專利名稱：：用于乳腺癌和前列腺癌診斷和治療的癌性疾病調(diào)節(jié)抗體的制作方法用于乳腺癌和前列腺癌診斷和治療的癌性疾病調(diào)節(jié)抗體發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及癌性疾病調(diào)節(jié)抗體(CDMAB)的分離和制備，以及CDMAB在診斷和治療過程中的應(yīng)用，任選地與一種或多種化學(xué)治療劑聯(lián)合使用。本發(fā)明還涉及利用本發(fā)明的CDMAB的結(jié)合分析。
背景技術(shù)：
：每個患有癌癥的個體都是獨特的，由于個體的差異，其患有的癌癥也不同于其他人所患的癌癥。盡管如此，目前的治療采用相同的方式治療患有同期同類型腫瘤的所有患者。至少30%的這些患者的一線治療是失敗的，這樣就造成更多輪次的治療，增加了治療失敗、肺瘤轉(zhuǎn)移及最終死亡的可能性。一種優(yōu)越的治療方式應(yīng)該是針對特定個體的個體化治療。目前唯一采用個體化治療的方式是外科手術(shù)?；熀头暖煵荒茚槍颊吡可矶ㄗ觯诖蠖鄶?shù)情況下，手術(shù)本身并不足以治愈癌癥。隨著單克隆抗體的問世，發(fā)展個體化治療方法的可能性變得更為現(xiàn)實，因為每種抗體能對應(yīng)單一的抗原決定簇。而且，制備針對多個抗原決定簇的集群(constellation)的抗體組合成為可能，該抗原決定簇集群唯一確定了某一特定個體的腫瘤。認識到癌細胞和正常細胞的顯著差異在于癌細胞含有轉(zhuǎn)化細胞特異別轉(zhuǎn)化細胞的單克隆抗體；這樣就產(chǎn)生了單克隆抗體能夠作為"魔術(shù)子彈(MagicBullets)"消除癌細胞的觀點。依照本發(fā)明公開的方法分離出的單克隆抗體已經(jīng)顯示出能夠以有利于患者的方式調(diào)節(jié)癌性疾病進程，如通過降低腫瘤負荷；并且在本文中這些單克隆抗體將分別被稱為癌性疾病調(diào)節(jié)抗體(CDMAB)或"抗癌"抗體。目前，癌癥患者通?？梢赃x擇的治療方式很少。目前的癌癥治療方美國第5,750,102號專利公開了一種方法，其中用可以從患者的細胞或組織中克隆的MHC基因轉(zhuǎn)染來自患者肺瘤的細胞。然后用這些轉(zhuǎn)染的細胞給患者接種。美國專利4,861,581公開了一種方法，它包括的步驟有獲取單克隆抗體，該抗體對哺乳動物腫瘤細胞和正常細胞的細胞內(nèi)成分是特異的，對外部成分沒有特異性；標(biāo)記單克隆抗體；將該標(biāo)記的抗體與哺乳動物的組織接觸，該哺乳動物已接受殺滅胂瘤細胞的治療；以及通過測量該標(biāo)記抗體與退化的肺瘤細胞的細胞內(nèi)成分的結(jié)合來確定治療的效果。在制備針對人類細胞內(nèi)抗原的抗體時，專利權(quán)所有人認識到肺瘤細胞是這類抗原的一個方便來源。美國專利5,171,665提供了一種新型抗體及其制備方法。具體地，該專利敘述了一種單克隆抗體的制備，該抗體有與人類腫瘤(例如腸癌和肺癌)相關(guān)的蛋白抗原牢固結(jié)合的特性，而與正常細胞的結(jié)合程度弱得多。美國專利5，484，596提供了一種癌癥治療的方法，所述方法包括手術(shù)去除人類癌癥患者的胂瘤；處理腫瘤組織以獲得肺瘤細胞；照射胂瘤細胞，使其能成活但不致瘤；用這些細胞來制備抑制原發(fā)性肺瘤復(fù)發(fā)、同時抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的患者疫苗。該專利講述了能夠與腫瘤細胞表面抗原反應(yīng)的單克隆抗體的研制。如在第4欄，第45行等處提到的，專利權(quán)所有人在開發(fā)單克隆抗體中應(yīng)用了自體肺瘤細胞，該單克隆抗體對人類腫瘤表現(xiàn)出活性特異的免疫治療。美國專利5,693,763講述了人類癌細胞的糖蛋白抗原特性，其不依賴于起源的上皮組織。美國專利5,783,186涉及能誘導(dǎo)表達Her2的細胞發(fā)生凋亡的抗-Her2抗體、產(chǎn)生該抗體的雜交瘤細胞系、用該抗體和包括所述抗體在內(nèi)的藥物組合物治療癌癥的方法。美國專利5,849,876描述了產(chǎn)生單克隆抗體的新的雜交瘤細胞系，該抗體針對從肺瘤和非胂瘤組織來源中純化的粘液素抗原。美國專利5，869，268涉及一種制備產(chǎn)生特異針對目標(biāo)抗原的抗體的人類淋巴細胞的方法，制備單克隆抗體的方法及該方法制備的單克隆抗體。該專利特別涉及用于癌癥診斷和治療的抗-HD人類單克隆抗體的制法已經(jīng)改善了總體存活率和發(fā)病率。然而，對特定的個體來說，這些改善的統(tǒng)計數(shù)據(jù)與他們個人情況的改善并無必然關(guān)系。因此，如果提出一種方法學(xué)，使醫(yī)生能夠在同組患者中，獨立于其他患者治療每例腫瘤，這就使根據(jù)個人進行量身定做的獨特治療成為可能。理論上，這樣一種治療過程可以增加治愈率，產(chǎn)生更好的效果，從而滿足長期的需要。從歷史上來看，多克隆抗體的應(yīng)用在治療人類癌癥的方面取得的成功有限。一直用人類的血漿來治療淋巴瘤和白血病，但極少有延長的好轉(zhuǎn)或反應(yīng)。而且，這種治療方法重復(fù)性差，與化療相比，沒有更多的益處。像乳癌、黑色素瘤和腎細胞癌等實體胂瘤也用人類血液、黑猩猩的血清、人類血漿和馬血清來治療過，但相應(yīng)的結(jié)果是不可預(yù)測和無效的。有很多用單克隆抗體治療實體腫瘤的臨床試驗。在20世紀(jì)80年代，就有至少四項針對人類乳腺癌的臨床試驗，在使用了針對特定抗原或基于組織特異性的抗體的至少47個患者中，只產(chǎn)生了一名應(yīng)答者。直到1998年，才有了成功的臨床試驗，該試驗聯(lián)合使用人源化的抗Her2抗體與順鉑。在這項試驗中，對37個患者的反應(yīng)進行了評估，大約有四分之一的患者有部分反應(yīng)，另外一半有輕微的或穩(wěn)定的病情發(fā)展。研究結(jié)腸直腸癌的臨床試驗涉及到針對糖蛋白和糖脂耙標(biāo)的抗體。對腺癌有某些特異性的諸如17-lA等抗體已經(jīng)進入了II期臨床試驗，其中60多例患者中，只有一例患者產(chǎn)生了部分反應(yīng)。在其他的試—瞼中，17-1A的使用在額外采用環(huán)磷酰胺實驗方案的52例患者中，只產(chǎn)生了l例完全反應(yīng)，2例輕微反應(yīng)。其他涉及17-1A的臨床試驗得到與此相似的結(jié)果。最初被批準(zhǔn)用來成像的人源化鼠單克隆抗體也沒能使肺瘤消退。到目前為止，還沒有對結(jié)腸直腸癌有效的抗體。同樣地，對于肺癌、腦癌、子宮癌、胰腺癌、前列腺癌和胃癌的結(jié)果同樣不好。用抗CD3單克隆抗體治療黑色素瘤取得了一些有限的成功。因此，可以看到，盡管在作為人類臨床試驗的先決條件的、動物實驗研究中獲得成功，但所測試的抗體在極大程度還是無效的?，F(xiàn)有專利備。美國專利5，869，045涉及與人類癌細胞反應(yīng)的抗體、抗體片段、抗體偶聯(lián)物和單鏈免疫毒素。這些抗體的作用機制是雙重的，其中該分子可以與人類癌細胞表面的細胞膜抗原反應(yīng)，而且該抗體能夠進一步內(nèi)化入癌細胞內(nèi)，隨后結(jié)合，這對形成抗體-藥物，抗體-毒素的偶聯(lián)物尤其有用。未經(jīng)修飾的抗體在特定濃度下，也表現(xiàn)出細胞毒特性。美國專利5,780,033公開了用于腫瘤治療和預(yù)防的自體抗體的用途。不過，這種抗體是來自老年哺乳動物的抗核自身抗體。這里，自身抗體是指一種存在于免疫系統(tǒng)的天然抗體。因為自身抗體來自"老年哺乳動物，，，所以就不要求自身抗體真正來自受治患者。此外，該專利公開了來自老年哺乳動物的天然單克隆抗核自身抗體及產(chǎn)生單克隆抗核自身抗體的雜交瘤細胞系。發(fā)明概述本發(fā)明的發(fā)明人之前已經(jīng)被授予發(fā)明名稱為"個體化患者特異抗癌抗體"的美國專利6,180,357，該專利要求保護篩選用于癌性疾病治療的個體化抗癌個性抗體的方法。本發(fā)明采用了美國專利6,180,357中講述的生產(chǎn)患者特異性抗癌抗體的方法，用以分離編碼癌性疾病調(diào)節(jié)單克隆抗體的雜交瘤細胞系。這些抗體可以針對一種腫瘤被專門制備，從而使癌癥治療的個性化成為可能。在本發(fā)明公開的內(nèi)容中，具有殺滅細胞(細胞毒性的)或抑制細胞生長(細胞生長抑制的)特性的抗癌抗體將在下文中被稱為細胞毒性的。這些抗體能夠用于幫助癌癥的分期和診斷，也可以用于治療腫瘤轉(zhuǎn)移。個性化抗癌治療的前景會給患者的治療方式帶來變化。一種可能的臨床情境是在腫瘤出現(xiàn)時就取樣并入庫。通過該樣品，能夠從預(yù)存在的癌性疾病調(diào)節(jié)抗體組對該腫瘤進行分型。患者將被常規(guī)分期，但可用的抗體可以對患者進一步分期。用現(xiàn)有的抗體可以直接對該患者進行治療，展示庫并結(jié)合本發(fā)明公開的篩選方法制備。制備的所有抗體都將被加入到抗癌抗體庫中，因為其他肺瘤可能攜帶一些與被治療肺瘤相同的抗原表位。根據(jù)本方法制備的抗體可以用于治療許多患有與這些抗體結(jié)合的腫瘤的患者。除抗癌抗體之外，患者可以選擇接受目前推薦治療作為多模式治療方案的一部分。通過本方法分離的抗體對于非癌細胞相對無毒性這一事實允許大劑量使用抗體組合，要么單獨應(yīng)用，要么與傳統(tǒng)的治療聯(lián)合應(yīng)用。高治療指數(shù)也允許短期內(nèi)的重復(fù)治療，從而降低了治療抗性細胞出現(xiàn)的可能性。另外，本發(fā)明還包括將標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)治療物質(zhì)，例如放射性核素，與本發(fā)明的CDMAB偶聯(lián)，從而使所述的化療作用集中。如果患者的初期治療產(chǎn)生耐藥性或發(fā)生了轉(zhuǎn)移，可以重復(fù)腫瘤特異性抗體的制備過程進行再次治療。而且，該抗癌抗體可以與從該患者體內(nèi)獲得的紅細胞偶聯(lián)，重新輸注到患者體內(nèi)用于治療轉(zhuǎn)移腫瘤。目前幾乎沒有有效的治療轉(zhuǎn)移癌的方法，而轉(zhuǎn)移通常預(yù)示著導(dǎo)致死亡的不良結(jié)果。然而，轉(zhuǎn)移癌通常血供豐富，通過紅細胞來運輸抗癌抗體可以使抗體富集在腫瘤部位。即便在轉(zhuǎn)移之前，大多數(shù)癌細胞也要依賴于宿主的血供來存活，與紅細胞偶聯(lián)的抗癌抗體對原位腫瘤同樣有效?？蛇x^^地，所述抗體可以與其他的血細胞，比如淋巴細胞、巨噬細胞、單核細胞、自然殺傷細胞等偶聯(lián)?？贵w有五類，每類都與其重鏈所賦予的功能相關(guān)。通常認為通過抗體依賴性細胞毒性作用或補體依賴性細胞毒性作用來介導(dǎo)棵抗體的癌細胞殺傷功能。例如，鼠IgM和lgG2a抗體能夠通過結(jié)合補體系統(tǒng)的C-l組分來活化人類補體，從而活化導(dǎo)致肺瘤裂解的補體活化的經(jīng)典途徑。對于人類抗體，最有效的補體激活抗體通常是IgM和IgGl。鼠IgG2a和IgG3同種型抗體可以有效地召集具有Fc受體的細胞毒細胞，其導(dǎo)致單核細胞、巨p藍細胞、粒細胞和某些淋巴細胞的細胞殺傷作用。人的IgGl和IgG3同種型抗體介導(dǎo)ADCC?？贵w介導(dǎo)的癌癥殺傷功能的另一可能機制是使用能夠催化細胞膜及其相關(guān)糖蛋白或糖脂中不同的化學(xué)鍵水解的抗體，即所謂的催化抗體?？贵w介導(dǎo)癌細胞殺傷的還有另外兩種被更廣泛接受的機制。第一種是抗體做為疫苗誘導(dǎo)機體產(chǎn)生針對位于腫瘤細胞上的假定抗原的免疫反應(yīng)。第二是抗體用于靶向生長受體并干擾其功能或者下調(diào)該受體以使其功能有效喪失。因此，本發(fā)明的目的是釆用特定個體來源的細胞制備癌性疾病調(diào)節(jié)抗體方法，該抗體對癌細胞有細胞毒性，而同時對非癌細胞相對無毒，該方法是為了分離雜交瘤細胞系和該雜交瘤細胞系編碼的相應(yīng)的分離的單克隆抗體及其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明的另外目的涉及癌性疾病調(diào)節(jié)抗體和其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明的另外目的是制備癌性疾病調(diào)節(jié)抗體，其細胞毒性通過抗體依賴性細胞毒性作用介導(dǎo)。本發(fā)明的另外目的是制備癌性疾病調(diào)節(jié)抗體，其細胞毒性通過補體依賴性細胞毒性作用介導(dǎo)。本發(fā)明的另外目的是制備癌性疾病調(diào)節(jié)抗體，其細胞毒性是其催化細胞的化學(xué)鍵的水解的能力的作用。本發(fā)明的另外目的是制備癌性疾病調(diào)節(jié)抗體，其用于癌癥診斷、預(yù)后和監(jiān)測的結(jié)合分析。本發(fā)明其它的目的和優(yōu)點通過本發(fā)明下述的說明、舉例和實施方案將變得顯而易見。附圖簡JH兌明圖1包括1A245.6抗體、兩種抗體的同種型對照抗體以及抗-EGFR抗體針對幾種癌細胞系和非癌細胞系的代表性流式細胞術(shù)(FACS)直方圖。圖2包括7BD-33-11A抗體、1A245.6抗體的同種型對照抗體、抗EGFR抗體以及抗EGFR抗體的同種型對照抗體針對幾種癌細胞系和非癌細胞系的代表性FACS直方圖。圖3包括11BD-2E11-2抗體、兩種抗體的同種型對照抗體以及抗-EGFR抗體針對幾種癌細胞和非癌細胞系的代表性FACS直方圖。圖4是特定抗體治療時，腫瘤體積隨時間變化的圖解分析。圖5是抗體對MB231人類乳腺癌腫瘤體積的影響隨時間變化的圖解分析。圖6是定量抗體治療的存活百分比隨時間變化的圖解分析。發(fā)明的詳細描述一般而言，下面用于概述、描述、實施例和權(quán)利要求書中的字詞或短語通常都有其指定的含義。術(shù)語"抗體"使用其最寬泛的涵義，且特別包括，例如單克隆抗體(包括激動劑、拮抗劑和中和抗體，去免疫的、鼠的、嵌合的或人源化的抗體)、攜帶有多表位特異性的抗體組合物、單鏈抗體、抗體的免疫偶聯(lián)物和抗體片段(見下文)。本發(fā)明中使用的術(shù)語"單克隆抗體"指從基本同質(zhì)的抗體群中荻得的抗體，即構(gòu)成該群抗體的個別抗體是相同的，除了可以少量存在的可能自然發(fā)生的變異。單克隆抗體高度特異性的針對單一抗原位點。而且，與包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑相比，每一種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。除了特異性之外，單克隆抗體的優(yōu)勢還在于其合成可以不受其他抗體的污染。修飾語"單克隆的，，指從基本同質(zhì)的抗體群中獲得的抗體的特征，而不能解釋為需要通過任何特定的方法來生產(chǎn)該抗體。例如，本發(fā)明中使用的單克隆抗體可以通過由Kohlerda/.，Atowe，256:495(1975)首次描述的雜交瘤(鼠或人)方法制備或由重組DNA方法制備(參見，例如，美國專利第4,816,567號)。還可以使用在例如ClacksonWa/.'A^mm，352:624-628(1991)和Marks"a/'/Mo/.說'o/，222:581-597(1991)中描述過的技術(shù)，從噬菌體抗體庫中分離"單克隆抗體"。"抗體片段"包括完整抗體的一部分，優(yōu)選包括其抗原結(jié)合區(qū)域或可變區(qū)?？贵w片段的實例包括非全長的抗體、Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；雙體(diabodies);線性抗體；單鏈抗體分子；單鏈抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體分子、融合蛋白、重組蛋白和由抗體片段形成的多特異性抗體。"完整"抗體指包括抗原結(jié)合可變區(qū)，以及輕鏈恒定區(qū)(QJ和重鏈恒定區(qū)Ch1，Ch2和Ch3的抗體。恒定區(qū)可以是天然序列的恒定區(qū)(例如，人天然序列恒定區(qū))或其氨基酸序列的變體。優(yōu)選地，所述完整抗體有一個或多個效應(yīng)器功能。依據(jù)其重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列，完整的抗體可以分為不同的"種類"。有五大類完整的抗體IgA、IgD、IgE、IgG和IgM,其中的幾類可以進一步分為"亞類，，(同種型)，例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。與不同種類抗體對應(yīng)的重鏈恒定區(qū)分別被稱為a，S，e,y和p。不同種類的免疫球蛋白的三維空間構(gòu)型和亞單位結(jié)構(gòu)是公知的?？贵w"效應(yīng)器功能"指那些由抗體Fc區(qū)引起的(天然序列的Fc區(qū)或氨基酸序列變異的Fc區(qū))的生物活性?？贵w效應(yīng)器功能的例子包括Clq結(jié)合；補體依賴性細胞毒性作用；Fc受體結(jié)合；抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒性作用(ADCC);吞噬作用；細胞表面受體的下調(diào)(例如B細胞受體；BCR)等。"抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒性作用"和"ADCC"指細胞介導(dǎo)的反應(yīng)，在所述反應(yīng)中表達Fc受體(FcR)的非特異性的細胞毒細胞(例如自然殺傷(NK)細胞，噬中性粒細胞和巨噬細胞)識別靶細胞上結(jié)合的抗體，并隨后導(dǎo)致靶細胞的裂解。介導(dǎo)ADCC的主要細胞，NK細胞，只表達FcyRIII,而單核細胞表達FcyRI、FcyRII和FcyRIII。Ravetch和Kinet，j朋w.Wev./mmw朋/9:457-92(1991)的第464頁的表3總結(jié)了造血細胞的FcR表達。為了測定目標(biāo)分子的ADCC活性，可以進行例如在美國專利5,500,362或5,821,337描述的體外ADCC活性分析。用于這類分析的效應(yīng)細胞包括外周血單個核細胞(PBMC)和自然殺傷(NK)細胞?？蛇x4奪地或附加地，可以在體內(nèi)評價目標(biāo)分子的ADCC活性，例如在諸如Clynesa/.尸A^4S(USA)95:652-656(1998)中公開的動物模型中。"效應(yīng)器細胞"指表達一種或多種FcRs并執(zhí)行效應(yīng)器功能的白細胞。優(yōu)選地，這些細胞至少表達FcyRIII,并執(zhí)行ADCC效應(yīng)器功能。介導(dǎo)(NK)細胞、單核細胞、細胞毒T細胞和中性粒細胞；優(yōu)選PBMC和NK細胞。效應(yīng)器細胞可以/人其天然來源中分離，例如/人本文中描述的血液或PBMCs中分離。術(shù)語"Fc受體"或"FcR"用于描述結(jié)合于抗體Fc區(qū)的受體。優(yōu)選的FcR是天然序列的人類FcR。而且，優(yōu)選的FcR是結(jié)合于IgG抗體(y受體)的受體，并包括FcyRI、FcyRII和FcyRIII亞類的受體，其包括這些受體的等位基因變體和選4奪性的剪切形式。FcyRII受體包括FcyRIIA("激活性受體")和FcyRIIB("抑制性受體")，兩者的氨基酸序列相似，區(qū)別主要在于其胞漿區(qū)。激活性受體FcyRIIA在其胞漿區(qū)含有免疫受體酪氨酸激活基序(ITAM)。抑制性受體FcyRIIB在其胞漿區(qū)含有免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)。(參見Dagron，v4ww,iev./附m做o/.15:203-234(1997)中的綜述M)。在Ravetch和Kinet,j畫.腸./m腦"o/9:457-92(1991);Capelda/"7m/wwwo/we^20tis14:25-34(1994)禾口deHaasefa/"J丄a6.C7/.A/ed.126:330-41(1995)中對FcR進行了綜述。其他FcR，包括將來要被確認的FcR,都包括在本發(fā)明中的術(shù)語"FcR"中。該術(shù)語也包括負責(zé)將母體的IgG轉(zhuǎn)運到胎兒體內(nèi)的新生受體，F(xiàn)cRn(Guyer"/，《//wmw"o/.117:587(1976)和Kim^a/"五mk//m附m"o/,24:2429(1994))。"補體依賴性細胞毒性作用"或"CDC"指分子在補體存在下，裂解靶細胞的能力。補體激活途徑通過補體系統(tǒng)的第一組分(Clq)與和同類抗原形成復(fù)合物的分子(比如，抗體)的結(jié)合啟動。為了評價補體激活，可以進行如在Gazzano-Santoroe,a/.'/7WeAoA202:163(1996)中描述的CDC分析。術(shù)語"可變的"指可變區(qū)某些部分的序列在抗體間高度不同，并用于每一種特定抗體與其特定抗原的結(jié)合及其特異性。然而，變異并不是均勻分布在抗體的可變區(qū)域內(nèi)。它集中在輕鏈和重鏈可變區(qū)的三個所謂的高度可變區(qū)的片段內(nèi)?？勺儏^(qū)內(nèi)保守性較高的部分被稱為骨架區(qū)(FRs)。每個天然的重鏈和輕鏈可變區(qū)，包含主要采用P-片層構(gòu)型的四個FR，由三個高度可變區(qū)連接在一起，形成環(huán)狀連接，在一些情況下形成部分〉片層結(jié)構(gòu)。每條鏈的高度可變區(qū)通過FRs以密切靠近的方式結(jié)合在一起，并與另一條鏈的高度可變區(qū)一起，促成抗體的抗原結(jié)合部位的形成(參見Kabatetal,Xe，eMceso/o/7mm柳o/og7'c"/7wfemy/(免疫學(xué)目標(biāo)蛋白的序列)，第5版.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，Md.pp15-17;48-53(1991))。恒定區(qū)并不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，而是呈現(xiàn)各種效應(yīng)器功能，例如在抗體依賴性的細胞毒效應(yīng)(ADCC)中抗體的參與。本發(fā)明中使用的術(shù)語"高度可變區(qū)"指抗體中負責(zé)與抗原結(jié)合的氨基酸殘基。高度可變區(qū)通常包括"互補決定區(qū)"或"CDR"的氨基酸殘基(例如輕鏈可變區(qū)的氨基酸殘基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97(L3)及重鏈可變區(qū)的氨基酸殘基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3);Kabatetal,5^wewceyo/q/"7mmimo/og/ca//j^ems^(免疫學(xué)目標(biāo)蛋白的序列)，第5版.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，Md.pp15-17;48-53(1991))和/或"高變環(huán)"區(qū)的氨基酸殘基(例如輕鏈可變區(qū)的殘基2632(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)及重鏈可變區(qū)的26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3);ChothiaandLeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987》。"骨架區(qū)"或"FR"殘基指除了本發(fā)明定義的高變區(qū)殘基之外的那些可變區(qū)的殘基?？贵w經(jīng)木瓜蛋白酶水解產(chǎn)生兩個相同的被稱為"Fab"片段的抗原結(jié)合片段和一個殘余的"Fc"片段，每個"Fab"片段都有單一的抗原結(jié)合部位，"Fc"片段的名稱反映了其易結(jié)晶的能力。胃蛋白酶處理抗體產(chǎn)生一個F(ab')2片段，其有兩個抗原結(jié)合部位，且仍能夠與抗原交聯(lián)。"Fv"是含有完整的抗原識別和抗原結(jié)合部位的最小抗體片段。該區(qū)域由以緊密、非共價結(jié)合的一條重鏈和一條輕鏈可變區(qū)的二聚體構(gòu)成。以這種每個可變區(qū)的三個高變區(qū)相互作用的構(gòu)型決定Vh-Vl二聚體表面的抗原結(jié)合部位。六個高變區(qū)域共同賦予了抗體的抗原結(jié)合特異性。然而，即便單一的可變區(qū)(或只含有三個抗原特異性高變區(qū)的Fv的一半)仍能夠識別和結(jié)合抗原，盡管比完整結(jié)合位點的親和性低。Fab片段也含有輕鏈恒定區(qū)和重鏈的第一恒定區(qū)(CH1)。Fab'片段不同于Fab片段之處在于其重鏈CHI區(qū)的羧基末端多了幾個氨基酸殘基，包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個或多個半胱氨酸。Fab'-SH在本發(fā)明中指代Fab',其中恒定區(qū)的半胱氨酸殘基至少攜帶一個游離的巰基。最初的F(ab')2抗體片段以Fab'片段對產(chǎn)生，之間有鉸鏈的半胱氨酸。其他的抗體片段的化學(xué)偶聯(lián)也是公知的。來自任一脊推動物的抗體的"輕鏈"基于其恒定區(qū)的氨基酸序列，都可以歸于兩種截然不同的所謂kappa(k)和lambda(人^連中的一種。"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段包含抗體的Vh和Vl區(qū)，其中這些區(qū)域存在于單一的多肽鏈上。優(yōu)選地，F(xiàn)v多肽還包含VH和Vt區(qū)之間的多肽連接子，其使scFv形成適于抗原結(jié)合的結(jié)構(gòu)。關(guān)于scFv的綜述參見Pliickthunin77ze/Vzar顧co/ogyo/Mo"oc/。Ma/^4""'6oflfes(單克隆抗體藥理學(xué))，vol.113,RosenburgandMooreeds.，Springer-Verlag，NewYork,pp.269-315(1994)。術(shù)語"雙體(Diabodies)"指帶有兩個抗原結(jié)合位點的小型抗體片段，該片段在同一多肽鏈上(V『V0包含與輕鏈可變區(qū)(VJ結(jié)合的重鏈可變區(qū)(Vh)。通過使用因過短而不能使同一條鏈上的兩個區(qū)域配對的連接子，使這些區(qū)域被迫與另一條鏈上的互補區(qū)域配對，由此產(chǎn)生了兩個抗原結(jié)合位點。例如在EP404,097;WO93/11161;和Hollinger"A^//jcat/.6W.90:6444-6448(1993)中對雙體作了更詳細的描述。"分離"抗體是指從其天然環(huán)境的組分中鑒別、分離和/或回收的抗體。其天然環(huán)境下的污染成分是指干擾抗體診斷或治療作用的物質(zhì)，可以包括酶、激素和其它的蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶解物。因為缺乏抗體的天然環(huán)境中的至少一種組分，分離抗體包括重組細胞內(nèi)部的原位抗體。但是，通常分離抗體會經(jīng)過至少一步的純化步驟來制備。"結(jié)合"目的抗原的抗體是指對該抗原有充分親和力的抗體，以致該抗體在耙定表達該抗原的細胞時，可以作為治療或診斷試劑。如果抗體能結(jié)合抗原性部分，它通常會優(yōu)先結(jié)合其抗原性部分，而不是其它受體，這不包括諸如非特異性的Fc接觸的偶然結(jié)合或與其他抗原共有的翻譯后修飾成分結(jié)合，該抗體不會與其他蛋白有明顯的相互作用。檢測與目的抗原結(jié)合的抗體的方法在本領(lǐng)域中是公知的，可以包括但并不局限于例如FACS、細胞ELISA和Western印跡等分析。正如本發(fā)明中使用的，"細胞"、"細胞系"、"細胞培養(yǎng)物，，的表述可以交替使用，所有這些用法都包括其子代。也可以理解為由于人為的或非人為的突變，所有的子代在DNA組成上不可能完全相同。在原始轉(zhuǎn)化細胞內(nèi)篩選的有相同功能或生物學(xué)活性的突變子代包括在內(nèi)。根據(jù)有意使用的不同指代的上下文，指代是清楚的。"治療"既指治療性處理，也指預(yù)防性或防止性的措施，其目的就是預(yù)防或減緩(減輕)目標(biāo)病理狀態(tài)或病癥。需要治療的個體包括那些已經(jīng)存在所述病癥的個體，還包括那些將發(fā)展為該病癥的或欲對其病癥進行預(yù)防的個體。因此，本文中欲被治療的哺乳動物已經(jīng)被診斷為患有該病癥或傾向于或易感于該病癥。術(shù)語"癌癥"和"癌性(的)"是指或描述哺乳動物的生理狀態(tài)，其典型特征是細胞生長或死亡不受調(diào)控。癌癥的實例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。這些癌癥更多具體的例子包括鱗狀細胞癌(例如鱗狀上皮細胞癌)，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌和肺鱗癌在內(nèi)的肺癌，腹膜癌，肝細胞癌，包括胃腸道癌在內(nèi)的胃癌，胰腺癌，膠質(zhì)母細胞瘤，宮頸癌，卵巢癌，肝臟癌癥，膀胱癌，肝細胞瘤，乳腺癌，結(jié)腸癌，直腸癌，結(jié)腸直腸癌，子宮內(nèi)膜或子宮癌，唾液腺癌，腎癌，前列腺癌，外陰癌，曱狀腺癌，肝癌，肛癌，陰莖癌，還有頭頸部癌。"化療劑"是用于癌癥治療的化合物?；焺┑膶嵗ㄖT如噻替派和環(huán)磷酰胺(CYTOXANTM)的烷化劑；例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)的烷基磺酸酯類；如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替口底(meturedopa)、烏瑞替派(uredopa)的氮丙啶類；包括六曱蜜胺、曲他胺(triethylenemelamine)、三亞乙基磷酰胺、三亞乙基硫代磷酰胺和三曱基奧羅蜜胺(trimethylolomelamine)在內(nèi)的乙蜂亞胺類(ethylenimines)和曱基蜜胺類(methylamelamine);如瘤可寧(chlorambucil)、萘氮芥、環(huán)磷酰胺、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸曱氧氮芥、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥(phenesterine)、潑尼莫司汀、曲磷胺、烏拉莫司汀(umcilmustard)等氮芥類藥物；如卡氯芥、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司丁、雷莫司汀等硝脲類(nitrosureas);如阿克拉霉素類、放線菌素、安曲霉素、重氮絲氨酸、博來霉素、放線菌素C、加里剎霉素、洋紅霉素、碳霉素(camomycin)、嗜癌霉素、色霉素、放線菌素D、柔紅霉素、地托咪定、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、表阿霉素、依索比星、依達比星、麻西羅霉素、絲裂霉素、霉酚酸、諾加霉素、橄欖霉素、灰霉素、potfiromydn、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑霉素、鏈佐星、殺結(jié)核菌素、烏苯美司、凈司他丁、佐柔比星類抗生素；曱氨碟呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)類抗代謝類藥；如二曱葉酸、氨曱喋呤、蝶羅呤、三曱曲沙等葉酸擬似物；如氟達拉濱、6-巰噪呤、硫米噤呤、硫鳥。票呤類噤呤類似物；如安西他濱、阿扎胞苷、6-氮雜尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷、5-FU等嘧啶類似物；如卡魯睪酮、屈他雄酮丙酸酯、表硫雄醇、美雄烷、睪內(nèi)酯酮等男性激素類藥物；如氨魯米特、米托坦、曲洛司坦等抗腎上腺類藥物；如亞葉酸等葉酸補充物；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖咬；bestrabucil;比生群；依達曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鳥氨酸；依利醋銨；依托格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇；尼曲吖啶；噴司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；足葉草酸；2-乙肼；丙卡巴肼；PSK;雷佐生；西佐喃；鍺螺胺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；烏拉坦；長春地辛；達卡巴。秦；甘露莫司?。欢甯事洞?；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷；gacytosine;阿拉伯糖香("Ara-C");環(huán)磷酰胺；塞替派；如紫杉醇(TAXOL⑧:Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,NJ.)和多西他賽(TAXOTERE⑧:Aventis,Rhone-PoulencRorer,Antony,France)等紫杉烷類；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥。票呤；巰噤呤；曱氨蝶呤；如順鉑和卡鉑等鉑類似物；長春堿；柏；依托泊苷(VP-16);異環(huán)磷酰胺；絲裂霉素C;米托蒽醌；長春新堿；長春瑞濱；去曱長春石咸；諾消靈(novantrone);替尼泊苷；柔紅霉素；氨蝶呤鈉；希羅達；伊班膦酸鈉；CPT-11;拓樸異構(gòu)酶抑制劑RFS2000;二氟曱基鳥氨酸(DMFO);視黃酸；埃斯波霉素；卡培他濱；以及上述任一種藥物在藥學(xué)上可以接受的鹽、酸或衍生物。調(diào)節(jié)或抑制激素對胂瘤作用的抗激素類藥物也包括在本定義內(nèi)，像抗雌激素藥物，包括例如它莫西芬、雷洛昔芬、芳香化酶抑制劑4(5)-咪唑、4-鞋基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷諾昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮和托瑞米芬(法樂通)；以及抗雄激素物質(zhì)，例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任一種藥物在藥學(xué)上可以接受的鹽、酸或衍生物。用于治療目的的"哺乳動物，，指任何一種可以歸于哺乳類的動物，包括人類、小鼠、免疫缺陷鼠(SCID)或棵鼠或品系小鼠、家畜和農(nóng)場動物及動物園內(nèi)的動物、體育動物或?qū)櫸铮热缇d羊、狗、馬、貓、母牛等。優(yōu)選地，本發(fā)明中的哺乳動物指人類。"寡核苷S臾"指短長度、單鏈或雙鏈多聚脫氧核香酸，其通過已知的方法(例如磷酸三酯、亞磷酸鹽、亞磷酰胺化學(xué))，利用例如發(fā)表于1988年5月4日的EP266,032中描述的固相技術(shù)，或利用Froehleretal,Nucl.AcidsRes.，14:5399-5407,1986描述的脫氧核苷H-磷酸鹽中間物化學(xué)合成。然后將其用聚丙烯酰胺凝膠純化。"嵌合"抗體指免疫球蛋白，其部分重鏈和/或輕鏈與來源于特定種屬其余序列與來源于另一種屬或?qū)儆诹硪环N類或亞類的抗體的對應(yīng)序列相同或同源，此外還指這些抗體的片段，只要它們能夠表現(xiàn)出所需的生物活性(美國專利4,816,567和MorrisonW"/，A^/.」c"<i.OS^，81:6851-6855(1984))。非人類(例如鼠科)抗體的"人源化"形式指特殊的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(例如Fv，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab',F(ab)2或抗體的其他抗原結(jié)合序列)，其包含來自非人類免疫球蛋白的最小序列。在絕大多數(shù)情況下，人源化抗體是人的免疫球蛋白(受者抗體)，其中，來自受者抗體的互補決定區(qū)(CDRs)的殘基被諸如具有所需的特異性、親和力、能力的小鼠、大鼠或兔等非人類抗體(供者抗體)的CDRs的殘基所替代。在一些情況下，人類免疫球蛋白的Fv骨架區(qū)(FR)殘基被相應(yīng)的非人類FR殘基所替代。此外，人源化抗體可以包含既不在受者抗體也不在引入的CDR或FR序列的殘基。這些修飾進一步改善和優(yōu)化了抗體的性能。通常，人源化抗體包含至少一個，通常是兩個可變區(qū)的幾乎所有的部分，其中所有或幾乎所有的CDR區(qū)對應(yīng)非人類免疫球蛋白的CDR區(qū)，且所有或幾乎所有的FR殘基是人類免疫球蛋白共有序列的FR殘基。最優(yōu)地，人源化抗體也包含免疫球蛋白恒定區(qū)序列的至少一部分，通常是人類免疫球蛋白的序列。免疫球蛋白。通過改造抗體的結(jié)構(gòu)可以實現(xiàn)去免疫化。可以使用任何本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的去免疫化技術(shù)。例如，在于2000年6月15日公布的WO00/34317中，描述了一項使抗體去免疫原性的適當(dāng)?shù)募夹g(shù)。"同源性"被定義為經(jīng)過序列比對和引入空位后，氨基酸序列變體中相同的殘基的百分比，如果需要，達到最大百分比的同源性。用于比對的方法和計算機程序在本領(lǐng)域內(nèi)是公知的。在本說明書中，雜交瘤細胞系及其產(chǎn)生的分離的單克隆抗體可以選擇用內(nèi)部分類號7BD-33-llA，1A245.6和11BD-2E11-2或其各自的保藏號PTA-4890,PTA-4889和PTA-5643來表示。本發(fā)明中使用的"配體"包含針對靶抗原呈現(xiàn)結(jié)合特異性的部分，其可以是完整的抗體分子或是至少有一個抗原結(jié)合區(qū)或其部分(即抗體分子的可變部分)的任一分子，例如，F(xiàn)v分子，F(xiàn)ab分子，F(xiàn)ab，分子，F(xiàn)(ab，)2分子，雙特異性抗體，融合蛋白或任一基因工程分子，其特異性識別和結(jié)合抗原，所述抗原被命名為ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643的雜交瘤細胞系所產(chǎn)生的分離的單克隆抗體所結(jié)合(ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643抗原)。本發(fā)明中使用的"抗原結(jié)合區(qū)"指識別靶抗原的分子的部分。本發(fā)明中使用的"竟?fàn)幮砸种?，，是指通過常規(guī)的抗體相互竟?fàn)幏治?BelangerL，SylvestreC.和DufourD.(1973)，Enzymelinkedimmunoassayforalphafetoproteinbycompetitiveandsandwichprocedures(覔爭和夾心法的曱胎蛋白的酶聯(lián)免疫測定).C//m'c"C7>w'ca48,15),能夠識別和結(jié)合由ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643雜交瘤細胞系產(chǎn)生的單克隆抗體(ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643抗體)針對的抗原決定表位。本發(fā)明中使用的"靶抗原"指ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643抗原或其部分。本發(fā)明中使用的"免疫偶聯(lián)劑"指以化學(xué)或生物學(xué)方式連接到細胞毒素、放射物質(zhì)、酶、毒素、抗胂瘤藥或治療劑的諸如抗體的任一分子或配體。只要能夠與其靶標(biāo)結(jié)合，該抗體可以在其分子的任一部位與細胞毒素、放射物質(zhì)、抗腫瘤藥或治療劑連接。免疫偶聯(lián)劑的實例包括抗體毒素化學(xué)偶聯(lián)劑和抗體-毒素融合蛋白。本發(fā)明中使用的"融合蛋白"指任一嵌合蛋白，其抗原結(jié)合區(qū)與例如毒素、酶或蛋白藥物的生物活性分子連接。為了更充分理解本文中描述的發(fā)明，進行下述說明。本發(fā)明提供特異識別并結(jié)合ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643抗原的配體(即ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643配體)。本發(fā)明的配體可以以任一形式存在，只要其具有一個抗原結(jié)合區(qū)域，所述配體能竟?fàn)幮砸种朴呻s交瘤細胞ATCCPTA-48卯、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643產(chǎn)生的單克隆抗體與其靶抗原的免疫特異性結(jié)合。因此，任一具有與ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643相同的結(jié)合特異性的重組蛋白(例如，其中抗體與另一種諸如淋巴因子或胂瘤抑制生長因子的蛋白結(jié)合所形成的融合蛋白)都屬于本發(fā)明的范圍。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述配體是ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643抗體。在其他實施方案中，所述配體是一個抗原結(jié)合片段，其可以是具有ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643抗體的抗原結(jié)合區(qū)的Fv分子(例如單鏈Fv分子)、Fab分子、Fab'分子、F(ab')2分子、融合蛋白、雙特異性抗體、異種抗體或任一重組分子。本發(fā)明中的配體針對的抗原決定簇是ATCCPTA-4890、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643單克隆抗體針對的決定簇。本發(fā)明中的配體可以被修飾，即通過分子內(nèi)的氨基酸修飾，產(chǎn)生出衍生分子。也可以是化學(xué)修飾。衍生分子要保留多肽的功能特性，也就是說，具有這類取代的分子仍能夠使該多肽與ATCCPTA-48卯、ATCCPTA-4889或ATCCPTA-5643抗原或其部分結(jié)合。氨基酸取代包括但不必然限于在本領(lǐng)域中公知的"保守"氨基酸取代。舉例來說，被稱為"保守氨基酸取代"的某些氨基酸取代能夠在蛋白質(zhì)中頻繁出現(xiàn)，但不改變該蛋白質(zhì)的構(gòu)象或功能，這是蛋白質(zhì)化學(xué)中已建立的法則。這些改變包括用異亮氨酸(I)、纈氨酸(V)和亮氨酸(L)的任一種取代這些疏水氨基酸的任何其它一種；天門冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)，反之亦然；谷氨酰胺(Q)取代天冬酰胺(N)，反之亦然；以及絲氨酸(S)取代蘇氨酸(T),反之亦然。其他的取代也可以被認為是保守的，取決于特定氨基酸的環(huán)境和其在蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)中的作用。例如，甘氨酸(G)和丙氨酸(A)可以經(jīng)?；Q，丙氨酸和纈氨酸(V)也是。相對疏水的蛋氨酸(M)可以經(jīng)常與亮氨酸和異亮氨酸互換，有時與纈氨酸互換。賴氨酸(K)和精氨酸(R)經(jīng)常互換，其發(fā)生部位氨基酸殘基的明顯特征是其帶電特性，這兩種氨基酸的不同pK的差別并不明顯。在特定情境下，仍有其他的一些變化可以被認為是"保守的"。給定一種抗體，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以生產(chǎn)出竟?fàn)幮砸种频呐潴w，例如竟?fàn)幮钥贵w，其可以識別相同的抗原決定簇(Belanger等人，1973)。一種方法是用表達該抗體識別抗原的免疫原產(chǎn)生免疫。該樣本可以包括組織、分離的蛋白或細胞系，但并不局限于這些。利用諸如ELISA、FACS或免疫沉淀的竟?fàn)幮苑治龊Y選產(chǎn)生的雜交瘤，所述竟?fàn)幏治瞿荑b別抑制所檢測抗體結(jié)合的抗體。另一種方法是利用噬菌體展示抗體庫，淘選識別所述抗原的抗體(Rubinstein等人，2003)。在任何一種情況下，雜交瘤的篩選都是基于其與靶抗原的結(jié)合能力竟?fàn)幊鲈瓨?biāo)記抗體。因此，這些雜交瘤的特征是可以與原始抗體識別相同的抗原，更具體地，可以識別同樣的抗原決定簇。實施例1雜交瘤制備一雜交瘤細胞系7BD-33-11A,1A245.6,11BD-2E11-2雜交瘤根據(jù)布達佩斯條約，雜交瘤細胞系7BD-33-11A和1A245.6于2003年1月8日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心，位于美國弗吉尼亞州20110-2209馬納薩斯大學(xué)路10801，保藏號分別為PTA-4890和PTA-4889。依據(jù)37CFR1.808的規(guī)定，保藏者保證在專利授權(quán)時將不可撤銷地取消對公眾獲取該保藏材料的所有限制。才艮據(jù)布達佩斯條約，雜交瘤細胞4朱11BD-2E11-2于2003年11月11日保藏于美國典型培養(yǎng)物保存中心，位于美國弗吉尼亞州20110-2209馬納薩斯大學(xué)路10801，保藏號為PTA-5643。依據(jù)37CFR1.808的規(guī)定，保藏者保證在專利授權(quán)時將不可撤銷地取消對公眾獲取該保藏材料的所有限制。為了制備產(chǎn)生7BD-33-11A抗癌抗體的雜交瘤，在冷PBS中制備抗原，即人類乳腺癌細胞的單細胞懸液。通過以分次劑量皮下和腹腔注射含有20萬至250萬個細胞的100微升抗原-佐劑和弗氏完全佐劑免疫8到9周齡的BALB/c小鼠。初次免疫三周后，用新鮮制備的含有20萬至250萬個細胞的抗原-佐劑以同樣的方式加強免疫小鼠，并在上次加強后兩周再加強一次。在最后一次免疫后的至少兩天，取出脾臟用于融合。通過融合分離的脾細胞以及Sp2/0骨髓瘤伴侶以制備雜交瘤。檢測所述雜交瘤亞克隆融合的上清。為了制備產(chǎn)生1A245.6抗癌抗體的雜交瘤，在冷PBS中制備抗原，即人類乳腺癌細胞的單細胞懸液。通過以分次劑量皮下和腹腔注射含有250萬個細胞的100^t升抗原-佐劑和弗氏完全佐劑免疫8到9周齡的BALB/c小鼠。初次免疫后3周，用新鮮制備的含有250萬個細胞的抗原-佐劑以同樣的方式加強免疫小鼠，2周后、五周后以及上一次加強三周后再加強免疫小鼠。在最后一次免疫后的至少三天，取出脾臟用于融合。將分離的脾細胞與NS0-1骨髓瘤伴侶融合以制備雜交瘤。檢測所述雜交瘤亞克隆融合的上清。為了制備產(chǎn)生11BD-2E11-2抗癌抗體的雜交瘤，在冷PBS中制備抗原，即人類乳腺癌細胞的單細胞懸液。通過以分次劑量皮下和腹腔注射含有20萬至250萬個細胞的100微升抗原-佐劑和弗氏完全佐劑免疫8到9周齡的BALB/c小鼠。初次免疫后兩周或三周，用新鮮制備的含有20萬至250萬個細胞的抗原-佐劑以同樣的方式加強免疫小鼠，并在上次加強后兩周再加強一次。在最后一次免疫后至少兩天，取出脾臟用于融合。將分離的脾細胞與NS0-1骨髓瘤伴侶融合以制備雜交瘤。4企測所述雜交瘤亞克隆融合的上清。為了檢測雜交瘤分泌的抗體是IgG,還是IgM同種型，進行ELISA分析。將4。C包被緩沖液(0.1M碳酸鹽/碳酸氬鹽緩沖液，pH9.2-9.6)中的濃度為2.4嗎/ml的山羊抗小鼠的IgG+IgM(H+L)，按100jul/孔加入ELISA板過夜。該ELISA板用洗滌緩沖液(PBS+0.05%Tween)洗三次。按100|^1/孔加入封閉緩沖液(5%奶洗滌緩沖液)，室溫1小時，隨后用洗滌緩沖液洗三次。按100pl/孔加入雜交瘤上清，將該板室溫孵育l小時。所述板用洗滌緩沖液洗三次，按100pl/孔加入山羊抗小鼠的IgG或IgM辣根過氧化物酶偶聯(lián)物的1/5000稀釋液(用含1%牛血清白蛋白的PBS稀釋)。室溫孵育1小時后，該板用洗滌緩沖液洗三次。按100pl/孔加入TMB溶液，室溫孵育1至3分鐘。按100(il/孔加入2MH2S04,終止顏色反應(yīng)，用Perkin-ElmerHTS7000酶標(biāo)儀在450nm波長處讀板。如表1所示，7BD-33-llA、1A245.6、11BD-2E11-2雜交瘤主要分泌IgG同種型抗體。經(jīng)過1至4輪有限稀釋，在細胞ELISA分析中，檢測雜交瘤上清中與草巴細胞結(jié)合的抗體。檢測了三種乳腺癌細胞系MDA-MB-231(也被稱為MB-231)、MDA-MB-468(也被稱為MB-468)和SKBR-3。板內(nèi)的細胞在使用前先固定。室溫下，該板用含MgCl2和CaCl2的PBS洗三次。每孔加PBS稀釋的2%的多聚曱醛100^1，室溫10分鐘，然后棄掉多聚曱醛。再用含MgCl2和CaCl2的PBS在室溫下洗滌該4反三次。每孔加100pl5。/。奶洗滌液(PBS+0.05%Tween)進行封閉，室溫1小時。該板用洗滌液洗三次，按100iil/孔加入雜交瘤上清，室溫孵育l小時。用洗滌緩沖液將該板洗三次，按100pl/孔加入辣根過氧化物酶偶聯(lián)的山羊抗小鼠的IgG或IgM的1/5,000稀釋液(用含1%牛血清白蛋白的PBS稀釋)。室溫孵育l小時后，該板用洗滌緩沖液洗三次，每孔加入100jilTMB底物，室溫孵育1-3分鐘。每孔加入100(il2MH2S04終止反應(yīng)，用Perkin-ElmerHTS7000酶標(biāo)儀在450nm波長處讀板。如圖1列表所示，結(jié)果表示為與IgG同種型對照(3BD-27)比較高出背景的倍數(shù)。7BD-33-11A和1A245.6雜交瘤細胞系產(chǎn)生的抗體與檢測的所有三種乳腺癌細胞系都強烈結(jié)合，至少比背景高出6倍。兩種抗體與MDA-MB-231細胞系的結(jié)合最強。雜交瘤細胞系11BD-2E11-2產(chǎn)生的抗體也與MDA-MB-231細胞系強烈結(jié)合，但是與另外兩種細胞系的結(jié)合并沒顯示出比背景強。這些結(jié)果表明該抗體識別的表位在MDA-MB-468或SKBR-3細胞上不存在，與7BD-33-11A和1A245.6識別的表位明顯不同。進行抗體結(jié)合試驗的同時，在相同的乳腺癌細胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468和SKBR-3上，檢測了雜交瘤上清的細胞毒性作用。活/死細胞毒性分析試劑盒購自MolecularProbes公司(Eu，OR)。根據(jù)廠商的說明書并作下述的改動后進行分析。在分析前，將細胞根據(jù)預(yù)先確定的適當(dāng)密度進行鋪板。兩天后，將100pl來自雜交瘤微孔板的上清轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)板中，在5%C02孵箱中孵育5天。將陽性對照孔吸凈，加入100pi疊氮鈉和/或放線菌酮。因為已知3BD-27單克隆抗體不與檢測的三種乳腺癌細胞系結(jié)合，所以該抗體也被加入作為同種型對照。抗-EGFR抗體(C225)也被用于該分析，以作比較。經(jīng)過5天的處理后，倒空反應(yīng)板的液體并吸干。通過多通道塑料擠瓶，將含MgCl2和CaCl2的室溫DPBS分到每孔中，叩打三次，倒出液體并吸干。每孔加入50(il用含MgCl2和CaCl2的DPBS稀釋的熒光活/死(Live/Dead)染料，在37。C含5%C02的孵箱內(nèi)孵育30分鐘。該板置于Perkin-ElmerHTS7000熒光讀板儀內(nèi)讀數(shù)，數(shù)據(jù)用MicrosoftExcel進行分析，結(jié)果在表l中列出。觀察到三種抗體的細胞毒性有所差異。11BD-2E11-2顯示出39-73%殺傷作用，在SKBR-2細胞上觀察到的細胞毒性最高。1A245.6和7BD-33-llA在MDA-MB-231細胞中呈現(xiàn)相似的細胞毒性，但1A245.6對于MDA-MB-468細胞也具有細胞毒性，而7BD-33-l1A則沒有。這表明來源于雜交瘤細胞的抗體能在癌細胞中產(chǎn)生細胞毒性作用。在抗體的結(jié)合程度與雜交瘤上清產(chǎn)生的細胞毒性作用之間也存在普遍的聯(lián)系。這種趨向有一些例夕卜，比如盡管11BD-2Ell-2對MB-468和SKBR-3細胞結(jié)合微弱，但11BD-2E11-2在MB-468和SKBR-3癌細胞中仍有細胞毒性。這提示該抗體具有在這種細胞類型上無法被細胞ELISA結(jié)合分析檢測到的調(diào)節(jié)活性，或者由于分析本身的限制(例如細胞的固定)而檢測不到其結(jié)合。最后，另一個可能性是所述分析在該特定情況下對檢測足以介導(dǎo)細胞毒性作用的結(jié)合不是足夠的敏感。另一個例外是盡管7BD-33-11A對MB-468細胞的結(jié)合與同種型對照相比高出背景六倍，但該抗體對MB-468細胞的細胞毒性作用較弱。這提出了一種可能性，即結(jié)合不一定必然預(yù)測抗體與其相關(guān)抗原連接的結(jié)果。已知的非特異性細胞毒性物質(zhì)放線菌酮產(chǎn)生了預(yù)期的細胞毒性作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實施例2抗體制備通過在CL-1000瓶(BDBiosciences,Oakville,ON)中培養(yǎng)雜交瘤7BD-33-llA、1A245.6、11BD-2E11-2來制備單克隆抗體，每星期進行兩次收集和再接種。然后用蛋白G瓊脂糖4快流(ProteinGSepharose4FastFlow)(AmershamBiosciences,Baied'Ur伝，QC)進行標(biāo)準(zhǔn)的抗體純化操作。本發(fā)明的范圍包括利用人源化的、嵌合的或鼠單克隆抗體。在細胞毒性分析中，7BD-33-llA、1A245.6、11BD-2E11-2與許多陽性對照(抗Fas(EOS9.1，IgM，k,20孩i克/毫升，eBioscience,SanDiego,CA),抗-Her2/neu(IgGl，k，10孩i克/毫升，InterMedico,Markham,ON),抗-EGFR(C225,IgGl，k，5微克/毫升，Cedarlane,Homby，ON),放線菌酮(100微摩爾，Sigma,Oakville，ON)，NaN3(0.1%，Sigma，Oakville,ON))以及陰性對照(107.3(抗-TNP，IgGl，k，20微克/毫升,BDBiosciences,Oakville,ON),G155-178(抗-TNP,IgG2a，k，20孩吏克/毫升，BDBiosciences,Oakville,ON)，MPC-11(抗原特異性未知，IgG2b，k，20微克/毫升)，J606(抗-果聚糖，IgG3，k，20微克/毫升)，IgG緩沖液(2%》比較(表2)。檢測了乳腺癌(MB-231,MB-468,MCF-7)、結(jié)腸癌(HT-29，SW1116，SW620)、肺癌(NCIH460)、卵巢癌(OVCAR)、前列腺癌(PC-3)以及非-癌(CCD27sk，Hs888Lu)細胞系(所有這些細胞系都來自ATCC,Manassas,VA)?；?死細胞毒性檢測試劑盒購自MolecularProbes公司(Eugene,OR)。根據(jù)廠商的說明書并作下述的改動后進行分析。在4企測前細胞以預(yù)確定的合適密度鋪板。2天以后，將100微升純化抗體稀釋到培養(yǎng)基中，然后轉(zhuǎn)移入細胞板中，在8。/。C02的孵箱中孵育5天。然后倒空培養(yǎng)板并吸干。通過多通道塑料擠瓶，將含MgCl2和CaCl2的室溫DPBS分到每孔中，。P打三次，倒出液體并吸干。每孔加入50|il用含MgCl2和CaCl2的DPBS稀釋的熒光活/死染料，在37。C含5%C02的孵箱內(nèi)孵育30分鐘。該板置于Perkin-ElmerHTS7000熒光讀板儀內(nèi)讀數(shù)，數(shù)據(jù)用MicrosoftExcel進行分析，結(jié)果在表2中列出。數(shù)據(jù)表示為四次試驗的平均值，每次三個重復(fù)，并以如下方式定性四次試驗中四次高于閾細胞毒性(thresholdcytotoxicity)記為(+++),四次試驗中三次高于閾細胞毒性記為(++)，四次試驗中兩次高于閾細胞毒性記為(+)。表2中未標(biāo)記的細胞表示幾次結(jié)果不一致或低于閾細胞毒性的作用。抗體7BD-33-llA和1A245.6在乳腺以及前列腺腫瘤細胞系中顯示出選擇性的細胞毒性，而對非轉(zhuǎn)化的正常細胞沒有影響。兩種抗體都顯示出比陽性對照抗-Fas抗體高25至50%的殺傷作用。11BD-2E11-2在乳腺和卵巢癌細胞中具有特異的細胞毒性，并且對正常細胞沒有影響。化學(xué)細胞毒性試劑誘導(dǎo)了預(yù)期的細胞毒性，而用于對比的許多其他的抗體的表現(xiàn)也與預(yù)期相同，盡管生物的細胞分析有局限性?？傊?，三種抗體均顯示出對許多類型的癌細胞都有細胞毒性活性。由于并不是所有的癌細胞類型都是敏感的，抗體在其活性上有選擇性。此外，所述抗體顯示出功能性特異性，因為其在非-癌細胞類型中并沒產(chǎn)生細胞毒性，這在治療情況下是一個4艮重要的因素。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>用于FACS的細胞的制備如下首先用DPBS(無鈣離子和鎂離子)沖洗單層細胞，然后在37°C用細胞解離緩沖液(INVITROGEN)使細胞脫離培養(yǎng)板。離心之后，在4。C用含MgCl2、CaCl2以及25%胎牛血清的Dulbecco's磷酸鹽緩沖液(洗滌培養(yǎng)基)重懸細胞并計數(shù)，分至適當(dāng)?shù)募毎芏?，離心以沉淀細胞并重懸于含20微克/毫升7BD-33-llA、1A245.6、11BD-2E11-2或?qū)φ湛贵w(同種型對照或抗-EGFR)染色培養(yǎng)基(含MgCl2和CaCl2的DPBS)中，冰上放置30分鐘。加入AlexaFluor488-偶聯(lián)的二抗之前，用洗滌培養(yǎng)基洗細胞一次。加入溶于染色培養(yǎng)基的AlexaFluor488-偶聯(lián)的抗體，i文置20分鐘。用含1孩t克/mL硪化丙咬(propidiumiodide)的染色培養(yǎng)基最后洗一次細胞。通過在使用CellQuest軟件的FACScan(BDBiosciences)上運行樣品來評估流式細胞計數(shù)的細胞獲取結(jié)果。細胞的前向散射(FSC)和側(cè)向散射(SSC)通過調(diào)整FSC和SSC檢測器的電壓和振幅設(shè)定。三個熒光通道(FL1、FL2和FL3)的檢測器通過運行用純化的同種型對照抗體染色，繼而用AlexaFluor488-偶聯(lián)二抗染色的細胞來調(diào)整，以使細胞有一個統(tǒng)一的熒光強度大約l-5個單位的波峰。通過FSC設(shè)門和碘化丙咬排除來獲取活細胞。對于每一份樣品，獲取大約10,000個活細胞進行分析，結(jié)果列于表3中。表3列出高于同種型對照的平均熒光密度的倍增，并如下定性小于5為(-);5至50為(+);50至100為(++);高于100為(+++),括號中為染色細^^的百分比。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>7BD-33-11A抗體的代表性直方圖匯編至圖1，1A245.6抗體的代表性直方圖匯編至圖2，11BD-2Ell-2抗體的代表性直方圖匯編至圖3并顯示結(jié)合特征，在某些情況下包含示例的雙峰。11BD-2Ell-2呈現(xiàn)出對于乳腺腫瘤細胞系MDA-MB-231的特異性腫瘤結(jié)合。7BD-33-llA和1A245.6呈現(xiàn)對于乳腺(MDA-MB-231和MCF-7)、結(jié)腸、肺、卵巢和前列腺來源的癌細胞系具有類似的結(jié)合，但對一種乳腺癌細胞系(MDA-MB-468)的結(jié)合有所不同。這三種抗體全部都與非-癌細胞結(jié)合，但所述結(jié)合并不產(chǎn)生細胞毒性作用。這是結(jié)合并不必然地預(yù)示著抗體與其相關(guān)抗原連接的結(jié)果的進一步證據(jù)，并且是非顯而易見的發(fā)現(xiàn)。這表明在不同細胞中細胞毒性作用取決于抗體連接的情形，而并不僅僅取決于抗體結(jié)合。實施例3體內(nèi)試驗參見圖5和圖6顯示的數(shù)據(jù)，在四至八周齡的雌性SCID小鼠頸背部皮下注射100微升以植入五百萬個MDA-MB-231人乳腺癌細胞。小鼠被隨機分成四個處理組，每組10只。植入前一天，將30(H鼓升體積的測試抗體11BD2E-ll-2、7BD-33-llA、1A245.6或3BD-27同種型對照抗體(已知不與MDA-MB-231細胞結(jié)合)以20mg/kg的量經(jīng)腹腔給藥，所述液體由含2.7mMKC1，1mMKH2P04，137mMNaCl和20mMNa2HP04的稀釋液將儲存液稀釋后得到。所述抗體以同樣方式每周給藥一次，一共7周。大約每7天用測徑器測量肺瘤生長，觀察達10周，或直至動物個體達到加拿大動物保護協(xié)會(CCAC)的終點。在研究期間記錄動物的體重。研究結(jié)束時所有動物都根據(jù)CCAC的指導(dǎo)原則被施以安樂死。整個研究中沒有出現(xiàn)臨床毒性癥狀。每周一次測量的體重可以作為健康或發(fā)育停滯的替代指標(biāo)。在用同種型對照、3BD-27以及7BD-33-llA、1A245.6或11BD-2Ell-2治療的各組之間，在體重上有最小的差異。在第60天(停止治療后11天)，1A245.6治療組的肺瘤體積是對照組的5.2%(p=0.0002),表明抗體治療在降低胂瘤負荷方面的有效性。那些用7BD-33-llA抗體治療的致癌攜帶癌細胞的小鼠沒有得病，并且沒有肺瘤負荷。11BD-2E11-2治療組在第67天時肺瘤體積縮小(對照的45%)(p=0.08)。這也表明，細胞毒性抗體治療與對照抗體相比，能減小腫瘤負荷。用7BD-33-llA、1A245.6和11BD-2E11-2細胞毒性抗體治療還有相應(yīng)的存活益處(圖6)。用3BD-27抗體治療的對照組在移植后第74天達到100%的死亡率。相反，7BD-33-11A治療組沒有得病并且1A245.6治療的動物呈現(xiàn)100%的存活率，11BD-2Ell-2治療組存活率為24%?？傊?，相比對照抗體，細胞毒性抗體治療在公認的人類癌癥模型中使肺瘤負荷降低并增加了存活率，這表明這些抗體(7BD-33-llA、1A245.6和11BD-2E11-2)在用于包括人類在內(nèi)的其他哺乳動物的治療中具有藥理學(xué)和藥物學(xué)益處。實施例4體內(nèi)建立的肺瘤試驗將頸背部皮下注射的100微升中的五百萬個MDA-MB-231人乳腺癌細胞植入到五至六周齡的雌性SCID小鼠。每周用測徑器測量腫瘤生長。植入后第34天，當(dāng)該群小鼠的大多數(shù)的腫瘤體積達到100mmS(范圍從50至200mm"時，三個處理組的每組被隨機分入8-10只小鼠。將150微升的7BD-33-11A、1A245.6測試抗體或3BD-27同種型對照抗體(已知不結(jié)合MDA-MB-231細胞)以15mg/kg的量經(jīng)腹腔給藥，所述液體由含2.7mMKC1,1mMKH2P04,137mMNaCl和20mMNa2HP04的稀釋液將儲存液稀釋后得到。然后所述抗體以同樣方式給藥，每周三次，總共10次，直至植入后第56天。每7天用測徑器測量腫瘤生長，直至植入后第59天或直到動物個體達到加拿大動物保護協(xié)會(CCAC)的終點。在研究期間記錄動物的體重。研究結(jié)束時所有動物都根據(jù)CCAC的指導(dǎo)原則被施以安樂死。整個研究中沒有出現(xiàn)臨床毒性癥狀。每周測量一次體重。同種型對照和7BD-33-llA，或1A245.6抗體治療組之間在體重上沒有顯著差異。由圖4可以看出，才直入后第59天(治療結(jié)束后兩天)，7BD-33-llA治療組的肺瘤體積是對照組的29.5%(p=0.0003)。在該組，第59天的數(shù)值與第52天比較時，平均腫瘤體積還有衰退的趨勢(pi.25)。同樣，1A245.6抗體治療也顯著地抑制肺瘤生長，并降低腫瘤負荷。用這種抗體處理的攜帶建立的腫瘤的動物的肺瘤體積是用同種型對照抗體處理組的56.3%(p=0.017)。總之，相比對照抗體，7BD-33-llA或1A245.6抗體在公認的人類癌癥模型中顯著降低了建立的腫瘤的腫瘤負荷，表明了這些抗體在用于包括人類在內(nèi)的其他哺乳動物的治療中具有藥理學(xué)和藥物學(xué)益處。本說明書中提及的所有專利和公開出版物代表了本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員的水平。所有專利和公開出版物通過引用的方式并入本文，其S1用程度如同每個出版物被特別單獨地指明以引用的方式并入本文。應(yīng)該明白，盡管本發(fā)明以某種形式被說明，但這不是要將本發(fā)明限定在本文所描述和顯示的特定形式或布局。對本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見的是，在不偏離本發(fā)明的范圍的前提下還可以做出各種變化，且不應(yīng)當(dāng)認為本發(fā)明限于本說明書中顯示和描述的內(nèi)容。本領(lǐng)域的技術(shù)人員很容易看出使本發(fā)明較好地適合實現(xiàn)所描述的目的并獲得最終結(jié)果和益處，以及其中固有的部分。本文中描述的任一寡核苷酸、肽、多肽、生物相關(guān)化合物、方法、程序和技術(shù)都是優(yōu)選實施方案中有代表性的，其目的在于示例，并不是限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠想到包括在本發(fā)明精神的范疇內(nèi)的變化和其它用途，并由所附權(quán)利要求書的范圍所限定。盡管借助特定的優(yōu)選實施方案描述了本發(fā)明，但是應(yīng)理解所要求保護的本發(fā)明并不僅僅局限于這些特定的實施方案。事實上，所描述的實施本發(fā)明的方式的各種變化，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是顯而易見的，均在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。弗吉尼亞州20110-2209馬納薩斯大學(xué)路10801電話703-365-2700傳真703-365-2745為專利？呈序的微生物《呆藏耳JU尋國卩示7"p:i人的布達f風(fēng)其開條約國際表禾艮J居第7.3條發(fā)布的微生物《呆藏"i正明以及才-艮J居第10.2條發(fā)布的微生物存》'舌聲明(譯文)致(保藏人或代理人名稱及地址)AriusResearchInc.(阿里烏斯研究公司)代理人LisaCechetto55YorkStreet16thFloorToronto,OntarioCanadaM5J1R7(加拿大多倫多)代表AriusResearchInc.(阿里烏斯研究公司)而保藏保藏人標(biāo)識號專利保藏指定小鼠雜交瘤細胞系7BD-33-11APTA-4890所述保藏附有以下說明的_科學(xué)性描述_建議的分類描述。本國際保藏機構(gòu)T2003年1月8日收到所述保藏，并且所述保藏已被接受。應(yīng)您的要求L我們旌向您通知30年內(nèi)對所述菌種的請求。如果布達佩斯條約成員國專利局證明某人有權(quán)收到該菌種，或者如果已出版引用該菌種的美國專利，且美國專利與商標(biāo)局或本保藏人指示ATCC釋放該菌種，那么將可獲得該菌種。如果該培養(yǎng)物在所述保藏的有效期內(nèi)死亡或被破壞，那么您將負有用相同的活培養(yǎng)物代替它的責(zé)任。在自保藏日起至少30年內(nèi)，或者在最近的樣品請求之后5年內(nèi)，該菌種將被維持，所述時間以較長者為準(zhǔn)。美國和其他很多國家都是布達佩斯條約成員國。于2003年1月19日檢測以上所引用培養(yǎng)物的存活。在當(dāng)天，所述培養(yǎng)物是存活的。國際保藏機構(gòu)AmericanTypeCultureCollection(美國典型培養(yǎng)物保藏中心)，Manassas,VA20110-2209USA(美國弗吉尼亞)ATCC授權(quán)代表簽字_日期2003年2月11日FerrisLander先生巻號2056.018弗吉尼亞州20110-2209馬納薩斯大學(xué)路10801電話703-365-2700傳真703-365-2745為專利，呈序的微生物《呆藏耳又:得國際7"rv:i人的布達f風(fēng)其/f條約國際表才、艮J居第7.3條發(fā)布的微生物^f呆藏i正明以及才、艮J居第10.2條發(fā)布的^散生物存^舌聲明(譯文)致(保藏人或代理人名稱及地址)AriusResearchInc.(阿里烏斯研究公司)代理人IisaCechetto55YorkStreet,16thFloorToronto,ONM5J1R7(加拿大多倫多)代表AriusResearchInc.(阿里烏斯研究公司)而保藏保藏人標(biāo)識號專利保藏指定小鼠雜交瘤細胞系1A245.6PTA-4889所述保藏附有以下說明的_科學(xué)性描述_建議的分類描述。本國際保藏機構(gòu)于2003年1月8日收到所述保藏，并且所述保藏已被接受。應(yīng)您的要求2￡_我們旌向您通知30年內(nèi)對所述菌種的請求。如果布達佩斯條約成員國專利局證明某人有權(quán)收到該菌種，或者如果已出版引用該菌種的美國專利，且美國專利與商標(biāo)局或本保藏人指示ATCC釋放該菌種，那么將可獲得該菌種。如果該培養(yǎng)物在所述保藏的有效期內(nèi)死亡或被破壞，那么您將負有用相同的活培養(yǎng)物代替它的責(zé)任。在自保藏日起至少30年內(nèi)，或者在最近的樣品請求之后5年內(nèi)，該菌種將被維持，所述時間以較長者為準(zhǔn)。美國和其他很多國家都是布達佩斯條約成員國。于2003年1月27日檢測以上所引用培養(yǎng)物的存活。在當(dāng)天，所述培養(yǎng)物是存活的。國際保藏機構(gòu)AmericanTypeCultureCollection(美國典型培養(yǎng)物保藏中心)，Manassas,VA20110-2209USA(美國弗吉尼亞)ATCC授權(quán)代表簽字_曰期2003年2月11日FerrisLander先生巻號2056.018權(quán)利要求1.單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體，其特征在于具有競爭性抑制分離的單克隆抗體與其靶抗原結(jié)合的能力，所述分離的單克隆抗體由以PTA-4890保藏于ATCC的克隆編碼。2.由權(quán)利要求1所述的抗體或配體，其是人源化的。3.由權(quán)利要求1所述的抗體或配體，其是嵌合的。4.引發(fā)抗體誘導(dǎo)的選自人乳腺或前列腺腫瘤的組織樣本中癌細胞的細胞毒性作用的方法，所述方法包括提供如權(quán)利要求1、2或3中的任一項所述的單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體，以及將所述單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體與所述組織樣本接觸。5.如權(quán)利要求1、2或3中的任一項所述的單克隆抗體或配體，其與選自細胞毒性部分、酶、放射活性化合物和造血細胞的成員偶聯(lián)。6.治療哺乳動物中對于抗體誘導(dǎo)的細胞毒性作用敏感的人類乳腺和前列腺肺瘤的方法，其中所述人類乳腺腫瘤和前列腺肺瘤表達與由保藏在ATCC、保藏號為PTA-4890的克隆編碼的分離的單克隆抗體或其誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體特異性結(jié)合的抗原，所述方法包括以有效誘導(dǎo)細胞毒性作用的量給予所述哺乳動物權(quán)利要求1或2或3中的任一項所述的單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體，從而降低所述哺乳動物的肺瘤負荷。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述單克隆抗體或配體與細胞毒性部分偶聯(lián)。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述細胞毒性部分是放射性同位素。9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述單克隆抗體或配體激活補體。10.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述單克隆抗體或配體介導(dǎo)抗體依賴的細胞毒性作用。11.單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體，其特征在于具有竟?fàn)幮砸种品蛛x的單克隆抗體與其靶抗原結(jié)合的能力，所述分離的單克隆抗體由以PTA-4889保藏于ATCC的克隆編碼。12.如權(quán)利要求11所述的抗體或配體，其是人源化的。13.如權(quán)利要求11所述的抗體或配體，其是嵌合的。14.引發(fā)抗體誘導(dǎo)的選自人類乳腺或前列腺腫瘤的組織樣本中癌細胞的細胞毒性作用的方法，所述方法包括提供如權(quán)利要求11、12或13中的任一項所述的單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體，以及將所述單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體與所述組織樣本接觸。15.如權(quán)利要求11、12或13中的任一項所述的單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體，其與選自細胞毒性部分、酶、放射活性化合物和造血細胞的成員偶聯(lián)。16.治療哺乳動物中對于抗體誘導(dǎo)的細胞毒性作用敏感的人類乳腺和前列腺肺瘤的方法，其中所述人類乳腺和前列腺腫瘤表達與由保藏在ATCC、保藏號為PTA-4889的克隆編碼的分離的單克隆抗體或其誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體特異性結(jié)合的抗原，所述方法包括以有效誘導(dǎo)細胞毒性作用的量給予所述哺乳動物如權(quán)利要求ll或12或13中的任一項所述的單克隆抗體或誘導(dǎo)細胞毒性作用的配體，從而降低所述哺乳動物的胂瘤負荷。17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述單克隆抗體或配體與細胞毒性部分偶聯(lián)。18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述細胞毒性部分是放射性同位素。19.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述單克隆抗體或配體激活補體。20.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述單克隆抗體或配體介導(dǎo)抗體依賴的細胞毒性作用。全文摘要本發(fā)明涉及一種使用新型篩選模式制備患者癌性疾病調(diào)節(jié)抗體的方法。該方法利用癌細胞的細胞毒性作用作為指標(biāo)來分離抗癌抗體，使制備諸如以保藏號PTA-4890和PTA-4899保藏在ATCC的雜交瘤所產(chǎn)生的抗體的抗癌抗體成為可能。所述抗體可以用于輔助癌癥分期和診斷，還可以用于治療原發(fā)性腫瘤，例如前列腺癌或乳腺癌，以及治療腫瘤轉(zhuǎn)移。所述抗癌抗體能夠與毒素、酶、放射性化合物和造血細胞偶聯(lián)。文檔編號C07K16/30GK101437851SQ200780015795公開日2009年5月20日申請日期2007年3月5日優(yōu)先權(quán)日2006年3月7日發(fā)明者大衛(wèi)·S·F·楊,海倫·P·芬德利,蘇姍·E·哈恩申請人:阿里烏斯研究公司