專利名稱：：模擬移動(dòng)床色譜拆分20(S)和20(R)-人參皂苷Rg3對映體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及受性藥物的拆分技術(shù)，特別地，涉及拆分20(S)-和20(R)-人參皂苷Rg3對映體的模擬移動(dòng)床色譜分離方法。技術(shù)背景20(S)-人參皂苷Rg3其化學(xué)名稱分別為3-0-[e-D-吡喃葡萄糖基-(1-2)-e-D-吡喃葡萄糖基]-達(dá)瑪-24-烯-,12e，20(S)-三醇。20(R)-人參皂苷Rg3化學(xué)名稱分別為3-0-[e-D-吡喃葡萄糖基-(1-2)-e-D-吡喃葡萄糖基]-達(dá)瑪-24-烯-30，12e，20(R)-三醇。二者為對映體，生物活性實(shí)驗(yàn)表明均具有較強(qiáng)的抗癌活性，其中20(R)-人參皂苷Rg3已經(jīng)開發(fā)上市，藥品名稱為"參一膠囊"，由吉林亞泰醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。20(R)-人參皂苷Rg3抗癌機(jī)理主要是抑制腫瘤新生血管生成和抑制腫瘤細(xì)胞的黏附作用，深受廣大患者的青睞。而20(S)-人參皂苷Rg3也正在進(jìn)行II期臨床研究階段，而且發(fā)現(xiàn)其具有抗病毒活性。因此拆分二者是十分有意義的。鞍山科技大學(xué)專利卡波前列素甲酯模擬移動(dòng)床色譜分離方法。申請?zhí)?00110348.2本發(fā)明公開了一種卡波前列素甲酯的模擬移動(dòng)床色譜分離方法，解決了批處理方法存在的溶媒、填料消耗量大、純度受到限制等問題。而且改善了操作環(huán)境，提高了生產(chǎn)自動(dòng)化水平。本發(fā)明的特征是采用模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)，填料為反相硅膠，以甲醇、水的混合液為流動(dòng)相。原料經(jīng)去雜預(yù)處理，進(jìn)入模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)。模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)出來的產(chǎn)品經(jīng)過濃縮、重結(jié)晶等處理得到純度為90%以上的合格產(chǎn)品。鞍山科技大學(xué)專利用模擬移動(dòng)床色譜分離提取替考拉寧的方法。申請?zhí)?2132707.3，本發(fā)明采用模擬移動(dòng)床色譜(簡稱SMBC)系統(tǒng)，取代現(xiàn)有的活性炭法精提方法。本發(fā)明與目前精提替考拉寧的活性炭法比較，效價(jià)由原來的829提高到900以上，純度由95%提高到97%，收率由35%提高到70%。另外模擬移動(dòng)床過程是連續(xù)過程，活性炭方法是間歇的，因此模擬移動(dòng)床技術(shù)的引入提高了生產(chǎn)的自動(dòng)化水平，生產(chǎn)效率，并使生產(chǎn)環(huán)境得到極大的改善。目前未見到有關(guān)模擬移動(dòng)床色譜拆分20(S)和20(R)-人參皂苷Rg3對映體的報(bào)道，屬首次發(fā)現(xiàn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種利用模擬移動(dòng)床色譜拆分20(S)和20(R)-人參皂苷Rg3對映體的技術(shù)方法。本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的采用的技術(shù)方案如下一種人參皂苷Rg3對映體的模擬移動(dòng)床色譜分離方法，其特征在于，用含有十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑作固定相，用甲醇和水的混合物作流動(dòng)相，用模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)將20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3的混合物分開。進(jìn)一步地，包括以下步驟(1)將20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3的混合物溶于流動(dòng)相，濃度為lmg/mL200mg/mL。(2)從模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)中分出20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3溶液。(3)分別濃縮、重結(jié)晶、過濾、干燥得到純度高于90%的20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明用模擬移動(dòng)床色譜，將20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3對映體分開，純度達(dá)到90%以上。工藝簡單，生產(chǎn)可工業(yè)化，產(chǎn)品穩(wěn)定。流動(dòng)相可回收，降低成本、減少污染，真正實(shí)現(xiàn)了清潔生產(chǎn)。具體實(shí)施方式本發(fā)明可通過下面的實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說明。1.采用模擬移動(dòng)床色譜(簡稱SMBC)系統(tǒng)，該系統(tǒng)是眾所周至的。樣品溶液和洗脫液分別從樣品入口與洗脫液入口注入色譜系統(tǒng)，20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3對映體分別從萃余液和萃取液兩個(gè)出口流出系統(tǒng)，操作溫度206(TC。最佳的操作溫度為25"C。2.色譜柱填料以及流動(dòng)相選擇填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，采用公知的方法制備，填料粒經(jīng)2060um，粒經(jīng)越小，分離效果越好。最佳粒經(jīng)為4045Pm。流動(dòng)相為甲醇和水，體積比為3070:7030。最佳體積比為83:17。3.分離步驟20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3混合物溶于流動(dòng)相，濃度為lmg/mL200mg/mL。進(jìn)樣濃度增加有利于提高產(chǎn)率，但其濃度受人參皂苷Rg3溶解度的限制。色譜系統(tǒng)由424根制備柱組成，柱子越多，分離效果越好，但系統(tǒng)的非線性成度越高，最佳柱子數(shù)目為48個(gè)。樣品溶液和洗脫液分別從樣品入口與洗脫液入口注入色譜系統(tǒng)，經(jīng)過SMBC分離，從萃取液出口可獲得高純度的20(R)-人參皂苷Rg3溶液，從萃余液出口則獲得得高純度的20(S)-人參皂苷Rg3溶液。分別經(jīng)濃縮、重結(jié)晶、過濾、干燥等得到20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3純品。4.純品檢驗(yàn)流動(dòng)相甲醇水(83:17)流速lml/min色譜柱4.6X250mm，5um，C18填料檢測器SPD-10AVP(日本)紫外檢測器檢測波長為203nm下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明1.流動(dòng)相的選擇流動(dòng)相中，甲醇和水的含量對分離20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3影響很大，進(jìn)而影響模擬移動(dòng)床色譜的分離效果。首先用分析色譜柱(4.6X250mm)選擇流動(dòng)相。如表1，20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3分離度隨著甲醇含量的減少而增加，但是保留時(shí)間明顯增加，同時(shí)系統(tǒng)的柱壓也明顯增加。表1流動(dòng)相的選擇<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.SMBC分離以下列出兩個(gè)分離實(shí)例。分離實(shí)例1a.操作條件運(yùn)行模式1-4-3(8個(gè)色譜柱)流動(dòng)相甲醇/水(70/30)進(jìn)樣濃度人參皂苷Rg3混合物濃度20mg/ml進(jìn)樣液流速UF=4ml/min洗脫液流速UE二40ml/min萃余液流速20ml/min萃取液流速24ml/min切換時(shí)間350S柱溫20°Cb.成品分析用十八烷基硅垸鍵合硅膠柱分析萃余液和萃取液組成。萃余液中20(R)-人參皂苷Rg3純度為92.5%;萃取液中20(S)-人參皂苷Rg3純度為90.3%。分離實(shí)例2c.操作條件運(yùn)行模式1-4-3(8個(gè)色譜柱)流動(dòng)相甲醇/水(30/70)進(jìn)樣濃度人參皂苷Rg3混合物濃度10mg/ml進(jìn)樣液流速Ue5ml/min洗脫液流速UE=50ml/min萃余液流速30ml/min萃取液流速25ml/min切換時(shí)間360S柱溫60°Cd.成品分析用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱分析萃余液和萃取液組成。萃余液中20(R)-人參皂苷Rg3純度為93.5%;萃取液中20(S)-人參皂苷Rg3純度為91.8%。分離實(shí)例3e.操作條件運(yùn)行模式1-4-3(8個(gè)色譜柱)流動(dòng)相甲醇/水(50/50)進(jìn)樣濃度人參皂苷Rg3混合物濃度15mg/ml進(jìn)樣液流速UF=6ml/min洗脫液流速UE=49ml/min萃余液流速30mlZmin萃取液流速25ml/min切換時(shí)間360S柱溫4CTCf.成品分析用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱分析萃余液和萃取液組成。萃余液中20(R)-人參皂苷Rg3純度為92.5%;萃取液中20(S)-人參皂苷Rg3純度為93.8%。權(quán)利要求1.一種人參皂苷Rg3對映體的模擬移動(dòng)床色譜分離方法，其特征在于，用含有十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑作固定相，用甲醇和水的混合物作流動(dòng)相，用模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)將20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3的混合物分開。2.根據(jù)權(quán)利要求1的所述的人參皂苷Rg3對映體的模擬移動(dòng)床色譜分離方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3的混合物溶于流動(dòng)相，濃度為lmg/mL200mg/mL。(2)從模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)中分出20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3溶液。(3)分別濃縮、重結(jié)晶、過濾、干燥得到純度高于90%的20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3。3.根據(jù)權(quán)利要求1的所述的人參皂苷Rg3對映體的模擬移動(dòng)床色譜分離方法，其特征在于，所述流動(dòng)項(xiàng)中甲醇和水的體積比為3070:7030。4.根據(jù)權(quán)利要求1的所述的人參皂苷Rg3對映體的模擬移動(dòng)床色譜分離方法，其特征在于，所述模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)的溫度為206(TC。最佳的操作溫度為25°C。全文摘要本發(fā)明公開了一種人參皂苷Rg3對映體的模擬移動(dòng)床色譜分離方法，本發(fā)明采用模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)，采用含十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)固定相，流動(dòng)相采用甲醇、水的混合物，從20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3的混合物中分離出高純度的20(R)-人參皂苷Rg3和20(S)-人參皂苷Rg3。由于模擬移動(dòng)床色譜分離為連續(xù)過程，因此本方法的生產(chǎn)自動(dòng)化程度高，生產(chǎn)效率高，溶劑可以回收利用，整個(gè)分離過程不接觸有毒溶劑。文檔編號(hào)C07B57/00GK101230080SQ200710055249公開日2008年7月30日申請日期2007年1月22日優(yōu)先權(quán)日2007年1月22日發(fā)明者劉金平,丹盧,盧愛萍,李平亞,杜秀娟申請人:李平亞