩陣=BL0SUM62 ;說明=50個(gè)序列；排序方式=高分；數(shù)據(jù)庫=非冗余，GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS翻譯庫+Swiss蛋白數(shù)據(jù)庫+Spupdate+PIR。這些程序的詳細(xì)信息可見于互聯(lián)網(wǎng)，網(wǎng)址為http://in front ofblast, ncb1.nlm.nih.gov/Blast.cgi?？蛇x地，在多核苷酸的背景下，同源性可通過以下方式測定:在同源區(qū)之間形成穩(wěn)定雙鏈體的條件下使多核苷酸雜交，然后用單鏈特異性核酸酶消化，以及進(jìn)行消化片段的大小測定。兩個(gè)DNA或兩個(gè)多肽序列在使用上述方法測定時(shí)若所述序列在分子的限定長度上表現(xiàn)出至少約80% -85%、至少約85% -90%、至少約90% -95%或至少約95% -98%序列同一性則彼此“大體同源”。如本文所用，大體上同源也指表現(xiàn)出與指定的DNA或多肽序列完全同一性的序列。大體上同源的DNA序列可在DNA雜交實(shí)驗(yàn)中在例如嚴(yán)格條件(如針對該特定系統(tǒng)而定義)下鑒定。 定義合適的雜交條件在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。參見例如Sambrook和Russel,Molecular Cloning:ALaboratory Manual第三版，(2001)Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY。第一多核苷酸在具有與第二多核苷酸的區(qū)域、其cDNA、其補(bǔ)體相同或大體上相同的核苷酸序列時(shí)或在表現(xiàn)出如上所述的序列同一性時(shí)則“衍生自”第二多核苷酸。該術(shù)語不意味著要求或暗示該多核苷酸必須得自所述的來源(雖然也涵蓋這種情況)，而是可以通過任何合適的方法制得。第一多肽(或肽)在⑴由衍生自第二多核苷酸的第一多核苷酸編碼時(shí)，或(ii)顯示出如上所述的與第二多肽的序列同一性時(shí)則“衍生自”第二多肽(或肽)。該術(shù)語不意味著要求或暗示該多肽必須得自所述的來源(雖然也涵蓋這種情況)，而是可以通過任何合適的方法制得。如本文所用的術(shù)語“聯(lián)合”是指如下使用，其中例如在第二治療的整個(gè)施用過程中施用第一治療；其中第一治療的施用時(shí)間段與第二治療的施用重疊，例如，第一治療的施用在第二治療的施用前開始并且第一治療的施用在第二治療的施用結(jié)束前結(jié)束；其中第二治療的施用在第一治療的施用前開始并且第二治療的施用在第一治療的施用結(jié)束前結(jié)束；其中第一治療的施用在第二治療的施用開始前開始并且第二治療的施用在第一治療的施用結(jié)束前結(jié)束；其中第二治療的施用在第一治療的施用開始前開始并且第一治療的施用在第二治療的施用結(jié)束前結(jié)束。因此，“聯(lián)合”也可指涉及施用兩種或更多種治療的方案。如本文所用的“聯(lián)合”也指兩種或更多種治療的施用，它們可以在相同的或不同的制劑中施用，通過相同或不同的途徑施用，以及以相同的或不同的劑型施用。術(shù)語“治療”、“處理”等是指獲得所需的藥理和/或生理效應(yīng)。該效應(yīng)在完全或部分防止疾病或其癥狀方面可以是預(yù)防性的，和/或在部分或完全治愈疾病和/或由該疾病引起的不利影響方面可以是治療性的。如本文所用的“治療”涵蓋對哺乳動物尤其是人類中的疾病的任何治療，并包括:(a)防止可能有患病傾向但尚未診斷為患有該疾病的受試者中的疾病發(fā)生；(b)抑制疾病，即阻止其發(fā)展或進(jìn)展；以及(C)緩解疾病，即，使疾病逆轉(zhuǎn)和/或緩解一種或多種疾病癥狀?！爸委煛币仓荚诤w藥劑遞送，以便提供藥理效應(yīng)，甚至在不存在疾病或疾患的情況下。例如，“治療”涵蓋穿透肽組合物的遞送，其可在不存在病情的情況下引起免疫反應(yīng)或產(chǎn)生免疫力，例如就疫苗而言。“受試者”、“宿主”和“患者”在本文可互換使用，以指代可根據(jù)本公開的方法接受治療或可向其施用根據(jù)本公開的肽組合物以實(shí)現(xiàn)所需效應(yīng)的動物、人類或非人類。一般來講，受試者為哺乳動物受試者。如本文所用的術(shù)語“皮炎”是指皮膚炎癥并包括例如過敏性接觸性皮炎、蕁麻疹、缺脂性皮炎(小腿皮膚干燥)、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎(包括刺激性接觸性皮炎和漆酚引起的接觸性皮炎)、濕疹、重力性皮炎、錢幣狀皮炎、外耳炎、口周皮炎和脂溢性皮炎。術(shù)語“角質(zhì)層”是指表皮的角質(zhì)外層，由扁平、角化、無核、死亡或剝離細(xì)胞組成。如權(quán)利要求書中所用，與“包括”、“含有”和“特征在于”同義的術(shù)語“包含”是包含性或開放式的，并且不會排除另外的、未列舉的要素和/或方法步驟?！鞍笔且粋€(gè)專門術(shù)語，是指存在所述的要素和/或步驟，但也可添加其他要素和/或步驟，并仍落在相關(guān)主題的范圍內(nèi)。 如本文所用，短語“由...組成”排除未具體列舉的任何要素、步驟和/或成分。例如，當(dāng)短語“由...組成”出現(xiàn)在權(quán)利要求主體的條款中而不是緊跟前序時(shí)，則其只限制該條款中所述的要素；其他要素作為整體不排除在權(quán)利要求之外。如本文所用，短語“基本上由...組成”將相關(guān)公開內(nèi)容或權(quán)利要求的范圍限制到指定的材料和/或步驟，以及不實(shí)質(zhì)性影響所公開的和/或要求保護(hù)的主題的基本和新穎特征的那些。例如，在一些實(shí)施方案中本發(fā)明所公開的主題的肽可“基本上由”核心氨基酸序列“組成”，這表示該肽可包含一個(gè)或多個(gè)(如1、2、3、4、5、6或更多個(gè))N端和/或C端氨基酸，其存在不實(shí)質(zhì)性影響肽的所需生物活性。至于術(shù)語“包含”、“基本上由...組成”和“由...組成”，如果在本文使用這三個(gè)術(shù)語之一，則本發(fā)明所公開的主題可包括使用其他兩個(gè)術(shù)語的任一者。例如，本發(fā)明所公開的主題在一些實(shí)施方案中涉及包含氨基酸序列TGSTQHQ (SEQ ID NO: I)的組合物。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明所公開的主題因此也涵蓋在一些實(shí)施方案中基本上由氨基酸序列TGSTQHQ(SEQID NO:1)組成的肽；以及在一些實(shí)施方案中由氨基酸序列TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)組成的肽。類似地，還應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明所公開的主題的方法在一些實(shí)施方案中包括本文所公開的和/或權(quán)利要求中所列舉的步驟，它們在一些實(shí)施方案中基本上由本文所公開的和/或權(quán)利要求中所列舉的步驟組成，以及它們在一些實(shí)施方案中由本文所公開的和/或權(quán)利要求中所列舉的步驟組成。本發(fā)明的示例性實(shí)施方案的詳述本公開涉及單獨(dú)時(shí)以及偶聯(lián)到活性劑或活性劑載體或者與活性劑或活性劑載體締合時(shí)均能夠穿透SC和/或活細(xì)胞(例如表皮和真皮細(xì)胞)細(xì)胞膜的肽。相關(guān)的組合物和方法也在本文進(jìn)行了描述。穿誘狀本公開提供在施用后能夠穿透SC和/或穿透活細(xì)胞的肽。這些肽在本文稱為“穿透肽”。在一些實(shí)施方案中，這些穿透肽能夠穿透活表皮和真皮細(xì)胞的細(xì)胞膜。根據(jù)本公開的穿透肽可包括例如下表I中提供的氨基酸序列的一者或多者。表I
權(quán)利要求
1.一種組合物，其包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ IDNO:2), KTGSHNQ (SEQ ID NO: 3)、MGPSSML (SEQ ID NO: 4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或STHFIDT(SEQ ID NO:6)的肽，其中所述肽偶聯(lián)到活性劑或包含所述活性劑的活性劑載體，并且其中所述組合物能夠在與角質(zhì)層(SC)接觸時(shí)穿透所述角質(zhì)層或與細(xì)胞接觸時(shí)穿透所述細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物能夠穿透所述SC層以及穿透所述細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述氨基酸序列包括CTGSTQHQC(SEQIDN0:7), CHSALTKHC(SEQ ID NO:8)、CKTGSHNQC(SEQ ID NO:9)、CMGPSSMLC(SEQ ID NO: 10)、CTDPNQLQC(SEQ ID NO:11)或 CSTHFIDTC(SEQ ID NO:12)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13),ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16), ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物能夠穿透所述活非人類動物細(xì)胞的細(xì)胞膜。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物能夠穿透所述活人類細(xì)胞的細(xì)胞膜。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述 的組合物，其中所述組合物能夠穿透活表皮或真皮細(xì)胞的細(xì)胞膜。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物能夠穿透活免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑包括大分子。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述大分子包括蛋白質(zhì)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述蛋白質(zhì)包括含有至少一個(gè)互補(bǔ)位的抗體或其片段。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述大分子包括核酸。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述核酸為DNA。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述核酸為RNA。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的組合物，其中所述RNA為干擾RNA。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述干擾RNA為shRNA。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述干擾RNA為miRNA。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述干擾RNA為siRNA。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述siRNA為IL-10siRNA。
21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述siRNA為⑶86siRNA。
22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述siRNA為KRT6asiRNA。
23.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述siRNA為TNFRlsiRNA。
24.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述siRNA為TACEsiRNA。
25.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述siRNA為突變特異性siRNA。
26.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑為藥物化合物。
27.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑包括可檢測劑。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的組合物，其中所述可檢測劑包括熒光標(biāo)記。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的組合物，其中所述可檢測劑包括放射性標(biāo)記。
30.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑為納米粒子。
31.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑為低分子量化合物。
32.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑為IL-10生物活性抑制劑。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的組合物，其中所述活性劑選自IL-1OsiRNA以及結(jié)合IL-10的抗體或其片段。
34.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述肽偶聯(lián)到所述活性劑。
35.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述肽偶聯(lián)到包含所述活性劑的活性劑載體。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述活性劑載體為脂質(zhì)體。
37.根據(jù)權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述活性劑載體為納米粒子。
38.根據(jù)權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述活性劑載體為聚合物膠束。
39.一種組合物，其包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQID NO: 2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO: 3)、MGPSSML (SEQ ID NO: 4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽，其中所述肽與活性劑或包含所述活性劑的活性劑載體締合，其中所述締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，并且其中所述組合物能夠在與角質(zhì)層(SC)接觸時(shí)穿透所述角質(zhì)層或與細(xì)胞接觸時(shí)穿透所述細(xì)胞。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述組合物能夠穿透所述SC層以及穿透所述細(xì)胞。
41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述氨基酸序列包括CTGSTQHQC(SEQIDNO: 7)、CHSALTKHC (SEQ ID NO: 8)、CKTGSHNQC (SEQ ID NO: 9)、CMGPSSMLC (SEQ ID NO: 10)、CTDPNQLQC(SEQ ID NO:11)或 CSTHFIDTC(SEQ ID NO:12)。
42.根據(jù)權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
44.一種分離肽，其包含選自以下序列之一的氨基酸序列:ACTGSTQHQCG (SEQ IDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID N`O:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)和 ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的分離肽，其中所述肽包含ACTGSTQHQCG(SEQID NO: 13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ ID NO:16)、ACTDPNQLQCG (SEQ ID NO: 17)和 ACSTHFIDTCG (SEQ ID NO: 18) 一者或多者的重復(fù)單元。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的分離肽，其中所述單元重復(fù)2至50次。
47.根據(jù)權(quán)利要求45所述的分離肽，其中每個(gè)單元由插入肽序列分離。
48.根據(jù)權(quán)利要求44所述的分離肽，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
49.一種分離多肽，其包含 TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO: 2),KTGSHNQ (SEQ ID NO: 3)、MGPSSML (SEQ ID NO: 4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)和 STHFIDT (SEQID NO:6) 一者或多者的重復(fù)單元。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的分離肽，其中所述單元重復(fù)2至50次。
51.根據(jù)權(quán)利要求49所述的分離肽，其中每個(gè)單元由插入肽序列分離。
52.一種分離多肽，其基本上由 TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO:3)、MGPSSML(SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ(SEQ ID NO:5)和 STHFIDT(SEQID NO:6) 一者或多者的重復(fù)單元組成。
53.一種將活性劑遞送至受試者的方法，其包括:向受試者施用包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO:3)、MGPSSML(SEQ IDNO:4), TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT(SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中所述肽偶聯(lián)到活性劑或包含所述活性劑的活性劑載體，并且其中所述組合物能夠穿透所述受試者的角質(zhì)層(SC)或穿透所述受試者的細(xì)胞。
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的SC以及穿透所述受試者的細(xì)胞。
55.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述施用為局部施用。
56.根據(jù)權(quán)利要求53 所述的方法，其中所述氨基酸序列包括CTGSTQHQC(SEQIDNO:7), CHSALTKHC(SEQ ID NO:8)、CKTGSHNQC(SEQ ID NO:9)、CMGPSSMLC(SEQ ID NO: 10)、CTDPNQLQC(SEQ ID NO:11)或 CSTHFIDTC(SEQ ID NO:12)。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的方法，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13),ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16), ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
59.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述活非人類動物細(xì)胞的細(xì)胞膜。
60.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述活人類細(xì)胞的細(xì)胞膜。
61.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述活表皮或真皮細(xì)胞的細(xì)胞膜。
62.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述活免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜。
63.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述活性劑包括大分子。
64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述大分子包括蛋白質(zhì)。
65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)包括含有至少一個(gè)互補(bǔ)位的抗體或其片段。
66.根據(jù)權(quán)利要求64所述的方法，其中所述大分子包括核酸。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中所述核酸為DNA。
68.根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中所述核酸為RNA。
69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中所述RNA為干擾RNA。
70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述干擾RNA為shRNA。
71.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述干擾RNA為miRNA。
72.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述干擾RNA為siRNA。
73.根據(jù)權(quán)利要求72所述的方法，其中所述siRNA為IL_10siRN。
74.根據(jù)權(quán)利要求72所述的方法，其中所述siRNA為⑶86siRNA。
75.根據(jù)權(quán)利要求72所述的方法，其中所述siRNA為KRT6asiRNA。
76.根據(jù)權(quán)利要求72所述的方法，其中所述siRNA為TNFRlsiRNA。
77.根據(jù)權(quán)利要求72所述的方法，其中所述siRNA為TACEsiRNA。
78.根據(jù)權(quán)利要求72所述的方法，其中所述siRNA為突變特異性siRNA。
79.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述活性劑為藥物化合物。
80.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述活性劑包括可檢測劑。
81.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述可檢測劑包括熒光標(biāo)記。
82.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述可檢測劑包括放射性標(biāo)記。
83.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述活性劑為納米粒子。
84.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述活性劑為低分子量化合物。
85.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述活性劑為IL-10生物活性抑制劑。
86.根據(jù)權(quán)利要求85所述的方法，其中所述活性劑選自IL-1OsiRNA以及結(jié)合IL-10的抗體或其片段。
87.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，`其中所述肽偶聯(lián)到所述活性劑。
88.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述肽偶聯(lián)到包含所述活性劑的活性劑載體。
89.根據(jù)權(quán)利要求88所述的方法，其中所述活性劑載體為脂質(zhì)體。
90.根據(jù)權(quán)利要求88所述的方法，其中所述活性劑載體為納米粒子。
91.根據(jù)權(quán)利要求88所述的方法，其中所述活性劑載體為聚合物膠束。
92.一種將活性劑遞送至受試者的方法，其包括:向受試者施用包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO:3)、MGPSSML(SEQ IDNO:4), TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT(SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中所述肽與活性劑或包含所述活性劑的活性劑載體締合，其中所述締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，并且其中所述組合物能夠穿透所述受試者的角質(zhì)層(SC)或穿透所述受試者的細(xì)胞。
93.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的SC以及穿透所述受試者的細(xì)胞。
94.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法，其中所述施用為局部施用。
95.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法，其中所述氨基酸序列包括CTGSTQHQC(SEQIDNO: 7)、CHSALTKHC (SEQ ID NO: 8)、CKTGSHNQC (SEQ ID NO: 9)、CMGPSSMLC (SEQ ID NO: 10)、CTDPNQLQC(SEQ ID NO:11)或 CSTHFIDTC(SEQ ID NO:12)。
96.根據(jù)權(quán)利要求95所述的方法，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
97.根據(jù)權(quán)利要求96所述的方法，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
98.—種治療患有皮膚疾病的受試者的方法,其包括:向所述受試者施用包含包括氨基酸序列 TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO: 2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO: 3)、MGPSSML (SEQ ID NO: 4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT(SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中所述肽偶聯(lián)到皮膚病活性劑或包含所述活性劑的皮膚病活性劑載體，并且其中所述組合物能夠穿透所述受試者的角質(zhì)層(SC)或穿透所述受試者的細(xì)胞。
99.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的SC以及穿透所述受試者的細(xì)胞。
100.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中所述施用為局部施用。
101.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
102.根據(jù)權(quán)利要求101所述的方法，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
103.—種治療患有皮膚疾病的受試者的方法,其包括:向受試者施用包含包括氨基酸序列 TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH(SEQ ID NO: 2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO: 3)、MGPSSML (SEQID NO: 4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或 STHFIDT(SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中所述肽與皮膚病活性劑或包含所述活性劑的皮膚病活性劑載體締合，其中所述締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，并且其中所述組合物能夠穿透所述受試者的角質(zhì)層(SC)或穿透所述受試者的細(xì)胞。
104.根據(jù)權(quán)利要求103所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的SC以及穿透所述受試者的細(xì)胞。
105.根據(jù)權(quán)利要求103所述的方法，其中所述施用為局部施用。
106.根據(jù)權(quán)利要求103所述的方法，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
107.根據(jù)權(quán)利要求106所述的方法，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
108.一種治療患有、疑似患有或易患至少部分地由mRNA的表達(dá)所導(dǎo)致的疾病的受試者的方法，其包括向所述受試者施用包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1),HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO:3)、MGPSSML(SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ(SEQ IDNO:5)或STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中所述肽偶聯(lián)到靶向所述mRNA的干擾RNA或包含所述干擾RNA的載體，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的角質(zhì)層(SC)或所述受試者的細(xì)胞，并且其中所述mRNA的表達(dá)因而得以減弱。
109.根據(jù)權(quán)利要求108所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的SC以及穿透所述受試者的細(xì)胞。
110.根據(jù)權(quán)利要求108所述的方法，其中所述施用為局部施用。
111.根據(jù)權(quán)利要求108所述的方法，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
112.根據(jù)權(quán)利要求111所述的方法，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
113.一種治療患有、疑似患有或易患至少部分地由mRNA的表達(dá)所導(dǎo)致的疾病的受試者的方法，其包括向所述受試者施用包含包括氨基酸序列TGSTQHQ(SEQ ID NO:1),HSALTKH(SEQ ID NO:2)、KTGSHNQ(SEQ ID NO:3)、MGPSSML(SEQ ID NO:4)、TDPNQLQ(SEQ IDNO:5)或STHFIDT(SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中所述肽與靶向所述mRNA的干擾RNA或包含所述干擾RNA的載體締合，其中所述締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的角質(zhì)層(SC)或所述受試者的細(xì)胞，并且其中所述mRNA的表達(dá)因而得以減弱。
114.根據(jù)權(quán)利要求113所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的SC以及穿透所述受試者的細(xì)胞。
115.根據(jù)權(quán)利要求113所述的方法，其中所述施用為局部施用。
116.根據(jù)權(quán)利要求113所述的方法，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
117.根據(jù)權(quán)利要求116所述的方法，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
118.—種減弱對其有需要的受試者中mRNA表達(dá)的方法，其包括向所述受試者施用包含包括氨基酸序列 TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO: 2)、KTGSHNQ (SEQ IDNO: 3)、MGPSSML (SEQ ID NO: 4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5) ^ STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中所述肽偶聯(lián)到祀向所述mRNA的siRNA或包含祀向所述mRNA的siRNA的載體，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的角質(zhì)層(SC)或所述受試者的細(xì)胞，并且其中所述mRNA的表達(dá)因而得以減弱。
119.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述mRNA為IL-1OmRNA并且所述siRNA為IL-10siRNA。
120.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述mRNA為⑶86mRNA并且所述siRNA為CD86 siRNA。
121.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述mRNA為KRT6amRNA并且所述siRNA為KRT6a siRNA。`
122.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述mRNA為TNFRlmRNA并且所述siRNA為TNFRl siRNA。
123.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述mRNA為TACEmRNA并且所述siRNA為TACE siRNA。
124.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的SC以及穿透所述受試者的細(xì)胞。
125.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述施用為局部施用。
126.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或 ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
127.根據(jù)權(quán)利要求126所述的方法，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
128.—種減弱對其有需要的受試者中mRNA表達(dá)的方法，其包括向所述受試者施用包含包括氨基酸序列 TGSTQHQ (SEQ ID NO:1)、HSALTKH (SEQ ID NO: 2)、KTGSHNQ (SEQ IDNO: 3)、MGPSSML (SEQ ID NO: 4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5) ^ STHFIDT (SEQ ID NO:6)的肽的組合物，其中所述肽與祀向所述mRNA的siRNA或包含祀向所述mRNA的siRNA的載體締合，其中所述締合由疏水、靜電或范德華相互作用產(chǎn)生，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的角質(zhì)層(SC)或所述受試者的細(xì)胞，并且其中所述mRNA的表達(dá)因而得以減弱。
129.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述mRNA為IL-1OmRNA并且所述siRNA為IL-10 siRNA。
130.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述mRNA為⑶86mRNA并且所述siRNA為CD86 siRNA。
131.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述mRNA為KRT6amRNA并且所述siRNA為KRT6a siRNA。
132.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述mRNA為TNFRlmRNA并且所述siRNA為TNFRl siRNA。
133.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述mRNA為TACEmRNA并且所述siRNA為TACE siRNA。
134.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述組合物能夠穿透所述受試者的SC以及穿透所述受試者的細(xì)胞。
135.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述施用為局部施用。
136.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述氨基酸序列包括ACTGSTQHQCG(SEQIDNO:13)、ACHSALTKHCG(SEQ ID NO:14)、ACKTGSHNQCG(SEQ ID NO:15)、ACMGPSSMLCG(SEQ IDNO: 16)、ACTDPNQLQCG(SEQ ID NO:17)或ACSTHFIDTCG(SEQ ID NO:18)。
137.根據(jù)權(quán)利要求136所述的方法，其中所述肽為包含Cys-Cys二硫鍵的環(huán)肽。
138.一種組合物，其包含基本上由氨基酸序列TGSTQHQ(SEQID NO:1)、HSALTKH (SEQID NO: 2)、KTGSHNQ (SEQ ID NO: 3)、MGPSSML (SEQ ID NO: 4)、TDPNQLQ (SEQ ID NO:5)或STHFIDT (SEQ ID NO:6)組成的肽，其中所述肽偶聯(lián)到活性劑或包含所述活性劑的活性劑載體，并且其中所述組合物能夠在與角質(zhì)層(SC)接觸時(shí)穿透所述角質(zhì)層或與細(xì)胞接觸時(shí)穿透所述細(xì)胞。
全文摘要
本公開提供促進(jìn)遞送活性劑或活性劑載體的肽以及肽組合物，其中所述組合物能夠穿透角質(zhì)層(SC)和/或活細(xì)胞的細(xì)胞膜。
文檔編號C07H21/04GK103201386SQ201180053251
公開日2013年7月10日 申請日期2011年10月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月9日
發(fā)明者T·徐, S·M·密特拉戈特里 申請人:加利福尼亞大學(xué)董事會