專(zhuān)利名稱(chēng)：：以條件性方式結(jié)合于需要的分子的氨基酸序列的制作方法以條件性方式結(jié)合于需要的分子的氨基酸序列本發(fā)明涉及以條件性方式(如本文中定義)結(jié)合于需要的分子的氨基酸序列，涉及包括所述氨基酸序列或基本由其組成的蛋白質(zhì)和多肽；涉及編碼所述氨基酸序列、蛋白質(zhì)或多肽的核酸；涉及包括所述氨基酸序列、蛋白質(zhì)和多肽的組合物，和具體地，藥物組合物；并且涉及所述氨基酸序列、蛋白和多肽的用途。由本文中進(jìn)一步的描述，本發(fā)明的其它方面、實(shí)施方案、優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用將變得清楚。結(jié)合于需要的分子的蛋白質(zhì)和肽是本領(lǐng)域中熟知的。一些非限制性實(shí)例包括具有免疫球蛋白折疊的肽和蛋白質(zhì)(即，免疫球蛋白)，諸如抗體和抗體片段、源自抗體和抗體片段的結(jié)合單位和結(jié)合分子(諸如重鏈可變結(jié)構(gòu)域、輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、結(jié)構(gòu)域抗體和適合于作為結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)和肽、單結(jié)構(gòu)域抗體和適合于作為單結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)和肽、納米抗體⑧和dAbsTM;以及前述任一項(xiàng)的合適片段)，以及包括所述抗體片段、結(jié)合單位或結(jié)合分子的構(gòu)建體(諸如scFv和雙抗體)。參考本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)。其它結(jié)合單位或結(jié)合分子例如包括，但不限于，基于除免疫球蛋白外其它蛋白質(zhì)支架的分子，其包括但不限于蛋白質(zhì)A結(jié)構(gòu)域、淀粉酶抑肽(tendamistat)、纖連蛋白、脂籠蛋白、CTLA-4、T-細(xì)胞受體、設(shè)計(jì)的錨蛋白重復(fù)序列和PDZ結(jié)構(gòu)域(Binz等，自然生物技術(shù)(Nat.Biotech)2005,巻23:1257)、和基于DNA或RNA的結(jié)合部分，其包括但不限于DNA或RNA適體(Ulrich等.組合的化學(xué)高通量篩選(CombChemHighThroughputScreen)20069(8):619-32)。在第一方面，本發(fā)明涉及針對(duì)需要的分子的氨基酸序列(本文中也稱(chēng)為"本發(fā)明的氨基酸序列")，其中所述氨基酸序列a)在第一生物學(xué)條件下，以1(TS摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合20于需要的分子；和b)在第二生物學(xué)條件下，以至少10倍不同于(具體地多于)所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的的解寓常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述需要的分子。本發(fā)明還涉及包括至少一種本發(fā)明氨基酸序列的化合物(如本文中定義)。所述化合物也在本文中稱(chēng)為"本發(fā)明的化合物"。由本文中進(jìn)一步的描述，本發(fā)明的其它方面和實(shí)施方案將變得清楚。在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中，術(shù)語(yǔ)"生物學(xué)條件"指動(dòng)物體(和具體地，哺乳動(dòng)物，諸如小鼠、大鼠、兔、狗或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物)或人體內(nèi)(例如，在至少一個(gè)細(xì)胞、組織、器官或生物體液，諸如血液或淋巴液中)可以存在的條件(或條件組)，所述動(dòng)物或人可以是健康動(dòng)物或人或患有疾病或病癥的動(dòng)物或人。術(shù)語(yǔ)"生物學(xué)條件"還包括體外或細(xì)胞測(cè)定或符合和/或代表動(dòng)物體或人體內(nèi)可以存在的條件的模型的條件。所述條件(無(wú)論在人體或動(dòng)物體體內(nèi)或在體外或細(xì)胞測(cè)定或模型中離體存在)對(duì)技術(shù)人員而言應(yīng)該是清楚的。由本文中的公開(kāi)內(nèi)容還應(yīng)該清楚的是，所述"第一生物學(xué)條件"與所述"第二生物學(xué)條件"至少在一方面不同。例如，第一生物學(xué)條件可以包括在第一生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件，且第二生物學(xué)條件包括第二生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件，其中所述第一和第二生理學(xué)區(qū)室或流體，在正常生理學(xué)條件下，由至少一種生物膜諸如細(xì)胞膜、細(xì)胞小泡或亞細(xì)胞區(qū)室的壁、或血管壁分開(kāi)。按照一個(gè)具體但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列(或包括本發(fā)明氨基酸序列的化合物)還能夠，在人或動(dòng)物體內(nèi)，穿過(guò)所述生物膜和或執(zhí)行容許其穿過(guò)所述生物膜的生物學(xué)作用或機(jī)制(諸如主動(dòng)或被動(dòng)運(yùn)輸機(jī)制)，以使得本發(fā)明的氨基酸序列或化合物從第一生理學(xué)區(qū)室(其中它暴露于所述第一生物學(xué)條件)進(jìn)入到第二生理學(xué)區(qū)室(其中它暴露于所述第二生理學(xué)條件)中。因此，按照本發(fā)明的一個(gè)具體的但非限制性方面，所述第一生物學(xué)條件可以包括人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞外普遍存在的生理學(xué)條件(即，細(xì)胞外條件，諸如在所述細(xì)胞直接接觸的環(huán)境或附近中、和/或在人體或動(dòng)21物體循環(huán)中的條件)，且所述第二生物學(xué)條件可以包括所述細(xì)胞中普遍存在的條件(即，細(xì)胞內(nèi)條件)(或反之亦然)。例如，按照本發(fā)明的這個(gè)具體但非限制性方面，所述第二生物學(xué)條件可以包括在人體或動(dòng)物體細(xì)胞的至少一種細(xì)胞內(nèi)或亞細(xì)胞區(qū)室(諸如內(nèi)體區(qū)室)中普遍存在的生理學(xué)條件，且所述叢二生物學(xué)條件可以包括所述細(xì)胞外普遍存在的條件(或反之亦然)。按照本發(fā)明的另一個(gè)具體但非限制性方面，所述第一生物學(xué)條件可以包括在所述人體或動(dòng)物體的循環(huán)中(例如在血流或淋巴系統(tǒng)中)普遍存在的生理學(xué)條件，且所述第二生物學(xué)條件可以包括在人體或動(dòng)物體的至少一種組織或細(xì)胞中(諸如，在所述細(xì)胞的至少一種亞細(xì)胞區(qū)室，諸如內(nèi)體區(qū)室中)普遍存在的條件(或反之亦然)。按照本發(fā)明的一個(gè)具體方面，當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列(象這樣或與需要的分子結(jié)合)能夠被吸收(例如，通過(guò)內(nèi)在化、胞飲作用、胞轉(zhuǎn)、胞吞、吞噬或類(lèi)似的生物學(xué)機(jī)制)或已經(jīng)被吸收，并且處于由人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞以胞吐作用或其它方式轉(zhuǎn)移出細(xì)胞的過(guò)程中時(shí)，所述第一生物學(xué)條件可以包括這樣的生理學(xué)條件，在所述生理學(xué)條件下，氨基酸序列在被細(xì)胞吸收前存在(例如，在本發(fā)明的氨基酸序列通過(guò)內(nèi)在化或胞飲作用、胞轉(zhuǎn)或胞吞被吸收進(jìn)入的細(xì)胞外部，例如在血流或淋巴系統(tǒng)中)，且所述第二生物學(xué)條件包括這樣的生理學(xué)條件，在所述生理學(xué)條件下，氨基酸序列在氨基酸序列已經(jīng)被吸收到細(xì)胞中后存在(例如，在亞細(xì)胞區(qū)室中，其中本發(fā)明的氨基酸序列隨著內(nèi)在化、胞飲作用、胞轉(zhuǎn)或胞吞(立即)存在(諸如內(nèi)體、溶酶體、胞飲泡、或其它細(xì)胞小泡);或反之亦然。如下文中更詳細(xì)解釋地，當(dāng)所述需要的分子是在其再循環(huán)過(guò)程中被該細(xì)胞吸收(即，進(jìn)行內(nèi)在化、胞飲作用、胞轉(zhuǎn)或胞吞或類(lèi)似生物學(xué)機(jī)制)的分子，如關(guān)于例如血清清蛋白的情形中時(shí)，這個(gè)方面是特別重要的。因此，在一個(gè)具體但非限制性方面，所述氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)并在該過(guò)程中被至少一種細(xì)胞吸收的意欲或需要的分子，且所述第一生物學(xué)條件包括關(guān)于涉及需要的化合物再循環(huán)、的動(dòng)物體或人體的至少一種細(xì)胞的細(xì)胞外條件(即，在所述細(xì)胞外普遍存在的條件，諸如在細(xì)胞表面或在細(xì)胞的直接接觸的環(huán)境或附近中的條件，和/或在循環(huán)中，例如在血流或淋巴系統(tǒng)中普遍存在的條件)，且所述第二生物學(xué)條件包括細(xì)胞內(nèi)普遍存在的條件(即，細(xì)胞內(nèi)的條件或在它的一種細(xì)胞內(nèi)或亞細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的條件,諸如該細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)體或小泡中，和具體地在涉及蛋白質(zhì)或多肽再循環(huán)的細(xì)胞內(nèi)或亞細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的條件)。作為本發(fā)明這個(gè)方面的非限制性實(shí)例，本發(fā)明的氨基酸序列可以針對(duì)通過(guò)人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞進(jìn)行再循環(huán)的血清蛋白(諸如，血清清蛋白)，且所述第一生物學(xué)條件可以包括在所述人體或動(dòng)物體的循環(huán)中普遍存在的條件，且所述第二生物學(xué)條件可以包括所述細(xì)胞內(nèi)普遍存在的條件(即，細(xì)胞內(nèi)的條件或在它的一種細(xì)胞內(nèi)或亞細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的條件，諸如該細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)體或小泡中，和具體地在涉及蛋白質(zhì)或多肽再循環(huán)的細(xì)胞內(nèi)或亞細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的條件)。作為本發(fā)明這個(gè)方面的另一個(gè)非限制性實(shí)例，本發(fā)明的氨基酸序列可以針對(duì)由所述細(xì)胞再循環(huán)的細(xì)胞表面上的蛋白質(zhì)或多肽(諸如受體)，且所述第一生物學(xué)條件可以包括在細(xì)胞表面處或在動(dòng)物體或人體的所述細(xì)胞直接接觸的環(huán)境中普遍存在的條件，且所述第二生物學(xué)條件可以包括所述細(xì)胞內(nèi)普遍存在的條件(即，細(xì)胞內(nèi)的條件或在它的一種細(xì)胞內(nèi)或亞細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的條件，諸如在該細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)體或小泡中，和具體地在涉及蛋白質(zhì)或多肽再循環(huán)的細(xì)胞內(nèi)或亞細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的條件)。這個(gè)方面(包括它的兩個(gè)具體實(shí)例)還可以容許使本發(fā)明的氨基酸序列(或包括本發(fā)明氨基酸序列的化合物，如本文中進(jìn)一步所述)靶向特異性細(xì)胞或組織，其中所述需要的分子通過(guò)內(nèi)在化、胞飲作用、胞轉(zhuǎn)或胞吞被吸收到所述特異性細(xì)胞或組織中(不管是作為再循環(huán)一部分還是其它方面)。在細(xì)胞外，本發(fā)明的氨基酸序列或化合物將以高親和性或親和力結(jié)合于所述需要的分子(即，以如本文中關(guān)于在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合所述的締合常數(shù)或解離常數(shù))，并且在結(jié)合于所述需要的分子的同時(shí)，會(huì)因此被吸收到細(xì)胞內(nèi)。隨著所述內(nèi)在化、胞飲作用、胞轉(zhuǎn)或胞吞，本發(fā)明的氨基酸序列或化合物與所述需要的化合物的親和性或親和力將下降(即，達(dá)到如本文中關(guān)于在所述第二生物學(xué)條件下結(jié)合所述的締合常數(shù)或解離常數(shù))，從而使，氨基酸序列或化合物從所述需要的分子中釋放出來(lái)，并可以在細(xì)胞中執(zhí)行其意欲的或理想的生物學(xué)、生理學(xué)、藥物或治療作用。通常，如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，該機(jī)制還可用于容許本發(fā)明的氨基酸序列或化合物穿越細(xì)胞的細(xì)胞膜并進(jìn)入所述細(xì)胞，并且還可以用于細(xì)胞內(nèi)耙向本發(fā)明的化合物。按照另一個(gè)具體但非限制性方面，所述第一生物學(xué)條件和所述第二生物學(xué)條件可以關(guān)于pH而不同，其中所述第一生物學(xué)條件可以包括高于7.0的生理學(xué)pH,例如高于7.1的pH或高于7.2的pH，諸如7.2-7.4范圍內(nèi)的pH;且所述第二生物學(xué)條件可以包括低于7.0的生理學(xué)pH,例如低于6.7的pH或低于6.5的pH,諸如6.5-6.0范圍內(nèi)的pH(或反之亦然)。按照另一個(gè)具體但非限制性方面，所述第一生物學(xué)條件和所述第二生物學(xué)條件可以關(guān)于蛋白酶的數(shù)量和類(lèi)型而不同。氨基酸序列對(duì)蛋白酶降解的易感性是高度可變的并且是序列和蛋白質(zhì)依賴(lài)的,蛋白質(zhì)體內(nèi)降解水平應(yīng)該依賴(lài)于該氨基酸序列實(shí)際遭遇的蛋白酶的類(lèi)型。例如在內(nèi)體中，存在許多半胱氨酸組織蛋白酶；在溶酶體中，存在一大組脂肪酶、糖酶、蛋白酶和核酸酶，它們?cè)谒嵝詐H(4.8)時(shí)具有最佳活性；在細(xì)胞外空間中和在血流中，許多其它蛋白酶(例如絲氨酸蛋白酶)具有活性。按照另一個(gè)具體但非限制性方面，所述第一和第二生物學(xué)條件關(guān)于下列因素的任意兩種、任意三種或基本所有而不同pH、離子強(qiáng)度、蛋白酶含量；其中所述因素可以如本文中所述和/或可以區(qū)別于如本文中所述。按照另一個(gè)具體但非限制性方面，所述第一生物學(xué)條件可以包括第一生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件，且所述第二生物學(xué)條件包括第二生理學(xué)區(qū)室或流體普遍存在的生理學(xué)條件，其中所述第一和第二生理學(xué)區(qū)室或流體，在正常生理學(xué)條件下，由至少一種生物膜諸如細(xì)胞膜、細(xì)胞小泡或亞細(xì)胞區(qū)室的壁、或血管壁分開(kāi)，其中所述第一生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的條件和所述第二生理學(xué)區(qū)室或流體普遍存在的條件關(guān)于下列因素的任意兩種、任意三種或基本全部而不同pH、離子強(qiáng)度、蛋白酶含量；其中所述因素可以如本文所述和/或可以區(qū)別于本文中所述。如由本文中的描述應(yīng)該清楚地，本發(fā)明的氨基酸序列和化合物是這樣的，以致它們分別在所述第一和第二生物學(xué)條件下，以不同的解離常數(shù)或締合常數(shù)(如本文中定義)結(jié)合于它們各自的需要的分子。這在本文中通常稱(chēng)為"條斧絲^^智^",且顯示出所述條件性的結(jié)合的氨基酸序列在本24文中也稱(chēng)為"姿,絲游，氨基酸序列(諸如，例如，"姿/f絲游韻襲貧謬，)或?yàn)?條斧絲游翁會(huì)欽'。本發(fā)明的條件性氨基酸序列(以及包括本發(fā)明條件性氨基酸序列的化合物)優(yōu)選是這樣的，以致它們?cè)谒龅诙飳W(xué)條件(或生物學(xué)條件組)下，以這樣的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于它們意欲或需要的分子，所述解離常數(shù)(KD)是該條件性的氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件(或生物學(xué)條件組)下結(jié)合于它的意欲的或需要的分子的解離常數(shù)的至少10倍，更優(yōu)選地100倍，更優(yōu)選地至少1000倍;和/或在所述第二生物學(xué)條件(或生物學(xué)條件組)下，以這樣的結(jié)合親和性(Ka)結(jié)合于它的意欲的或需要的分子，所述結(jié)合親和性(Ka)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件(或生物學(xué)條件組)下結(jié)合于所述意欲或需要的分子的結(jié)合親和性的至少10分之一，更優(yōu)選地100分之一，更優(yōu)選地至少I(mǎi)OOO分之一。因此，通過(guò)舉例說(shuō)明而非限制的方式，當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列可以在所述第一第二生物學(xué)條件下，以約l(T7摩爾/升的解離常數(shù)(Kd)和/或以約107M—1結(jié)合親和性(Ka)結(jié)合于所述需要的分子時(shí)，本發(fā)明的氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以約10—6摩爾/升或更高的解離常數(shù)(Kd)和/或以約106M—1或更低的結(jié)合親和性(KA),優(yōu)選地以約IO'5摩爾/升或更高的解離常數(shù)(Kd)和/或以約105M"或更低的結(jié)合親和性(KA),和更優(yōu)選地以約l(T4摩爾/升或更高的解離常數(shù)(Kd)和/或以約1(^M"或更低的結(jié)合親和性(KA)結(jié)合于所述需要的分子。另外，本發(fā)明的氨基酸序列和化合物優(yōu)選地是這樣的，以致它們?cè)谒龅谝簧飳W(xué)條件下，以10_6摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD),更優(yōu)選地以l(T7摩爾/升或更低的解離常數(shù)(Kd)，和甚至更優(yōu)選地以10—8摩爾/升或更低的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述意欲或需要的分子。此外，本發(fā)明的氨基酸序列或化合物還優(yōu)選地是這樣的，以致它們?cè)谒龅诙飳W(xué)條件下，以10.6摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD),更優(yōu)選地以1CT5摩爾/升或更高的解離常數(shù)(Kd)，和甚至更優(yōu)選地以IO'4摩爾/升或更高的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述意欲或需要的分子。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，解離常數(shù)可以是實(shí)際或表觀解離常數(shù)。用于確定解離常數(shù)的方法應(yīng)該是技術(shù)人員清楚的，并且例如，包括本文中提到的技術(shù)。在這個(gè)方面，還應(yīng)該清楚的是，可能不能測(cè)量大于10—4摩爾/升或10—3摩爾/升(例如，10'2摩爾/升)的解離常數(shù)。因此，當(dāng)不能測(cè)量解離常數(shù)時(shí)，應(yīng)該認(rèn)為為了本發(fā)明的目的，解離常數(shù)是10—5摩爾/升的解離常數(shù)的至少1000倍。任選地，如技術(shù)人員也應(yīng)該清楚地，可以基于(實(shí)際或表觀)締合常數(shù)(KA)，根據(jù)關(guān)系[KD-1/KA]，計(jì)算(實(shí)際或表觀)解離常數(shù)。為了該目的，技術(shù)人員應(yīng)該清楚用于確定在某一pH值處締合常數(shù)的方法，且例如包括本文中提到的技術(shù)。而且，由此，應(yīng)該清楚本發(fā)明的氨基酸序列還可以是這樣的，以致它們?cè)诘诙飳W(xué)條件下以這樣的結(jié)合親和性(Ka)結(jié)合于所述需要的分子，所述結(jié)合親和性(KA)少于所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的結(jié)合親和性至少10倍。親和性表示分子相互作用的強(qiáng)度或穩(wěn)定性。通常通過(guò)Kd，或解離常數(shù)表示親和性，其具有單位摩爾/升，簡(jiǎn)單表示為M。還可以將親和性表示為締合常數(shù)，Ka，其等于1/Kd，且具有單位(摩爾/升)"，簡(jiǎn)單表示為M"。貫穿本文，我們將通過(guò)其Kd值表示分子相互作用的穩(wěn)定性。但是應(yīng)該理解，由于關(guān)系式Ka-l/Kd，通過(guò)其Kd值指定分子相互作用的強(qiáng)度，也自動(dòng)指定Ka值。Kd也表征熱力學(xué)意義中的分子相互作用強(qiáng)度，因?yàn)樗ㄟ^(guò)眾所周知的關(guān)系式DG:RT.ln(Kd)(等價(jià)地，DG--RT.ln(Ka))與結(jié)合自由能(DG)相關(guān)，其中R等于氣體常數(shù)，T等于絕對(duì)溫度且hi表示自然對(duì)數(shù)。有意義的生物學(xué)復(fù)合物的Kd典型地在1(X10M(O.lnM)-l(T5M(10000nM)的范圍內(nèi)。相互作用越強(qiáng)，其Kd越低。還可以將Kd表示為復(fù)合物解離率常數(shù)(表示為koff)，與其締合率(表示為k^)的比。換言之，Kd-解離率/締合率(k。fj/k。n)。清楚地表示為K『締合率/解離率(k。n/k。ff)。解離率k。ff具有單位s"(其中s是秒的SI單位符號(hào))。締合率kon具有單位M'V1。締合率可以在102M"s"—約107M'V1之間變化，接近雙分子相互作用的擴(kuò)散-限制性締合率常數(shù)。解離率通過(guò)關(guān)系式tu^ln(2)/koff，與給定分子相互作用的半衰期相關(guān)。解離率可以在l(TV'(接近具有多日t^的不可逆復(fù)合物)一Is'1(t1/2=0.69s)的范圍內(nèi)變化。兩分子之間分子相互作用的親和性可以通過(guò)不同的技術(shù)，諸如眾所周26知的表面等離子體共振(SPR)生物傳感器技術(shù)(例如，Ober等，國(guó)際免疫學(xué)(Intern.Immunology)，13,1551-1559,2001使用了Biacore3000SPR生物傳感器研究不同pH條件下清蛋白與FcRn的親和性)測(cè)量，其中將一個(gè)分子固定在生物傳感器芯片上，并在流動(dòng)條件下使另一個(gè)分子經(jīng)過(guò)該固定的分子，從而產(chǎn)生締合率(K。n)、解離率(k。ff)測(cè)量值和由此的Kd(或Ka)值。應(yīng)該注意到，如果測(cè)量過(guò)程以某種方式影響所示分子固有的結(jié)合親和性，例如通過(guò)與在一個(gè)分子的生物傳感器上的涂層相關(guān)的人為產(chǎn)物，則測(cè)量的Kd對(duì)應(yīng)于表觀Kd。而且，如果一個(gè)分子包含多于一個(gè)關(guān)于另一個(gè)分子的識(shí)別位點(diǎn)，則可以測(cè)量表觀Kd。在所述情形中，測(cè)量的親和性可能受到兩分子相互作用親和力的影響。例如，關(guān)于固定的人FcRn的SPR實(shí)驗(yàn)對(duì)人IgG顯示出比FcRn和固定的IgG相互作用親和性顯著更高的親和性(親和力)，相當(dāng)于FcRn-IgG相互作用2:1的化學(xué)定量關(guān)系(Sanchez等,生物化學(xué)(Biochemistry)，38,9471-9476,1999)?？梢杂糜谠u(píng)估親和性的另一種方法是Friguet等的2-步ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)程序(免疫學(xué)方法雜志(J.Immunol.Methods)，77,305-19，1985)。該方法建立溶液相結(jié)合平衡測(cè)量法，并避免將所述分子之一吸附到支持物諸如塑料上可能涉及的人為產(chǎn)物。例如，Nguyen等(蛋白質(zhì)工程設(shè)計(jì)和選擇(ProteinEngDesSel),19，291-297,2006)近期利用Friguet測(cè)定測(cè)量了Fab構(gòu)建體與清蛋白的親和性。然而，精確測(cè)量Kd可能需要大量勞動(dòng)，所以，通常確定表觀Kd值來(lái)評(píng)估兩分子的結(jié)合強(qiáng)度。應(yīng)該注意到只要以一致的方式進(jìn)行所有測(cè)量(例如，保持測(cè)定條件不變)，則表觀Kd測(cè)量值可以用作真實(shí)Kd的近似值，且因此在本文件中，應(yīng)該認(rèn)為Kd和表觀Kd是同等重要或相關(guān)的。最后，應(yīng)該注意到在許多情形中，有經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)家判斷相對(duì)于一些參考分子來(lái)確定結(jié)合親和性是方便的。例如，為了評(píng)估分子A和B之間的結(jié)合強(qiáng)度，人們可以例如使用參考分子C，已知所述參考分子C結(jié)合于B并由熒光基團(tuán)或發(fā)色基團(tuán)或其它化學(xué)部分，諸如用于在ELISA或FACS中簡(jiǎn)單檢測(cè)(熒光激活的細(xì)胞分類(lèi))的生物素或其它形式(用于熒光檢測(cè)的熒光團(tuán)、用于光吸收檢測(cè)的發(fā)色團(tuán)、用于鏈霉抗生物素蛋白-介導(dǎo)的ELISA檢測(cè)的生物素)適當(dāng)標(biāo)記。典型地，將所述參考分子C保持為固定濃度，且B的濃度由于給定的B濃度或量而變化。作為結(jié)果，獲得對(duì)應(yīng)于A濃度的IC50值，在所述濃度時(shí)，在缺乏A的條件下，對(duì)C測(cè)量的信號(hào)減半。倘若Kd參考，參考分子的Kd,以及參考分子的總濃度c參考是已知的，則可以由下列公式Kd=IC50/(l+c參考/Kd參考)獲得關(guān)于相互作用A-B的表觀Kd。注意，如果c參考"^Kd參考，則Kd-IC50。倘若人們以一致的方式進(jìn)行IC50測(cè)量(例如，保持c參考固定)，則可以通過(guò)IC50評(píng)估分子相互作用的強(qiáng)度或穩(wěn)定性，并且貫穿本文將該測(cè)量判定為等價(jià)于Kd或表觀Kd。優(yōu)選地，作為單價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以?xún)?yōu)于3000nM,優(yōu)選地優(yōu)于300nM,更優(yōu)選地優(yōu)于30nM諸如優(yōu)于3nM的親和性(Kd)結(jié)合于所述意欲或需要的分子，并且應(yīng)該在所述第二生物學(xué)條件下，以差至少10倍、優(yōu)選地差超過(guò)100倍，諸如差至少I(mǎi)OOO倍或更多的親和性結(jié)合于所述意欲或需要的分子。例如,且不限制地,單價(jià)氨基酸序列可以在所述第二生物學(xué)條件下，以比3nM更差，更優(yōu)選地比30nM更差，更優(yōu)選地比300nM更差，諸如比3000nM更差的親和性結(jié)合于所述意欲或需要的分子。除相互作用的親和性外，相互作用的動(dòng)力學(xué)也可以是分子的條件性結(jié)合行為中的激勵(lì)因數(shù)(drivingfactor)。例如締合率和解離-率中的差別可以在影響結(jié)合事件結(jié)果中起作用，例如隨著改變生物學(xué)條件與結(jié)合抗原分開(kāi)的速度，隨著改變生物學(xué)條件結(jié)合于抗原的速率。優(yōu)選地，作為單價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以?xún)?yōu)于10-'s—1,優(yōu)選地優(yōu)于10-、—1，更優(yōu)選地優(yōu)于10-33_1諸如優(yōu)于10、"的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子，且應(yīng)該在所述第二生物學(xué)條件下以差至少10倍，優(yōu)選地差超過(guò)100倍，諸如差至少1000倍或更多的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子。例如，且不限制地,單價(jià)氨基酸序列可以在所述第二生物學(xué)條件下，以比l(T4s"更差，更優(yōu)選地比IO'3s"更差，更優(yōu)選地比10—2s"更差，諸如比10'1s-1更差的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子。優(yōu)選地,作為單價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以?xún)?yōu)于102]^13—1,優(yōu)選地優(yōu)于103M-1S-1,更優(yōu)選地優(yōu)于104M—1s'1諸如優(yōu)于105M—1s'1的締合率結(jié)合于所述意欲或需要的28分子，且應(yīng)該在所述第二生物學(xué)條件下，以差至少10倍，優(yōu)選地差超過(guò)100倍，諸如差至少1000倍或更多的締合率結(jié)合于所述意欲或需要的分子。例如，且不限制地,單價(jià)氨基酸序列可以在所述第二生物學(xué)條件下，以比105NT1s"更差，更優(yōu)選地比104M—1s"更差，更優(yōu)選地比103M"s—1更差:諸如比1(^M"s"更差的相應(yīng)締合率，結(jié)合于所述意欲或需要的分子。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中,可以作為單價(jià)，二價(jià)或多價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(例如如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以0.1s"-IO-6s",優(yōu)選地0.1s"-l(T5s"和更優(yōu)選地0.01s'1-IO-4s"的解離率(K。ffrate)(g卩，解離率)，結(jié)合于所述意欲或需要的分子，且所述本發(fā)明的氨基酸序列應(yīng)該在所述第二生物學(xué)條件下，以所述第一生物學(xué)條件下解離率的至少1,5倍(higherormore)的解離率，優(yōu)選地以所述第一生物學(xué)條件下解離率的大于1,7倍(higherormore)的解離率，更優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的2倍的解離率，更優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的3倍的解離率，更優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的5倍的解離率，更優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的10倍的解離率，更優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的20倍的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，可以作為單價(jià)，二價(jià)或多價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(例如如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以0.1s"-IO-6s"，優(yōu)選地0.1s"■IO-5s"和更優(yōu)選地0.01s-'-10-4s"的解離率(K。ffmte)(即，解離率)，結(jié)合于所述意欲或需要的分子，且所述本發(fā)明的氨基酸序列應(yīng)該在所述第二生物學(xué)條件下，以所述第一生物學(xué)條件下解離率的至少1,5倍的解離率，優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的大于1，7倍的解離率，更優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的2倍的解離率,更優(yōu)選地在所述第一生物學(xué)條件下解離率的3倍的解離率，更優(yōu)選地在所述第一生物學(xué)條件下解離率的5倍的解離率，更優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的10倍以上的解離率，更優(yōu)選地所述第一生物學(xué)條件下解離率的20倍的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子；且其中，所述本發(fā)明的氨基酸序列單價(jià)結(jié)合于血清蛋白(優(yōu)選地，血清清蛋白)并以單價(jià)、二價(jià)或多價(jià)方式結(jié)合于靶蛋白。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，可以作為單價(jià)，二價(jià)或多價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(例如如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以解離率(K。ffrate)(g卩，解離率)0.1s—1-10'6s—1結(jié)合于所述意欲或需要的分子，且所述本發(fā)明的氨基酸序列應(yīng)該，在所述第二生物學(xué)條件下，以所述第一生物學(xué)條件下解離率的至少2倍以上的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，可以作為單價(jià)，二價(jià)或多價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(例如如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以解離率(K。ffrate)(g卩，解離率)O.ls"-10_6s"結(jié)合于所述意欲或需要的分子，且所述本發(fā)明的氨基酸序列應(yīng)該，在所述第二生物學(xué)條件下，以所述第一生物學(xué)條件下解離率的至少5倍以上的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中,可以作為單價(jià)，二價(jià)或多價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(例如如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以解離率(k^rate)(即，解離率)0.01s"-10'4s—1結(jié)合于所述意欲或需要的分子，且所述本發(fā)明的氨基酸序列應(yīng)該，在所述第二生物學(xué)條件下，以所述第一生物學(xué)條件下解離率的至少2倍的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子；且其中，所述本發(fā)明的氨基酸序列單價(jià)結(jié)合于血清蛋白(優(yōu)選地，血清清蛋白)并以單價(jià)、二價(jià)或多價(jià)方式結(jié)合于靶蛋白。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中,可以作為單價(jià)，二價(jià)或多價(jià)形式的本發(fā)明氨基酸序列(例如如本文中所述)應(yīng)該，在所述第一生物學(xué)條件下，以解離率(K。ffrate)(即，解離率)0.01s"-l(T4s"結(jié)合于所述意欲或需要的分子，且所述本發(fā)明的氨基酸序列應(yīng)該，在所述第二生物學(xué)條件下，以所述第一生物學(xué)條件下解離率的至少5倍的解離率結(jié)合于所述意欲或需要的分子;且其中，所述本發(fā)明的氨基酸序列單價(jià)結(jié)合于血清蛋白(優(yōu)選地，血清清蛋白)并以單價(jià)、二價(jià)或多價(jià)方式結(jié)合于靶蛋白?？梢砸匀魏伪旧硪阎暮线m方式，包括，例如，斯卡査德分析和/或競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定，諸如放射性免疫測(cè)定(RIA)、酶免疫測(cè)定(EIA)和夾心式競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定，及其在本領(lǐng)域中本身已知的不同變體，確定氨基酸序列分別在第一和第二生物學(xué)條件下與意欲或需要的分子的結(jié)合(包括所述結(jié)合的締合30常數(shù)、解離常數(shù)、親和性、締合率或解離率)。而且，如上提到地，可以在人體或動(dòng)物體內(nèi)體內(nèi)測(cè)量所述結(jié)合，或-當(dāng)這不可行或行不通時(shí)-例如，在體外或細(xì)胞測(cè)定或?qū)?yīng)于和/或代表動(dòng)物體或人體內(nèi)可以存在的條件的模型的條件下，離體地測(cè)量所述結(jié)合。例如，當(dāng)所述第一或第二生物學(xué)條件包括人或動(dòng)物循環(huán)中普遍存在的生理學(xué)條件時(shí)，可以在血液樣品、血漿樣品或另一種源自所述人或動(dòng)物的合適血液-或血漿-來(lái)源制劑或溶液中確定本發(fā)明的氨基酸序列在所述條件下的結(jié)合。當(dāng)所述第一或第二生物學(xué)條件包括細(xì)胞中普遍存在的生理學(xué)條件時(shí)，可以在合適的細(xì)胞提取物中確定本發(fā)明的氨基酸序列在所述條件下的結(jié)合。當(dāng)所述第一或第二生物學(xué)條件在pH和/或離子強(qiáng)度方面不同時(shí)，例如可以利用一種或多種合適的生理學(xué)緩沖液或溶液確定本發(fā)明的氨基酸序列在所述第一和第二生物學(xué)條件下(即，在pH和/或離子強(qiáng)度的相關(guān)值處)的結(jié)合。本發(fā)明的氨基酸序列可以是能夠結(jié)合于(如本文中所述)和/或?qū)σ庥蛐枰姆肿泳哂杏H和性的任何蛋白質(zhì)或多肽(或其衍生物，諸如加入聚乙二醇的衍生物)。按照本發(fā)明的具體但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列可以選自由下列各項(xiàng)組成的組具有免疫球蛋白折疊的蛋白質(zhì)和肽，基于除免疫球蛋白外其它蛋白質(zhì)支架的蛋白質(zhì)和肽，其包括但不限于蛋白質(zhì)A結(jié)構(gòu)域、淀粉酶抑肽、纖連蛋白、脂籠蛋白、CTLA-4、T-細(xì)胞受體、設(shè)計(jì)的錨蛋白重復(fù)序列和PDZ結(jié)構(gòu)域(Binz等，自然生物技術(shù)(Nat.Biotech)2005,巻23:1257),和基于DNA或RNA的結(jié)合部分，包括但不限于DNA或RNA適體(Ulrich等.CombChemHighThroughputScreen20069(8):619-32);且特別地選自由具有免疫球蛋白折疊的蛋白質(zhì)和肽(或選自任意前述各項(xiàng)的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體、衍生物、等)組成的組。而且，按照一個(gè)具體但非限制性方面,本發(fā)明的氨基酸序列可以包括四種彼此間由三種互補(bǔ)性決定區(qū)隔開(kāi)的構(gòu)架區(qū)或基本由其組成(或來(lái)自所述蛋白質(zhì)或多肽的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體、衍生物、等。如本文中進(jìn)一步所述，所述部分或片段優(yōu)選地至少包括所述蛋白質(zhì)或多肽的至少一種CDR)。例如，本發(fā)明的氨基酸序列可以選自由下列各項(xiàng)組成的組抗體和抗體片段、源自抗體或抗體片段的結(jié)合單位和結(jié)合分子、和抗體片段、結(jié)合單位或結(jié)合分子；且特別選自由下列各項(xiàng)組成的組重鏈可變結(jié)構(gòu)域、輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、結(jié)構(gòu)域抗體和合適于作為結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)和肽、單結(jié)構(gòu)域抗體和適合于作為單結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)和肽、納米抗體⑧和dAbsTM(或選自所述蛋白質(zhì)或多肽的合適'部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體、衍生物、等。而且，所述部分或片段優(yōu)選地至少包括至少一種CDR)。根據(jù)本發(fā)明的氨基酸序列是被如何選擇的，它優(yōu)選地包括4-500個(gè)氨基酸殘基，更優(yōu)選地5-300個(gè)氨基酸殘基,和甚至更優(yōu)選地10-200個(gè)氨基酸殘基，諸如20-150個(gè)氨基酸殘基，例如約30,40,50,60,70,80，90，100,110:120,130或140個(gè)氨基酸殘基。而且，本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選地包括單氨基酸鏈(具有或不具有二硫鍵/鍵合)。在一個(gè)具體但非限制性實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列是基本不包括免疫球蛋白折疊的小線(xiàn)性肽。在該實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列可以包括3-50,優(yōu)選地5-40,諸如約10，15,20或25個(gè)氨基酸殘基。所述肽可以例如是小的合成或半-合成肽和/或可以源自或包括至少一種來(lái)自針對(duì)所述意欲或需要的分子的本發(fā)明免疫球蛋白(即，其中所述免疫球蛋白可以如本文中進(jìn)一步所述)的CDR。例如，所述肽可以源自或包括至少一種來(lái)自本發(fā)明重鏈可變結(jié)構(gòu)域、輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、納米抗體TM或dAbsTM，和特別來(lái)自本發(fā)明納米抗體的CDR(諸如CDR1,CDR2,和特別CDR3)。參考例如WO03/050531(埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)和AlgonomicsN.V.),其描述了用于識(shí)別和選擇肽，具體地結(jié)合于給定靶標(biāo)或目的靶標(biāo)的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域CDR序列的方法。按照另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的氨基酸序列選自由下列各項(xiàng)組成的組結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體和適合于作為單結(jié)構(gòu)域抗體使用蛋白質(zhì)和肽、納米抗體⑧和dAbsTM(或其合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體、衍生物)。最優(yōu)選地，本發(fā)明的氨基酸序列是VHH結(jié)構(gòu)域納米抗體⑧。有關(guān)用于生成所述Vhh結(jié)構(gòu)域納米抗體⑧的納米抗體和方法的描述，參考本文中進(jìn)一步引用的現(xiàn)有技術(shù)。本發(fā)明的氨基酸序列針對(duì)的意欲或需要的分子可以是任何合適或需要的分子。通常，它應(yīng)該是人體或動(dòng)物體中存在的分子，例如人體或動(dòng)物體中天然存在的分子；當(dāng)人或動(dòng)物患有疾病或病癥時(shí)所述人體或動(dòng)物體中存在的分子;或人體或動(dòng)物體中天然不存在的(但被施用或以別的方式進(jìn)入人體或動(dòng)物體中的)分子。當(dāng)所述需要或意欲的分子是人體或動(dòng)物體中或患有疾病或病癥的人體或動(dòng)物體上天然存在的分子時(shí)，所述分子可以例如是任何生物學(xué)分子，諸如蛋白質(zhì)、(多)肽、受體、抗原、抗原決定簇、酶、因子、等?；诒疚闹械墓_(kāi)內(nèi)容，技術(shù)人員應(yīng)該清楚這些和其它合適生物學(xué)分子的實(shí)例。當(dāng)所述需要或意欲的分子是人體或動(dòng)物體中天然不存在的分子時(shí)，所述分子可以例如是異源蛋白質(zhì)、病毒(外殼上存在的蛋白質(zhì))、細(xì)菌或真菌(細(xì)胞壁中存在的蛋白質(zhì))、外源性化學(xué)物質(zhì)化合物、等。基于本文中的公開(kāi)內(nèi)容，技術(shù)人員應(yīng)該清楚這些和其它合適生物學(xué)分子的實(shí)按照一個(gè)具體但非限制性實(shí)施方案(本文中更詳細(xì)描述)，所述意欲或需要的分子可以是血清蛋白，諸如清蛋白,和具體地人血清蛋白，諸如人血清清蛋白。本發(fā)明氨基酸序列可以針對(duì)的其它血清蛋白的實(shí)例是國(guó)際申請(qǐng)WO04/003019(也見(jiàn)EP1517921)中提到的那些。按照一個(gè)具體但非限制性實(shí)施方案，所述意欲或需要的分子可以是任何生物學(xué)分子，所述生物學(xué)分子在其存在的人體或動(dòng)物體內(nèi)，經(jīng)歷再循環(huán)、內(nèi)在化、胞飲作用、胞轉(zhuǎn)或胞吞或以別的方式被所述人體內(nèi)的至少一種細(xì)胞或組織吸收。一些非限制性實(shí)例包括一些血清蛋白，諸如血清清蛋白和一些受體。按照一個(gè)具體但非限制性實(shí)施方案，所述意欲或需要的分子可以是在人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞或組織表面上存在的任何生物學(xué)分子。而且，一些非限制性實(shí)例包括受體，諸如胰島素受體。按照該實(shí)施方案的特殊方面，例如，作為再循環(huán)(例如受體再循環(huán))的一部分，這種生物學(xué)分子還可以被這樣的細(xì)胞吸收，其中所述生物學(xué)分子存在于所述細(xì)胞上。在其它方面中，本發(fā)明涉及用于生成本發(fā)明的氨基酸序列的方法。一方面，所述方法至少包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下能夠以10—s摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列；c)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下，以這樣的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離常數(shù)(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的至少10倍；禾口d)分離在所述第一生物學(xué)條件下能夠以10—5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子和在所述第二生物學(xué)條件下以這樣的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離常數(shù)(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的至少10倍；具體地，所述方法可以包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下能夠以l(T5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列；從而提供在所述第一生物學(xué)條件下能夠以10—5摩爾/升或更低的解寓常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；禾口c)篩選步驟b)中獲得的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下以這樣的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離常數(shù)(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的至少10倍；和d)分離在所述第一生物學(xué)條件下能夠以10—5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子和在所述第二生物學(xué)條件下以這樣的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離常數(shù)34(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的至少10倍。通常，在這些方法中，步驟b)，即篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下能夠以10—5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，是通過(guò)在所述第一生物學(xué)條件下篩選進(jìn)行的。類(lèi)似地，在這些方法中，步驟C)，即篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下，以這樣的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離常數(shù)(Ko)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的至少10倍，所述步驟c)是在所述第二生物學(xué)條件下進(jìn)行的。在其它方面，本發(fā)明涉及用于生成本發(fā)明氨基酸序列的方法。在一方面，所述方法至少包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下能夠以0.1s-1和10_6s"的解離率,例如諸如0.01-0.00001的koff結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列；和c)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下以這樣的解離率結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離率是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離率至少1.5倍以上的解離率，更優(yōu)選地1.7倍以上的解離率，更優(yōu)選地2倍以上的解離率，更優(yōu)選地3倍以上的解離率，更優(yōu)選地4倍以上的解離率，更優(yōu)選地5倍以上的解離率，更優(yōu)選地10倍以上的解離率；和d)分離所述氨基酸序列。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可以包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下能夠以0.1s'1和10-6s"的解離率,例如諸如0.01-0.00001的k^結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列；和c)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下以這樣的解離率結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離率是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離率至少2倍以上；和d)分離所述氨基酸序列。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可以包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下，例如pH7.2-7,4，例如7.2下，能夠以0.1s'1和l(T6s'1的解離率,例如諸如0.01-0.00001的解離率(k。ff)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列；和c)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下，例如pH5-6，例如pH5.5下，以這樣的解離率結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離率是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離率至少2倍以上；和d)分離所述氨基酸序列；和任選地e)體內(nèi)評(píng)估(例如在食蟹猴中PK評(píng)估)所述氨基酸序列的半衰期。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可以包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下，例如pH7.2-7，4，例如7.3下，能夠以0.1s—1和10—6s—1的解離率，例如諸如0.01-0.00001的解離率(koff)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列；禾口c)(篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下，例如pH5-6，例如pH5.5下，以這樣的解離率結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離率是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離率的至少2倍以上諸如3倍、5倍、10倍、100倍、1000倍；或d)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下不結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列)，和e)分離所述氨基酸序列；和任選地36f)體內(nèi)評(píng)估(例如在食蟹猴中PK評(píng)估)所述氨基酸序列的半衰期。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可以包括下列步驟a)提供氨基酸序列組、集合或文庫(kù)；和b)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第二生物學(xué)條件下，例如pH5-6，例如pH5.5下，能夠以0.1s-1和10'6s"的解離率,例如諸如0.01-0.00001的解離率(k。ff)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列；和c)(篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下，例如pH7.2-7.4,例如7.3下，以這樣的解離率結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述這樣的解離率是所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離率的至少2倍以上諸如3倍、5倍、10倍、100倍、1000倍；或d)篩選所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)，以獲得在所述第一生物學(xué)條件下不結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列)，和e)分離所述氨基酸序列；和任選地f)體內(nèi)評(píng)估(例如在食蟹猴中PK評(píng)估)所述氨基酸序列的半衰期。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，還可以將篩選步驟作為選擇步驟進(jìn)行。例如，已知抗體-抗原相互作用通常對(duì)緩沖液條件、pH和離子強(qiáng)度變化敏感，但是最經(jīng)常的是沒(méi)有對(duì)那些變化進(jìn)行評(píng)分或研究，且不經(jīng)常使用它們來(lái)設(shè)計(jì)藥物治療劑，因?yàn)檫@些變化總體上是不可預(yù)知的。例如通過(guò)篩選結(jié)合蛋白的所有組成成分以獲得敏感相互作用的發(fā)生，例如通過(guò)分別在第一和第二生物學(xué)條件下進(jìn)行結(jié)合測(cè)定,和確定的相對(duì)結(jié)合強(qiáng)度，發(fā)現(xiàn)了具有需要的結(jié)合特征的結(jié)合蛋白?？梢岳萌魏魏线m的結(jié)合測(cè)試包括ELISA、基于BIAcore的方法、斯卡査德分析等，測(cè)量所述相對(duì)相互作用強(qiáng)度。所述測(cè)試將揭示哪些結(jié)合蛋白表現(xiàn)出對(duì)所選參數(shù)(pH)敏感的相互作用和到何種程度。備選地，通過(guò)例如從噬菌體、核糖體、酵母或細(xì)胞文庫(kù)中，利用優(yōu)選富含需要的敏感性的選擇中的條件，選擇結(jié)合蛋白的所有組成成分，從而發(fā)現(xiàn)了具有需要的結(jié)合特征的結(jié)合蛋白。采取在pH方面不同的第一和第二生物學(xué)條件作為實(shí)例，在堿性pH(例如，pH7.4)培養(yǎng)噬菌體抗體文庫(kù)并且利用較低pH(例如，6.0)的緩沖液洗脫結(jié)合的噬菌體粒子，將富集那些識(shí)別易受PH變化影響的抗原的噬菌體抗體。在所述選擇的重復(fù)周期后，篩選各個(gè)克隆，從而識(shí)別在該pH范圍內(nèi)表現(xiàn)出pH-依賴(lài)性結(jié)合的結(jié)合蛋白。還可以從設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)文庫(kù)中分離具有需要的結(jié)合特征的結(jié)合蛋白，在所述蛋白質(zhì)文庫(kù)中將推定結(jié)合位點(diǎn)改造為包含在某些"敏感的"相互作用中優(yōu)選的氨基酸殘基或序列，例如關(guān)于pH-敏感性的組氨酸。例如，已知FcRn和IgG的相互作用對(duì)pH非常敏感，當(dāng)pH從pH6.0升至7.0時(shí)，降低超過(guò)2個(gè)數(shù)量級(jí)。親和性轉(zhuǎn)變的主要機(jī)制基礎(chǔ)是結(jié)合位點(diǎn)的組氨酸含量組氨酸殘基的咪唑側(cè)改變通常在pH6.0-7.0的范圍內(nèi)脫質(zhì)子。預(yù)測(cè)在推定結(jié)合位點(diǎn)中明確包含組氨酸(例如，利用優(yōu)先將該殘基引入文庫(kù)中的寡核苷酸，如使用三核苷酸和本領(lǐng)域中已知的，例如Knappik等，分子生物學(xué)雜志(J.MoLBiol)2000,巻296:57-86)以較高頻率產(chǎn)生基本依賴(lài)于pH結(jié)合的氨基酸序列。因此，術(shù)語(yǔ)"篩選"，用于本說(shuō)明書(shū)中時(shí)，可以包括選擇、篩選或選擇和/或篩選技術(shù)的任何合適組合。通常，可以作為單獨(dú)或獨(dú)立的篩選步驟，或作為單獨(dú)篩選過(guò)程的一部分執(zhí)行步驟b)和c)。當(dāng)作為單獨(dú)篩選過(guò)程的一部分執(zhí)行步驟b)和c)時(shí)，所述篩選過(guò)程可以例如包括下列步驟i)在所述第一生物學(xué)條件下，使氨基酸序列組、集合或文庫(kù)與所述需要的分子相接觸(即，從而使能夠以10—5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列結(jié)合于所述需要的分子，且從而使不能夠以IO-5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子的氨基酸序列不結(jié)合于所述需要的分子)；ii)除去步驟i)中不結(jié)合的氨基酸序列(即，在所述第一生物學(xué)條件下，不以l(T5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述需要的分子的那些氨基酸序列)；以便保留與意欲一需要的分子結(jié)合(并且在所述第一生物學(xué)條件下也存在)的氨基酸序列組或集合；iii)使所述氨基酸序列組或集合經(jīng)歷所述第二生物學(xué)條件，從而使，不條件性地結(jié)合(如本文中定義)于所述意欲或需要的分子的氨基酸序列保持與所述意欲或需要的分子的結(jié)合，且從而使，條件性地結(jié)合(如本文中定義)于所述意欲或需要的分子的氨基酸序列不再保持與所述意欲或需要的分子的結(jié)合；iv)分離條件性地結(jié)合(如本文中定義)于所述意欲或需要的分子的氨基酸序列和不條件性地結(jié)合(仍結(jié)合于所述需要的分子)的氨基酸序列；和任選地，v)收集條件性地結(jié)合于所述意欲或需要的分子的氨基酸序列。例如，可以通過(guò)提供合適的載體或支持物(諸如，柱、珠、或固體表面諸如多-孔板的孔表面、或Biacore的靜止相)容易地執(zhí)行這種單篩選過(guò)程，其中將所述需要的分子適當(dāng)?shù)毓潭?例如，共價(jià)地或通過(guò)抗生物素蛋白-鏈霉抗生物素蛋白連接)于所述載體或支持物上；使所述載體或支持物與所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)相接觸；洗掉不結(jié)合于與所述載體或支持物相結(jié)合的需要的分子的氨基酸序列；將條件改變?yōu)樗龅诙飳W(xué)條件，并收集在所述第二生物學(xué)條件下，不結(jié)合于與所述載體或支持物相結(jié)合的需要的分子的氨基酸序列。備選地，如下文中更詳細(xì)描述地，可以通過(guò)富集關(guān)于結(jié)合于所述需要的分子的條件性結(jié)合物的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)(如本文中所述)，獲得本發(fā)明的氨基酸序列。在以上方法中使用的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)可以是任何合適的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)。例如，所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)可以是免疫球蛋白序列或免疫球蛋白序列片段的組、集合或文庫(kù)，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列或其片段的組、集合或文庫(kù)，例如Vh-，Vl-或Vhh-序列或其片段的組、集合或文庫(kù)。在一個(gè)具體但非限制性方面，所述氨基酸序列組、集合或文庫(kù)是結(jié)構(gòu)域抗體的、能夠作為結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)的、"dAb"的、單結(jié)構(gòu)域抗體的、能夠作為單結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)的、或納米抗體的(或任何前述各項(xiàng)的合適片段的)組、集合或文庫(kù)。所述氨基酸序列的組、集合或文庫(kù)可以是首次用于實(shí)驗(yàn)的組、集合或文庫(kù)；可以是合成或半-合成氨基酸序列的組、集合或文庫(kù)(例如，但不限于,通過(guò)親和力成熟產(chǎn)生的氨基酸序列的組、集合或文庫(kù)),或可以是免疫組、集合或文庫(kù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組、集合或文庫(kù)是通過(guò)用抗原適當(dāng)免疫哺乳動(dòng)物(諸如兔、大鼠、小鼠、豬或狗、或駱駝科動(dòng)物(camelid))(從而使所述哺乳動(dòng)物形成針對(duì)所述抗原的抗體)獲得的免疫組、集合或文庫(kù),39并然后由獲自所述哺乳動(dòng)物的生物學(xué)樣品(諸如血液或B-細(xì)胞樣品)開(kāi)始，產(chǎn)生免疫球蛋白序列組、集合或文庫(kù)。例如，由本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)，技術(shù)人員應(yīng)該清楚用于獲得和篩選所述免疫組、集合或文庫(kù)的方法和技術(shù)。在一個(gè)優(yōu)選的方面,免疫球蛋白序列的組、集合或文庫(kù)獲自已被預(yù)期血清蛋白(例如被血清清蛋白)適當(dāng)免疫的哺乳動(dòng)物。在另一個(gè)優(yōu)選的方面,所述組、集合或文庫(kù)是獲自駱駝科動(dòng)物的VHH序列的組、集合或文庫(kù)，和具體地，獲自已被預(yù)期的血清蛋白(例如被血清清蛋白)適當(dāng)免疫的駱駝科幼物的Vhh序列的免疫組、集合或文庫(kù)。所述組、集合或文庫(kù)可以包括任何合適數(shù)量的氨基酸序列，諸如1,2,3或約5，10,50,100,500,1000,5000,104,105,106,107,108或更多序列。以上氨基酸序列的組、集合或文庫(kù)可以包括一種或多種在選擇和/或篩選過(guò)程前未知的序列，例如如果這些序列是一種或多種給定氨基酸序列隨機(jī)化步驟(例如通過(guò)易錯(cuò)PCR或其它方法)的結(jié)果。而且，可以通過(guò)合理或半-經(jīng)驗(yàn)的方法，諸如計(jì)算機(jī)建模技術(shù)或生物靜力學(xué)或數(shù)據(jù)-開(kāi)采技術(shù)，獲得或定義以上氨基酸序列組、集合或文庫(kù)中的一種或多種或全部氨基酸序列，其中可以將氨基酸序列定義或提議為被預(yù)期或認(rèn)為賦有某些特性諸如增高的穩(wěn)定性、pH最適度、蛋白酶敏感性或其它特性或其組合。在所述組、集合或文庫(kù)中(和/或在本文中所述的篩選步驟中)，所述組、集合或文庫(kù)中存在的氨基酸序列還可以適當(dāng)?shù)仫@示在合適的宿主或宿主細(xì)胞上，例如在噬菌體粒子、核糖體、細(xì)菌、酵母細(xì)胞等上。此外，例如由本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)，技術(shù)人員應(yīng)該清楚合適的宿主或宿主細(xì)胞、用于在所述宿主或宿主細(xì)胞上顯示氨基酸序列的合適技術(shù)、和用于篩選所述宿主或宿主細(xì)胞上顯示的氨基酸序列組、集合或文庫(kù)的合適技術(shù)。當(dāng)在合適的宿主或宿主細(xì)胞上顯示氨基酸序列時(shí)，還可能(和習(xí)慣)首先從所述宿主或宿主細(xì)胞分離編碼需要的氨基酸序列的核苷酸序列，并且然后通過(guò)在合適的宿主生物體中適當(dāng)表達(dá)所述核苷酸序列獲得需要的氨基酸序列。此外，如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，這可以以任何本身已知的合適方式執(zhí)行。通過(guò)非-限制性實(shí)例的方法，所述組、集合或文庫(kù)可以包括1、2或多種彼此不同的氨基酸序列(例如，具有設(shè)計(jì)的點(diǎn)突變或具有隨機(jī)化位置)，包括(compmmise)源自天然多樣化氨基酸序列(例如免疫文庫(kù))的不同組，或任何其它不同氨基酸序列來(lái)源(如例如在Hoogenboom等，自然生物技術(shù)(NatBiotechnol)23:1105,2005禾卩Binz等，自然生物技術(shù)(NatBiotechnol)2005,23:1247中所述)的多種氨基酸序列。所述氨基酸序列的組、集合或文庫(kù)可以顯示在噬菌體粒子、核糖體、細(xì)菌、酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面上，并且與這些載體中編碼所述氨基酸序列的核苷酸序列相連。這使得所述組、集合或文庫(kù)可以按照選擇程序分離本發(fā)明的需要氨基酸序列。本發(fā)明的氨基酸序列還可以包含一種或多種關(guān)于一種或多種其它抗原、抗原決定簇、蛋白質(zhì)、多肽、或其它化合物的另外的結(jié)合位點(diǎn)。可以將本文中公開(kāi)的氨基酸序列有利地用作關(guān)于其它部分(諸如其它氨基酸序列、蛋白質(zhì)或多肽、或其它化學(xué)實(shí)體)的融合配偶體，和具體地用作關(guān)于治療部分諸如治療蛋白質(zhì)或多肽、治療化合物(包括，但不限于，小分子)或其它治療實(shí)體的融合配偶體。所述包括至少一種本發(fā)明的氨基酸序列和至少一種其它化合物、部分或?qū)嶓w的構(gòu)建體或融合物本文中也稱(chēng)為"本發(fā)剪游眾合欽'。因此，在其它方面，本發(fā)明提供包括本發(fā)明公開(kāi)的氨基酸序列或基本由其組成的化合物，諸如多肽或蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述本發(fā)明公開(kāi)的氨基酸序列任選地，通過(guò)一種或多種合適的連接體或間隔區(qū)，與至少一種治療部分相連。如本文中進(jìn)一步所述，所述多肽或蛋白質(zhì)構(gòu)建體可以例如(但不限于)是融合蛋白。本發(fā)明還涉及多肽或蛋白質(zhì)構(gòu)建體或融合蛋白的治療用途，以及包括所述多肽或蛋白質(zhì)構(gòu)建體或融合蛋白的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由治療蛋白質(zhì)、多肽、化合物、因子或其它實(shí)體組成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療部分針對(duì)需要的抗原或靶標(biāo)，能夠結(jié)合于需要的抗原(和具體地，能夠特異性結(jié)合于需要的抗原)，和/或能夠與需要的靶標(biāo)相互作用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由治療蛋白質(zhì)或多肽組成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由免疫球蛋白或免疫球蛋白序列(包括但不限于免疫球蛋白片段)，諸如抗體或抗體片段(包41括但不限于ScFv片段)組成。在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由抗體可變結(jié)構(gòu)域，諸如重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域組成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由至少一種結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體，"dAb"或納米抗體⑧組成，這樣由此產(chǎn)生的多肽或蛋白質(zhì)構(gòu)建體或融合蛋白是多價(jià)構(gòu)建體和優(yōu)選地多特異性構(gòu)建體。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂"多價(jià)"化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體意指包括至少2個(gè)結(jié)合單位(g卩，結(jié)合于相同或不同表位)的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，其全部能夠結(jié)合于相同(類(lèi)型)的生物學(xué)分子。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂"二價(jià)"化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體意指包括2個(gè)結(jié)合單位的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，其能夠結(jié)合于相同(類(lèi)型)的生物學(xué)分子。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂"單價(jià)"化合物、蛋白質(zhì)或多肽意指基本由1個(gè)結(jié)合單位組成的化合物、蛋白質(zhì)或多肽，其能夠結(jié)合于生物學(xué)分子。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂"結(jié)合單位"意指任何能夠結(jié)合如本文中所述的生物學(xué)分子,諸如本發(fā)明的氨基酸序列或治療部分(均如本文中所述)的氨基酸序列、肽、蛋白質(zhì)、多肽、構(gòu)建體、融合蛋白、化合物、因子或其它實(shí)體。當(dāng)化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體包括2個(gè)或更多結(jié)合單位時(shí)，所述結(jié)合單位可以任選地通過(guò)一種或多種合適的連接體彼此相連。在本說(shuō)明書(shū)中，所謂"多特異性"化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體意指包括至少2個(gè)結(jié)合單位的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，其中至少第一結(jié)合單位能夠結(jié)合于第一生物學(xué)功能分子和其中至少第二結(jié)合單位能夠結(jié)合于第二生物學(xué)功能分子，在本說(shuō)明書(shū)中，所謂"雙特異性"化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體意指包括2個(gè)結(jié)合單位的化合物、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體，其中所述第一結(jié)合單位能夠結(jié)合于第一生物學(xué)功能分子和其中所述第二結(jié)合單位能夠結(jié)合于第二生物學(xué)功能分子。所述第一和第二生物學(xué)功能分子可以是不同的分子或可以是相同的生物學(xué)分子，在該情形中，所述雙特異性化合物識(shí)別或結(jié)合于位于(atto)不同位點(diǎn)的生物學(xué)分子。在具體實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由至少一個(gè)單價(jià)納米抗體⑧或二價(jià)、多價(jià)、雙特異性或多特異性納米抗體⑧構(gòu)建體組成。在其它具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可以包括兩個(gè)或更多本發(fā)明的氨基酸序列(和任選地，一個(gè)或多個(gè)如本文中所述的其它部分)，其任選地通過(guò)一種或多種合適的連接體相連，其中所述兩個(gè)或更多本發(fā)明的氨基酸序列可以針對(duì)相同的需要的或意欲的分子(例如,從而提供在所述第一生物學(xué)條件下具有增高親和力的條件性的結(jié)合物)，針對(duì)相同需要的或意欲的分子上表位的不同部分(而且，例如，從而提供在所述第一生物學(xué)條件下具有增高親和力的條件性結(jié)合物)，或針對(duì)不同的意欲或需要的分子。按照上一個(gè)非限制性實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物可以是雙特異性(或多特異性)化合物，其條件性地結(jié)合于2種或更多不同的預(yù)期的需要的分子。同樣地，本發(fā)明的化合物可以是這樣的，以致它在所述第一生物學(xué)條件下(或備選地，在所述第二生物學(xué)條件下)結(jié)合于第一和第二意欲或需要的分子，或可以是這樣的，以致它在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于第一意欲或需要的分子，而在所述第二生物學(xué)條件下結(jié)合于第二意欲或需要的分子。因此，當(dāng)由所述第一生物學(xué)條件變化為所述第二生物學(xué)條件時(shí)，所述本發(fā)明的化合物因此會(huì)從第一意欲或需要的分子中釋放出來(lái)并結(jié)合于第二意欲或需要的分子。由本文中的進(jìn)一步說(shuō)明，所述本發(fā)明化合物中條件性的結(jié)合物為了延長(zhǎng)治療化合物、部分或?qū)嶓w的半衰期目的的一些具體但非限制性應(yīng)用將變得清楚。在其它實(shí)施方案中,本發(fā)明的化合物可以包括至少1種如本文中所述的條件性的結(jié)合單位，和一種或多種本身不是條件性的結(jié)合物的其它結(jié)合單位。而且，由本文中的進(jìn)一步說(shuō)明，所述本發(fā)明化合物中條件性的結(jié)合物為了延長(zhǎng)治療化合物、部分或?qū)嶓w半衰期目的的一些具體但非限制性應(yīng)用將變得清楚。本發(fā)明還涉及編碼本文中所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的核苷酸序列或核酸。本發(fā)明還包括包括上述核苷酸序列或核酸的遺傳構(gòu)建體，和一種或多種本身已知的用于遺傳構(gòu)建體的元件。所述遺傳構(gòu)建體可以處于質(zhì)?；蜉d體的形式。所述遺傳構(gòu)建體和其它遺傳構(gòu)建體是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。43本發(fā)明還涉及包含所述核苷酸序列或核酸，和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))本文中所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的宿主或宿主細(xì)胞。而且，所述宿主或宿主細(xì)胞是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。本發(fā)明通常還涉及用于制備本文中所述氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體的方法，所述方法包括在這樣的條件下培養(yǎng)或維持本文中所述的宿主細(xì)胞，在所述條件下，所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生或表達(dá)如本文中所述的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體，且任選地，還包括分離由此產(chǎn)生的氨基酸序列、化合物、蛋白質(zhì)、多肽、融合蛋白或或多價(jià)或多特異性構(gòu)建體。而且，可以如本文中提到的申請(qǐng)人的共同-待審專(zhuān)利申請(qǐng)中通常所述的方式，執(zhí)行所述方法?？梢詫⒈景l(fā)明的氨基酸序列和化合物設(shè)計(jì)為并用于任何本身已知的合適目的，其依賴(lài)于選擇本發(fā)明化合物中存在的條件性結(jié)合物所針對(duì)的意欲或需要的化合物,和還依賴(lài)于本發(fā)明化合物中存在的其它部分、化合物或結(jié)合單位(其可以是條件性的或非-條件性的結(jié)合單位)?；诒疚闹械墓_(kāi)內(nèi)容，所述目的以及適于所述應(yīng)用的本發(fā)明氨基酸序列和化合物對(duì)技術(shù)人員而言應(yīng)該是清楚的。按照本發(fā)明的一個(gè)具體但非限制性應(yīng)用，本發(fā)明的氨基酸序列針對(duì)血清蛋白,并能夠作為融合配偶體，結(jié)合單位或部分使用，從而增長(zhǎng)治療部分或化合物的半衰期(如本文中所述)。'能夠結(jié)合于血清蛋白的氨基酸序列及其在多肽構(gòu)建體中用于增加治療相關(guān)蛋白質(zhì)、多肽和其它化合物半衰期的用途是本領(lǐng)域中己知的。例如，WO91/01743、WO01/45746和WO02/076489描述肽部分結(jié)合于能夠融合于治療蛋白和其它治療化合物和實(shí)體從而增長(zhǎng)其半衰期的血清清蛋白。然而，這些肽部分是細(xì)菌或合成來(lái)源的，其在治療中的使用是較不優(yōu)選的。新生兒Fc受體(FcRn)，也稱(chēng)為"Brambell受體"，與延長(zhǎng)清蛋白在循環(huán)中的壽命有關(guān)(見(jiàn)Chaudhury等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(TheJournalofExperimentalMedicine)，第3巻，第197號(hào)，315-322(2003))。FcRn受體是由可溶性輕鏈、跨膜區(qū)和約50個(gè)氨基酸的胞質(zhì)尾區(qū)組成的完整膜糖蛋白，所述可溶性輕鏈由P2-微球蛋白組成，所述P2-微球蛋白通過(guò)三個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與43kDot鏈非共價(jià)結(jié)合。所述胞質(zhì)尾區(qū)包含涉及受體內(nèi)在化、以二核苷酸基序?yàn)榛A(chǔ)的胞吞作用信號(hào)。所述a鏈?zhǔn)堑鞍踪|(zhì)非經(jīng)典MHCI家族的成員。P2m與a鏈的聯(lián)合對(duì)FcRn的正確折疊和離開(kāi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定向到內(nèi)體和細(xì)胞表面非常關(guān)鍵。FcRn的總體結(jié)構(gòu)類(lèi)似于I類(lèi)分子的總體結(jié)構(gòu)。a-l和a-2區(qū)類(lèi)似由8個(gè)反平行P鏈組成的平臺(tái)，所述反平行(3鏈形成頂部為2個(gè)反平行a-螺旋的單(3-折疊，所述a-螺旋非常類(lèi)似于MHCI分子中的肽裂。由于a-l螺旋的全面重新定位和由于存在Pro162所引入的a-2螺旋中的斷裂而導(dǎo)致的所述螺旋的C-末端部分彎曲，F(xiàn)cRn螺旋彼此相當(dāng)靠近，從而阻斷肽結(jié)合。FcRn的Argl64側(cè)鏈也阻斷肽N-末端與MHC袋的潛在相互作用。另外，a-l和a-2螺旋間的鹽橋和疏水性相互作用也有利于溝閉合。因此，F(xiàn)cRn不參與抗原呈遞，且所述肽裂是空的。FcRn結(jié)合并運(yùn)輸IgG由母體循環(huán)穿過(guò)胎盤(pán)合胞滋養(yǎng)層到達(dá)胎兒循環(huán)，并保護(hù)成年人中IgG免于被降解。除體內(nèi)穩(wěn)態(tài)外，F(xiàn)cRn控制組織中IgG的胞轉(zhuǎn)作用。FcRn位于上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和肝細(xì)胞中。按照Chaudhury等(見(jiàn)上)，清蛋白結(jié)合FcRn從而與IgG—起形成三隱分子復(fù)合物。清蛋白和IgG非協(xié)作地結(jié)合于FcRn上的不同位點(diǎn)。人FcRn與瓊脂糖-HSA和瓊脂糖-hlgG的結(jié)合是pH依賴(lài)性的，其在pH5.0時(shí)達(dá)到最大，并在pH7.0-pH8時(shí)為零。關(guān)于FcRn以與結(jié)合IgG相同的pH依賴(lài)方式結(jié)合清蛋白的觀察提示清蛋白與FcRn相互作用并由此受到保護(hù)免于被降解的機(jī)制與IgG的相同，并通過(guò)類(lèi)似的與FcRn的pH敏感性相互作用受到介導(dǎo)。利用SPR測(cè)量各個(gè)HSA結(jié)構(gòu)域結(jié)合固定的可溶性hFcRn的能力，Chaudhury顯示FcRn和清蛋白通過(guò)清蛋白的D-III結(jié)構(gòu)域，以pH-依賴(lài)性方式，在與IgG結(jié)合位點(diǎn)不同的位點(diǎn)上相互作用(Chaudhury，PhD論文，見(jiàn)http:〃www.andersonlab.com/biosketchCC.htm;Chaudhury等生物化學(xué)(Biochemistry)，ASAP文章10.1021/bi052628yS0006-2960(05)02628扁0(網(wǎng)頁(yè)公開(kāi)日期2006年3月22曰))。本申請(qǐng)人的WO04/041865描述能夠結(jié)合于血清清蛋白(和具體地針對(duì)人血清清蛋白)的納米抗體⑧，所述納米抗體⑧能夠與其它蛋白質(zhì)c諸如，一種或多種能夠結(jié)合于需要靶標(biāo)的其它納米抗體⑧)相連，從而增長(zhǎng)所述蛋白質(zhì)的半衰期。已知這些納米抗體⑧比常規(guī)四-鏈血清清蛋白結(jié)合抗體更有效的和更穩(wěn)定，其導(dǎo)致(l)較低劑量形式、較低給藥頻率，從而引起較少副作用；(2)改進(jìn)的穩(wěn)定性，從而引起施用途徑的廣泛選擇，包括，除靜脈內(nèi)途徑外，口服或皮下途徑;(3)由于較低的材料成本引起的較低治療成本。在這個(gè)本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述需要的分子是血清蛋白，和具體地，在人體或動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行再循環(huán)的血清蛋白。所述血清蛋白的一些非限制性實(shí)例是能夠結(jié)合于FcRn諸如血清清蛋白和IgG的血清蛋白。技術(shù)人員應(yīng)該清楚本發(fā)明的氨基酸序列能夠結(jié)合的其它血清蛋白，其例如包括國(guó)際申請(qǐng)WO04/003019(還見(jiàn)EP1517921)中提到的血清蛋白。因此，按照這個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明涉及針對(duì)血清蛋白的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第一生物學(xué)條件下，以10'5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(Kd)和域以至少1()sm"的結(jié)合親和性(Ka)結(jié)合于所述血清蛋白;和b)在第二生物學(xué)條件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述血清蛋白的解離常數(shù)至少10倍的解離常數(shù)(Ko)結(jié)合于所述血清蛋白。本發(fā)明的氨基酸序列結(jié)合(或在生理學(xué)條件下，能夠結(jié)合)的血清蛋白可以是任何血清蛋白(諸如本文中和在WO04/003019中提到的那些,且具體地，可以是在天然存在所述血清蛋白的人體或動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行再循環(huán)或再循環(huán)機(jī)制的任何血清蛋白。技術(shù)人員應(yīng)該清楚所述血清蛋白的實(shí)例。更具體地，本發(fā)明的氨基酸序列結(jié)合(或在生理學(xué)條件下，能夠結(jié)合)的血清蛋白可以選自由下列各項(xiàng)組成的組..血清清蛋白、免疫球蛋白諸如IgG和轉(zhuǎn)鐵蛋白。按照優(yōu)選但非限制性實(shí)施方案，本發(fā)明的氨基酸序列結(jié)合于血清清蛋白。所述血清蛋白優(yōu)選地是人血清蛋白，諸如人血清清蛋白、IgG或轉(zhuǎn)鐵蛋白、和具體地人血清清蛋白。然而，應(yīng)該理解按照本發(fā)明的一些具體但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列可以與來(lái)自至少一種其它哺乳動(dòng)物物種，諸如小鼠、大鼠、兔、狗或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的相應(yīng)(即，直向同源)血清蛋白交叉-反應(yīng)。具體地，按照這些方面，如本文中進(jìn)一步所述，本發(fā)明的氨基酸序列可以與來(lái)自至少一種其它靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即，直向同源)血清蛋白交叉-反應(yīng)。具體地，按照該實(shí)施方案，本發(fā)明的氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，可以以這樣的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述血清蛋白，所述解離常數(shù)(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述血清蛋白的解離常數(shù)的至少lO-倍，優(yōu)選地100倍，更優(yōu)選地1000倍。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列，例如單鏈抗體，例如dAb或納米抗體，在所述第二生物學(xué)條件下，根本不結(jié)合，例如本發(fā)明的氨基酸序列在pH5.5(或在pH5-6)不結(jié)合，但在生理學(xué)pH,艮P，pH7.2-7.4下結(jié)合。優(yōu)選地，按照該實(shí)施方案，本發(fā)明的氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以l(T6摩爾/升或更小的解離常數(shù)(KD),優(yōu)選地以10_7摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)，更優(yōu)選地以l(T8摩爾/升或更低的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述血清蛋白。而且，優(yōu)選地，按照該實(shí)施方案，本發(fā)明的氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以10-6摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD),優(yōu)選地以l(T5摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD),更優(yōu)選地以l(T4摩爾/升或更高的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述血清蛋白。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以這樣的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述血清蛋白，所述解離常數(shù)(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述血清蛋白的解離常數(shù)的至少I(mǎi)O分之一，IOO分之一，優(yōu)選地1000分之一。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以10一6摩爾/升或更高的解離常數(shù)(Kd)，且在所述第二生物學(xué)條件下以10—7摩爾/升或更低，例如10'8摩爾/升或更低或10—9摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)，結(jié)合于所述血清蛋白。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以10—5摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD)，且在所述第二生物學(xué)條件下，以10'6摩爾/升或更低，例如10—7摩爾/升或更低;或例如10'847摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)，結(jié)合于所述血清蛋白。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以l(T4摩爾/升或更高的解離常數(shù)(Kd),且在所述第二生物學(xué)條件下，以10—5摩爾/升或更低，例如10—6摩爾/升或更低;或例如10'7摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)，結(jié)合于所述血清蛋白。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列，例如單鏈抗體，例如dAb或納米抗體，在所述第一生物學(xué)條件下根本不結(jié)合，例如本發(fā)明的氨基酸序列在內(nèi)體pH5.5(或在pH5-6)下結(jié)合，但在細(xì)胞外pH,即，在pH7.2-7.4下不結(jié)合。在其它優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列，例如單鏈抗體，例如dAb或納米抗體，是二價(jià)或多價(jià)氨基酸序列，其中一個(gè)結(jié)合區(qū)段針對(duì)人血清清蛋白且其中所述人血清清蛋白結(jié)合區(qū)段在pH5.5(或在pH5-6)下不結(jié)合，但在pH7.2-7.4下結(jié)合;和任選地，本發(fā)明的氨基酸序列，例如單鏈抗體，例如dAb或納米抗體，結(jié)合于關(guān)于治療干預(yù)的耙蛋白(例如處于單價(jià)或多價(jià)，例如二價(jià)形式)。所述關(guān)于治療干預(yù)靶標(biāo)的實(shí)例是TNF超家族的蛋白質(zhì)(Aggarwal，自然綜述免疫學(xué)(NatureReviewsImmunology)3:747,2003)。該蛋白質(zhì)超家族由19個(gè)成員組成，其通過(guò)29個(gè)受體發(fā)信號(hào)。這些配體，在調(diào)節(jié)正常功能，諸如免疫應(yīng)答、血細(xì)胞生成和形態(tài)發(fā)生時(shí)，還在腫瘤發(fā)生、移植排斥、敗血癥性休克、病毒復(fù)制、骨吸收、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和糖尿病中有所涉及。已經(jīng)批準(zhǔn)了對(duì)人使用TNF阻滯劑治療TNF-相關(guān)的自體免疫疾病。盡管大部分配體結(jié)合于單受體，其它結(jié)合于多于一種受體。例如，TRAIL結(jié)合于5種受體(DR4,DR5，DVRl,DCR2和OPG)之多，而B(niǎo)AFF結(jié)合于三種受體、跨膜活化劑和親環(huán)蛋白配體相互作用劑(TACI)、B-細(xì)胞成熟抗原(BMCA)和BAFFR(Aggarwal，2003，圖1)。還存在關(guān)于針對(duì)TNP超家族不同配體的受體之間串?dāng)_的證據(jù)。由此得出結(jié)論，為了獲得最大治療益處，所有配體與特定受體的相互作用，或特定配體與其所有受體的相互作用將會(huì)同時(shí)受到抑制。因此，為了有效的治療，需要多種不同結(jié)合分子或具有多結(jié)合特異性的結(jié)合分子。關(guān)于治療干預(yù)的可能耙標(biāo)的其它實(shí)例是受體酪氨酸激酶亞-家族，即Eph家族，包括16種已知的Eph受體(14存在于哺乳動(dòng)物中)和9種已知的肝配蛋白配體(8種存在于哺乳動(dòng)物中)。Eph受體和肝配蛋白配體指導(dǎo)系統(tǒng)定位細(xì)胞和調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的能力反映出它們?cè)诎l(fā)育中的不同作用。這些膜錨定配體和受體涉及雙向信號(hào)傳導(dǎo)(進(jìn)入受體攜帶細(xì)胞和配體攜帶細(xì)胞。Eph受體，首先顯示出是軸突路徑選擇(pathfinding)和神經(jīng)元細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要調(diào)節(jié)劑(Drescher等.，細(xì)胞(Cell)82:359，1995;Henkemeyer等.，細(xì)胞(Cell)86:35,1996),現(xiàn)已知它們?cè)诳刂埔慌鄻拥钠渌?xì)胞-細(xì)胞相互作用中，包括在血管內(nèi)皮細(xì)胞(Wang等.，細(xì)胞(Cell)93:741,1998;Adams等.，基因發(fā)育(GenesDev.)13:295,1999;Gerety等.，分子細(xì)胞(Mol.Cell)4:403,1999)和分化的上皮細(xì)胞(Orioli等.，EMBO雜志(EMBOJ.)15:6035,1996;Flanagan和Vanderhaeghen神經(jīng)科學(xué)年度綜述(Annu.Rev.Neurosci.)21:309,1998;Frisen等，EMBO雜志(EMBOJ.)18:5159,1999;Cowan等.，神經(jīng)元26:417,2000)的那些中起作用。肝配蛋白和肝配蛋白受體雙向信號(hào)傳導(dǎo)與軸突指導(dǎo)、血管發(fā)生和骨重建有關(guān)。在治療學(xué)上，存在關(guān)于對(duì)抗某些肝配蛋白-Eph受體信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程的興趣?；谄潢P(guān)于彼此間親和性和序列保守性，將肝配蛋白和Eph受體分為2類(lèi)，艮卩A和B。通常，9種不同的EphARTKs(EphAl-EphA9)雜亂地結(jié)合于6種A-肝配蛋白(肝配蛋白Al-肝配蛋白A6)，并受到其的活化，并且EphB亞類(lèi)受體(EphBl-EphB6和，在一些情形中，EphA4)與3種不同的B-肝配蛋白(肝配蛋白B1-肝配蛋白B3)相互作用。因此，為了獲得最大治療益處，全部肝配蛋白配體與特定Eph受體的相互作用，或特定肝配蛋白與其全部Eph受體的相互作用將同時(shí)受到抑制。因此，還于本文，為了有效的治療，需要多種不同的結(jié)合分子或具有多結(jié)合特異性的結(jié)合分子。B7超家族的共刺激分子是關(guān)于治療干預(yù)的可能靶標(biāo)的其它實(shí)例。在MHC分子的情況下，除抗原性肽("信號(hào)l")外，需要在APC上存在共-刺激分子("信號(hào)2")，以獲得關(guān)于首次用于實(shí)驗(yàn)的抗原反應(yīng)性T細(xì)胞的有效刺激。將CD80,CD86,CD28,細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞抗原4(CTLA4)，可誘導(dǎo)的共刺激劑(ICOS),程序性死亡l(PD-1),和OX40用作靶標(biāo)，從而操作T-細(xì)胞以減慢自體免疫疾病的進(jìn)程,或通過(guò)增高T-細(xì)胞活性治療腫瘤。CD80(以前稱(chēng)為B7-l)和CD86(B7-2)在活化的抗原呈遞細(xì)胞(APC)諸如49樹(shù)突細(xì)胞，巨噬細(xì)胞或B-細(xì)胞的膜上表達(dá)。由T-細(xì)胞表面上的反受體檢測(cè)到共刺激分子的存在。選擇性阻斷T-細(xì)胞上所述共刺激分子和它們同源活化受體(CD28)的相互作用可以因此抑制T-細(xì)胞活化(Howard等.，當(dāng)前藥物靶標(biāo)和炎性過(guò)敏癥(Curr,DrugTargetsInflamm.Allergy)4:85,2005;Stuart和Racke,治療學(xué)耙標(biāo)專(zhuān)家觀點(diǎn)(ExpertOpinionTher.Targets)6:275,2002)。針對(duì)T-細(xì)胞的活化的自體-抗原由于其效應(yīng)子功能對(duì)在自體免疫疾病諸如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或多發(fā)性硬化中的組織損傷的至少部分負(fù)責(zé)，并是通過(guò)提供對(duì)B-細(xì)胞的"幫助"產(chǎn)生高-親和性自體-反應(yīng)性抗體的間接原因。因此，阻斷CD80禾H/或CD86與CD28的相互作用能夠治療自體免疫病癥。在人疾病的動(dòng)物模型以及在人中，通過(guò)利用針對(duì)CD80或CD86的封閉單克隆抗體，或利用反受體的可溶性形式，嚴(yán)格地確定了這些原理(Stuart和Racke,2002)。CD152(以前稱(chēng)為CTLA4)是T-細(xì)胞上關(guān)于CD80和CD86的其它反受體。然而，與CD28不同，CD152與CD80禾n/或CD86的相互作用不引起T-細(xì)胞活化。認(rèn)為CD152以比CD28更高的親和性與CD80和CD86相互作用,并且可以因此起關(guān)于CD28的誘殺型受體的作用，從而剝奪CD28的配體，并因此間接地降低T-細(xì)胞的活化(Collins等.，免疫性(Immunity)17:201,2002)。備選地，CD152還可以轉(zhuǎn)導(dǎo)陰性信號(hào)進(jìn)入T-細(xì)胞，從而引起較低的T-細(xì)胞活化總水平。不管機(jī)制如何，CD152信號(hào)傳導(dǎo)的活性導(dǎo)致抑制T-細(xì)胞響應(yīng)，特別地當(dāng)表面CD152表達(dá)變高時(shí)，T-細(xì)胞刺激后的晚期(48-72H)。通過(guò)使用單克隆抗體阻斷其與CD80和/或CD86的相互作用而阻斷CD152信號(hào)傳導(dǎo)增高體內(nèi)T-細(xì)胞活化水平，并且證明了這有益地用作腫瘤疫苗治療中的輔助治療。由于在T細(xì)胞激活過(guò)程中，CTLA4信號(hào)傳導(dǎo)的抑制導(dǎo)致與CD28阻斷非常不同的后果，其可以有利于設(shè)計(jì)CD80禾口/或CD86中和治療實(shí)體，所述治療實(shí)體抑制CD80和/或CD86與CD28的相互作用，但是不抑制其與CTLA4的相互作用，或反之亦然。CD80和CD86還以高水平存在于許多B-細(xì)胞來(lái)源的淋巴瘤。因此，單克隆抗體、其片段和其它結(jié)合CD80和/或CD86的蛋白質(zhì)能夠，通過(guò)恢復(fù)效應(yīng)子功能、誘導(dǎo)細(xì)胞死亡或作為免疫毒素或放射性毒素綴合物的耙實(shí)50體，有效用于治療所述腫瘤(Friedberg等.，血液(Blood)106:11摘要2435，2005)。由于CD80和CD86均結(jié)合于任一反受體，認(rèn)為這些分子具有至少部分重疊功能性作用(部分功能冗余性)。由此得出結(jié)論，為了獲得最大治療益處，CD80和CD86與CD28或CD152的相互作用均需要同時(shí)受到抑制。潛在地，這可以通過(guò)利用CD152的可溶形式(Abatacept,CTLA4-Ig,見(jiàn)Linsley等.實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(J.Exp.Med.)174:561,1991)、其親和性變體(Belatacept，LEA29Y，見(jiàn)Larsen等,，美國(guó)移植雜志(Am.J.Transplant)5:443,2005)或CD28(CD28-Ig,見(jiàn)Linsley等.，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(J.Exp.Med.)173:721，1991)實(shí)現(xiàn)。盡管這是明顯有益的，但是尚未記述能夠結(jié)合于CD80和CD86的單個(gè)單克隆抗體(WO04/076488,vandenBeucken等.，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)310:591,2001)。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列，例如單鏈抗體,例如dAb或納米抗體，是二價(jià)或多價(jià)氨基酸序列，其中至少一個(gè)結(jié)合區(qū)段針對(duì)血清清蛋白，例如人血清清蛋白,和其中所述血清清蛋白結(jié)合區(qū)段在例如pH5.5(或例如在pH5-6,或例如ph5.3-5.7)下結(jié)合，但在pH7.2-7.4下不結(jié)合。如本文中關(guān)于本發(fā)明的氨基酸序列所述地，所述第一生物學(xué)條件可以包括第一生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件,和所述第二生物學(xué)條件包括第二生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件，其中所述第一和第二生理學(xué)區(qū)室，在正常生理學(xué)條件下，由至少一種生物膜，諸如細(xì)胞膜、細(xì)胞小泡或亞細(xì)胞區(qū)室壁,或血管壁隔開(kāi)。具體地，所述第一生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞外普遍存在的生理學(xué)條件(諸如所述人體或動(dòng)物體的血流或淋巴系統(tǒng)中普遍存在的生理學(xué)條件)，且所述第二生物學(xué)條件包括所述細(xì)胞中普遍存在的條件(或反之亦然，盡管這對(duì)于延長(zhǎng)半衰期的目的是不太優(yōu)選的)。為了該實(shí)施方案的目的，所謂"動(dòng)欽或乂氛智應(yīng)/^#遏存#游主湮學(xué)條/f，意指細(xì)胞內(nèi)，和具體地與血清蛋白再循環(huán)有關(guān)的細(xì)胞內(nèi)可以存在的條件(諸如pH值)。具體地，所謂"動(dòng)激^ftA沐一智應(yīng)^/普遍^^"游仝潘,姿伊，意指在與血清蛋白再循環(huán)有關(guān)的(亞)細(xì)胞區(qū)室或小泡(例如作為胞飲作用，胞吞，胞轉(zhuǎn)，胞吐和吞噬或吸收或內(nèi)在化進(jìn)入所述細(xì)胞的類(lèi)似機(jī)制的結(jié)果)，諸如內(nèi)體，溶酶體或胞飲泡內(nèi)可以存在的條件(諸如pH值)。例如，所述細(xì)胞可以是包含或表達(dá)FcRn受體的細(xì)胞，特別是當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列針對(duì)結(jié)合于FcRn的血清蛋白時(shí)。如由本文中進(jìn)一步描述應(yīng)該清楚地，所述細(xì)胞與某些能夠結(jié)合于FcRn的血清蛋白，諸如血清清蛋白和免疫球蛋白諸如IgG的再循環(huán)有關(guān)。備選地，例如和不限于，所述細(xì)胞可以是包含或表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白-受體的細(xì)胞，特別是當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列針對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白時(shí)。為了該實(shí)施方案的目的，所謂"動(dòng)激或乂氛銀應(yīng)//夢(mèng)遏#*游主邏學(xué)條/f'通常意指其中存在所述細(xì)胞的人體或動(dòng)物體內(nèi)可以存在的條件(諸如pH值)，但所述條件在所述細(xì)胞外，諸如在細(xì)胞表面上或在所述細(xì)胞的直接接觸的環(huán)境或附近中。具體地，所謂"動(dòng)#^^乂謬_^^//宭遍^^"/^主潘^#/護(hù)'意指其中存在所述細(xì)胞的人體或動(dòng)物體循環(huán)中可以存在的條件(諸如pH值)，所述條件諸如血液(流)中或淋巴系統(tǒng)中。因此，通常，在該實(shí)施方案中，當(dāng)能夠由人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞吸收(例如通過(guò)內(nèi)在化、胞飲作用、胞吞、胞轉(zhuǎn)、胞吐、吞噬或吸收或內(nèi)在化進(jìn)入所述細(xì)胞的類(lèi)似機(jī)制)血清蛋白時(shí)，其中所述第一生物學(xué)條件可以包括這樣的生理學(xué)條件，其中所述氨基酸序列在被吸收進(jìn)入細(xì)胞前存在，且所述第二生物學(xué)條件可以包括這樣的生理學(xué)條件，其中所述氨基酸序列在被吸收進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后存在。具體地，當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的血清蛋白時(shí)，其中所述第一生物學(xué)條件包括關(guān)于涉及再循環(huán)需要的化合物的動(dòng)物體或人體的至少一種細(xì)胞的細(xì)胞外條件(例如循環(huán)中普遍存在的條件),和其中所述第二生物學(xué)條件包括涉及再循環(huán)需要的化合物的動(dòng)物體或人體的至少一種細(xì)胞中普遍存在的條件。按照該實(shí)施方案的其它非限制性方面，所述第一生物學(xué)條件可以是大于7.0的生理學(xué)pH,和所述第二生物學(xué)條件可以是小于7.0的生理學(xué)pH。具體地，所述第一生物學(xué)條件可以是大于7.1的生理學(xué)pH,和所述第二生物學(xué)條件可以是小于6.7的生理學(xué)pH。更具體地，所述第一生物學(xué)條件可以是大于7.2的生理學(xué)pH，和所述第二生物學(xué)條件可以是小于6.5的生理學(xué)pH。更具體地，所述第一生物學(xué)條件可以是大于7.2的生理學(xué)pH,和所述第二生物學(xué)條件可以是小于6.0的生理學(xué)pH。更具體地，所述第一生物學(xué)條件可以是大于7.2的生理學(xué)pH,和所述第二生物學(xué)條件可以是小于5.7的生理學(xué)pH。例如，所述第一生物學(xué)條件可以是在7.2-7.4范圍內(nèi)的生理學(xué)pH,和所述第二生物學(xué)條件可以是在6.0-6.5范圍內(nèi)的生理學(xué)pH。例如，所述第一生物學(xué)條件可以是在7.2-7.4范圍內(nèi)的生理學(xué)pH，和所述第二生物學(xué)條件可以是在5.0-6.0范圍內(nèi)的生理學(xué)pH。例如，所述第一生物學(xué)條件可以是在7.2-7.4范圍內(nèi)的生理學(xué)pH,和所述第二生物學(xué)條件可以是在5.3-5.7范圍內(nèi)的生理學(xué)pH。在另一個(gè)實(shí)施方案中，針對(duì)血清蛋白的氨基酸序列通?？梢?進(jìn)一步)如本文中關(guān)于本發(fā)明的氨基酸序列所述。例如，它們可以選自由下列各項(xiàng)組成的組具有免疫球蛋白折疊的蛋白質(zhì)和多肽；基于除免疫球蛋白外的蛋白質(zhì)支架的分子，其包括但不限于蛋白質(zhì)A結(jié)構(gòu)域、淀粉酶抑肽、纖連蛋白、脂籠蛋白、CTLA-4、T-細(xì)胞受體、設(shè)計(jì)的錨蛋白重復(fù)序列和PDZ結(jié)構(gòu)域，和基于DNA或RNA的結(jié)合部分包括但不限于DNA或RNA適體;或選自所述蛋白質(zhì)或多肽的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物;和具體地選自由下列各項(xiàng)組成的組:抗體和抗體片段，源自抗體或抗體片段的結(jié)合單位和結(jié)合分子，和抗體片段，結(jié)合單位或結(jié)合分子;或選自前述任一項(xiàng)的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。而且，優(yōu)選地，它們選自由下列各項(xiàng)組成的組重鏈可變結(jié)構(gòu)域，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，結(jié)構(gòu)域抗體和合適作為結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)和肽，單結(jié)構(gòu)域抗體和合適作為單結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)和肽，納米抗體⑧和dAbsTM;或選自前述任一項(xiàng)的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。具體地，在該實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列(以及包括本發(fā)明氨基酸序列的化合物，如本文中定義)可以是這樣的，以致它們以這樣的方式與血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，所述方式是當(dāng)氨基酸序列在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中與所述血清蛋白分子(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合時(shí)，它表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中血清蛋白諸如血清清蛋白天然半衰期的至少約50%(諸如約50%-70%)，優(yōu)選地至少60%(諸如約60%-80%)或優(yōu)選地至少70%(諸如約70%-90%)，更優(yōu)選地至少約80%(諸如約80%-90%)或優(yōu)選地至少約90%。例如，在該實(shí)施方案中，本發(fā)明的氨基酸序列可以以這樣的方式與人血清蛋白諸如血清清蛋白結(jié)合或締合，所述方式是當(dāng)氨基酸序列與人血清蛋白諸如血清清蛋白結(jié)合或締合時(shí)，所述氨基酸序列在人中表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述血清蛋白(諸如人血清清蛋白)天然半衰期的至少約50%(諸如約50%-70%)，優(yōu)選地至少約60%(諸如約60%-80%)或優(yōu)選地至少70%(諸如約70%-90%)，更優(yōu)選地至少約80%(諸如約80%-90%)或優(yōu)選地至少約90%。而且，優(yōu)選地，在該實(shí)施方案中，本發(fā)明的所述氨基酸序列以如本文中所定義的解離常數(shù)(Kd)和/或結(jié)合親和性(KA)，結(jié)合于所述血清蛋白(諸如人血清清蛋白)。在人中，血清清蛋白的半衰期是約19天(PetersT(1996)關(guān)于清蛋白的一切"http://j/6ww/"l學(xué)術(shù)出版社(AcademicPress)，圣地亞哥)。靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的這種體內(nèi)半衰期使本發(fā)明的氨基酸序列成為延長(zhǎng)與之連接的治療劑的血清半衰期的理想候選者。按照本發(fā)明的組合氨基酸序列和治療劑的長(zhǎng)血清半衰期隨之容許降低施用頻率和/或降低施用的量，從而為待治療的受試者帶來(lái)顯著益處。該實(shí)施方案因此還包括本發(fā)明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列和在人中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在人中半衰期的至少80%,更優(yōu)選地至少90%,諸如95°/?；蚋嗷蚺c其基本相同。在該實(shí)施方案的一個(gè)具體方面，本發(fā)明的氨基酸序列可以是這樣的，以致它們與來(lái)自至少一種其它靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即，直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)，且具體地，與來(lái)自至少一種這樣的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即，直向同源)血清蛋白交叉反應(yīng)，所述這樣的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種選自由下列各項(xiàng)組成的組來(lái)自獼猴屬(Ma^m)的猴(諸如，和具體地，食蟹猴(j^acaca/osc/cw/an^)禾口/或稱(chēng)猴(A/acacaww/a"a》禾口沸沸(尸a;/0ww'm^)。優(yōu)選地，所述交叉反應(yīng)的氨基酸序列進(jìn)一步是這樣的，以致其在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中相應(yīng)(即，直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)天然半衰期的至54少約50%(諸如約50%-70%)，優(yōu)選地至少約60%(諸如約60%-80%)或優(yōu)選地至少約70%(諸如約70%-90%)，更優(yōu)選地至少約80%(諸如約80%-90%)或優(yōu)選地至少約90%。所述本發(fā)明的氨基酸序列還優(yōu)選地以如本文中所定義的解離常數(shù)(KD)和/或結(jié)合親和性(KA)結(jié)合于來(lái)自所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的相應(yīng)(即，直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)。該實(shí)施方案因此還包括本發(fā)明的化合物，所述化合物包括至少一種本發(fā)明的氨基酸序列和在人和/或所述至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的本發(fā)明氨基酸序列分別在人和/或所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中半衰期的至少80%，更優(yōu)選地至少90%，諸如95%或更多或與其基本相同。按照本發(fā)明這個(gè)實(shí)施方案的其它優(yōu)選，但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列是這樣的，以致它們以這樣的方式與人血清蛋白(諸如人血清清蛋白)結(jié)合或締合，所述方式是當(dāng)氨基酸序列與所述血清蛋白結(jié)合或締合時(shí)，所述氨基酸序列在人中表現(xiàn)出血清半衰期是至少約9天(諸如約9-14天)，優(yōu)選地至少約10天(諸如約10-15天)或至少11天(諸如約11-16天)，更優(yōu)選地至少約12天(諸如約12-18天或更長(zhǎng))或超過(guò)14天(諸如約14-19天)。所述本發(fā)明的氨基酸序列還優(yōu)選地以如本文中所定義的解離常數(shù)(Kd)和/或結(jié)合親和性(KA)，結(jié)合于所述人血清蛋白(諸如人血清清蛋白)。該實(shí)施方案因此還包括本發(fā)明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列和在人中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在人中半衰期的至少80%，更優(yōu)選地至少90%,諸如95°/。或更多或與其基本相同。在該實(shí)施方案的一個(gè)具體但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列可以是這樣的，以致它們與來(lái)自至少一種其它靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)，且具體地，與來(lái)自至少一種這樣的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)交叉反應(yīng)，所述這樣的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種選自由下列各項(xiàng)組成的組來(lái)自獼猴屬的猴(諸如，獼猴或食蟹猴)和狒狒。優(yōu)選地，所述交叉反應(yīng)的氨基酸序列在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)55動(dòng)物中相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)天然半衰期的至少約50%(諸如約50%-70%)，優(yōu)選地至少60%(諸如約60%-80%)或優(yōu)選地至少70%(諸如約70%-90%)，更優(yōu)選地至少約80%(諸如約80%-90%)或優(yōu)選地至少約90%。所述本發(fā)明的氨基酸序列還優(yōu)選地以如本文中所定義的解離常數(shù)(Kd)和/或結(jié)合親和性(KA)，結(jié)合于來(lái)自所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)。該實(shí)施方案因此還包括本發(fā)明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列和在人和/或所述至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的本發(fā)明氨基酸序列分別在人和/或所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中半衰期的至少80%,更優(yōu)選地至少90%，諸如95%或更多或與其基本相同。在該實(shí)施方案的另一個(gè)具體但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列可以是這樣的，從而它們與來(lái)自至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，且當(dāng)所述相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中半衰期是至少約10天，諸如10-15天，例如約11-13天(通過(guò)舉例，在獼猴中，預(yù)期的血清清蛋白半衰期是約11-13天，具體地約11-12天)時(shí)，所述氨基酸序列在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清半衰期為至少約5天(諸如約5-9天)，優(yōu)選地至少約6天(諸如約6-10天)或至少7天(諸如約7-11天)，更優(yōu)選地至少約8天(諸如約8-12天)或超過(guò)9天(諸如約9-12天或更長(zhǎng))。所述本發(fā)明的氨基酸序列優(yōu)選地進(jìn)一步是這樣的以致以如本文中所定義的解離常數(shù)(Kd)和/或結(jié)合親和性(KA)，結(jié)合于來(lái)自所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的血清清蛋白。在該實(shí)施方案的一個(gè)特別優(yōu)選方面，所述氨基酸序列與人血清清蛋白交叉反應(yīng)，且更優(yōu)選地，以如本文中所定義的解離常數(shù)(KD)和/或結(jié)合親和性(KA)結(jié)合于所述相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)。該實(shí)施方案還包括本發(fā)明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在所述至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中半衰期的至少80%，更優(yōu)選地至少90%，諸如95°/。或更長(zhǎng)或與其基本相同。在該實(shí)施方案的另一個(gè)具體但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列還可以這樣的，以致它們與來(lái)自至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，且當(dāng)所述相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的半衰期是至少約13天，諸如13-18天(通過(guò)舉例，在狒狒中，血清清蛋白的半衰期是至少約13天，且通常是約16-18天)時(shí)，所述氨基酸序列在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中具有至少約7天(諸如約7-13天)，優(yōu)選地至少約8天(諸如約8-15天)或至少9天(諸如約9-16天)，更優(yōu)選地至少約10天(諸如10-16天或更長(zhǎng))或超過(guò)13天(諸如13-18天)的血清半衰期。所述本發(fā)明的氨基酸序列還優(yōu)選地是這樣的，以致它們以如本文中所定義的解離常數(shù)(KD)和/或結(jié)合親和性(KA)，結(jié)合于來(lái)自所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)。該實(shí)施方案還包括本發(fā)明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在所述至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中半衰期的至少80%，更優(yōu)選地至少90%，諸如95%或更長(zhǎng)或與其基本相同。在該實(shí)施方案的另一個(gè)具體但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列還可以是這樣的，以致它們a)以這樣的方式與人血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，所述方式使當(dāng)所述氨基酸序列與所述人血清蛋白結(jié)合或締合時(shí)，所述氨基酸序列在人中表現(xiàn)出的血清半衰期是至少約9天(諸如約9-14天)，優(yōu)選地至少約10天(諸如約10-15天)或至少11天(諸如約11-16天)，更優(yōu)選地至少約12天(諸如約12-18天或更長(zhǎng))或超過(guò)14天(諸如約14-19天)；和b)與來(lái)自至少一種選自獼猴屬物種的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)(且具體地，與來(lái)自食蟹猴和/或來(lái)自獼猴的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白)交叉反應(yīng)；和c)在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中具有的血清半衰期為至少約5天(諸如約5-9天)，優(yōu)選地至少約6天(諸如約6-10天)或至少7天(諸如約7-11天)，更優(yōu)選地至少約8天(諸如約8-12天)或超過(guò)9天(諸如約9-12天或更長(zhǎng))。優(yōu)選地，所述氨基酸序列以如本文中所定義的解離常數(shù)(KD)和/或結(jié)57合親和性(KA)結(jié)合于人蛋白質(zhì)(諸如人血清清蛋白)和/或來(lái)自靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)。該實(shí)施方案還包括本發(fā)明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在人和/或所述至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列分別在人和/或所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中半衰期的至少80%,更優(yōu)選地至少90%，諸如95°/?；蚋L(zhǎng)或與其基本相同。在該實(shí)施方案的另一個(gè)具體但非限制性方面.，本發(fā)明的氨基酸序列還可以是這樣的，以致它們a)以這樣的方式與人血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，所述方式使當(dāng)所述氨基酸序列與所述人血清蛋白結(jié)合或締合時(shí)，所述氨基酸序列在人中表現(xiàn)出的血清半衰期是至少約9天(諸如約9-14天)，優(yōu)選地至少約10天(諸如約10-15天)或至少11天(諸如約11-16天)，更優(yōu)選地至少約12天(諸如約12-18天或更長(zhǎng))或超過(guò)14天(諸如約14-19天)；和b)與來(lái)自狒狒的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)交叉反應(yīng)；和c)在狒狒中具有的血清半衰期為至少約7天(諸如約7-13天)，優(yōu)選地至少約8天(諸如約8-15天)或至少9天(諸如約9-16天)，更優(yōu)選地至少約10天(諸如約10-16天或更長(zhǎng))或超過(guò)13天(諸如約13-18天)。優(yōu)選地，所述氨基酸序列以如本文中所定義的解離常數(shù)(KD)和/或結(jié)合親和性(KA)結(jié)合于人血清蛋白(諸如人血清清蛋白)和/或來(lái)自狒狒的相應(yīng)(即直向同源)血清蛋白(諸如血清清蛋白)。該實(shí)施方案還包括本發(fā)明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在人和/或所述至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列分別在人和/或所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中半衰期的至少80%，更優(yōu)選地至少90%，諸如95%或更長(zhǎng)或與其基本相同。優(yōu)選地，而且，包括該實(shí)施方案至少一種的氨基酸序列的化合物、構(gòu)建體、融合蛋白等的半衰期優(yōu)選地是其中存在(即，在相同的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中)的本發(fā)明氨基酸序列半衰期的至少80%，更優(yōu)選地至少90%，諸如95%或更長(zhǎng)或與其基本相同。在本發(fā)明的這個(gè)實(shí)施方案的具體但非限制性方面，本發(fā)明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)針對(duì)與FcRn受體結(jié)合或能夠與其結(jié)合的血清蛋白(例如，作為所述血清蛋白質(zhì)的再循環(huán)的一部分)并且是這樣的，從而它們能夠以這樣的方式與所述血清蛋白結(jié)合或締合，所述方式使當(dāng)所述氨基酸序列或多肽構(gòu)建體與所述血清蛋白分子結(jié)合或締合時(shí)，不(顯著)降低或抑制所述血清蛋白分子與FcRn的結(jié)合。能夠與FcRn結(jié)合的一些具體但非限制性血清蛋白包括血清清蛋白和免疫球蛋白，諸如，具體地IgG。在該實(shí)施方案的另一方面，本發(fā)明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)可以這樣的方式與血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，所述方式使當(dāng)氨基酸序列或多肽構(gòu)建體與所述血清蛋白分子結(jié)合或締合時(shí)，不(顯著)縮短所述血清蛋白分子的半衰期。在該實(shí)施方案的其它方面，本發(fā)明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)能夠結(jié)合于不涉及所述血清蛋白和FcRn的結(jié)合的血清蛋白上的氨基酸殘基。例如，當(dāng)所述血清蛋白是血清清蛋白時(shí)，本發(fā)明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)能夠結(jié)合于不形成血清清蛋白結(jié)構(gòu)域III部分的氨基酸殘基。在本發(fā)明該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列或其片段，更具體地，是免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列或其片段，例如，VH-、VL-或VHH-序列或其片段。本發(fā)明的氨基酸序列可以是結(jié)構(gòu)域抗體，"dAb"，單結(jié)構(gòu)域抗體或納米抗體，或其中任一項(xiàng)的片段。本發(fā)明的氨基酸序列可以是完全人、人源化、駱駝科動(dòng)物、駱駝源化(camdized)的人或人源化的駱駝科動(dòng)物的序列，且更具體地，可以包括4個(gè)構(gòu)架區(qū)(分別地FR1-FR4)和3個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)(分別地CDR1-CDR3)。更具體地，按照本發(fā)明的氨基酸序列可以是(單)結(jié)構(gòu)域抗體或納米抗體。用于產(chǎn)生針對(duì)在該實(shí)施方案中使用的血清蛋白的氨基酸序列的方法可以通常如本文中所述，其中所述需要的化合物是需要的血清蛋白(諸如血清清蛋白)。該實(shí)施方案的其它方面涉及包括至少一種按照該實(shí)施方案的氨基酸序列的本發(fā)明化合物，所述化合物還可以任選地包括至少一個(gè)治療部分，其包括選自至少一個(gè)由小分子、多核苷酸、多肽或肽組成的組的治療部分。所述本發(fā)明的化合物優(yōu)選地是這樣的，以致它們適合于以這樣的頻率或，備選地，以這樣的間隔向靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物施用，所述頻率對(duì)應(yīng)于所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清蛋白(諸如血清清蛋白)天然半衰期的不少于50%(諸如約50%-70°/。)，優(yōu)選地至少60%(諸如約60%-80%)或優(yōu)選地至少70%(諸如約70%-90%)，更優(yōu)選地至少約80%(諸如約80%-90%)或優(yōu)選地至少約90%，所述間隔是至少4天(諸如約4-12天或更長(zhǎng))，優(yōu)選地至少7天(諸如約7-15天或更長(zhǎng))，更優(yōu)選地至少9天(諸如約9-17天或更長(zhǎng))，諸如至少15天(諸如約15-19天或更長(zhǎng)，具體地，為了施用于人)或至少17天(諸如約17-19天或更長(zhǎng)，特別是為了施用于人)；其中進(jìn)行所述施用具體是為了維持受到該化合物治療的受試者血清中所述化合物的需要的水平(如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，這特別依賴(lài)于使用的化合物和/或待治療的疾病)。臨床醫(yī)生或醫(yī)師應(yīng)該能夠選擇需要的血清水平和選擇向待治療受試者施用的劑量和/或量，從而在以本文中提到的頻率施用本發(fā)明的化合物時(shí)，在所述受試者中獲得和/或維持需要的血清水平。例如，所述劑量可以在需要的血清水平的1倍-10倍間變化，諸如需要的血清水平的2倍-4倍(其中，以本身已知的方式重新計(jì)算需要的血清水平，從而提供待施用的相應(yīng)劑量)。還可以將所述本發(fā)明的化合物配制為預(yù)期和/或被包裝(例如，與合適的使用說(shuō)明書(shū)一起)為以上述頻率施用的單位劑量，并且所述單位劑量和包裝產(chǎn)品構(gòu)成本發(fā)明另外的方面。本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明化合物在提供所述單位劑量或包裝產(chǎn)品中的用途(即，通過(guò)適當(dāng)?shù)嘏渲坪?或包裝所述化合物)。在該實(shí)施方案的具體方面，本發(fā)明的化合物是融合蛋白或構(gòu)建體。在所述融合蛋白或構(gòu)建體中，本發(fā)明的氨基酸序列可以直接與至少一種治療部分相連，或通過(guò)連接體或間隔區(qū)與至少一種治療部分相連。具體的實(shí)施方案涉及包括免疫球蛋白序列或其片段，更具體地，(單)結(jié)構(gòu)域抗體或納米抗體的治療部分。60在具體方面，該實(shí)施方案還涉及多價(jià)和多特異性納米抗體構(gòu)建體，其包括至少一種作為納米抗體的本發(fā)明氨基酸序列和至少一種另外的納米抗體。所述納米抗體直接與所述至少一種另外的納米抗體相連，或通過(guò)連接體或間隔區(qū)與所述至少一種另外的納米抗體相連，優(yōu)選地，通過(guò)氨基酸序列連接體或間隔區(qū)與所述至少一種另外的納米抗體相連。而且，如本文中所示，但不意欲限制，條件性地結(jié)合于至少一種血清蛋白和至少一種(其它)意欲或需要的分子的雙特異性(或多特異性)化合物可以在本發(fā)明的這個(gè)實(shí)施方案中存在特殊的用途。同樣地，該實(shí)施方案的化合物可以是這樣的，從而它在所述第一生物學(xué)條件下(或備選地，在所述第二生物學(xué)條件下)結(jié)合于血清蛋白和所述意欲或需要的分子，或可以是這樣的，從而它在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于血清蛋白，但在所述第二生物學(xué)條件下結(jié)合于其它意欲或需要的分子。因此，當(dāng)由所述第一生物學(xué)條件改變?yōu)樗龅诙飳W(xué)條件時(shí)，所述該實(shí)施方案的化合物會(huì)因此從第一血清蛋白分子中釋放出來(lái)并結(jié)合于所述意欲或需要的分子(或反之亦然)。而且，在所述雙特異性分子中，結(jié)合于所述意欲或需要的分子的條件性結(jié)合物可以自身形成治療部分或起治療部分的作用(在該情形中，它可以如本文中進(jìn)一步所述)，和/或所述本發(fā)明的化合物可以包含一種或多種另外的治療部分(如本文中定義)。圖1中也說(shuō)明了該實(shí)施方案所述雙特異性化合物的非限制性實(shí)例，其為非限制性示意圖，顯示FcRn、結(jié)合于FcRn的血清蛋白(諸如血清清蛋白或IgG)、本發(fā)明的雙特異性化合物(具體地，按照如本文中所述用于延長(zhǎng)半衰期的特定實(shí)施方案的雙特異性化合物)和抗原(S卩，作為第二意欲或需要的分子)之間可能的相互作用的實(shí)例。而且，表l-3概述了本發(fā)明的雙特異性化合物(具體地，按照如本文中所述用于延長(zhǎng)半衰期的特定實(shí)施方案的雙特異性化合物)能夠與血清蛋白(即，作為第一意欲或需要的分子)和抗原(作為第二意欲或需要的分子)結(jié)合的方式的不同非限制性實(shí)例。還參考本文中的詳細(xì)說(shuō)明。此外，該實(shí)施方案涉及編碼按照該實(shí)施方案的氨基酸序列、或該實(shí)施方案化合物的氨基酸序列、或該實(shí)施方案的多價(jià)和多特異性納米抗體的核苷酸序列或核酸。該實(shí)施方案還提供包含該實(shí)施方案的核苷酸序列或核酸和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))該實(shí)施方案的氨基酸序列、或按照該實(shí)施方案化合物的氨基酸序列、或該實(shí)施方案的多價(jià)和多特異性納米抗體的宿主或宿主細(xì)胞。而且，該實(shí)施方案涉及用于制備該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、或多價(jià)和多特異性納米抗體的方法，其包括在這樣的條件下培養(yǎng)或維持該實(shí)施方案的宿主細(xì)胞，在所述條件下所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生或表達(dá)所述產(chǎn)物，并任選地進(jìn)一步包括由此產(chǎn)生的所述產(chǎn)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該實(shí)施方案涉及藥物組合物，其包括選自由該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、或多價(jià)和多特異性納米抗體組成的組中的一種或多種，其中所述藥物組合物適合于以在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中血清蛋白天然半衰期至少約50%的間隔施用于所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。所述藥物組合物還可以包括至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。該實(shí)施方案還包括包含該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物或多價(jià)和多特異性納米抗體的治療的醫(yī)學(xué)用途和方法，其中所述醫(yī)學(xué)用途或方法的特征在于所述藥物適合于以所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中血清蛋白天然半衰期的至少約50%的間隔施用，且所述方法包括以所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中血清蛋白天然半衰期至少約50%的頻率施用。該實(shí)施方案還涉及用于延長(zhǎng)或增長(zhǎng)治療劑的血清半衰期的方法。所述方法包括使所述治療劑與任意前述的該實(shí)施方案氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體(包括多價(jià)和多特異性納米抗體)相接觸，以使所述治療劑與該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或締合。在一些實(shí)施方案中，所述治療劑是生物學(xué)治療劑，優(yōu)選地是肽或多肽，在該情形中，接觸所述治療劑的步驟可以包括通過(guò)使所述肽或多肽與該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體相連接，而制備融合蛋白。這些方法可以進(jìn)一步包括在治療劑與該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或締合后，向靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物施用所述治療劑。在該方法中，所述治療劑在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清半衰期是治療劑本身半衰期的至少1.5倍，或與治療劑本身的半衰期相比增加至少1小時(shí)。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療劑在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清半衰期是相應(yīng)治療部分本身半衰期的至少2倍、至少5倍、至少10倍或超過(guò)20倍。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療劑在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清半衰期與相應(yīng)治療部分本身的半衰期相比，增加超過(guò)2小時(shí)，超過(guò)6小時(shí)或超過(guò)12小時(shí)。優(yōu)選地，增加所述治療劑在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清半衰期，以使所述治療劑具有如本文中對(duì)該實(shí)施方案化合物定義的半衰期(即，在人中和/或在至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中)。在另一方面，該實(shí)施方案涉及用于改進(jìn)治療劑的方法，所述方法使所述治療劑的需要的治療水平，在適當(dāng)施用所述治療劑以獲得所述需要的治療劑水平后，維持一段延長(zhǎng)的時(shí)期。所述方法包括使所述治療劑與任意前述的該實(shí)施方案氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體(包括多價(jià)和多特異性納米抗體)相接觸，從而使所述治療劑與該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或締合。在一些實(shí)施方案中，所述治療劑是生物學(xué)治療劑，優(yōu)選地是肽或多肽，在該情形中，接觸所述治療劑的步驟可以包括通過(guò)使所述肽或多肽與該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體相連接，而制備融合蛋白。這些方法可以進(jìn)一步包括在治療劑與該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或締合后，向靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物施用該治療劑，從而在所述施用后獲得需要的治療劑水平。在該方法中，所述治療劑在所述施用后維持需要的治療劑水平的時(shí)間是治療劑本身半衰期的至少1.5倍，或與治療劑本身的半衰期相比增加至少1小時(shí)。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療劑在所述施用后維持需要的治療劑水平的時(shí)間是相應(yīng)治療部分本身半衰期的至少2倍、至少5倍、至少10倍或超過(guò)20倍。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療劑在所述施用后維持需要的治療劑水平的時(shí)間與相應(yīng)治療部分本身的半衰期相比，增加超過(guò)2小時(shí)，超過(guò)6小時(shí)或超過(guò)12小時(shí)。優(yōu)選地，增加所述治療劑在所述施用后維持需要的治療劑水平的時(shí)間，這樣可以以本文中關(guān)于該實(shí)施方案化合物定義的頻率施用所述治療劑。在另一方面中，該實(shí)施方案涉及該實(shí)施方案的化合物(如本文中定義)制備藥物的用途，所述藥物增加和/或擴(kuò)大患者血清中所述化合物或構(gòu)建體中治療劑水平，以致能夠以與單獨(dú)治療劑相比更低的劑量施用所述化合物或構(gòu)建體中的所述治療劑(即，以基本相同的施用頻率)。該實(shí)施方案的氨基酸序列還優(yōu)選地是這樣的，以致它們可以以這樣的方式與血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，所述方式使當(dāng)所述氨基酸序列或多肽構(gòu)建體與靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清蛋白分子結(jié)合或締合時(shí)，它們表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中血清蛋白天然半衰期的至少約50%，優(yōu)選地至少約60%，優(yōu)選地至少約70%，更優(yōu)選地至少約80%和最優(yōu)選地至少約90%。該實(shí)施方案的氨基酸序列在向靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物施用后的血清半衰期可以是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中血清蛋白天然半衰期的至少50%,55%，60%,65%,70°/。，75%，80%,85%,90%,95%或至少100%。所謂"所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中血清蛋白天然血清半衰期"意指如下定義的血清半衰期，其中所述血清蛋白在生理學(xué)條件下處于健康個(gè)體中。將血清清蛋白作為血清蛋白的實(shí)例，則血清清蛋白在人中的天然血清半衰期是19天。已知較小的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物具有較短的血清清蛋白天然半衰期，例如在8-19天的范圍內(nèi)。血清清蛋白的具體半衰期可以是至少4,5,6,7,8,9,10，11,12,13,14，15,16，17,18,或19天或更長(zhǎng)。由此得出結(jié)論，例如在人個(gè)體中，該實(shí)施方案的氨基酸序列顯示出與血清清蛋白相關(guān)的血清半衰期為19天的至少約50%，即7.6天。在較小的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中，根據(jù)這些物種中血清清蛋白.的天然半衰期，所述血清半衰期可能再短幾天。在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)"靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物"指猴和猿物種，并包括猴物種，諸如來(lái)自獼猴屬的猴(諸如，和具體地，食蟹猴(7V/acaca/wcfc"/an》和或獼猴(Macacamw/aWa))和狒狒(尸opz'o，以及狨猴(來(lái)自狨(。//油n'x)屬的物種)，松鼠猴(來(lái)自松鼠猴(Sw7mW)屬的物種)和絹毛猴(tamarin)(來(lái)自獠狨(SagWm^)屬的物種)，以及猿物種，諸如黑猩猩(尸fl"frag/o辦f^)，并且還包括人。人是按照該實(shí)施方案優(yōu)選的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。通?？梢詫被嵝蛄谢蚧衔锏陌胨テ诙x為例如由于由天然機(jī)制引起的序列或化合物降解和/或序列或化合物清除或螯合，多肽的血清濃度64在體內(nèi)，被降低50%所需的時(shí)間。可以以任何本身已知的方式，諸如通過(guò)藥物動(dòng)力學(xué)分析，確定該實(shí)施方案的氨基酸序列(和包括所述氨基酸序列的化合物)在相關(guān)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種中的半衰期。合適的技術(shù)對(duì)本領(lǐng)域中的技術(shù)人員應(yīng)該是清楚的，且通?？梢岳绨ㄏ铝胁襟E向靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物適當(dāng)?shù)厥┯煤线m劑量的待處理的氨基酸序列或化合物；每隔一定間隔從所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中收集血液樣品或其它樣品；確定所述血液樣品中該實(shí)施方案的氨基酸序列或化合物的水平或濃度；和由獲得的數(shù)據(jù)(圖)計(jì)算直到該實(shí)施方案的氨基酸序列或化合物的水平或濃度與給藥時(shí)起始水平相比降低50%的時(shí)間。參考例如標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)，諸如Keimeth，A等藥品的化學(xué)穩(wěn)定性藥劑師手冊(cè)(ChemicalStabilityofPharmaceuticals:AHandbookforPharmacists)和Peters等，藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析實(shí)踐方案(Pharmacokineteanalysis:APracticalApproach)(1996)。還參考"藥物代謝動(dòng)力學(xué)"("Pharmacokinetics"),MGibaldi&DPerron,由MarcelDekker出版，第2修訂版(1982)。如在WO04/003019的第6和7頁(yè)和在其中引用的其它參考文獻(xiàn)中所述地，可以利用參數(shù)諸如tl/2-a，tl/2-p和曲線(xiàn)下面積(AUC)表示半衰期。在本說(shuō)明書(shū)中，"半衰期的增加"指這些參數(shù)中任一項(xiàng)，諸如這些參數(shù)中任兩項(xiàng)，或基本全部三項(xiàng)參數(shù)的增加。"半衰期的增加"具體指在tl/2-a和/或AUC或二者增加或不增加的條件下，tl/2-(3的增加。在另一方面，針對(duì)血清蛋白(諸如血清清蛋白，優(yōu)選地，人血清清蛋白)的該實(shí)施方案的氨基酸序列，和具體地，該實(shí)施方案的免疫球蛋白序列，和更具體地，該實(shí)施方案的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列是這樣的，以致它們?cè)讷J猴中具有的半衰期是至少約4天，優(yōu)選地至少約7天，更優(yōu)選地至少約9天。在另一方面，該實(shí)施方案的氨基酸序列是這樣的，以致它們?cè)谌酥芯哂械陌胨テ谑侵辽偌s7天，優(yōu)選地至少約15天，更優(yōu)選地至少約17天。該實(shí)施方案還涉及該實(shí)施方案的化合物，其在人中具有這樣的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的該實(shí)施方案的氨基酸序列半衰期的至少80%,更優(yōu)選地至少90%，諸如95%或更多或基本與其相同。更具體地，該實(shí)施方案還涉及該實(shí)施方案的化合物，其在人中具有的半衰期為至少約7天，優(yōu)選地至少約15天，更優(yōu)選地至少約17天。該實(shí)施方案還提供包括該實(shí)施方案的氨基酸序列的化合物，具體地，除該實(shí)施方案的氨基酸序列外還包括至少一種治療部分的化合物。按照該實(shí)施方案的化合物的特征在于，在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中表現(xiàn)出與該實(shí)施方案的氨基酸序列在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中相當(dāng)?shù)难灏胨テ冢鼉?yōu)選地，至少是該實(shí)施方案氨基酸序列在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中血清半衰期的半衰期，和更優(yōu)選地，大于該實(shí)施方案的氨基酸序列在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中半衰期的半衰期。在一方面，該實(shí)施方案通過(guò)提供本文中公開(kāi)的氨基酸序列實(shí)現(xiàn)該目的，所述氨基酸序列可以結(jié)合于與能夠與FcR:i結(jié)合的血清蛋白，該氨基酸序列還是這樣的，從而它們可以以這樣的方式與血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，所述方式使當(dāng)所述氨基酸序列或多肽構(gòu)建體與血清蛋白分子結(jié)合或締合時(shí)，不(顯著)降低或抑制所述血清蛋白分子與FcRn的結(jié)合(即，與當(dāng)氨基酸序列或多肽構(gòu)建體不與其結(jié)合時(shí)，所述血清蛋白分子與FcRn的結(jié)合相比)。在該實(shí)施方案的這個(gè)方面，所謂"不顯著降低或抑制"意指關(guān)于血清蛋白和FcRn的結(jié)合親和性(如利用合適的測(cè)定，諸如SPR測(cè)量地)不被降低超過(guò)50%，優(yōu)選地不被降低超過(guò)30%，甚至更優(yōu)選地不被降低超過(guò)10%，諸如不被降低超過(guò)5%，或基本完全不被降低。在該實(shí)施方案的這個(gè)方面，"不顯著降低或抑制"還可以意指(或另外意指)血清蛋白分子的半衰期不顯著縮短(如下定義)。如技術(shù)人員通常理解地，當(dāng)在本說(shuō)明書(shū)中，提及結(jié)合時(shí)，所述結(jié)合優(yōu)選地是特異性結(jié)合。當(dāng)如本文中所述的氨基酸序列是單價(jià)免疫球蛋白序列(例如，單價(jià)納米抗體)時(shí)，所述單價(jià)免疫球蛋白序列優(yōu)選地在所述第一生物學(xué)條件下，以10—5-10"2摩爾/升或更低，和優(yōu)選地10:10'12摩爾/升或更低和更優(yōu)選地10—8-10"2摩爾/升的解離常數(shù)(Kd)(即，以105-1012升/摩爾或更高，和優(yōu)選地107-1012升/摩爾或更高和更優(yōu)選地108-1012升膽爾的締合常數(shù)(KA)，和/或以至少107M",優(yōu)選地至少10S]VT1,更優(yōu)選地至少109M",諸如至少1012M"的結(jié)合親和性(Ka))結(jié)合于人血清清蛋白。通常認(rèn)為任何大于104摩爾/升的KD值(或任何小于1(^M"的Ka惶)表示非-特異性結(jié)合。優(yōu)選地，該實(shí)施方案的單價(jià)免疫球蛋白序列在所述第一生物學(xué)條件下，以小于3000nM，優(yōu)選地小于300nM,更優(yōu)選地小于30nM,諸如小于3nM的親和性，結(jié)合于需要的血清蛋白?？梢砸匀魏伪旧硪阎暮线m方式，包括，例如，斯卡查德分析和/或競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定，諸如放射性免疫測(cè)定(RIA)、酶免疫測(cè)定(EIA)和夾心式競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定，以及本領(lǐng)域中本身已知的所述方式的不同變化，確定抗原-結(jié)合蛋白與抗原或抗原決定簇的特異性結(jié)合。在另一方面，該實(shí)施方案的氨基酸序列(和具體地，免疫球蛋白序列，和更具體地，免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列)還是這樣的，從而它們以這樣的方式與血清蛋白(諸如血清清蛋白)結(jié)合或締合，所述方式使當(dāng)氨基酸序列或多肽構(gòu)建體與所述血清蛋白分子結(jié)合或締合時(shí)，不(顯著)減少所述血清蛋白分子的半衰期(即，與當(dāng)所述氨基酸序列或多肽構(gòu)建體不與其結(jié)合時(shí)，血清蛋白分子的半衰期相比)。在該實(shí)施方案的這個(gè)方面，所謂"不顯著減少"意指血清蛋白分子的半衰期(如利用本身已知的合適技術(shù)測(cè)量地)不被減少超過(guò)50%，優(yōu)選地不被減少超過(guò)30%，甚至更優(yōu)選地不被減少超過(guò)10%，諸如不被減少超過(guò)5%，或基本完全不被減少。在另一方面，該實(shí)施方案的氨基酸序列(和具體地，免疫球蛋白序列，和更具體地，免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列)可以針對(duì)能夠與FcRn結(jié)合的血清蛋白，并且還可以是這樣的，以致它們能夠結(jié)合于與所述血清蛋白與FcRn的結(jié)合無(wú)關(guān)的血清蛋白分子上的氨基酸殘基(諸如血清清蛋白上的氨基酸殘基)。具體地，按照該實(shí)施方案的這個(gè)方面，當(dāng)該實(shí)施方案的氨基酸序列針對(duì)血清清蛋白時(shí)，它們是這樣的，以致它們能夠結(jié)合于不形成血清清蛋白結(jié)構(gòu)域m部分的血清清蛋白氨基酸序列。例如，但不限于，該實(shí)施方案的這個(gè)方面提供這樣的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于形成結(jié)構(gòu)域I和/或結(jié)構(gòu)域II部分的血清清蛋白氨基酸序列。該實(shí)施方案的氨基酸序列優(yōu)選地是(單)結(jié)構(gòu)域抗體或適合于用作(單)結(jié)構(gòu)域抗體，并同樣地，可以是重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列(VH序列)或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列(VL序列)，且優(yōu)選地是VH序列。所述氨基酸序列可以例如是所謂的"dAbs"。然而，按照特別優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明的氨基酸序列是納米抗體。為了進(jìn)一步描述和定義納米抗體，以及本說(shuō)明書(shū)中使用的一些其它術(shù)語(yǔ)(諸如，例如且不限于，術(shù)語(yǔ)"針對(duì)")，參考埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審申請(qǐng)(諸如WO06/040153和共同待審國(guó)際申請(qǐng)PCT/EP2006/004678));以及本文中引用的其它現(xiàn)有技術(shù)。同樣地，它們可以是屬于"KERE"-類(lèi)、"GLEW"-類(lèi)或"103-P,R,S"-類(lèi)的納米抗體(也如埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審專(zhuān)利申請(qǐng)中定義地)。優(yōu)選地，本發(fā)明的氨基酸序列是人源化的納米抗體(也如埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審專(zhuān)利申請(qǐng)中定義地)。可以有利地將本文中公開(kāi)的氨基酸序列用作融合配偶體，從而增加治療部分，諸如蛋白質(zhì)、化合物(包括，但不限于，小分子)或其它治療實(shí)體的半衰期。因此，在另一方面，該實(shí)施方案提供包括或基本由如本文中公開(kāi)的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)或多肽。具體地，該實(shí)施方案提供包括或基本由至少一種該實(shí)施方案的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)或多肽構(gòu)建體，所述該實(shí)施方案的氨基酸序列任選地，通過(guò)一種或多種合適的連接體或間隔區(qū)，與至少一種治療部分相連。如本文中進(jìn)一步所述，所述蛋白質(zhì)或多肽構(gòu)建體可以例如(但不限于)是融合蛋白。該實(shí)施方案還涉及蛋白質(zhì)或多肽構(gòu)建體或融合蛋白和構(gòu)建體的治療用途，以及包括所述蛋白質(zhì)或多肽構(gòu)建體或融合蛋白的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由治療蛋白質(zhì)、多肽、化合物、因子或其它實(shí)體組成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療部分針對(duì)需要的抗原或靶標(biāo)，能夠結(jié)合于需要的抗原(和具體地，能夠特異性結(jié)合于需要的抗原)，和/或能夠與需要的靶標(biāo)相互作用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由治療蛋白質(zhì)或多肽組成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由免疫球蛋白或免疫球蛋白序列(包括但不限于免疫球蛋白片段)，諸如抗體或抗體片段(包括但不限于ScFv片段)組成。在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由抗體可變結(jié)構(gòu)域，諸如重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域組成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由至少一種結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體，"dAb"或納米抗體⑧組成。按照該實(shí)施方案，該實(shí)施方案的氨基酸序列優(yōu)選地還是結(jié)構(gòu)域抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體，"dAb"或納米抗體，這樣由此產(chǎn)生的構(gòu)建體或融合蛋白是多價(jià)構(gòu)建體(如本文中所述)和優(yōu)選地多特異性構(gòu)建體(也如本文中定義)，其包括至少2個(gè)結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAbs"或納米抗體⑧(或其組合)，至少其中之一是該實(shí)施方案的氨基酸序列。在具體的實(shí)施方案中，所述至少一種治療部分包括或基本由至少一個(gè)單價(jià)納米抗體⑧或二價(jià)、多價(jià)、雙特異性或多特異性納米抗體⑧構(gòu)建體組成。按照該實(shí)施方案，該實(shí)施方案的氨基酸序列優(yōu)選地還是納米抗體，這樣由此產(chǎn)生的構(gòu)建體或融合蛋白是多價(jià)納米抗體構(gòu)建體(如本文中所述)和優(yōu)選地多特異性納米抗體構(gòu)建體(也如本文中定義)，其包括至少2個(gè)納米抗體，至少其中之一是該實(shí)施方案的氨基酸序列。按照該實(shí)施方案的一個(gè)實(shí)施方案，該實(shí)施方案的氨基酸序列是人源化的納米抗體。而且，當(dāng)該實(shí)施方案的氨基酸序列、蛋白質(zhì)、多肽或構(gòu)建體意欲藥物或診斷應(yīng)用時(shí)，上述各項(xiàng)優(yōu)選地針對(duì)人血清蛋白，諸如人血清清蛋白。當(dāng)所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列，諸如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列時(shí)，還可以使用所述序列的合適(即，適合于本文中提到的目的)片段。例如，當(dāng)所述氨基酸序列是納米抗體時(shí)，所述片段可以基本如wo04/041865中所述。該實(shí)施方案還涉及包括或基本由本文中所述的氨基酸序列或其合適片段組成的蛋白質(zhì)或多肽。該實(shí)施方案的氨基酸序列還可以包含關(guān)于一種或多種其它抗原、抗原決定簇、蛋白質(zhì)、多肽或其它化合物的一個(gè)或多個(gè)另外的結(jié)合位點(diǎn)。如本文中提及地，可以將本文中所述的氨基酸序列有利地用作融合配偶體，從而增加治療部分，諸如蛋白質(zhì)、化合物(包括，但不限于，小分子)或其它治療實(shí)體的半衰期。因此，該實(shí)施方案的一個(gè)實(shí)施方案涉及包含至少一種該實(shí)施方案的氨基酸序列和至少一種治療部分的構(gòu)建體或融合蛋白。所述構(gòu)建體或融合蛋白與治療部分本身相比，優(yōu)選地具有增加的半衰期。通常，(制備和使用)所述融合蛋白和構(gòu)建體可以如以上引用的現(xiàn)有技術(shù)中所述，但是其具有該實(shí)施方案的氨基酸序列，而不是現(xiàn)有技術(shù)69中所述的半衰期增加的部分。通常，本文中所述的構(gòu)建體或融合蛋白優(yōu)選地具有這樣的半衰期，所述半衰期是相應(yīng)治療部分本身半衰期的至少1.5倍，優(yōu)選地至少2倍，諸如至少5倍，例如至少10倍或超過(guò)20倍。而且，優(yōu)選地，任何所述融合蛋白或構(gòu)建體具有這樣的半衰期，所述半衰期與相應(yīng)治療部分本身的半衰期相比，增加超過(guò)1小時(shí)，優(yōu)選地超過(guò)2小時(shí)，更優(yōu)選地超過(guò)6小時(shí)，諸如超過(guò)12小時(shí)。而且，優(yōu)選地，任何融合蛋白或構(gòu)建體具有這樣的半衰期，所述半衰期是超過(guò)1小時(shí)，優(yōu)選地超過(guò)2小時(shí)，更優(yōu)選地超過(guò)6小時(shí)，諸如超過(guò)12小時(shí)，和例如約1天、2天、l周、2周或3周，其優(yōu)選地，不超過(guò)2個(gè)月，盡管后者可能不太關(guān)鍵。而且，如上所提及地，當(dāng)該實(shí)施方案的氨基酸序列是納米抗體時(shí)，可以使用它增加其它免疫球蛋白序列，諸如結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAbs"或納米抗體的半衰期。因此，該實(shí)施方案的一個(gè)實(shí)施方案涉及這樣的構(gòu)建體或融合蛋白，其包括至少一種該實(shí)施方案的氨基酸序列和至少一種免疫球蛋白序列，諸如結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、"dAbs"或納米抗體。所述免疫球蛋白序列優(yōu)選地針對(duì)需要的靶標(biāo)(其優(yōu)選地是治療靶標(biāo))，和/或有效于或適合于治療、預(yù)防和/或診斷目的其它免疫球蛋白序列。因此，在另一方面，該實(shí)施方案涉及多特異性(和具體地，雙特異性)納米抗體構(gòu)建體，其包括至少一種本文中所述的納米抗體，和至少一種其它納米抗體，其中所述至少一種其它納米抗體優(yōu)選地針對(duì)需要的靶標(biāo)(其優(yōu)選地是治療靶標(biāo))，和/或有效于或適合于治療、預(yù)防和/或診斷目的其它納米抗體。關(guān)于納米抗體和包含一種或多種納米抗體的多價(jià)和多特異性多肽和它們的制備的一般性描述，參考埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審申請(qǐng)，諸如WO06/040153和共同待審國(guó)際申請(qǐng)PCT/EP2006/004678(以及這些申請(qǐng)中引用的其它現(xiàn)有技術(shù))，并還參考例如Conrath等，生物化學(xué)雜志(J.BiolChem.)，巻276，10.7346-7350，2001;Muyldermans，分子生物技術(shù)綜述(ReviewsinMolecularBiotechnology)74(2001)，277-302;以及參考例如WO96/34103和WO99/23221。埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審申請(qǐng)中存在關(guān)于該實(shí)施方案一些特殊多特異性和/或多價(jià)多肽的一些其它實(shí)例。具體地，關(guān)于為了增加半衰期包括至少一種針對(duì)血清蛋白的納米抗體的多價(jià)和多特異性構(gòu)建體、編碼所述構(gòu)建體的核酸、包括所述構(gòu)建體的組合物、上述各項(xiàng)的制備、和上述各項(xiàng)的用途的一般性描述，參考埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的國(guó)際申請(qǐng)WO04/041865。通?？梢耘c其中所述半衰期增加的納米抗體類(lèi)似地使用本文中所述的氨基酸序列。在一個(gè)非-限制性實(shí)施方案中，所述其它納米抗體針對(duì)處于單體和/或多聚體(即三聚體)形式的腫瘤壞死因子(x(TNF-a)。所述納米抗體構(gòu)建體的一些實(shí)例可以存在于埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審國(guó)際申請(qǐng)中，其名稱(chēng)為"改良的針對(duì)腫瘤壞死因子-a的納米抗體TM(ImprovedNanobodiesTMagainstTumorNecrosisFactor-alpha)"，其與本申請(qǐng)具有相同的優(yōu)先權(quán)和相同的國(guó)際申請(qǐng)日。該實(shí)施方案還涉及編碼本文中所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白和構(gòu)建體的核苷酸序列或核酸。該實(shí)施方案還包括遺傳構(gòu)建體，其包括上述核苷酸序列或核酸，和一種或多種關(guān)于遺傳構(gòu)建體的本身已知的元件。所述遺傳構(gòu)建體可以處于質(zhì)?；蜉d體的形式。而且，所述構(gòu)建體通常可以如埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審專(zhuān)利申請(qǐng)和本文中提到的現(xiàn)有技術(shù)，以及其中引用的其它現(xiàn)有技術(shù)所述。該實(shí)施方案還涉及包含所述核苷酸序列或核酸，和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))本文中所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白和構(gòu)建體的宿主或宿主細(xì)胞。而且，所述宿主細(xì)胞通?？梢匀绨２╈`克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審專(zhuān)利申請(qǐng)和本文中提到的現(xiàn)有技術(shù)，以及其中引用的其它現(xiàn)有技術(shù)中所述。該實(shí)施方案還涉及用于制備本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的方法，所述方法包括在這樣的條件下培養(yǎng)或維持本文中所述的宿主細(xì)胞，在所述條件下，所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生或表達(dá)如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體，且任選地，還包括分離由此產(chǎn)生的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體。而且，通?？梢匀绨２╈`克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審專(zhuān)利申請(qǐng)和本文中提到的現(xiàn)有技術(shù)，以及其中引用的其它現(xiàn)有技術(shù)中所述地執(zhí)行所述方法。該實(shí)施方案還涉及藥物組合物，其包括至少一種如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體，和任選地，至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。所述制劑、載體、賦形劑和稀釋劑通常可以如埃博靈克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待審專(zhuān)利申請(qǐng)和本文中提到的現(xiàn)有技術(shù)，以及其中引用的其它現(xiàn)有技術(shù)中所述。然而，由于本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體具有增加的半衰期，所以?xún)?yōu)選地將它們施用到循環(huán)中。同樣地，可以以任何容許所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體進(jìn)入循環(huán)的合適方式，諸如靜脈內(nèi)、通過(guò)注射或輸注，或以任何其它容許所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體進(jìn)入循環(huán)的合適方式(包括口服施用、經(jīng)由皮膚施藥、透粘膜施用、鼻內(nèi)施用、通過(guò)肺的施用等)施用它們。而且，還例如由WO04/041862的教導(dǎo)，技術(shù)人員應(yīng)該清楚合適的施用方法和途徑。因此，在另一方面，該實(shí)施方案涉及用于預(yù)防和/或治療至少一種能夠通過(guò)使用如本文中所述的化合物、融合蛋白或構(gòu)建體預(yù)防或治療的疾病或病癥的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用藥物有效量的該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體，和/或藥物有效量的包括所述該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的藥物組合物。能夠通過(guò)使用如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體預(yù)防或治療的疾病和病癥通常與能夠通過(guò)使用該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體中存在的治療部分預(yù)防或治療的疾病和病癥相同。待治療的受試者可以是任何靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，但是具體地是人。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，待治療的受試者應(yīng)該具體地是患有本文中提及疾病和病癥或處于本文中提及疾病和病癥危險(xiǎn)的人。更具體地，本發(fā)明涉及治療方法，其中施用該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的頻率是該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體所針對(duì)的血清蛋白的天然半衰期的至少50%，優(yōu)選地至少60%,優(yōu)選地至少70%,更優(yōu)選地至少80%和最優(yōu)選地至少90%。72屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的對(duì)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物具體施用頻率是該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體所針對(duì)的血清蛋白天然半衰期的至少50%，55%,60%，65%,70%，75%,80%,85%,90%，95%或至少100%。換言之，屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的具體施用頻率是每4,5,6,7,8，9,10，11，12,13,14，15,16,17，18,或19天。不限制地，上文提到的施用頻率特別適合于維持利用所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體治療的受試者血清中的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的需要的水平，任選地，在施用意欲建立所述需要的血清水平的一次或多次(起始)劑量后。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，所述需要的血清水平可以特別依賴(lài)于使用的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體和/或待治療的疾病。臨床醫(yī)生或醫(yī)師應(yīng)該能夠選擇需要的血清水平，和選擇向待治療受試者施用的劑量和/或量，從而在以本文中提到的頻率施用該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體時(shí)，在所述受試者中獲得和/或維持需要的血清水平。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"預(yù)防和/或治療"不僅包括預(yù)防和/或治療疾病，通常還包括預(yù)防疾病的發(fā)作，減緩或逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)程，預(yù)防或減緩一種或多種與疾病相關(guān)癥狀的發(fā)作，減輕和/或緩解一種或多種與疾病相關(guān)的癥狀，減少疾病和/或其任意相關(guān)癥狀的嚴(yán)重性和/或持續(xù)時(shí)間，和/或預(yù)防疾病和/或其任意相關(guān)癥狀嚴(yán)重性的進(jìn)一步增加，預(yù)防、降低或逆轉(zhuǎn)由疾病導(dǎo)致的任何生理學(xué)損傷，和通常任何有益于待治療患者的藥理學(xué)作用。待治療的受試者可以是任何靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，但是具體地是人。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，待治療的受試者應(yīng)該具體地是患有能通過(guò)本文中提及的治療部分治療的疾病和病癥或處于能通過(guò)本文中提及的治療部分治療的疾病和病癥危險(xiǎn)的人。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該實(shí)施方案涉及用于免疫治療，和具體地用于被動(dòng)免疫治療的方法，所述方法包括向患有本文中提及疾病和病癥或處于本文中提及疾病和病癥危險(xiǎn)的受試者施用藥物有效量的該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體，和/或藥物有效量的包括所述該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的藥物組合物。該實(shí)施方案還涉及用于延長(zhǎng)或增加治療劑的血清半衰期的方法。在這73些方法中，治療劑與任意該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體，包括多價(jià)和多特異性納米抗體相接觸，以使該治療劑與所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或締合。所述治療劑和所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體可以以技術(shù)人員已知的各種方式結(jié)合或締合。在生物學(xué)治療劑，諸如肽或多肽的情形中，該治療劑可以按照本領(lǐng)域中已知的方法與所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體融合。所述治療劑可以直接融合，或利用間隔區(qū)或連接體分子或序列融合。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述間隔區(qū)和連接體由氨基酸組成，但是可以如本領(lǐng)域中熟知的方式使用其它非-氨基酸間隔區(qū)或連接體。因此，接觸所述治療劑的步驟可以包括通過(guò)連接所述肽或多肽和該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體，包括多價(jià)和多特異性納米抗體來(lái)制備融合蛋白。所述治療劑還可以與該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體直接結(jié)合。作為一個(gè)實(shí)例，多價(jià)和多特異性納米抗體可以包括至少一種結(jié)合所述血清蛋白(諸如血清清蛋白)的可變結(jié)構(gòu)域和至少一種結(jié)合所述治療劑的可變結(jié)構(gòu)域。用于延長(zhǎng)或增加治療劑血清半衰期的方法還可以包括在所述治療劑與該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體結(jié)合或締合后，向靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物施用所述治療劑。在所述方法中，如本文中別處所述地，以顯著量延長(zhǎng)或增加所述治療劑的半衰期。按照適合于預(yù)防和/或治療待預(yù)防或治療的疾病或病癥的治療方案，施用所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體和/或包括所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的組合物。臨床醫(yī)生通常應(yīng)該能夠根據(jù)因素，諸如待預(yù)防或治療的疾病或病癥，待治療疾病的嚴(yán)重性和/或其癥狀的嚴(yán)重性，待使用的該實(shí)施方案特定納米抗體或多肽，待使用的特殊施用途徑和藥物制劑或組合物，患者的年齡、性別、體重、飲食、一般狀態(tài)，和臨床醫(yī)生熟知的類(lèi)似因素，確定合適的治療方案。通常，所述治療方案應(yīng)該包括以一種或多種藥物有效量或劑量，施用一種或多種該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體，或一種或多種包括所述該實(shí)施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的組合物。臨床醫(yī)生也可以根據(jù)以上引用的因素確定具體的待施用量或劑通常，為了預(yù)防和/或治療本文中提到的疾病和病癥，并根據(jù)待治療的具體疾病或病癥，待使用的特定氨基酸序列、化合物、融合蛋白或構(gòu)建體的功效和/或半衰期，使用的具體施用途徑和具體藥物劑型或組合物，通常應(yīng)該以這樣的量，在一天中連續(xù)地(例如通過(guò)輸注)作為單次每日劑量或作為多次分開(kāi)的劑量施用該實(shí)施方案的納米抗體和多肽，所述量是1克-0.01微克/kg體重/天，優(yōu)選地O.l克-0.1微克/kg體重/天，諸如約1,10,100或1000微克/kg體重/天。臨床醫(yī)生通常能夠根據(jù)本文中提到的因素確定合適的每日劑量。還應(yīng)該清楚地是，在具體情形中，臨床醫(yī)生可以選擇偏離這些量，例如，基于以上引用的因素和他的專(zhuān)業(yè)判斷。通常，可以由對(duì)類(lèi)似常規(guī)抗體或抗體片段通常施用的量獲得一些關(guān)于待施用量的指導(dǎo)，所述類(lèi)似常規(guī)抗體或抗體片段針對(duì)基本通過(guò)相同途徑施用的相同靶標(biāo)，然而考慮親和性/親和力、功效、生物分布、半衰期和技術(shù)人員熟知的類(lèi)似因素中的差別。通常，在以上方法中，應(yīng)該使用該實(shí)施方案的單納米抗體或多肽。然而，組合使用兩種或更多該實(shí)施方案的納米抗體和/或多肽屬于該實(shí)施方案的范圍。該實(shí)施方案的納米抗體和多肽還可以與一種或多種其它藥物活性化合物或原理組合使用，即作為組合的治療方案，其可以或可以不引起協(xié)同作用。而且，臨床醫(yī)生應(yīng)該能夠基于以上引用的因素和他的專(zhuān)業(yè)判斷，選擇所述其它化合物或原理，以及合適的組合治療方案。具體地，該實(shí)施方案的納米抗體和多肽可以與其它藥物活性化合物或原理組合使用，所述藥物活性化合物或原理用于或能夠用于預(yù)防和/或治療能夠用該實(shí)施方案融合蛋白或構(gòu)建體預(yù)防或治療的疾病和病癥，且作為其結(jié)果，可以或可以不獲得協(xié)同作用。如臨床醫(yī)生應(yīng)該清楚地，可以以關(guān)于有關(guān)疾病或病癥本身已知的任何方式，確定和/或關(guān)注按照該實(shí)施方案使用的治療方案的效力。臨床醫(yī)生還應(yīng)該能夠，在適當(dāng)和或個(gè)案基礎(chǔ)上，改變或修改具體的治療方案，從而獲得理想的治療效果，以避免、限制或減少不希望的副作用，和/或在一方面獲得理想治療效果和另一方面避免、限制或減少不希望副作用之間獲得適當(dāng)?shù)钠胶?。通常，?yīng)該遵從所述治療方案，直到獲得理想的治療效果和/或只要是為了維持理想治療效果。而且，這可以由臨床醫(yī)生確定。發(fā)明詳述由本文中進(jìn)一步的描述，本發(fā)明的其它方面、實(shí)施方案、優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用將變得清楚，其中a)圖1是非限制性示意圖，顯示FcRn、與FcRn結(jié)合的血清蛋白(諸如血清清蛋白或IgG)、本發(fā)明的雙特異性化合物(具體地，按照如本文中所述用于延長(zhǎng)半衰期的具體實(shí)施方案的雙特異性化合物)和抗原(即，作為第二意欲或需要的分子)之間可能的相互作用的實(shí)例。參考本文中進(jìn)一步的描述。b)圖2是這樣的示意圖，其顯示FcRn和與FcRn結(jié)合的血清蛋白之間的相互作用是pH依賴(lài)性/敏感性的。參考本文中進(jìn)一步的描述。c)表l-3概述本發(fā)明的雙特異性化合物(具體地，按照如本文中所述用于延長(zhǎng)半衰期的具體實(shí)施方案的雙特異性化合物)能夠與血清蛋白(即，作為第一意欲或需要的分子)和抗原(作為第二意欲或需要的分子)結(jié)合的方式的不同非限制性實(shí)例。還參考本文中的迸一步描述。d)除非另外指示或定義，所有使用的術(shù)語(yǔ)具有它們?cè)诒绢I(lǐng)域中的普通含義，技術(shù)人員應(yīng)該對(duì)此很清楚。參考例如標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)，諸如Sambrook等,"分子克隆:實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)"("MolecularCloning:ALaboratoryManual")(第2版)，巻1-3，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)(1989);RAusubel等，編輯，"當(dāng)前分子生物學(xué)方案"("Currentprotocolsinmolecularbiology"),GreenPublishing禾卩WileyInterscience,纟丑約(1987);Lewin，"基因II"("GenesII"),JohnWiley&Sons,紐約，N.Y.，(1985);Old等.，"基因操作原理遺傳工程入門(mén)"("PrinciplesofGeneManipulation:AnIntroductiontoGeneticEngineering")，第2版,力口禾ll,畐尼亞大學(xué)出版社(UniversityofCaliforniaPress),伯克利，CA(1981);Roitt等.，"免疫學(xué)"("Immunology")(第6版)，Mosby/Elsevier,愛(ài)丁堡(2001);Roitt等.，Roitt基本免疫學(xué)(Roitt，sEssentialImmunology),第10版，BlackwellPublishing,UK(2001);和Janeway等，"免疫生物學(xué)"("lmmunobiology，，)(第6版)，GarlandSciencePublishing/ChurchillLivingstone,紐約(2005),以及本文中引用的一般背景；e)除非另外指示，術(shù)語(yǔ)"免疫球蛋白序列"-無(wú)論其在本文中用于指重鏈抗體或指常規(guī)4-鏈抗體-均作為包括全長(zhǎng)抗體、其各條鏈、以及其所有部分、結(jié)構(gòu)域或片段(包括但不限于，抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域或片段，諸如分別地，VHH結(jié)構(gòu)域或Vh/Vl結(jié)構(gòu)域)的一般術(shù)語(yǔ)使用。另外，術(shù)語(yǔ)"序列"用于本文中(例如，在如"免疫球蛋白序列"、"抗體序列"、"可變結(jié)構(gòu)域序列"、"vhh序歹U"或"蛋白質(zhì)序列"中)時(shí)，應(yīng)該通常理解為包括相應(yīng)的氨基酸序列以及編碼所述氨基酸序列的核酸序列或核苷酸序列，除非上下文需要更有限的解釋?zhuān)籪)如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地，除非另外指示，可以且已經(jīng)以本身已知的方式執(zhí)行沒(méi)有特別詳細(xì)描述的所有方法、步驟、技術(shù)和操作。還參考例如標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)和本文中提到的一般
背景技術(shù)：
，和其中引用的其它參考。g)認(rèn)為核酸序列或氨基酸序列是"(處于)基本分離的形式"-例如，與其天然生物學(xué)來(lái)源和/或從中獲得其的反應(yīng)培養(yǎng)基或培養(yǎng)基相比-當(dāng)其與至少一種在所述來(lái)源或培養(yǎng)基中通常與其相聯(lián)合的其它成分，諸如其它核酸、其它蛋白質(zhì)/多肽、其它生物學(xué)成分或大分子或至少一種污染物、雜質(zhì)或微量組分分隔開(kāi)時(shí)。具體地，當(dāng)對(duì)其純化至少2-倍，具體地至少10-倍，更具體地至少100-倍，和至多1000-倍或更多時(shí)，認(rèn)為核酸序列或氨基酸序列是"基本分離的"。如利用合適的技術(shù)，諸如合適的層析技術(shù)，諸如聚丙烯酰胺-凝膠電泳所確定地，"處于基本分離形式"的核酸序列或氨基酸序列優(yōu)選地基本是同源的；h)術(shù)語(yǔ)"結(jié)構(gòu)域"用于本文中時(shí)，通常指抗體鏈的球狀區(qū)，和具體地，重鏈抗體的球狀區(qū)，或基本由所述球狀區(qū)組成的多肽。通常，所述結(jié)構(gòu)域應(yīng)該包括例如，作為折疊或通過(guò)二硫鍵穩(wěn)定的肽環(huán)(例如3或4個(gè)肽環(huán));i)術(shù)語(yǔ)"抗原決定簇"指由抗原-結(jié)合分子(諸如本發(fā)明納米抗體或多肽)和更具體地，由所述分子的抗原-結(jié)合位點(diǎn)識(shí)別的抗原上的表位。術(shù)語(yǔ)"抗原決定簇"和"表位"也可以交替用于本文中；77j)認(rèn)為能夠結(jié)合于特異性抗原決定簇、表位、抗原或蛋白質(zhì)(或其至少一個(gè)部分、片段或表位)，對(duì)其具有親和性和/或?qū)ζ渚哂刑禺愋缘陌被嵝蛄?諸如本發(fā)明的納米抗體、抗體、多肽，或其通常的抗原結(jié)合蛋白或多肽或片段)"針對(duì)(against或directedagainst)"所述抗原決定簇、表位、抗原或蛋白質(zhì)；k)術(shù)語(yǔ)"特異性"指特定抗原-結(jié)合分子或抗原-結(jié)合蛋白(諸如本發(fā)明的納米抗體或多肽)分子能夠結(jié)合的不同抗原或抗原決定簇類(lèi)型的數(shù)量?？梢曰谟H和性和/或親和力確定抗原-結(jié)合蛋白的特異性。親和性，由抗原與抗原-結(jié)合蛋白解離的平衡常數(shù)(KD)表示，是抗原決定簇和抗原-結(jié)合蛋白上的抗原-結(jié)合位點(diǎn)之間結(jié)合強(qiáng)度的量度標(biāo)準(zhǔn)Kd値越小，則抗原決定簇和抗原-結(jié)合分子之間的結(jié)合強(qiáng)度越強(qiáng)(備選地，還可以將親和性表示為親合性常數(shù)(KA)，其為l/Ko)。如技術(shù)人員應(yīng)該清楚地(例如基于本文中進(jìn)一步的公開(kāi)內(nèi)容)，根據(jù)特異性目的抗原，可以以本身已知的方式確定親和性。親和力是抗原-結(jié)合分子(諸如本發(fā)明的納米抗體或多肽)和相關(guān)抗原之間結(jié)合強(qiáng)度的量度標(biāo)準(zhǔn)。親和力與抗原決定簇和其在抗原-結(jié)合分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間的親和性以及抗原-結(jié)合分子上存在的相關(guān)結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量有關(guān)。可以以任何本身已知的合適方式，包括，例如斯卡査德分析和/或競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定，諸如放射性免疫測(cè)定(RIA)、酶免疫測(cè)定(EIA)和夾心式競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定，和其在本領(lǐng)域中本身已知的不同變體，確定抗原-結(jié)合蛋白與抗原或抗原決定簇的特異性結(jié)合為了一般性描述重鏈抗體及其可變結(jié)構(gòu)域，特別參考下列參考文獻(xiàn)，將其作為一般
背景技術(shù)：
提及VrijeUniversiteitBmssel的WO94/04678，WO95/04079和WO96/34103;Unilever的WO94/25591，WO99/37681,WO00/40968,WO00/43507,WO00/65057,WO01/40310,WO01/44301,EP113423l和WO02/48193;VlaamsInstituutvoorBiotechnologie(VIB)的WO97/49805，WO01/21817,WO03/035694,WO03/054016和WO03/055527;AlgonomicsN.V.和申請(qǐng)人的WO03/050531;加拿大國(guó)家研究委員會(huì)(NationalResearchCouncilofCanada)的WO01/90190;抗體學(xué)會(huì)(InstituteofAntibodies)的WO03/025020(=EP1433793);以及申請(qǐng)人的WO04/041867,WO04/041862,WO04/041865,WO04/041863,WO04/062551和申請(qǐng)人的其它公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)；Hamers-Casterman等.，自然(Nature)1993年6月3日；363(6428):446-8;Davies和Riechmann，F(xiàn)EBS通訊(FEBSLett.)1994年2月21日；339(3):285-90;Muylde腿ns等.，蛋白質(zhì)工程(ProteinEng.)1994年9月；7(9):1129-3;Davies和Riechmann,生物技術(shù)(Biotechnology)(NY)1995年5月；13(5):475-9;Gharoudi等"應(yīng)用生物技術(shù)第9屆討論會(huì)(9thForumofAppliedBiotechnology)，Med.Fac.LandbouwUniv.Gent.1995;60/4a部分I:2097-2100;Davies和Riechmann,蛋白質(zhì)工程(ProteinEng.)1996年6月；9(6):531-7;Desmyter等.，自然結(jié)構(gòu)生物學(xué)(NatStructBiol.)1996年9月；3(9):803-11;Sheriff等.，自然結(jié)構(gòu)生物學(xué)(NatStructBiol.)1996年9月；3(9):733-6;Spinelli等.，自然結(jié)構(gòu)生物學(xué)(NatStructBiol.)1996年9月；3(9):752-7;ArbabiGhahroudi等.,FEBS通訊(FEBSLett.)1997年9月15日；414(3):521-6;Vu等.，分子免疫學(xué)(MolImmunol.)1997年11-12月；34(16-17):1121-31;Atarhouch等,，駱鴕實(shí)踐和研究雜志(JournalofCamelPracticeandResearch)1997;4:177-182;Nguyen等.，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)1998年1月23曰；275(3):413-8;Lauwereys等.，EMBO雜志(EMBOJ.)1998年7月1日；17(13):3512-20;Frenken等.，研究免疫學(xué)(ResImmunol.)1998年7-8月;149(6):589-99;Transue等.，蛋白質(zhì)(Proteins)1998年9月1日；32(4):515-22;Muyldermans和Lauwereys，分子識(shí)別雜志(J.Mol.Recognit.)1999年3-4月；12(2):131-40;vanderLinden等.，生物化學(xué)和生物物理錄集(Biochim.Biophys.Acta)1999年4月12日；1431(1):37-46.;Decanniere等.，結(jié)構(gòu)折疊和設(shè)計(jì)(StructureFold,Des.)1999年4月15日；7(4):361-70;Nguyen等.，分子免疫學(xué)(Mol.Immunol.)1999年6月；36(8):515-24;Woolven等.，免疫遺傳學(xué)(Immunogenetics)1999年10月；50(1-2):98-101;Riechmann禾卩Muyldermans,免疫學(xué)方法雜志(J.Immunol.Methods)1999年12月10日；231(1-2):25-38;Spinelli等.，生物化學(xué)(Biochemistry)2000年2月15日；39(6):1217-22;Frenken等.，生物技術(shù)雜志(J.Biotechnol.)2000年2月28日；78(1):11-21;Nguyen等.，EMBO雜志(EMBOJ,)2000年3月1日；19(5):921-30;vanderLinden等.，免疫學(xué)方法雜志(J.Immunol.Methods)2000年6月23日；240(1-2):185-95;Decanniere等.，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)2000年6月30日；300(1):83-91;vanderLinden等"生物技術(shù)雜志(J.Biotechnol.)2000年7月14日；80(3):261-70;Harmsen等.，分子免疫學(xué)(Mol.Immunol.)2000年8月；37(10):579-90;Perez等.，生物化學(xué)(Biochemistry)2001年1月9日；40(1):74-83;Conrath等.，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)2001年3月9日；276(10):7346-50;Muyldermans等.，生物化學(xué)科學(xué)趨勢(shì)(TrendsBiochemSci.)2001年4月；26(4):230-5;MuyldermansS.，生物技術(shù)雜志(J.Biotechno.)2001年6月；74(4):277-302;Desmyter等.，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)2001年7月13日;276(28):26285-90;Spinelli等.,分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)2001年8月3日；311(1):123-9;Conrath等.，抗菌劑化學(xué)療法(AntimicrobAgentsChemother.)2001年10月；45(10):2807-12;Decanniere等.，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)2001年10月26日；313(3):473-8;Nguyen等.，現(xiàn)代免疫學(xué)(AdvImmunol.)2001;79:261-96;Muruganandam等.，F(xiàn)ASEB雜志(FASEBJ.)2002年2月；16(2):240-2;Ewert等.，生物化學(xué)(Biochemistry)2002年3月19日；41(11):3628-36;Dumoulin等.，蛋白質(zhì)科學(xué)(ProteinSci.)2002年3月；11(3):500-15;Cortez-Retamozo等.，國(guó)際癌癥雜志(Int.J.Cancer.)2002年3月20日；98(3):456-62;Su等.,分子生物學(xué)進(jìn)展(Mol,Biol.Evol.)2002年3月；19(3):205-15;vanderVaartJM.，分子生物學(xué)方法(MethodsMolBiol.)2002;178:359-66;Vranken等.，生物化學(xué)(Biochemistry)2002年7月9日；41(27):8570-9;Nguyen等.，免疫遺傳學(xué)(Immunogenetics)2002年4月；54(1):39-47;Renisio等.，蛋白質(zhì)(Proteins)2002年6月1日；47(4):546-55;Desmyter等.，生物化學(xué)雜志G.Biol.Chem.)2002年6月28日；277(26):23645-50;Ledeboer等.,每日科學(xué)雜志(J.DairySci.)2002年6月；85(6):1376-82;DeGenst等.，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)2002年8月16日；277(33):29897-907;Ferrat等.，生物化學(xué)雜志(Biochem.J.)2002年9月1日；366(Pt2):415-22;Thomassen等.，酶和微生物技術(shù)(EnzymeandMicrobialTechnol.)2002;30:273-8;Harmsen等.，應(yīng)用微生物學(xué)和生物技術(shù)(Appl.Microbiol.Biotechno1.)2002年12月；60(4):449-54;Jobling等.,自然生物技術(shù)(NatBiotechnol.)2003年1月；21(1):77-80;Conrath等.，免疫學(xué)發(fā)展和比較(Dev.Comp.Immunol.)2003年2月；27(2):87-103;Pleschberger等.，生物綴合物化學(xué)(Bioconjug.Chem.)2003年3-4月；14(2):440-8;Lah等.，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)2003年4月18日；278(16):14101-11;Nguyen等.，免疫學(xué)(Immunology.)2003年5月；109(1):93-101;Joosten等.，微生物細(xì)胞實(shí)情(Microb.CellFact.)2003年1月30日；2(1):l;Li等.,蛋白質(zhì)(Proteins)2003年7月1日；52(1):47-50;Loris等,，生物化學(xué)(BiolChem.)2003年7月25日；278(30):28252-7;vanKoningsbruggen等.，免疫學(xué)方法雜志(J.Immunol.Methods)2003年8月；279(1-2):149-61;Dumoulin等.,自然(Nature.)2003年8月14日；424(6950):783-8;Bond等.，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)2003年9月19日；332(3):643-55;Yau等.，免疫學(xué)方法雜志(J.Immunol.Methods)2003年10月1日；281(1-2):161-75;Dekker等"病毒雜志(J.Virol.)2003年11月；77(22):12132-9;Meddeb誦Mouelhi等.，Toxicon,2003年12月；42(7):785-91;Verheesen等.，生物化學(xué)和生物物理錄集(Biochim.Bi叩hys.Acta)2003年12月5日；1624(1-3):21-8;Zhang等.，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.BioL)2004年1月2日；335(1):49-56;Stijlemans等.,生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem,)2004年1月9日；279(2):1256-61;Cortez-Retamozo等"癌癥研究(CancerRes.)2004年4月15日；64(8):2853-7;Spinelli等.，F(xiàn)EBS通訊(FEBSLett.)2004年4月23日；56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原-反應(yīng)性(第一)結(jié)合蛋白自身與另一種識(shí)別血清蛋白的(第二)結(jié)合蛋白相連，已知所述血清蛋白識(shí)別新生兒Fc受體(FcRn)或補(bǔ)救受體。備選地，同等優(yōu)選地，所述抗原-反應(yīng)性結(jié)合蛋白包含與所述抗原結(jié)合位點(diǎn)不同的第二結(jié)合位點(diǎn)，其識(shí)別已知識(shí)別FcRn或補(bǔ)救受體的血清蛋白。其中特別重要的是清蛋白，以41.8mg/ml存在于人血漿中(Davies和Morris,1993)，己知其在內(nèi)體再循環(huán)期間(Kim等.，2006)在與IgG結(jié)合所用位點(diǎn)不同的位點(diǎn)處結(jié)合于FcRn。另一種同等重要的血清蛋白是IgG，其豐富地存在(ll-12/mg/ml)于人血清中(Waldmann和Strober)。如果抗原-反應(yīng)性蛋白在被FcRn識(shí)別的位點(diǎn)處結(jié)合于血清蛋白，則抗原-結(jié)合蛋白復(fù)合物在內(nèi)體吸收后迅速降解，這是因?yàn)檠宓鞍讍适Я吮籉cRn拯救的潛力。按照本發(fā)明，如與內(nèi)體區(qū)室條件相比，結(jié)合蛋白與清蛋白在血漿中普遍存在的條件之間的結(jié)合強(qiáng)度差別能夠合理地說(shuō)明Kd和tl/2之間的關(guān)系。在所有動(dòng)物中，清蛋白以非常高的濃度存在于血漿中(如Davis和Morris,1993列出地，在小鼠、大鼠、兔、猴、狗和人中分別為32.7,31.6,38.7,49.3,26,3,41.8mg/ml)。Chaudhury等.(2003)和Kim等.(2006)顯示清蛋白通過(guò)與FcRn(組織相容性復(fù)合物-相關(guān)Fc受體)的酸依賴(lài)性高親和性的結(jié)合，被組成性地胞吞并免于降解。FcRn還再循環(huán)IgG，所述IgG通過(guò)流體相胞飲作用或通過(guò)受體-介導(dǎo)的吸收進(jìn)入胞吞途徑(Ober等.,2004)。有趣的是，清蛋白以1:1的化學(xué)計(jì)量結(jié)合于FcRn(Chaudhury等.，2006)，相反，在平衡條件下FcRn-IgG復(fù)合物具有2:1的化學(xué)計(jì)量(Sanchez等，1999)，盡管如小鼠中所述的表觀1:1化學(xué)計(jì)量(Popov等.，1996)，但是顯示出其與小鼠上碳水化合物部分的改變有關(guān)，并且可以與非-平衡測(cè)量有關(guān)(Sanchez等,1999)。由關(guān)于野生型和FcRn-缺陷型小鼠的分析，詳細(xì)分析了清蛋白的周轉(zhuǎn)率(Kim等.，2006)。清蛋白再循環(huán)率非常高。更精確地，清蛋白再循環(huán)率等于31,000nmol/日/kg，其中穩(wěn)態(tài)清蛋白產(chǎn)生和分解代謝率為31,000nmol/日/kg。在內(nèi)體處理過(guò)程中，清蛋白或IgG在內(nèi)體的酸性條件下結(jié)合FcRn，并遵循如關(guān)于IgG補(bǔ)救所詳述的分類(lèi)內(nèi)體進(jìn)行胞吐的途徑(Ober等.,2004)。應(yīng)該注意到清蛋白和IgG結(jié)合于FcRn中的不同位點(diǎn)(Kim等,2006)。關(guān)于清蛋白與FcRn的親和性在酸性pH時(shí)比在中性pH時(shí)高約200倍，這符合對(duì)FcRn提出的作為保護(hù)受體的作用，即防止與FcRn結(jié)合的清蛋白進(jìn)入溶酶體降解途徑。關(guān)于人FcRn的人清蛋白在pH6時(shí)的Kd是1.8-3pM(Chaudhury等.，2006)。也對(duì)IgG觀察到在pH6和中性pH之間IgG與FcRn增加的結(jié)合。發(fā)現(xiàn)野生型IgGl和人FcRn在pH6時(shí)的Kd是2527nM(Dall，Acqua等.，2002)。應(yīng)該注意到，盡管FcRn在酸性pH下以相似的親和性結(jié)85合清蛋白或IgG，但是如與IgG-FcRn相比，清蛋白-FcRn之間的化學(xué)計(jì)量差別可能在內(nèi)體區(qū)室中引起FcRn對(duì)IgG增強(qiáng)的保護(hù)。在與血清蛋白結(jié)合的條件性的氨基酸序列(諸如與清蛋白或IgG結(jié)合的納米抗體)進(jìn)入內(nèi)體區(qū)室后，它遭遇內(nèi)體的酸性pH(接近pH6)，這引起條件性的氨基酸序列與清蛋白親和性的降低。另外，與清蛋白結(jié)合的(進(jìn)一步)減少可以伴隨著蛋白酶敏感性的增加。盡管本發(fā)明不局限于特殊的機(jī)制或解釋?zhuān)侨绻傻味ú糠稚婕胺€(wěn)定與清蛋白的相互作用，或如果酸性pH誘導(dǎo)影響Kd的構(gòu)象調(diào)整，則認(rèn)為Kd應(yīng)該受到pH的影響。按照本發(fā)明，這顯著增加了本發(fā)明氨基酸序列(或包括本發(fā)明氨基酸序列的化合物)的tl/2。因此，按照本發(fā)明的一個(gè)非限制性方面，本發(fā)明清蛋白結(jié)合條件性結(jié)合物(或包括所述結(jié)合物的化合物)延長(zhǎng)的半衰期是通過(guò)增加其在血清pH(7.2-7.4)下與清蛋白的結(jié)合強(qiáng)度獲得的，這樣，在不太適宜的內(nèi)體條件下，剩余表觀Kd是這樣的，從而只有有限的結(jié)合分子組分與清蛋白解離；和/或是通過(guò)不增加其與清蛋白在血清pH下的結(jié)合強(qiáng)度，但增加在內(nèi)體條件下的結(jié)合強(qiáng)度獲得的。而且，按照本發(fā)明，該教導(dǎo)不局限于清蛋白，且還能夠應(yīng)用于結(jié)合于其它血清蛋白的分子，諸如IgG。在非限制性圖1中示意性地描述了本發(fā)明的這個(gè)特定方面。眾所周知地，結(jié)合于FcRn的不同血清蛋白的相互作用是pH敏感的(圖1中的相互作用1)。作為結(jié)果，復(fù)合結(jié)合蛋白、抗原和血清蛋白之間的復(fù)合物，在胞飲作用和pH下降后，能夠通過(guò)血清蛋白結(jié)合于FcRn，并補(bǔ)救其成分免于降解(圖2)。本發(fā)明條件性的結(jié)合物對(duì)隨著內(nèi)在化發(fā)生的條件改變同等敏感，且同樣影響結(jié)合的抗原的半衰期。如本發(fā)明這個(gè)方面的一些具體非限制性實(shí)例，該復(fù)合結(jié)合蛋白、抗原或血清蛋白的相互作用(在圖l中分別地，相互作用3和2)，可以或可以不對(duì)內(nèi)在化后引起的條件改變"敏感"。還通過(guò)代表性但非限制性實(shí)例的方法，將其總結(jié)在表l、2和3中，其中條件性的結(jié)合物在pH6無(wú)相互作用，且在pH7.4具有100%的相互作用，己知這些原理適用于在兩種條件之間表現(xiàn)出10-倍、100-倍或1000-倍差別的優(yōu)選相互作用。還應(yīng)該清楚的是，pH6.0表示"酸性pH"條件，且該條件還可以指如Kamei等提出的5-6范圍內(nèi)的內(nèi)體pH(2005)。內(nèi)在化后，本發(fā)明氨基酸序列、血清蛋白和/或抗原(作為第二意欲或需要的化合物)之間的相互作用隨著內(nèi)在化，可能基本不受影響，被減弱或增強(qiáng)(提供本發(fā)明化合物和血清蛋白或抗原之間的相互作用中至少之一受到影響)。如果相互作用2和3對(duì)內(nèi)在化引起的條件改變均不敏感，則抗原、復(fù)合結(jié)合蛋白和血清蛋白之間在循環(huán)中形成的復(fù)合物得到大規(guī)模再循環(huán)，這歸因于血清蛋白與FcRn的相互作用(例如，通過(guò)與IgG上或血清清蛋白上容許與FcRn相互作用的位點(diǎn)的相互作用)。將第一非限制性實(shí)例描述為表l中的情形B:在該情形中，第一結(jié)合蛋白和其抗原之間的相互作用隨著pH的降低而喪失，并釋放進(jìn)入內(nèi)體區(qū)室。作為結(jié)果，抗原本身被降解，但是復(fù)合結(jié)合蛋白被拯救免于降解?？梢允褂盟龇椒▉?lái)避免在循環(huán)中積累復(fù)合結(jié)合蛋白-Ag復(fù)合物。該復(fù)合物形成抗原量下降(sink)，這有時(shí)迫使增加藥物劑量(例如，對(duì)一些抗-TNF-阻滯劑)。另一種優(yōu)勢(shì)是再循環(huán)復(fù)合結(jié)合蛋白，并因此不需要與不再循環(huán)的分子一樣的頻繁注射和高劑量給藥。這種選擇性去除將再循環(huán)藥物本身(例如，納米抗體融合)，并容許比如果要清除納米抗體融合本身更有效地，從循環(huán)中清除抗原。按照這個(gè)實(shí)例，這種從循環(huán)中有效清除抗原(但猛烈攻擊結(jié)合蛋白)的途徑有利于使用缺乏效應(yīng)子Fc部分的結(jié)合蛋白(諸如，例如納米抗體、結(jié)構(gòu)域抗體或其它分子)，所述效應(yīng)子Fc部分通過(guò)與Fcy受體的相互作用，介導(dǎo)抗體依賴(lài)性細(xì)胞-介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)或抗體-依賴(lài)性細(xì)胞-介導(dǎo)的吞噬作用(ADCP)和IgG-復(fù)合物的聯(lián)合清除(L0vdal等.，2000)。另外，藥物的再循環(huán)可以正向影響其免疫原性，因?yàn)楦俚乃幬镆子谶M(jìn)行蛋白水解裂解和導(dǎo)致MHCII類(lèi)呈遞的內(nèi)體處理。這兩種特性均可以對(duì)藥物的功效作出貢獻(xiàn)。將另一種非限制性實(shí)例描述為表l中的情形C:在生理學(xué)pH下，在循環(huán)中不存在復(fù)合結(jié)合蛋白與抗原的結(jié)合，但是在胞飲作用事件后存在。當(dāng)該區(qū)室中的特異性吸收是優(yōu)選的時(shí)候，例如，當(dāng)在循環(huán)中與抗原的相互作用能夠以非-優(yōu)選的方式影響其功能(由于位阻現(xiàn)象，干擾具有抗原功能的復(fù)合結(jié)合蛋白)時(shí)，這樣的設(shè)置是有效的。由于其與血清蛋白的相互作用而本身是長(zhǎng)壽命分子的復(fù)合蛋白在低pH下結(jié)合的結(jié)果是抗原能夠受到保護(hù)而免于被降解，和被拯救而免于被降解。然而，一旦它從細(xì)胞中釋放出來(lái)，它就與復(fù)合蛋白分開(kāi)，并容許其起獨(dú)立分子的作用。例如，能夠使用所述設(shè)置增加內(nèi)源性存在的細(xì)胞因子或激素的半衰期。在另一種非限制性實(shí)例(表2中的情形D、E和F)中，第二結(jié)合蛋白和血清蛋白之間的相互作用隨著pH從7.4降至6.0而減小。作為結(jié)果，在復(fù)合結(jié)合蛋白-血清蛋白復(fù)合物(有或無(wú)與之結(jié)合的抗原)的胞飲作用后，復(fù)合結(jié)合蛋白會(huì)失去關(guān)于FcRn或補(bǔ)救受體的結(jié)合親和性，并在內(nèi)體區(qū)室中被破壞。如果抗原半衰期的延長(zhǎng)應(yīng)該受到尺寸增加的限制并且再循環(huán)是不需要的(例如，如果抗原是優(yōu)選以不同方式清除的細(xì)菌或病毒)，則能夠設(shè)想使用所述相互作用。該方法還可以適合于快速破壞循環(huán)抗原(細(xì)胞因子、毒素)。表2中的三種不同情形描述了會(huì)發(fā)生的是，復(fù)合結(jié)合蛋白與抗原的相互作用對(duì)pH改變(D)不敏感，或在pH7.4和6.0之間變化(E和F的情形)。情形F的有價(jià)值應(yīng)用可以是通過(guò)本發(fā)明的氨基酸序列或化合物或其它靶向例如RabllGTP酶(Ward等.2005)的結(jié)合分子，控制內(nèi)體區(qū)室的命運(yùn)，從而干擾胞吐或干擾Na,K-ATP酶，從而增強(qiáng)內(nèi)體酸化(Rybak等.，1997)。而且，例如，如果在與疾病或其它病癥相關(guān)的患者中存在過(guò)高血清水平(IgG或清蛋白)，則可以增強(qiáng)溶酶體降解途徑。備選地，該應(yīng)用可能是有價(jià)值的，從而快速消除在先施用的抗體，所述抗體的作用應(yīng)該被限制在小時(shí)間范圍內(nèi)(例如，從而避免不希望的抗體副作用)。通過(guò)施用復(fù)合結(jié)合蛋白，防止結(jié)合分子(納米抗體、結(jié)構(gòu)域抗體或其它分子)受到由腎小球?yàn)V過(guò)引起的快速清除，并在不需要維持與載體(例如IgG或清蛋白)結(jié)合時(shí)在內(nèi)體中起作用，因?yàn)轭A(yù)期的作用是無(wú)論如何都將全部?jī)?nèi)體內(nèi)容物改變路徑(reroute)為溶酶體降解途徑。在另一種非限制性實(shí)例(表3的情形G、H和I)中，第二結(jié)合蛋白和血清蛋白之間的相互作用隨著pH從7.4降至6.0而增加。例如，當(dāng)在生理學(xué)pH下，幾乎不存在或不存在結(jié)合蛋白與血清蛋白的結(jié)合時(shí)，在循環(huán)中，結(jié)合蛋白自由地與抗原相互作用，且該相互作用不受任何與血清蛋白的相互作用的影響。后一種相互作用可以導(dǎo)致一些位阻現(xiàn)象，干涉抗原-組合結(jié)合蛋白復(fù)合物的藥物動(dòng)力學(xué)，或干涉與組合蛋白結(jié)合的抗原的功能。在內(nèi)在化抗原-復(fù)合結(jié)合蛋白復(fù)合物內(nèi)在化和pH下降后，且優(yōu)選地在PH6.0下，復(fù)合結(jié)合蛋白的第二結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合會(huì)變得足以補(bǔ)救復(fù)合結(jié)合蛋白免于降解。在該情形中，與復(fù)合結(jié)合蛋白結(jié)合的抗原可以被保留(情形G)或免于被降解(情形H)。在一種最后的情形(情形I)中，與抗原的結(jié)合僅發(fā)生在低pH下，這可能是拯救由于被復(fù)合結(jié)合蛋白拯救而釋放進(jìn)入內(nèi)體區(qū)室中的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的途徑。在本發(fā)明的這些方面和實(shí)例中，本發(fā)明的氨基酸序列或化合物本身的結(jié)合本身可以足以誘導(dǎo)有偏向的清除抗原，但優(yōu)選地，使本發(fā)明氨基酸序列或化合物和抗原的復(fù)合物主動(dòng)靶向內(nèi)體區(qū)室，例如通過(guò)本發(fā)明另一種識(shí)別細(xì)胞-表面靶標(biāo)(優(yōu)選地，F(xiàn)cRn)的氨基酸序列或化合物，所述細(xì)胞-表面的耙標(biāo)是通過(guò)內(nèi)體區(qū)室，或通過(guò)識(shí)別在通過(guò)內(nèi)體區(qū)室循環(huán)的循環(huán)中存在的因子，而被有規(guī)則地內(nèi)在化和清除的。優(yōu)選的是，該細(xì)胞-表面靶標(biāo)是FcRn，或血清蛋白是IgG或清蛋白、或轉(zhuǎn)鐵蛋白。在另一方面，本發(fā)明包括用于產(chǎn)生針對(duì)抗原和/或血清蛋白的結(jié)合蛋白的方法，所述抗原和/或血清蛋白在它們的相互作用中，例如對(duì)內(nèi)在化引起的環(huán)境改變敏感。已知抗體-抗原相互作用有時(shí)對(duì)緩沖液條件、pH和離子強(qiáng)度中變化敏感，但最經(jīng)常地是，沒(méi)有對(duì)那些變化進(jìn)行評(píng)分或研究，且不經(jīng)常使用它們?cè)O(shè)計(jì)藥物治療劑，因?yàn)樽兓傮w上是不可預(yù)知的。例如，通過(guò)關(guān)于發(fā)生敏感相互作用篩選結(jié)合蛋白的所有組成成分，例如通過(guò)在2種代表性條件下(例如在pH7.4下和在pH6.0下)進(jìn)行結(jié)合測(cè)定，發(fā)現(xiàn)具有需要的結(jié)合特征的結(jié)合蛋白，并確定相對(duì)結(jié)合強(qiáng)度?？梢允褂萌魏魏线m的結(jié)合測(cè)試，包括ELISA、基于BIAcore的方法、斯卡查德分析等測(cè)量所述相對(duì)相互作用強(qiáng)度。所述測(cè)試將揭示哪種結(jié)合蛋白表現(xiàn)出對(duì)所選參數(shù)(pH、離子強(qiáng)度、溫度)敏感的相互作用，以及程度。本發(fā)明的條件性結(jié)合物可以備選地通過(guò)利用會(huì)優(yōu)先富集需要敏感性的選擇中的條件，例如從噬菌體、核糖體、酵母或細(xì)胞文庫(kù)中，選擇結(jié)合蛋白的所有組成成分而產(chǎn)生。在生理學(xué)pH下培養(yǎng)噬菌體抗體文庫(kù)和通過(guò)僅將pH改變?yōu)槔?.0來(lái)洗脫結(jié)合的噬菌體粒子，將洗脫具有pH-敏感性相互作用的那些噬菌體。類(lèi)似地，能夠使用離子強(qiáng)度的改變(例如，NaCl或KC1，從150mM變?yōu)?0mM)，從而確定對(duì)這些相互作用高度敏感的相89件。例如，Christensen等.,(2001):觀察到在新形成的胞飲泡中pH由7.2降至6.2時(shí)，[Ca2+]pin0降低2個(gè)數(shù)量級(jí)，隨后隨著胞飲泡成熟[C^+]pino顯著增加，這些暗示低鈣濃度是早期內(nèi)體的獨(dú)特生理學(xué)特性。還能夠從設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)文庫(kù)中分離具有需要的結(jié)合特征的條件性結(jié)合蛋白，其中將推定結(jié)合位點(diǎn)改造為包含氨基酸殘基或序列，所述氨基酸殘基或序列在某些"敏感的"相互作用中是優(yōu)選的，例如關(guān)于pH-敏感性的組氨酸。例如，已知FcRn和IgG之間的相互作用對(duì)pH非常敏感，當(dāng)pH由pH6.0上升至7.0時(shí)降低超過(guò)2個(gè)數(shù)量級(jí)。親和性轉(zhuǎn)變的主要機(jī)制基礎(chǔ)是結(jié)合位點(diǎn)的組氨酸含量組氨酸殘基的咪唑側(cè)改變通常在pH6.0-7.0的范圍內(nèi)脫質(zhì)子。預(yù)測(cè)在推定結(jié)合位點(diǎn)中包含組氨酸(例如，利用優(yōu)選引入文庫(kù)中該殘基的寡核苷酸)以較高頻率產(chǎn)生具有pH-敏感性相互作用的結(jié)合蛋白。使用的術(shù)語(yǔ)和表述作為說(shuō)明而非限制性術(shù)語(yǔ)使用，且不意欲使用所述術(shù)語(yǔ)和表述排除所示和所述特征的任何等價(jià)物及其部分，承認(rèn)多種修改可能屬于該實(shí)施方案的范圍。引入本文中所述的全部參考文獻(xiàn)作為參考，具體地為了上文中提到的教導(dǎo)。(legend)圖1.本發(fā)明氨基酸序列可能的相互作用。圖2.對(duì)pH改變敏感的相互作用1。圖3.周質(zhì)制備物的人血清清蛋白-特異性ELISA分析，所述周質(zhì)制備物包含來(lái)自所選克隆的his-標(biāo)記的納米抗體蛋白片段。將可溶性納米抗體蛋白片段的周質(zhì)制備物加入到ELISA板的孔中，所述板己被HSA抗原包被，并另外被PBS+l。/。酪蛋白封閉。通過(guò)單克隆生物素化的抗-his抗體，以及隨后辣根-綴合鏈霉抗生物素蛋白執(zhí)行檢測(cè)。如實(shí)施例1中所述，由TMB-底物顯影ELISA。在450nm處，利用ELISA-閱讀器測(cè)量OD-值(Y-軸)。每個(gè)柱代表各種周質(zhì)提取物。圖4.不同pH下，清蛋白-結(jié)合納米抗體和人血清清蛋白之間相互作用的表面等離子體共振測(cè)量法。在pH5，pH6或pH7下，將可溶性納米抗體蛋白片段的周質(zhì)制備物注射到固定的人血清清蛋白上。圖4A和4B分別顯示納米抗體4A1和4C3的相互作用。圖5.氨基酸序列。圖6.僅在中性條件下，而不在酸性條件下結(jié)合的納米抗體(克隆)。圖7.僅在酸性條件下，而不在中性條件下結(jié)合的納米抗體(克隆)。實(shí)驗(yàn)部分實(shí)施例h鑒定條件性的血清清蛋白特異性納米抗體在獸醫(yī)系道德委員會(huì)(EthicalCommitteeoftheFacultyofVeterinaryMedicine)(根特大學(xué)(UniversityGhent),比利時(shí))批準(zhǔn)后，按照標(biāo)準(zhǔn)方案，以每周一次的時(shí)間間隔，用6次肌肉內(nèi)注射人血清清蛋白，以及小鼠血清清蛋白、食蟹猴血清清蛋白和狒狒血清清蛋白的混合物，交替免疫2只美洲鴕(117，118)。文庫(kù)構(gòu)建當(dāng)最后一次抗原注射后4天在美洲駝中誘導(dǎo)了適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答時(shí)，收集150ml血液樣品，并按照制造商的指示，通過(guò)在Ficoll-Paque的密度梯度離心純化外周血淋巴細(xì)胞(PBL)。隨后，從這些細(xì)胞中提取總RNA，并將其用作RT-PCR的初始材料，從而擴(kuò)增編碼基因片段的納米抗體。將這些片段克隆到噬菌粒載體pAX50中。按照標(biāo)準(zhǔn)方法(見(jiàn)，例如本文中引入的申請(qǐng)人提交的現(xiàn)有技術(shù)和申請(qǐng))制備噬菌體并將其保存在4"C，以便將來(lái)使用。選擇選擇所有組成成分以獲得與血清清蛋白的結(jié)合在第一個(gè)選擇中，在室溫(RT)下，以100嗎/ml，將人血清清蛋白(西格瑪(Sigma)A-8763)包被在Maxisorp96-孔板(Nimc,威斯巴登，德國(guó))上過(guò)夜(ON)。在RT下，用處于PBS中的4%Marvel封閉板2小時(shí)。用PBST清洗3次后，將噬菌體加入到4%Marvel/PBS中，并在RT下溫育1小時(shí)。充分清洗后，用0.1M三乙醇胺(TEA)洗脫，并用1MTris-HClpH7.5中和結(jié)合的噬菌體。選擇所有組成成分以獲得與血清清蛋白的條件性結(jié)合為了富集條件性的結(jié)合物，所述結(jié)合物具有pH敏感性相互作用，在生理學(xué)pH下與抗原一起溫育噬菌體文庫(kù)，并在酸性pH下洗脫，如下在第一選擇中，在室溫(RT)下，以100pg/ml，將人血清清蛋白(西格瑪A-8763)包被在Maxisorp96-孔板(Nunc,威斯巴登，德國(guó))上過(guò)夜(ON)。在RT下，用處于PBS中的4。/。MarvelpH7.3封閉板2小時(shí)。用PBS/0.05。/。吐溫20(PBST)pH7.3清洗5次后，將噬菌體加入到2%Marvel/PBSpH7.3中，并在RT下溫育2小時(shí)。通過(guò)用PBSTpH7.3清洗10次，除去未結(jié)合的噬菌體，并隨后用PBSpH5.8清洗2次。在RT下，用PBSpH5.8洗脫結(jié)合的噬菌體30分鐘，并用1MTris-HClpH7.5中和結(jié)合的噬菌體。在第二選擇中，在RT下，在被調(diào)節(jié)為pH7.3的2%Marvell/CPA緩沖液(10mM檸檬酸鈉+10mM磷酸鈉+10mM乙酸鈉+115mMNaCl)中，與人血清清蛋白一起，溫育噬菌體文庫(kù)2小時(shí)。通過(guò)用CPA/0.05。/。吐溫20(CPAT)pH7.3清洗10次，除去未結(jié)合的噬菌體，并隨后用CPATpH5.8清洗2次。在RT下，用CPApH5.8洗脫結(jié)合的噬菌體30分鐘，并用1MTris-HClpH7中和結(jié)合的噬菌體。在第三選擇方案中，在RT下，在2°/。Marvell/CPApH5.8中，與人血清清蛋白一起，溫育噬菌體文庫(kù)2小時(shí)。通過(guò)用CPATpH5.8清洗10次，除去未結(jié)合的噬菌體，并隨后用CPApH7.3清洗2次。在RT下，用lmg/ml胰蛋白酶/CPApH7.3洗脫結(jié)合的噬菌體30分鐘。在第四選擇方案中，在RT下，在2%Marvell/PBSpH5.8中，與人血清清蛋白一起，溫育噬菌體文庫(kù)2小時(shí)。通過(guò)用PBSTpH5.8清洗10次，除去未結(jié)合的噬菌體，并隨后用PBSpH7.3清洗2次。在RT下，用lmg/ml胰蛋白酶/CPApH7.3洗脫結(jié)合的噬菌體30分鐘。在所有的選擇中，觀察到富集。將來(lái)自每種選擇的產(chǎn)物作為集合，再克隆到表達(dá)載體pAX51中。挑取菌落，并在96深孔板(lml體積)中生長(zhǎng)，并通過(guò)加入IPTG誘導(dǎo)納米抗體的表達(dá)。按照標(biāo)準(zhǔn)方法(見(jiàn)例如本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)和申請(qǐng)人提交的申請(qǐng))，制備周質(zhì)提取物(體積~80(Xl)。由ELISA進(jìn)行文庫(kù)評(píng)估通過(guò)在固相包被的人血清清蛋白上進(jìn)行ELISA，篩選各個(gè)納米抗體的周質(zhì)提取物，以獲得清蛋白特異性。利用生物素化的小鼠抗-his抗體(SerotecMCA1396B)進(jìn)行對(duì)與固定的人血清清蛋白結(jié)合的納米抗體片段的檢測(cè)，所述生物素化的小鼠抗-his抗體是利用鏈霉抗生物素蛋白-HRP(DakoCytomation^P0397)檢測(cè)的。通過(guò)加入TMB底物溶液(Pierce34021)顯影信號(hào)，并在450nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)。在淘選(panning)輪1后，可獲得陽(yáng)性克隆的高擊中率。圖3說(shuō)明了典型的ELISA結(jié)果。通過(guò)ELISA選擇納米抗體與清蛋白的條件性或pH-敏感性結(jié)合。為了富集條件性的結(jié)合物，所述結(jié)合物具有pH敏感性相互作用，可以在生理學(xué)pH下與抗原一起溫育噬菌體文庫(kù)，并在酸性pH下洗脫，如下'.在第一選擇方案中，在室溫(RT)下，以100pg/ml，將人血清清蛋白(西格瑪A-8763)包被在Maxisorp96-孔板(Nunc,烕斯巴登，德國(guó))上過(guò)夜(ON)。在RT下，用處于PBS中的4。/。MarvelpH7.3封閉板2小時(shí)。用PBS/0.05。/。吐溫20(PBST)pH7.3清洗5次后，將噬菌體加入到2%Marvel/PBSpH7.3中，并在RT下溫育2小時(shí)。通過(guò)用PBSTpH7.3清洗10次，除去未結(jié)合的噬菌體，并隨后用PBSpH5.8清洗2次。在RT下，用PBSpH5.8洗脫結(jié)合的噬菌體30分鐘，并用1MTris-HClpH7.5中和結(jié)合的噬菌體。在第二選擇方案中，在RT下，在被調(diào)節(jié)為pH7.3的2。/。Marvell/CPA緩沖液(10mM檸檬酸鈉+10mM磷酸鈉+10mM乙酸鈉+115mMNaCl)中，與人血清清蛋白一起，溫育噬菌體文庫(kù)2小時(shí)。通過(guò)用CPA/0.05。/。吐溫20(CPAT)pH7.3清洗10次，除去未結(jié)合的噬菌體，并隨后用CPATpH5.8清洗2次。在RT下，用CPApH5.8洗脫結(jié)合的噬菌體30分鐘，并用1M93Tris-HClpH7中和結(jié)合的噬菌體。在第三選擇方案中，在RT下，在2%Marvell/CPApH5.8中，與人血清清蛋白一起，溫育噬菌體文庫(kù)2小時(shí)。通過(guò)用CPATpH5.8清洗10次，除去未結(jié)合的噬菌體，并隨后用CPApH7.3清洗2次。在RT下，用lmg/ml胰蛋白酶/CPApH7.3洗脫結(jié)合的噬菌體30分鐘。在第四選擇方案中，在RT下，在2%Marvell/PBSpH5.8中，與人血清清蛋白一起，溫育噬菌體文庫(kù)2小時(shí)。通過(guò)用PBSTpH5.8清洗10次，除去未結(jié)合的噬菌體，并隨后用PBSpH7.3清洗2次。在RT下，用lmg/ml胰蛋白酶/CPApH7.3洗脫結(jié)合的噬菌體30分鐘。在所有的選擇中，觀察到富集。將來(lái)自每種選擇的產(chǎn)物作為集合，再克隆到例如表達(dá)載體pAX51中。挑取菌落，并在96深孔板(lml體積)中生長(zhǎng)，并通過(guò)加入IPTG誘導(dǎo)納米抗體的表達(dá)。按照標(biāo)準(zhǔn)方法(見(jiàn)例如本文中引用的現(xiàn)有技術(shù)和申請(qǐng)人提交的申請(qǐng))，制備周質(zhì)提取物(體積~80|al)。通過(guò)表面等離子體共振(BIAcore)針對(duì)發(fā)生pH-敏感性相互作用而篩選納米抗體所有組成成分為了活化利用NHS/EDC和為了鈍化利用乙醇胺(Biacore胺偶聯(lián)試劑盒)，將人血清清蛋白通過(guò)胺偶聯(lián)固定在CM5傳感器芯片表面上。固定大約1000RU人血清清蛋白。在25。C進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。為了納米抗體與清蛋白的pH依賴(lài)性結(jié)合使用的緩沖液(Biacore)如下10mM檸檬酸鈉(Na3C6H507)+10mM磷酸鈉(Na2HP04)+10mM乙酸鈉(CH3COONa)+115mMNaCl。通過(guò)加入HCl或NaOH(根據(jù)測(cè)量的混合物pH)使該化合物變?yōu)閜H7、pH6和pH5。在pH7、pH6和pH5的運(yùn)行緩沖液中稀釋周質(zhì)提取物。以流速45(^1/分鐘，將樣品注射到活化的和參照表面上1分鐘。用甘氨酸-HClpH1.5+0.1%P20的3s脈沖再生那些表面。利用BiacoreT100評(píng)估軟件實(shí)現(xiàn)評(píng)估。表1中記錄了不同納米抗體在pH7和pH5條件下的解離率。大多數(shù)納米抗體(4A2，4A6,4B5,4B6,4B8,4C3,4C4,4C5,4C8,4C9,4D3,4D4,4D7和4D10)在pH5具有比在pH7更快的解離率(2-6倍解離率差別)。納米抗體4A9在pH5具有比在pH7更慢的解離率(0.54倍解離率差別)。對(duì)于其它納米抗體，包括4C12,4B，4B10,IL6R202,Alb-8,和4D5，在不同pH條件下與抗原的結(jié)合不變。由此能夠使用對(duì)納米抗體所有組成成分的直接篩選，來(lái)獲得與抗原的條件性結(jié)合。通過(guò)ELISA篩選納米抗體的條件性結(jié)合為了針對(duì)它們與清蛋白的條件性結(jié)合篩選納米抗體，還可以利用兩種代表性的條件，pH5.8和pH7.3進(jìn)行結(jié)合ELISA，并確定相對(duì)結(jié)合強(qiáng)度。用100pl處于碳酸氫鹽緩沖液(50mM,pH9.6)中的1pg/ml人血清清蛋白溶液，在4。C，包被Maxisorb微量滴定板(Nunc,商品號(hào)430341)過(guò)夜。包被后，用含有0.05%吐溫20的PBS(PBST)清洗該板3次，并在室溫(RT)下，用含有2%Marvel的PBS(PBSM)封閉2小時(shí)。封閉步驟后，用PBSTpH5.8清洗包被的板2次，將在PBSMpH5.8中稀釋10倍的每種周質(zhì)樣品等分試樣(100pl)轉(zhuǎn)移到包被的板中，并容許在RT下結(jié)合1小時(shí)。將樣品溫育后，用PBST清洗該板5次，并在RT下，與100)il處于2y。PBSM中的1:1000小鼠抗-myc抗體稀釋液一起溫育1小時(shí)。在RT下1小時(shí)后，用PBST清洗該板5次，并與100^與辣根過(guò)氧化物酶綴合的山羊抗-小鼠抗體的1:1000稀釋液一起溫育。1小時(shí)后，用PBST清洗板5次，并與100pi慢TMB(Pierce，商品號(hào)34024)—起溫育。20分鐘后，利用100jxlH2SO4終止反應(yīng)。在450nm處測(cè)量每個(gè)孔的吸光度。對(duì)如本文中所述的各種條件性選擇方案，在該ELISA中分析了92種周質(zhì)提取物。圖6描述關(guān)于在中性pH，即pH7.4下條件性地結(jié)合于人血清清蛋白，但在酸性，即pH5.8下不結(jié)合于人血清清蛋白的納米抗體的結(jié)果。圖7描述關(guān)于在酸性pH，即pH5.8下條件性地結(jié)合于人血清清蛋白，但在中性pH，即pH7.4下不結(jié)合于人血清清蛋白的納米抗體的結(jié)果。在對(duì)人血清清蛋白的一輪選擇，以及隨后的總洗脫后，鑒定了在酸性pH下(n=16)或在中性pH下(ri=19)條件性地結(jié)合于清蛋白的納米抗體。將選擇條件推向條件性結(jié)合的方向，導(dǎo)致較高比例的條件性結(jié)合的納米抗體(『23)。實(shí)施例2:分析條件性結(jié)合對(duì)納米抗體藥物代謝動(dòng)力學(xué)行為的作用1.構(gòu)建雙特異性納米抗體形式產(chǎn)生雙特異性納米抗體，其例如由C-末端條件性HSA-結(jié)合納米抗體、9個(gè)氨基酸Gly/Ser連接體和N-末端抗-靶標(biāo)納米抗體組成。可以將這些構(gòu)建體作為c-myc,His6-標(biāo)記的蛋白質(zhì)，表達(dá)在大腸桿菌(￡."http://)中，并隨后利用固定的金屬親和性層析(IMAC)和尺寸排阻層析(SEC)從培養(yǎng)基中純化出來(lái)。2.在形成多特異性形式后而保持條件性的結(jié)合。通過(guò)表面等離子體共振(BIAcore)評(píng)估抗-HSA納米抗體或dAbs以多特異性納米抗體形式的條件性pH-結(jié)合特性，例如如本申請(qǐng)中所公開(kāi)的條件性的結(jié)合物與一種或多種納米抗體或結(jié)合于一種或多種蛋白質(zhì)靶標(biāo)的dAb相連。還評(píng)估了與食蟹猴血清清蛋白的交叉-反應(yīng)性。為了活化利用NHS/EDC和為了鈍化利用乙醇胺(Biacore胺偶聯(lián)試劑盒)，將人和食蟹猴血清清蛋白通過(guò)胺偶聯(lián)固定在CM5傳感器芯片表面上。在25"C進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。為了納米抗體與清蛋白(Biacore)的pH依賴(lài)性結(jié)合使用的緩沖液如下10mM檸檬酸鈉0^3<:611507)+10mM磷酸鈉(^2見(jiàn)04)+10mM乙酸鈉(013(:0(^&)+115mMNaCl。通過(guò)加入HC1或NaOH(根據(jù)測(cè)量的混合物pH)使該混合物變?yōu)閜H7、pH6和pH5。在pH7、pH6和pH5的運(yùn)行緩沖液中稀釋純化的納米抗體。以流速45^1/分鐘，將樣品注射到活化的和參照表面上1分鐘。用甘氨酸-HClpH1.5+0.1%P20的3s脈沖再生那些表面。利用BiacoreT100評(píng)估軟件實(shí)現(xiàn)評(píng)估。3.食蟹猴中雙特異性納米抗體形式的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征在食蟹猴中進(jìn)行了藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究。通過(guò)彈丸注射(bolusinjection)(1.0ml/kg，大約30秒)，將納米抗體(例如IL6R-4D10，艮卩，通過(guò)9個(gè)氨基酸Gly/Ser連接體與條件性的清蛋白結(jié)合的結(jié)合區(qū)段相連的IL-6受體結(jié)合區(qū)段)靜脈內(nèi)施用于左或右臂的頭靜脈中，以獲得2.0mg/kg的劑量。通過(guò)ELISA確定血漿樣品中的納米抗體濃度。血漿樣品中的濃度確定如下用100(il處于碳酸氫鹽緩沖液(50mM,pH9.6)中的5pg/ml12B2-GS9-12B2(B2弁1302nr4.3.9)溶液，在4。C，包被Maxisorb微量滴定板(Nunc,商品號(hào)430341)過(guò)夜。包被后，用含有0.1%吐溫20的PBS清洗該板3次，并在室溫(RT)下，用含有"/。酪蛋白的PBS(250pl/孔)封閉該板2小時(shí)。在單獨(dú)的非-包被板(Nunc,商品號(hào)249944)中，以PBS稀釋血漿樣品，和納米抗體-標(biāo)準(zhǔn)物(摻加到100%匯集的空白食蟹猴血漿中)的連續(xù)稀釋物，從而在由處于PBS中的10%匯集的食蟹猴血漿組成的最終樣品基質(zhì)中獲得需要的濃度/稀釋度。在RT下，在非-包被板中溫育所有預(yù)-稀釋物30分鐘。封閉步驟后，(用含有0.m吐溫20的PBS)清洗包被的板3次，并將每種樣品稀釋物的等分試樣(10(^1)轉(zhuǎn)移到包被的板中，并容許在RT下結(jié)合1小時(shí)。樣品溫育后，(用含有0.1%吐溫20的PBS)清洗該板3次，并在RT下，與100^處于PBS中的100ng/mlsIL6R溶液(Peprotech,商品號(hào)20006R)—起溫育1小時(shí)。在RT下1小時(shí)后，(用含有0.1%吐溫20的PBS)清洗該板3次，并與100^的處于含有P/。酪蛋白(R&D系統(tǒng),商品號(hào)BAF227)的PBS中的250ng/ml生物素化多克隆抗-IL6R抗體溶液一起溫育。溫育30分鐘(RT)后，(用含有0.1。/。吐溫20的PBS)清洗板3次，并與100與辣根過(guò)氧化物酶(DaktoCytomation,商品號(hào)P0397)綴合的鏈霉抗生物素蛋白的1/5000稀釋液(在包含P/。酪蛋白的PBS中)一起溫育30分鐘(RT)。30分鐘后，(用含有0.1。/。吐溫20的PBS)清洗板3次，并與100pd慢TMB(Pierce,商品號(hào)34024)—起溫育。20分鐘后，利用100plHC1(1N)終止反應(yīng)。在450nm處測(cè)量每個(gè)孔的吸光度(Tecan日出分光光度計(jì)(TecanSunrisespectrophotometer)),并關(guān)于620nrn處的吸光度對(duì)其進(jìn)行校正。該測(cè)定測(cè)量游離納米抗體以及與sIL6R和/或食蟹猴血清清蛋白結(jié)合的納米抗體?；诰哂嘘P(guān)于各種納米抗體可變斜率的S形標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，確定每份血漿樣品中的濃度。在2次獨(dú)立的測(cè)定中分析每份單獨(dú)的血漿樣品，并且為了藥物代謝動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)分析計(jì)算平均血漿濃度。在從中央?yún)^(qū)室消除的條件下，用二-區(qū)室建模，計(jì)算所有參數(shù)。表1.第二氨基酸序列和抗原之間，而非第一氨基酸序列和血清蛋白之間的pH-依賴(lài)性相互作用<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>表2.第一氨基酸序列和血清蛋白的相互作用優(yōu)先地發(fā)生在生理學(xué)pH下<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>E2++相同++在內(nèi)體區(qū)室中釋放Ag，降解；用于防止納米抗體-Ag復(fù)合物在循環(huán)中積累的方法F2++相同++如果靶標(biāo)是例如RabllGTP酶或Na+，K+，ATP酶，則內(nèi)體改變路徑請(qǐng)注意pH6.0可以意指酸性生理學(xué)pH，即還可以是5.5或更低或更高。pH7.4可以意指中性生理學(xué)pH，即還可以是pH7.2-7.4(且可能更高或更低一點(diǎn))。表3.氨基酸序列與血清蛋白在酸性pH下的優(yōu)先結(jié)合+主l冃相互pH6.0pH7.4納米抗體最相互pH6.0pH7.4抗原最終結(jié)果形作用終結(jié)果作用G2++僅結(jié)合于內(nèi)體區(qū)室中的血清蛋白(在低pH下)；在血清蛋白釋放后，納米抗體也脫離；半衰期延長(zhǎng)限于再循環(huán)作用；保持尺寸的優(yōu)勢(shì)++++當(dāng)在循環(huán)中時(shí)，不干擾具有納米抗體功能的血清蛋白的結(jié)合99<table>tableseeoriginaldocumentpage100</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage101</column></row><table>權(quán)利要求1.針對(duì)需要的分子的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第一生物學(xué)條件下，以10-5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)和/或以至少105M-1的結(jié)合親和性(KA)結(jié)合于所述需要的分子；和b)在第二生物學(xué)條件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的至少10倍的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子。2.按照權(quán)利要求l的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的至少100倍的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子。3.按照權(quán)利要求1的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在第二生物學(xué)條件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離常數(shù)的至少1000倍的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子。4.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以10-6摩爾/升或更低的解離常數(shù)(&)結(jié)合于所述需要的分子。5.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以W摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子。6.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以10-s摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子。7.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以10—摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子。8.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以10-5摩爾/升或更高的解離常數(shù)(&)結(jié)合于所述需要的分子。9.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以1(^摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述需要的分子。10.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括在第一生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件，且所述第二生物學(xué)條件包括在第二生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件，其中所述第一和第二生理學(xué)區(qū)室，在正常生理學(xué)條件下，由至少一種生物膜諸如細(xì)胞膜、細(xì)胞小泡或亞細(xì)胞區(qū)室的壁、或血管壁分開(kāi)。11.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞外的普遍存在的生物學(xué)條件，且所述第二生物學(xué)條件包括所述細(xì)胞內(nèi)普遍存在的條件。12.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括所述人體或動(dòng)物體的血流或淋巴系統(tǒng)中普遍存在的生物學(xué)條件，且所述第二生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的至少一種組織或細(xì)胞內(nèi)普遍存在的條件。13.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第二生物學(xué)條件包括在人體或動(dòng)物體細(xì)胞的至少一種亞細(xì)胞區(qū)室中普遍存在的生理學(xué)條件，且所述第一生物學(xué)條件包括所述細(xì)胞外普遍存在的條件。14.按照權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的血流或淋巴系統(tǒng)中普遍存在的條件，且所述第二生物學(xué)條件包括所述人體或動(dòng)物體細(xì)胞的至少一種亞細(xì)胞區(qū)室中普遍存在的生理學(xué)條件。15.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的血流或淋巴系統(tǒng)中普遍存在的條件，且所述第二生物學(xué)條件包括所述人體或動(dòng)物體細(xì)胞的至少一種內(nèi)體、脂質(zhì)體、胞飲泡區(qū)室或所述細(xì)胞中存在的其它小泡中普遍存在的生理學(xué)條件。16.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以被所述人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞吸收(例如，通過(guò)內(nèi)在化、胞飲作用、胞吞、胞轉(zhuǎn)、胞吐、吞噬或吸收或內(nèi)在化進(jìn)入所述細(xì)胞的類(lèi)似機(jī)制)，其中所述第一生物學(xué)條件包括這樣的生理學(xué)條件，其中所述氨基酸序列在被吸收進(jìn)入細(xì)胞之前存在，且所述第二生物學(xué)條件包括這樣的生理學(xué)條件，其中所述氨基酸序列在被吸收進(jìn)入細(xì)胞后存在。17.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的意欲或需要的分子，其中所述第一生物學(xué)條件包括關(guān)于至少一種涉及再循環(huán)需要的化合物的動(dòng)物體或人體細(xì)胞的細(xì)胞外條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括在至少一種涉及再循環(huán)所述需要的化合物的動(dòng)物體或人體細(xì)胞中普遍存在的條件。18.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的意欲或需要的分子，其中所述第一生物學(xué)條件包括在動(dòng)物體或人體循環(huán)中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括在至少一種涉及再循環(huán)所述需要的化合物的動(dòng)物體或人體細(xì)胞中普遍存在的條件。19.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的血清蛋白，其中所述第一生物學(xué)條件包括在動(dòng)物體或人體循環(huán)中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括在至少一種涉及再循環(huán)所述血清蛋白的動(dòng)物體或人體細(xì)胞中普遍存在的條件。20.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)血清清蛋白，其中所述第一生物學(xué)條件包括在動(dòng)物體或人體循環(huán)中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括在至少一種涉及再循環(huán)所述血清清蛋白的動(dòng)物體或人體細(xì)胞中普遍存在的條件。21.按照權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的意欲或需要的分子，其中所述第一生物學(xué)條件包括在涉及再循環(huán)所述意欲和需要的化合物的動(dòng)物體或人體的至少一種細(xì)胞的細(xì)胞表面或直接接觸環(huán)境中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括所述細(xì)胞中普遍存在的條件。22.按照權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)或21的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)被所述細(xì)胞再循環(huán)的所述細(xì)胞表面上的蛋白質(zhì)或多肽，其中所述第一生物學(xué)條件包括所述動(dòng)物體或人體細(xì)胞直接接觸的環(huán)境中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括所述細(xì)胞中普遍存在的條件。23.按照權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)，21或22的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)被所述細(xì)胞再循環(huán)的所述細(xì)胞表面上的受體，其中所述第一生物學(xué)條件包括所述動(dòng)物體或人體細(xì)胞直接接觸的環(huán)境中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括所述細(xì)胞中普遍存在的條件。24.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件和所述第二生物學(xué)條件關(guān)于下列因素中任意1項(xiàng)、任意2項(xiàng)、任意3項(xiàng)或基本全部而不同pH、離子強(qiáng)度、和蛋白酶依賴(lài)性。25.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.0的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于7.0的生理學(xué)pH。26.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.1的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于6.7的生理學(xué)pH。27.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.2的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于6.5的生理學(xué)pH。28.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是7.2-7.4范圍內(nèi)的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是6.0-6.5范圍內(nèi)的生理學(xué)pH。29.按照權(quán)利要求1-20或24-27中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)血清蛋白，具體地，人血清蛋白。30.按照權(quán)利要求1-20或24-29中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的血清蛋白，具體地，進(jìn)行再循環(huán)的人血清蛋白。31.按照權(quán)利要求1-20或24-30中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)血清清蛋白，具體地，人血清清蛋白。32.按照權(quán)利要求1-20或24-31中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)人血清清蛋白和針對(duì)來(lái)自至少一種其它哺乳動(dòng)物物種的血清清蛋白。33.按照權(quán)利要求1-20或24-32中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)人血清清蛋白和針對(duì)來(lái)自至少一種其它哺乳動(dòng)物物種的血清清蛋白，所述其它哺乳動(dòng)物物種選自由下列各項(xiàng)組成的組小鼠、大鼠、兔和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。34.按照權(quán)利要求1-20或24-33中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)人血清清蛋白和針對(duì)來(lái)自至少一種其它靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的血清清蛋白，所述其它靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種選自由下列各項(xiàng)組成的組選自獼猴屬(M"^m)的猴(諸如，和具體地，食蟹猴(Mm"m/mc/c^z^)和/或獼猴(Macacaww/"加)和狒狒wraZw船)。35.按照權(quán)利要求1-18或21-28中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)細(xì)胞-表面蛋白。36.按照權(quán)利要求1-18，21-28或35中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)受體。37.按照權(quán)利要求1-18，21-28，35或36中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的細(xì)胞-表面蛋白，和具體地，進(jìn)行再循環(huán)的受體。38.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其選自由下列各項(xiàng)組成的組具有免疫球蛋白折疊的蛋白質(zhì)和多肽；基于除免疫球蛋白外的其它蛋白質(zhì)支架的分子，所述支架包括但不限于，蛋白質(zhì)A結(jié)構(gòu)域、淀粉酶抑肽(tendamistat)、纖連蛋白、脂籠蛋白、CTLA-4、T-細(xì)胞受體、設(shè)計(jì)的錨蛋白重復(fù)序列和PDZ結(jié)構(gòu)域,和基于DNA或RNA的結(jié)合部分，包括但不限于DNA或RNA適體；或選自所述蛋白質(zhì)或多肽的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。39.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其選自由下列各項(xiàng)組成的組包括四種彼此間由三種互補(bǔ)性決定區(qū)隔開(kāi)的構(gòu)架區(qū)或基本由其組成的蛋白質(zhì)和多肽；或選自所述蛋白質(zhì)或多肽的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。40.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其選自由下列各項(xiàng)組成的組抗體和抗體片段，源自抗體或抗體片段的結(jié)合單位和結(jié)合分子,和抗體片段，結(jié)合單位或結(jié)合分子；或選自前述任一項(xiàng)的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。41.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其選自由下列各項(xiàng)組成的組重鏈可變結(jié)構(gòu)域、輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，結(jié)構(gòu)域抗體和適合于作為結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)和肽和適合于作為單結(jié)構(gòu)域抗體、納米抗體TM和dAbsTM使用的蛋白質(zhì)和肽；或選自前述任一項(xiàng)的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。42.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其包括4-500個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選地，5-300個(gè)氨基酸殘基，更優(yōu)選地，10-200個(gè)氨基酸殘基，諸如20-150個(gè)氨基酸殘基，例如約30,40,50,60,70,80,90,100,110,120，130或140個(gè)氨基酸殘基。43.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其包括單氨基酸鏈(具有或不具有二硫鍵/鍵合)。44.包括權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列的化合物。45.按照權(quán)利要求44的化合物，其中所述化合物還包括至少一種另外的部分或結(jié)合單位。46.按照權(quán)利要求44或45的化合物，其中所述化合物包括2個(gè)(或更多)按照權(quán)利要求l-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列，和任選地，還包括至少一種另外的部分或結(jié)合單位。47.按照權(quán)利要求46的化合物，其中所述化合物包括2個(gè)(或更多)按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的針對(duì)相同需要的分子或針對(duì)所述相同需要的分子不同部分或表位的氨基酸序列。48.按照權(quán)利要求46的化合物，其中所述化合物包括2個(gè)(或更多)按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的針對(duì)2種(或更多)不同需要的分子的氨基酸序列。49.按照權(quán)利要求47的化合物，其中所述化合物包括2個(gè)(或更多)按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的針對(duì)2種(或更多)不同需要的分子的氨基酸序列，且其中所述化合物還是這樣的，以致它在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于這2種(或全部)需要的分子。50.按照權(quán)利要求47的化合物，其中所述化合物包括2個(gè)(或更多)按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的針對(duì)2種(或更多)不同需要的分子的氨基酸序列，且其中所述化合物還是這樣的，以致它在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于至少一種(或更多)所述需要的分子；且在所述第二生物學(xué)條件下結(jié)合于至少一種(或更多)所述需要的分子。51.按照權(quán)利要求44-50中任一項(xiàng)的化合物，其中所述化合物中存在的至少一種按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列針對(duì)血清蛋白。52.按照權(quán)利要求51的化合物，其中所述化合物中存在的至少一種按照權(quán)利要求l-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列針對(duì)選自由血清清蛋白、IgG和轉(zhuǎn)鐵蛋白組成的組中的一種血清蛋白。53.按照權(quán)利要求44-52中任一項(xiàng)的化合物，其中所述另外的部分或結(jié)合單位(如果存在)是治療部分或結(jié)合單位。54.按照權(quán)利要求53的化合物，其中所述治療部分選自由小分子、多核苷酸、多肽或肽組成的組中的至少一種。55.按照權(quán)利要求44-54中任一項(xiàng)的化合物，所述化合物是融合蛋白或構(gòu)建體。56.按照權(quán)利要求55的化合物，其中在所述融合蛋白或構(gòu)建體中，按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列直接與所述至少一種治療部分相連，或通過(guò)連接體或間隔區(qū)與所述至少一種治療部分相連(和/或結(jié)合至少一種治療部分)。57.按照權(quán)利要求44-56中任一項(xiàng)的化合物，其中所述治療部分包括免疫球蛋白序列或其片段。58.按照權(quán)利要求57的化合物，其中所述治療部分包括(單)結(jié)構(gòu)域抗體或納米抗體。59.多價(jià)和多特異性納米抗體構(gòu)建體，其包括至少一種按照權(quán)利要求1_43中任一項(xiàng)的作為納米抗體的氨基酸序列和至少一種另外的納米抗體。60.按照權(quán)利要求59的多價(jià)和多特異性納米抗體構(gòu)建體，其中所述按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)作為納米抗體的氨基酸序列直接與所述至少一種另外的納米抗體相連，或通過(guò)連接體或間隔區(qū)與所述至少一種另外的納米抗體相連。61.按照權(quán)利要求42的多價(jià)和多特異性納米抗體構(gòu)建體，其中所述按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)作為納米抗體的氨基酸序列通過(guò)連接體或間隔區(qū)與所述至少一種另外的納米抗體相連，且其中所述連接體是氨基酸序列。62.核苷酸序列或核酸，其編碼按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求44-58中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求59-62中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體。63.宿主或宿主細(xì)胞，其包括按照權(quán)利要求62的核苷酸序列或核酸，和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求44-58中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求59-62中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體。64.用于制備按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求44-58中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求59-62中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體的方法，所述方法包括在這樣的條件下培養(yǎng)或維持按照權(quán)利要求63的宿主細(xì)胞，在所述條件下，所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生或表達(dá)按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求44-58中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求59-62中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體，且任選地，還包括分離由此產(chǎn)生的按照權(quán)利要求1-43中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求44-58中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求59-62中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體。65.針對(duì)血清蛋白的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第一生物學(xué)條件下，以10—5摩爾/升或更低的解離常數(shù)(Kd)和/或以至少1()SM"的結(jié)合親和性(K》結(jié)合于所述血清蛋白;禾口b)在第二生物學(xué)條件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述血清蛋白的解離常數(shù)至少10倍的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述血清蛋白。66.按照權(quán)利要求65的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以這樣的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述血清蛋白，所述解離常數(shù)(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述血清蛋白的解離常數(shù)的至少100倍。67.按照權(quán)利要求65或66的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以這樣的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合于所述血清蛋白，所述解離常數(shù)(Kd)是所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述血清蛋白的解離常數(shù)的至少1000倍。68.按照權(quán)利要求65-67中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以10—6摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述血清蛋白。69.按照權(quán)利要求65-68中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以10—7摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述血清蛋白。70.按照權(quán)利要求65-69中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下，以10'8摩爾/升或更低的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述血清蛋白。71.按照權(quán)利要求65-70中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以10—6摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述血清蛋白。72.按照權(quán)利要求65-71中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以10—5摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述血清蛋白。73.按照權(quán)利要求65-72中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下，以10—4摩爾/升或更高的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于所述血清蛋白。74.按照權(quán)利要求65-73中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中其中所述第一生物學(xué)條件包括在第一生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件，且所述第二生物學(xué)條件包括在第二生理學(xué)區(qū)室或流體中普遍存在的生理學(xué)條件，其中所述第一和第二生理學(xué)區(qū)室，在正常生理學(xué)條件下，由至少一種生物膜諸如細(xì)胞膜、細(xì)胞小泡或亞細(xì)胞區(qū)室的壁、或血管壁分開(kāi)。75.按照權(quán)利要求65-74中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞外普遍存在的生理學(xué)條件，且所述第二生物學(xué)條件包括所述細(xì)胞內(nèi)普遍存在的條件。76.按照權(quán)利要求65-75中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括所述人體或動(dòng)物體的血流或淋巴系統(tǒng)中普遍存在的生理學(xué)條件，且所述第二生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的至少一種組織或細(xì)胞中普遍存在的條件。77.按照權(quán)利要求65-76中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的血流或淋巴系統(tǒng)中普遍存在的條件，且所述第二生物學(xué)條件包括所述人體或動(dòng)物體細(xì)胞的至少一種亞細(xì)胞區(qū)室中普遍存在的生理學(xué)條件。78.按照權(quán)利要求65-77中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件包括人體或動(dòng)物體的血流或淋巴系統(tǒng)中普遍存在的條件，且所述第二生物學(xué)條件包括所述人體或動(dòng)物體細(xì)胞的至少一種內(nèi)體、脂質(zhì)體、胞飲泡區(qū)室或所述細(xì)胞中存在的其它小泡中普遍存在的生理學(xué)條件。79.按照權(quán)利要求65-78中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以被所述人體或動(dòng)物體的至少一種細(xì)胞吸收(例如，通過(guò)內(nèi)在化、胞飲作用、胞吞、胞轉(zhuǎn)、胞吐、吞噬或吸收或內(nèi)在化進(jìn)入所述細(xì)胞的類(lèi)似機(jī)制)，其中所述第一生物學(xué)條件包括這樣的生理學(xué)條件，其中所述氨基酸序列在被吸收進(jìn)入所述細(xì)胞之前存在，且所述第二生物學(xué)條件包括這樣的生理學(xué)條件，其中所述氨基酸序列在被吸收進(jìn)入所述細(xì)胞后存在。80.按照權(quán)利要求65-79中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的意欲的或血清蛋白，其中所述第一生物學(xué)條件包括關(guān)于至少一種涉及再循環(huán)所述需要的化合物的動(dòng)物體或人體細(xì)胞的細(xì)胞外條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括在至少一種涉及再循環(huán)所述需要的化合物的動(dòng)物體或人體細(xì)胞中普遍存在的條件。81.按照權(quán)利要求65-80中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的意欲的或血清蛋白，其中所述第一生物學(xué)條件包括在動(dòng)物體或人體循環(huán)中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括在至少一種涉及再循環(huán)所述需要的化合物的動(dòng)物體或人體細(xì)胞中普遍存在的條件。82.按照權(quán)利要求65-81中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的血清蛋白，其中所述第一生物學(xué)條件包括在動(dòng)物體或人體循環(huán)中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括在至少一種涉及再循環(huán)所述血清蛋白的動(dòng)物體或人體細(xì)胞中普遍存在的條件。83.按照權(quán)利要求65-82中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)血清清蛋白，其中所述第一生物學(xué)條件包括在動(dòng)物體或人體循環(huán)中普遍存在的條件，且其中所述第二生物學(xué)條件包括在至少一種涉及再循環(huán)所述血清清蛋白的動(dòng)物體或人體細(xì)胞中普遍存在的條件。84.按照權(quán)利要求65-74中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.0的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于7.0的生理學(xué)pH。85.按照權(quán)利要求65-74中任一項(xiàng)或84的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.1的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于6.7的生理學(xué)pH。86.按照權(quán)利要求65-74，84或85中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.2的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于6.5的生理學(xué)pH。87.按照權(quán)利要求65-74或84-86中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是7.2-7.4范圍內(nèi)的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是6.0-6.5范圍內(nèi)的生理學(xué)pH。88.按照權(quán)利要求65-87中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)血清蛋白，進(jìn)行再循環(huán)的血清蛋白。89.按照權(quán)利要求65-88中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)人血清蛋白。90.按照權(quán)利要求65-89中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)人血清清蛋白和針對(duì)來(lái)自至少一種其它哺乳動(dòng)物物種的血清清蛋白。91.按照權(quán)利要求65-90中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)人血清清蛋白和針對(duì)來(lái)自至少一種其它哺乳動(dòng)物物種的血清清蛋白，所述其它哺乳動(dòng)物物種選自由下列各項(xiàng)組成的組小鼠、大鼠、兔和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。92.按照權(quán)利要求65-90中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其針對(duì)人血清清蛋白和針對(duì)來(lái)自至少一種其它靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的血清清蛋白，所述其它靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種選自由下列各項(xiàng)組成的組選自獼猴屬的猴(諸如，和具體地，食蟹猴和/或獼猴和狒狒。93.按照權(quán)利要求65-91中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其能夠以這樣的方式與所述血清蛋白結(jié)合或締合，所述方式是當(dāng)所述氨基酸序列與所述血清蛋白分子結(jié)合或締合時(shí)，不(顯著)縮短所述血清蛋白分子的半衰期。94.按照權(quán)利要求65-92中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于能夠與FcRn結(jié)合的血清蛋白，其中所述氨基酸序列能夠以這樣的方式與所述血清蛋白結(jié)合或締合，所述方式是當(dāng)所述氨基酸序列與所述血清蛋白分子結(jié)合或締合時(shí)，不(顯著)減少或抑制所述血清蛋白分子與FcRn的結(jié)合。95.按照權(quán)利要求94的氨基酸序列，其能夠結(jié)合于所述血清蛋白上的氨基酸殘基，所述氨基酸殘基不涉及所述血清蛋白與FcRn的結(jié)合。96.按照權(quán)利要求65-95中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其選自由下列各項(xiàng)組成的組具有免疫球蛋白折疊的蛋白質(zhì)和多肽；基于除免疫球蛋白外的其它蛋白質(zhì)支架的分子，所述支架包括但不限于蛋白質(zhì)A結(jié)構(gòu)域、淀粉酶抑肽、纖連蛋白、脂籠蛋白、CTLA-4、T-細(xì)胞受體、設(shè)計(jì)的錨蛋白重復(fù)序列和PDZ結(jié)構(gòu)域,和基于DNA或RNA的結(jié)合部分，包括但不限于DNA或RNA適體;或選自所述蛋白質(zhì)或多肽的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。97.按照權(quán)利要求65-96中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其選自由下列各項(xiàng)組成的組包括四種構(gòu)架區(qū)或基本由其組成的蛋白質(zhì)和多肽，所述四種構(gòu)架區(qū)由三種互補(bǔ)性決定區(qū)彼此分開(kāi)；或選自所述蛋白質(zhì)或多肽的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。98.按照權(quán)利要求65-97中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其選自由下列各項(xiàng)組成的組抗體和抗體片段，源自抗體或抗體片段的結(jié)合單位和結(jié)合分子,和抗體片段，結(jié)合單位或結(jié)合分子；或選自前述任一項(xiàng)的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。99.按照權(quán)利要求65-98中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其選自由下列各項(xiàng)組成的組重鏈可變結(jié)構(gòu)域、輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，結(jié)構(gòu)域抗體和適合于作為結(jié)構(gòu)域抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體使用的蛋白質(zhì)和肽和適合于作為單結(jié)構(gòu)域抗體、納米抗體TM和dAbsTM使用的蛋白質(zhì)和肽；或選自前述任一項(xiàng)的合適部分、片段、類(lèi)似物、同源物、直向同源物、變體或衍生物。100.按照權(quán)利要求65-99中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其包括4-500個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選地，5-300個(gè)氨基酸殘基，更優(yōu)選地，10-200個(gè)氨基酸殘基，諸如20-150個(gè)氨基酸殘基，例如約30，40,50,60,70,80,90，100,110,120，130或140個(gè)氨基酸殘基。101.按照權(quán)利要求65-100中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其包括單氨基酸鏈(具有或不具有二硫鍵/鍵合)。102.按照權(quán)利要求65-101中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其以這樣的方式與至少一種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種的血清蛋白結(jié)合或締合，所述方式是當(dāng)所述氨基酸序列與所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的所述血清蛋白結(jié)合或締合時(shí)，所述氨基酸序列表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清蛋白天然血清半衰期的至少50%。103.按照權(quán)利要求102的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清蛋白天然血清半衰期的至少60%。104.按照權(quán)利要求102或103的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清蛋白的天然血清半衰期的至少80%。105.按照權(quán)利要求102-104中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表現(xiàn)出這樣的血清半衰期，所述血清半衰期是所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清蛋白的天然血清半衰期的至少90%。106.按照權(quán)利要求65-105中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表現(xiàn)出至少4天的血清半衰期。107.按照權(quán)利要求106的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表現(xiàn)出至少7天的血清半衰期。108.按照權(quán)利要求106或107的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表現(xiàn)出至少9天的血清半衰期。109.包括權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列的化合物。110.按照權(quán)利要求109的化合物，其中所述化合物還包括至少一種治療部分。111.按照權(quán)利要求109或110的化合物，其中所述化合物包括至少一種按照權(quán)利要求65-101中任一項(xiàng)的氨基酸序列，至少一種按照權(quán)利要求1-43針對(duì)需要的分子的氨基酸序列(其可以或可以不形成治療部分)，和任選地，還包括至少一種治療部分。112.按照權(quán)利要求lll的化合物，其中所述化合物還是這樣的，以致它在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于血清蛋白和所述至少一種需要的分子。113.按照權(quán)利要求lll的化合物，其中所述化合物還是這樣的，以致它在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述血清蛋白，且在所述第二生物學(xué)條件下結(jié)合于所述至少一種需要的分子。114.按照權(quán)利要求lll的化合物，其中所述化合物還是這樣的，以致它在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述至少一種需要的分子，且在所述第二生物學(xué)條件下結(jié)合于所述血清蛋白。115.按照權(quán)利要求110-114中任一項(xiàng)的化合物，其中所述治療部分選自由小分子、多核苷酸、多肽或肽組成的組中的至少一種。116.按照權(quán)利要求109-115中任一項(xiàng)的化合物，所述化合物是融合蛋白或構(gòu)建體。117.按照權(quán)利要求116的化合物，其中在所述融合蛋白或構(gòu)建體中，按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列直接與所述至少一種治療部分相連，或通過(guò)連接體或間隔區(qū)與所述至少一種治療部分相連(和/或結(jié)合至少一種治療部分)。118.按照權(quán)利要求110-117中任一項(xiàng)的化合物，其中所述治療部分包括免疫球蛋白序列或其片段。'119.按照權(quán)利要求118的化合物，其中所述治療部分包括至少一種(單)結(jié)構(gòu)域抗體或納米抗體。120.多價(jià)和多特異性納米抗體構(gòu)建體，其包括至少一種按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的作為納米抗體的氨基酸序列和至少一種另外的納米抗體。121.按照權(quán)利要求120的多價(jià)和多特異性納米抗體構(gòu)建體，其中所述按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的作為納米抗體的氨基酸序列直接與所述至少一種另外的納米抗體相連，或通過(guò)連接體或間隔區(qū)與所述至少一種另外的納米抗體相連。.122.按照權(quán)利要求121的多價(jià)和多特異性納米抗體構(gòu)建體，其中所述按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的作為納米抗體的氨基酸序列通過(guò)連接體或間隔區(qū)與所述至少一種另外的納米抗體相連，且其中所述連接體是氨基酸序列。123.核苷酸序列或核酸，其編碼按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體構(gòu)建體。124.宿主或宿主細(xì)胞，其包括按照權(quán)利要求123的核苷酸序列或核酸，和/或表達(dá)(或能夠表達(dá))按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體。125.用于制備按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體的方法，所述方法包括在這樣的條件下培養(yǎng)或維持按照權(quán)利要求124的宿主細(xì)胞，在所述條件下，所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生或表達(dá)按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體，且任選地，還包括分離由此產(chǎn)生的按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，或按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物的氨基酸序列，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體。126.包括選自由下列各項(xiàng)組成的組中的一種或多種的藥物組合物按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體，其中所述藥物組合物適合于對(duì)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，以所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清蛋白天然半衰期的至少50%為間隔進(jìn)行施用。127.按照權(quán)利要求126的藥物組合物，還包括至少一種藥用載體、稀釋劑或賦形劑。128.任何按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體用于制備用于對(duì)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物施用的藥物的用途，其中以所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清蛋白天然半衰期的至少50%的間隔施用所述藥物。129.按照權(quán)利要求128的用途，其中所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物是人。130.按照權(quán)利要求129的用途，其中以至少7天的間隔施用所述藥物。131.治療方法，包括將任何按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體施用于需要所述治療的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，其中所述施用以所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中所述血清蛋白的天然半衰期的至少50%的頻率發(fā)生。132.按照權(quán)利要求131的方法，其中所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物是人。133.按照權(quán)利要求132的方法，其中以至少7天的間隔施用所述藥物。134.用于延長(zhǎng)或增加治療劑血清半衰期的方法，所述方法包括使所述治療劑與任何按照權(quán)利要求65-108中任一項(xiàng)的氨基酸序列，按照權(quán)利要求109-119中任一項(xiàng)的化合物，或權(quán)利要求120-122中任一項(xiàng)的多價(jià)和多特異性納米抗體相接觸，以使得所述治療劑與所述氨基酸序列、化合物、或多價(jià)和多特異性納米抗體結(jié)合或締合。135.權(quán)利要求134的方法，其中所述治療劑是生物學(xué)治療劑。136.權(quán)利要求135的方法，其中所述生物學(xué)治療劑是肽或多肽，且其中接觸治療劑的步驟包括通過(guò)使所述肽或多肽與所述氨基酸序列、化合物、或多價(jià)和多特異性納米抗體相連接，而制備融合蛋白。137.權(quán)利要求134-136中任一項(xiàng)的方法，還包括在治療劑與所述氨基酸序列、化合物、或多價(jià)和多特異性納米抗體結(jié)合或締合后，向靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物施用所述治療劑。138.權(quán)利要求137的方法，其中所述治療劑在所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清半衰期是治療劑本身半衰期的至少1.5倍。139.權(quán)利要求138的方法，其中所述治療劑在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中的血清半衰期與治療劑本身半衰期相比，增加至少l小時(shí)。140.針對(duì)需要的分子的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第一生物學(xué)條件下，以l(T6摩爾/升或更高的解離率結(jié)合于所述需要的分子；和b)在第二生物學(xué)條件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下結(jié)合于所述需要的分子的解離率至少2倍的解離率結(jié)合于所述需要的分子。141.按照權(quán)利要求140的氨基酸序列，其中所述解離率是5倍更多。142.按照權(quán)利要求140的氨基酸序列，其中所述解離率是10倍更多。143.按照權(quán)利要求140的氨基酸序列，其中所述解離率是IOO倍更多。144.按照權(quán)利要求140的氨基酸序列，其中所述解離率是1000倍更多。145.按照權(quán)利要求140的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下不結(jié)合于所述需要的分子。146.針對(duì)需要的分子的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第二生物學(xué)條件下，以10—6摩爾/升或更高的解離率結(jié)合于所述需要的分子；和b)在第一生物學(xué)條件下，以所述氨基酸序列在所述第二生物學(xué)條件下結(jié)合于需要的分子的解離率的至少2倍的解離率結(jié)合于所述需要的分子。147.按照權(quán)利要求146的氨基酸序列，其中所述解離率是5倍更多。148.按照權(quán)利要求146的氨基酸序列，其中所述解離率是10倍更多。149.按照權(quán)利要求146的氨基酸序列，其中所述解離率是100倍更多。150.按照權(quán)利要求146的氨基酸序列，其中所述解離率是1000倍更多。151.按照權(quán)利要求146的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物學(xué)條件下不結(jié)合于所述需要的分子。152.按照前述權(quán)利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件和所述第二生物學(xué)條件關(guān)于下列因素中任一項(xiàng)、任兩項(xiàng)、任三項(xiàng)或基本全部而不同pH、離子強(qiáng)度、和蛋白酶依賴(lài)性。153.按照前述權(quán)利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.0的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于7.0的生理學(xué)pH。154.按照前述權(quán)利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.1的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于6.0的生理學(xué)pH。155.按照前述權(quán)利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是高于7.2的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是低于5.7的生理學(xué)pH。156.按照前述權(quán)利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物學(xué)條件是7.2-7.4范圍內(nèi)的生理學(xué)pH，且所述第二生物學(xué)條件是5.0-6.0范圍內(nèi)，例如5.5的生理學(xué)pH。157.按照前述權(quán)利要求140-156的氨基酸序列，其針對(duì)血清蛋白，具體地，人血清蛋白。158.按照前述權(quán)利要求140-156的氨基酸序列，其針對(duì)進(jìn)行再循環(huán)的血清蛋白，具體地，進(jìn)行再循環(huán)的人血清蛋白。159.按照前述權(quán)利要求140-158的氨基酸序列，其針對(duì)人血清清蛋白和針對(duì)來(lái)自至少一種其它哺乳動(dòng)物物種的血清清蛋白。160.按照前述權(quán)利要求140-159的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列針對(duì)a)人血清清蛋白和b)針對(duì)一個(gè)耙蛋白或相同序列的多個(gè)靶蛋白或在與多于一個(gè)靶蛋白結(jié)合的情形中的不同序列的多個(gè)靶蛋白是二價(jià)或多價(jià)的。161.權(quán)利要求160的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列是納米抗體或dAbs。全文摘要本發(fā)明涉及結(jié)合于血清蛋白諸如血清清蛋白的氨基酸序列；涉及包括所述氨基酸序列或基本由其組成的化合物、蛋白質(zhì)和多肽；涉及編碼所述氨基酸序列、蛋白質(zhì)或多肽的核酸；涉及包括所述氨基酸序列、蛋白質(zhì)和多肽的組合物，且具體地藥物組合物；和涉及所述氨基酸序列、蛋白質(zhì)和多肽的應(yīng)用，本發(fā)明所述的結(jié)合基本在不同生理學(xué)狀況下是條件性的，例如在酸性條件下和pH-中性條件下是不同的。文檔編號(hào)C07K16/18GK101589057SQ200780043274公開(kāi)日2009年11月25日申請(qǐng)日期2007年10月11日優(yōu)先權(quán)日2006年10月11日發(fā)明者亨德里克斯·雷內(nèi)瑞斯·雅各布斯·馬托伊斯·霍根博姆,伊格納茨·約瑟夫·伊莎貝拉·拉斯特斯申請(qǐng)人:埃博靈克斯股份有限公司