專利名稱：TGF-β拮抗物治療具有罹患支氣管肺發(fā)育不良風險的嬰兒的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及TGF-P拮抗物治療具有罹患支氣管肺發(fā)育不良風險的嬰 兒(包括早產(chǎn)兒)的用途。
背景技術：
在發(fā)育非常早期的階段出生的嬰兒由于其發(fā)育不全的肺、簡單的呼吸 驅動(primitive respiratory drive )和容易受感染，而通?；加泻粑ソ?。 支氣管肺發(fā)育不良(BPD)，是一種早產(chǎn)兒慢性肺病，最早在近40年前得到 表征(Northway， N. Engl. J. Med. 276:357-368 (1967); Jobe等人，Am. J. Resp. Crit. Card. Med. 163:1723-1729 (2001))。如同最初所描述的，BPD 是主要發(fā)生在嬰兒身上的病癥，這些嬰兒的大小和成熟程度令他們足以在 長時間暴露于高氧和正壓通氣所造成的損傷下存活下來。這主要是在妊娠 28到32周之間誕下的嬰兒，以及出生時體重在1,000到1，500克之間的嬰 兒。其臨床過程和肺病理學反映了嚴重的肺型氧中毒和肺過度膨脹的后果。 BPD的最初病理描述記錄了氣道損傷、發(fā)炎、間質性纖維化、平滑肌細胞 增生和遠端氣道的鱗狀化生。這些嬰兒的死亡率高，且在幸存者中經(jīng)常出 現(xiàn)長期呼吸4幾依賴性呼吸衰竭(Bland, Biol. Neonate 88:181-191 (2005))。
隨著表面活性劑治療的出現(xiàn)、產(chǎn)前類固醇治療的廣泛應用、先進的呼 吸機和營養(yǎng)治療的使用，BPD的流行病學和病理生理學有了可觀的變化。 現(xiàn)在，幾乎三分之二罹患BPD的嬰兒體重低于l，OOO克，在妊娠28周之前出生(Martinez等人，Chronic Lung Disease in Early Infancy, 21-39頁； New York, Marcel Dekker (2000); Bancalori等人編，41-64頁)。與以往 經(jīng)驗不同，當時肺型氧中毒和肺過度膨脹被認為是產(chǎn)生慢性肺損傷的主要 原因，而現(xiàn)在罹患BPD的早產(chǎn)兒暴露于較低水平的氧和機械通氣。
此外，這些患有BPD的極為不成熟的嬰兒的肺病理學與"經(jīng)典型，，BPD 不同。有時此疾病被稱為"新型BPD"，其現(xiàn)在主要與末端肺發(fā)育中斷相關。 對死于BPD的嬰兒的肺的顯孩吏觀察顯示了遠端(distal)肺發(fā)育部分至完 全的中止(Husain等人，Hum. Pathol. 29:710-717 (1998))。這致使患有BPD 的嬰兒的周邊肺單元的肺泡產(chǎn)生(alveologenesis )減少，及孩吏脈管系統(tǒng)發(fā) 育減少和異形。
肺氣嚢發(fā)育對于子宮外存活是至關重要的。肺發(fā)育可以分為5個重疊 的階段胚胎早期(妊娠3-7周)、假腺體期(妊娠5-17周)、小管期(妊娠16-26 周)、囊狀期(妊娠24-38周)和肺泡期(妊娠36周至出生后2年)(Burri， Lung Growth and Development, J. McDonald編,1-35頁；New York, Marcel Dekker (1997); Kotecha， Paediatr. Respir. Rev. 1:308-13 (2000); Coalson， Sem.， Neonatology 8:73-81 (2003))。對于在妊娠26周出生的嬰兒，嚢狀 期和肺泡期還未完成。在嚢狀期過程中，肺球嚢(lung saccules )壁薄，壁 中的次級嵴(secondary crest)形成。預期呼吸空間的極大擴展使得球嚢 形成，間質組織量顯著減少。肺看起來越來越"充氣"，盡管充滿著來自肺 和胎兒周圍的羊水的液體。在肺泡期過程中，肺泡的形成由次級嵴的伸展 和變薄開始，而后其成熟為肺泡壁。因此，肺泡產(chǎn)生(alveologenesis)在 多數(shù)早產(chǎn)兒出生后開始。
盡管并未完全知曉導致BPD的機制，但是間接證據(jù)表明BPD是由細 胞因子對發(fā)育中的肺的影響所致(Groneck等人，Arch, Dis. Child Fetal Neonatal. Ed. 73:F1隱3 (1995); Jobe等人，Early Hum. Dev. 53:81-94 (1998); Jobe等人，Curr.Opin.Pediatr. 13:124-129(2001))。例如，已觀察到子宮 內感染令早產(chǎn)新生兒肺中的細胞因子水平升高，且該子宮內感染與BPD風 險增加相關。此外，早產(chǎn)兒肺對氧和呼吸機治療的暴露與肺流出物中細胞因子水平升高以及罹患BPD的風險升高相關。而且，BPD可能有直接的 遺傳原因。由于有若干基因禎:認為對于末端肺發(fā)育有決定性作用(Bourbon 等人，Pediatric Research 57:38R-46R (2005))，其中一個或多個基因的異 常可能直接抑制正常的肺成熟并導致BPD。此外，也有可能遺傳異常可以 通過導致早產(chǎn)而間接令BPD發(fā)病率升高。
近期的有限間接證據(jù)表明TGF-p可能是BPD中參與抑制末端肺發(fā)育 的眾多細胞因子之一。例如，在早產(chǎn)兒末端氣道和肺流出物中鑒定出了 TGF畫p(Kotecha等人，J. Pediatr. 128:464-469 (1996); Toti等人，Pediatr. Pulmon. 24:22-28 (1997); Lecart等人，Biol. Neonate 77:217-223 (2000); Saito等人，Pediatr. Res. 55:960-965(2004))， TGF-(51水平在罹患BPD的 早產(chǎn)兒中最高(Kotecha， 1996)，且與疾病的嚴重性相關(Lecart， 2000)。 然而，此報道的TGF-p水平提高僅僅是對該疾病起主要作用的其他因子作 用的結果，還是TGF-p在BPD的發(fā)生中起更直接的作用，對于這點仍不 知曉。例如，除了 TGF-p之外，到目前為止已有約20個備選基因被鑒定 為可能控制末端肺發(fā)育。在這些基因之中，已報道有13個在動物模型或患 有BPD的嬰兒中受到調節(jié)(Bourbon等人，Pediatr. Res. 57:38R-46R (2005))。使用基因表達i普技術，Perkowski及其同事報道了在成年小鼠的 高氧肺損傷中受到調節(jié)的385個基因(Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 28:682-696 (2003))。
至少有兩項研究檢測了 TGF-pi在發(fā)育中的肺中異位it^達的影響。 例如，Vicencio等人^L道了具生物活性的TGF-(31在新生小鼠的肺上皮細 胞中的過表達與末端肺發(fā)育的抑制相關(Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31:650-656 (2004))， Gauldie等人報道了用編碼TGF-|31的腺病毒感染新生 大鼠肺會影響新生的肺結構，包括產(chǎn)生纖維化的斑片狀區(qū)域(未在新型 BPD中見到)。(Am.丄Pathol. 163:2575-2584 (2003))。然而，并不清楚在 后一模型中所觀察到的變化是否直接與TGF-pi的活性相關，因為接觸腺 病毒(無TGF-p)的對照肺顯示顯著的遠端氣道水腫，這表明腺病毒栽體本 身誘導炎癥。此外，兩項研究均包含TGF-p的被動異位表達，因此不能模擬患有BPD的早產(chǎn)兒發(fā)育中的肺中發(fā)生的狀況。因此，這些研究對于闡明 TGF-p在BPD中的作用并無幫助。
同時，其他研究已表明TGF-(5調控肺發(fā)育中的早期事件，所述早期事 件包括分支形態(tài)發(fā)生(Zhao等人，Am.丄Physiol. 273:L355-362 (1997); Zhao等人，Am. J. Physiol. 21 :L412-422 (1999))。然而，影響近端傳導氣 道(conducting)數(shù)量的胎兒肺分支形態(tài)發(fā)生在肺發(fā)育的嚢狀期之前即告 完成(McMurty， Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 282:L341-344 (2002))。因此，分支形態(tài)發(fā)生的缺陷與早期肺發(fā)育的疾病相關，如肺發(fā)育 不全和先天性膈疝，而與抑制或中斷肺發(fā)育的嚢狀期和肺泡期的疾病BPD 無關。由于患有BPD的嬰兒的肺中沒有觀察到分支形態(tài)發(fā)生異常，其近端 傳導氣道數(shù)量正常，這些研究對于闡明TGF-p是否在BPD發(fā)病機制中起 作用也沒有幫助。
最后，已在兒科肺病而不是BPD的某些模型中研究了 TGF-p中和對 肺發(fā)育的影響。在這些情況中，TGF-p活性的提高在正常肺中通過改變 TGF-p與細胞外基質的結合得到實現(xiàn)(Nephme等人，Nat. Genet 33:407-411 (2003)和Massaro等人，Am . J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 278:L955-60 (2000))，或在培養(yǎng)的生長的胎兒肺中通過提供過量水平 TGF-p實現(xiàn)(Zhang等人，E-PASS2006 59:5166.6 (2006))。對受損的發(fā)育中 肺中產(chǎn)生的過量TGF-p的中和是否抑制BPD的發(fā)生則沒有進行研究。由 于病因學、病理學和病程的差異，這些對TGF-p進行了中和的研究對我們 理解TGF-p在BPD中的作用并無貢獻。見例如Neptune等人，Nat. Genet. 33:407-411 (2003)和Massaro等人，Am . J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 278:L955-60 (2000),其中報道了異常TGF-卩信號傳導在馬方氏癥小鼠模 型中的作用；以及Zhang等人，E-PASS2006 59:5166.6 (2006)中報道了 TGF-p在作為與在高海拔生活相關的先天性心臟病或肺血管疾病模型的低 氧小鼠中的作用。
總而言之，盡管一些研究表明TGF-p能夠影響末端肺發(fā)育，其他研究 則表明TGF-p在早得多的階段(在分支形態(tài)發(fā)生過程)中起作用，卻從沒有研究直接指出在具有罹患BPD風險的早產(chǎn)兒的受損的肺中，TGF-P是 否在末端肺發(fā)育的調節(jié)起了致病作用，或者在這樣的嬰兒中中和TGF-p是 否對病程有任何影響。
BPD是嬰兒發(fā)病率和死亡率極為重要的原因。排在哮喘之后，BPD是 對于兒科患者花費最昂貴的疾病。表面活性劑治療和其他先進治療的利用 改善了新生兒存活率，但沒有伴隨BPD發(fā)病率的減少。因此，對于治療具 有罹患BPD風險的早產(chǎn)兒的改良的方法仍存在重大需求。
發(fā)明簡述
本發(fā)明部分基于這樣的發(fā)現(xiàn)和證實在支氣管肺發(fā)育不良的高氧小鼠 模型中，在圍產(chǎn)期中施用抗TGF-p抗體能夠保護受損的發(fā)育中的肺的肺泡 產(chǎn)生和血管發(fā)生不被抑制。本發(fā)明提供了治療具有,限患支氣管肺發(fā)育不良 (BPD)風險的嬰兒(包括早產(chǎn)兒)的方法。
本發(fā)明提供了通過在圍產(chǎn)期(包括產(chǎn)前期和/或產(chǎn)后期)中施用TGF-p 拮抗物治療嬰兒的方法。對于在產(chǎn)前期施用，TGF-(5拮抗物可以直接對在 子宮內的嬰兒施用，或對母親間接施用。
在一個實施方案中，本發(fā)明的方法包括治療具有罹患支氣管肺發(fā)育不 良風險的早產(chǎn)兒，其中嬰兒的年齡為約妊娠24周至約產(chǎn)后6個月。在一個 實施方案中，待治療的嬰兒為出生于約妊娠32周或更早的早產(chǎn)兒。在一個 實施方案中，待治療的嬰兒為出生于約妊娠28周或更早的早產(chǎn)兒。在一個 實施方案中，嬰兒出生時的重量為約1500克或更少。在另一實施方案中， 嬰兒出生時的重量為約1000克或更少。
在另一實施方案中，本發(fā)明的方法包括使用TGF-p中和劑減輕疾病的 嚴重性來治療具有肺損傷和支氣管肺發(fā)育不良的早產(chǎn)新生兒和嬰兒，其中 嬰兒的年齡至約產(chǎn)后6個月。
在一些實施方案中，TGF-p拮抗物為TGF-p的直接拮抗物，例如抗 TGF-p抗體、抗TGF-(3受體抗體或可溶性TGF-j5受體。在具體實施方案 中，TGF-p拮抗物為人或人源化形式的抗TGF-p抗體lDll。在非限制性實施方案中，TGF-p拮抗物為人泛特異性(pan-specific)抗體，如PCT 申請WO 06/086469中公開的PET1073G12, PET1074B9或PET1287A10。
TGF-p拮抗物可以全身性施用，包括肌內、靜脈內或皮下。TGF-p拮 抗物還可以以氣化形式直接對肺施用，以小滴或粉末形式、或與表面活性 載體一起包括通過吸入器或噴霧器施用。
在一些實施方案中，TGF-p拮抗物可以用于制備治療支氣管肺發(fā)育不 良的藥物。此外，在一些實施方案中，藥物可以包括TGF-P拮抗物和另一 治療物質，包括例如類固醇、維生素A、高卡路里營養(yǎng)制劑、利尿藥和/ 或支氣管擴張藥。
在其他實施方案中，TGF-p拮抗物可以增加嬰兒發(fā)育中的肺的肺泡產(chǎn) 生。在一些實施方案中，增加的肺泡產(chǎn)生和/或血管發(fā)生可以發(fā)生在肺周邊。 在一些實施方案中，可以施用TGF-p拮抗物以使嬰兒肺的平均弦長(chord length)降低至少約10%、至少約20%、至少約30%或至少約40%。在 其他實施方案中，可以施用TGF-p拮抗物以使肺泡的體積密度降低至少約 20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%或至少約60%。此外，在 一個實施方案中，可以施用TGF-P拮抗物以使次級隔(secondary septal) 密度提高至少約20%、至少約30%、至少約40%或至少約50%。
在一些實施方案中，可以施用TGF-P拮抗物以產(chǎn)生更正常的肺結構。 例如，在一個實施方案中，可以施用TGF-P拮抗物以降低彈性蛋白的體積 密度。此外，在其他實施方案中，可以施用TGF-p拮抗物以增加嬰兒發(fā)育 中的肺的血管發(fā)生。例如，在一個實施方案中，可以施用TGF-p拮抗物以 增加肺周邊組織中彈性蛋白和/或aSMA的表達。
在另一實施方案中，可以施用TGF-p拮抗物以治療或預防由于補加氧 造成的損傷。例如，在一個實施方案中，TGF-p拮抗物可以在補加氧之前 施用或同時施用，以預防或治療由于慢性暴露于氧和/或肺過度膨脹造成的 肺發(fā)育異常。在一個實施方案中，TGF-(5拮抗物可以在子宮內或嬰兒產(chǎn)后 不久施用，氧治療可以在產(chǎn)后施用。此外，在另一實施方案中，可以施用 TGF-p拮抗物以促進嬰兒產(chǎn)后的正常生長。


圖1A-1D為顯微照片，顯示TGF-p同種型在小鼠幼崽發(fā)育中的肺中 的表達。在10日齡小鼠幼崽肺的支氣管上皮中(圖1A;箭頭)、末端和呼 吸性細支氣管中(圖IB;分別為TB和RB)和末端氣道中(圖1C和圖ID) 檢測到不同的TGF-p免疫反應性(暗斑)。此外，在末端氣道壁中，相對于 TGF-(32和TGF-P3， TGF-pi顯示有更高的免疫反應性。所有的圖均用蘇 木精復染。實心比例尺50nm;空心比例尺lOOjun;交叉陰影線比例尺
圖2A-2F為顯微照片，顯示TGF-p中和抗體在10日齡小鼠幼崽肺中 檢測到TGF-P表達。圖2A-2C中，用泛特異性單克隆抗TGF-p抗體1D11 在10日齡的小鼠幼患的肺中檢測到TGF-P免疫反應性(暗斑)。圖2D-2F 中，用非免疫血清代替1D11與肺共同孵育。如圖2A所示，在大氣道(*) 和血管(**)的壁中及細胞外基質(箭頭)中的細胞鑒定出了 TGF-p免疫反應 性。并且在幼崽肺遠端氣道中鑒定出了 TGF-p免疫反應性(圖2B和2C)。 所有的圖均用蘇木精復染。實心比例尺20nm;空心比例尺50nm。
圖3A-3D為顯微照片，顯示用抗TGF-p抗體的治療降低受損的新生 肺中的TGF-p信號傳導。用免疫組織化學檢測經(jīng)過以下處理的10日齡幼 崽肺中的p-Smad2(暗斑)PBS和空氣(圖3A)、 PBS和85% 02(圖3B)、 11)11和空氣(圖3C)以及1D11和85% 02(圖3D)。與暴露于空氣的肺相比， 用PBS處理并暴露于85% 0210天的肺在遠端氣道的細胞核中檢測到更豐 富的p-Smad2(箭頭指示代表性的細胞核p-Smad2免疫反應性)。相反，用 1D11處理、暴露于02的肺中，具有p-Smad2反應性的細胞核比用PBS 處理并暴露于02的肺中具有p-Smad2反應性的細胞核的少。用1D11處理、 暴露于02的肺中的p-Smad2染色的細胞核還與用PBS和1D11處理并暴 露于空氣的肺中的p-Smad2染色的細胞核數(shù)量相似。所有的圖均用蘇木精 復染。比例尺50nm。
圖4A-4D為顯微照片，顯示暴露于抗TGF-P抗體與受損的新生肺中遠端氣道發(fā)育的改善相關。用甲苯胺藍染色經(jīng)過以下處理的io日齡幼崽肺
切片PBS和空氣(圖4A)、 PBS和85% 02(圖4B)， 1D11和空氣(圖4C) 以及1D11和85% 02(圖4D)。與暴露于空氣的幼崽肺相比，用PBS處理 并暴露于85% 02與遠端氣腔面積增加和次級隔數(shù)量減少(箭頭)相關。用 1D11處理改善了暴露于02的幼崽肺的遠端氣it^育；在這些肺中顯示有 更多的肺泡形成。比例尺200nm。
圖5A-5C為實驗圖示，顯示在受損的肺中，用抗TGF-P抗體進行處 理改善肺泡發(fā)育的客觀量化指征。在PBS處理的小鼠肺中，在周邊肺中慢 性暴露于85。/。的氧與平均弦長(Lm)和氣腔體積密度(。/。AVD)(圖5B)的增加 相關(圖5A)，而這些與周邊肺發(fā)育和氣道表面積成反比，慢性暴露于85% 的氧還與發(fā)育中的肺中的次級隔密度降低相關(圖5C)。在慢性暴露于高水 平02的肺中，用1D11處理抑制Lm和。/。AVD的異常增加，并提高次級 隔的密度。每組N二12; *P<0.05。
圖6A-6C為顯微照片，顯示在用抗TGF-(5抗體處理的受損新生肺中， 彈性蛋白的表達提高。顯示了經(jīng)下列處理的10日齡小鼠幼崽周邊肺的彈性 蛋白米勒染色(黑)PBS和空氣(圖6A)、 PBS和85。/。02(圖6B)以及1D11 和85%02(圖6<:)。彈性蛋白在對照的幼崽周邊肺中表達，在次級隔(箭頭) 頂部觀察到高水平表達。慢性暴露于高水平02與定位于隔片(spetae)中的 彈性蛋白減少和其與球嚢壁關聯(lián)的增加相關(箭頭頭部；圖6B)。用抗 TGF-P抗體處理與彈性蛋白在肺泡隔頂部的沉積增加相關。實心比例尺 100pm;空心比例尺20nm。
圖7A為顯孩￡照片，圖7B為實驗圖示，顯示用抗TGF-p抗體處理受 損的發(fā)育中的肺提高周邊肺實質中的彈性蛋白體積密度。/。(。/。EVD)，其為 細胞外基質發(fā)育的客觀量化指征。在PBS處理的小鼠肺中，慢性暴露于 85。/。氧與彈性蛋白的異常沉積相關，該異常沉積由。/。EVD的增加反映。用 1D11處理通過改善彈性蛋白在周邊肺的分布來抑制。/。EVD的異常增加。 每組N-4; *P<0.05。
圖8A-8C為顯孩t照片，顯示在用抗TGF-P抗體處理的受損肺中，肺孩l血管內皮細胞形態(tài)(pattern )發(fā)生顯著改善。顯示了經(jīng)下列處理的10 曰齡小鼠幼崽周邊肺中，內皮細胞a-D-半乳糖苷的西非單葉豆(Gn)5^w/" )凝集素染色PBS和空氣(圖8A)、 PBS和85% 02(圖8B)以 及l(fā)Dll和85。/。02(圖8C)。暴露于85%02的幼崽肺隔壁增厚，且內皮細 胞染色呈錯綜復雜的形態(tài)。相反，用1D11和高水平氧處理的肺則具有更 有條理的內皮細胞形態(tài)。所有的圖均用蘇木精復染。實心比例尺100nm; 空心比例尺20nm。
圖9A-9B為實驗圖示，顯示用抗TGF-p抗體處理的受損肺中的肺微 血管發(fā)育具有改善的客觀量化指征。用分別與凝集素和aSMA抗體反應的 幼崽肺檢測周邊肺中內皮細胞的％熒光體積密度(。/。FVD)(圖9A)和 SMC(圖9B)。發(fā)育中肺的損傷與凝集素增加和aSMA的。/。FVD減少相關。 相反，暴露于TGF-p中和抗體則提高這些肺微血管細胞標記物的體積密 度。每組N-7; 、 P<0.05。
圖10A-10C顯示用抗TGF-p抗體處理的受損的新生肺中，肺微血管 肌成纖維細胞的標準化。顯示經(jīng)下列處理的10日齡小鼠幼崽周邊肺細胞中 的aSMA免疫反應性(暗斑)PBS和空氣(圖IOA)、 PBS和85% 02(圖10B) 以及1D11和85% 02(圖IOC)。與呼吸空氣的小鼠幼崽的肺相比，暴露于 高水平02的肺在肺周邊的aSMA免疫反應性較低。用1D11和高水平氧處 理的幼崽肺顯示在遠端氣道壁具有更多的aSMA免疫反應性。所有的圖均 用曱苯胺藍復染。實心比例尺100nm;空心比例尺20nm。
發(fā)明詳述
本發(fā)明提供了治療具有罹患支氣管肺發(fā)育不良風險的(BPD)或已經(jīng)患 有BPD的嬰兒(包括早產(chǎn)兒)的方法，其在圍產(chǎn)期、包括產(chǎn)前期和產(chǎn)后期 期間的至少一個時間點，對處于圍產(chǎn)期、包括產(chǎn)前期和產(chǎn)后期的嬰兒施用 治療有效量的TGF-f5拮抗物。本文所使用的術語"嬰兒"包括約"^ 24周 至約產(chǎn)后6個月的在子宮內或產(chǎn)后的人。支氣管肺發(fā)育不良
BPD的臨床診斷是在妊娠36周時，對那些患有需要連續(xù)或持續(xù)補加 氧的肺病和那些胸腔X光檢查異常的任何早產(chǎn)兒做出的。本文所使用的 "BPD，，還包括所有可選的臨床診斷定義，如對那些出生超過四周，患有持 續(xù)肺病、需要連續(xù)補加氧的和那些胸腔X光檢查異常的嬰兒做出的診斷。 BPD有時還在文獻中和被兒科醫(yī)護人員稱為"慢性肺病，，(Jobe等人，Early Hum. Devd， 53:81-94 (1998))。
由于臨床上BPD只有在早產(chǎn)兒出生一段時間后，例如妊娠36周才能 診斷，通常在正式診斷出該疾病之前即對有風險的嬰兒施行治療。在一些 方法中，對診斷患有BPD的嬰兒施行治療以減輕疾病的嚴重性。根據(jù)本發(fā) 明的方法，TGF-p拮抗物用于治療圍產(chǎn)期中的嬰兒。本文所使用的用本 發(fā)明的方法治療的人"圍產(chǎn)期"包括產(chǎn)前期(即出生前)和產(chǎn)后期(即出生后)， 從約妊娠26周開始，持續(xù)至約產(chǎn)后6個月。對于在產(chǎn)前期期間施用，TGF-|5 拮抗物可以可以直接對在子宮內的胎兒施用，或對母親間接施用。
在本發(fā)明的某些方法中，以治療有效量施用TGF-p拮抗物以治療具有 罹患BPD風險的嬰兒，從而減輕、最小化或預防BPD在嬰兒中的發(fā)生。 本文所使用的術語"治療"意指用以減輕、最小化或預防與BPD相關的肺后 遺癥及臨床體征和癥狀。可以用本發(fā)明的方法治療的嬰兒包括具有罹患 BPD風險的任何嬰兒。具有罹患BPD風險的嬰兒包括早產(chǎn)兒、具有早產(chǎn) 風險的嬰兒和由于其他原因具有罹患BPD風險的其他任何嬰兒。
待用本發(fā)明的方法治療的嬰兒年齡為從約妊娠24周至約產(chǎn)后6個月。 妊娠周數(shù)(即孕齡)可以用許多常規(guī)方法中的任意方法確定。例如，孕齡可 以從最后一次月經(jīng)的第一天開始計算。
在一個實施方案中，嬰兒為早產(chǎn)兒。本文所使用的早產(chǎn)兒為在妊娠37 周前出生的嬰兒；術語"早產(chǎn)(preterm delivery)"或"早產(chǎn)(premature delivery )，，指任何發(fā)生在妊娠37周之前的分娩。因此，在一個實施方案中，
生)。 ' ' ^ P 1患上BPD的嬰兒有幾乎三分之二出生時體重低于1,000克且出生時少 于妊娠28周。因此，在一個實施方案中，待用TGF-卩拮抗物治療的嬰兒 可以用其出生時的體重和/或年齡進行鑒定。在一個實施方案中，待治療的 嬰兒為出生于約妊娠32周或更早的早產(chǎn)兒。在一個實施方案中，待治療的 嬰兒為出生于約妊娠28周或更早的早產(chǎn)兒。在一個實施方案中，待治療的 嬰兒出生時體重為約1500克或更少。在另一實施方案中，嬰兒出生時體重 為約1000克或更少。
具有罹患BPD風險的嬰兒還包括未出生的具有早產(chǎn)風險(從而具有 BPD風險)的嬰兒(即胎兒)。通過在產(chǎn)前期期間對母親施用或直接對在子宮 內的胎兒施用治療此類嬰兒。W^約23周或更久，具有臨床上完整的胎膜 且有一個或多個早產(chǎn)危險因素或早產(chǎn)標志的任何懷孕婦女均可以成為治療 候選人。
已知有許多因素與早產(chǎn)風險相關。這些因素包括但不限于多胎妊娠；
子宮頸功能不全；子宮異常；羊水過多；未經(jīng)產(chǎn)；曾有胎膜早破或早產(chǎn)標 記；先兆子癇；伴隨胎盤前置的陰道出血；少有或無產(chǎn)前護理；及諸如腹 痛、腰痛、排出宮頸粘液和(子宮)收縮的癥狀。
除了這些危險因素以外，許多早產(chǎn)標記已凈皮鑒定。本文所使用的早產(chǎn) 標志為這樣的標志，當其處于或超過閥值水平，則表明早產(chǎn)風險增加。早 產(chǎn)標志的例子包括但不限于限于胎兒的抗原如胎兒纖連蛋白和雌三醇(美 國專利申請公開號2004/0266025)、胰島素樣生長因子結合蛋白l(可能破水 的標志；見美國專利申請爿>開號2004/0053838)及MMP-8和MMP-9 (美國 專利申請/^開號2004/0029176)。檢測早產(chǎn)標志水平的方法為本領域熟知， 在例如美國專利申請^Hf號2004/0266025中所描述的。
盡管BPD主要見于早產(chǎn)兒，它也可以發(fā)生在出生后的最初幾天有呼吸 問題的足月嬰兒身上。因此，本發(fā)明的方法也可以用于治療這些嬰兒。
TGF-P拮抗物
TGF-p是二硫鍵連接的二聚物，合成時為約400個氨基酸(aa)的前蛋白原，在分泌之前切割產(chǎn)生成熟TGF-p。稱為"潛在相關肽"(LAP)的N端 切割片段可以保持與二聚物非共價結合，從而使TGF-(5失活。體內分離的 TGF-p，主要以這種無活性的"潛在，，形式，即與LAP結合的形式存在?？?以用若干方法活化TGF-(3潛在復合物，例如通過與稱為非陽離子依賴型甘 露糖-6-磷^/胰島素樣生長因子II受體的細胞表面受體結合。結合通過附 著于LAP中的糖基化位點的甘露糖-6-磷酸殘基實現(xiàn)。與受體結合后， TGF-P以其成熟形式釋放。而后成熟的活性TGF-P可以與其受體自由結合 并發(fā)揮其生物學功能。II型TGF-(5受體中的主要TGF-p結合結構域已被 定位于一個19個氨基酸的序列中(Demetriou等人，J. Biol. Chem. 271:12755 (1996))。
本文所使用的術語"TGF-P"指TGF-p的任何一種或多種哺乳動物同種 型。同樣，除非另有說明，術語"TGF-p受體"指與至少一種哺乳動物TGF-j5 同種型結合的任何受體。當前有五種已知的TGF-p同種型(TGF-pi到 TGF-P5)，彼此間均為同源(60-80%同一性)，都形成約25 kDa的同型二聚 體，并作用于共同的TGF-p受體(TpR-I、 T(3R-I1、 T卩R-IIB和TpR-III)。 在哺乳動物中見到TGF-pi、 TGF-(52和TGF-卩3。 TGF-p和TGF-(3受體的 結構和功能方面為本領域熟知(見例如Cytokine Reference, Oppenheim 等人編，Academic Press, San Diego， CA， 2001)。 TGF-卩在不同物種中 非常保守。例如，大鼠和人的成熟TGF-pi的M酸序列幾乎相同。因此， 預期TGF-p拮抗物在物種間具有高交叉反應性。
術語"TGF-P拮抗物"及其同類詞如"抑制劑"、"中和"和"下調，，指對 TGF-P的生物活性起拮抗作用的化合物(或適當情況下指其性質)或其他分 子。TGF-p拮抗物可以例如與TGF-p結合并中和其活性；降低TGF-p表 達水平；影響穩(wěn)定性或影響前體分子向活性、成熟形式的轉化；干擾TGF-p 與一種或多種受體的結合；或可以干擾TGF-p受體的胞內信號傳導。術語 "TGF-p的直接拮抗物"通常指直接下調TGF-p生物活性的任何化合物。如 果一個分子通過與TGF-p基因、TGF-p轉錄物、TGF-p配體或TGF-p受 體相互作用而下調TGF-p的活性，則該分子"直接下調"TGF-p的生物活性。
評估TGF-P的生物活性的方法，包括中和TGF-p拮抗物的活性，為 本領域已知。 一些更常用的體外生物測定的例子包括下列方法
(1) 在EGF存在下，誘導NRK細胞在軟瓊脂中形成集落(Roberts 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:5339-5343 (1981));
(2) 誘導原始間充質細胞分化以表達軟骨表型(Seyedin等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:2267-2271 (1985));
(3) 抑制MvlLu貂肺上皮細胞(Danielpour等人(1989) J. Cell. Physiol., 138:79-86)和BBC-1猴腎細胞的生長(Holley等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:5989-5992 (1980));
(4) 抑制C3H/HeJ小鼠胸腺細胞的有絲分裂發(fā)生(Wrann等人(1987) EMBO丄，6:1633-1636);
(5) 抑制大鼠L6成肌細胞的分化(Florini等人，J. Biol. Chem. 261:16509-16513 (1986》;
(6) 測量纖連蛋白的生產(chǎn)(Wrana等人，Cell 71:1003-1014 (1992));
(7) 誘導與螢光素酶才艮道基因融合的纖溶酶原激活物抑制劑I(PAI-l) 啟動子(Abe等人(1994) Anal. Biochem.， 216:276-284);
(8) 測量肺組織或血清或血漿中的PAI-1水平；
(9) 夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(Danielpour等人，Growth Factors 2:61-71 (1989));和
(10) Singh等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. 13(24):4355-4359 (2003)
中描述的細胞測定法。
可以用于評估體內TGF-p活性的方法的例子包括評估SMAD2磷酸化 和/或核定位。
可以使用的TGF-j5拮抗物的例子包括但不限于針對一種或多種 TGF-j3同種型的單克隆和多克隆抗體(美國專利號5,571,714; WO 97/13844; WO 00/66631; WO 05/097832; WO 05/101149; WO 06/086469); 顯性失活的可溶性TGF-P受體或直接針對TGF-p受體的抗體(Flavell等人，Nat. Rev. Immunol. 2:46-53 (2002);美國專利號5,693,607;美國專利 號6,001,969;美國專利號6，008，011;美國專利號6,010,872; WO 92/00330; WO 93/09228; WO 95/10610;和WO 98/48024; LAP(WO 91/08291);結 合LAP的TGF-p(WO 94/09812);結合TGF-(3的糖蛋白/蛋白聚糖如胎球 蛋白(美國專利號5,821,227);飾膠蛋白聚糖、p聚糖、纖調蛋白、腔蛋白 聚糖和內皮糖蛋白(美國專利號5,583,103;美國專利號5,654,270;美國專 利號5,705,609;美國專利號5,726,149;美國專利號5,824,655;美國專利 號5,830,847;美國專利號6,015,693; WO 91/04748; WO 91/10727; WO 93/09800;和WO 94/10187);甘露糖-6-磷酸或甘露糖-l-磷酸(美國專利號 5,520,926);促乳素(WO 97/40848);胰島素樣生長因子II(WO 98/17304); 植物、真菌和細菌的提取物(EU 813875; JP 8119984;和美國專利號 5,693,610);反義寡核苷酸(美國專利號5,683,988;美國專利號5,772,995; 美國專利號5,821,234;美國專利號5,869,462;和WO 94/25588);以及保 留了抑制TGF-P的生物活性能力的上述分子的任何突變體、片段或衍生 物。許多可用的小分子TGF-P拮抗物也為本領域技術人員所熟知，包括但 不限于WO 02/62753; WO 02/62776; WO 02/62787; WO 02/62793; WO 02/62794; WO 02/66462; WO 02/94833; WO 03/87304; WO 03/97615; WO 03/97639; WO 04/10929; WO 04/21989; WO 04/22054; WO 04/24159; WO 04/26302; WO 04/26871;美國專利號6,184,226; WO 04/16606; WO 04/47818; WO 04/48381; WO 04/48382; WO 04/48930; WO 04/50659; WO 04/56352; WO 04/72033; WO 04/87056; WO 05/10049; WO 05/032481; WO 05/065691; WO 05/92894; WO 06/026305; WO 06/026306;和WO 06/052568中所描述的那些。
在一些實施方案中，TGF-p拮抗物為TGF-P的直接拮抗物，例如阻斷 TGF-P與其受體結合的抗體。
本文所使用的術語"抗體"指免疫球蛋白或其部分，包括任何包含抗原 結合部位的多肽，而無論其來源、制備方法和其他特征。該術語包括但不 限于多克隆、單克隆、單一特異性、多特異性、人源化、人、單鏈、嵌合、合成、重組、雜合、突變和CDR移植抗體。術語"抗原結合結構域"指抗 體分子的部分，其包含與部分或整個抗原特異性結合或互補的區(qū)域。當抗 原很大時，抗體可能僅與抗原的特定部分結合。"表位"或"抗原決定簇"為 抗原分子的部分，其負責與抗體的抗原結合結構域特異性相互作用?？乖?br> 結合結構域可以包含抗體輕鏈可變區(qū)(ViJ和抗體重鏈可變區(qū)(VH)?？乖Y
合結構域可以由一種或多種抗體可變結構域提供(例如Fd抗體片段由VH 結構域組成，F(xiàn)v抗體片段由Vh結枸域和V^結構域組成，或scFv抗體片 段由接頭連接的VH結構域和VL結構域組成)。術語"抗TGF-p抗體"或"針 對至少一種TGF-p同種型的抗體"指特異性結合至少一種tgf-p表位的任 何抗體。術語"TGF-P受體的抗體"和"針對TGF-p受體的抗體"指特異性結 合TGF-p受體(例如I型、II型、或III型)的至少一種表位的任何抗體。
用于本發(fā)明方法的抗體與至少一種TGF-j5同種型或至少一種TGF-p 受體的胞外結構域特異性結合。本文所使用的術語"特異性相互作用"或"特 異性結合"或其同類詞指兩種分子在生理條件下形成相對穩(wěn)定的復合物。特 異性結合的特征在于高親和力和低到中等的容量(capacity)。非特異性結合 通常具有低親和力和中等到高的容量。通常，當親和常數(shù)Ka高于1061^1， 或優(yōu)選高于108 m—1時^L為特異性結合。
在其他一些實施方案中，抗TGF-P抗體特異性結合選自TGF-pl、 TGF-P2和TGF-P3的至少一種TGF-p同種型。在另一些實施方案中，抗 TGF-P抗體至少特異性結合(a) TGF-卩l(xiāng)、 TGF-卩2和TGF-卩3 ("泛中和 抗體")；(b) TGF-pl和TGF-(52; (c) TGF畫pi和TGF-卩3;或(d) TGF-卩2和 TGF-(53。在不同實施方案中，TGF-(5抗體對于其特異性結合的至少一種 tgf-P同種型的親和常數(shù)Ka優(yōu)選高于106m—、 1()7m1， 1()8m1， 109m'， 1010 m—1， 1011 m"或1012 m—1。預期用于人的還有中和一種或多種哺乳動
物。制備此類抗體的方法為本領域才支術人員所熟知(見例如Antibody Engineering, Borrebaeck編，第二版，Oxford University Press (1995))。 在非限制性的示例性實施方案中，抗TGF-p抗體為由雜交瘤1D11.16(保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，其位于10801 University Boulevard, Manassas, Virginia, 20110，美國，ATCC保藏號HB 9849，在美國專利 號第5,571,714號；第5,772,998號；和第5,783,185號中有所描述)產(chǎn)生的 鼠單克隆抗體1D11。 1D11重鏈可變區(qū)序列可用登錄號AAB46787得到。 因此，在相關的實施方案中，抗TGF-(3抗體為1D11的衍生物，例如包含 與AAB46787中的重鏈CDR相同的CDR序列的抗體，如人源化抗體。在 其他實施方案中，抗TGF-(5抗體為人抗體，通過1D11定向選擇從噬菌體 呈現(xiàn)文庫中分離得到。
在非限制性實施方案中，抗TGF-p抗體為人泛特異性抗體，如PCT 申請WO 06/086469中公開的PET1073G12、 PET1074B9或PET1287A10。
施用方法
利用本文提供的教導和本領域中關于不同TGF-p拮抗物的特征，包括 其效價和親和力的豐富信息，熟練的臨床醫(yī)生可以容易地確定對于任何給 定的TGF-p拮抗物應^f吏用的準確劑量和使用方案。例如，當TGF-p拮抗 物為抗體時，可以用選定的提供與1D11抗體相同的中和效價的劑量，以 0.1到10mg/kg患者體重的劑量施用。相似地，抗TGF-p受體抗體、可溶 性TGF-p受體或另一 TGF-p拮抗物的治療有效量可以在提供相當中和效 價的范圍內選擇。 一般而言，可以對母親施用較高的劑量以在胎兒得到有 效劑量的TGF-P拮抗物；直接對胎兒或嬰兒肺遞送時，可以施用較低劑量 的TGF-p拮抗物。
"施用"不限于任何特定的制劑、遞送系統(tǒng)或路徑，可以包括例如腸胃 外(包括皮下、靜脈內、髓內、關節(jié)內、肌內或腹膜內注射)直腸、局部、 經(jīng)皮或口服(例如膠嚢、混懸劑或片劑)。對個體施用可以為單劑量、快速 濃注劑量(bolus dose )或重復施用，以及以眾多藥物組合物中的任何一種 施用，所述藥物組合物含有生理學上可接受的鹽形式，和/或可藥用載體和 /或添加劑作為藥物組合物的部分。生理學上可接受的鹽形式和標準的藥物 配制才支術及賦形劑是已知的(見例如Physicians' Desk Reference 2003， 57版，Medical Economics Company, 2002;和Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Genu ado等人編,20版，Lippincott， Williams & Wilkins， 2000)。
在一個實施方案中，含TGF-p拮抗物的組合物可以通過肺途徑施用， 包括以粉狀或液體氣溶膠形式的吸入劑施用。氣溶膠化(aerosolized)制 劑可以是直徑小于l(Him的小滴或粉狀顆粒。例如，拮抗物可以溶于微:粒 化的疏水/親水乳劑。這樣的吸入劑可以通過噴霧器、吸入器、氣管內路徑、 口內或鼻內路徑施用。用于對呼吸道遞送治療物質的氣溶膠，包括空氣動 力學上的輕顆粒，在例如美國專利申請/>開號2005/0244341中有所描述。
對嬰兒施用拮抗物可以通過基因治療的方法完成，其中對患者體內施 用編碼拮抗物的核酸序列、或對體外細胞施用而后將所述體外細胞引入患 者，再以適當?shù)暮怂嵩泽w序列表達拮抗物(例如反義RNA、 snRNA、可溶 性TGF-p受體)。基因治療遞送TGF-p拮抗物的方法在(見例如Fakhrai 等人，Proc. Nat. Acad. Sci.美國，93:2909-2914 (1996))和U.S. 5,824,655 中有所描述。TGF-(5拮抗物的施用是通過用包含編碼拮抗物的cDNA的栽 體進行基因轉移實現(xiàn)的，例如編碼TGF-p II型(rsTGFBIIR)或III型受體 (rsTGFBIIIR)胞外結構域的cDNA在例如美國專利申請公開號 2003/0180301中有所描述。
TGF-p拮抗物可以與當前用于或將用于治療具有罹患BPD風險或已 診斷患有BPD的早產(chǎn)兒的任何其他物質或治療組合施用于嬰兒。在出生后 的第一個月中缺乏維生素A會顯著增加罹患BPD的風險。研究還發(fā)現(xiàn)地 塞米松可以增加維生素A的血漿水平；這可以幫助嬰兒擺脫氧治療，從而 預防BPD。
通常使用支氣管擴張藥通過放松氣道周圍的肌肉打開肺的氣道。在病 情更嚴重的嬰兒中，只用支氣管擴張藥有時難以控制哞鳴和呼吸窘迫，則 使用抗炎藥減輕氣道肺脹。因此，可以與本發(fā)明的方法組合的BPD治療包 括表面活性劑、氧治療、呼吸機治療、類固醇、維生素A、 一氧化氮吸入、 高卡路里營養(yǎng)制劑、靜脈內飼、抗生素、液體限制和利尿藥減少肺中的水囤積、及提高肌肉性能以幫助肺排出粘液的物理療法。
下列實施例提供例示性實施方案。本領域技術人員會認識到，可以進 行許多修改和變更而不改變本發(fā)明的精神或范圍。這樣的修改和變更涵蓋 在本發(fā)明的范圍之中。實施例不以任何方式限制本發(fā)明。
實施例
在胚胎第17和19天，對標注時間(time-dated)的C57BL/6懷孕小 鼠(Charles River)腹腔注射含有或不含10 mg/kg泛特異性抗TGF-卩IgG, 抗體1Dll(Genzyme)的0.5 ml PBS pH 7.4，或是沒有已知抗原的同種型配 對骨髓瘤蛋白(MOPC21; Sigma-Aldrich)。出生12小時以內，經(jīng)相似處理 的成對母鼠的幼崽混合，隨機分為兩窩，隨后與其母鼠一起接受連續(xù)的空 氣或85%氧處理10天。每24小時，將成對兩窩中的授乳母鼠根據(jù)不同的 ()2暴露水平進行交換，以減少呼吸高水平02造成的影響。醫(yī)用級別的氧 和氮氣(Airgas)用分別調控和校準的流量表進行混合。將氣體混合物引入 680 L丙烯酸接觸室(acrylic exposure chamber)。阻隔室(airlock)使得可 以交換母鼠及更新食物、水和寢具而不改變幼崽的氧暴露水平。接觸室中 新鮮氣流的流速超過計算得出的其內小鼠的氧消耗的10倍以上(Bartlett 等人，Respir. Physiol. 29:193-200 (1997))。
氧水平用順磁反應法
(paramagnetic method)測定(Servomex model 572)。此暴露方法產(chǎn)生具 有穩(wěn)定氧水平的氣體氛圍，且接觸室中的相對濕度和溫度分別為不超過 60%和70°C。所有方案均經(jīng)過麻省綜合醫(yī)院動物研究小組委員會
(Subcommittee for Research Animal Studies of the Massachusetts General Hospital)批準。
組織制備
為得到分析用的肺和心臟，幼崽經(jīng)稱重，通過腹腔注射200 mg/kg戊 巴比妥鈉處死。施行胸廓切開術令肺萎陷，通過頸中的橫切口鑒定氣管，將0.61 mm外徑的聚乙埽管(PE10; Harvard Apparatus)固定在氣管中。 用含3%低聚甲醛和0.1。/。戊二酪(gluteraldehyde)的PBS以22 cm的H20 壓力令肺膨脹30分鐘，而后當肺擴張時結扎氣道。幼崽軀體于4。C浸于固 定劑中3天。從軀體中解剖心和肺，4。C儲存于PBS中留待進一步分析。 為獲得用于冷凍切片的肺組織，進行氣管插管，用組織冷凍培養(yǎng)基(TFM; Triangle Biochemical Sciences)和含20%蔗糖的PBS (按1:1體積比稀釋) 輕柔地令肺膨脹并取出。隨后，用TFM將肺覆蓋，在異戊烷中冷凍(保存 在干冰上)，儲存在-80。C待用。
檢測組織TGF-p。
用免疫組織化學檢測幼崽肺中的TGF-p同種型免疫反應性。經(jīng)過檸檬 酸抗原修復之后，封閉肺切片，暴露于兔抗TGF-pi(Santa Cruz， sc-146)、 TGF-p2(sc-卯)和TGF-(53(sc-82)抗體及預先免疫的兔血清(對照)。經(jīng)充分洗 滌，切片暴露于生物素化的抗兔抗體、抗生物素蛋白-生物素過氧化物酶復 合物(Vector Labs)和二氨基聯(lián)苯胺(DAB; Vector labs)，再用蘇木精復染。 肺TGF-P也用泛特異性抗TGF-p抗體和間接免疫組織化學(Graham等人， Biol. Reprod. 46:561-572 (1992))以及對于使用小鼠組織中的鼠類抗體最優(yōu) 化的市售試劑盒(M.O.M.免疫檢測試劑盒；Vector Labs)進行檢測。將石 蠟包埋的6pm厚的肺切片用二甲苯、醇梯度溶液處理，在PBST(含有0.1% 吐溫20的PBS)中7JC合。在封閉試劑中孵育后，組織在4。C下暴露于1D11(在 封閉溶液中稀釋)過夜。組織用PBST洗滌過后，用生物素化的抗小鼠抗體 孵育，用PBST洗滌，暴露于抗生物素蛋白-生物素過氧化物酶復合物 (Vector Labs)和二^i^聯(lián)苯胺(DAB; Vector labs)，再用蘇木精復染。
分析TGF-p信號傳導
用間接免疫組織化學檢測肺中的細胞核磷酸SMAD 2(p-Smad2)。將 6nm厚的冷凍肺切片置于Superfrost PlusTM載玻片(Fisher Scientific)上， 用含4%低聚曱醛的PBS固定2分鐘，用100%甲醇透化處理10分鐘。用含5。/。山羊血清的PBST封閉1小時，將切片在4。C下暴露于用封閉液稀 釋的兔抗pSmad2(Ce11 Signaling)中過夜。切片用PBST洗滌后，與生物素 化的抗兔抗體孵育，用PBST洗滌，暴露于抗生物素蛋白-生物素過氧化物 酶復合物和DAB，再用蘇木精復染。
肺結構的立體學分析
肺的病理生理學由確定肺體積，Lm(平均截線長度(mean linear intercept)或弦長)和。/。AVD(。/。氣腔體積密度)表征。在肺充氣固定之后， 用阿基米德原理測定肺體積。受損的發(fā)育中的肺的肺泡形成中斷，停留在 類似嚢狀期的發(fā)育階段，遠端氣道直徑增大。通過用立體學方法，以及測 定Lm(Massaro等人，Am.丄Physiol. 250:R51-55 (1986); Tomkeieff， Nature 155:24 (1945))、 ％AVD (Weibel， Stereological Methods. London: Academic Press (1979))和次級隔密度(Pierce等人Am J Physiol. 272: L452-60 (1997)) 量化這些變化。Lm與肺的內表面積成反比(Thurlbeck, Am. Rev. Respir. I)is. 95:752-764 (1967); Thurlbeck， Am. Rev. Respir. Dis. 95:765-773 (1967))。次級隔密度與肺泡的發(fā)育直接相關。
充氣固定的幼崽肺包埋在異丁烯酸甲酯中，將2nm厚、甲苯胺藍染色 的左肺切片用于結構研究。收集和處理肺圖象數(shù)據(jù)的觀察人員對治療組的 組別和肺的暴露狀況不知情。使用系統(tǒng)抽樣法(與Tschanz和Burri， Exp. LungRes. 28:457-471 (2002)中的方法相似)，由不含大氣道和血管結構，隨 機定向的左肺橫向切片中取4個0.60 mm2的視野，進行數(shù)字化以測定Lm; 在這些視野中，獲取4個0.15 mm2切片以測定。/。 AVD。使用專門編輯的 macro和I戲geJ(Rasband， ImageJ， Bethesda， MD (1997-2004)),用前 述方法過濾并分割圖像(Tschanz等人，2002)。為測定Lm，通過對含有間 隔90nm的水平線的圖象進行位元字串的按位元邏輯與運算(bit-wise logical AND operation )將圖4象倒排和歸并。將得到的弦排序；排除< 8nm 且〉250nm的弦，從而除去與肺毛細血管和傳導氣道相關的數(shù)據(jù)(Soutiere 等人，Respir. Physiol. Neurobiol 140:283-291 (2004))。通過將得到的弦總和除以截段(intercept)數(shù)得到Lm。用標準點計數(shù)方法測定遠端氣腔的 %AVD(WeibeI， 1979)。通過計數(shù)客觀測定次級隔密度。
細胞外基質蛋白的肺染色
用6pm厚、石蠟包埋的肺切片測定肺彈性蛋白和膠原。用0.5%高錳 酸鉀和1%草酸處理后，用彈性蛋白米勒染色進行彈性蛋白染色(Miller, Stain Techno. 28:148-149 (1971))。用含0.1%粘膠纖維紅(Sirius red)的 飽和苦味酸進行膠原染色(Walsh等人，Anal. Biochem. 203:187-1卯 (1992))。用標準方法測定實質中的彈性蛋白。/。體積密度(Pierce等人Am J Physiol. 272: L452-60 (1997》。
血管發(fā)育評估。
用凝集素染色鑒定遠端氣道壁中的肺微脈管系統(tǒng)。已觀察到西非單葉 豆(Griffania simplicifolia, Bandeiraea)凝集素與內皮細胞(Mattsson等人, Pancreatology 2:155-162 (2002))中的a-D-半乳糖苷結合(Hayes等人，J. Biol. Chem. 249:1904-1914 (1974)),優(yōu)選用于鑒定肺微脈管系統(tǒng)(King等 人，Microvasc. Res. 67:139-151 2004))。石蠟包埋的6nm厚的肺切片經(jīng)封 閉，與生物素化的西非單葉豆凝集素(Molecular Probes)IB4同種型孵育過 夜。用含0.1。/。吐溫20的Tris緩沖鹽水(TBST)洗滌過后，用抗生物素蛋白 -生物素復合的堿性磷酸酶和Vector Red底物(Vector Laboratories)檢測結 合的凝集素，切片用曱苯胺藍復染。根據(jù)前述方法使用6jmi厚的石蠟包埋 的肺切片，用鼠單克隆抗aSMA抗體(1A4; Sigma)對平滑肌細胞進行免 疫組織化學鑒定(Roberts等人，Circ. Res. 87:140-145 (2000))。
用Weibel(1979)所述的方法分析小鼠幼崽肺中的肺微血管細胞的面密 度(areal density)。如前所述與生物素化的凝集素、aSMA抗體和Vector Red 底物反應的肺切片分別用于獲取微脈管系統(tǒng)內皮和SMC區(qū)室的詳細信息。 使用上文詳述的系統(tǒng)抽樣法獲取除去胸膜、大氣道和血管結構的周邊肺的 落射熒光圖像。經(jīng)過過濾和分割操作后，通過用熒光像素對應的像素數(shù)目除以圖像中的像素總數(shù)確定％熒光體積密度(。/。FVD)。取每張幼崽肺切片 的三幅圖像的。/oFVD中值用于分析。
通過測定富爾頓比(Fulton ratio )(Fulton等人，Br. Heart J. 14:413-420 (1952))評估慢性呼吸85%02或空氣對14只小鼠幼崽右心室肥大的影響。 在含3。/。低聚甲醛和0.1%戊二醛的PBS中固定3天后，將心臟在PBS中 4。C儲存。除去心房和大血管，將右心室游離壁與左心室和室間隔分割開。 從組織上吸去過量PBS后，將右心室和左心室(包括室間隔)在帶防護的天 平上稱重。
統(tǒng)計方法
用Pocock所述的方法測定用于立體學分析的樣品大小(Pocock， 123-141頁,Clinical trials: A practical approach, New York: John Wiley & Sons (1983))。每組取六個肺進行研究以檢測可能的10%的Lm減少，使 用同種型對照抗體，a為0.05，效力為0.9。初步研究顯示用1D11處理使 得用PBS處理過的呼吸85% 02的小鼠Lm從68.0減少至62.3nm，合計 SI)為4.2。由于這些數(shù)據(jù)顯示每組需要11.4個幼崽肺以顯示1D11的有益 效果，a為0.05，效力為0.90,于是每個治療和暴露組取12個幼崽肺進行 研究。成對兩窩中的幼崽重量用隨機化完全區(qū)組設計進行分析(Snedecor 等人，255-273頁，Statistical methods, Ames, Iowa: Iowa State University Press (1980))。數(shù)據(jù)用平均值士SD表示，用ANOVA因素模型進行對比。 之后當檢測到顯著差異時，使用Sheffe檢驗。顯著性以P〈0.05確定。
實施例1: TGF-p在發(fā)育中肺的表達，及用抗TGF-p抗體調節(jié)TGF-p
信號傳導
盡管在出生后的大鼠肺中觀察到TGF-pi和TGF-J32的RNA水平增加 (Zhao等人，Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 278:L1231-1239 (2000))， TGF-P同種型在發(fā)育中的肺周邊中的表ii^莫式知之甚少。如圖1 所示，在10日齡小鼠幼崽肺中檢測TGF-j51-3的免疫反應性。在大傳導氣道中，以及在末端和呼吸性細支氣管中觀察到相似的TGF-(5同種型水平。 盡管在周邊肺中TGF-pi顯示具有最高的免疫反應性，但在該處也檢測到 TGF-P2和TGF-(53。由于期望確定抑制遠端發(fā)育中的肺的TGF-卩活性是 否抑制肺損傷對肺泡發(fā)育的影響，我們首先測試泛特異性TGF-(5中和抗體 是否識別周邊肺中的TGF-p。 1D11為雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，該雜交 瘤由用天然的牛TGF-p2免疫的Balb/c小鼠脾細胞產(chǎn)生(Dasch等人，J. Immunol. 142:1536-1541 (1989))。在體外用1D11中和TGF-(51-3(Dasch， 1989; Ruzek等人，Immimophamiacol. Immunotoxicol. 25:235-257 (2003》 并鑒定人胎盤和蛻膜組織中的TGF-p(Graham等人，Biol. Reprod. 46:561-572 (1992))。如圖2所示，用1D11檢測10日齡小鼠肺中的TGF-(5。 特別是在大小氣道和血管的壁中觀察到TGF-p免疫反應性。強烈的細胞外 TGF-p免疫反應性也與細胞外基質(箭頭)相關。
盡管出生前暴露于TGF-p中和抗體可以抑制具有細胞外基質異常的 小鼠中的TGF-p信號傳導(Neptune等人，2003)，但此方法能否調節(jié)受損 的發(fā)育中的肺中TGF-p信號傳導的預期增加仍不知曉。由于增加的TGF-|5 信號傳導與Smad2或3的磷酸化和細胞核定位增加相關(Nakao等人， Embo J. 16:5353-62 (1997)),使用免疫組織化學測試在小鼠幼崽肺中高氧 肺損傷是否與磷酸化的Smad2(p-Smad2)的細胞核區(qū)室化增加相關。用此 方法進行額外研究以確定TGF-p信號傳導的增加是否可以通過用抗 TGF-j5抗體進行處理而改變。如圖3所示，與用PBS處理過、暴露于空氣 的幼崽肺相比，用PBS處理過、慢性暴露于85% 02的幼崽肺中細胞核 p-Smad2的水平增加。重要的是，1D11處理與暴露于高水平氧的幼崽肺中 p-Smad2細胞核定位的減少相關。這些觀察結果表明高氧肺損傷增加 TGF-p信號傳導，且過度的TGF-p活性可以用TGF-p中和抗體減弱。而 且有趣的是，注意到PBS處理的暴露于空氣的肺中的一些肺細胞具有細胞 核p-Smad2。這說明TGF-(3在出生后的肺中有一些基礎活性，并在正常末 端肺發(fā)育的調控中起作用。實施例2:抗TGF-p抗體處理改善受損新生肺中的肺泡產(chǎn)生
新生嚙齒動物慢性吸入高水平氧導致肺損傷，抑制末端肺發(fā)育，其方 式與在患有BPD的嬰兒中所觀察到的相似(Bonikos等人，Lab Invest. 32:619-635 (1975); Frank等人，J. Appl. Physiol. 45:699-704 (1978); Pappas 等人，Lab Invest. 48:735-748 (1983); Bonikos, Am. J. Pathol. 85:623-650 (1976); Warner等人，Am.丄Physiol. 275:L110-117 (1998))。因此，使用 高氧小鼠幼崽的肺損傷模型檢測用TGF-p中和抗體處理是否改善肺泡的 發(fā)育。將新生小鼠幼崽連續(xù)暴露于85%0210天，這是因為在初步研究中 觀察到這樣的暴露水平導致肺泡產(chǎn)生減少，同時存活率>80%。如圖4所 示，慢性暴露于85% 02與末端肺發(fā)育減退相關。與呼吸空氣的對照幼崽 肺相比，受損的幼崽肺的遠端氣道顯示復雜程度較低的間質結構，和較少 的次級隔和肺泡(箭頭)。此末梢氣腔面積的增加可能由間質組織的減少所 引起，因為暴露于85% 02的肺的總體積與暴露于空氣的肺沒有不同(肺體 積，jil/g體重PBS和85。/o02 62士8，相對于PBS和空氣60±5， P>0.05)。
重要的是，暴露于抗TGF-p抗體改善受損新生肺的末端肺發(fā)育，因為 其致使周邊肺的分隔水平和氣腔面積接近PBS處理的呼吸空氣的對照肺中 的水平。此外，暴露于1D11未顯示與肺毒性相關。在1D11處理、暴露于 空氣的肺中，遠端氣道中沒有高水平的炎癥細胞浸潤。這些觀察結果表明 減弱異常的TGF-p信號傳導改善受損的新生小鼠肺中的末梢肺發(fā)育。
在暴露于85% 02的幼崽肺中對1D11對于Lm和。/。AVD的影響進行 了檢測，以確定用抗TGF-p抗體進行處理是否改善受損的新生肺中的肺泡 產(chǎn)生。受損新生肺中肺泡產(chǎn)生的減少與肺內表面積減少和肺泡的氣腔面積 增加相關，這可以用立體學方法進行量化(Weibel， 1979; Bolender等人， Am.丄Physiol. 265:L521-548 (1993))。例如，Lm與肺內表面積成反比， %AVD與肺泡氣腔面積逆相關。其他學者才艮道了高氧肺損傷令發(fā)育中的小 鼠和大鼠肺中的Lm和。/oAVD增加(Shaffer等人，Pediatr. Res. 21:14-20 (1987); Boros等人，Am. J. Physiol. 272:L433陽441 (1997); Warner等人， Am. ,J. Physiol. 275:L110-117 (1998)).如圖5A-5C所示，與暴露于空氣相比，慢性呼吸85% 02與Lm增加 30Q/o(PBS-空氣50.7±3.4nm,相對于PBS-02 67.3士3.7nm)、 ％AVD增加 20。/。(PBS-空氣55.6±3.7%，相對于PBS-02 67.8±4.0%)和次級隔密度降 低相關。重要的是，和這種與暴露于PBS和02相關的變化相比，用1D11 處理呼吸02的肺與Lm降低30%(lDll-O2 62.3士4.4nm)、 ％AVD降低 51%(lDll-02 61.6±4.2%)和次級隔密度提高(增加38%)相關。這些數(shù)據(jù)表 明TGF-p對于介導損傷對末端肺發(fā)育的影響起重要作用。有趣的是，單獨 用抗TGF-P抗體進行處理也與Lm和。AAVD的適度降低相關。由于對照 肺中觀察到的基礎TGF-(5信號傳導顯示還被對于1D11的暴露所調控，這 些后面的數(shù)據(jù)表明TGF-P調控新生肺中出生后肺泡形成的速度。
進行了其他研究以探索1D11的保護效應是否歸功于其同種型IgG,。 因此，用立體學方法檢測IgG,是否能保護高氧新生小鼠肺，令其肺泡產(chǎn)生 不祐:抑制。MOPC21為沒有已知抗原的1D11 IgG同種型配對的對照單克 隆抗體，出生前暴露于MOPC21并不減輕由慢性暴露于85% 02誘導的對 肺泡產(chǎn)生的抑制。暴露于85%02并用MOPC21或PBS處理的動物肺中， 對Lm和。/oAVD沒有觀察到區(qū)別(Lm: MOPC21-02 70.4土7.1nm，相對于 PBS-()2 68.0土3,7jim; %AVD: MOPC21-02 69.4±2.6%，相對于PBS-02 68.9±4.5%，兩項中PX).05)。這些數(shù)據(jù)與其他報道相一致，非特異性IgG 不能保護新生肺使其不發(fā)生對高氧癥誘導的肺泡產(chǎn)生的抑制(Padela等人， Am.丄Respir. Crit. Care Med. 172:907-914 (2005))。
實施例3:通過抗TGF-p處理改善受損新生肺中的肺泡隔的彈性蛋 白結構
彈性蛋白是肺泡壁和肺脈管系統(tǒng)中的重要成分，它的生物合成和胞外 組裝對于正常肺發(fā)育至關重要。在患有BPD的嬰兒肺中，同具有肺損傷的 新生小鼠一樣(Veness-Meehan等人，Pediatr. Res. 48:434-444 (2002)),在 次級峰頂部，彈性蛋白的正常結構被破壞，反而在遠端氣道壁中觀察到彈 性蛋白。由于TGF-p調控ECM蛋白質在間充質細胞(Leask等人，F(xiàn)aseb J.和肺(Kucich等人，Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 17:10-16 (1997); Parks等人，Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 17:1-2 (1997)) 中的表達和降解，檢測了用1D11處理對細胞外基質蛋白沉積的影響。如 圖6所示，慢性呼吸高水平02與次級隔中的彈性蛋白表達的改變相關。在 用PBS處理、呼吸空氣的幼崽(箭頭)中觀察到的彈性蛋白表達的典型模式 更加無序，散布在整個隔壁中(箭頭頭部)。如圖7A和7B所示，無序的彈 性蛋白表達才莫式與。/。EVD增加相關。重要的是，用1D11處理與氧處理的 肺次級峰中彈性蛋白沉積模式改善和正常的。/。EVD相關。這些數(shù)據(jù)表明 TGF-p對于介導高氧肺損傷中的彈性蛋白異常表達起重要作用。而且，這 些數(shù)據(jù)還表明用抗TGF-p抗體處理可以保護受損的新生肺不產(chǎn)生無序的 彈性蛋白形成。在此肺損傷的早期，在暴露于氧的小鼠幼崽肺中沒有觀察 到膠原分布的改變(數(shù)據(jù)未顯示)。
實施例4:用抗TGF-p抗體處理改善高氧的發(fā)育中肺的微血管發(fā)育 在發(fā)育中的小鼠和大鼠中，暴露于高水平氧改變正常的肺微血管發(fā)育 (Roberts等人，Pediatr. Res. 17:368-375 (1983)); D，Angio等人，F(xiàn)ront. Biosci. 7:dl609-1623 (2002))。已報道TGF-卩對于形成血管的細胞的分化起 調控作用(Roberts等人，Am. Rev. Respir. Dis. 140:1126-1128 (1989))。因 此，進行了研究以確定抗TGF-p抗體是否能改善在02損傷的新生幼崽肺 中觀察到的異常肺微血管發(fā)育。如圖8所示，慢性暴露于85% 02與肺微 血管的異形組^f目關。與暴露于空氣的對照肺中所觀察到的相比，慢性暴 露于85% 02的肺微血管內皮細胞的凝集素染色的模式更發(fā)散而較為無序。 這也與受損的幼崽肺周邊凝集素染色的細胞的體積密度增加相關；在暴露 于85%02 10天的幼崽肺中，凝集素的。/。FVD增加約4倍(圖9)。而且，用 11)11處理與用85% 02處理的肺遠端氣道中內皮細胞排列的相似模式相 關。此外，暴露于1D11與暴露于高水平02的肺中的凝集素。/。FVD減少將 近50%相關。這些數(shù)據(jù)表明TGF-p破壞受損的新生肺中的正常肺微血管 發(fā)育，用抗體中和TGF-(3可以減輕異常的肺血管發(fā)育。由于平滑肌細胞(SMC)影響肺微血管發(fā)育，進行了檢測以確定用 TGF-p中和抗體減輕受損的新生肺中的異常TGF-(5信號傳導是否與肌成 纖維細胞分布改善相關。如圖10所示，高氧肺損傷與遠端肺壁中aSMA 鑒定的肌成纖維細胞減少相關。在慢性暴露于85% 02的幼崽肺中，aSMA 的。/。FVD減少近于70。/。(圖9)。相反，用抗TGF-P抗體進行處理則增加受 損的肺中aSMA免疫反應性的量和。/。FVD。這些數(shù)據(jù)表明中和TGF-卩對 新生(幼崽)受損的肺微脈管系統(tǒng)具有有益影響。在此才莫型中，用aSMA 抗體進行的免疫組織化學測定顯示暴露于85% 0210天的幼崽肺中肺動脈 肌肉形成(muscularization)沒有增加(數(shù)據(jù)未顯示)。此外，慢性呼吸高水平 氧的幼崽的右心室質量沒有增加(RV:LV+S: PBS-空氣0.32士0.04; PBS-85%O2 0.25±0.05， P>0.05)。
實施例5:身體生長和用抗TGF-(5抗體進行處理
新生幼崽高氧肺損傷與身體生長減少相關。由于用抗TGF-p抗體進行 處理與周邊肺的肺泡產(chǎn)生和血管發(fā)生的改善相關，進行了研究以確定用 11)11處理是否對暴露于85% 02的幼崽生長有有益影響。與呼吸空氣的對 照幼崽相比，新生小鼠幼崽暴露于高水平氧與體重減少近30%相關(10日 齡時的體重PBS-空氣5.26±1.18 gm， PBS-85% 02: 3.74±1.0 gm; n=10-15， P<0.05)。用1D11處理的暴露于85% 02的幼崽體重(4.62士0.85 gm)與呼吸 空氣的對照幼崽體重沒有顯著差異。
在上述實施例中，暴露于泛特異性抗TGF-P抗體促進具有肺損傷的小 鼠幼崽的肺發(fā)育。如同之前報道的，觀察到不斷吸入高水平02使得在肺發(fā) 育決定性的終末期減少肺泡產(chǎn)生并改變血管發(fā)生(Roberts等人，Pediatr. Res, 17:368-375 (1983); Warner等人，Am. J. Physiol. 275:L110-117 (1998); D'Angio等人，F(xiàn)ront. Biosci. 7:dl609-1623 (2002))。這使得高氧小鼠幼崽 的病理檢查結果與患有BPD的新生兒的病理檢查結果相似。重要的是，出 生前階艮暴露于抗TGF-p抗體改善受損的新生幼崽肺的肺泡發(fā)育、彈性蛋 白沉積和微血管結構。這些研究結果第一次表明抗TGF-P治療可以保護受損的新生肺的肺 泡產(chǎn)生和血管發(fā)生不受抑制，并治療BPD。
依照發(fā)明書中所引用文獻的教導能夠最完整的理解本發(fā)明書。發(fā)明書 中的實施方案提供本發(fā)明實施方案的舉例說明，而不應，為對本發(fā)明范 圍的限制。本領域技術人員很容易認識到許多其他的實施方案也涵蓋在本 發(fā)明中。4^>開中引用的所有出版物、專利、專利申請和生物序列，其完 整引入本文作為參考。此處對任何文獻的引用均非承認該文獻為本發(fā)明的 背景技術。
除非另有說明，在說明書、包括權利要求書中使用的表達許多成份、 細胞培養(yǎng)、處理條件等的量的所有數(shù)字，應理解為在所有情況下均可任選 地以術語"約"進行修飾。因此，除非另有相反說明，數(shù)字參數(shù)為近似值， 并且可以根據(jù)本發(fā)明意圖獲取的期望性質而有所變化。除非另有說明，在 一系列要素前的術語"至少"應理解為指該系列中的每個要素。本領域技術 人員僅通過例行試驗即可認識到或能夠確定本文描述的本發(fā)明的具體實施 方案相等同的實施方案。下文的權利要求書旨在涵蓋這樣的等同實施方案。
權利要求
1.治療具有罹患支氣管肺發(fā)育不良風險的嬰兒的方法，其包括對嬰兒施用治療有效量的TGF-β拮抗物。
2. 權利要求1所述的方法，其中TGF-p拮抗物在產(chǎn)前期期間對嬰兒 施用。
3. 權利要求2所述的方法，其中TGF-p拮抗物在嬰兒出生前通過對 母親施用而施用于嬰兒。
4. 權利要求2所述的方法，其中TGF-p拮抗物直接對子宮內的嬰兒 施用。
5. 權利要求1所述的方法，其中TGF-p拮抗物在產(chǎn)后期期間對嬰兒 施用。
6. 權利要求1所述的方法，其中嬰兒的年齡為約妊娠24周至約產(chǎn)后6 個月。
7. 權利要求l所述的方法，其中嬰兒為在約妊娠24周至約妊娠32周 的年齡出生的早產(chǎn)兒。
8. 權利要求1所述的方法，其中嬰兒出生時的重量為約1500克或更少。
9. 權利要求1所述的方法，其中嬰兒出生時的重量為約1000克或更少。
10. 權利要求l所述的方法，其中TGF-p拮抗物選自抗TGF-p抗體、 抗TGF-p受體抗體和可溶性TGF-p受體。
11. 權利要求10所述的方法，其中抗體為人或人源化形式的單克隆抗 體1D11。
12. 權利要求l所述的方法，其中TGF-(5拮抗物為單克隆抗體，其施 用劑量的效價等同于劑量為0.1到10mg/kg體重的1D11抗體的效價。
13. 權利要求1所述的方法，其中TGF-(5拮抗物為單克隆抗體，其施 用劑量的效價等同于劑量為1 mg/kg體重的1D11抗體的效價。
14. 權利要求1所述的方法，其中TGF-p拮抗物為泛特異性的人或人 源化單克隆抗體。
15. 權利要求l所述的方法，其中TGF-p拮抗物通過肌內、靜脈內或 皮下施用。
16. 權利要求1所述的方法，其中TGF-P拮抗物以氣溶膠形式被吸入。
17. 權利要求16所述的方法，其中TGF-p拮抗物通過噴霧器或吸入 器施用。
18. 權利要求16所述的方法，其中所述氣溶膠形式包含直徑小于10nm 的小滴，所述小滴在合適的可藥用液體載體中包含TGF-p拮抗物。
19. 權利要求1所述的方法，其中TGF-p拮抗物以包含直徑小于10nm 的顆粒的粉狀形式纟皮吸入。
20. 權利要求1所述的方法，其還包含對嬰兒施用至少一種其他物質 或治療，所述物質或治療選自表面活性劑、氧治療、呼吸機治療、類固醇、 維生素A、 一氧化氮吸入、高卡路里營養(yǎng)制劑、利尿藥和支氣管擴張藥。
21. TGF-p拮抗物的用途，其在所需嬰兒中治療支氣管肺發(fā)育不良。
22. 權利要求21所述的用途，其中TGF-(J拮抗物用于減輕已確診患 有支氣管肺發(fā)育不良的嬰兒的該疾病。
23. TGF-p拮抗物在制備用于在所需嬰兒中治療支氣管肺發(fā)育不良的 藥物中的用途。
24. 治療嬰兒肺損傷的方法，其包括 對嬰兒施用治療有效量的TGF-p拮抗物；和 出生后對嬰兒提供氧補充。
25. 權利要求24所述的方法，其中TGF-p拮抗物選自抗TGF-卩抗體、 抗TGF-P受體抗體和可溶性TGF-p受體。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過在包括產(chǎn)前期和/或產(chǎn)后期的圍產(chǎn)期期間，對具有罹患支氣管肺發(fā)育不良風險的嬰兒(包括早產(chǎn)兒)施用TGF-β拮抗物進行治療的方法。對于在產(chǎn)前期期間施用，TGF-β拮抗物可以對子宮內的嬰兒直接施用，或對母親間接施用。
文檔編號C07K16/22GK101553254SQ200780044749
公開日2009年10月7日 申請日期2007年10月3日 優(yōu)先權日2006年10月3日
發(fā)明者J·B·施特賴桑德, J·D·小羅伯茨 申請人:建新公司