專利名稱：：丙型肝炎病毒蛋白酶抑制劑的制作方法丙型肝炎病毒蛋白酶抑制劑
背景技術(shù)：
：丙型肝炎病毒(HCV)是一種(+)有義的單鏈RNA病毒((+)-sensesingle-strandedRNA),也是主要引起非甲型、非乙型肝炎的致病因子。它涉及到肝硬化和肝細(xì)胞癌。HCV感染是威脅人類健康的問題。例如參見WO05/007681;WO89/04669;EP381216;Alberti等人的J.Hepatology,31(增干ij1)，17-24(1999);Alter,J.Hepatology,31(增刊1)，88-91(1999);以及Lavanchy,J.ViralHepatitis,6,35-47(1999)。HCV包括核殼蛋白(C),膜蛋白(E1和E2)和一些非結(jié)構(gòu)蛋白(NS2，NS3,NS4a,NS5a和NS5b)。NS3蛋白具有絲氨酸蛋白酶活性，被認(rèn)為是病毒復(fù)制所必需。這一點(diǎn)通過黃熱病毒NS3蛋白酶的變異降低病毒感染性、以及HCVNS3蛋白酶活性位點(diǎn)的變異完全抑制了黑猩猩模型中的HCV感染這些現(xiàn)象得以證明。例如參見Chamber等人的Proc.Natl.Acad.Sci.USA87，8898-8卯2(1990)以及Rice等人的J.Virol.74(4)2046-51(2000)。另夕卜，發(fā)現(xiàn)所述HCVNS3絲氨酸蛋白酶能夠在NS3/NS4a，NS4a/NS4b,NS4b/NS5a,NS5a/NS5b連接點(diǎn)促進(jìn)蛋白質(zhì)水解。因此認(rèn)為HCVNS3絲氨酸蛋白酶對(duì)于病毒復(fù)制過程中四種病毒蛋白質(zhì)的產(chǎn)生有關(guān)。例如參見US2003/0207861。因此，所述HCVNS3絲氨酸蛋白酶是用來治療HCV感染的一個(gè)吸引人的目標(biāo)?？赡艿腘S3HCV蛋白酶抑制劑可以在以下文獻(xiàn)中找到WO02/18369，WO00/09558，WO00/09543，WO99/64442,WO99/07733，WO99/07734，WO99/50230，WO98/46630，WO98/17679，WO97/43310,US5,990,276，Dunsdon等人的，Biorg.Med.Chem.Lett.10,1571-1579(2000);Llinas-Brunet等人的Biorg.Med.Chem.Lett.10,2267-2270(2000);以及S.LaPlante等人的Biorg.Med.Chem.Lett.10，2271-2274(2000)。目前僅有的抗-HCV治療劑是干擾素-a,PEG化的(pegylated)干擾素-a和干擾素-a/病毒唑組合。但是，發(fā)現(xiàn)干擾素-a或干擾素-a/病毒唑組合的持續(xù)響應(yīng)率<50%，而且病人會(huì)很大程度地受到這些治療劑的副反應(yīng)影響。例如參見Walker,DDT，4，518-529(1999);Weiland,FEMSMicrobial.Rev.,14,279-288(1994);以及WO02/18369。因此，人們?nèi)匀恍枰_發(fā)更有效、更易接受的抗HCV藥物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是基于以下出人意料的發(fā)現(xiàn)，即某些吡咯烷化合物能夠有效地抑制HCV蛋白酶。一方面，本發(fā)明的特征是式(I)所示的吡咯垸化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式(I)其中R,,R2，R3,R4和Rs各自獨(dú)立地是H,C卜6垸基，C,-6烷氧基，<:3-1()環(huán)垸基，CM0雜環(huán)烷基，C6—,q芳基或C3,雜芳基；或者R2和R3以及與它們連接的碳原子一起形成Cwo環(huán)烷基和C,.,o雜環(huán)垸基，所述基團(tuán)可任選地被選自以下的一種或多種取代基所取代鹵素，硝基，氰基，C,-6烷基，C卜6垸氧基，C2-6烯基，C2—6炔基，C6.,。芳基和C3.h)雜芳基；U是-O-，-NH-,-C(O)NH-,.NHSO-或-NHS02-;X是-O-,-S-，-NH-或-OCH2-;Y是T",其中V是-CH-或-N-;A,和八2各自獨(dú)立地選自Cwo環(huán)烷基，CM0雜環(huán)垸基，C6—|()芳基和C3—,o雜芳基，這些基團(tuán)各自任選地被以下基團(tuán)取代鹵素，硝基，氰基，a6垸基，C,.6烷氧基，C2-6烯基，C2-6炔基，C6-,q芳基或Cw。雜芳基，或者任選地與另外的C3-,o環(huán)垸基，d.,o雜環(huán)烷基，C6-,q芳基和C3-,0雜芳基稠合，這些另外的基團(tuán)任選地被以下基團(tuán)取代鹵素，硝基，氰基，C,-6垸基，C,-6垸氧基，(:2.6烯基，02.6炔基，C6-,q芳基或CwQ雜芳基；Z是-C(O)，-O-C(O)-,-NH-C(O)-，-O-C(S)陽，-NH-C(S)-,-O-C(NH)-或-NH-C(NH)-。參見式(I)，上述化合物可具有一種或多種以下特征R,是環(huán)丙基；&和R3以及與之相連的碳原子一起形成環(huán)丙基(可以被乙烯基取代)；R4是CL6烷基；R5是環(huán)戊基；X是-O-;U是-NHS02-;Z是-OC(O)-;Af2是苯基；V是-N-;Y選自，這些基團(tuán)各自任選地被鹵素，C,—6烷基或Cw垸氧基取代。另外，上述化合物可具有以下顯示的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)-.YI,,、、、、、、xR3R2術(shù)語"烷基"表示包含l-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴基。烷基的例子包括但不限于甲基，乙基，正丙基異丙基正丁基異丁基和叔丁基。術(shù)語"烯基"表示包含2-10個(gè)碳原子以及一個(gè)或多個(gè)雙鍵的直鏈或支鏈烴基。烯基的例子包括但不限于乙烯基，丙烯基，烯丙基和1,4-丁二烯基。術(shù)語"炔基"表示包含2-IO個(gè)碳原子以及一個(gè)或多個(gè)三鍵的直鏈或支鏈烴基。炔基的例子包括但不限于乙炔基，l-丙炔基,l-丁炔基和2-丁炔基，以及l(fā)-甲基-2-丁炔基。術(shù)語"烷氧基"表示-O-烷基基團(tuán)。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基和叔丁氧基。術(shù)語"環(huán)烷基"表示飽和的環(huán)狀烴基部分，例如環(huán)己基。術(shù)語"環(huán)烯基"表示包含至少一個(gè)雙鍵的非芳香類環(huán)狀烴基部分，例如環(huán)己烯基。術(shù)語"雜環(huán)烷基"表示包含至少一個(gè)環(huán)雜原子(例如N，o或S)的飽和環(huán)狀部分，例如4-四氫吡喃基。術(shù)語"雜環(huán)烯基"表示包含至少一個(gè)環(huán)雜原子(例如N，O或S)以及至少一個(gè)環(huán)雙鍵的非芳香性環(huán)狀部分，例如吡喃基。術(shù)語"芳基"表示包含一個(gè)或多個(gè)芳環(huán)的烴基部分。芳基部分的例子包括苯基，亞苯基，萘基，亞萘基，芘基，蒽基和菲基。術(shù)語"雜芳基"表示包含一個(gè)或多個(gè)具有至少一個(gè)雜原子(例如N，O或S)的芳環(huán)的部分。雜芳基部分的例子包括呋喃基，亞呋喃基，芴基，吡咯基，噻吩基，噁唑基，咪唑基，噻唑基，吡啶基，嘧啶基，喹唑啉基，喹啉基，異喹啉基和吲哚基。除非另外說明，本文所述的烷基,烯基,炔基，環(huán)垸基，環(huán)烯基，雜環(huán)垸基，雜環(huán)烯基，芳基和雜芳基同時(shí)包括取代的和未取代的部分。環(huán)垸基，環(huán)烯基,雜環(huán)垸基，雜環(huán)烯基，芳基和雜芳基上可能的取代基包括，但不限于C,-Q。垸基,C2-d。烯基，C2-Qo炔基，C3-C2Q環(huán)垸基，C3-C2Q環(huán)烯基，C「C2Q雜環(huán)烷基，C「C20雜環(huán)烯基，d-C,o烷氧基，芳基，芳氧基，雜芳基，雜芳氧基，氨基，C,-C,。垸基氨基，C,-C2。二垸基氨基，芳基氨基，二芳基氨基，Q-Qc垸基氨磺?；蓟被酋；?，CVQc烷基亞氨基，芳基亞氨基，C,-dQ烷基磺基亞氨基，芳基磺基亞氨基，羥基，鹵素，巰基，C,-C,。烷硫基，芳硫基，C,-Q。烷基磺酰基，芳基磺?；?，?；被?，氨酰基，氨基硫代?；呋?，胍基，脲基，氰基，硝基，亞硝基，疊氮基，?；?，硫代酰基，酰氧基，羧基和羧酸酯基。另一方面，烷基,烯基或炔基上可能的取代基包括上述所有的取代基，但是C,-Q。烷基除外。環(huán)烷基,環(huán)烯基，雜環(huán)烷基，雜環(huán)烯基，芳基和雜芳基也可互相稠合。上述式(I)的化合物包括這些化合物本身，如果可能的話，還可包括這些化合物的鹽(如藥學(xué)上可接受的鹽)、前藥和溶劑合物。例如，鹽可以是陰離子與式(1)的化合物上帶正電荷的基團(tuán)(例如氨)形成的鹽。合適的陰離子包括氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、檸檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、乙酸根、蘋果酸根、甲苯磺酸根、酒石酸根、富馬酸根、谷氨酸根、葡糖醛酸根、乳酸根、戊二酸根和馬來酸根。類似地，可以由陽離子與式(I)的化合物上的帶負(fù)電荷的基團(tuán)(例如羧酸根)形成鹽。合適的陽離子包括鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子和銨離子，例如四甲基銨離子。式(I)的化合物還可包括含有季氮原子的鹽。前藥的例子包括酯和其它藥學(xué)上可接受的衍生物，它們?cè)诮o予目標(biāo)的時(shí)候，能夠得到式(I)的活性化合物。溶劑合物表示式(I)的活性化合物與藥學(xué)上可接受的溶劑形成的絡(luò)合物。藥學(xué)上可接受的溶劑的例子包括水、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。所述化合物還可包含非芳香性的雙鍵和不對(duì)稱中心。因此，它們可以是外消旋體和外消旋混合物，單獨(dú)的對(duì)映異構(gòu)體，獨(dú)立的非對(duì)映異構(gòu)體，非對(duì)映異構(gòu)體混合物，互變異構(gòu)體以及順式或反式-異構(gòu)形式。所有的這些異構(gòu)形式都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。下面列出了本發(fā)明的38種示例性的化合物:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>。？a々》？化合物13。？a化合物14As《化合物15巧《化合物16o、a々Z化合物17^》e化合物18化合物19化合物20馬》e化合物21化合物22。？a化合物23As力化合物24Cl/、0。、《化合物25化合物26^》？化合物27<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>0。5△々o《化合物400—化合物41化合物42oY、。NN0。4△化合物43oY'PNNO。^△4《化合物44另一方面，本發(fā)明涉及一種治療HCV感染的方法，該方法包括給予被HCV感染的病人有效量的一種或多種式(I)的吡咯烷化合物。在另一優(yōu)選例中，所述化合物是化合物1-44中的一種。在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括給予治療的對(duì)象有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括給予治療的對(duì)象有效量的另一種抗病毒劑。在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括給予治療的對(duì)象有效量的HCV蛋白酶的另一種抑制劑。在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括給予治療的對(duì)象有效量的除了HCVNS3蛋白酶以外的HCV生命周期中一種靶的抑制劑。在本發(fā)明的另一方面，還提供一種式(I)的吡咯烷化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，它被用于制備藥物，尤其是用于治療HCV的藥物。在另一優(yōu)選例中，所述化合物是化合物1-44中的一種。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物還包括免疫調(diào)節(jié)劑。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物還包括另一種抗病毒劑。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物還包括HCV蛋白酶的另一種抑制劑。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物還包括除了HCVNS3蛋白酶以外的HCV生命周期中一種靶的抑制劑。本發(fā)明還包括一種用來治療HCV感染的包含一種或多種式(I)的吡咯垸化合物的藥物組合物及其應(yīng)用，以及一種或多種吡咯烷化合物在生產(chǎn)用于上述治療的藥物中的應(yīng)用。下面對(duì)本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式進(jìn)行了詳細(xì)描述。由說明書和權(quán)利要求書可以顯而易見地看出本發(fā)明地其它特征、目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的吡咯垸化合物可以通過本領(lǐng)域眾所周知的方法制備。下面的歷程1說明了合成本發(fā)明某些吡咯烷化合物的常規(guī)歷程<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>歷程i以下是歷程1所示反應(yīng)的簡(jiǎn)述使得多環(huán)化合物(i)與N-(叔丁氧基羰基)-L-脯氨酸(ii)偶聯(lián)，然后進(jìn)行甲基化，形成中間體(iii)。中間體(iii)進(jìn)行去保護(hù)反應(yīng)，除去N-丁氧基羰基，形成N-游離化合物(W),其與羧酸(v)偶聯(lián)，形成中間體(vi)。通過水解甲基羧酸酯基團(tuán)，使中間體(vi)脫保護(hù)，形成酸(vii),酸與胺化合物(viii)偶聯(lián)，制得所需的吡咯烷化合物(ix)。以上合成歷程所用的原料可以從市場(chǎng)上購(gòu)得，或者可以根據(jù)文獻(xiàn)中已報(bào)道的方法很容易地制備。以上化學(xué)歷程種所需要的合成化學(xué)變化和保護(hù)基團(tuán)方法(保護(hù)和去保護(hù))是本領(lǐng)域已知的，包括例如以下文獻(xiàn)所述的那些R.Larock,ComprehensiveOrganicTransformations,VCH出版社(1989);T.W.Greene禾口P.G.M.Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,第三版，約翰威力和薩孫出版社(JohnWileyandSons)(1991);LFieser禾口M.Fieser,FieserandFieser，sReagentsforOrganicSynthesis,約翰威力和薩孫出版社(1994);以及L.Paquette著的EncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesis,約翰威力禾卩薩孑小出版社(1995)，以及其隨后的版本。上面合成的化合物通過合適的方法純化，例如柱色譜法、高壓液相色譜或重結(jié)晶。下面的實(shí)施例1-38詳細(xì)描述了化合物1-38的實(shí)際制備方式。本發(fā)明還包括有效量的至少一種式(I)的吡咯烷化合物以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。另外，本發(fā)明還包括通過給予感染了HCV的病人有效量的一種或多種式(I)的化合物以治療HCV感染的方法。術(shù)語"治療"表示給予感染了HCV、表現(xiàn)出感染HCV的癥狀、或者易受HCV感染的對(duì)象所述化合物，以獲得治療效果，例如治愈、緩解、改變、影響、改善或防止HCV感染、感染HCV的癥狀、或者易受HCV感染的傾向。術(shù)語"有效量"表示使得被治療的對(duì)象獲得治療效果所需的式(I)活性化合物的量。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，有效劑量可根據(jù)所治療的疾病種類、給藥途徑、所用賦形劑、以及可能采用的其它治療而改變。為了實(shí)施本發(fā)明的方法，包含至少一種式(I)的吡咯院化合物以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物可以腸道外給藥、口服給藥、鼻內(nèi)給藥、直腸給藥、局部給藥或向頰給藥。術(shù)語"腸道外"表示皮下注射，皮內(nèi)注射，靜脈注射，肌肉注射，關(guān)節(jié)內(nèi)注射，動(dòng)脈注射，滑膜內(nèi)注射，胸骨內(nèi)注射，鞘內(nèi)注射，傷口注射或顱內(nèi)注射，以及任何合適的注射技術(shù)。無菌可注射組合物可以是位于無毒的可不經(jīng)腸道給藥的可接受的稀釋劑或溶劑中的溶液或懸浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液?？梢越邮艿拿浇槲锖腿軇楦事洞?，水，林格溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，通常使用不揮發(fā)性油作為溶劑或懸浮介質(zhì)(例如合成的單甘油酯或二甘油酯)。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可用來制備可注射藥品，例如可使用藥學(xué)上可接受的天然油類，例如橄欖油或蓖麻油，特別是它們的聚氧基乙烯化形式。這些油溶液或懸浮液還可包含長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或懸浮劑，羧甲基纖維素或類似的分散劑。其它常用的表面活性劑，例如吐溫(Tween)或斯潘(Span)或通常用于生產(chǎn)藥學(xué)上可接受的固體、液體或者其它劑型的其它類似的乳化劑或生物利用度促進(jìn)劑，也可用來配制藥物組合物。用于口服給藥的組合物可以是任何可以接受的口服劑型，包括膠囊、片劑、乳液和水懸浮液、分散體和溶液。對(duì)于片劑，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還可加入潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂。對(duì)于膠囊形式的口服給藥，可用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)水懸浮液或乳液口服給藥時(shí)，可以將活性成分懸浮或溶解在與乳化劑或懸浮劑合并的油相中。如果需要，可以加入某些甜味劑、香料或著色劑?？梢愿鶕?jù)制藥領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)制備鼻噴霧劑或吸入組合物。例如，可使用芐醇或其它合適的防腐劑、提高生物利用度的吸收促進(jìn)劑、氟代烴、禾口/或本領(lǐng)域已知的其它增溶劑或分散劑，將這樣的組合物制成在鹽水中的溶液。包含一種或多種式(I)的吡咯垸化合物的組合物還可以成栓劑的形式，用于直腸給藥。所述藥物組合物中的載體必須是"可以接受"的，即與組合物的活性成分相容(優(yōu)選能夠使活性成分穩(wěn)定化)，且不會(huì)對(duì)被治療的對(duì)象造成不利影響。可以將一種或多種增溶劑作為用來遞送式(I)的活性化合物的藥物賦形劑。其它載體的例子包括膠體氧化硅、硬脂酸鎂、纖維素、月桂基硫酸鈉和D&CYellow#10。本發(fā)明的化合物可以與一種或多種用來治療HCV感染的其它活性試劑一起使用。因此，本發(fā)明還涉及一種通過給予需要治療的對(duì)象以有效量的本發(fā)明化合物以及有效量的一種或多種其它活性試劑來治療HCV感染的方法?；钚栽噭┌ǖ幌抻诿庖哒{(diào)節(jié)劑，例如干擾素oc,卩和y;抗病毒劑，例如病毒唑和金剛胺；其它HCVNS3蛋白酶的抑制劑；HCV生命周期中其他靶的抑制劑,所述靶是例如解螺旋酶，聚合酶，金屬蛋白酶或內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)。這些活性試劑以及本發(fā)明的化合物可以在兩個(gè)不同的時(shí)間施用給對(duì)象，或者以兩劑藥同時(shí)施用給對(duì)象?；蛘呖梢栽谏鲜鼋M合物中組合起來，以單一藥劑使用。可以通過體外試驗(yàn)(下面的實(shí)施例39)初步篩選本發(fā)明上述化合物在抑制HCV蛋白酶方面的效率。還可進(jìn)一步檢驗(yàn)所述化合物，以確定它們治療HCV感染的療效。例如，可以將化合物施用給被HCV感染的動(dòng)物(例如小鼠模型)，然后評(píng)價(jià)其療效。基于這些結(jié)果，還可確定合適的劑量范圍和給藥途徑。我們相信，基于本文的描述，無需另外的工作便可實(shí)施本發(fā)明。因此以下實(shí)施例僅僅是說明性的，不會(huì)對(duì)說明書的其它部分構(gòu)成限制。本文引用的所有出版物的全文都全部以引用的方式納入本文。實(shí)施例實(shí)施例1:(2S)-1-((2S,4R)-2-(l-(環(huán)丙基磺?；被柞；?-2-乙烯基環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(6-甲氧基-1,2，3，4-四氫吖啶-9-基氧基)卩比咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸環(huán)戊酯(化合物l)的合成可用來合成化合物1的化合物1-3通過下列歷程，由市售的2-氨基-3-甲基-丁酸甲基酯制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>在0。C，向1-環(huán)戊醇(1.72克，20.0毫摩爾)和吡啶(2.37克，30.0毫摩爾)在CH2Cl2(80亳升)中的溶液加入三光氣(2.18克，22.0毫摩爾)。反應(yīng)混合物升溫至室溫，再攪拌3小時(shí)。然后用10%的HC1停止反應(yīng)，用二氯甲垸(60毫升X2)進(jìn)行萃取。收集有機(jī)層，用MgS04干燥，真空濃縮制得粗化合物I-1。在0。C，向Et3N(3.03克，30.0毫摩爾)滴加粗化合物I-1(1.63克，11.0毫摩爾)和2-氨基-3-甲基-丁酸甲基酯(2.43克，10.0毫摩爾)在CH2C12(50毫升)中的溶液。攪拌3小時(shí)之后，反應(yīng)混合物用10。/。的HCl酸化至pH〈，然后真空濃縮。殘余物進(jìn)行過濾，然后用水洗滌，得到化合物1-2(2.26克，93%)。MSm/z244.1(M++1);'HNMR(CDC13)S5.13-5.02(m,2H),4.25(dd,J=9.2Hz,J=4.5Hz,1H)，3.50(s,3H),2.17-2.05(m，1H),1.88-1.49(m,8H),0.93(d，J=6.6Hz,3H),0.86(d，J=6.9Hz，3H)。在室溫下向化合物1-2(2.43克，10.0毫摩爾)在THF(50毫升)中的溶液加入0.5MLiOH(60毫升，30.3毫摩爾)。攪拌過夜之后，該反應(yīng)混合物用10%的HC1酸化至pHK7,然后真空濃縮。殘余物進(jìn)行過濾，然后用水洗滌，得到化合物1-3(2.13克，93。/。)。MS:m/z230.1(M++1);'HNMR(CDC13)55.12-5.04(m,2H),4.28(dd,J-9.3Hz,J=4.6Hz，1H),2.15-2.10(m，IH)，1.86-1.45(m,8H),0.95(d,J=6.6Hz，3H),0.87(d，J=6.9Hz，3H)。同樣可以用來合成化合物1的化合物1-6是通過以下顯示的歷程，由1-叔丁氧基羰基氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙基酯制備的'.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>向l-叔丁氧基羰基氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙基酯(0.34克，1.3毫摩爾)在THF(5毫升)和甲醇(5毫升)中的溶液加入LiOH(0.13克，5.3毫摩爾)在水(1.4毫升)中的懸浮液。在室溫下攪拌過夜之后，用10%HC1(2毫升)終止反應(yīng)，真空除去溶齊'」。所得的固體粉末用水(10毫升)洗滌，得到化合物1-4(0.27克，90%)。MSm/z249.9(M+十23);(HNMR(CDC13)510.35(brs,1H),5.84-5.71(m,1H),5.29(d,J=17.4Hz,1H)，5.12(d,J=10.2Hz，1H),2.23-2.14(m，1H),1.87-1.65(m，1H),1.58-1.41(m，1H)，1.43(s,9H)?；衔?0.52克，2.3毫摩爾)，2-(lH-7-氮雜苯并三唑-l-基)-l,l,3,3-四甲基脲陽離子(uronium)六氟-磷酸鹽甲鉸(methanaminium)(HATU,1.74克，4.6毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(1.39克，11.6毫摩爾)在CH2Cl2(40毫升)中的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)，然后在15分鐘內(nèi)緩慢加入環(huán)丙垸磺酰胺(0.57克，4.7毫摩爾)，二異丙基乙胺(1.81毫升，14.0毫摩爾)禾卩1,8-二氮雜雙環(huán)[5，4,0]h^—碳-7-烯(1.80克，11.7毫摩爾)。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜之后，真空除去溶劑。殘余物通過硅膠柱色譜純化，得到化合物I-5(0.51克，66%)。MSm/z353.1(M++23);NMR(CDC13)S9.75(brs，1H)，5.64-5.51(m,1H)，5.30(d，J=17.4H)，5.16(d,J=10.2Hz，1H),2.95-2.89(m,1H),2.19-2,10(m,1H)，1.93-1.88(m，1H)，1.47(s,9H),1.46-1.38(m,1H),1.32-1.23(m，2H),1.15-1.00(m,2H)。在室溫下向化合物I-5(0.50克，1.5毫摩爾)在MeOH(8毫升)中的溶液加入SOC12(0.26克，2.2毫摩爾)。反應(yīng)混合物回流1小時(shí)之后，真空除去MeOH禾口SOCl2。殘余物用戊烷磨碎，過濾得到白色固體中間體1-6(0.32克，91%)。MSm/z(M++1);'HNMR(CD3COD)S.5.77-5.65(m，IH),5.43(d，J=17.4Hz,IH),5.32(d,J=10.2Hz,IH),3.06-2.97(m,IH),2.45(dd,J=17.4Hz，J=7.8，IH),2.16(dd,J=8.0Hz,J=7.8Hz，IH),1.75(dd,J=10.1Hz，J=7.8Hz，IH),1.32-0.86(m,4H)?；衔?通過以下所示的歷程制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>2-氨基-4-甲氧基-苯甲酸(1.67克，10.0毫摩爾)和1-己酮(1.18克，12.0毫摩爾)在過量磷酰氯(POCb)中的溶液回流3小時(shí)。冷卻并充分濃縮之后，殘余物用二氯甲烷和10%的氫氧化鈉萃取。有機(jī)層用MgS04干燥，濃縮，然后通過硅膠柱色譜純化得到化合物1-7(1.69克，71%)。MSm/z248.1(M++1);NMR(CDC13)S7.56(d,J=9.0Hz,1H),7.14(d,J=2.7Hz，1H),6.90(dd,J=9.0:J=2.7Hz,1H),3.81(s,3H),2.86(brs,2H),2.67(brs,2H)，1.82-1.71(m,4H)。在0'C向叔丁氧羰基-反式-4-羥基-L-脯氨酸(1.90克，8.2毫摩爾)在DMSO(25毫升)中的懸浮液加入t-BuOK(1.84克，16.4毫摩爾)。反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌1小時(shí)之后，一次性加入化合物1-7(2.05克，8.3毫摩爾)。繼續(xù)攪拌過夜，加入碘代甲垸(1.40克，9.84毫摩爾)。在室溫下再攪拌30分鐘，然后所述混合物用10。/。的HCl水溶液酸化至pH為67，用二氯甲烷萃取。有機(jī)層用MgS04干燥，真空蒸發(fā)，通過硅膠柱色譜純化得到化合物I-8(2.73g，73%)。MSm/z457.1(M++l)。在室溫下向化合物1-8(0.46克，1.1毫摩爾)的MeOH(8毫升)溶液中加入SOC12(0.39克，3.3毫摩爾)。該反應(yīng)混合物回流1小時(shí)，然后真空除去MeOH和S0C12。殘余物在戊烷中磨碎，過濾得到白色固體化合物1-9(0.35克，90%)。MSm/z357.2(M++l)。在室溫下，將N-甲基嗎啉(NMM,2.64克，26.1毫摩爾)加入化合物1-9(2.16克，5.2毫摩爾)，HATU(2.97克，7.8毫摩爾)，N-羥基苯并三唑(HOBT，1.08克，7.8毫摩爾)和化合物1-3(1.19克，5.2毫摩爾)在CH2C12(40毫升)中的溶液內(nèi)。攪拌過夜之后，真空濃縮該混合物。殘余物通過硅膠柱色譜純化得到化合物I-10(2.70克，83%)。MSm/z568.3(M++l)。在室溫下向化合物1-10(1.13克，2.0毫摩爾)在THF(50毫升)中的溶液加入0.5MLiOH(20毫升，10.1毫摩爾)。攪拌過夜之后，該反應(yīng)混合物用10%的HC1酸化至pH<7并真空濃縮得到固體，然后過濾并用水洗滌，得到化合物1-11(1.03克，93%)。MS:m/z554.0(M++1);'HNMR(CDC13)S7.71(d,J=9.3Hz,IH)，7.18(s,IH)，7.03(dd，J=9.3，2.7Hz,IH)，5.93(brs,IH)，5.34-5.28(m,1H),4.96(brs,1H),4.83(dd,J=8.1,J=7.8Hz,IH)，4.33-4.02(m,3H)，3.93(s,3H),3.01-2.97(m,2H),2.64-2.59(m，4H),2.09-2.03(m,IH)，1.90-1.51(m，13H)，1.02(d,J=6.6Hz,3H),0.95(d,J=6.9Hz,3H)。在室溫下，向化合物1-11(0.23克，0.41毫摩爾)，HATU(0.31克，0.81毫摩爾)，HOBT(0.08克，0.61毫摩爾)和化合物1-7(0.09克，0.41毫摩爾)在CH2C12(10毫升)中的溶液加入NMM(0.12克，1.21毫摩爾)。攪拌過夜之后，所述反應(yīng)混合物真空濃縮，然后通過硅膠柱色譜純化得到化合物1(0.22克，65%)。MSm/z766.4(M++1);'HNMR(CDC13)S.7.69(d,J=9.0Hz,IH)，7.14(s，IH)，7.16(d,J=9.0Hz,IH)，5.94-5.78(m,3H),5.37-4.93(m，3H)，4.52-4.42(m，1H),4.29-4.01(m，3H),3.92(s,3H),2.98-2.78(m，3H),2.63-2.32(m，4H),2.22-0.82(m，28H)。實(shí)施例2-12:化合物2-12的合成化合物2-12依照與實(shí)施例1所述類似的方式合成?；衔?:MSm/z780.1(M++l)。化合物3:MSm/z766.3(M++l)?；衔?:MSm/z842.4(M++l)?；衔?:MSm/z795.8(M++l)。化合物6:MSm/z796.1(M++1);'HNMR(CDC13)57.29(s,IH)，7.02(s,1H),5.92-5.53(m,IH)，5.38-4.91(m，4H),4.51(brs，IH)，4.37-4.21(m，2H)，3.97(s，3H),3.91(s，3H),3.05-2.63(m，5H),2.45-0.81(m,31H)?；衔?:MSm/z766.3(M++l)?；衔?:MSm/z736.2(M++l)?；衔?:MSm/z768.3(M++l)?；衔?0:MSm/z766.4(M++1);'HNMR(CDC13)S7.68(d,J=8.7Hz,IH)，7.38(s,1H),7.18-7.07(m,2H),6.81(s,1H),6.32(s，IH)，5.92-5.76(m，IH)，5.71-5.57(m,IH)，5.36-5.05(m,4H),4.61-4.45(m,1H),4.37-4.08(m，4H)，3.95(s,3H),3.90-3.81(m,1H),3.22(brs，2H)，3.01-2.84(m，2H)，2.53-1.98(m，4H),1.97-0.84(m,20H)。化合物11:MS:m/z803.3(M++l)?；衔?2:MS:m/z791.0(M++l)。實(shí)施例13:(S)-l-((2S,4R)-4-(9-氯-3-氟苯并呋喃并(foro)[3，2-b]喹啉-ll-基氧基)-2-((lR,2S)-l-(環(huán)丙基磺?；被柞；?-2-乙烯基環(huán)丙基氨基甲?；?卩比咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸環(huán)戊基酯(化合物13)的合成化合物13通過以下歷程制備2-氨基-4-氟-苯甲酸(5.00克，32.2毫摩爾)和7-氯-苯并呋喃-3-酮(4.41克，33.0毫摩爾)在過量磷酰氯(POCl3)中的溶液回流3小時(shí)。冷卻并充分濃縮之后，該混合物用二氯甲烷和10%的氫氧化鈉萃取。有機(jī)層用MgSCV干燥，濃縮，通過硅膠柱色譜純化得到化合物1-12(1.60克，18.3%)。MSm/z306.0，308.0(M++1);'HNMR(CDC13)58.36-8.31(m,2H)，7.93(dd,J=10.1Hz，J=2.7Hz,1H),7.72-7.66(m,2H),7,53-7.45(m，2H)。在0'C，向叔丁氧羰基-反-4-羥基-L-脯氨酸(1.91克，8.2毫摩爾)在DMSO(25毫升)中的懸浮液加入t-BuOK(1.8克，16.4毫摩爾)。使所述混合物升溫至室溫，然后攪拌1小時(shí)，一次性加入化合物1-12(2.51克，8.2毫摩爾)。繼續(xù)攪拌過夜。加入碘代甲烷(1.40克，9.84毫摩爾)，反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌30分鐘。反應(yīng)混合物用10。/。的HCl水溶液酸化至pH為67，用二氯甲烷萃取。有機(jī)層用MgS04干燥，真空蒸發(fā)，通過硅膠柱色譜純化得到化合物1-13(3.08克，73%)。MSm/z515.0，517.0(M+十l)。在室溫下向化合物1-13(1.02克，2.0毫摩爾)在MeOH(8毫升)中的溶液加入SOCb(0.71克，6.1毫摩爾)。該反應(yīng)混合物回流1小時(shí)，除去MeOH和SOCl2。殘余物在戊垸中磨碎，過濾得到白色固體化合物1-14(0.76克，92%)。MSm/z415.1,417.1(M++l)。在室溫下將NMM(2.64克，26.1毫摩爾)加入化合物1-14(2.16克，5.2毫摩爾)，HATU(2,97克，7.8毫摩爾)，HOBT(1.08克，7.8毫摩爾)和I陽3(1.19克，5.2毫摩爾)在CH2C12(40亳升)中的溶液中。攪拌過夜之后，真空濃縮該混合物。殘余物通過硅膠柱色譜純化得到化合物1-15(2.70克，83%)。MSm/z626.2，628.2(M十+l)。在室溫下，向化合物1-15(1.25克，2.0毫摩爾)在THF(50毫升)中的溶液加入0.5MLiOH(20毫升，10.1毫摩爾)。攪拌過夜之后，該反應(yīng)混合物用10%的HCl酸化至pH〈7并真空濃縮。所得的固體進(jìn)行過濾，用水洗滌，得到化合物1-16(1.1l克，91%)。MS:m/z612.0，614.0(M+十l)。在室溫下將NMM(0.12克，1.2毫摩爾)加入化合物1-16(0.25克，0.4毫摩爾)，HATU(0.31克，0.8毫摩爾)，HOBT(0.08克，0.6毫摩爾)和化合物1-6(0.09克，0.4毫摩爾)在CH2Cl2(10毫升)中的溶液。攪拌過夜之后，真空濃縮反應(yīng)混合物。殘余物通過硅膠柱色譜純化得到化合物13(0.22克，65%)。MSm/z824.3(M++1);HNMR(CDCl3)S8.31-8,22(m,2H),7.73(d，J=9.9Hz,1H)，7.65(d,J=7.5Hz,1H)，7.43(dd，J=7.5Hz，J=7.5Hz，1H)，7.31-7.25(m,1H),7.18(s,1H),6.15(s，1H),5.88-5.75(m,1H),5.48(d,J=8.7Hz,1H),5.25(d，J=17.4Hz,1H),5.13(d,J=9.6Hz,1H)，4.73(s,1H),4.68(d,J=12.6Hz,1H),4.54(dd,J=9.0Hz，J=8.3Hz，1H),4.24-4.18(m,2H)，2.92-2.86(m,1H),2.76-2.61(m，2H),2.19-1.97(m,4H)，1.87-1.23(m,11H),1,18-0.84(m，8H)?；衔?-12也通過以下歷程所示的另一歷程制備將吡啶(24.01克，303.0毫摩爾)滴加入2-氨基-4-氟-苯甲酸(9.00克，58.0毫摩爾)在苯(300毫升)中的溶液中。所得的溶液在室溫下攪拌IO分鐘，然后緩慢地加入氯代乙酰氯(12毫升，151.0毫摩爾)。再繼續(xù)攪拌12小時(shí)。真空除去溶劑之后，殘余物溶解在EA(400毫升)中，用6N的HC1洗滌。用鹽水洗滌有機(jī)層，用MgS04干燥，真空蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物用乙酸乙酯和正己烷重結(jié)晶，得到化合物1-17(8.81克，65%)。MS:m/z254.0,256.0(M++1);'HNMR(CD3OD)58.45(dd，J=12.0Hz,J=2.7Hz,1H)，8.16(dd,J=12.0Hz,J=6.6Hz，1H),6.95-6.88(m,1H)，4.31(s,2H)。化合物1-17(5.00克，21.6毫摩爾)，2-氯苯酚(8.35克，64.8毫摩爾)和K2CO3(10.0克，過量的)在無水THF(IOO毫升)中的混合物在85"C下加熱12小時(shí)。冷卻至室溫之后，過濾該反應(yīng)混合物。所得的固體用1N的HC1、鹽水洗滌，用MgS04干燥，真空蒸發(fā)，用CH2Cb和正己烷重結(jié)晶，制得粉末狀化合物1-18(3.41克，10.5毫摩爾,49%)。MS:m/z346.0,348.0(M++l);'HNMR(DMSO-d6)S8.44(dd,J=12.0Hz,J=2.4Hz,1H),8.04(dd,J=12.0Hz,J=6.9Hz,1H),7.44(dd，J=7.8Hz,J=1.2Hz，1H),7.31-7.24(m,1H),7.15-7.12(m,1H)，7.04-6.97(m,2H)，4.83(s，2H)。加熱聚磷酸(20克)中的化合物1-17(3.00克，9.3毫摩爾)，在120-130。C攪拌8小時(shí)。冷卻至室溫之后，反應(yīng)混合物用碎冰處理，用碳酸鈉堿化。對(duì)所得的懸浮液進(jìn)行過濾，用水洗滌，干燥得到化合物1-19(1.36克，51%)。MSm/z288.0，290.0(M+十l)?；衔?-19(3.00克，10.4毫摩爾)在過量磷酰氯(POCl3)中的溶液回流4小時(shí)。冷卻該溶液并充分濃縮。殘余物用二氯甲垸和10%的氫氧化鈉萃取。有機(jī)層用MgS04干燥，濃縮，用CH2Cl2和正己垸重結(jié)晶，制得化合物1-12(2.06克，65%)。MSm/z306.0,308.0(M++l)。實(shí)施例14-44:化合物14-44的合成化合物14-38依照與實(shí)施例13所述類似的方式合成?；衔?4:MSm/z790.3(M++l)?；衔?5:MSm/z790.3(M++l);NMR(CDC13)38.27(d,J=7,5Hz,IH),8.13(dd,J=9.3Hz，J=6.0Hz，IH)，8.07(s,IH),7.71(d,J=10.8Hz,IH),7.63-7.39(m，3H)，7.17-7.09(m，IH)，6.10(s,IH)，5.83-5.68(m，IH),5.66(d,J=9.0Hz，IH)，5.18(d,J=17.4Hz,IH)，5.06(d，J=10.5Hz，IH),4.71(s,IH),4.63-4.57(m，2H),4.16-4.08(m,2H)，2.88-2.79(m,IH),2.72-2.47(m,2H)，2.19-1.84(m,9H)，1.73-0.84(m,13H)?；衔?6:MSm/z820.2(M++l)?；衔?7:MSm/z804.3(M++1);'HNMR(CDC13)510.13(s,IH),8.17(dd，J=9.3Hz,J=6.0Hz,IH),7.73(d,J=10.5Hz，IH),7.43(s,2H),7.35(s，IH),7.19(m,IH)，6.15(s,IH)，5.88-5.70(m,IH),5.55(d,J=9.0Hz,IH)，5.20(d,J=16.8Hz,IH)，5.08(d,J=10.5Hz，IH),4.70(brs,IH)，4.62-4.51(m,2H)，4.15-4.08(m,2H),2.92-2.83(m，IH),2.68-2.43(m,4H),2.51(s,3H)，2.17-1.92(m,3H)，1.76-0,82(m,18H)?；衔?8:MSm/z820.3(M++1);'HNMR(CDC13)10.18(s，IH),8.22(dd，J=8.4Hz,J=6.3Hz，IH),7.78(d,J=9.6Hz,IH)，7.38(dd,J=7.8Hz,J=7.5Hz,IH),7.26-7.19(m,IH)，7.15(d，J=7.8Hz,IH),6.21(s，IH),5.84-5.71(m,IH),5.49(d,J=9.0Hz,IH),5.21(d,J=17.1Hz,IH),5.10(d,J=10.5Hz，IH),4.74(brs,IH),4.62(d，J=12.0Hz，IH),4.58-4.48(m,IH),7.19-4.12(m，2H)，4.04(s，3H),2.卯-2.85(m,IH)，2.72-2.51(m,2H)，2.15-1.93(m，6H),1.76-0.82(m,18H)?；衔?9:MSm/z790.3(M++1);'HNMR(CDC13)§10.13(s，IH)，8.31(d,J=7.8Hz，IH),8,14(dd,J=8.6Hz，J=5.1Hz，IH),7.84(d,J=9.6Hz,IH),7.67-7.54(m，2H),7.49-7.38(m,2H),7.28(s,IH),6.18(s,IH)，5.83-5.70(m,IH)，5.54(d,J=8.7Hz,IH),5.21(d,J=17.4Hz，IH),5.09(d,J=10.2Hz，IH)，4.77(s,1H),4.69(d,J=12.0Hz，H),4.54(dd,J=9.5Hz,J=8.7Hz,1H),4.16-4.06Cm,2H)，2.卯-2.86(m,IH)，2.66-2.56(m,2H),2.13-1.93(m,6H),1.71-0.74(m，16H)?；衔?0:MSm/z808.2(M++1);'HNMR(CDC13)$10.09(s,IH),8.29(d,J=7.5Hz，IH)，7.99(dd,J=12.0Hz,J=8.7Hz,IH)，7.89(dd,J=12.0Hz,8.1Hz,IH)，7.68-7.55(m,2H)，7.46(dd，J=7.5Hz，J=7.2Hz，IH),7.37(s,IH)，6.18(s,IH)，5.84-5.69(m,IH),5.56(d,J=9.3Hz,IH)，5.21(d，J=17.4Hz,IH)，5.10(d，J=10.5Hz,IH),4.78(brs,IH),4.69(d，J=12.0Hz，IH)，4.55(dd.J=8.4Hz,J=7.5Hz，IH)，4.14-4.03(m，2H)，2.92-2.81(m,IH),2.69-2.48(m,2H)，2.19-2.02(m,2H)，2.01-1.81(m,4H),.78-1.07(m，8H),1.01-0,88(8H)?；衔?1:MSm/z790.2(M++1);'HNMR(CDC13)$10.27(s,IH)，8.33(d,J=7.5Hz,IH),7.98(d,J=8.4Hz,IH),7.69-7.51(m,4H)，7.47(dd,J=7.5Hz,J=7.0Hz,IH),7.16(s,IH),7.09(dd,J=12.6Hz,J=7.5Hz,IH),6,12(s，IH),5.86-5.74(m，IH),5.38(d,J=9.0Hz,IH)，5.24(d,J=17.1Hz，IH),5.11(d,J=10.2Hz,IH),4.58-4.50(m,2H),4.15-4.02(m，2H)，2.89-2.85(m,IH),2.66-2.46(m，2H)，2.17-1.96(m，6H)，1.58-0.68(m，16H)。化合物22:MSm/z772.3(M++1);'HNMR(CDC13)59.19(brs，IH)，8.33(d，J=7.2Hz，IH)，8.17(d，J=7.2Hz,IH)，8.15(d,J=6.9Hz,IH)，7.68-7.39(m，6H),6,15(s,H),5.84-5.69(m，2H)，5.20(d，J=17.4Hz,IH),5,09(d,J=10.5Hz,IH),4.73(s,IH)，4.66-4.55(m，2H),4.21-4.06(m,2H)，2.92-2.81(m，IH)，2.69-2.44(m,2H),2.18-2.04(m,2H),1.98-1.90(m，IH),1.74-1.34(m，8H)，1,31-1.12(m,3H)，1.04-0.88(m，8H)?；衔?3:MSm/z832.3(M++l)?；衔?4:MSm/z832.3(M++1);'HNMR(CDC13)$8.03(d,J=9.0Hz,IH)，7.84(d,7.8Hz,IH)，7.62(s，1H),(s,IH)，7.33(dd，J=7.8Hz,J=7.5Hz,IH)，7.07(d,J=7.5Hz，IH),7.06(d,J=9.0Hz,IH),6.16(s,IH),5.86-5.73(m,IH),5.61(brs，IH)，5.19(d,J=16.8Hz,IH),5.07(d,J=9.9Hz,IH),4.79(s,IH)'4.64-4.55(m,2H)，4.24-4.08(m，2H),4.03(s,3H),3.93(s,3H),2.86(brs,IH),2.69-2.48(m，2H),2.18-1.92(m,3H),1.76-1.10(m，12H),1.05-0.82(m,8H)?；衔?5:MSm/z836.2(M++1);'HNMR(CDC13)$10.22(s,1H),8.30(s,1H),8.09(d,J=9.3Hz，1H)，7.59-7.48(m,3H)，7.16(s,1H),7.12(s，1H),6.16(s,1H)，5.86-5.73(m，1H),5.47(d，J=9.3Hz,1H),5.22(d，16.8Hz,1H)，5.12(d,J=10.2Hz，1H)，4.78(brs,1H),4.63(d，12.3Hz,1H)，4.51(dd，J=9.0Hz，J=8.4Hz，1H),4.21-4.08(m,2H),3.97(s，3H)，2.93-2.60(m，1H),2.68-2.58(m,2H)，2.18-1.97(m，3H),1.67-0.82(m,19H)。化合物26:MSm/z830.3(M++1);'HNMR(CDC13)$8.05(s，1H),7.91(d,J=4.5Hz,1H),J=7.90(d,J=9.0Hz,1H),7,91(s,1H),7.23(s,1H),6.94(d,J=9.0Hz，1H)，6.02(s,1H),5.84-5.68(m，1H),5.66(d,J=9.0Hz,1H)，5.14(d,J=17.1Hz，1H),5.05(d，J=10.5Hz，1H)，4.77(s，1H),4.61(dd,J=7.2Hz,9.4Hz，1H),4.53(d，J=12.0Hz,1H),4.16(dd,J=8.7Hz，J=8.7Hz，1H)，4.06(dd，J=8.7Hz，J=4.2Hz,1H)，3.91(s,1H),3.45(q，J=6.9Hz，1H),2.93-2.83(m,1H)，2.68-2.59(m，1H)，2.54-2.42(m，1H),2.36(s，3H),2.34(s，3H)，2.18-2.04(m,2H)，1.95(dd,J=7.6Hz，J=5.4Hz，1H)，1.74-1.13(m,12H)，1.03-0.88(8H)?；衔?7:MSm/z802.3(M++l)?；衔?8:MSm/z802.3(M++1);'HNMR(CDC3)$8.30(d，J=7.5Hz，IH),8.06(d，J=9.0Hz,IH),7.69-7.53(m,2H)，7.47-4.41(m,2H),7.09(d，J=9.3Hz，IH)，6.16(s，IH)，5.83-5.71(m，IH)，5.48(d，J=9.0Hz,IH)，5.20(d,J=16.8Hz，IH)，5.08(d,J=10.5Hz,IH),4.71(brs，IH)，4.61(d,J=12Hz,IH)，4.53(dd,J=9.3Hz,J=8.4Hz,IH),4.17-4.09(m，2H)，3.93(s，3H)，3.74(s，IH),2.92-2.83(m,IH),2.72-2.43(m，2H),2.41-1.91(m,8H),1.74-0.84(m,14H)?；衔?9:MSm/z832.3(M++l)。化合物30:MSm/z832.3(M++1);'HNMR(CDC13)$8.05(d，J=9.3Hz，IH)，7.23(s,IH),7.52(s,IH),7.45(s，IH),7.44(d,J=9.3Hz，IH)，7.26(s,IH)，7.18(d，J=9.0Hz,IH),7.09(d,J=9.0Hz,IH)，6.13(s，IH)，5.85-5.72(m，IH)，5.66(d,J=8.7Hz，IH),5.21(d,J=17.4Hz,IH),5.09(d,J=10.2Hz,IH)，4.77(s,IH)，4.58(dd，J=12.7Hz，J=11.7Hz，IH)，4.21-4.08(m,2H),3.94(s,3H),3.92(s，3H)，2.91-2.82(m，IH)，2.68-2.47(m，2H)，2.18-1.92(m，3H)，1.76-1.6(m，7H),1.04-0.82(m,12H)。化合物31:MSm/z830.3(M++1);'HNMR(CDC13)$8.18(s，IH),7.98(d,J=9.6Hz,1H)，7.51-7.33(m,2H),7.02(dd，J=9.2Hz,J=2.1Hz,1H)，6.11(s,IH),5,85-5.73(m,IH),5.48(d,J=8.7Hz,IH)，5.19(d,J=16.8Hz,IH),5.10(d,J=10.8Hz，IH),4.74(s，IH)，4.61-4.54(m,2H),4.25-4.08(m,2H)，3.91(s，3H)，3.54-3.43(m,3H)，2.92-2.78(m,4H)，2.69-2.41(s，2H)，2.16-1.96(m，3H)，1.61-0.88(m，20H)?；衔?2:MSm/z816.3(M++1);'HNMR(CDC13)$8.04-7.92(m，3H),7.42-7.32(m，3H)，7.49(d，J=9.0Hz，IH)，6.05(s,IH)，5.83-5.64(m,2H),5.16(d，J=17.4Hz,IH)，5.63(d,J=10.5Hz，IH),4.75(s，IH)，4.58(dd，J=12.6Hz,J=10.8Hz,2H),4.22-4.06(m，2H),3.92(s，3H)，2.92-2.81(m,IH)，2.70-2.56(m，IH)，2.47(s，3H)，2.19-2.04(m,2H),1.98-1.91(m,IH)，1.72-1.14(m,12H),1.04-0.89(m，8H)。化合物33:MSm/z832.3(M++1);'HNMR(CDC13)$8.12(d，J=8.4Hz，IH),8.04(d,J=9.3Hz,IH),7.42(s,IH),7.08-6.96(m，3H)，6.06(s,IH),5.74-5.70(m，IH)，5.67(brs,IH),5.19(d，16.5Hz,IH),5.09(d，J=9.6Hz，IH),4.81(s,IH)，4.65-4.52(m,2H),4.26-4.04(m,3H),3.92(s，6H),2.94-2.79(m，IH),2.71-2.46(m,2H)，2.16-1.93(m，3H),1.74-1.17(m,11H),1.04-0.84(m，8H)?；衔?4:MSm/z846.3(M++1);'HNMR(CDC13)$8.12(d,J=8.7Hz，IH),7.99(d,J=9.6Hz,IH),7.44(s,IH),7.06-6.96(m,3H)，6.08(s，IH)，5.85-5.71(m,IH)，5.53(d,J=9.0Hz，IH),5.20(d，J=17.4Hz,IH)，5.10(d,J=10.5Hz,IH)，4.84(s，IH),4.63-4.51(m，2H),4.25-4.04(m,5H),3.94(s，3H),2.96-2.85(m,IH),2.69-2.46(m，2H)，2.20-1.21(m,17H)，1.06-0.82(m，8H)?；衔?5:MSm/z820.3(M++1);'HNMR(CDC13)$10.18(s，IH)，8.09(d，J=9.0Hz，IH)，7.98(d,J=7.8Hz，IH),7.52(dd.J=9.3Hz，J=3.6Hz,IH),7.48(s,IH),7.33(dd，J=7.8Hz,J=7.8Hz,IH),7.13(d,J=9.0Hz，IH),6.16(s,IH),5.86-5.73(m,IH),5.55(d,J=9.0Hz，IH),5.22(d,J-16.8Hz,IH),5.11(d,J=10.8Hz,IH),4.77(s,IH),4.63(d,J=10.4Hz,IH),4.53(dd,J=9.0Hz,J=9.0Hz,IH),4.22-4.06(m,2H),3.96(s，3H),2.96-2.84(m,IH),2.68-2.50(m,2H)，2.18-2.05(m，2H)，2.02-1.94(m，IH)，1.84-1,21(m，12H),1.04-0.82(m，8H)?；衔?6:MSm/z802.3(M++1);!HNMR(CDC13)$8.36(d,J=7.5Hz,IH),7.74(d，J=8.7Hz,IH)，7.58(d,J=8.7Hz，IH),7.47-7.33(m,3H),7.03(d,J=6.9Hz,1H),6.17(s,1H),5.84-5.73(m,1H),4.45(d,J=9.0Hz，IH),5.6(d,J=17.4Hz,IH),5.08(d，J=9.9Hz，IH),4.95-4.86(m，IH),4.66-4.55(m,2H)，4.28-4.20(m,IH)，4.13(s,3H)，2.96-2.87(m,IH),2.78-2.54(m,4H),2.18-1.24(m,14H),1.08-0.92(8H)。化合物37:MSm/z840.3(M++1);'HNMR(CDC13)$10.11(s,IH),8.48(s，IH),8.35(d,J=7.5Hz,2H),7.71-7.58(m,3H),7.50(dd,J=7.5Hz，J=7.2Hz,IH)，6.23(brs,IH)，5,84-5.71(m，IH)，5.53(d，J=8.7Hz,IH)，5.22(d，J=17.4Hz,IH),5.10(d,J=10.5Hz,IH)，4.69(d,12.0Hz，IH)，4.61-4.53(m，2H)，4.16-4.04(m,2H),2.92-2.83(m,IH),2.73-2.51(m,2H)，2.18-1.90(m,5H),1.74-0.77(m，18H)?；衔?8:MSm/z808.2(M++l)?；衔?9:MSm/z834.5(M++1);NMR(CDC13)58.01(d,J=8.7Hz，IH)，7.70(s,IH)，7.46-7.36(m，2H),7.17(d,J=8.7Hz，IH),7.03(d,J=8.4Hz，IH),6.07(s，IH),5.82-5.64(m,IH),5.17(d,J=17.1Hz,IH)，5.05(d，J=9.9Hz，IH),4.68-4.50(m,2H)，4.29(d，J=8.7Hz,IH),4.13-4.04(m，IH),3.92(s,6H),2.86-2.76(m,IH),2.63-2.73(m,IH),2.58-2.44(m,IH),2.32-1.88(m,2H),1.40-0.84(m,6H),1.38(s,9H),1.05(s,9H)?；衔?0:MSm/z791.3(M++l)?；衔?1:MSm/z850.3(M++l)?；衔?2:MSm/z807.3(M++l)?；衔?3:MSm/z807.3(M++1);'HNMR(CDC13)$8.20(dd，J=9.3Hz,J=6.0Hz,IH),7.98(s,IH),7.90(dd,J=7.5Hz,J=0.9Hz,IH),7.77(dd,J=10.4Hz,J=2.7Hz,IH),7.40-7.26(m,2H),7.21-7.13(m，2H)，6.24(brs,IH)，5.89-5.76(m，IH),5.37(d,J=8.7Hz，IH),5.20(d,J=16.5Hz,IH),5.09(d，J=12.0Hz,IH),4.58-4.43(m,3H)，4.22-4.16(dd,J=12.2Hz,J=3.6Hz，IH),4.04(s，3H),2.61-2.56(m,IH),2.18-1.16(m,19H),1.01(d，J=5.1Hz,3H),O.卯(d，J=6,6Hz,3H)?；衔?4:MSm/z827.3(M++l)。實(shí)施例45:NS3/4A蛋白質(zhì)的抑制蛋白質(zhì)的表達(dá)和純化將含有N-末端His6-標(biāo)簽的NS4A②.32)-GSGS-NS3(w8D的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入諾瓦金公司(Novagen)的大腸桿菌(f.coZ/)菌株BL21(DE3)pLysS中來過度表達(dá)蛋白質(zhì)。37°C，在含有卡那霉素和氯霉素的200mLLauria-Bertani(LB)培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的BL2I(DE3)pLysS單菌落。將細(xì)菌培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至迪菲科公司(Difco)的6升含抗生素的LB培養(yǎng)基中，22r振蕩培育。600nm吸光度達(dá)到0.6后，在22'C用1mM異丙基-l-硫代-J3-D-吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)培養(yǎng)物5小時(shí)。然后離心(4。C，6,000Xg，15分鐘)收集培養(yǎng)物。將細(xì)胞沉淀重懸在150mL緩沖液A(50mMHEPES，pH7.4，0.3MNaCl，0.1%(w/v)CHAPS，10mM咪唑，10%(v/v)甘油)中。使混合物流過在30psi操作的微流化儀(Microfluidizer)四次使之分散，然后離心(4'C，58,250Xg，30分鐘)除去細(xì)胞碎片。在有10mM咪唑存在下，用法瑪西亞公司(Pharmacia)的GradiFrac系統(tǒng)將含His6-標(biāo)簽蛋白的細(xì)胞裂解液以3mL/分鐘施加到25mL恰根公司(Qiagen)的Ni-NTA柱上。用10個(gè)柱體積的裂解緩沖液洗滌柱。用8個(gè)柱體積的補(bǔ)加了300mM咪唑的緩沖液A洗脫結(jié)合的NS4A(21_32)-GSGS-NS3(3.181)。通過用緩沖液B(50mMHEPES，pH7.4，0.1%(w/v)CHAPS，10%(v/v)甘油，5mM二硫蘇糖醇(DTT)和1MNaCl)平衡的Q-瓊脂糖柱進(jìn)一步純化合并的諸組分。收集含NS4A(21—32)-GSGS-NS3(3—181)的洗脫液。收集含NS4A(21—32)-GSGS-NS3。.m)的組分，利用聚丙烯酰胺葡聚糖(sephacryl)-75柱(16x100cm,法瑪西亞公司)以流速5mL/分鐘通過尺寸排阻層析進(jìn)一步純化。這些柱用緩沖液C(50mMHEPES，pH7,4，0.1%(w/v)CHAPS'5mMDTT，10%(v/v)甘油)預(yù)平衡。冷凍純化的蛋白質(zhì)，保存于-8(TC待用。抑制試驗(yàn)方案采用分離HCV蛋白酶底物和產(chǎn)物的HPLC微孔試驗(yàn)。試驗(yàn)所用的底物是Ac-Asp-Glu-Asp(EDANS)-Ghi-Glu-Abu-\)/-[COOAla]-Ser-Lys(DABCYL)-NH2(RETSl，ANASPEC)。試驗(yàn)所用的緩沖液包含50mMTris緩沖液，pH7.4，100mMNaCl，20%甘油和0.012%CHAPS。制備10mM底物RETSl的儲(chǔ)備水溶液，等份保存于-8(TC待用。將DTT、RETSI和測(cè)試化合物溶解于緩沖液(終體積80pL)，加入96-孔板的孔中。加入20iaL緩沖液配制的10nMNS3/4A蛋白酶形成100iiL試驗(yàn)溶液從而開始反應(yīng)，所述試驗(yàn)溶液含有50mMTris緩沖液，pH7.4，100mMNaCl，20%甘油和0.012%CHAPS，10mMDTT，5|nM底物RETSl和10測(cè)試化合物。NS3/4A蛋白酶的終濃度是2nM，低于底物RETS1的Km。3(TC培育試驗(yàn)溶液30分鐘。然后加入1001Q/。TFA終止反應(yīng)。將200等份試樣轉(zhuǎn)移至安捷侖公司(Agilent)的96-孔板的各孔中用于下一步驟。分離產(chǎn)物與底物采用下述的反相HPLC分析反應(yīng)產(chǎn)物。HPLC系統(tǒng)包括Agilent1100,脫氣器G1379A，雙泵G1312A,自動(dòng)進(jìn)樣器G1367A，柱恒溫室G1316A，二極管陣列檢測(cè)器G1315B，柱Agilent,ZORBAXEclipseXDB-C18，4.6mm，5pm，P/N993967-902，柱恒溫器室溫，注射體積100^L;溶劑A=HPLC級(jí)水十0.09。/。TFA，溶劑B二HPLC級(jí)乙腈+0.09%TFA。HPLC運(yùn)行總時(shí)間為7.6分鐘，其中4分鐘內(nèi)乙腈的線性梯度為25-50%B，然后以50%B運(yùn)行30秒，最后30秒的梯度為50-25%B。用25%B再平衡柱2.6分鐘，然后注射下一樣品。根據(jù)HPLC結(jié)果計(jì)算各測(cè)試化合物的IC5。值(實(shí)現(xiàn)50%的NS3/4A受抑制時(shí)的濃度)。在該試驗(yàn)中測(cè)試了化合物1-44。結(jié)果顯示幾乎所有測(cè)試化合物表現(xiàn)出NS3/4A蛋白酶活性的抑制作用。某些化合物出乎意料地具有極低的ICso值。例如，化合物36的ICso值低于50nM，而化合物5的1<:5()值在50-500nM之間。實(shí)施例46:HCV復(fù)制子細(xì)胞試驗(yàn)方案在含10%胎牛血清(FBS)、1.0mg/mlG418和適當(dāng)添加物的DMEM(培養(yǎng)基A)中培養(yǎng)HCV復(fù)制子細(xì)胞。在第1天，用胰蛋白酶/EDTA混合物處理復(fù)制子細(xì)胞單層，移取該細(xì)胞單層，用培養(yǎng)基A稀釋至終濃度48,000細(xì)胞/ml。將該溶液(1ml)接種于24-孔組織培養(yǎng)平板的各孔，37°C，5%(:02氣氛下，在組織培育箱中培養(yǎng)過夜。在第2天，用含10%FBS和適當(dāng)添加物的DMEM稀釋各測(cè)試化合物(DMSO配制)，從而提供濃度不同的一系列樣品溶液。在所有系列稀釋中，DMSO的終濃度維持在0.2%。除去復(fù)制子細(xì)胞單層上的培養(yǎng)基，然后加入含各樣品溶液。將含10%FBS和適當(dāng)添加物，但不含化合物的DMEM加入其它孔作為無化合物的對(duì)照。37°C，5%(:02氣氛下，在組織培育箱中將細(xì)胞與化合物或0.2y。DMSO在培養(yǎng)基中培育72小時(shí)，所述培養(yǎng)基除不含G418外，與上述培養(yǎng)基A相同。除去培養(yǎng)基，用PBS洗滌復(fù)制子細(xì)胞單層一次并提取細(xì)胞總RNA。將RNA提取試劑(例如，Rneasy試劑盒的試劑或TRIZOL試劑)立即加入細(xì)胞以避免RNA降解。按照生產(chǎn)商的使用說明書的改進(jìn)方法提取總RNA以改善提取效率和一致性。最后，洗脫包含HCV復(fù)制子RNA的細(xì)胞總RNA，保存在-8(TC以待進(jìn)一步加工。用兩套特異性引物和探針實(shí)施TaqMan⑧實(shí)時(shí)RT-PCR定量測(cè)定試驗(yàn)。一套用于HCV，另一套ACTB(P-肌動(dòng)蛋白)。將處理的HCV復(fù)制子細(xì)胞的總RNA提取物加入PCR反應(yīng)，從而在同一PCR孔中定量測(cè)定HCV和ACTBRNA。根據(jù)各孔中ACTBRNA的水平對(duì)實(shí)驗(yàn)失敗作標(biāo)記并舍棄。根據(jù)同一PCR板中獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各孔中的HCVRNA水平。利用DMSO或無化合物對(duì)照作為0。/。抑制來計(jì)算化合物處理所致的HCVRNA水平的抑制百分比。根據(jù)任何給定化合物的滴定曲線計(jì)算EC5。(HCVRNA水平達(dá)到50%抑制時(shí)的濃度)。在HCV復(fù)制子細(xì)胞試驗(yàn)中測(cè)試了化合物1-44。結(jié)果顯示所有測(cè)試化合物表現(xiàn)出針對(duì)HCVRNA水平的抑制作用。某些化合物出乎意料地具有極低的ECs。值。例如，化合物33的IC5。值低于50nM，而化合物1的ECs。值在50-500nM之間。其它實(shí)施方式說明書中所揭示的所有特征可以以任意的組合方式結(jié)合。說明書中所揭示的各種特征可以被起到相同、等價(jià)或類似目的的特征代替。因此，除非另外說明，所揭示的各種特征僅僅是一系列等價(jià)或類似特征的一個(gè)例子。通過以上說明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地確定本發(fā)明的主要特征，同時(shí)可以在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改變和改良，以使其適用于各種應(yīng)用和條件。因此，其他的實(shí)施方式也在所附權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.式(I)的化合物式(I)其中R1，R2，R3，R4和R5各自獨(dú)立地是H，C1-6烷基，C1-6烷氧基，C3-10環(huán)烷基，C1-10雜環(huán)烷基，C6-10芳基或C3-10雜芳基；或者R2和R3以及與它們連接的碳原子一起形成C3-10環(huán)烷基和C1-10雜環(huán)烷基，所述基團(tuán)可任選地被選自以下的一種或多種取代基所取代鹵素，硝基，氰基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，C2-6烯基，C2-6炔基，C6-10芳基和C3-10雜芳基；U是-O-，-NH-，-C(O)NH-，-NHSO-或-NHSO2-；X是-O-，-S-，-NH-或-OCH2-；Y是其中V是-CH-或-N-；A1和A2各自獨(dú)立地選自C3-10環(huán)烷基，C1-10雜環(huán)烷基，C6-10芳基和C3-10雜芳基，這些基團(tuán)任選地被以下基團(tuán)取代鹵素，硝基，氰基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，C2-6烯基，C2-6炔基，C6-10芳基或C3-10雜芳基，或者任選地與另外的以下基團(tuán)稠合C3-10環(huán)烷基，C1-10雜環(huán)烷基，C6-10芳基和C3-10雜芳基，這些基團(tuán)任選地被以下基團(tuán)取代鹵素，硝基，氰基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，C2-6烯基，C2-6炔基，C6-10芳基或C3-10雜芳基；和Z是-C(O)，-O-C(O)-，-NH-C(O)-，-O-C(S)-，-NH-C(S)-，-O-C(NH)-或-NH-C(NH)-。2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，112和R3以及與它們相連的碳原子一起形成環(huán)丙基。3.如權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于，所述環(huán)丙基被乙烯基取代。4.如權(quán)利要求3所述的化合物，其特征在于，Ar2是苯基，V是-N-。5.如權(quán)利要求4所述的化合物，其特征在于，Y選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>，這些基團(tuán)各自任選地被以下基團(tuán)取代鹵素，C^垸基或C^烷氧基。6.如權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于，X是-O-。7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其特征在于，U是-NHS02-，且Z是-oc(o)-。8.如權(quán)利要求7所述的化合物，其特征在于，R,是環(huán)丙基，R4是C"6垸基，R5是環(huán)戊基。9.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，X是-O-。10.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Ar2是苯基，V是-N-。11.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Y是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>任選地被鹵素，C,—6垸基或C^烷氧基取代。12.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Y是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>，其任選地被鹵素，CL6烷基或C卜6烷氧基取代。13.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，U是-NHS02-，R,是環(huán)丙基。14.如權(quán)利要求l所述的化合物，其特征在于，Z是-OC(O)-，Rs是環(huán)戊基。15.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，！^是環(huán)丙基，R4是C"6焼基。16.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Y選自，這些基團(tuán)各自任選地被鹵素，Q.6烷基或Ci.6烷氧基取代。17.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有下式所示的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)o其中&，R2,R3,R4，R5,U,X，Y和Z如權(quán)利要求1所定義。18.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物是化合物1-44中的一種。19.權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其特征在于，用于制備藥物。20.如權(quán)利要求19所述的用途，其特征在于，所述藥物用于丙型肝炎病毒感染。21.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述化合物是化合物1-44中的一種。22.如權(quán)利要求19所述的用途，其特征在于，所述的藥物還包括免疫調(diào)節(jié)劑。23.如權(quán)利要求19所述的用途，其特征在于，所述的藥物還包括另一種抗病毒劑。24.如權(quán)利要求19所述的用途，其特征在于，所述的藥物還包括HCV蛋白酶的另一種抑制劑。25.如權(quán)利要求19所述的用途，其特征在于，所述的藥物還包括除了HCVNS3蛋白酶以外的HCV生命周期中一種靶的抑制劑。26.—種藥物組合物，包含權(quán)利要求1所述的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。全文摘要本發(fā)明涉及丙型肝炎病毒蛋白酶抑制劑。所述的抑制劑包括式(I)所示的化合物，其中R₁，R₂，R₃，R₄和R₅，U，X，Y和Z如本文所述。還揭示了這些化合物單獨(dú)或者與其它活性試劑結(jié)合起來用于治療丙肝病毒感染的應(yīng)用。文檔編號(hào)C07D491/048GK101429232SQ20081017474公開日2009年5月13日申請(qǐng)日期2008年10月27日優(yōu)先權(quán)日2007年10月25日發(fā)明者劉振富,劉永慶,李廣元,林助強(qiáng),斌羅,金其新,韓岳強(qiáng)申請(qǐng)人:太景生物科技股份有限公司