專利名稱：一種高純度β-欖香烯原料藥的工業(yè)化生產方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種獲得高純度"-欖香烯原料藥的工業(yè)化生產方法。
背景技術：
欖香烯是莪術油、香茅油中的分離出來的，現(xiàn)己被廣泛的用于治療癌癥，最早應用的抗 癌藥物是用莪術油制成莪術油注射液，該注射液只能用局部瘤體給藥的方式治療子宮頸癌， 其療程較長、給藥操作不便，而對于其它各種癌癥則無法用此注射液進行有效治療。為了解 決莪術油注射液使用局限性的問題，人們從莪術油、香茅油中將具有固定配比成分的欖香烯 分離出來，制成欖香烯注射液。該乳注射液除可局部瘤體給藥、區(qū)域性給藥外，還可靜脈注 射，可治療子宮頸癌、腦瘤、消化道惡性腫瘤、惡性胸腔積液、惡性腹腔積液和白血病等多 種癌癥，臨床應用范圍較廣。近年來的研究發(fā)現(xiàn)一枝黃花揮發(fā)油的主要成分為萜烯類和醇類物質，主要有J-欖香烯， 》-欖香烯，石竹烯，"-金合歡烯，^一杜松烯，異大香葉烯D等。 一枝黃花葉組織的揮發(fā) 油中含有高含量的抗腫瘤功能成分欖香烯類化合物。因此一枝黃花可以作為》-欖香烯新的原 料來源來加以開發(fā)利用。欖香烯發(fā)揮抗腫瘤作用的主要有效成分是P -欖香烯，》-欖香烯的拉丁名為 -Elemenum、英文名為>9- elemene、化學名為(1S,2S,4R)卜甲基-1-乙烯基-2， 4-二異丙 烯基環(huán)己垸，結構式為分子量為204，其含量大小直接關系到治療作用的好壞，因此人們都在尋求制備高純度/ -欖香烯的方法。在專利號為93110091. 7中首次采用精餾柱對莪術油進行精密分餾，但欖香烯 的含量僅為0. 4 1. 5g/mL;專利號為98106848. 0中，對"-欖香烯含量在80%以上的香茅油 下角料采用二次精餾，得到含量為96. 4%"-欖香烯；專利號為02132984. 2公布了一種高純度欖香烯抗癌藥物及其制備方法，"-欖香烯的含量為75% 99. 9%，但按照此方法獲取"-攬香烯的含量不穩(wěn)定；在此基礎上專利號為200310121760. X中對其進行了優(yōu)化，雖然得到了 平均含量在98°/。 99. 9%的A -欖香烯，但其原料為80%-92%"-欖香烯，來源很有限。以上 專利中影響"-欖香烯含量變化的因素較多，》-欖香烯的提取率重現(xiàn)性較差。專利號為 200410064570.3中首次采用超臨界流體萃取-精餾柱聯(lián)用技術對莪術藥材和莪術油中的》-欖香烯進行提取，極大的簡化了實驗操作歩驟，縮短了提取時間，但欖香烯的提取含量僅為 25% 33%，遠達不到原料藥生產的要求，同時超臨界萃取設備儀器操作穩(wěn)定性較差；專利號 為200510049615. 4采用G-排式同歩精餾裝置來分離莪術揮發(fā)油中的"-欖香烯，含量雖然 達到了 93%以上，但由于該裝置結構復雜，并且一個精餾柱出現(xiàn)問題直接會影響到下一個精 餾柱的分離效果，所以工業(yè)化生產會遇到很大問題；專利號為200610129740. 0采用分子蒸餾 法對兩雙版納香茅油次要成分進行提取，得到"-欖香烯的含量為85%-95%，但tJd于分子蒸 餾基礎理論研究和傳質傳熱機理研究的落后大大制約了分子蒸餾技術的推廣，所以不適于工 業(yè)化生產應用。專利號為200610052575. 3以一枝黃花藥材為原料，采用硅膠柱層析的方法得 到"-欖香烯含量最高為97.4%，但批量樣品的生產需要大量硅膠以及有機溶劑，根本不適 應于工業(yè)生產。總結以上提取純化方法，大部分是根據"-欖香烯的沸點不同，采用精餾柱分離，分離 效率低，耗時長，操作條件很不穩(wěn)定，并且得不到高純度的/ -欖香烯。本專利從/ -欖香 烯本身的結構特點出發(fā)，考慮其能夠與硝酸銀進行絡合，從而能夠從揮發(fā)油中有效專一的提 取^-欖香烯，這是本專利的一個重要特點。Ag是IB族元素，其價電子殼層結構為4d^5s1 ，它很容易失去電子而呈現(xiàn)+l價氧化態(tài)， Ag的離子半徑為126pm。目前，對銀離子與碳碳雙鍵的成鍵，普遍采用Dewar-Chatt-Duncanson 模型(DCD模型)。該模型認為銀離子與碳碳雙鍵的成鍵作用中包含相互依賴的兩個方面其 ---，碳碳雙鍵中不飽和電子與銀離子的5s軌道形成一個a配位鍵，這是雙鍵到Ag+的鍵合；其二， Ag+反過來給出一對d電子到碳碳雙鍵的7^反鍵軌道上，形成反饋7I鍵，這是Ag+到雙鍵的鍵合。Ag+絡合萃取法是基于銀離子與不飽和有機物碳碳雙鍵絡合反應的分離方法。在AgNCb 水溶液中，銀離子可與碳烯比小于等于6的、含不同類型碳碳雙鍵且沒有空間位阻的不飽和有 機物在一定條件下進行絡合反應。由于化學反應的專一性，這一方法選擇性強，但適用范圍 小。本專利便是利用這一規(guī)律從油相中對P-欖香烯進行定向絡合萃取。本專利的大致工藝歩驟是以含有"-欖香烯的天然植物為原料，經過不同方法提取出揮 發(fā)油后，得到含量為1%以上的^-欖香烯原料，經過真空精餾除去沸點低的單萜及倍半萜化 合物后，將所得餾分通過大孔吸附樹脂分離法或大孔吸附樹脂結合乙醇萃取法除去含氧萜烯類極性大的化合物，所得油相采用硝酸銀水溶液進行定向萃取，再用正己垸進行反萃取，減 壓濃縮后的樣品采用真空減壓蒸餾得到含量在95.0%' -99.9%的"-欖香烯產品。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術中所存在的高含量"-欖香烯原料來源局限、生產設備 復雜且造價昂貴以及儀器設備提取穩(wěn)定性差等問題，提供了一種以含有"-欖香烯的天然植 物為起始原料，制備高純度^-欖香烯原料藥的新型方法。本發(fā)明重大突破在于從抗癌活性化 合物"-欖香烯本身的結構特點出發(fā)，采用相應的分離純化方法，實現(xiàn)了從低含量"-欖香烯 原料直接制備含量為95. 0% 99. 9%的高純欖香烯，突破了傳統(tǒng)提取純化方法中僅從"-欖 香烯沸點的角度來對其進行分離純化的局限，同時此方法制備工藝簡單，分離純化重現(xiàn)性好， 生產效率明顯提高并且收率較高，適應工業(yè)化生產的需要。本發(fā)明的技術解決方案是采用水蒸氣蒸餾等方法將含有"-欖香烯天然植物根莖葉花籽 中的揮發(fā)油進行提??；所得揮發(fā)油加入精餾塔中進行高真空精餾，收集^-欖香烯含量在 16. 0% 60. 0%的餾分；繼而將所得餾分通過大孔吸附樹脂分離法或大孔吸附樹脂結合乙醇萃 取法，硝酸銀絡合萃取法除去其它雜質；最終在高真空蒸餾下得到含量在95.0% 99.9%的》-欖香烯產品。與以前方法比較，該方法原料來源廣泛，儀器設備簡單，生產操作歩驟簡潔且 收率較高，生產效率明顯提高。一種高純度"-欖香烯原料藥的工業(yè)化生產實現(xiàn)方法包括如下歩驟a. 以含有"-欖香烯天然植物的根莖葉花籽為原料，其主要包括莪術的塊莖或塊根、香茅 草的鮮葉和一枝黃花的根、莖、葉、花和籽；b. 將以上原料采用水蒸氣蒸餾，溶劑萃取，超聲提取或超臨界萃取等方法進行提取，得到 含有"-欖香烯1.0%以上的揮發(fā)油原料；c. 將b所得的原料放入精餾塔釜內進行精餾，控制真空度為1 7mm Hg，塔釜的溫度為 11(TC 124r，.在回流比為1: l時，除去溫度在75。C以下的雜質餾分；控制回流比為l: l 5: l之間，收集溫度在77'C 82'C的餾分，得到含量為16.0% 60.0%的"-欖香烯；d. 將c所得餾分用二倍體積量80% 95%的乙醇水溶液進行稀釋，在重量為20倍的大孔吸 附樹脂上進行柱層析，先用30% 65%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱四個保留體積以上，再用70% 80%的乙醇水沖柱二個保留體積，將70%-80°/。的乙醇水溶液減壓濃縮后所得油相備用；e. 將d歩驟所得油相通過液相色譜分析，若》-欖香烯保留時間以前極性大的成分基本除 凈，則d步驟所得油相進行下一歩操作；若極性大的成分還有少量沒有除凈，則將d歩驟所 得油相通過乙醇萃取法將其中極性大的部分進一歩除凈，用一倍體積量以上的濃度為50% 80%乙醇水溶液萃取三次，收集上層油相；f. 將e歩驟所得油相用等體積濃度為1.0 4.0mol/L硝酸銀的水溶液萃取二次，分液取下層 水相，繼續(xù)用等體積的正己垸萃取三次，將h層正己烷減壓濃縮，得到無色油狀液體，此萃 取過程全程氮氣保護；g. .將f歩驟所得--欖香烯樣品為原料，采用高真空度油泵進行減壓蒸餾或精餾，控制真 空度為l 7mmHg，塔釜溫度為115°C 126°C，收集溫度為63。C 80'C的餾分，得到含量 在95.0% 99.9% (重量百分比)的》-欖香烯。本發(fā)明歩驟a中所用的天然植物原料有莪術的塊莖或塊根，香茅草的葉片， 一枝黃花的根 莖葉花籽屮的一種或幾種等。本發(fā)明歩驟b中采用水蒸氣蒸餾，溶劑萃取，超聲提取和超臨界萃取等方法對中藥材進行 提取后得到揮發(fā)油，其屮所得原料--欖香烯的含量為1% 15%。本發(fā)明歩驟c中所述的在真空條件下，75'C以下餾分包括月桂烯，龍腦，異龍腦，D-檸檬 烯，香茅烷，香茅醛，苧烯，香葉醇，異胡薄荷醇，芳樟醇，蒎烯等小分子單萜類化合物。本發(fā)明歩驟c中回流是指位于加熱釜中的餾分受熱氣化后上升至冷凝裝置遇冷液化返回 至加熱釜中形成的。


圖l是本專利實施的工藝流程圖，其中a是不同天然植物來源的藥材；b是揮發(fā)油提取裝 置；C是油水分離器；d和i是真空精餾裝置；e是大孔吸附樹脂分離裝置；f是乙醇萃取裝置； g足硝酸銀萃取裝置；h是正己烷萃取裝置；j是真空蒸餾裝置；k是高純終產品；1是溶解在 乙醇中的油相部分；m是回收乙醇裝置；n是硝酸銀萃取后的上層油相部分；O是回收正己烷 的裝置；(1)是指采用真空精餾的方法；(2)是指采用真空蒸餾的方法；(1)與(2)兩種方 法平行，采用兩者其一均可達到要求。
具體實施例方式
實施例1:a、 取天然植物藥莪術塊莖為原料；b、 將藥材莪術通過水蒸氣蒸餾得到莪術揮發(fā)油，其中5-欖香烯的含量為6.0%;c、 將b所得的原料放入精餾塔釜內進行精餾，控制真空度為5 6mm Hg，塔釜的溫度為 123°C 124°C，在回流比為l: l時，除去溫度在75'C以下的雜質餾分；控制回流比為3: 1， 收集溫度在77。C 82。C的餾分，得到含量為30.0°/。的--欖香烯。d. 將c歩驟所得30.0。/。的yS-欖香烯用二倍體積量85%的乙醇水溶液進行稀釋，在大孔吸 附樹脂上進行柱層析，先用60%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱四個保留體積以上，再用70%的乙醇 水沖柱二個保留體積，將70%的乙醇水溶液減壓濃縮后進液相分析，結果顯示"-欖香烯保 留時問以前極件大的成分基本除凈。e. 將d步驟所得油相用等體積濃度為L8mol/L硝酸銀的水溶液萃取三次，分液取卜'層水相， 繼續(xù)用等體積的正己烷萃収三次，將上層TT.己烷減壓濃縮，得到無色油狀"-欖香烯樣品。f. 將e步驟所得"-欖香烯樣品為原料，采用高真空度油泵進行減壓蒸餾或精餾，控制真空 度為5 6mmHg，塔釜溫度為125'C 126'C，收集溫度為67'C 68'C的餾分，得到含量在 96.3% (重量百分比)的^-欖香烯。實施例2:a、 取天然植物爪哇香茅草鮮葉為原料；b、 將藥材爪哇香茅草通過水蒸氣蒸餾得到爪哇揮發(fā)油，其中"-欖香烯的含量為5.0%;c、 將b所得的原料放入精餾塔釜內進行精餾，控制真空度為2~3mm Hg，塔釜的溫度為 116°C 117°C，在回流比為l: l時，除去溫度在75'C以下的雜質餾分；控制回流比為3: 1， 收集溫度在78。C 8rC的餾分，得到含量為16.0%的》-欖香烯。d. 將c步驟所得16.0%的f-欖香烯用二倍體積量80%的乙醇水溶液進行稀釋，在重量為 20倍的大孔吸附樹脂上進行柱層析，先用60%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱四個保留體積以上，再 用75%的乙醇水沖柱二個保留體積，將75%的乙醇水溶液減壓濃縮后進液相分析，結果顯示 "-欖香烯保留時間以前極性大的成分基本除凈。e. 將d歩驟所得油相用等體積濃度為1.5md/L硝酸銀的水溶液萃取三次，分液取下層水相， 繼續(xù)用等體積的正己烷萃取三次，將上層正己烷減壓濃縮，得到無色油狀的A-欖香烯樣品。f. 將e歩驟所得"-欖香烯樣品為原料，采用高真空度油泵進行減壓蒸餾或精餾，控制真空 度為2 3mmHg，塔釜溫度為117。C 118。C，收集溫度為64。C 65。C的餾分，得到含量在 95.5% (重量百分比)的》-欖香烯。實施例3:a、 取天然植物一枝黃花鮮葉為原料；b、 將一枝黃花葉片通過超臨界萃取得到一枝黃花揮發(fā)油，其屮P-欖香烯的含量為14.3%;c、 將b所得的原料放入精餾塔釜內進行精餾，控制真空度為6 7mm Hg，塔釜的溫度為 123 124°C，在回流比為1: 1時，除去溫度在75。C以下的雜質餾分；控制回流比為4: 1，收集溫度在79" 82"C的餾分，得到含量為40.6%的W-欖香烯。d. 將c歩驟所得40.6%的"-欖香烯用二倍體積量90%的乙醇水溶液進行稀釋，在重量為 20倍的大孔吸附樹脂上進行柱層析，先用60%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱四個保留體積以h,再 用75%的乙醇水沖柱二個保留體積，將75%的乙醇水溶液減壓濃縮后進液相分析，結果顯示 "-欖香烯保留時間以前極性大的成分仍有少量雜質未除凈。e. 將d歩驟所得油相用三倍量72。/。的乙醇水萃取三次，所得上層油相減JK濃縮后進液相分 析，發(fā)現(xiàn)保留時間在W-欖香烯以前的成分基本除凈。f. 將e歩驟所得油相用等體積濃度為2.0mol/L硝酸銀的水溶液萃取二次，分液取F層水相， 繼續(xù)用等體積的正己烷萃取三次，將上層正己烷減壓濃縮，得到無色油狀的"-欖香烯樣品。g. 將f歩驟所得W-欖香烯樣品為原料，采用高真空度油泵進行減壓蒸餾或精餾，控制真 空度為2 3mmHg，塔釜溫度為117°C 118°C，收集溫度為64。C 65。C的餾分，得到含量 在99.8% (重量百分比)的"-欖香烯。實施例4:a、 取天然植物藥莪術塊根為原料；b、 將藥材莪術通過水蒸氣蒸餾得到莪術揮發(fā)油，其中^-欖香烯的含量為7.5%;c、 將b所得的原料放入精餾塔釜內進行精鎦，控制真空度為5 6mm Hg，塔釜的溫度為 123 124°C，在回流比為l: 1時，除去溫度在75。C以下的雜質餾分；控制回流比為3: 1， 收集溫度在77。C 8(TC的餾分，得到含量為25.7%的"-欖香烯。d、 將c歩驟所得25.7。/。的"-欖香烯用二倍體積量85%的乙醇水溶液進行稀釋，在重量為 20倍的大孔吸附樹脂上進行柱層析，先用60%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱四個保留體積以上，再 用70%的乙醇水沖柱二個保留體積，將70%的乙醇水溶液減壓濃縮后進液相分析，結果顯/孓-^-欖香烯保留時間以前極性大的成分仍有少量雜質未除凈。e、 將d歩驟所得油相用五倍量70°/。的乙醇水萃取三次，所得上層油相減壓濃縮后進液相分 析，發(fā)現(xiàn)保留時間在"-欖香烯以前的成分基本除凈。f、 將e歩驟所得油相用等體積濃度為1.Omol/L硝酸銀的水溶液萃取三次，分液取下層水相， 繼續(xù)用等體枳的.'F.己烷萃取三次，將上層正己烷減壓濃縮，得到無色油狀的"-欖香烯樣品。g、 將f歩驟所得"-欖香烯樣品為原料，采用高真空度油泵進行減壓蒸餾或精餾，控制真 空度為4 5mmHg，塔釜溫度為120°C 122°C，收集溫度為66'C 67。C的餾分，得到含量 在98.1% (重量百分比)的"-欖香烯。實施例5:a、 取天然植物一枝黃花鮮葉為原料；b、 將一枝黃花葉片通過超臨界萃取得到一枝黃花揮發(fā)油，其中--欖香烯的含量為14.3%;c、 將b歩驟所得14.3。/o的--欖香烯用二倍體積量90%的乙醇水溶液進行稀釋，在重量為 20倍的大孔吸附樹脂上進行柱層析，先用50%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱四個保留體積以上，再 用65%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱兩個保留體積，最后用70%的乙醇水沖柱二個保留體積，將70% 的乙醇水溶液減/li濃縮后進液相分析，結果顯示"-欖香烯保留時間以前極性大的成分仍有少 量雜質未除凈。d、 將c歩驟所得油相用五倍量70%的乙醇水萃取二次，所得上層油相減壓濃縮后進液相分 析，發(fā)現(xiàn)保留時間在f-欖香烯以前的成分基本除凈。f. 將e歩驟所得油相用等體積濃度為2.0mol/L硝酸銀的水溶液萃取三次，分液取下層水相， 繼續(xù)用等體積的正己垸萃取三次，將上層正己烷減壓濃縮，得到無色油狀的"-欖香烯樣品。g. 將f歩驟所得"-欖香烯樣品為原料，采用卨真空度油泵進行減壓蒸餾或精餾，控制真 空度為5 6mmHg，塔釜溫度為124。C 125。C，收集溫度為68。C 69。C的餾分，得到含量 在98.4% (重量百分比)的--欖香烯。實施例6:a、 取天然植物藥莪術塊莖為原料；b、 將藥材莪術通過有機溶劑萃取得到莪術揮發(fā)油，其中^-欖香烯的含量為8.2%;c、 將b歩驟所得8.2。/。的"-欖香烯用二倍體積量95%的乙醇水溶液進行稀釋，在重量為 20倍的大孔吸附樹脂上進行柱層析，先用45%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱四個保留體積以上，再 用60%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱兩個保留體積，最后用75%的乙醇水沖柱二個保留體積，將75% 的乙醇水溶液減壓濃縮后進液相分析，結果顯示"-欖香烯保留時間以前極性大的成分仍有少 量雜質未除凈。d、 將c歩驟所得油相用六倍量72%的乙醇水萃取三次，所得上層油相減壓濃縮后進液相分 析，發(fā)現(xiàn)保留時間在"-欖香烯以前的成分基本除凈。f. 將e歩驟所得油相用等體積濃度為1.5mol/L硝酸銀的水溶液萃取三次，分液取卜』層水相， 繼續(xù)用等體積的正己烷萃取三次，將上層正己烷減壓濃縮，得到無色油狀的"-欖香烯樣品。g. 將f歩驟所得》-欖香烯樣品為原料，采用高真空度油泵進行減壓蒸餾或精餾，控制真 空度為4 5mmHg，塔釜溫度為122。C 123。C，收集溫度為68。C 69。C的餾分，得到含量 在96.5% (重量百分比)的j9-欖香烯。實施例7:以上述實施例1 6制得的^欖香烯為原料，進行A-欖香烯脂質體制備采用乙醇注入法制 備脂質體，(1)稱取膽固醇2.0g，大豆卵磷脂5.0g及yff-欖香烯原料藥0.75g于小燒杯中后加入適 量無水乙醇攪拌使其溶解形成油相。(2)量取100ml PBS緩沖液置于三頸瓶中，在水浴溫度 50°C，轉速30 r/min磁力攪拌下用注射器將油相緩慢注入水相中，然后抽真空10min，即得含 藥7.5mg/m啲產品?；?3)在上述--欖香烯脂質體混懸液中加入25%海藻糖，經冷凍千燥即得f 欖香烯脂質體粉末，臨用前用水稀釋即可迅速溶解。該制備方法得到的脂質體粒徑約為 100nm，可用于口服或注射給藥。實施例8:以上述實施例1 6制得的^欖香烯為原料，進行^欖香烯乳劑制備(1)稱取大豆油180g， 蛋黃磷脂15g， TPGS35g，々-欖香烯原料藥10g置于水浴中加熱攪拌熔融，保持溫度7(TC，作 為油相；(2)稱取Poloxamer188 3.0g及聚乙二醇400 50g加入到適量注射用水中，加熱攪拌使 其溶解，保持溫度7(TC，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成初乳；(3) 初乳經700bar高壓乳勻2次，迅速冷卻固化即可得到10mg/mL的^欖香烯乳液，該乳劑的粒度 小于100nm，可用于口服或注射給藥。實施例9:以上述實施例l 6制得的^-欖香烯為原料，進行注射用^欖香烯微乳劑制備(1)稱取中 鏈油(MCT)100g,大豆磷脂15g，油酸2.5g， A欖香烯原料藥8.5g置于水浴中加熱攪拌熔融， 保持溫度75。C，作為油相；(2)稱取Poloxamerl88 3.0g，吐溫-80 2.0g及甘油85g加入到適量注 射用水中，加熱攪拌使其溶解，保持溫度75。C，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼 續(xù)攪拌，即形成y5-欖香烯微乳；或(3)在上述/ -欖香烯微乳液中加入20%葡萄糖，經冷凍千燥 即得注射用A欖香烯微乳固體粉末，臨用前用水稀釋即可迅速溶解。實施例10:以上述實施例1~6制得的/ -欖香烯為原料，進行y -欖香烯納米脂質載體制備(1)稱取單硬脂酸甘油酯62.5g，大豆油25.5g， HS-15 75g，油酸l.Og，々-欖香烯5.0g置于水浴中加熱 攪拌熔融，保持溫度75。C，作為油相；(2)稱取poloxamerl88 5.0g加入到適量注射用水中， 加熱攪拌使其溶解，保持溫度75。C，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成初乳；(3)初乳經1200bar高壓乳勻6次，迅速冷卻固化即可得到,欖香烯納米脂質載體混 懸液；或(4)在上述^欖香烯納米脂質載體混懸液中加入15%甘露醇，經噴霧干燥即得注射用 ^欖香烯納米脂質載體固體粉末，臨用前用水稀釋即可迅速溶解。噴霧干燥條件入口溫度 150°C，出口溫度85'C，風量100%，流速0.01%，產率37.8%。該制劑可用于口服或注射給 藥，具有一定的緩釋效應。實施例11:以上述實施例l 6制得的^-欖香烯為原料，進行f欖香烯固體脂質納米粒制備(1)稱取 硬脂酸95.0g,大豆磷脂25g,油酸3.0g， ；8-欖香烯原料藥7.5g，置于水浴中加熱攪拌熔融，保 持溫度85。C，作為油相；(2)稱取Poloxamer188 5.0g， TPGS 18g加入到適量注射用水中，加 熱攪拌使其溶解，保持溫度85t:，作為水相。在攪拌下將水相滴入油相中，繼續(xù)攪拌，形成 初乳；(3)初乳經800bar高壓乳勻7次，迅速冷卻固化即可得到/ -欖香烯固體脂質納米?；鞈?液或(4)在上述^欖香烯固體脂質納米?；鞈乙褐屑尤雔5%庶糖，經真空冷凍千燥即得注射 用A欖香烯固體脂質納米粒固體粉末，臨用前用水稀釋即可迅速溶解。該制劑可用于口服或 注射給藥，具有一定的緩釋效應。實施例12: -以上述實施例l 6制得的y -欖香烯為原料，進行^-欖香烯自乳化軟膠囊劑制備稱取yS-欖 香烯原料藥10.0g加入丙二醇30.0g， 4(TC超聲使其溶解后，加入油酸乙酯25.0g，吐溫-85 45.0g攪拌均勻后制成軟膠囊。實施例13:以上述實施例i 6制得的y -欖香烯為原料，進行p-欖香烯透皮貼劑制備稱取/ -欖香烯5.0g，復合促滲劑氮酮15g，薄荷腦30g，丙二醇50g作為潛溶劑，研磨均勻后，加入丙烯酸酯 共聚物至100%，研磨均勻后涂布在80ym厚的PVC膜上，7(TC干燥后成透明固體分散薄片。實施例14:以卜』述實施例1 6制得的^欖香烯為原料，進行/Mt香烯脂質體噴霧劑制備稱取大豆卵 磷脂37.5g，膽固醇2.5g，油酸0.3g，氮酮0.01g，維生素E0.03g，薄荷油0.3g， / -欖香烯8.0g 加入40mL乙醇，加熱攪拌至完全溶解，將乙醇藥物溶液加入高速攪拌(3000r/min)的160mL水 中，在氮氣保護的條件下持續(xù)攪拌30min后，經700bar高壓乳勻機勻質5次，即得到^欖香烯脂質體溶液。用干燥的G6垂熔玻璃濾器過濾，分裝至噴霧劑瓶中，即得"-欖香烯脂質體噴霧劑。實施例15:以上述實施例1 6制得的&欖香烯為原料，進行y -欖香烯栓劑制備稱取硬脂酸18g和半合成脂肪酸酯25g，在65。C水浴中加熱熔化。稱取y5-欖香烯9.5g分三次加入熔化的基質中，不 斷攪拌使藥物均勻分散，待此混合物呈粘稠狀態(tài)時，灌入已涂有潤滑劑的模型內，冷卻凝固 后削去?？谏弦绯霾糠郑撃?，即得。實施例16:以上述實施例1 6制得的A欖香烯為原料，進行A-欖香烯納米微球制備稱取A欖香烯5.0g 加入到濃度為7%的聚乳酸或乳酸-羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中，超聲分散制成混懸液， 然后將混懸液緩慢滴加到濃度為2.5%的聚乙二醇水溶液中，室溫下2h使二氯甲垸揮發(fā)完全， 通過真空抽濾收集微球，蒸餾水洗滌5次，于室溫下真空千燥48h后即得"-欖香烯微球半成品， 與其他溶劑復配后即可制成注射劑或植入劑。實施例17:以上述實施例l 6制得的々-欖香烯為原料，進行^欖香烯納米脂質體滴鼻劑制備稱取大豆卵磷脂2.0g，膽固醇1.0g，膽酸鈉0.01g及A欖香烯0.85g溶于40mL氯仿溶液中，65。C減壓蒸 發(fā)形成類脂膜，加入40mL的磷酸緩沖液震蕩溶解，調節(jié)pH值為6.0，加入0. lg硬脂酸胺，0. 05g 吐溫-80，得到;5-欖香烯脂質體分散液，經800bar高壓乳勻機勻質7次后，得到粒徑小于100nm 的脂質體混懸液，向其中加入0.8g磷脂酰甘油后即得到鼻腔給藥制劑。
權利要求
1、一種高純度β-欖香烯原料藥的工業(yè)化生產方法，其特征在于將含有β-欖香烯天然植物的根莖葉花籽進行揮發(fā)油的提取，經過真空精餾后得到較高純度的β-欖香烯，繼而依次采用大孔吸附樹脂分離法或大孔吸附樹脂結合乙醇萃取法，硝酸銀絡合萃取法除去其它雜質，最終通過減壓蒸餾或精餾后得到含量在95.0％～99.9％的β-欖香烯原料藥。
2、 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于實現(xiàn)方法包含以下歩驟a. 以含有"-欖香烯天然植物的根莖葉花籽為原料，其主要包括莪術的塊莖或塊根、香茅 草的鮮葉和一枝黃花的根、莖、葉、花和籽；b. 將以上天然植物的特定部位采用水蒸氣蒸餾，溶劑萃取，超聲提取或超臨界萃取等方法 進行提取，得到含有"-欖香烯1.0%以上(重量百分比)的揮發(fā)油原料；c. 將b所得的原料放入精密分餾塔塔釜內進行精餾，控制真空度為1 7mmHg，塔釜的溫 度為11(TC 124。C，在回流比為l: l時，除去溫度在75。C以下的雜質餾分；控制回流比為 1: 1 5:之間，收集溫度在77。C 82。C的餾分，得到含量為16.0% 60.0% (重量百分比) 的W-欖香烯；d. 將c所得餾分用二倍體積量80% 95%的乙醇水溶液進行稀釋，在重量為20倍的大孔吸 附樹脂上進行柱層析，先用30% 65%的乙醇水溶液連續(xù)沖柱四個保留體積以上，再用70% 80%的乙醇水沖柱二個保留體積，將70%-80%的乙醇水溶液減壓濃縮后所得油相備用；e. 將d步驟所得油相通過液相色譜分析，若"-欖香烯保留時間以前極性大的成分基本除 凈，則d歩驟所得油相進行下一歩操作；若極性大的成分還有少量沒有除凈，則將d歩驟所 得油相通過乙醇萃取法將其中極性大的部分進一歩除凈，用二倍體積量以上的濃度為50% 80%乙醇水溶液萃取三次，收集上層油相；f. 將e歩驟所得油相用等體積濃度為1.0 4.0mol/L硝酸銀的水溶液萃取三次，分液取下層 水相，繼續(xù)用等體積的TK己烷萃取三次，將上層正己烷減壓濃縮，得到無色油狀液體，此萃 取過程全程氮氣保護；g. .將f步驟所得f-欖香烯樣品為原料，采用高真空度油泵進行減壓蒸餾或精餾，控制真 空度為1 7mm Hg，塔釜溫度為115。C 126。C，收集溫度為63。C 80。C的餾分，得到含量 在95.0% 99.9% (重量百分比)的W-欖香烯。
3、 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于含有》-欖香烯天然植物的根莖葉花籽原料 包括莪術的塊莖或塊根、香茅草的葉片和一枝黃花的根、莖、葉、花 和籽；精餾以及減 壓蒸餾操作中的真空度均為1 7mmHg。
4、 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于 歩驟b采用不同揮發(fā)油提取方法得到jS-欖香烯的含量在1.0%以上，即所有含量在1%以 上的"-欖香烯的樣品均可采用該方法得到卨純f-欖香烯產品；歩驟C中精餾塔以3X3mm不銹鋼網巻為填料；回流比控制在l: 1 5: 1;塔釜的溫度范圍為110'C 124'C;精餾收集餾分的溫度為77。C 82。C;精餾所得到的"-欖香烯含量 為16.0% 60.0%之間。
5、 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于 歩驟d中萃取所用的方法是大孔吸附樹脂分離法；所用大孔吸附樹脂的型弓為n本三菱化學的Diaion HP系列、美國羅門哈斯的Amberlite XAD系列、美國Diamond Alkali公司 的DuolitePSP、 DuoliteS-30、德國的Lewapol G-7318、捷克的SP-U2、中國天津試劑二 廠的GDX系列以及山東魯抗立科藥物化學有限公司的CAD系列和DM系列等；裝柱時 采用20倍油相重量的大孔吸附樹脂來填裝；上樣前采用二倍體積量80% 95%的乙醇水 對油相進行稀釋；除去極性大的雜質成分采用30% 65°/。的乙醇沖柱四個保留休積；所得 油相用70% 80%的乙醇水沖柱二個保留體積濃縮既得； 歩驟e中高效液相的色譜條件色譜柱KromasilC18 5um 200x4.6um 流動相乙腈水冰醋酸=82: 18: 0.01流速1.0ml/min 檢測波長210nm 柱溫30°C 。
6、 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟f中萃取所用方法為硝酸銀水溶液絡合萃取和正己烷反萃取方法相結合；萃取所用硝酸銀的濃度為1.0 4.0mol/L,并且萃取過程全程氮氣保護。這里所用的正己烷可以換成 石油醚等極性小的溶劑。
7、 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟g是在f步驟所得樣品基礎上，經過減壓蒸餾或精餾操作來純化；蒸餾塔或精餾塔的 溫度為115°C 126°C;收集熘分的溫度為63。C 8(TC。
8、 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在丁各歩驟萃取方法中均采用三次 萃取法；最終制備所得"-欖香烯的含量為95.0% 99.9%。
9、 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于c歩驟的操作可以省去，d、 e和f歩驟的操 作順序可以倒置，最終在g歩驟的處理下，同樣可以得到95.0% 99.9%的,欖香烯產品。
10、 根據權利要求8或9所述的制備方法，制得的原料可與藥學上可以接受的輔料制成U服 給藥常規(guī)以及緩、控釋制劑，非胃腸道給藥的常規(guī)或緩控釋、靶向制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種從莪術(莪術的塊根或塊莖)、香茅草(香茅草鮮葉)、一枝黃花(一枝黃花的根莖葉花籽)等含有β-欖香烯的天然植物制備高純度β-欖香烯的方法，可以提高從起始原料到高純度β-欖香烯的生產效率，降低生產成本。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比主要不同點在于將以上天然植物的根莖葉花籽為原料，采用不同揮發(fā)油的提取方法得到天然植物特定部位的揮發(fā)油，然后采用精餾的方法對其揮發(fā)油進行精餾，得到含量較高的β-欖香烯；依次通過大孔吸附樹脂分離法或大孔吸附樹脂結合乙醇萃取法，硝酸銀絡合萃取法去除雜質成分，最后經過減壓蒸餾或精餾得到含量在95.0％～99.9％的β-欖香烯，該原料藥不僅可以制成口服給藥制劑乳口服液和自乳化/自微乳化膠囊或軟膠囊劑等；而且可以做成非腸道給藥制劑脂質體、載藥乳注射液、水針劑、透皮吸收劑、肺部噴霧制劑、以及栓劑等。本發(fā)明實驗方法設計新穎；儀器設備簡單；操作步驟簡潔；操作時間明顯縮短，提高了生產效率并且收率較高，適合工業(yè)化生產。
文檔編號C07C13/19GK101402544SQ200810228769
公開日2009年4月8日 申請日期2008年11月14日 優(yōu)先權日2008年11月14日
發(fā)明者丹 劉, 莉 周, 孫敏鴿, 紅 寧, 李淑斌 申請人:沈陽萬愛普利德醫(yī)藥科技有限公司