專利名稱：一種吲哚苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種吲哚苷的制備方法，尤其是從中藥大青葉中提取吲哚苷的制備方法。
背景技術(shù)：
大青葉為十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fort.的干燥葉，夏、秋二季分 2 3次采收，全國均有種植。具有清熱解毒，涼血消斑的功效。用于溫邪入營，高熱神昏， 發(fā)斑發(fā)疹，黃疸，熱痢，痄腮，喉痹，丹毒，癰腫。 大青葉維吾爾藥志中又稱烏斯瑪草，是維吾爾族民間世世代代習(xí)用的一種生眉植 物，是中藥材蔣藍(lán)(Isatis indigotica Fort.)的——變禾中(Isatis indigotica Fort, var. osma)學(xué)名叫新疆菘藍(lán)。 吲哚苷是大青葉中的主要成分，經(jīng)證實(shí)具有抗病毒活性。也是大青葉細(xì)胞里的青 黛色素的主要存在形式。青黛色素是一種已被發(fā)掘利用三、四千年的，被譽(yù)為世界上最古老 也最著名的植物色素，最早用于纖維制品的染色，為人所皆知。目前已應(yīng)用于藥品、食品和 化妝品等領(lǐng)域。 3 —羥基吲哚一 13 -D —葡萄糖甙俗名吲哚苷，英俗名Indican ;
化學(xué)名稱3 — Hydroxyindole- P _D_glucoside ;
結(jié)構(gòu)式如下分子量295.28。 該化合物含結(jié)晶水時為無色針狀晶體，熔點(diǎn)57 58°C ;不含結(jié)晶水的溶點(diǎn)為 176-178°C [a]D—16. 17(水)。可被靛素植物體內(nèi)自身存在的靛素酶(lndhamlsin)，或 可被杏仁內(nèi)的苦杏仁酶(mulsin)，經(jīng)酶解生物化學(xué)反應(yīng)分解成相同摩爾數(shù)的3 —羥基吲哚 和B — II葡萄糖；亦可在隔離空氣下，被3%的溫?zé)嵯←}酸，經(jīng)水解反應(yīng)，除生成相同摩爾 數(shù)的3羥基噴哚.葡萄糖外，同時3 —羥基噴哚繼而生成少量的3 —羥基噴哚棕(lndoxyl brown)，若此時通入空氣則生成蘭色的靛蘭。查閱相關(guān)資料，未見有吲哚苷單體制備方法的 報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，提供一種吲哚苷的制備方法，該方法是從純中藥大青葉中通過水提取，合并提取液，靜置過夜，稀釋，室溫進(jìn)行超濾，納濾膜濃縮，大孔樹脂剃度洗脫，濃
縮至流浸膏，稀釋，乙醚萃取，減壓濃縮，室溫下靜置析晶，濾過，得到吲哚苷粗品，加熱水溶
解，過濾，放冷析晶，即可得到灰白色無定型結(jié)晶粉末到吲哚苷精品。該方法操作簡單，通過
該方法獲得的吲哚苷適用于藥品、食品和化妝品等領(lǐng)域。 本發(fā)明所述的一種吲哚苷的制備方法，按下列步驟進(jìn)行 a、將大青葉加8倍量的水提取3次，每次0. 5小時，合并提取液，靜置過夜，取上清 液； b、加水稀釋，用中空纖維膜在壓力0. lMPa、室溫進(jìn)行超濾，重復(fù)3次，合并超濾液， 再用納濾膜濃縮； c、將濃縮液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在7(TC繼續(xù)濃縮，加入大孔樹脂中用水和乙醇進(jìn)行梯度 洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇濃縮至流浸膏，用50毫升蒸餾水稀釋后以等量的乙醚萃 取3次，分離出水層； d、加2倍的乙酸乙酯熱回流5-6小時，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮至十分之一體 積，室溫下靜置析晶，濾過，得到吲哚苷粗品； e、加熱水溶解，趁熱濾過，放冷析晶，如此反復(fù)5次，即可得到吲哚苷精品，為灰白
色無定型結(jié)晶粉末；熔點(diǎn)57t:，易溶于水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯。 步驟b中空纖維膜為復(fù)合聚丙烯-30000規(guī)格的中空纖維膜。 步驟c中剃度洗脫為先用水洗脫，再用濃度為20%的乙醇洗脫， 步驟c大孔樹脂優(yōu)選為AB-8、 X-5、匿301、匿130型的大孔樹脂。測定 色譜條件流動相甲醇-水(20 : 80v/v)，進(jìn)樣量10iil，流速1.0ml/min，柱
溫:35"C，檢測波長:230nm ; 溶液的制備分別精密稱取吲哚苷對照品和自制吲哚苷精品5. Omg于25ml容量瓶 中，加水稀釋至刻度，精密量取10ml于50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，即得40 y g/ml的 標(biāo)準(zhǔn)溶液； 結(jié)果通過本發(fā)明所述方法獲得的吲哚苷精品與吲哚苷標(biāo)準(zhǔn)品保留時間一致，且 精品純度可達(dá)98%以上。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例1 稱取大青葉(通過一號篩不能通過三號篩的細(xì)粉)400g，加8倍的水提取3次，每 次0. 5小時，合并提取液，靜置過夜，得上清液8000毫升； 加水32000毫升稀釋，用復(fù)合聚丙烯-30000規(guī)格的中空纖維膜在壓力0. lMPa、室 溫進(jìn)行超濾，共重復(fù)3次，合并超濾液，再用納濾膜濃縮至2000毫升； 用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在7(TC濃縮至流浸膏，加入用梯度乙醇和水處理好的大孔樹脂 AB-8(干重480克)中，先用2000毫升水洗脫，再用1000毫升20%的乙醇洗脫，收集20% 乙醇洗脫液，回收乙醇濃縮至流浸膏，用50毫升蒸餾水稀釋后以等量的乙醚萃取3次，分離 出水層； 加2倍的乙酸乙酯熱回流5小時，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮至十分之一體積，室 溫下靜置析晶，濾過，得到吲哚苷粗品；
加熱水溶解，趁熱濾過，放冷析晶，如此反復(fù)5次，即可得到吲哚苷精品，為灰白色
無定型結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)57t:，易溶于水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯。 實(shí)施例2 稱取大青葉(通過一號篩不能通過三號篩的細(xì)粉)400g，加8倍的水提取3次，每 次0. 5小時，合并提取液，靜置過夜，得上清液8000毫升； 加水32000毫升稀釋，用復(fù)合聚丙烯-30000規(guī)格的中空纖維膜在壓力0. lMPa、室 溫進(jìn)行超濾，共重復(fù)3次，合并超濾液，再用納濾膜濃縮至2000毫升； 將濃縮液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在7(TC繼續(xù)濃縮至200毫升，加入用梯度乙醇和水處理好 的大孔樹脂X-5 (干重480克)中，先用2000毫升水洗脫，再用1000毫升20 %的乙醇洗脫， 收集20%乙醇洗脫液，回收乙醇濃縮至流浸膏，用50毫升蒸餾水稀釋后以等量的乙醚萃取 3次，分離出水層； 加2倍的乙酸乙酯熱回流6小時，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮至十分之一體積，室 溫下靜置析晶，濾過，得到吲哚苷粗品； 加熱水溶解，趁熱濾過，放冷析晶，如此反復(fù)5次，即可得到吲哚苷精品，為灰白色
無定型結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)57t:，易溶于水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯。 實(shí)施例3 稱取大青葉(通過一號篩不能通過三號篩的細(xì)粉)400g，加8倍的水提取3次，每 次0.5小時，合并提取液，靜置過夜，得上清液8000毫升。 加水32000毫升稀釋，用復(fù)合聚丙烯-30000規(guī)格的中空纖維膜在壓力0. lMPa、室 溫進(jìn)行超濾，共重復(fù)3次，合并超濾液，再用納濾膜濃縮至2000毫升； 將濃縮液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在7(TC繼續(xù)濃縮至200毫升，加入用梯度乙醇和水處理好 的大孔樹脂匿301(干重480克)中，先用2000毫升水洗脫，再用1000毫升20%的乙醇洗 脫，收集20%乙醇洗脫液，回收乙醇濃縮至流浸膏，用50毫升蒸餾水稀釋后以等量的乙醚 萃取3次，分離出水層； 加2倍的乙酸乙酯熱回流5.5小時，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮至十分之一體積， 室溫下靜置析晶，濾過，得到吲哚苷粗品； 加熱水溶解，趁熱濾過，放冷析晶，如此反復(fù)5次，得到吲哚苷精品，為灰白色無定
型結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)57t:，易溶于水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯。 實(shí)施例4 稱取大青葉(通過一號篩不能通過三號篩的細(xì)粉)400g，加8倍的水提取3次，每 次0. 5小時，合并提取液，靜置過夜，得上清液8000毫升； 加水32000毫升稀釋，用復(fù)合聚丙烯-30000規(guī)格的中空纖維膜在壓力0. lMPa、室 溫進(jìn)行超濾，共重復(fù)3次，合并超濾液，再用納濾膜濃縮至2000毫升； 將濃縮液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在7(TC繼續(xù)濃縮至200毫升，加入用梯度乙醇和水處理好 的大孔樹脂匿130(干重480克)中，先用2000毫升水洗脫，再用1000毫升20%的乙醇洗 脫，收集20%乙醇洗脫液，回收乙醇濃縮至流浸膏，用50毫升蒸餾水稀釋后以等量的乙醚 萃取3次，分離出水層； 加2倍的乙酸乙酯熱回流6小時，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮至十分之一體積，室 溫下靜置析晶，濾過，得到吲哚苷粗品；
加熱水溶解，趁熱濾過，放冷析晶，如此反復(fù)5次，得到吲哚苷精品，為灰白色無定
型結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)57t:，易溶于水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯。
權(quán)利要求
一種吲哚苷的制備方法，其特征在于按下列步驟進(jìn)行a、將大青葉加8倍量的水提取3次，每次0.5小時，合并提取液，靜置過夜，取上清液；b、加水稀釋，用中空纖維膜在壓力0.1MPa、室溫進(jìn)行超濾，重復(fù)3次，合并超濾液，再用納濾膜濃縮；c、將濃縮液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在70℃繼續(xù)濃縮，加入大孔樹脂中用水和乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇濃縮至流浸膏，用50毫升蒸餾水稀釋后以等量的乙醚萃取3次，分離出水層；d、加2倍的乙酸乙酯熱回流5-6小時，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮至十分之一體積，室溫下靜置析晶，濾過，得到吲哚苷粗品；e、加熱水溶解，趁熱濾過，放冷析晶，反復(fù)5次，即可得到吲哚苷精品，為灰白色無定型結(jié)晶粉末。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述方法，其特征在于步驟b中空纖維膜為復(fù)合聚丙烯-30000規(guī)格的中空纖維膜。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于步驟c中剃度洗脫為先用水洗脫，再用濃度為20%的乙醇洗脫，
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于步驟c大孔樹脂優(yōu)選為AB-8、 X-5、匿301、DM130型的大孔樹脂。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種吲哚苷的制備方法，該方法是從純中藥大青葉中通過水提取，合并提取液，靜置過夜，稀釋，室溫進(jìn)行超濾，納濾膜濃縮，大孔樹脂剃度洗脫，濃縮至流浸膏，稀釋，乙醚萃取，減壓濃縮，室溫下靜置析晶，濾過，得到吲哚苷粗品，加熱水溶解，過濾，放冷析晶，即可得到灰白色無定型結(jié)晶粉末吲哚苷精品。該方法操作簡單，通過該方法獲得的吲哚苷適用于適用于藥品、食品和化妝品等領(lǐng)域。
文檔編號C07H17/02GK101701028SQ200910113500
公開日2010年5月5日 申請日期2009年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日
發(fā)明者于萍, 井立萍, 劉慶華 申請人:新疆奧斯曼生物科技有限公司