專利名稱：：用于篩選與使用拮抗孢子-表面交互作用的化合物的組合物與方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是關(guān)于感染控制領(lǐng)域。特定言之，本發(fā)明是關(guān)于維持無菌條件、去除細(xì)菌污染和/或預(yù)防細(xì)菌暴露的組合物與方法。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期抑制微生物孢子與基質(zhì)表面結(jié)合的感染控制組合物。舉例而言，該抑制破壞和/或置換微生物孢子與基質(zhì)表面的交互作用、附著和/或穩(wěn)定。
背景技術(shù)：
：產(chǎn)孢細(xì)菌可能會造成污染，包括(但不限于)醫(yī)院感染、食物腐敗和/或食物傳染疾病問題。隨著最低限度加工的冷藏產(chǎn)品的制造變得更有效率且無菌，背景微生物區(qū)系被去除，且產(chǎn)孢生物體最終可能限制所述產(chǎn)品的儲存期限。懷疑產(chǎn)孢細(xì)菌造成罐頭食品、面包、真空包裝肉、巴氏殺菌乳制品(pasteurizeddairyproduct)及果汁腐敗。進入任何所述類型的產(chǎn)品的成分中高含量細(xì)菌孢子的存在可能會增加最終產(chǎn)品腐敗的可能性。在衛(wèi)生保健環(huán)境中，產(chǎn)孢細(xì)菌時常引起感染，包括醫(yī)院性腹瀉、破傷風(fēng)及壞疽。艱難梭菌(Clostridiumdifficile)為引起抗生素相關(guān)性腹瀉及假膜性結(jié)腸炎的產(chǎn)孢厭氧細(xì)菌。最近出現(xiàn)的會導(dǎo)致發(fā)病率及死亡率增加的高度致病性流行菌株已進一步增強該醫(yī)院病原體的重要性。預(yù)期降低醫(yī)院工作人員與患者之間的感染傳播會顯著改善恢復(fù)時間，從而導(dǎo)致加快患者出院。自患者健康與社會成本觀點看，此為有益的。雖然醫(yī)療界努力增加消毒劑的使用來阻止微生物傳播，但患者感染及再感染的發(fā)生導(dǎo)致不必要的發(fā)病率及死亡率。細(xì)菌形成孢子，所述孢子在發(fā)芽之前可以休眠形式(dormantform)在宿主細(xì)胞中駐留數(shù)十年且可能造成與食品工業(yè)相關(guān)的出乎意料的污染或在醫(yī)學(xué)實踐中造成出乎意料的污染。此外，細(xì)菌孢子內(nèi)壁對皮膚及表面消毒劑有抗性，且因此當(dāng)前抗微生物措施大多無效。對篩選消除和/或阻止微生物孢子附著于宿主及后續(xù)宿主感染的感染控制組合物的方法存在需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是關(guān)于感染控制領(lǐng)域。特定言之，本發(fā)明是關(guān)于維持無菌條件、去除細(xì)菌污染和/或預(yù)防細(xì)菌暴露的組合物與方法。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期抑制微生物孢子與基質(zhì)表面結(jié)合的感染控制組合物。舉例而言，該抑制拮抗、破壞和/或置換微生物孢子與基質(zhì)表面的交互作用、附著和/或穩(wěn)定。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期能夠阻斷和/或抑制微生物孢子與基質(zhì)表面結(jié)合的感染控制組合物。在一個具體實例中，組合物包含有機小分子。在一個具體實例中，組合物包含蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，肽包含孢子表面肽。在一個具體實例中，肽來源于梭菌屬(Clostridia)孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)包含艱難梭菌(Clostridiadifficile)孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，肽來源于芽孢桿菌屬(Bacillus)孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)包含炭疽芽孢桿菌(Bacillusanthracis)孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，艱難梭菌孢子表面肽包含SEQIDNO:1或SEQIDNO1的同源物(homologue)。在一個具體實例中，孢子表面肽選自包含SEQIDNO3,SEQIDNO:5、SEQIDNO:7及SEQIDN0:15的群組。在一個具體實例中，組合物包含抗體。在一個具體實例中，抗體為多克隆抗體。在一個具體實例中，抗體為單克隆抗體。在一個具體實例中，組合物包含合成肽。在一個具體實例中，組合物包含無機離子復(fù)合物。在一個具體實例中，組合物包含蛋白質(zhì)模擬物。在一個具體實例中，基質(zhì)表面包含無生命表面。在一個具體實例中，包含有生命表面。在一個具體實例中，有生命表面包含身體組織表面。在一個具體實例中，身體組織表面包含上皮表面。在一個具體實例中，上皮表面包含哺乳動物皮膚表面。在一個具體實例中，無生命表面包含不銹鋼。在一個具體實例中，無生命表面包含陶瓷。在一個具體實例中，無生命表面包含乙烯樹脂(vinyl)。在一個具體實例中，無生命表面包含瓷磚。在一個具體實例中，組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。在一個具體實例中，組合物進一步包含載劑。在一個具體實例中，載劑進一步包含清潔劑(detergent)。在一個具體實例中，載劑為無菌的且適于人類給藥。在一個具體實例中，載劑包含抗微生物皮膚清潔劑(skincleaner)0在一個具體實例中，皮膚清潔劑包含手洗清潔劑(handwashcleaner)0在一個具體實例中，載劑包含抗微生物表面清潔劑。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期包含能夠阻斷和/或抑制微生物孢子與基質(zhì)表面結(jié)合的氨基酸序列的感染控制組合物，其中該氨基酸序列與微生物孢子表面蛋白質(zhì)具有實質(zhì)同源性。在一個具體實例中，實質(zhì)同源性包含約75%同源性，較佳85%同源性，且最佳90%或95%同源性。在一個具體實例中，表面蛋白質(zhì)包含孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，孢子表面蛋白質(zhì)為梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為艱難梭菌(C.difficile)孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，孢子表面蛋白質(zhì)為芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為炭疽芽孢桿菌(B.anthracis)孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，孢子表面蛋白質(zhì)包含孢子表面肽。在一個具體實例中，肽來源于梭菌屬表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬表面蛋白質(zhì)包含艱難梭菌表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，肽來源于芽孢桿菌屬表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬表面蛋白質(zhì)包含炭疽芽孢桿菌表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，艱難梭菌(Clostridiadifficile)孢子表面肽包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:1的同源物。在一個具體實例中，孢子表面肽選自包含SEQIDNO3,SEQIDN0:5、SEQIDNO:7及SEQIDN0:15的群組。在一個具體實例中，氨基酸序列來源于孢子表面蛋白質(zhì)的C末端。在一個具體實例中，氨基酸序列來源于孢子表面蛋白質(zhì)的N末端。在一個具體實例中，組合物進一步包含載劑。在一個具體實例中，載劑包含清潔劑。在一個具體實例中，組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。在一個具體實例中，載劑適于人類給藥。在一個具體實例中，組合物進一步包含抗微生物皮膚清潔劑。在一個具體實例中，皮膚清潔劑為手洗清潔劑。在一個具體實例中，組合物進一步包含抗微生物表面清潔劑。在一個具體實例中，組合物進一步包含皮膚屏障(skinbarrier)0在一個具體實例中，組合物進一步包含表面屏障(surfacebarrier)。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期包含拮抗化合物的感染控制組合物，其中該化合物對微生物孢子表面蛋白質(zhì)氨基酸序列具有親和力。在一個具體實例中，該親和力針對基質(zhì)表面特異性結(jié)合位點區(qū)。在一個具體實例中，化合物包含抗體。在一個具體實例中，化合物包含有機小分子。在一個具體實例中，孢子表面蛋白質(zhì)氨基酸序列包含肽片段。在一個具體實例中，肽片段來源于孢子表面蛋白質(zhì)的C末端。在一個具體實例中，肽片段來源于孢子表面蛋白質(zhì)的N末端。在一個具體實例中，孢子表面蛋白質(zhì)為梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，孢子表面蛋白質(zhì)為芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。在一個具體實例中，組合物進一步包含載劑。在一個具體實例中，載劑適于人類給藥。在一個具體實例中，組合物進一步包含抗微生物手部清潔劑。在一個具體實例中，組合物進一步包含抗微生物表面清潔劑。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期方法，該方法包含a)提供i)處于暴露于微生物的風(fēng)險中的個體，其中該暴露可能導(dǎo)致微生物感染；及ii)感染控制組合物；b)在微生物暴露之前在使得形成微生物感染屏障的條件下向個體給予組合物。在一個具體實例中，微生物感染屏障減少微生物感染。在一個具體實例中，微生物感染屏障阻止微生物感染。在一個具體實例中，微生物包含細(xì)菌。在一個具體實例中，細(xì)菌選自包含梭菌屬(Clostridia)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、脫硫腸狀菌屬(Desulfotomaculum)、芽孢乳桿菌屬(Sporolactobacillus)、芽孢八疊球菌屬(Sporosarcina)或高溫放線菌屬(Thermoactinomyces)的群組。在一個具體實例中，細(xì)菌包含細(xì)菌孢子。在一個具體實例中，細(xì)菌孢子包含至少一種孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，感染控制組合物包含氨基酸序列。在一個具體實例中，氨基酸序列來源于微生物孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，氨基酸序列與微生物孢子表面蛋白質(zhì)具有實質(zhì)同源性。在一個具體實例中，感染控制組合物包含能夠抑制、拮抗、破壞、置換和/或阻斷微生物孢子與基質(zhì)表面的結(jié)合。在一個具體實例中，感染控制組合物進一步包含拮抗化合物，其中該化合物對微生物孢子表面蛋白質(zhì)氨基酸序列具有親和力。在一個具體實例中，組合物進一步包含載劑。在一個具體實例中，感染控制組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。在一個具體實例中，處于風(fēng)險中的個體為衛(wèi)生保健工作人員。在一個具體實例中，處于風(fēng)險中的個體為醫(yī)療第一反應(yīng)者(medicalfirstresponder)。在一個具體實例中，處于風(fēng)險中的個體為醫(yī)療患者。在一個具體實例中，患者處于衛(wèi)生保健環(huán)境中。在一個具體實例中，已對醫(yī)療患者給予至少一種抗生素。在一個具體實例中，處于風(fēng)險中的個體為消防員。在一個具體實例中，處于風(fēng)險中的個體為警察。在一個具體實例中，處于風(fēng)險中的個體為軍事人員。在一個具體實例中，處于風(fēng)險中的個體為食物操作員(foodhandler)0在一個具體實例中，處于風(fēng)險中的個體為無生命表面和/或物體。在一個具體實例中，給藥選自包含局部給藥、經(jīng)口給藥、腸胃外給藥、肺部給藥、肛門給藥、陰道給藥、經(jīng)眼給藥或鼻內(nèi)的群組。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期方法，該方法包含a)提供i)已暴露于微生物的個體，其中該暴露導(dǎo)致微生物感染；ii)感染控制組合物；b)在微生物暴露之后在使得微生物感染減少的條件下向個體給予組合物。在一個具體實例中，微生物包含細(xì)菌。在一個具體實例中，細(xì)菌選自包含梭菌屬、芽孢桿菌屬、脫硫腸狀菌屬、芽孢乳桿菌屬、芽孢八疊球菌屬或高溫放線菌屬的群組。在一個具體實例中，細(xì)菌包含細(xì)菌孢子。在一個具體實例中，細(xì)菌孢子包含至少一種孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，感染控制組合物包含氨基酸序列。在一個具體實例中，氨基酸序列來源于微生物孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，氨基酸序列與微生物孢子表面蛋白質(zhì)具有實質(zhì)同源性。在一個具體實例中，感染控制組合物能夠抑制、拮抗、破壞、置換和/或阻斷微生物孢子與基質(zhì)表面的結(jié)合。在一個具體實例中，感染控制組合物進一步包含拮抗化合物，其中該化合物對微生物孢子表面蛋白質(zhì)氨基酸序列具有親和力。在一個具體實例中，組合物進一步包含載劑。在一個具體實例中，感染控制組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。在一個具體實例中，暴露的個體為衛(wèi)生保健工作人員。在一個具體實例中，暴露的個體為醫(yī)療第一反應(yīng)者。在一個具體實例中，暴露的個體為消防員。在一個具體實例中，暴露的個體為警察。在一個具體實例中，暴露的個體為軍事人員。在一個具體實例中，給藥選自包含局部給藥、經(jīng)口給藥、腸胃外給藥、肺部給藥、肛門給藥、陰道給藥、經(jīng)眼給藥或鼻內(nèi)給藥的群組。在一個具體實例中，暴露的個體為無生命表面和/或物體。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期篩選方法，該方法包含a)提供i)經(jīng)分離的肽，其中該肽來源于微生物孢子表面蛋白質(zhì)；及ii)懷疑與肽具有交互作用的感染控制測試化合物；b)使肽與感染控制測試化合物接觸；及C)檢測肽與感染控制測試化合物的交互作用。在一個具體實例中，該方法進一步包含能夠附著經(jīng)分離的肽的基質(zhì)。在一個具體實例中，基質(zhì)表面包含豬皮。在一個具體實例中，肽來源于梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)包含艱難梭菌孢子外膜。在一個具體實例中，肽來源于芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬孢子外膜包含炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，肽包含孢子表面肽。在一個具體實例中，艱難梭菌孢子表面肽包含SEQIDNO:1或SEQIDNO1的同源物。在一個具體實例中，孢子表面肽選自包含SEQIDNO3,SEQIDNO:5、SEQIDNO-JRSEQIDNO15的群組。在一個具體實例中，感染控制測試化合物包含有機小分子。在一個具體實例中，感染控制測試化合物包含合成肽。在一個具體實例中，感染控制測試化合物包含蛋白質(zhì)模擬物。在一個具體實例中，感染控制測試化合物包含抗體。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期方法，該方法包含a)提供i)經(jīng)分離的經(jīng)標(biāo)記微生物孢子表面肽，其中該肽產(chǎn)生第一熒光強度模式(pattern)；及ii)能夠與該肽交互作用的感染控制測試化合物；b)使該肽與該化合物接觸以產(chǎn)生具有第二熒光強度模式的接觸肽；c)比較該第一熒光強度模式與該第二熒光強度模式。在一個具體實例中，該方法進一步包含步驟d)檢測第一強度模式與第二強度模式之間的差異。在一個具體實例中，該差異表示該化合物結(jié)合該肽。在一個具體實例中，肽來源于細(xì)菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，細(xì)菌孢子表面蛋白質(zhì)來源于梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)包含艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，細(xì)菌孢子表面蛋白質(zhì)來源于芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)包含炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，孢子表面蛋白質(zhì)包含肽片段。在一個具體實例中，肽選自包含SEQIDN0:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7或SEQIDNO:9的群組。在一個具體實例中，標(biāo)記選自由4'-6-二甲脈基-2-苯基吲哚(DAPI)、苯氨基萘磺酸酯(ANS)、雙-ANS(雙-苯氨基萘磺酸酯)、N-苯基-1-萘(NPN)、釕紅(rutheniumred)、甲酚紫(cresolviolet)及4_(二氰基乙烯基)久洛尼定(4-(dicyanovinyl)julolidine,DCVJ)組成的群組。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期篩選化合物的方法，該方法包含a)提供i)包含重組表達載體的細(xì)菌，其中該載體包含孢子表面寡核苷酸序列的至少一部分；及ii)懷疑具感染控制活性的化合物；b)表達該載體以使孢子表面蛋白質(zhì)呈現(xiàn)于細(xì)菌膜上；C)使該細(xì)菌與該化合物接觸；及d)檢測該化合物的感染控制活性。在一個具體實例中，感染控制活性包含形成該化合物與該所呈現(xiàn)蛋白質(zhì)的結(jié)合對。在一個具體實例中，寡核苷酸序列包含SEQIDNO:2。在一個具體實例中，寡核苷酸序列選自包含SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8或SEQIDNO:16的群組。在一個具體實例中，重組表達載體進一步包含融合序列，其中該融合序列包含報導(dǎo)序列。在一個具體實例中，報導(dǎo)序列為半乳糖苷酶序列。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期檢測樣品中編碼微生物孢子表面蛋白質(zhì)基因的至少一部分的多核苷酸序列存在的方法，該方法包含a)提供i)SEQIDNO:2的至少一部分；及ii)懷疑含有孢子表面寡核苷酸序列的樣品；b)在使得在SEQIDNO2部分與孢子表面寡核苷酸序列之間形成雜交復(fù)合物的條件下合并SEQIDNO:2部分與樣品；及c)檢測雜交復(fù)合物。在一個具體實例中，孢子表面寡核苷酸來源于微生物孢子。在一個具體實例中，孢子來源于梭菌屬物種。在一個具體實例中，孢子來源于芽孢桿菌屬物種。在一個具體實例中，寡核苷酸序列為RNA。在一個具體實例中，寡核苷酸序列為DNA。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期方法，該方法包含提供感染控制組合物及包含細(xì)菌孢子的基質(zhì)表面；將組合物施用于該表面，其中自表面移除至少50%、較佳60%、更佳70%、甚至更佳80%、最佳90%或100%的孢子。在一個具體實例中，表面可選自由皮膚、身體組織、無機表面(亦即例如不銹鋼、花崗巖、塑料、瓷磚、陶瓷等)、手套、實驗服或醫(yī)療儀器組成的群組。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期方法，該方法包含提供感染控制組合物及處于高細(xì)菌孢子結(jié)合風(fēng)險的基質(zhì)表面；將組合物施用于該表面，其中阻止至少50%、較佳60%、更佳70%、甚至更佳80%、最佳90%或100%的細(xì)菌孢子結(jié)合。在一個具體實例中，表面可選自由皮膚、身體組織、無機表面(亦即例如不銹鋼、花崗巖、塑料、瓷磚、陶瓷等)或醫(yī)療儀器組成的群組。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期篩選與微生物孢子蛋白質(zhì)結(jié)合的多種感染控制組合物的方法，該方法包含a)提供包含載有該微生物孢子蛋白質(zhì)的珠粒的層析柱；b)在使得至少一種該感染控制組合物與該珠粒形成結(jié)合對的條件下使該多種感染控制組合物與該珠粒接觸；c)自該珠粒可控性釋放該至少一種結(jié)合的感染控制組合物；d)檢測該至少一種結(jié)合的感染控制組合物。在一個具體實例中，該結(jié)合對包含微生物孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，檢測至少一種結(jié)合的感染控制組合物包含產(chǎn)生熒光信號。在一個具體實例中，檢測至少一種結(jié)合的感染控制組合物包含形成酶-基質(zhì)產(chǎn)物。在一個具體實例中，可控性釋放步驟包含使珠粒暴露于釋放劑。在一個具體實例中，釋放劑選自由光、酸及堿組成的群組。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期包含蛋白質(zhì)模擬化合物及載劑的感染控制組合物，其中該蛋白質(zhì)模擬化合物在基質(zhì)表面上具有第一特異性結(jié)合位點模式，其中該第一結(jié)合模式與氨基酸序列的第二特異性結(jié)合位點模式具有至少50%—致性，較佳60%—致性，更佳70%一致性，甚至更佳80%一致性，最佳90%一致性或100%一致性，其中該序列與微生物孢子表面蛋白質(zhì)具有實質(zhì)同源性。在一個具體實例中，蛋白質(zhì)模擬化合物包含有機小分子。在一個具體實例中，蛋白質(zhì)模擬化合物包含合成肽。在一個具體實例中，蛋白質(zhì)模擬化合物包含無機離子復(fù)合物。在一個具體實例中，表面蛋白質(zhì)包含孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，微生物孢子表面蛋白質(zhì)來源于梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，孢子表面蛋白質(zhì)來源于芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，氨基酸序列來源于微生物孢子表面蛋白質(zhì)的C末端。在一個具體實例中，氨基酸序列來源于微生物孢子表面蛋白質(zhì)的N末端。在一個具體實例中，基質(zhì)表面包含有生命表面。在一個具體實例中，基質(zhì)表面包含無生命表面。在一個具體實例中，有生命表面包含身體組織表面。在一個具體實例中，身體組織表面包含哺乳動物皮膚表面。在一個具體實例中，無生命表面包含不銹鋼。在一個具體實例中，無生命表面包含陶瓷。在一個具體實例中，無生命表面包含乙烯樹脂。在一個具體實例中，無生命表面包含瓷磚。在一個具體實例中，載劑包含清潔劑。在一個具體實例中，組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。在一個具體實例中，載劑為無菌的且適于人類給藥。在一個具體實例中，組合物進一步包含抗微生物皮膚清潔劑。在一個具體實例中，組合物進一步包含抗微生物表面清潔劑。定義如本文所使用的術(shù)語“醫(yī)藥上(pharmaceuticalIy)”或“藥理上可接受(pharmacologicallyacc印table)”指當(dāng)向動物或人類給藥時不產(chǎn)生不利、過敏性或其它不良反應(yīng)的分子實體及組合物。如本文所使用的術(shù)語“醫(yī)藥上可接受的載劑(pharmaceuticallyacceptablecarrier)”包括任何及所有溶劑或分散介質(zhì)，包括(但不限于)水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液態(tài)聚乙二醇及其類似物)、其適合混合物、及植物油、涂料、等張劑及吸收延遲劑、脂質(zhì)體、商業(yè)上可獲得的清潔劑及其類似物。亦可向所述載劑中并入補充生物活性成分。如本文所使用的術(shù)語“經(jīng)純化的(purified)”或“經(jīng)分離的(isolated)”可指肽組合物，其已經(jīng)受處理(亦即例如分級分離)而移除各種其它組分，且該組合物實質(zhì)上保留其所表達的生物活性。當(dāng)使用術(shù)語“實質(zhì)上經(jīng)純化的(substantiallypurified)”時，該表述將指其中的蛋白質(zhì)或肽構(gòu)成組合物的主要組分，諸如構(gòu)成組合物的約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%或更多(亦即例如重量/重量和/或重量/體積)的組合物。使用術(shù)語“純化至均質(zhì)(purifiedtohomogeneity)”來包括已經(jīng)純化至“表觀均質(zhì)性(apparenthomogeneity)”以致僅存在單一蛋白質(zhì)種類(亦即例如基于十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)或高效液相色譜(HPLC)分析)的組合物。經(jīng)純化的組合物不欲意謂可能余留一些微量雜質(zhì)。如本文所使用的術(shù)語“實質(zhì)上經(jīng)純化的，，是指分子(核酸或氨基酸序列)，其自其天然環(huán)境中移出、分離或分開，且無至少60%、較佳75%且更佳90%的與其天然締合的其它組分摻雜。因此，“經(jīng)分離的多核苷酸”為實質(zhì)上經(jīng)純化的多核苷酸。如本文所使用的“核酸序列，，及“核苷酸序列，，是指寡核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，且指基因組或合成來源的DNA或RNA，其可為單鏈或雙鏈且表示正義鏈或反義鏈。如本文所使用的術(shù)語“經(jīng)分離的核酸”是指已自天然狀態(tài)移出的任何核酸分子(例如自細(xì)胞移出且在一個較佳具體實例中，不含其它基因組核酸)。如本文所使用的術(shù)語“功能等效密碼子(functionallyequivalentcodon)”是指編碼相同氨基酸的不同密碼子。該現(xiàn)象通常稱為遺傳密碼的“簡并性(degeneracy)”。舉例而言，6個不同密碼子編碼氨基酸精氨酸。如本文所使用的術(shù)語“氨基酸序列”及“多肽序列”可互換且指氨基酸的序列。如本文所使用的術(shù)語“孢子表面蛋白質(zhì)”是指來源于任何細(xì)菌孢子外膜蛋白質(zhì)或與任何細(xì)菌孢子外膜蛋白質(zhì)具有實質(zhì)相似性(亦即同源)的任何蛋白質(zhì)或肽片段。認(rèn)為微生物孢子表面蛋白質(zhì)負(fù)責(zé)使微生物孢子附著及固定于無生命和/或有生命表面直至條件足以誘導(dǎo)發(fā)芽。如本文所使用的術(shù)語“來源于”是指化合物或序列的來源。在一個方面中，化合物或序列可來源于生物體或特定物種。在另一方面中，化合物或序列可來源于較大復(fù)合物或序列。如本文所使用的“BclA”或“BclA多肽”或“BclA蛋白質(zhì)”或“BclA同源物”可互換使用來指自任何物種、尤其細(xì)菌物種(包括革蘭氏陰性細(xì)菌(gramnegativekicteria)、革蘭氏陽性細(xì)菌(grampositivekicteria)、好氧細(xì)菌及厭氧細(xì)菌)獲得及自任何來源(不論天然、合成、半合成或重組)獲得的實質(zhì)上經(jīng)純化的芽孢桿菌屬樣(Bacillus-like)蛋白質(zhì)的氨基酸序列。舉例而言，艱難梭菌BclA同源物將具有與炭疽芽孢桿菌BclA肽相同的功能及活性。蛋白質(zhì)的“變異體(variant)”定義為與多肽序列(亦即例如SEQIDNO:1)或該多肽序列的任何同源物相差一或多個氨基酸的氨基酸序列。變異體可能具有“保守性(conservative)”變化，其中經(jīng)取代的氨基酸具有類似結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)，例如亮氨酸經(jīng)異亮氨酸置換。較少見的是，變異體可能具有“非保守性(nonconservative)”變化，例如甘氨酸經(jīng)色氨酸置換。類似的微小變異亦可包括氨基酸缺失或插入(亦即添加)或兩者?？墒褂糜嬎銠C程序(包括但不限于DNAMar軟件)發(fā)現(xiàn)確定哪些及多少氨基酸殘基可經(jīng)取代、插入或缺失而不徹底破壞生物或免疫活性的指導(dǎo)原則。核苷酸的“變異體”定義為與參考寡核苷酸相比因具有缺失、插入及取代而不同的新穎核苷酸序列。所述不同可使用多種方法(例如測序、雜交檢定等)檢測。該定義內(nèi)包括編碼梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)的基因組DNA序列的改變(亦即例如通過能夠與SEQIDNO2雜交的限制酶片段的模式的改變(限制性內(nèi)切酶多型性(RFLP)分析)、使所選SEQIDN02片段在高嚴(yán)格度條件下不能與基因組DNA樣品雜交(例如使用等位基因特異性寡核苷酸探針)、及不適當(dāng)或出乎意料的雜交，諸如與除梭菌屬孢子表面基因的正常染色體基因座以外的基因座雜交(例如使用熒光原位雜交(FISH))?！叭笔А倍x為核苷酸或氨基酸序列中分別缺少一或多個核苷酸或氨基酸殘基的變化?！安迦搿被颉疤砑?，，為核苷酸或氨基酸序列中與例如天然存在的梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)相比分別導(dǎo)致添加一或多個核苷酸或氨基酸殘基的變化?！叭〈庇梢换蚨鄠€核苷酸或氨基酸分別經(jīng)不同核苷酸或氨基酸置換而引起。如本文所使用的術(shù)語“衍生物”是指核酸或氨基酸的任何化學(xué)修飾。所述修飾的例證可為用烷基、?；虬被脫Q氫。舉例而言，核酸衍生物將編碼保留基本生物學(xué)特征的多肽。如本文所使用的術(shù)語“部分”當(dāng)提及蛋白質(zhì)(如“指定蛋白質(zhì)的部分”)時是指該蛋白質(zhì)的片段。片段的大小可在四個氨基酸殘基至整個氨基酸序列減去一個氨基酸范圍內(nèi)。舉例而言，“包含SEQIDNO1的氨基酸序列的至少一部分”的蛋白質(zhì)涵蓋全長梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)及其含四(4)個或更多個氨基酸的片段。術(shù)語“部分”當(dāng)提及核苷酸序列使用時是指該核苷酸序列的片段。所述片段的大小可在5個核苷酸殘基至整個核苷酸序列減去一個核酸殘基范圍內(nèi)。術(shù)語“生物活性”指任何具結(jié)構(gòu)、調(diào)控或生物化學(xué)功能的分子。舉例而言，可例如通過恢復(fù)缺乏孢子表面蛋白質(zhì)活性的細(xì)胞(亦即例如孢子表面蛋白質(zhì)裸細(xì)胞(nullcell)和/或“敲除(knockout)”細(xì)胞)的野生型生長來測定孢子表面蛋白質(zhì)生物活性。缺乏孢子表面蛋白質(zhì)活性的細(xì)胞可利用許多方法(亦即例如點突變及移碼突變(frame-shiftmutation))產(chǎn)生。通過用表達孢子表面蛋白質(zhì)、其衍生物或其部分的表達載體轉(zhuǎn)染缺乏孢子表面蛋白質(zhì)活性的細(xì)胞來達成互補。術(shù)語“免疫活性(immunologicallyactive)”定義天然、重組或合成肽(亦即例如孢子表面蛋白質(zhì))或其任何寡肽在適當(dāng)動物或細(xì)胞中誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)和/或與特異性抗體結(jié)合的能力。如本文所使用的術(shù)語“抗原性決定子(antigenicdeterminant)”是指分子中由特定抗體識別的部分(亦即抗原決定基)。當(dāng)使用蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段免疫宿主動物時，蛋白質(zhì)的許多區(qū)域可誘導(dǎo)產(chǎn)生與蛋白質(zhì)上的指定區(qū)域或三維結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合的抗體；所述區(qū)域或結(jié)構(gòu)稱為抗原性決定子?？乖詻Q定子可與完整抗原(亦即用于引發(fā)免疫反應(yīng)的免疫原)競爭以結(jié)合抗體。術(shù)語“免疫原”、“抗原”、“免疫原性”及“抗原性”是指當(dāng)引入動物中時能夠產(chǎn)生抗體的任何物質(zhì)。根據(jù)定義，免疫原必須含有至少一個抗原決定基(能夠引起免疫反應(yīng)的特定生物化學(xué)單元)，且一般含有更多。雖然最常使用蛋白質(zhì)作為免疫原，但與蛋白質(zhì)復(fù)合的脂質(zhì)及核酸部分亦可充當(dāng)免疫原。當(dāng)具有少數(shù)抗原決定基的較小分子本身不能激發(fā)令人滿意的免疫反應(yīng)時，后者復(fù)合物通常適用。術(shù)語“抗體”是指免疫原(抗原)在動物中引起的免疫球蛋白。希望抗體顯示針對免疫原中所含的抗原決定基的特異性。術(shù)語“多克隆抗體”是指由單個以上漿細(xì)胞純系產(chǎn)生的免疫球蛋白質(zhì)；相比之下，“單克隆抗體”是指由單個漿細(xì)胞純系產(chǎn)生的免疫球蛋白。術(shù)語“特異性結(jié)合(specificbinding)或(specificallybinding)”當(dāng)提及抗體與蛋白質(zhì)或肽的交互作用使用時，意謂交互作用視蛋白質(zhì)上特定結(jié)構(gòu)(亦即例如抗原性決定子或抗原決定基)的存在而定；換言之，抗體識別及結(jié)合特定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)而非一般蛋白質(zhì)。舉例而言，若抗體對抗原決定基“A”具有特異性，則在含經(jīng)標(biāo)記“A”及該抗體的反應(yīng)中含抗原決定基A的蛋白質(zhì)(或自由的未經(jīng)標(biāo)記的A)的存在將減少與該抗體結(jié)合的經(jīng)標(biāo)記A的量。如本文所使用的術(shù)語“重組DNA分子”是指包含借助于分子生物學(xué)技術(shù)連接在一起的DNA區(qū)段的DNA分子。如本文所使用的術(shù)語“重組蛋白質(zhì)”或“重組多肽”是指使用重組DNA分子表達的蛋白質(zhì)分子。如本文所使用的術(shù)語“載體(vector)”及“運載體(vehicle)，，當(dāng)提及將DNA區(qū)段自一個細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個細(xì)胞的核酸分子時，可互換使用。如本文所使用的術(shù)語“表達載體”或“表達盒(expressioncassette)”是指含有所要編碼序列及在特定宿主生物體中表達可操作地連接的編碼序列所必需的適當(dāng)核酸序列的重組DNA分子。在原核生物中表達所必需的核酸序列通常包括啟動子(promoter)、操縱子(operator)(視情況)及核糖體結(jié)合位點，通常同時存在其它序列。已知真核生物細(xì)胞使用啟動子、增強子(enhancer)及終止與聚腺苷酸化信號。如本文所使用的術(shù)語“可操作合并”、“可操作順序”及“可操作地連接”是指核酸序列以使得產(chǎn)生能夠指導(dǎo)指定基因轉(zhuǎn)錄和/或所要蛋白質(zhì)分子合成的核酸分子的方式連接。該術(shù)語亦指氨基酸序列以使得產(chǎn)生功能性蛋白質(zhì)的方式連接。如本文所使用的術(shù)語“轉(zhuǎn)染”是指將外源DNA引入細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染可通過此項技術(shù)已知的多種方式達成，包括磷酸鈣-DNA共沉淀、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、聚凝胺(polybrene)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電穿孔、顯微注射、脂質(zhì)體融合、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染(lipofection)、原生質(zhì)體融合、反轉(zhuǎn)錄病毒感染、基因槍法(biolistics)(亦即粒子轟擊)及其類似方式。如本文所使用的術(shù)語“互補，，或“互補性，，用于指根據(jù)堿基配對規(guī)則而相關(guān)的“多核苷酸”及“寡核苷酸”(所述術(shù)語可互換，指核苷酸序列)。舉例而言，序列“C-A-G-T”與序列“G-T-C-A”互補?；パa性可為“部分”或“整體”?！安糠帧被パa性系根據(jù)堿基配對規(guī)則，一或多個核酸堿基不匹配。核酸之間的“整體”或“完全”互補性系于堿基配對規(guī)則下，每個核酸堿基均與另一堿基匹配。核酸鏈之間的互補性程度對核酸鏈之間的雜交效率及強度具有顯著影響。此在擴增反應(yīng)以及依賴于核酸之間的結(jié)合的檢測方法中尤其重要。本文所使用的術(shù)語“同源性(homology)”及“同源(homologous)”在提及核苷酸序列時是指與其它核苷酸序列的互補性程度?？赡艽嬖诓糠滞葱曰蛲耆葱?亦即一致性)。與核酸序列部分互補(亦即“實質(zhì)上同源”)的核苷酸序列為至少部分抑制完全互補序列與目標(biāo)核酸序列雜交的核苷酸序列。對完全互補序列與目標(biāo)序列雜交的抑制可在低嚴(yán)格度條件下使用雜交檢定(DNA印跡(Southernblot)或RNA印跡(Northernblot)、溶液雜交及其類似方法)檢查。實質(zhì)上同源的序列或探針將在低嚴(yán)格度條件下與完全同源的序列競爭與目標(biāo)序列的結(jié)合(亦即雜交)且抑制完全同源的序列與目標(biāo)序列的結(jié)合(亦即雜交)。此并不意謂低嚴(yán)格度條件為以致允許非特異性結(jié)合；低嚴(yán)格度條件要求兩個序列彼此間的結(jié)合為特異性(亦即選擇性)交互作用?？赏ㄟ^使用甚至缺乏部分程度的互補性(例如低于約30%的一致性)的第二目標(biāo)序列來測試無非特異性結(jié)合存在；在無非特異性結(jié)合存在下，探針不會與第二非互補目標(biāo)雜交。如本文所使用的術(shù)語“同源性”及“同源”在提及氨基酸序列時是指兩個氨基酸序列之間一級結(jié)構(gòu)的一致性程度。該一致性程度可針對各氨基酸序列的部分或針對氨基酸序列的整個長度。兩個或更多個“實質(zhì)上同源”的氨基酸序列可具有至少50%—致性，較佳至少75%—致性，更佳至少85%—致性，最佳至少95%或100%—致性。為梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)核酸序列(亦即例如SEQIDNO2)的“同源物”的寡核苷酸序列在本文中定義為當(dāng)比較具有長度為IOObp或更長的序列時，展現(xiàn)與SEQIDNO2序列的一致性大于或等于50%的寡核苷酸序列?；蛘?，SEQIDNO:2的同源物定義為編碼生物活性梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)氨基酸序列的寡核苷酸序列。舉例而言，梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)同源物可包含編碼孢子表面蛋白質(zhì)的寡核苷酸序列的部分。低嚴(yán)格度條件包含與如下條件等效的條件當(dāng)使用長度為約500個核苷酸的探針時，在42°C下在由5XSSPE(43.8g/lNaCl、6.9g/lNaH2PO4·H2O及1.85g/l乙二胺四乙酸(EDTA)，pH值用NaOH調(diào)整至7.4)、0.1%SDS.5X鄧哈特試劑(Denhardt'sreagent){每500ml50X鄧哈特試劑含有:5g菲柯爾(Ficoll)(Type400，法瑪西亞(Pharmacia))、5g牛血清清蛋白(BSA)(FractionV；西格瑪(Sigma))}及100μg/ml變性鮭魚精子DNA組成的溶液中結(jié)合或雜交，接著在42°C下在包含5XSSPE、0.1%SDS的溶液中洗滌。亦可使用許多等效條件來包含低嚴(yán)格度條件；可改變因素來產(chǎn)生與以上所列的條件不同但等效的低嚴(yán)格度雜交條件，所述因素為諸如探針的長度及性質(zhì)(DNA、RNA、堿基組成)及目標(biāo)的性質(zhì)(DNA、RNA、堿基組成、存在于溶液中或為固定等)及鹽及其它組分的濃度(例如是否存在甲酰胺、硫酸葡聚糖、聚乙二醇)以及雜交溶液的組分。另外，亦可使用在高嚴(yán)格度條件下(例如增加雜交和/或洗滌步驟的溫度、在雜交溶液中使用甲酰胺等)促進雜交的條件。如本文所使用的術(shù)語“雜交”用于指使用使核酸鏈與互補鏈經(jīng)由堿基配對連接以形成雜交復(fù)合物的任何方法使互補核酸配對。雜交及雜交強度(亦即核酸之間的締合強度)受以下因素影響諸如核酸之間的互補性程度、所涉及條件的嚴(yán)格度、所形成雜交體(hybrid)的Tm及核酸內(nèi)的GC比率。如本文所使用的術(shù)語“雜交復(fù)合物”是指兩個核酸序列之間通過在互補G與C堿基之間及互補A與T堿基之間形成氫鍵的功效所形成的復(fù)合物；所述氫鍵可經(jīng)由堿基堆積交互作用而進一步穩(wěn)定。兩個互補核酸序列氫鍵呈反平行構(gòu)形。雜交復(fù)合物可在溶液中形成(例如Ctlt或Rqt分析)或在存在于溶液中的一個核酸序列與固定于固體支撐物(例如DNA印跡及RNA印跡、點印跡法中所采用的尼龍膜(nylonmembrane)或硝化纖維素濾紙，或用于原位雜交包括FISH(熒光原位雜交)中所采用的玻璃載玻片)的另一核酸序列之間形成。如本文所使用的術(shù)語“Tm”用于指“熔融溫度(meltingtemperature)熔融溫度為雙鏈核酸分子群變成半分離成單鏈的溫度。如標(biāo)準(zhǔn)參考文獻所指示，當(dāng)核酸處于IMNaCl水溶液中時，可由等STm=81.5+0.41(G+C%)計算出Tm值的簡單估算值。Anderson等人，“定量過濾雜交(QuantitativeFilterHybridization)，1n核酸雜交(NucleicAcidHybridization)(1985)。更精準(zhǔn)計算在計算Tm時考慮結(jié)構(gòu)以及序列特征。如本文所使用的術(shù)語“嚴(yán)格度”用于指執(zhí)行核酸雜交的溫度、離子強度及存在其它化合物(諸如有機溶劑)的條件?！皣?yán)格度”典型地存在于約Tm至低于1約201至25°C的范圍內(nèi)?！皣?yán)格雜交”可用于鑒別或檢測相同多核苷酸序列或鑒別或檢測類似或相關(guān)多核苷酸序列。舉例而言，當(dāng)SEQIDNO:2的片段在嚴(yán)格條件下用于雜交反應(yīng)中時，含獨特序列(亦即不與SEQIDNO:2同源或與SEQIDNO:2的同源性或互補性小于約50%的區(qū)域)的SEQIDNO:2的片段的雜交較好?；蛘?，當(dāng)使用“弱(weak)”或“低(low)”嚴(yán)格度條件時，來源于遺傳上多樣的生物體(亦即例如在所述生物體之間互補序列出現(xiàn)頻率通常較低)的核酸可能發(fā)生雜交。如本文所使用的術(shù)語“可擴增核酸”用于指可利用任何擴增方法擴增的核酸。預(yù)期“可擴增核酸”通常包含“樣品模板”。如本文所使用的術(shù)語“樣品模板”是指來源于分析有興趣的目標(biāo)序列的存在的樣品的核酸。相比之下，“背景模板”用于指樣品中可能存在或可能不存在的除樣品模板以外的核酸。背景模板最常被疏忽。其可能為留存物的結(jié)果，或其可能歸因于存在本應(yīng)設(shè)法自樣品中純化除去的核酸污染物。舉例而言，來自生物體的除待檢測核酸以外的核酸均可能存在作為測試樣品中的背景?！皵U增(Amplification)”定義為產(chǎn)生核酸序列的額外復(fù)制體且一般使用聚合酶鏈反應(yīng)進行。DieffenbachC.W.及G.S.Dveksler(1995)，In:PCR引物(PCRPrimer)，實驗室手冊(aLaboratoryManual)，冷泉港出版社(ColdSpringHarborPress)，普萊恩維尤，紐約(Plainview，N.Y)。如本文所使用的術(shù)語“聚合酶鏈反應(yīng)”(“PCR”)是指K.B.Mullis美國專利案第4，683，195號及第4，683，202號的方法，所述專利以引用的方式并入本文中，所述專利描述不經(jīng)克隆化或純化而增加基因組DNA混合物中目標(biāo)序列區(qū)段的濃度的方法。所要目標(biāo)序列的所擴增區(qū)段的長度由兩個寡核苷酸引物彼此間的相對位置決定，且因此該長度為可控制參數(shù)。根據(jù)方法的重復(fù)態(tài)樣的功效，該方法稱為“聚合酶鏈反應(yīng)”(下文稱為“PCR”)。因為目標(biāo)序列的所要擴增區(qū)段成為混合物中的優(yōu)勢序列(就濃度而言)，所以稱其為經(jīng)“PCR擴增”。利用PCR，可將基因組DNA中特定目標(biāo)序列的單個復(fù)制體擴增至可用數(shù)種不同方法(例如與經(jīng)標(biāo)記的探針雜交；并入經(jīng)生物素標(biāo)記的引物，接著檢測抗生物素蛋白-酶共軛物；將經(jīng)32P標(biāo)記的三磷酸脫氧核苷酸(諸如dCTP或dATP)并入所擴增的區(qū)段中)檢測的含量。除基因組DNA以外，任何寡核苷酸序列亦均可用適當(dāng)引物分子組擴增。特定言之，PCR方法自身產(chǎn)生的擴增區(qū)段本身即為后續(xù)PCR擴增的有效模板。如本文所使用的術(shù)語“引物(primer)”是指寡核苷酸(不論天然存在于經(jīng)純化的限制消化產(chǎn)物中或合成產(chǎn)生)，當(dāng)將其置于誘導(dǎo)合成與核酸鏈互補的引物延長產(chǎn)物的條件(亦即在核苷酸及諸如DNA聚合酶的誘導(dǎo)劑存在下且在適合溫度及pH值下)下時，其能夠充當(dāng)合成起點。雖然為達成擴增的最高效率，引物較佳為單鏈，但或者亦可為雙鏈。若為雙鏈，則在使用引物制備延長產(chǎn)物之前，首先將其處理以使其各鏈分離。引物較佳為寡脫氧核糖核苷酸。引物必須足夠長以在誘導(dǎo)劑存在下引發(fā)延長產(chǎn)物的合成。引物的確切長度將視許多因素而定，包括溫度、引物來源及方法的使用。如本文所使用的術(shù)語“探針”是指寡核苷酸(亦即核苷酸序列)(不論天然存在于經(jīng)純化限制的消化產(chǎn)物中或合成、重組或利用PCR擴增產(chǎn)生)，其能夠與另一有興趣的寡核苷酸雜交。探針可為單鏈或雙鏈。探針適用于檢測、鑒別及分離特定基因序列。預(yù)期本發(fā)明所使用的任何探針將經(jīng)任何“報導(dǎo)分子”標(biāo)記以便可在任何檢測系統(tǒng)中檢測，該檢測系統(tǒng)包括(但不限于)酶(例如ELISA以及基于酶的組織化學(xué)檢定)、熒光、放射性及發(fā)光系統(tǒng)。不希望本發(fā)明局限于任何特定檢測系統(tǒng)或標(biāo)記。如本文所使用的術(shù)語“限制核酸內(nèi)切酶(restrictionendonuclease)”及“限制酶(restrictionenzyme)”是指各自在特定核苷酸序列處或附近切割雙鏈DNA的細(xì)菌酶。認(rèn)為DNA分子具有“5'末端(5‘end)”及“3‘末端(3‘end)”，因為單核苷酸以使一個單核苷酸戊糖環(huán)的5'磷酸經(jīng)由磷酸二酯鍵沿一個方向附著至其相鄰單核苷酸戊糖環(huán)的3'氧的方式反應(yīng)而得到寡核苷酸。因此，若寡核苷酸的5'磷酸未連接于單核苷酸戊糖環(huán)的3'氧，則寡核苷酸的該末端稱為“5'末端”。若寡核苷酸的3'氧未連接于另一單核苷酸戊糖環(huán)的5'磷酸，則寡核苷酸的該末端稱為“3'末端”。即使本文所使用的核酸序列位于較大寡核苷酸內(nèi)部，亦可認(rèn)為其具有5'末端及3'末端。在線性或環(huán)狀DNA分子中，離散的組件(discreteelement)稱為位于“上游(upstream)”或“下游(downstream)”的5'或3'組件。該術(shù)語反映轉(zhuǎn)錄沿DNA鏈以5'至3'的方式進行的事實。指導(dǎo)所連接基因的轉(zhuǎn)錄的啟動子及增強子組件一般位于編碼區(qū)的5'或上游。然而，增強子組件甚至在位于啟動子組件及編碼區(qū)的3'時，亦可發(fā)揮作用。轉(zhuǎn)錄終止及聚腺苷酸化信號位于編碼區(qū)的3'或下游。如本文所使用的術(shù)語“具有編碼基因的核苷酸序列的寡核苷酸”意謂包含基因的編碼區(qū)的核酸序列，亦即編碼基因產(chǎn)物的核酸序列。編碼區(qū)可以cDNA、基因組DNA或RNA形式存在。當(dāng)以DNA形式存在時，寡核苷酸可為單鏈(亦即正義鏈)或雙鏈。若需要允許適當(dāng)啟始轉(zhuǎn)錄和/或正確處理初級RNA轉(zhuǎn)錄物，則可緊密接近基因的編碼區(qū)放置適合的控制組件(諸如增強子/啟動子、剪接點(splicejunction)、聚腺苷酸化信號等)?；蛘?，本發(fā)明表達載體中所用的編碼區(qū)可含有內(nèi)源性增強子/啟動子、剪接點、介入序列(interveningsequence)、聚腺苷酸化信號等或內(nèi)源性與外源性控制組件兩者的組合。如本文所使用的術(shù)語“調(diào)控組件(regulatoryelement)”是指控制核酸序列表達的一些方面的遺傳組件。舉例而言，啟動子為促進可操作地連接的編碼區(qū)轉(zhuǎn)錄啟始的調(diào)控組件。其它調(diào)控組件為剪接信號、聚腺苷酸化信號、終止信號等。真核生物中的轉(zhuǎn)錄控制信號包含“啟動子”及“增強子”組件。啟動子及增強子由與參與轉(zhuǎn)錄的細(xì)胞蛋白質(zhì)特異性交互作用的DNA序列陣列(array)組成。ManiatiS，T.等人，Science2361237(1987)。已自多種真核生物來源分離啟動子及增強子組件，所述來源包括植物、酵母、昆蟲及哺乳動物細(xì)胞及病毒的基因(原核生物中亦發(fā)現(xiàn)類似控制組件，亦即啟動子)。特定啟動子及增強子的選擇視何種細(xì)胞類型用于表達有興趣的蛋白質(zhì)而定。表達載體上存在“剪接信號(splicingsignal)”通常導(dǎo)致較高程度的重組轉(zhuǎn)錄物的表達。剪接信號介導(dǎo)自初級RNA轉(zhuǎn)錄物移除內(nèi)含子(intron)，且由剪接供體及受體位點組成。Sambrook，J.等人，分子克隆實驗指南(MolecularCloninR:ALaboratoryManual),第2版，ColdSpringHarborlaboratoryPress,NewYork(1989)第16.7-16.8頁。常用剪接供體及受體位點為來自SV40的16SRNA的剪接點。如本文所使用的術(shù)語“聚A位點(polyAsite)”或“聚A序列(polyAsequence)’，表示指導(dǎo)初生RNA轉(zhuǎn)錄物的終止與聚腺苷酸化的DNA序列。希望重組轉(zhuǎn)錄物有效聚腺苷酸化，因為缺乏聚A尾的轉(zhuǎn)錄物不穩(wěn)定且快速降解。表達載體中所用的聚A信號可為“異源(heterologous)”或“內(nèi)源(endogenous)”。內(nèi)源聚A信號為天然發(fā)現(xiàn)于基因組中指定基因的編碼區(qū)的3'末端者。異源聚A信號為自一個基因分離出來且置于另一基因的3'者。在真核生物細(xì)胞中有效表達重組DNA序列涉及表達指導(dǎo)所得轉(zhuǎn)錄物的有效終止及聚腺苷酸化的信號。轉(zhuǎn)錄終止信號一般可見于聚腺苷酸化信號的下游且長度為數(shù)百個核苷酸。術(shù)語“轉(zhuǎn)染(transfection或transfected)”是指將外源DNA引入細(xì)胞中。如本文所使用的術(shù)語“編碼……的核酸分子”、“編碼……的DNA序列”及“編碼……的DNA”是指沿脫氧核糖核酸鏈的脫氧核糖核苷酸的順序或序列。所述脫氧核糖核苷酸的順序決定沿多肽(蛋白質(zhì))鏈的氨基酸順序。因此DNA序列編碼氨基酸序列。如本文所使用的術(shù)語“反義”用于指與特定RNA序列(例如mRNA)互補的RNA序列。反義RNA可通過任何方法產(chǎn)生，包括通過沿相反方向?qū)⒂信d趣的基因剪接于允許合成編碼鏈的病毒啟動子來合成。一旦該所轉(zhuǎn)錄的鏈引入細(xì)胞中，其即與細(xì)胞產(chǎn)生的天然mRNA組合以形成雙鏈。所述雙鏈隨后阻斷mRNA的進一步轉(zhuǎn)錄或其轉(zhuǎn)譯。以此方式可產(chǎn)生突變表型。術(shù)語“反義鏈(antisensestrand)”用于指與“正義”鏈互補的核酸鏈。符號(-)(亦即“負(fù)”)有時用于指反義鏈，而符號⑴有時用于指正義(亦即“正”)鏈。術(shù)語“DNA印跡”是指在瓊脂糖或丙烯酰胺凝膠上分析DNA以根據(jù)大小分級分離DNA，接著將DNA自凝膠轉(zhuǎn)移至固體支撐物(諸如硝化纖維素或尼龍膜)并加以固定。隨后用經(jīng)標(biāo)記的寡脫氧核糖核苷酸探針或DNA探針探測固定的DNA以檢測與所用探針互補的DNA種類。在電泳之前，可用限制酶裂解DNA。電泳之后，在將DNA轉(zhuǎn)移至固體支撐物之前或期間，可將DNA部分去嘌呤及變性。DNA印跡為分子生物學(xué)家的標(biāo)準(zhǔn)手段。J.Sambrook等人，(1989)In:MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPress,NY，第9.31-9.58頁。如本文所使用的術(shù)語“RNA印跡”是指通過在瓊脂糖凝膠上電泳RNA來分析RNA以根據(jù)大小分級分離RNA，接著將RNA自凝膠轉(zhuǎn)移至固體支撐物(諸如硝化纖維素或尼龍膜)上。隨后用經(jīng)標(biāo)記的寡脫氧核糖核苷酸探針或DNA探針探測固定的RNA以檢測與所用探針互補的RNA種類。RNA印跡為分子生物學(xué)家的標(biāo)準(zhǔn)手段。J.Sambrook，J.等人，(1989)同上，第7.39-7.52頁。如本文所使用的術(shù)語“反向RNA印跡(reverseNorthernblot)”是指通過在瓊脂糖凝膠上電泳DNA來分析DNA以根據(jù)大小分級分離DNA，接著將經(jīng)分級分離的DNA自凝膠轉(zhuǎn)移至固體支撐物(諸如硝化纖維素或尼龍膜)上。隨后用經(jīng)標(biāo)記的寡核糖核苷酸探針或RNA探針探測固定的DNA以檢測與所用核糖探針互補的DNA種類。如本文所使用的術(shù)語“編碼區(qū)(codingregion)，，當(dāng)提及結(jié)構(gòu)基因使用時，是指編碼由mRNA分子轉(zhuǎn)譯所產(chǎn)生的初生多肽中得到的氨基酸的核苷酸序列。編碼區(qū)在真核生物中在5'側(cè)以編碼起始甲硫氨酸的核苷酸三聯(lián)體“ATG”為邊界，且在3'側(cè)以三個表示終止密碼子(亦即TAA、TAG、TGA)的三聯(lián)體中的一個為邊界。如本文所使用的術(shù)語“結(jié)構(gòu)基因”是指編碼RNA或蛋白質(zhì)的DNA序列。相比之下，“調(diào)控基因”為編碼控制其它基因(例如轉(zhuǎn)錄因子)的表達的產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)基因。如本文所使用的術(shù)語“基因(gene)”意謂脫氧核糖核苷酸序列，其包含結(jié)構(gòu)基因的編碼區(qū)且包括位在鄰接編碼區(qū)(在5'末端與3'末端相距任一末端約11Λ的距離)的序列，使得基因?qū)?yīng)于全長mRNA的長度。位于編碼區(qū)的5'且存在于mRNA上的序列稱為5'非轉(zhuǎn)譯序列。位于編碼區(qū)的3'或下游且存在于mRNA上的序列稱為3'非轉(zhuǎn)譯序列。術(shù)語“基因”涵蓋cDNA與基因的基因組形式?；虻幕蚪M形式或純系含有間雜有稱為“內(nèi)含子”或“介入?yún)^(qū)”或“介入序列”的非編碼序列的編碼區(qū)。內(nèi)含子為轉(zhuǎn)錄成異質(zhì)核RNA(heterogeneousnuclearRNA,hnRNA)的基因的區(qū)段；內(nèi)含子可含有諸如增強子的調(diào)控組件。內(nèi)含子自核或初級轉(zhuǎn)錄物中移除或“剪接出”；因此信使RNA(mRNA)轉(zhuǎn)錄物中不存在內(nèi)含子。mRNA在轉(zhuǎn)譯期間用于指定初生多肽中氨基酸的序列或順序。除含有內(nèi)含子以外，基因的基因組形式亦可包括位于存在于RNA轉(zhuǎn)錄物上的序列的5'與3'末端的序列。所述序列稱為“側(cè)接(flanking)”序列或區(qū)(所述側(cè)接序列位于存在于mRNA轉(zhuǎn)錄物上的非轉(zhuǎn)譯序列的5'或3')。5'側(cè)接區(qū)可含有諸如啟動子及增強子的調(diào)控序列，其控制或影響基因的轉(zhuǎn)錄。3'側(cè)接區(qū)可含有指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄終止、轉(zhuǎn)錄后裂解及聚腺苷酸化的序列。如本文所使用的術(shù)語“樣品”以其最廣泛意義使用且包括環(huán)境及生物樣品。環(huán)境樣品包括來自諸如土壤及水的環(huán)境的物質(zhì)。生物樣品可為動物(包括人類)、流體(例如血液、血漿及血清)、固體(例如糞便)、組織、液態(tài)食品(例如牛乳)及固態(tài)食品(例如蔬菜)。懷疑含有編碼孢子表面蛋白質(zhì)的核酸的生物樣品可包含細(xì)胞、組織提取物、體液、自細(xì)胞分離的染色體或染色體外組件、基因組DNA(于溶液中或結(jié)合于固體支撐物，諸如用于DNA印跡分析者)、RNA(于溶液中或結(jié)合于固體支撐物，諸如用于RNA印跡分析者)、cDNA(于溶液中或結(jié)合于固體支撐物)及其類似物。術(shù)語“感染控制組合物”是指與無組合物存在下生物體(亦即例如微生物生物體，包括來源于微生物生物體的孢子)的生長速率相比，阻止和/或降低生物體的生長速率的任何化合物。感染控制組合物可為天然的(例如來源于微生物，諸如細(xì)菌、病毒、真菌、藻類、霉菌等)、合成的或重組的。感染控制組合物可為微生物孢子蛋白質(zhì)和/或微生物孢子表面蛋白質(zhì)的競爭性抑制劑。或者，感染控制組合物可與微生物孢子蛋白質(zhì)和/或微生物孢子表面蛋白質(zhì)形成穩(wěn)定和/或短暫的結(jié)合對?！案腥究刂平M合物”亦可包括抗細(xì)菌和/或抗微生物劑和/或藥物(亦即例如抗生素)。因此，“感染控制活性”解釋為意謂因向表面施用感染控制組合物所產(chǎn)生的對微生物生長的任何降低和/或阻止。術(shù)語“抗細(xì)菌”及“抗微生物”可互換使用，指與無組合物存在下生物體的生長速率相比，阻止和/或降低生物體的生長速率的組合物?？辜?xì)菌和/或抗微生物組合物可具抑細(xì)菌性、殺細(xì)菌性、兩者或兩者均不。若抗細(xì)菌和/或抗微生物組合物在不影響受抑制細(xì)胞的生存力的情況下抑制細(xì)胞分裂，則其為抑細(xì)菌性。若抗細(xì)菌和/或抗微生物組合物引起細(xì)胞死亡，則其為殺細(xì)菌性。細(xì)胞死亡通常通過液體生長介質(zhì)中不存在細(xì)胞生長(例如未出現(xiàn)混濁)或固體表面上不存在細(xì)胞生長(例如瓊脂上無菌落形成)來檢測?？辜?xì)菌和/或抗微生物組合物可有效降低病毒、霉菌及真菌的生長速率和/或引起其細(xì)胞死亡。在指定濃度下為抑細(xì)菌性的組合物在較高濃度下可能為殺細(xì)菌性，而其它某些抑細(xì)菌組合物在任何濃度下均不具殺細(xì)菌性。術(shù)語“細(xì)菌(bacteria或hcterium)”是指所有原核生物體，包括屬于原核生物界中所有門的原核生物體。意欲該術(shù)語涵蓋所有視為細(xì)菌的微生物，包括(但不限于)梭菌屬、芽孢桿菌屬、支原體屬(Mycoplasma)、衣原體屬(Chlamydia)、放線菌屬(Actinomyce)、鏈霉菌屬(Sti^ptomyce)及立克次體屬(Rickettsia)。該定義內(nèi)包括所有細(xì)菌形式，包括球菌、桿菌、螺旋體、球形質(zhì)體、原生質(zhì)體、孢子等。該術(shù)語亦包括為革蘭氏陰性或革蘭氏陽性的原核生物體?！案锾m氏陰性”及“革蘭氏陽性”是指采用革蘭氏染色法(Gram-stainingprocess)獲得的染色模式。Finegold及Martin，h診斷微生物學(xué)(DiagnosticMicrobiology)，第6版(1982),C.V.MosbySt.Louis，第13-15頁?！案锾m氏陽性細(xì)菌”為保留革蘭氏染色中所使用的初染料的細(xì)菌，使得所染色的細(xì)胞在顯微鏡下呈現(xiàn)深藍(lán)色至紫色?！案锾m氏陰性細(xì)菌”不保留革蘭氏染色中所使用的初染料，但經(jīng)對比染色(counterstain)染色。因此，革蘭氏陰性細(xì)菌呈現(xiàn)紅色。術(shù)語“測試試劑”是指待在本文所述的一種或多種檢定中篩選的試劑。該試劑幾乎可為任何化合物。其可呈單一經(jīng)分離的化合物或可為化學(xué)(例如組合)庫的成員。在一尤其較佳具體實例中，測試試劑將為有機小分子。如本文所使用的術(shù)語“有機小分子(smallorganicmolecule)”是指大小可與醫(yī)藥品中通常使用的有機分子相比的任何分子。該術(shù)語排除生物大分子(例如蛋白質(zhì)、核酸等)。較佳有機小分子的大小在約IODa至約5000Da、更佳至2000Da且最佳至約IOOODa范圍內(nèi)。術(shù)語“標(biāo)記”或“可檢測標(biāo)記”在本文中用于指可由光譜、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)、電學(xué)、光學(xué)或化學(xué)方法檢測的任何組合物。所述標(biāo)記包括可用經(jīng)標(biāo)記抗生蛋白鏈菌素(sti^ptavidin)共軛物染色的生物素、磁性珠粒(例如Dynabeads)、熒光染料(例如熒光素、得克薩斯紅(texasred)、玫瑰紅、綠色熒光蛋白質(zhì)及其類似物)、放射性標(biāo)記(例如3H、125I、35S、14C或32P)、酶(例如辣根過氧化酶、堿性磷酸酶及酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)中常用的其它酶)，及熱量標(biāo)記，諸如膠體金或有色玻璃或塑料(例如聚苯乙烯、聚丙烯、乳膠等)珠粒。教示使用所述標(biāo)記的專利案包括(但不限于)美國專利案第3，817，837號、第3，850，752號、第3，939，350號、第3，996，345號、第4，277，437號、第4，275，149號及第4，366，241號(所有均以引用的方式并入本文中)。本發(fā)明中所預(yù)期的標(biāo)記可利用許多方法檢測。舉例而言，可使用照相膠片或閃爍計數(shù)器檢測放射性標(biāo)記，可使用光檢測器檢測發(fā)射光來檢測熒光標(biāo)志。典型地通過提供酶及基質(zhì)并檢測在酶對基質(zhì)的作用下所產(chǎn)生的反應(yīng)產(chǎn)物來檢測酶標(biāo)記，而通過簡單觀測著色標(biāo)記來檢測熱量標(biāo)記。如本文所使用的術(shù)語“主要界面活性劑(primarysurfactant)，，意謂作用于經(jīng)取代酚或與經(jīng)取代酚一起作用以進一步增強或至少不顯著降低經(jīng)取代酚的感染控制活性的任何界面活性劑。如本文所使用的術(shù)語“抑制”、“破壞”、“置換”、“拮抗，，或“阻斷”是指自基質(zhì)表面移除微生物孢子和/或微生物孢子表面蛋白質(zhì)和/或阻止微生物孢子和/或微生物孢子表面蛋白質(zhì)附著于基質(zhì)表面的任何方式。如本文所使用的術(shù)語“拮抗劑”是指能夠阻止微生物(亦即例如細(xì)菌、病毒、霉菌、真菌等)和/或微生物的生殖組分(亦即例如孢子)附著于表面的任何化合物?！稗卓箘笨赏ㄟ^競爭性置換微生物和/或微生物的生殖組分或與的形成結(jié)合對(亦即例如穩(wěn)定的或短暫的)來阻止附著。舉例而言，拮抗劑可通過與孢子表面蛋白質(zhì)結(jié)合來阻止細(xì)菌孢子附著于表面。如本文所使用的術(shù)語“結(jié)合拮抗劑”是指能夠與微生物孢子絨毛層蛋白質(zhì)(亦即例如梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì))或基質(zhì)表面形成結(jié)合對的任何化合物。結(jié)合對的形成阻止和/或置換微生物孢子附著于基質(zhì)表面。如本文所使用的術(shù)語“基質(zhì)表面”是指包含供微生物孢子表面蛋白質(zhì)附著的結(jié)合位點的任何材料?；|(zhì)表面可包括(但不限于)有生命表面和/或無生命表面。如本文所使用的術(shù)語“無生命表面”是指任何非活著的材料。舉例而言，無生命表面可包括(但不限于)乙烯樹脂、不銹鋼、塑料、木料、陶瓷、玻璃、鉻、瓷磚等。通常遇到的所述表面包括(但不限于)工作臺面、椅子、桌子、手術(shù)設(shè)備、醫(yī)療裝置、地面、墻壁、窗戶、水槽、柜等。如本文所使用的術(shù)語“有生命表面”指任何活的材料。舉例而言，有生命表面可包括(但不限于)表皮表面、黏膜上皮組織表面和/或內(nèi)臟表面。如本文所使用的術(shù)語“有生命表面”亦包含植物表面，包括(但不限于)水果表面(亦即例如草莓、蘋果、甜橙、柑橘等)、蔬菜表面(茄子、南瓜、西紅柿、馬鈴薯等)、豆科植物表面(亦即例如花生、腰果、豆等)、谷物表面(亦即例如小麥、大豆、稻米、裸麥等)、花表面、莖表面、柄表面、葉表面、樹皮表面、大枝表面、分枝表面等。如本文所使用的術(shù)語“交互作用拮抗劑”是指能夠干擾微生物孢子絨毛層蛋白質(zhì)/基質(zhì)表面結(jié)合對形成的任何化合物。如本文所使用的術(shù)語“結(jié)合”是指感染控制組合物與表面之間的任何交互作用。該表面定義為“結(jié)合表面”。結(jié)合可為可逆的或不可逆的。該結(jié)合可為(但不限于)非共價結(jié)合、共價鍵結(jié)、離子鍵結(jié)、范德華力(VandeWaalforce)或摩擦力及其類似作用。若用感染控制組合物浸漬表面、將該組合物并入表面中、用該組合物涂布表面、將表面懸浮于該組合物中、將表面溶解于該組合物中、混合該組合物與表面等，則該組合物結(jié)合于表面。如本文所使用的術(shù)語“感染控制測試組合物”是指待就阻止微生物孢子結(jié)合表面的能力篩選的化合物集合。所述測試組合物可包括(但不限于)多種不同化合物，包括化學(xué)化合物、化學(xué)化合物的混合物(例如多糖、小有機或無機分子、生物大分子(例如肽、蛋白質(zhì)、核酸))或由生物材料(諸如細(xì)菌、植物、真菌或動物細(xì)胞或組織)制得的提取物、天然存在或合成的組合物。如本文所使用的術(shù)語“處于風(fēng)險中”指任何人員或無生命表面受微生物污染的機率超過平均機率(亦即大于50%)。以下職業(yè)中可能存在“處于風(fēng)險中”暴露機率諸如第一反應(yīng)者，包括(但不限于)消防員、警察、應(yīng)急醫(yī)療人員。以下職業(yè)中亦可能存在“處于風(fēng)險中”暴露機率諸如衛(wèi)生保健工作人員，包括(但不限于)醫(yī)生、護士、勤雜工、醫(yī)院看門人員及其類似職業(yè)。以下職業(yè)中亦可能存在“處于風(fēng)險中”暴露機率諸如軍事人員，包括(但不限于)陸軍人員、海軍人員、空軍人員、海運人員、國家防衛(wèi)人員(NationalGuardpersonnel)、海岸防衛(wèi)人員(CoastGuardpersonnel)。醫(yī)療患者中亦可能存在“處于風(fēng)險中”暴露機率，包括(但不限于)免疫受損患者、灼傷患者、彈創(chuàng)患者等。如本文所使用的術(shù)語“特異性結(jié)合位點模式(specificbindingsitepattern)"是指身體表面或無生命表面上的任何一組可再現(xiàn)的結(jié)合位點。所述結(jié)合位點對組合物具有固有親和力，所述組合物包括(但不限于)如本文所論述的微生物孢子、感染控制組合物或有機小分子。雖然不必要了解發(fā)明機制，但咸信該結(jié)合模式為在三維上與組合物兼容(亦即例如經(jīng)由立體特異性化學(xué)基團交互作用)的表面化學(xué)基團和/或形貌的獨特排列的結(jié)果。進一步咸信，特異性結(jié)合位點模式預(yù)測指定表面積內(nèi)非特異性結(jié)合(亦即并非經(jīng)由專用受體介導(dǎo)的結(jié)合)的排列。圖1呈現(xiàn)具有長、蜿蜒或絲狀孢子外膜突出物(箭頭)的產(chǎn)芽孢梭菌孢子內(nèi)壁(S)的例示性掃描電子顯微照片。貼于表面的突出物形成黏滯接觸(tenaciouscontact)。圖2呈現(xiàn)例示性電子顯微照片，其顯示活化之前表面光滑的橢圓形艱難梭菌43594孢子內(nèi)壁(插圖)及活化之后覆蓋有孢子外突出物(箭頭)的艱難梭菌43594孢子內(nèi)壁。圖3呈現(xiàn)顯示發(fā)芽進行時的艱難梭菌43594孢子的例示性電子顯微照片，其中孢子外膜覆蓋有低凸塊及位于指定為尾(T)區(qū)的一極的厚錨定結(jié)構(gòu)。圖4呈現(xiàn)顯示SDS-PAGE凝膠的例示性資料，該凝膠鑒別ISkDa帶(參見箭頭)中出現(xiàn)的總孢子蛋白質(zhì)。該ISkDa帶與能夠雜交艱難梭菌抗體的蛋白質(zhì)印跡ISkDa帶對應(yīng)。圖5呈現(xiàn)顯示SDS-PAGE凝膠的例示性資料，該凝膠鑒別140、150及160kDa帶(分別參見pl、p2及p3)中出現(xiàn)的總孢子蛋白質(zhì)。所述140、150及1601^^帶與能夠雜交艱難梭菌抗體的蛋白質(zhì)印跡140、150及160kDa帶對應(yīng)。圖6A呈現(xiàn)顯示SDS-PAGE凝膠的例示性資料，該凝膠用于鑒別位于約300kDa(箭頭1)、275kDa(箭頭2、、250kDa(箭頭；3)、160kDa(箭頭4)、150kDa(箭頭幻、140kDa(箭頭6)、35kDa(箭頭7)、28kDa(箭頭8)及15kDa(箭頭9)處的艱難梭菌孢子外膜蛋白質(zhì)。亦鑒別6個其它非雜交帶(箭頭10-15)以確定非免疫反應(yīng)性孢子外膜蛋白質(zhì)。圖6B及6C呈現(xiàn)顯示蛋白質(zhì)印跡的例示性資料，所述蛋白質(zhì)印跡顯示艱難梭菌抗體與對應(yīng)于圖6A中所示的帶的300kDa(箭頭1)、275kDa(箭頭2)、250kDa(箭頭3)、160kDa(箭頭4)、150kDa(箭頭5)、140kDa(箭頭6)、!35kDa(箭頭7)J8kDa(箭頭8)及15kDa(箭頭9)帶雜交。圖7呈現(xiàn)以下的結(jié)構(gòu)的一個具體實例分別為BclA(綠色)及Clq(紫紅色)單體(A及B)及其迭置(C)。標(biāo)記N末端及C末端及β鏈。圖8呈現(xiàn)BclA(A)及Clq(B)三聚體的自側(cè)面及上面觀看的一個具體實例。構(gòu)成各三聚體的三個單體著以藍(lán)色、綠色及紅色。圖9Α呈現(xiàn)顯示孢子外膜的仙人掌桿菌(B.cereus)ATCC10876孢子的例示性穿透式電子顯微照片。圖9B呈現(xiàn)顯示自孢子外膜突出的絨毛層(naplayer)的炭疽芽孢桿菌孢子的例示性穿透式電子顯微照片。圖9C呈現(xiàn)顯示BclA絨毛層及內(nèi)部基底層的炭疽芽孢桿菌孢子外膜層的一例示性特寫照。圖10呈現(xiàn)顯示微生物孢子與表面基質(zhì)(亦即例如皮膚表面)的交互作用的具體實例的圖標(biāo)。圖IOA說明微生物孢子絨毛層(亦即例如孢子表面蛋白質(zhì)突出物)附著于哺乳動物皮膚上皮層。圖IOB說明微生物孢子表面蛋白質(zhì)(亦即例如天然形式)附著于表面基質(zhì)及能夠破壞微生物孢子表面蛋白質(zhì)附著于表面基質(zhì)的各種感染控制組合物。圖11呈現(xiàn)包含孢子表面蛋白質(zhì)基因的pET_19b質(zhì)粒的一個具體實例的示意圖。圖12呈現(xiàn)顯示自pET-19b載體的重組⑶1067(紅色箭頭)表達的SDS-PAGE電泳分離的例示性資料。泳道1分子量標(biāo)準(zhǔn)物梯狀電泳帶。泳道2:1小時樣品。泳道3:2小時樣品。泳道4:3小時樣品。泳道5:4小時樣品。泳道6:5小時樣品。泳道7:6小時樣品。蛋白質(zhì)染色考馬斯藍(lán)(CoomassieBlue)。圖13呈現(xiàn)顯示自pET_19b載體的重組⑶1067(紅色箭頭)表達的蛋白質(zhì)印跡分析的例示性資料。泳道1分子量標(biāo)準(zhǔn)物梯狀電泳帶。泳道2:1小時樣品。泳道3:2小時樣品。泳道4:3小時樣品。泳道5:4小時樣品。泳道6:5小時樣品。泳道7:6小時樣品。圖13A使用F1373抗艱難梭菌抗體的檢測。圖13B使用抗HIS抗體的檢測。圖14呈現(xiàn)顯示自pET_19b載體的重組⑶3620(紅色箭頭)表達的SDS-PAGE電泳分離的例示性資料。泳道1分子量標(biāo)準(zhǔn)物梯狀電泳帶。泳道2:0小時樣品。泳道3:1小時樣品。泳道4:2小時樣品。泳道5:3小時樣品。泳道6:4小時樣品。泳道7:4.5小時樣品。蛋白質(zhì)染色考馬斯藍(lán)。圖15呈現(xiàn)顯示自pET_19b載體的重組⑶3620(紅色箭頭)表達的蛋白質(zhì)印跡分析的例示性資料。泳道1分子量標(biāo)準(zhǔn)物梯狀電泳帶。泳道2:0小時樣品。泳道3:1小時樣品。泳道4:2小時樣品。泳道5:3小時樣品。泳道6:4小時樣品。泳道7:4.5小時樣PΡΠO圖15A使用F1373抗艱難梭菌抗體的檢測。圖15B使用抗HIS抗體的檢測。圖16呈現(xiàn)顯示自pET_19b載體的重組⑶3620(紅色箭頭)表達的抗體檢測對照數(shù)據(jù)的例示性數(shù)據(jù)。泳道1分子量標(biāo)準(zhǔn)物梯狀電泳帶。泳道2:6小時pJEB02樣品。泳道34.5小時pJEB03樣品。圖16A鑒別重組⑶1067(上紅色箭頭)及重組⑶3620(下紅色箭頭)的SDS-PAGE考馬斯藍(lán)參考電泳分離。圖16B使用免疫前F1373檢測的蛋白質(zhì)印跡分析。圖16C使用免疫前F1997檢測的蛋白質(zhì)印跡分析。圖16D使用F1997抗艱難梭菌抗體檢測的蛋白質(zhì)印跡分析。圖17說明移除艱難梭菌孢子外膜外殼的方法的數(shù)個具體實例(參見實施例IV)。圖18A描繪可用作起始物質(zhì)的代表性艱難梭菌630孢子。圖18B描繪孢子外膜剝落后的代表性艱難梭菌630孢子。圖18C描繪剝落后的經(jīng)純化且經(jīng)濃縮的代表性艱難梭菌630孢子外膜。具體實施例方式本發(fā)明是關(guān)于感染控制領(lǐng)域。特定言之，本發(fā)明是關(guān)于維持無菌條件、去除細(xì)菌污染和/或預(yù)防細(xì)菌暴露的組合物與方法。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期抑制微生物孢子與基質(zhì)表面結(jié)合的感染控制組合物。舉例而言，該抑制破壞和/或置換微生物孢子與基質(zhì)表面的交互作用、附著和/或穩(wěn)定?？股刈鳛閷辜?xì)菌感染的第一線防御已歷經(jīng)約70年。在1940年代及1950年代，臨床上使用第一種抗生素，且自那時以后，其使用顯著增加。雖然抗生素及抗微生物療法取得不可估量的進展，但亦遭遇諸多問題。首先，抗生素對孢子無效。其次，抗生素抗性的發(fā)展為在全世界都很重要的嚴(yán)重且危及生命的事件。舉例而言，已知一些微生物菌株對大多數(shù)可用抗生素具免疫力。(Travis,Science264:360-362(1994))。尤其，抗藥性生物體包括引起肺炎及腦膜炎的肺炎球菌(pneumococci)；引起腹瀉的隱孢子蟲(Cryptosporidium)及大腸桿菌(E.coli)；及引起血流、外科手術(shù)創(chuàng)傷及尿路感染的腸球菌(enterococci)。(Berkelman等人，JInfectDis.170:272-277(1994))。本發(fā)明預(yù)期致力于解決關(guān)于微生物孢子的污染控制及微生物感染對習(xí)用抗生素給藥的臨床抗藥性的問題的組合物與方法。I.細(xì)菌孢子一些微生物排出孢子，所述孢子當(dāng)暴露于不利于生長及增殖的環(huán)境中時進入休眠期。當(dāng)附著和/或粘附于固體表面時，孢子存活增強。當(dāng)環(huán)境條件再次變得有利于生長及增殖時，微生物孢子發(fā)芽且進而污染周圍區(qū)域。隨后與增殖的新微生物生長接觸的人員或動物自先前未知會污染的區(qū)域感染。在一些情況下，人員和/或動物可能與微生物孢子接觸，其中在接觸后，開始發(fā)芽及感染?；蛘?，該未檢測到的孢子發(fā)芽會導(dǎo)致食物腐敗，從而起始食物傳染疾病暴發(fā)。由于所述細(xì)菌的孢子相對耐化學(xué)及物理滅菌劑，因此使用其作為包括濕熱及干熱、紫外線照射及過氧化氫的處理的滅菌效率的指標(biāo)。Ito等人，“使用無菌系統(tǒng)白勺^11"!^的(Sterilizationofpackagingmaterialsusingasepticsystems)”食品技術(shù)(FoodTechnol).38:60-62(1984)。了解細(xì)菌孢子的表面性質(zhì)及其與無生命及有生命基質(zhì)的交互作用對食品、醫(yī)藥劑及醫(yī)藥用品包裝中所使用的包裝材料的選擇及表面滅菌程序的評估而言很重要。舉例而言，公認(rèn)疏水性交互作用在細(xì)菌(亦即營養(yǎng)細(xì)胞)與惰性材料表面的粘附中具有作用。然而，相對較少的研究已全面研究細(xì)菌孢子的表面疏水性或孢子與無生命基質(zhì)的粘附。細(xì)菌孢子的疏水性可通過運用用于量測營養(yǎng)細(xì)胞疏水性的方法測定。量測表面疏水性的既定技術(shù)包括(但不限于)i)對烴的粘附(Beck等人，“金黃色葡萄球菌在表面生長裝量禾口疏水性的影口向(EffectofgrowthonsurfacechargeandhydrophobicityofStaphylococcusaureus)，，Ann·Inst.Pasteur/Microbiol.(Paris)139:655-664(1988))；ii)疏水性交互作用層析(HIC)(Doyle等人，“芽孢桿菌屬孢子疏水特性(HydrophobiccharacteristicsofBacillusspores)，，Curr·Microbiol·10:329-332(1984))；iii)鹽聚集(Takubo等人，“巨大芽孢桿菌最外層缺陷突變體孢子的分離與表征(IsolationandcharacterizationofoutermostlayerdeficientmutantsporesofBacillusmegaterium)"Microbiol.Immunol.9:973-979(1988))；iv)接觸角量測(Minagi等人，“通過接觸角和烴粘附方法測得的念珠菌屬的種的細(xì)胞表面疏水性(Cell-surfacehydrophobicityofCandidaspeciesasdeterminedbythecontact-angleandhydrocarbon-adherencemethods)”J.Gen.Microbiol.132:1111-1115(1986))；及ν)細(xì)菌對十六烷的粘附(BATH)(Wienek等人，“芽孢桿菌屬和梭菌屬的孢子的疏水性(HydrophobicityofBacillusandClostridiumspores)，，ApplEnvironMicrobiol56^00-2605(1990))。研究顯示孢子疏水性隨物種及菌株而變化。然而，咸信各生物體的孢子的疏水性均大于營養(yǎng)細(xì)胞疏水性。另外，適度熱處理增加大多數(shù)芽孢桿菌屬孢子的疏水性。一個假設(shè)提出熱處理后孢子疏水性的增加可能因外層外殼或孢子外膜蛋白質(zhì)遭破壞而引起。雖然不必了解發(fā)明機制，但咸信細(xì)菌孢子的疏水性增加歸因于與營養(yǎng)細(xì)胞上的肽聚糖相比，外層外殼及孢子外膜中的蛋白質(zhì)相對豐富。Doyle等人，“芽孢桿菌孢子的疏水性特征(HydrophobiccharacteristicsofBacillusspores)，，Curr·Microbiol·10329-332(1984)；Matz等人，“來自蠟狀芽孢桿菌孢子的外壁的化學(xué)組合物(ChemicalcompositionofexosporiumfromsporesofBacilluscereus)，，J·Bacteriol·101196-201(1970)；及Takumi等人，“來自A型肉毒梭菌高產(chǎn)孢突變體的孢子的外壁的分離禾口(IsolationandpartialcharacterizationofexosporiumfromsporesofahighlysporogenicmutantofClostridiumbotulinumtypeA)，，Microbiol.Immunol.28:443-454(1979)。最近已報導(dǎo)數(shù)種芽孢桿菌屬物種的孢子疏水性與存在孢子外膜之間有關(guān)聯(lián)。Kjelleberg，S.“無生命表面粘附(Adhesiontoinanimatesurfaces)，，-LfePif(Microbialadhesionandaggregation),%51-70K.C.Marshall(編)，Springer-VerlagKG,Berlin(1984)。當(dāng)通過化學(xué)處理移除孢子表面時，觀察到仙人掌桿菌(B.cereUS)T孢子的孢子疏水性降低。Kutima等人，“仙人掌桿菌T抱子萌發(fā)中的抱子表面相關(guān)(InvolvementofthesporesurfaceingerminationofBacilluscereusTspores)，，Appl.Environ.Microbiol.53:47-52(1987)。亦發(fā)現(xiàn)巨大芽孢桿菌(B.megaterium)的“敲除”外層外殼陰性突變體(QMB1551=ATCC12872)的孢子疏水性降低。Takubo等人，“巨大芽孢桿菌最外層缺陷突變體孢子的分離與表征(IsolationandcharacterizationofoutermostlayerdeficientmutantsporesofBacillusmegaterium)”Microbiol.Immunol.9:973-979(1988)及Koshikawa等人，“芽孢桿菌屬的禾中的包子表面疏水個生(SurfacehydrophobicityofsporesofBacillusspp.)"J.Gen.Microbiol.135:2717-2722(1989)。所述觀察結(jié)果表明孢子外膜的外層外殼在孢子疏水性中發(fā)揮作用。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期改進醫(yī)療、醫(yī)藥和/或食品工業(yè)中所使用的設(shè)備和/或包裝材料的表面衛(wèi)生、滅菌的組合物與方法。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期改進皮膚衛(wèi)生的組合物與方法。A.艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)認(rèn)為梭菌屬的細(xì)菌引發(fā)所述疾病，包括(但不限于)氣性壞疽、創(chuàng)傷感染、肉毒桿菌中毒、破傷風(fēng)、假膜性結(jié)腸炎、敗血癥或醫(yī)院性腹瀉。該屬在不利條件下通過形成高度耐熱、耐化學(xué)物質(zhì)及耐輻射的脫水孢子內(nèi)壁而良好存活。所述孢子可于土壤中發(fā)現(xiàn)、由風(fēng)攜帶、自哺乳動物消化及尿殖道中回收，且能夠保持極長時間休眠直至生長條件支持孢子活化及發(fā)芽。艱難梭菌孢子在衛(wèi)生保健及醫(yī)院環(huán)境內(nèi)盛行。艱難梭菌孢子在有生命和/或無生命表面上存活較長時間，對許多消毒劑及抗生素具抗性，且容易在患者間傳播。了解艱難梭菌孢子與表面的附著以及孢子形成及發(fā)芽將有助于預(yù)防、控制及治療艱難梭菌相關(guān)性疾病。舉例而言，艱難梭菌缺乏數(shù)種參與觸發(fā)芽孢桿菌屬物種的孢子形成過程的磷酸中繼系統(tǒng)(phospho-relaysystem)的基因；最近已回顧梭菌屬物種(Clostridiaspp.)中孢子形成系統(tǒng)的該態(tài)樣及其它態(tài)樣。Paredes等人，“梭菌屬孢子形成和生理學(xué)的比較基因組觀察(Acomparativegenomicviewofclostridialsporulationandphysiology)nNat.Rev.Microbiol.3:969-978(2005)。另外，艱難梭菌亦缺乏大多數(shù)芽孢桿菌屬及梭菌屬物種中通常存在的三順反子ger操縱子。Moir等人，“孢子萌發(fā)(Sporegermination)"CellMolLifeSci.59:403-409(2002)；及Broussolle等人，“肉毒桿菌和生孢梭菌中孢子萌發(fā)的分子禾口生理學(xué)表征(MolecularandphysiologicalcharacterisationofsporegerminationinClostrdidiumbotulinumandC.sporogenes)，，厭氧生物(Anaerobe)889-100(2002)。所述觀察結(jié)果表明艱難梭菌發(fā)芽受體實質(zhì)上不同于其它梭菌屬物種及芽孢桿菌屬物種(Bacillusspp.)且不應(yīng)基于與其它梭菌屬物種及芽孢桿菌屬物種的序列相似性進行鑒別。微生物孢子對熱、溶劑、酶、清潔劑、紫外線及電離輻射、氫氧化鈉、乙醇、過甲酸、酚、寒冷及大部分殺孢子劑的抗性以及其當(dāng)條件最佳時侵襲性生長的能力使其成為動物且尤其人體健康的嚴(yán)重威脅。Tipper等人，“細(xì)菌孢子內(nèi)壁的結(jié)構(gòu)(Structureofthebacterialendospore)，，SporesV,H.Halvorson,R.Hanson及L.Campbell.編Amer.Soc.forMicrobiol.，Bethesda,Maryland,3-12(1972)；及Russell,A.,“細(xì)菌孢子和化(Bacterialsporesandchemicalsporicidalagents)”丨I^j石if胃(Clin.Microbiol.Rev.)，3，99-119(1990)。在醫(yī)院及療養(yǎng)院中院內(nèi)獲得艱難梭菌感染成為嚴(yán)重的流行病學(xué)問題，因為孢子存在于健康設(shè)施的墻壁、地面、器具、床單及護理者的手上。孢子似乎容易感染以下個體，包括(但不限于)具有i)腸內(nèi)菌群因抗生素療法而改變；ii)免疫系統(tǒng)受損；或iii)因診斷測試或治療而需要多次灌腸劑的個體。Zaleznik，D.“艱難梭菌二十世紀(jì)九十年代重要的醫(yī)院病原體(Clostridiumdifficile:animportantnosocomialpathogenforthe1990s)"^fMW^^Ml^(Clin.Microbiol.Newsletter)13，145-152(1991)。兩類梭菌屬孢子(亦即例如產(chǎn)芽孢梭菌(Clostridiumsporogenes)ATCC3584及艱難梭菌ATCC9689及ATCC43594)的孢子外膜可能在附著、發(fā)芽和/或菌落叢生中發(fā)揮作用。Panessa-Warren等人，“產(chǎn)芽孢梭菌和艱難梭菌的孢子外膜膜可塑性(ExosporialmembraneplasticityofClostridiumsporogensandClostridiumdifficile")組織和細(xì)胞(Tissue&Cell)29:449-461(1997)。超微結(jié)構(gòu)變化與雙酶梭菌(C.bifermentans)孢子附屬物的發(fā)芽及長出有關(guān)，但并未確定特定功能。Samsonoff等人，“與支撐附著物的梭菌芽孢萌發(fā)和向外生長相關(guān)的超微結(jié)構(gòu)改變(Ultrastructuralchangesassociatedwithgerminationandoutgrowthofanappendage-bearingclostridialspore)，，J.Bacteriol.，101，1038-1045(1970)。利用薄切片穿透式電子顯微術(shù)研究產(chǎn)芽孢梭菌孢子確實揭露孢子外外層具有發(fā)樣突出物，但未提供關(guān)于與梭菌屬菌落叢生有關(guān)的分布、功能或外觀的論述。Hoeniger等人，“產(chǎn)芽孢梭菌中孢子萌發(fā)和向外生長的超微結(jié)構(gòu)方位(UltrastructuralaspectsofsporegerminationandoutgrowthinClostridiumsporogenes)”Can.J.Microbiol.，15，1061-1065(1969)。已知穿透式電子顯微術(shù)薄切片重建當(dāng)一次觀察及解釋許多孢子的孢子外形態(tài)時存在顯著問題，且所述問題與獲得所述小、纖細(xì)且未充分染色的孢子附著于營養(yǎng)基質(zhì)的薄切片相關(guān)。產(chǎn)芽孢梭菌孢子一旦打破休眠狀態(tài)即可展現(xiàn)特定形態(tài)期，且孢子外膜似乎在成功發(fā)芽、長出、營養(yǎng)性增殖及基質(zhì)表面結(jié)合位點的菌落叢生中發(fā)揮主動作用。Panessa-Warren等人，“產(chǎn)芽孢梭菌孢子內(nèi)壁附著和萌發(fā)的電子顯微鏡檢(ElectronmicroscopyofC.sporogenesendosporeattachmentandgermination)"Scanning16，227—240(1994)。咸信梭菌屬孢子外膜為孢子外部“膜性”層，已描述為在發(fā)芽的被動參與物。然而，產(chǎn)芽孢梭菌ATCC3584孢子一旦打破休眠狀態(tài)，似乎即產(chǎn)生掃描電子顯微術(shù)(SEM)可見的極特定孢子外形態(tài)結(jié)構(gòu)，其似乎有利于孢子與基質(zhì)附著或與其它孢子附著(亦即例如孢子共聚集)。孢子外突出物隨后經(jīng)自孢子遠(yuǎn)程(亦即例如尾區(qū))延伸的單柄置換，該柄似乎在營養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育及長出的最后階段期間錨定孢子。產(chǎn)芽孢梭菌附著初期，孢子外膜的纖細(xì)絲狀突出物向外延伸，其中一些較短突出物附著于表面。參見圖1，白色箭頭。孢子外膜的長絲狀突出物通常起源于孢子的上表面或側(cè)面，且延伸至表面或最鄰近孢子，將孢子結(jié)合在一起(共聚集)。孢子外膜突出物出現(xiàn)在產(chǎn)芽孢梭菌活化孢子的整個外表面上，最終發(fā)育成延伸至表面的單個粗附著結(jié)構(gòu)，似乎用于錨定孢子。不同于產(chǎn)芽孢梭菌，艱難梭菌的附著孢子數(shù)目較少且需要較長培育時間來使附著發(fā)生。休眠艱難梭菌孢子較小(約長2.OgmX寬1.Igm)，呈橢圓形且基本上光滑。參見圖2，插圖。一旦活化開始，孢子即展現(xiàn)覆蓋孢子外膜的低隆凸。參見圖3。在附著早期，艱難梭菌43594長出覆蓋伸長孢子的整個表面的孢子外凸塊及圓丘。所述孢子在尾區(qū)長出更多伸長的孢子外突出物，所述突出物隨后在發(fā)芽循環(huán)期間經(jīng)變粗的附著結(jié)構(gòu)置換。圖3，黑色箭頭。不同于產(chǎn)芽孢梭菌，艱難梭菌展現(xiàn)較少孢子外膜延伸，但產(chǎn)生在孢子尾端長出的變粗的孢子外膜延伸。產(chǎn)芽孢梭菌及艱難梭菌孢子在水或緩沖液中劇烈攪拌(亦即例如300rpm離心)期間保持附著于瓊脂表面的能力有力地表明所述孢子具有強大的粘附和/或附著于表面的手段。在理想條件下，觀察到在接種后27分鐘內(nèi)發(fā)生產(chǎn)芽孢梭菌附著于瓊脂表面。在預(yù)先還原的瓊脂上在缺氧條件下，觀察到在88至105分鐘內(nèi)發(fā)生最大程度的產(chǎn)芽孢梭菌孢子附著。艱難梭菌孢子附著需要顯著較長的時間，例如艱難梭菌9689需要105分鐘且艱難梭菌ATCC43594需要180分鐘。孢子一旦附著，即可保持牢固錨定于固體表面。艱難梭菌43594顯得較獨特，因為孢子附著極慢。然而，艱難梭菌可具有在暴露于有生命表面后加速附著的適應(yīng)性反應(yīng)。舉例而言，已報導(dǎo)在具有腸道運動增加的患者及經(jīng)受多次灌腸劑的患者中艱難梭菌院內(nèi)感染的發(fā)病率增加。Bartlett，J.“Introduction”In艱難梭菌其在腸道中的作用(ClostridiumDifficile:ItsRoleinIntestinalDisease),R.Rolfe及S.Finegold編.AcademicPress,NewYork，第1-13頁(1988)；Silva,J.Jr.，“艱難梭菌有關(guān)的腸道疾病的預(yù)防(PreventionofClostridiumdifficile-associatedintestinaldisease)"InClostridiumdifficile:ItsRoleinIntestinalDisease,R.Rolfe及S.Finegold編，AcademicPress,NewYork，第368-378頁(1988)；及McFarland等人，“艱難梭菌感染醫(yī)院米集(NosocomialacquisitionofClostridiumdifficileinfection.)NewEngl.J.Med.，320:204-210(1989)。艱難梭菌孢子通?？梢娪诮】禑o癥狀個體的消化道中。因此，起始附著于腸及開始感染過程的觸發(fā)機制可能為正常菌群損失(亦即例如由抗生素、疾病或反復(fù)灌腸引起)和/或結(jié)腸活動性過高的組合。梭菌屬孢子的孢子外膜附著長出物典型具有直徑為約7nm，且長度可在0.Inm與2.9nm之間變化。所述長出物包含原纖維，其長度通常小于200nm且可能極纖細(xì)。Hancock，I,“微生物細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)(Microbialcellsurfacearchitecture)”微生物細(xì)胞表面分析(MicrobialCellSurfaceAnalysis),N.Mozes,P.Handley,H.Busscher及P.Rouxhet編，VCHPublishers,NewYork，第23-59頁(1991)。產(chǎn)芽孢梭菌的孢子外膜長出物的寬度通常量測為85nm至1015nm，然而，一些長出物、尤其亦包含共聚集附著物的長出物的長度可長達2000nm。產(chǎn)芽孢梭菌孢子外膜的圓丘樣突出物的直徑可在68nm至75nm范圍內(nèi)，且發(fā)芽后期可見的腫脹突出物的直徑可達180nm至MOnm。顯然，總視為“發(fā)芽中的被動參與物”的孢子外膜似乎在產(chǎn)芽孢梭菌及艱難梭菌的孢子附著及菌落叢生中發(fā)揮主動作用。在一個具體實例中，艱難梭菌蛋白質(zhì)來源于孢子外膜表面層，其中該孢子外膜層包含艱難梭菌孢子的最外蛋白質(zhì)。在一個具體實例中，本發(fā)明預(yù)期包含艱難梭菌孢子的至少一種最外表面蛋白質(zhì)的組合物。在一個具體實例中，表面蛋白質(zhì)包含孢子表面蛋白質(zhì)。雖然不必了解發(fā)明機制，但咸信所述孢子表面蛋白質(zhì)提供細(xì)菌孢子與基質(zhì)表面結(jié)合位點之間的界面。亦咸信所述蛋白質(zhì)可用于界定分子附著交互作用，包括(但不限于)i)孢子與有生命表面之間的交互作用；及ii)孢子與無生命表面之間的交互作用。艱難梭菌孢子外膜蛋白質(zhì)的大小特征提供于表I中。表I.代表性艱難梭菌孢子外膜蛋白質(zhì)的大小特征權(quán)利要求1.一種感染控制組合物，其能夠阻斷和/或抑制微生物孢子與基質(zhì)表面的結(jié)合。2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物包含有機小分子。3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物包含蛋白質(zhì)。4.根據(jù)權(quán)利要求3的組合物，其中，所述蛋白質(zhì)包含孢子表面肽。5.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中，所述肽來源于梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。6.根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其中，所述梭菌屬表面蛋白質(zhì)包含艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)。7.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中，所述肽來源于芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)。8.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中，所述芽孢桿菌屬表面蛋白質(zhì)包含炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。9.根據(jù)權(quán)利要求6的組合物，其中，所述艱難梭菌孢子表面肽包含SEQIDNO:1或SEQIDNO1的同源物。10.根據(jù)權(quán)利要求6的組合物，該艱難梭菌孢子表面肽選自包含SEQIDN0:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO7及SEQIDNO15的群組。11.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物包含抗體。12.根據(jù)權(quán)利要求11的組合物，其中，所述抗體為多克隆抗體。13.根據(jù)權(quán)利要求11的組合物，其中，所述抗體為單克隆抗體。14.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物包含合成肽。15.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物包含無機離子復(fù)合物。16.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物包含蛋白質(zhì)模擬物。17.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述基質(zhì)表面包含無生命表面。18.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述基質(zhì)表面包含有生命表面。19.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其中，所述有生命表面包含身體組織表面。20.根據(jù)權(quán)利要求19的組合物，其中，所述身體組織表面包含上皮表面。21.根據(jù)權(quán)利要求20的組合物，其中，所述上皮表面包含哺乳動物皮膚表面。22.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中，所述無生命表面包含不銹鋼。23.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中，所述無生命表面包含陶瓷。24.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中，所述無生命表面包含乙烯樹脂。25.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中，所述無生命表面包含瓷磚。26.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。27.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物適于人類給藥。28.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物進一步包含抗微生物皮膚清潔劑。29.根據(jù)權(quán)利要求觀的組合物，其中，所述皮膚清潔劑包含手洗清潔劑。30.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中，所述組合物進一步包含抗微生物表面清潔劑。31.一種方法，其包含a)提供i)處于暴露于微生物的風(fēng)險中的個體，其中，所述暴露可能導(dǎo)致微生物感染和/或菌落叢生；及ii)感染控制組合物；b)在該微生物暴露之前在使得形成微生物感染屏障的條件下向該個體給予該組合物。32.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述微生物感染屏障減少該微生物感染。33.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述微生物感染屏障阻止該微生物感染。34.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述微生物包含細(xì)菌。35.根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中，所述細(xì)菌選自包含梭菌屬、芽孢桿菌屬、脫硫腸狀菌屬、芽孢乳桿菌屬、芽孢八疊球菌屬或高溫放線菌屬(Thermoactinomyces)的群組。36.根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中，所述細(xì)菌包含細(xì)菌孢子。37.根據(jù)權(quán)利要求36的方法，其中，所述細(xì)菌孢子包含至少一種孢子表面蛋白質(zhì)。38.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中，所述梭菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)。39.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，所述芽孢桿菌屬孢子表面蛋白質(zhì)為炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。40.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述感染控制組合物包含氨基酸序列。41.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中，所述氨基酸序列來源于微生物孢子表面蛋白質(zhì)。42.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中，所述氨基酸序列與微生物孢子表面蛋白質(zhì)具有實質(zhì)同源性。43.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述感染控制組合物包含能夠抑制、拮抗、破壞、置換和/或阻斷微生物孢子與基質(zhì)表面的結(jié)合。44.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述感染控制組合物進一步包含拮抗化合物，其中，所述化合物對該微生物孢子表面蛋白質(zhì)氨基酸序列具有親和力。45.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述組合物進一步包含載劑。46.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述感染控制組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。47.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為衛(wèi)生保健工作人員。48.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為醫(yī)療第一反應(yīng)者。49.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為醫(yī)療患者。50.根據(jù)權(quán)利要求49的方法，其中，所述醫(yī)療患者處于衛(wèi)生保健環(huán)境中。51.根據(jù)權(quán)利要求49的方法，其中，所述醫(yī)療患者已給予至少一種抗生素。52.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為消防員。53.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為警察。54.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為軍事人員。55.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為食物操作員。56.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為無生命表面和/或物體。57.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中，所述給藥選自由局部給藥、經(jīng)口給藥、腸胃外給藥、肺部給藥、肛門給藥、陰道給藥、經(jīng)眼給藥及鼻內(nèi)給藥組成的群組。58.一種方法，其包含a)提供i)已暴露于微生物的個體，其中，所述暴露導(dǎo)致微生物感染；ii)感染控制組合物；b)在該微生物暴露之后在使得該微生物感染減少的條件下向該個體給予該組合物。59.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中，所述微生物包含細(xì)菌。60.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中，所述細(xì)菌包含細(xì)菌孢子。61.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中，所述細(xì)菌孢子包含至少一種孢子表面蛋白質(zhì)。62.根據(jù)權(quán)利要求61的方法，其中，所述細(xì)菌孢子表面蛋白質(zhì)為艱難梭菌孢子表面蛋白質(zhì)。63.根據(jù)權(quán)利要求61的方法，其中，所述細(xì)菌孢子表面蛋白質(zhì)為炭疽芽孢桿菌孢子表面蛋白質(zhì)。64.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中，所述感染控制組合物包含能夠抑制、拮抗、破壞、置換和/或阻斷微生物孢子與基質(zhì)表面的結(jié)合。65.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中，所述感染控制組合物進一步包含拮抗化合物，其中，所述化合物對該微生物孢子表面蛋白質(zhì)氨基酸序列具有親和力。66.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中，所述組合物進一步包含載劑。67.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中，所述感染控制組合物進一步包含至少一種抗微生物藥物。68.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為衛(wèi)生保健工作人員。69.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中，所述處于風(fēng)險中的個體為醫(yī)療第一反應(yīng)者。70.一種篩選方法，其包含a)提供i)經(jīng)分離的肽，其中，所述肽來源于微生物孢子表面蛋白質(zhì)；及ii)懷疑與該肽具有交互作用的感染控制測試化合物；b)使該肽與該感染控制測試化合物接觸；及c)檢測該肽與該感染控制測試化合物的交互作用。71.根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中，所述方法進一步包含能夠附著該經(jīng)分離的肽的基質(zhì)表面。72.根據(jù)權(quán)利要求71的方法，其中，所述基質(zhì)表面包含豬皮。73.根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中，所述肽來源于梭菌屬孢子表面。74.根據(jù)權(quán)利要求73的方法，其中，所述梭菌屬孢子表面包含艱難梭菌孢子表面。75.根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中，所述肽來源于芽孢桿菌屬孢子表面。76.根據(jù)權(quán)利要求75的方法，其中，所述芽孢桿菌屬孢子表面包含炭疽芽孢桿菌孢子表面。77.根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中，所述肽包含孢子表面肽。78.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，其中，所述孢子表面肽選自包含SEQIDNO:3、SEQIDNO5、SEQIDNO7及SEQIDNO:15的群組。79.根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中，所述肽包含抗體。全文摘要本發(fā)明提供編碼介導(dǎo)微生物孢子附著于表面的新穎微生物蛋白質(zhì)的基因(亦即例如孢子外膜基因及蛋白質(zhì))。所述微生物孢子蛋白質(zhì)的特定片段可用于抑制微生物孢子附著于表面，從而提供感染控制劑。本發(fā)明提供包含編碼孢子外膜蛋白質(zhì)的基因的重組表達載體以及含有所述表達載體的宿主細(xì)胞。本文進一步提供鑒別包含抑制細(xì)菌孢子附著于身體組織或固體表面的孢子外膜蛋白質(zhì)的感染控制組合物的篩選方法。另外，本發(fā)明提供孢子外膜蛋白質(zhì)表達的核酸抑制劑的用途，其通過與編碼孢子外膜蛋白質(zhì)的核酸序列以及與孢子外膜mRNA雜交。本發(fā)明進一步描述對孢子外膜蛋白質(zhì)具有親和力的單克隆及多克隆抗體。文檔編號C07K16/12GK102388064SQ201080014098公開日2012年3月21日申請日期2010年3月26日優(yōu)先權(quán)日2009年3月27日發(fā)明者大衛(wèi)·R·馬希加,莎拉·L·艾德蒙德斯,詹姆斯·艾德蒙·賓翰申請人:高裘企業(yè)公司