專利名稱：可利霉素的純化工藝的制作方法
可利霉素的純化工藝
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥化工技術(shù)領(lǐng)域，更具體地講，涉及一種從發(fā)酵液中提取可利霉素 的純化工藝。
背景技術(shù)：
可利霉素，又稱必特螺旋霉素，是中國第一個抗生素一類新藥。它是由轉(zhuǎn)基因的螺 旋霉素產(chǎn)生菌發(fā)酵得到的，在螺旋霉素4"位加入異戊?；鶄?cè)鏈形成的多種結(jié)構(gòu)類似成分 的混合物。其成品的主要組分為異戊酰螺旋霉素I、II、III，除此以外還含有少量丁酰、丙 酰、乙酰螺旋霉素Π、ΙΙΙ等?；菪顾兀瘜W(xué)結(jié)構(gòu)如下圖，具體組分見表1。成品組分要 求為異戊酰螺旋霉素III含量不低于30%，總異戊酰螺旋霉素含量不低于65%，總?；?旋霉素含量不低于80%?？衫顾爻煞謴?fù)雜，用溶媒萃取法從發(fā)酵液中提取獲得的萃取液由于含有過多乙 酰、丙酰螺旋霉素而使最終獲得的成品不能達到組分指標(biāo)要求。因此，在溶媒萃取法的基礎(chǔ) 上建立合理有效的分離純化工藝，去除雜質(zhì)，優(yōu)化組分配比，是提高可利霉素產(chǎn)品質(zhì)量的有 效方法?？衫顾鼗瘜W(xué)結(jié)構(gòu)式示意圖如圖3所示。目前，對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的提取分離研究主要集中于對溶媒萃取法、大孔樹脂 吸附法等工藝的研究。例如，中國發(fā)明專利CN1228437A公開了一種從發(fā)酵濾液中提取螺旋 霉素的工藝，通過改進傳統(tǒng)工藝和設(shè)備，簡化操作，提高收率。但針對去除雜質(zhì)、優(yōu)化組分而 進行的研究還較少，尤其是可利霉素作為一類新藥，對其組分純化研究的報道更少。表1可利霉素組分一覽表
螺旋霉素II 乙酰螺旋霉素II
螺旋霉素III 乙酰螺旋霉素III 丙酰螺旋霉素III (異)丁酰螺旋霉素II 異戊酰螺旋霉素I 異戊酰螺旋霉素II 異戊酰螺旋霉素III
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種通過緩沖鹽溶液洗滌溶劑萃取相、分離 雜質(zhì)、優(yōu)化組分的純化方法。為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種提取可利霉素的純化工藝，包括如下步驟(1)向發(fā)酵液中加入絮凝劑沉淀蛋白，過濾獲得濾液，其中，所述絮凝劑加入量的 質(zhì)量約為發(fā)酵液質(zhì)量的3% 6% ；(2)用溶媒萃取法從步驟(1)獲得的發(fā)酵濾液中提取可利霉素，取得酯相，所述溶 媒萃取法包括向濾液中加入乙酸丁酯，濾液與乙酸丁酯的體積比為10 30 1，充分?jǐn)?拌，加入NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8. 0 8. 8，靜置；(3)用鹽溶液、純水交替洗滌步驟(2)獲得的酯相；(4)用反萃取法將可利霉素從酯相反萃取到水相；(5)將步驟(4)得到的水相可利霉素結(jié)晶、干燥，獲得成品。步驟(1)所述的絮凝劑為聚合氯化鋁或者聚丙烯酰胺。步驟(2)所述的溶媒萃取法中，在酯相中加入破乳劑消除萃取時的乳化現(xiàn)象，乳 化現(xiàn)象不嚴(yán)重時也可不使用破乳劑；所述破乳劑是指NaCl或者十二烷基三甲基氯化銨1231。步驟(3)所述的洗滌過程包括先用純水洗滌，再用鹽溶液洗滌，最后再用純水洗 滌；所述洗滌過程包括(1)用純水洗滌，酯與純水的體積比為3 5 1 ；(2)用鹽溶液洗滌，酯與鹽溶液的體積比為3 5 1 ；(3)用純水洗滌，酯與純水的體積比為3 5 1。步驟(3)所述的鹽溶液為pH4 7的緩沖溶液；所述的鹽溶液為磷酸鹽緩沖液體系或者醋酸鹽緩沖液體系；鹽溶液質(zhì)量濃度為 0. 4% ；所述的鹽溶液為質(zhì)量濃度為0. 4% 的NaH2PO4溶液時最優(yōu)。本發(fā)明的優(yōu)點在于，該純化方法操作簡單，通過萃取，尤其是步驟(3)緩沖鹽溶液 的選擇性作用，酯相提取液中去除了大部分螺旋霉素等雜質(zhì)，使主要組分達到優(yōu)化，最終成 品中異戊酰螺旋霉素III、總異戊酰螺旋霉素及總螺旋霉素含量高于質(zhì)量控制指標(biāo)，而洗滌 液中的螺旋霉素可以分離回收，本發(fā)明大大提高了產(chǎn)品的質(zhì)量和收率。

圖1為產(chǎn)品HPLC組分分析圖；圖2為產(chǎn)品HPLC組分分析圖。 圖3為可利霉素化學(xué)結(jié)構(gòu)式示意圖。
具體實施方式
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的具體實施方式
做詳細(xì)說明。實施例1向25L可利霉素發(fā)酵液(效價796u/ml)中加入150g聚合氯化鋁，板框過濾，獲得37.5L濾液。向濾液中加入乙酸丁酯1.46L，攪拌的同時加入6mol/LNa0H溶液調(diào)節(jié)pH至 8. 5，繼續(xù)攪拌30min后靜置，加NaCl后分層獲得1. 13L酯相提取液。依次用280mL水、質(zhì)量 濃度為的NaH2PO4溶液、水對丁酯提取液進行洗滌。向洗后體積為1. 07L的丁酯提取液 中加入純水310mL，攪拌的同時加入3mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至2. 1，繼續(xù)攪拌30min后靜 置、分層，獲得325ml水相提取液。加入2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至中性，通入N2吹氣5h。 向獲得的300ml水相提取液中加入2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10. 0，靜置、抽濾、干燥，獲 得可利霉素成品8. 6g。經(jīng)檢測，成品中異戊酰螺旋霉素III含量為32.9%，總異戊酰螺旋霉素含量為 75. 9%，總螺旋霉素含量為91. 8%，產(chǎn)品總收率為45. 9%。產(chǎn)品HPLC組分分析圖見圖1，其 中每個峰號代表的物質(zhì)與表一中的組分對應(yīng)。實施例2向25L可利霉素發(fā)酵液(效價1470u/ml)中加入125g聚合氯化鋁，用板框過濾， 獲得40L濾液。向濾液中加入乙酸丁酯3. 5L，攪拌的同時加入6mol/LNa0H溶液調(diào)節(jié)pH至 8. 2，繼續(xù)攪拌30min后靜置，分層獲得2. 98L酯相提取液。用745ml水對酯相提取液進行一 次洗滌，再用745ml質(zhì)量濃度為0. 7%的NaH2PO4溶液對酯相提取液進行兩次洗滌。向洗后 體積為2. 86L的提取液中加入質(zhì)量濃度為0. 7%的NaH2PO4溶液1L，攪拌的同時加入3mol/L 鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH至2. 2，繼續(xù)攪拌30min后靜置、分層，獲得1. 04L水相提取液。加入2mol/ L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至中性，通入N2吹氣5h。向獲得的1. 18L提取液中加入2mol/L NaOH 溶液調(diào)節(jié)PH至9. 8，靜置、抽濾、干燥，獲得可利霉素成品19. 7g。經(jīng)檢測，成品中異戊酰螺旋霉素III含量為39.6%，總異戊酰螺旋霉素含量為 81. 0%，總螺旋霉素含量為96. 9%，產(chǎn)品總收率為40. 1%。產(chǎn)品HPLC組分分析圖見圖2， 其中每個峰號代表的物質(zhì)與表一中的組分對應(yīng)。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
一種可利霉素的純化工藝，其特征在于，包括如下步驟(1)向發(fā)酵液中加入絮凝劑沉淀蛋白，過濾獲得濾液，其中，所述絮凝劑質(zhì)量為發(fā)酵液的3％～6％；(2)用溶媒萃取法從步驟(1)獲得的發(fā)酵濾液中提取可利霉素，取得酯相，所述溶媒萃取法包括向濾液中加入乙酸丁酯，濾液與乙酸丁酯的體積比為10～30∶1，充分?jǐn)嚢?，加入NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.0～8.8，靜置；(3)用鹽溶液、純水交替洗滌步驟(2)獲得的酯相；(4)用反萃取法將可利霉素從酯相反萃取到水相；(5)將步驟(4)得到的水相可利霉素結(jié)晶、干燥，獲得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，步驟(1)所述的絮凝劑為 聚合氯化鋁或者聚丙烯酰胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，步驟(2)所述的溶媒萃取 法中，在酯相中加入破乳劑消除萃取時的乳化現(xiàn)象。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，所述破乳劑是指NaCl或 者十二烷基三甲基氯化銨1231。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，步驟(3)所述的洗滌過程 包括先用純水洗滌，再用鹽溶液洗滌，最后再用純水洗滌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，所述洗滌過程包括(1)用純水洗滌，酯與純水的體積比為3 5 1 ；(2)用鹽溶液洗滌，酯與鹽溶液的體積比為3 5 1 ；(3)用純水洗滌，酯與純水的體積比為3 5 1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，步驟(3)所述的鹽溶液是 PH為4 7的緩沖溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，所述的鹽溶液為磷酸鹽 緩沖液體系或者醋酸鹽緩沖液體系。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，所述的鹽溶液質(zhì)量濃度 為 0. 4% 1%。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的可利霉素的純化工藝，其特征在于，所述的鹽溶液為質(zhì)量濃 度為0. 4% 1 %的NaH2PO4溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從發(fā)酵液提取可利霉素的純化工藝，包括如下步驟(1)向發(fā)酵液中加入絮凝劑沉淀蛋白，過濾獲得濾液；(2)用溶媒萃取法從步驟(1)獲得的發(fā)酵濾液中提取可利霉素，取得酯相；(3)用鹽溶液、純水交替洗滌步驟(2)獲得的酯相；(4)用反萃取法將可利霉素從酯相反萃取到水相；(5)將步驟(4)得到的水相可利霉素結(jié)晶、干燥，獲得成品。該純化方法通過萃取，尤其是通過緩沖鹽溶液洗滌萃取相，去除了其中殘留的螺旋霉素，優(yōu)化了可利霉素的組分配比，所得產(chǎn)品符合質(zhì)量指標(biāo)要求，而洗滌液中的螺旋霉素可以分離回收，大大提高了產(chǎn)品的質(zhì)量和收率。
文檔編號C07H1/06GK101921302SQ201010229139
公開日2010年12月22日 申請日期2010年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月16日
發(fā)明者吳艷陽, 張海平, 朱家文, 武斌, 游旭, 紀(jì)利俊, 郝玉有, 陳葵, 顧芨芨 申請人:華東理工大學(xué);上海同聯(lián)制藥有限公司