專利名稱：：穿心蓮總內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及中草藥提取與分離，更確切地說涉及新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝。
背景技術：
：穿心蓮又名一見喜，為爵床科植物穿心蓮AndrographisPaniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分。原產(chǎn)印度，我國華東、中南等地區(qū)均有栽培。性苦，寒，歸心、肺、大腸、膀胱經(jīng)。具有清熱解毒、涼血、消腫止痛等功效。臨床主要用于感冒發(fā)熱，咽喉腫痛，口舌生瘡，頓咳勞嗽，泄瀉痢疾，熱淋澀痛，癰腫瘡瘍，毒蛇咬傷等證。穿心蓮的主要成分含有二萜內(nèi)酯與黃酮類化合物。二萜內(nèi)酯類主要為穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯及脫水穿心蓮內(nèi)酯，其中以穿心蓮內(nèi)酯含量最髙，占1.5%以上。穿心蓮內(nèi)酯因在藥材中含量髙而易提取，故對穿心蓮內(nèi)酯的研究較深入。現(xiàn)代藥理研究表明，穿心蓮內(nèi)酯及其衍生物具有抗炎抗菌、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、治療心腦血管疾病、保肝利膽等作用。新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯因在藥材中含量較低，常規(guī)提取方法不易大量提取，故對其研究相對較少，但因其與穿心蓮內(nèi)酯結(jié)構(gòu)相近，故藥理活性相近。如均具有一定的抗炎抗菌、抗病毒活性；中國專利申請CN1511522的專利"穿心蓮二萜內(nèi)酯在抑制血管生成中的應用"公開了包括穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯在內(nèi)的穿心蓮二萜內(nèi)酯化合物具有抑制血管生成的作用，可以作為制備抑制血管生成的治療和預防藥物應用。又因結(jié)構(gòu)上的差異，有的方面表現(xiàn)出更強的活性或不同于穿心蓮內(nèi)酯的新的藥理作用。如穿心蓮內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯對卡介苗(BCG)誘導的小鼠腹膜巨噬細胞經(jīng)脂多糖(LPS)刺激產(chǎn)生NO的抑制作用試驗顯示口服新穿心蓮內(nèi)酯(5、25mg/kg)對NO產(chǎn)生的抑制率分別為35y。、40%,而口服相同劑量的穿心蓮內(nèi)酯不抑制NO產(chǎn)生，該結(jié)果提示新穿心蓮內(nèi)酯在穿心蓮抗炎作用中起關鍵作用(BiolPharmBull，2002,25(9)，11691774}。另外有研究發(fā)現(xiàn)新穿心蓮內(nèi)酯具有治療中暑的作用(中國工業(yè)醫(yī)學雜志，2O07,20(1)，3637}。然而目前穿心蓮總內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝卻存在很多缺陷。如目前臨床主要應用穿心蓮粗提取物，主要通過水或醇類簡單提取，含雜質(zhì)很多，服用劑量大，且粗提取物有效成分含量以穿心蓮內(nèi)酯為主，其它內(nèi)酯的含量很低，從而影響臨床的療效?，F(xiàn)有穿心蓮二萜單體成分分離比較常用的方法為將穿心蓮內(nèi)酯以乙醇提取，回收乙醇，經(jīng)石油醚洗除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，水液用氯仿振搖，放置過夜，水和氯仿層之間析出物分離新穿心蓮內(nèi)酯與穿心蓮內(nèi)酯，氯仿層用于分離脫水穿心蓮內(nèi)酯及脫水穿心蓮內(nèi)酯(楊云等主編，天然藥物化學成分提取與分離手冊(修訂版)，中國中醫(yī)藥出版社，582583)。首先該方法大量使用有毒試劑氯仿萃取，不利于操作人員的勞動保護，環(huán)境污染嚴重，其次，用氯仿萃取時乳化嚴重，需長時間靜置，生產(chǎn)效率低下，另外二萜內(nèi)酯與黃酮等成分并存，相互助溶，該方法提取很不完全，收得率很低。中國專利申請CN1962650的專利"一種髙純度脫水穿心蓮內(nèi)酯的制備方法"公開了髙純度脫水穿心蓮內(nèi)酯的制備方法，將穿心蓮用乙醇熱浸提取，過濾，過大孔吸附樹脂柱，收集有效洗脫液，洗脫液濃縮后真空干燥，得干粉，用甲醇溶解，裝入硅膠柱，用氯仿和甲醇混合溶劑洗脫，收集有效成份的洗脫液后濃縮，用乙醇結(jié)晶，重結(jié)晶，得髙純度的脫水穿心蓮內(nèi)酯。該方法經(jīng)大孔吸附樹脂除雜后仍混有不少雜質(zhì)，直接上硅膠柱層析，使用溶劑量大，分離工藝復雜，且采用有毒試劑氯仿和甲醇作為洗脫劑，同樣不利于操作人員的勞動保護及環(huán)境保護?，F(xiàn)有的生產(chǎn)工藝缺點使得目前市場上高純度的新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯難以買到，無法滿足藥理活性的篩選和臨床應用的需求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是由于穿心蓮提取物及新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯存在很強的藥理活性，臨床應用與實驗研究均需要大量的髙品質(zhì)穿心蓮總內(nèi)酯及各單體純品，然而目前的生產(chǎn)工藝存在不少缺點，不能滿足需求，故尋找一種工藝簡便，適合工業(yè)化批量生產(chǎn)的生產(chǎn)工藝極為重要。本發(fā)明的技術方案是通過以下步驟實現(xiàn)1、通過常規(guī)提取方法，包括采用乙醇等溶劑冷浸、熱浸或滲漉等方法對穿心蓮莖葉進行提取，回收乙醇制備含穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯的提取物，并用石油醚脫除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)。2、上述所得脫葉綠素提取物熱溶于含C^Cs的低級醇或含水低級醇，以活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收溶劑至適量，緩慢加水適量，放置，析出大部分穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，過濾，母液濃縮，放置，再析出小部分穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，過濾，濾液回收溶劑至干，得浸膏。3、上述所得浸膏溶于有機溶劑，包括低級醇或含水低級醇，乙酸乙酯、乙酸丁酸，乙酸甲酯、丙酮、含水丙酮、乙酸乙酯-石油醚混合液、乙酸丁酯-石油醚混合液。過氧化鋁柱，有機溶劑洗脫，洗脫液濃縮，得脫黃酮雜質(zhì)濃縮物?；蛉苡谥苄匀軇?，如乙酸乙酯，乙酸丁酸，正丁醇、乙酸乙酯-石油醚混合液、乙酸丁酯-石油醚混合液等，弱堿洗去黃酮雜質(zhì)，Nacl溶液或水洗滌，溶劑濃縮，得脫黃酮雜質(zhì)濃縮物?；蛉苡谥苄匀軇?，弱堿洗去黃酮雜質(zhì)，Nacl溶液或水洗滌，溶劑濃縮，溶于有機溶劑，再過氧化鋁柱，有機溶劑洗脫，洗脫液濃縮，得脫黃酮雜質(zhì)濃縮物。4、上述所得脫黃酮雜質(zhì)濃縮物熱溶于有機溶劑中，包括低級醇或含水低級醇，乙酸乙酯、乙酸丁酸，乙酸甲酯、丙酮、含水丙酮、乙酸乙酯-石油醚混合液、乙酸丁酯-石油醚混合液，放冷析晶，過濾，得穿心蓮總內(nèi)酯。5、上述所得的穿心蓮總內(nèi)酯以三氯甲垸或二氯甲烷冷溶2-4次，過濾，得濾液與不溶物兩部分。濾液濃縮，濃縮物主要為脫水穿心蓮內(nèi)酯與去氧穿心蓮內(nèi)酯，僅含微量穿心蓮內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯，再經(jīng)溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶，或柱層析分離分別得到脫水穿心蓮內(nèi)酯與去氧穿心蓮內(nèi)酯純品。不溶物主要為穿心蓮內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯混合物，僅含微量脫水穿心蓮內(nèi)酯與去氧穿心蓮內(nèi)酯，再經(jīng)溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶或柱層析分離分別得到新穿心蓮內(nèi)酯及穿心蓮內(nèi)酯純品。產(chǎn)品檢測使用髙效液相色譜儀，紫外檢測器。ds-ODS柱；流動相乙腈水(35:65);脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測波長254nm;新穿心蓮內(nèi)酯與穿心蓮內(nèi)酯檢測波長225nm;去氧穿心蓮內(nèi)酯檢測波長205nm;流速1.0ml/min。樣品進樣濃度約0.1mg/ml，進樣量為10lM,穿心蓮總內(nèi)酯采用6外標法進行定量分析。新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯的純度分析采用峰面積歸一化法檢測。本發(fā)明的優(yōu)點是1、本發(fā)明所得的穿心蓮總內(nèi)酯中新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯所占比例髙，三者總含量大于50%。總內(nèi)酯中新穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯的總量大于80%。2、由于穿心蓮莖葉提取物中穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯的主要成分，含量遠高于其它內(nèi)酯，故先分出提取物中的大部穿心蓮內(nèi)酯，有利于各單體分離的后續(xù)處理，可大大減少后續(xù)處理過程中的溶劑使用量，從而節(jié)約時間和成本。3、穿心蓮莖葉中含大量黃酮類化合物，本發(fā)明中將穿心蓮莖葉提取物過氧化鋁柱，或溶于脂溶性溶劑，弱堿洗，去除大部分黃酮雜質(zhì)，有利于總內(nèi)酯的析晶，對析出的總內(nèi)酯即便采用結(jié)晶與重結(jié)晶等簡化的處理方法便可得到各純品。同已有方法相比，極大地簡化了分離步驟，節(jié)約了時間和成本，提高了產(chǎn)品的收率。4、本發(fā)明分離新穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯的工藝，同現(xiàn)有柱層析和萃取分離方法相比，有害溶劑使用量少，有利于操作人員的勞動保護和環(huán)境保護。5、本發(fā)明生產(chǎn)設備簡單，工藝路線簡化易操作，可實現(xiàn)大批量工業(yè)化生產(chǎn)。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步描述具體實施例方式實施例1穿心蓮總內(nèi)酯的制備取穿心蓮莖葉粗粉2kg,用18倍量95%乙醇分2次熱浸提取，回收乙醇浸提液，用水稀釋至約4000ml，用石油醚6000ml分3次洗除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，水溶液濃縮，將濃縮浸裔熱溶于15001195%乙醇，以50g活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收乙醇至800ml，緩慢加水200ml,在加完水時應沒有固體析出，放置，析出大部分穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，過濾，母液濃縮至400ml,放置，再析出小部分穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，過濾，，濾液回收溶劑至干，得浸膏，將其加熱溶于1000ml95。/c乙醇，再用95%乙醇1000ml稀釋，此溶液冷卻到室溫后逐漸通過500克Al203短柱，溶液通過后，柱用1000ml95^乙醇洗滌，合并乙醇液，真空濃縮至干，加入200ml95^乙醇熱溶，溶解后邊加熱邊加入與乙醇相同體積的去離子水，在加完水時應沒有固體析出。首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約200ml，同上法析晶，真空過濾，合并結(jié)晶，用50%乙醇重結(jié)晶，得穿心蓮總內(nèi)酯精品35.6g(濾液中仍可回收穿心蓮總內(nèi)酯)。實施例2三種穿心蓮二萜內(nèi)酯單體的分離取實施例1中的穿心蓮總內(nèi)酯20g，研細，以三氯甲烷200ml冷溶，過濾，不溶物分別再以三氯甲垸200ml、100ml冷溶2次，過濾，合并三氯甲烷液，得三氯甲烷液與不溶物兩部分。將三氯甲垸液回收至干，熱溶于100ml95。/。乙醇，放置，析出去氧穿心蓮內(nèi)酯片狀結(jié)晶，母液濃縮至60ml，放置，析出脫水穿心蓮內(nèi)酯針狀結(jié)晶，余下母液繼續(xù)適當濃縮交替析晶，合并去氧穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，分別以乙醇、丙酮重結(jié)晶得純品3.6g(濾液中仍可回收去氧穿心蓮內(nèi)酯)。合并脫水穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶分別以乙酸乙酯與50%乙醇重結(jié)晶得純品3.2g(濾液中仍可回收脫水穿心蓮內(nèi)酯)。將不溶物熱溶于100ml95。/。乙醇，放置，析出新穿心蓮內(nèi)酯棱狀結(jié)晶，母液濃縮至80ml，放置，析出穿心蓮內(nèi)酯四方型結(jié)晶，余下母液繼續(xù)適當濃縮交替析晶，合并新穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，以乙醇重結(jié)晶得純品4.5g(濾液中仍可回收新穿心蓮內(nèi)酯)。實施例3穿心蓮總內(nèi)酯的制備取穿心蓮莖葉粗粉lkg，用15倍量95%乙醇分2次冷浸提取，每次24小時，回收乙醇浸提液，用水稀釋至約2000ml，用石油醚3000ml分3次洗除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，水溶液濃縮，將濃縮浸裔熱溶于1000ml甲醇，以30g活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收甲醇至約500ml,緩慢加水100ml，在加完水時應沒有固體析出，首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約350ml，同上法放置，繼續(xù)析出少量穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，真空過濾，濾液回收溶劑至干，得浸膏，將其熱溶于1500ml乙酸乙酯，冷卻到室溫后逐漸通過300克Al203短柱，溶液通過后，柱用1000ml乙酸乙酯洗滌，合并乙酸乙酯，真空濃縮至干，加入200ml丙酮熱溶，溶解后邊加熱加入與丙酮相同體積的去離子水，在加完水時應沒有固體析出。首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約200ml,同上法析晶，真空過濾，合并結(jié)晶，將其溶于50%丙酮重結(jié)晶，得穿心蓮總內(nèi)酯精品20.2g(濾液中仍可回收穿心蓮總內(nèi)酯)。實施例4三種穿心蓮二萜內(nèi)酯單體的分離取實施例3中的穿心蓮總內(nèi)酯15g,研細，以二氯甲烷15ml冷溶，過濾，不溶物分別再以二氯甲垸200ml、100ml冷溶2次，過濾，合并二氯甲烷液，得二氯甲烷液與不溶物兩部分。將二氯甲垸液回收至干，以50ml丙酮溶解，將其與10克硅膠(100-200目)拌樣，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干溶劑，取出，60"干燥，研細，備用。另取200-300目的硅膠200g，與石油醚(6090°)攪拌均勻，攪除氣泡后濕法裝柱，用石油醚(6090°)洗脫平衡，上樣，用石油醚(6090°)/醋酸乙酯梯度洗脫，硅膠薄層層析跟蹤檢測，點樣于以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯(4:5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nin)下檢視，相同流份合并，所得去氧穿心蓮內(nèi)酯用丙酮結(jié)晶與重結(jié)晶，得片狀結(jié)晶純品2.8g(濾液中仍可回收去氧穿心蓮內(nèi)酯)，脫水穿心蓮內(nèi)酯用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶，得針狀結(jié)晶純品2.4g(濾液中仍可回收脫水穿心蓮內(nèi)酯)。將不溶物熱溶于80ml95。/。乙醇，放置，析出新穿心蓮內(nèi)酯棱狀結(jié)晶，母液濃縮至50ml，放置，析出穿心蓮內(nèi)酯四方型結(jié)晶，余下母液繼續(xù)適當濃縮交替析晶，合并新穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，以乙醇重結(jié)晶得純品3.2g(濾液中仍可回收新穿心蓮內(nèi)酯)。實施例5穿心蓮總內(nèi)酯的制備取穿心蓮莖葉粗粉lkg，用15倍量95%乙醇浸泡24小時后滲漉，回收乙醇浸提液，用水稀釋至約2000ml，用石油醚3000ml分3次洗除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，水溶液濃縮，將濃縮浸裔熱溶于1000m95。/。乙醇，以30g活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收乙醇至約500ml,緩慢加水100ml，在加完水時應沒有固體析出，首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約350ml,同上法放置，繼續(xù)析出少量穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，真空過濾，濾液回收溶劑至干，得浸裔，將其熱溶于1000ml正丁醇，冷卻到室溫后逐漸通過300克Al203短柱，溶液通過后，柱用1000ml正丁醇洗滌，合并正丁醇液，真空濃縮至干，加入200ml甲醇熱溶，溶解后邊加熱加入與甲醇相同體積的去離子水，在加完水時應沒有固體析出。首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約200ml,同上法析晶，真空過濾，合并結(jié)晶，將其熱溶于50%乙醇中，放冷至析晶完全，過濾，得穿心蓮總內(nèi)酯精品18.9g(濾液中仍可回收穿心蓮總內(nèi)酯)。實施例6三種穿心蓮二萜內(nèi)酯單體的分離取實施例5中的穿心蓮總內(nèi)酯15g,研細，以二氯甲烷150ml冷溶，過濾，不溶物分別再以二氯甲垸150ml、100ml冷溶2次，過濾，合并二氯甲烷液，得二氯甲烷液與不溶物兩部分。將二氯甲烷液回收至干，以50ml丙酮溶解，將其與10克硅膠(100-200目)拌樣，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干溶劑，取出，60"干燥，研細，備用。另取200-300目的硅膠200g，與石油醚(6090°)攪拌均勻，攪除氣泡后濕法裝柱，用石油醚(6090°)洗脫平衡，上樣，用石油醚(6090°)/醋酸乙酯，梯度洗脫，硅膠薄層層析跟蹤檢測，點樣于以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯(4:5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，相同流份合并，所得去氧穿心蓮內(nèi)酯用丙酮結(jié)晶與重結(jié)晶，得片狀結(jié)晶純品2.3g(濾液中仍可回收去氧穿心蓮內(nèi)酯)，脫水穿心蓮內(nèi)酯用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶，得針狀結(jié)晶純品1.9g(濾液中仍可回收脫水穿心蓮內(nèi)酯)。將不溶物用50ml95V。乙醇加熱溶解，將其與10克中性氧化鋁(100-200目)拌樣，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干溶劑，取出，60"干燥，研細，備用。另取150g中性氧化鋁(100-200目)，與二氯甲烷攪拌均勻，攪除氣泡后濕法裝柱，用二氯甲烷洗脫平衡，上樣，用二氯甲烷/無水乙醇梯度洗脫，硅膠薄層層析跟蹤檢測，點樣于以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF2S4薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯(4:5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，相同流份合并，所得新穿心蓮內(nèi)酯用乙醇結(jié)晶與重結(jié)晶，得棱柱狀結(jié)晶純品2.6g(濾液中仍可回收新穿心蓮內(nèi)酯)。實施例7穿心蓮總內(nèi)酯的制備取穿心蓮莖葉粗粉1.5kg，用15倍量95%乙醇浸泡24小時后滲漉，回收乙醇浸提液，用水稀釋至約3000ml，用石油醚4500ml分3次洗除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，水溶液濃縮，將濃縮浸裔熱溶于1500m95。/。乙醇，以30g活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收乙醇至約800ml，緩慢加水200ml,在加完水時應沒有固體析出，首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約500ml，同上法放置，繼續(xù)析出少量穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，真空過濾，濾液回收溶劑至干，得浸膏，將其熱溶于1500ml正丁醇，冷卻到室溫后用5V。NaHC03洗滌2次，每次1000ml，再用"/。Nacl水溶液洗滌1次，考慮到NaHCO;j與Nacl水溶液可能會帶去內(nèi)酯，繼而用正丁醇洗滌一次NaHCOs與Nacl水溶液，合并正丁醇液，真空濃縮至干，加入300ml95。/。醇熱溶，溶解后邊加熱加入與乙醇相同體積的去離子水，在加完水時應沒有固體析出。首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約400ml,同上法析晶，真空過濾，合并結(jié)晶，將其熱溶于50。/。乙醇中，放冷至析晶完全，過濾，得穿心蓮總內(nèi)酯精品30.8g(濾液中仍可回收穿心蓮總內(nèi)酯)。實施例8三種穿心蓮二萜內(nèi)酯單體的分離取實施例7中的穿心蓮總內(nèi)酯20g，研細，以三氯甲烷200ml冷溶，過濾，不溶物分別再以三氯甲烷150ml、100ml冷溶2次，過濾，合并三氯甲垸液，得三氯甲烷液與不溶物兩部分。將三氯甲烷液回收至干，以lOOml丙酮溶解，將其與10克中性氧化鋁(100-200目)拌樣，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干溶劑，取出，60'C干燥，研細，備用。另取200-300目的中性氧化鋁200g，與石油醚(6090°)攪拌均勻，攪除氣泡后濕法裝柱，用石油醚(6090°)洗脫平衡，上樣，用石油醚(6090°)/丙酮梯度洗脫，硅膠薄層層析跟蹤檢測，點樣于以羧甲纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF2S4薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯(4:5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，相同流份合并，所得去氧穿心蓮內(nèi)酯用丙酮結(jié)晶與重結(jié)晶，得片狀結(jié)晶純品3.1g(濾液中仍可回收去氧穿心蓮內(nèi)酯)，脫水穿心蓮內(nèi)酯用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶，得針狀結(jié)晶純品2.7g(濾液中仍可回收脫水穿心蓮內(nèi)酯)。將不溶物熱溶于100ml95。/。乙醇，放置，析出新穿心蓮內(nèi)酯棱狀結(jié)晶，以乙醇重結(jié)晶得純品4.5g(濾液中仍可回收新穿心蓮內(nèi)酯)。實施例9穿心蓮總內(nèi)酯的制備取穿心蓮莖葉粗粉2kg，用15倍量95%乙醇分2次熱浸提取，回收乙醇浸提液，用水稀釋至約4000ml,用石油醚6000ml分3次洗除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，水溶液濃縮，將濃縮浸膏熱溶于1500m95。/。乙醇，以50g活性炭11回流脫色，趁熱過濾，回收乙醇至約1000ml，邊加熱邊緩慢加水300ml，在加完水時應沒有固體析出，首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約800ml,同上法放置，繼續(xù)析出少量穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，真空過濾，濾液回收溶劑至干，得浸裔，將其熱溶于3000ml乙酸乙酯，冷卻到室溫后用5。/。Na2C03洗滌2次，每次2000ml,再用1。/。Nacl水溶液洗滌1次，考慮到Na2C03與Nacl水溶液可能會帶去內(nèi)酯，繼而用乙酸乙酯洗滌一次Na2C03與Nacl水溶液，合并乙酸乙酯液，真空濃縮至干，加入4001195%醇熱溶，溶解后邊加熱加入與乙醇相同體積的去離子水，在加完水時應沒有固體析出。首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約400ml,同上法析晶，真空過濾，合并結(jié)晶，將其熱溶于50%乙醇重結(jié)晶，得穿心蓮總內(nèi)酯精品38.3g(濾液中仍可回收穿心蓮總內(nèi)酯)。實施例10三種穿心蓮二萜內(nèi)酯單體的分離取實施例9中的穿心蓮總內(nèi)酯30g，研細，以二氯甲烷300ml冷溶，過濾，不溶物分別再以二氯甲烷200ml、100ml冷溶2次，過濾，合并二氯甲烷液，得二氯甲烷液與不溶物兩部分。將二氯甲烷液回收至干，熱溶于150ml60。/。乙醇，放置，析出去氧穿心蓮內(nèi)酯片狀結(jié)晶，母液濃縮至100ml,放置，析出脫水穿心蓮內(nèi)酯針狀結(jié)晶，去氧穿心蓮內(nèi)酯分別以80%乙醇、丙酮重結(jié)晶得純品4.0g(濾液中仍可回收去氧穿心蓮內(nèi)酯)。脫水穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶分別以乙酸乙酯與30%乙醇重結(jié)晶得純品3.8g(濾液中仍可回收脫水穿心蓮內(nèi)酯)。將不溶物熱溶于150ml95y。乙醇，放置，析出新穿心蓮內(nèi)酯棱狀結(jié)晶，母液濃縮至80ml,放置，析出穿心蓮內(nèi)酯四方型結(jié)晶，新穿心蓮內(nèi)酯以乙醇重結(jié)晶得純品5.6g(濾液中仍可回收新穿心蓮內(nèi)酯)。實施例11穿心蓮總內(nèi)酯的制備取穿心蓮莖葉粗粉2kg，用16倍量95%乙醇分2次冷浸提取，回收乙醇浸提液，用水稀釋至約4000ml,用石油醚4000ml分2次洗除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，水溶液濃縮，將濃縮浸裔熱溶于1500195%乙醇，以50g活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收乙醇至約1000ml，邊加熱邊緩慢加水300ml,在加完水時應沒有固體析出，首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約800ml，同上法放置，繼續(xù)析出少量穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，真空過濾，濾液回收溶劑至干，得浸裔，將其熱溶于2000ml乙酸丁酯，冷卻到室溫后用5。/。NaHC03洗滌2次，每次1500ml，再用去離子水洗滌l次，考慮到Na2C03與水溶液可能會帶去內(nèi)酯，繼而用乙酸丁酯洗滌一次NaHC03與水溶液，合并乙酸丁酯液，真空濃縮至干，將其加熱溶于1000ml95。/。乙醇，再用95%乙醇1000ml稀釋，此溶液冷卻到室溫后逐漸通過500克Al203短柱，溶液通過后，柱用1000ml95^乙醇洗滌，合并乙醇液，真空濃縮至干，加入1500ml乙酸乙酯熱溶，溶解后邊加熱加入500ml石油醚，在加完石油醚時應沒有固體析出。首先室溫放置，然后轉(zhuǎn)移至冰箱中過夜，待結(jié)晶完全析出，真空過濾，濾液濃縮至約1500ml,同上法析晶，真空過濾，合并結(jié)晶，用乙酸乙酯重結(jié)晶，得穿心蓮總內(nèi)酯精品52.9g(濾液中仍可回收穿心蓮總內(nèi)酯)。實施例12三種穿心蓮二萜內(nèi)酯單體的分離取實施例11中的穿心蓮總內(nèi)酯40g,研細，以三氯甲垸300ml冷溶，過濾，不溶物分別再以三氯甲垸200ml、150ml冷溶2次，過濾，合并三氯甲烷液，得三氯甲烷液與不溶物兩部分。將三氯甲烷液回收至干，熱溶于100ml丙酮，放置，析出去氧穿心蓮內(nèi)酯片狀結(jié)晶，母液濃縮至50ml，放置，析出脫水穿心蓮內(nèi)酯針狀結(jié)晶，去氧穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶分別以丙酮重結(jié)晶得純品7.6g(濾液中仍可回收去氧穿心蓮內(nèi)酯)。脫水穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶分別以乙酸乙酯與50%丙酮重結(jié)晶得純品4.8g(濾液中仍可回收去氧穿心蓮內(nèi)酯)。將不溶物熱溶于200ml95。/。乙醇，放置，析出新穿心蓮內(nèi)酯棱狀結(jié)晶，以乙醇及丙酮重結(jié)晶得純品8.1g(濾液中仍可回收去氧穿心蓮內(nèi)酯)。實施例13產(chǎn)品檢測使用島津高效液相色譜儀，LC-10ATvp溶劑輸送泵，SPD-lOAvp紫外-可見檢測器。HW-2000色譜工作站(上海千譜軟件有限公司)。色譜柱Shim隱packVP隱ODS柱(150X4.6mm，5,);乙腈水(35:65);脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測波長254nm;新穿心蓮內(nèi)酯與穿心蓮內(nèi)酯檢測波長225nm;去氧穿心蓮內(nèi)酯檢測波長205nm;流速1.0ml/min;靈敏度0.02AUFS。樣品進樣濃度約0.1mg/ml，進樣量為101U,穿心蓮總內(nèi)酯采用外標法進行定量分析，結(jié)果見表l。新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯的純度分析采用峰面積歸一化法檢測，結(jié)果見表2。表l、穿心蓮總內(nèi)酯中各單體的含量檢測結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>權(quán)利要求1.一種穿心蓮總內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝，包括(1)制備含穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯的穿心蓮莖葉提取物，并用石油醚脫除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)；(2)上述所得脫葉綠素提取物熱溶于低級醇或含水低級醇，以活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收溶劑至適量，緩慢加水適量，放置，析出大部分穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，過濾，母液濃縮，放置，再析出小部分穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶，過濾，濾液回收溶劑至干，得浸膏；(3)上述所得浸膏溶于有機溶劑，過氧化鋁柱，有機溶劑洗脫，洗脫液濃縮，得脫黃酮雜質(zhì)濃縮物；或溶于脂溶性溶劑，弱堿洗，Nacl溶液或水洗，溶劑濃縮，得脫黃酮雜質(zhì)濃縮物；或溶于脂溶性溶劑，弱堿洗，Nacl溶液或水洗，溶劑濃縮，溶于有機溶劑，過氧化鋁柱，有機溶劑洗脫，洗脫液濃縮，得脫黃酮雜質(zhì)濃縮物；(4)上述所得脫黃酮雜質(zhì)濃縮物熱溶于有機溶劑中，放冷析晶，過濾，得穿心蓮總內(nèi)酯；(5)上述所得的穿心蓮總內(nèi)酯以三氯甲烷或二氯甲烷冷溶2-4次，過濾，得濾液與不溶物兩部分。濾液濃縮，濃縮物經(jīng)溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶，或柱層析分離分別得到脫水穿心蓮內(nèi)酯與去氧穿心蓮內(nèi)酯純品；不溶物經(jīng)溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶或柱層析分離分別得到新穿心蓮內(nèi)酯及穿心蓮內(nèi)酯純品。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述穿心蓮總內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝，其特征在于有機溶劑為低級醇或含水低級醇，乙酸乙酯、乙酸丁酸，乙酸甲酯、丙酮、含水丙酮、乙酸乙酯-石油醚混合液、乙酸丁酯-石油醚混合液。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述穿心蓮總內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝，其特征在于脂溶性溶劑為乙酸乙酯，乙酸丁酸，正丁醇、乙酸乙酯-石油醚混合液、乙酸丁酯-石油醚混合液。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述穿心蓮總內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝，其特征在于低級醇為d-Cs醇。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述穿心蓮總內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝，其特征在于低級醇為C^-Cs醇。全文摘要本發(fā)明公開了穿心蓮總內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝，該工藝為先制備穿心蓮莖葉提取物，經(jīng)石油醚脫除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)，將其熱溶于低級醇或含水低級醇，以活性炭回流脫色，析除大部分穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶后，經(jīng)過氧化鋁柱或堿洗脫去黃酮類，得到穿心蓮總內(nèi)酯，將其以三氯甲烷或二氯甲烷冷溶2-4次，過濾，得濾液與不溶物兩部分，濾液濃縮，經(jīng)溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶，或柱層析分離分別得到脫水穿心蓮內(nèi)酯與去氧穿心蓮內(nèi)酯純品。不溶物經(jīng)溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶或柱層析分離分別得到新穿心蓮內(nèi)酯及穿心蓮內(nèi)酯純品。本發(fā)明生產(chǎn)設備簡單，工藝路線簡化易操作，可實現(xiàn)大批量工業(yè)化生產(chǎn)，所得穿心蓮總內(nèi)酯中新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯所占比例高，雜質(zhì)含量少。所得新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及去氧穿心蓮內(nèi)酯單體純度均達98％以上，可作為中藥化學對照品使用，或作為醫(yī)藥及化工原料應用。文檔編號C07D307/58GK101559088SQ20091011542公開日2009年10月21日申請日期2009年5月21日優(yōu)先權(quán)日2009年5月21日發(fā)明者揚盧,周一君,增楊,石榮火,榮陸申請人:雷允上藥業(yè)有限公司