專利名稱：使用載鋅蛋白質(zhì)片段治療或預(yù)防超重或肥胖的組合物和方法
使用載鋅蛋白質(zhì)片段治療或預(yù)防超重或肥胖的組合物和方法本申請是2005年12月22日提交的美國申請11/315,810號(hào)的部分繼續(xù) 申請，后者是2005年4月26日提交的美國申請11/114,792號(hào)的部分繼續(xù) 申請。本申請要求上述每個(gè)申請的優(yōu)先權(quán)，本申請包括上述每個(gè)申請的全 部內(nèi)容以供參考。1. 發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防肥胖或超重的組合物和方法。具體地，本 發(fā)明公開了制備載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的源自例如血清或乳的蛋白質(zhì)混合 物并向患者施用該混合物的方法。2. 發(fā)明背景肥胖是嚴(yán)重的健康流行病。根據(jù)疾病控制和預(yù)防中心(CDC)和國家健康 與營養(yǎng)檢查調(diào)查(NHANES)1999-2000，估計(jì)有64%的美國成年人是超重或 肥胖的(超重指體表指數(shù)(BMI)為25或更大，肥胖指BMI為30或更大)，且 該數(shù)字還在增大。在過去15年中，肥胖在成年人中的流行率增加超過30%。 甚至更令人吃驚的是，在過去二十年中，兒童和青少年的肥胖流行率增加 了 100%。超重和肥胖個(gè)體患身體疾病如高血液壓力、高血壓、高血液膽固 醇水平、糖尿病、胰島素抗性、葡萄糖不耐受、冠心病和甚至心理障礙如 抑郁和進(jìn)食障礙的危險(xiǎn)增加(National Institutes of Health: Clinical Guidelineson the Identification, Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults, 1998， Bethesda, Maryland: Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, National Heart, Lung, and Blood Institute; Mokdad等，2001, JAMA 289:76-79)。當(dāng)人變得肥胖時(shí)，他們體內(nèi)的脂肪細(xì)胞(adipocyte)會(huì)發(fā)生兩種情況這 些細(xì)胞的體積和數(shù)目兩者都會(huì)增加。人體內(nèi)的脂肪細(xì)胞數(shù)目只有在人獲得 大量體重時(shí)才會(huì)增加。人體重的較小波動(dòng)通常伴隨脂肪細(xì)胞平均尺寸的逐 步增加或降低。然而，存在脂肪細(xì)胞可以生長的最大尺寸。隨著體重明顯 增加，由成纖維細(xì)胞產(chǎn)生新的脂肪細(xì)胞。不幸的是，當(dāng)人通過節(jié)食失去大 量體重時(shí)，脂肪細(xì)胞只會(huì)收縮尺寸，其數(shù)目卻不會(huì)必然減少。脂肪細(xì)胞數(shù) 目在體重減少的人體內(nèi)保持相同，這個(gè)事實(shí)解釋了為什么體重減少和保持 所獲得的體重減少如此困難。通過減少脂肪細(xì)胞的數(shù)目可以更有效地達(dá)到 這些目標(biāo)。目前的抗肥胖治療集中在通過藥物抑制食欲、限制食物攝入，或者在 最激進(jìn)方法中使用體重減少手術(shù)。流行的食欲抑制藥可以分成兩類影響 腦食欲中樞的去甲腎上腺素能藥如苯丙醇胺(Acutrim, Dexatrim)，和影響腦 飽中樞的血清素能藥如芬氟拉明和右芬氟拉明(Williamson, 1999, JAMA 281:278-279)。然而，研究已經(jīng)顯示，進(jìn)食行為的神經(jīng)生理學(xué)極為復(fù)雜，這 使得食欲抑制難以實(shí)現(xiàn)。同時(shí)，芬氟拉明及其衍生物伴有極為有害的副作 用，這迫使禁用這些物質(zhì)。試圖限制食物攝入的患者通常難以完成體重減 少程序，并且在他們返回舊進(jìn)食習(xí)慣時(shí)傾向于恢復(fù)原狀。過多的食物迅速 轉(zhuǎn)化為補(bǔ)充由于體重減少而收縮的脂肪細(xì)胞的脂肪。通過手術(shù)減少胃的尺 寸會(huì)明顯限制食物攝入。然而，這樣的手術(shù)具有其自身的副作用，只推薦給嚴(yán)重肥胖的個(gè)體。在脂肪抽吸術(shù)程序中，只能從某些身體部分中除去脂 肪。結(jié)果是，留在其它位置如頸和前臂中的脂肪細(xì)胞會(huì)升高失調(diào)的脂肪量， 從而產(chǎn)生難看的外表。因此希望提供將通過減少脂肪細(xì)胞的數(shù)目起作用的非侵入式體重減少 療法。如果可以耙向全身的脂肪細(xì)胞(而不是只在有限的區(qū)域內(nèi))，則將是尤 其有益的。3.發(fā)明概述本發(fā)明部分基于發(fā)現(xiàn)了可用于減少體重增加，甚至可使有需要的個(gè)體 體重減少的組合物和方法。不受任何發(fā)明范圍的限制，相信本發(fā)明的組合 物和方法可以誘導(dǎo)個(gè)體中的脂肪細(xì)胞的凋亡。不受任何發(fā)明范圍的限制， 還相信本發(fā)明的組合物和方法可以調(diào)節(jié)個(gè)體中的胰島素受體活性。下面的 實(shí)例證明了本發(fā)明的組合物和方法可有效地減少人個(gè)體的體重。在一方面，本發(fā)明提供了可用于本文所述方法的組合物。在某些實(shí)施 方案中，所述組合物是藥物單位劑量的形式。在某些實(shí)施方案中，所述組 合物是營養(yǎng)制品單位劑量的形式。在某些實(shí)施方案中，所述組合物是膳食 補(bǔ)充劑、食品添加劑或食品組合物的形式。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的 組合物包含載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳蛋白。在某些實(shí)施方案 中，所迷蛋白酶是木瓜蛋白酶。在某些實(shí)施方案中，所述血清蛋白或乳蛋 白選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)軼蛋 白和a-月臺(tái)蛋白。在另一方面，本發(fā)明提供了用本發(fā)明的一種或多種組合物治療個(gè)體的 方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防肥胖的方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防超重的方法。在某些實(shí)施方案中， 本發(fā)明提供了減少體重增加的方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了誘 導(dǎo)體重減少的方法。所述方法包括向個(gè)體施用有效量的本發(fā)明組合物的步 驟。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防人超重或肥胖的方法。在另 一方面，本發(fā)明提供了使用本文所述的組合物誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡 的方法。所述方法包括使脂肪細(xì)胞與本發(fā)明的組合物接觸的步驟。所述細(xì) 胞可以是任何脂肪細(xì)胞，包括體內(nèi)、體外或離體脂肪細(xì)胞。在某些實(shí)施方 案中，所述脂肪細(xì)胞處于個(gè)體體內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，所述脂肪細(xì)胞處 于人體內(nèi)。在還一方面，本發(fā)明提供了用于治療肥胖的方法和組合物，它們可通 過凋亡直接減少脂肪細(xì)胞的數(shù)目。該方法不同于減少體重的常規(guī)方法，所 述常規(guī)方法包括抑制食欲、限制食品攝入或從身體的單個(gè)區(qū)域中除去脂肪 細(xì)胞。本發(fā)明的組合物包含經(jīng)蛋白酶消化的載鋅蛋白片段，它們可有效地 治療或預(yù)防有需要的個(gè)體的肥胖或超重。在另一方面，本文提供了制備本發(fā)明組合物的方法。4.附圖簡述

圖1是在施用本發(fā)明的組合物后小鼠的體重增加穩(wěn)定化； 圖2是人個(gè)體每天兩次(3 mg/kg體重)服用本發(fā)明的組合物十天后的體 重減少；圖3是本發(fā)明組合物對胰島素受體活性的抑制； 圖4A是用20磺/ml本發(fā)明組合物治療的脂肪細(xì)胞； 圖4B是用2磺/ml本發(fā)明組合物治療的脂肪細(xì)胞；圖5是用本發(fā)明組合物治療的肥胖小鼠相對于對照的體重增加減少； 圖6是在用本發(fā)明組合物治療時(shí)和治療后一些天后肥胖小鼠的休重增 力口減少；圖7是用本發(fā)明組合物口服治療的大鼠的體重減少；圖8是用本發(fā)明組合物治療的大鼠肝(脂肪肝)內(nèi)油滴減少；圖9是在總計(jì)60天試驗(yàn)中的人體重減少；圖10是人體重減少作為劑量的函數(shù)；圖11是一個(gè)月內(nèi)的人體重減少；圖12是六名人個(gè)體的體重減少；圖13A-C是施用本發(fā)明組合物的人個(gè)體的血液葡萄糖減少。 5.發(fā)明詳述本專利申請描述了新組合物及其制備方法以及治療或預(yù)防肥胖和超重 的方法。尤其是，所述組合物包含源自例如血清或乳的載鋅蛋白質(zhì)及其蛋 白水解片段。5.1定義在用于本文時(shí)，除非另有說明，術(shù)語"蛋白質(zhì)"指包括一個(gè)或多個(gè)多 肽鏈的分子或其片段。由于可以用例如一個(gè)或多個(gè)糖或寡糖修飾多肽鏈， 所以術(shù)語"蛋白質(zhì)"明確包括糖蛋白。除非另有說明，術(shù)語"蛋白質(zhì)"沒 有大小限制。具體地，該術(shù)語包括來自例如血清或乳的經(jīng)蛋白酶消化的蛋 白質(zhì)片段，包括糖蛋白。用于消化的優(yōu)選蛋白酶包括木瓜蛋白酶。在用于本文時(shí)，除非另有說明，術(shù)語"治療"指減輕或減少與被治療疾病或病癥相關(guān)的癥狀的嚴(yán)重性。例如，術(shù)語"治療肥胖"和"治療超重" 指減輕與肥胖或超重相關(guān)的一種或多種癥狀。在用于本文時(shí)，除非另有說明，術(shù)語"控制"指保持與被控制疾病或 病癥相關(guān)的癥狀的嚴(yán)重性降低或避免與^皮控制疾病或病癥相關(guān)的癥狀。在用于本文時(shí)，除非另有說明，術(shù)語"預(yù)防"指減少獲得被預(yù)防疾病 或病癥或其癥狀的危險(xiǎn)或延遲其發(fā)生。例如，術(shù)語"預(yù)防肥胖"和"預(yù)防 超重"指減少與肥胖或超重相關(guān)的一種或多種癥狀的危險(xiǎn)或延遲其發(fā)生。用于本文時(shí)，"個(gè)體"是動(dòng)物，通常為人。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述個(gè) 體是人，例如患者。在用于本文時(shí)，除非另有說明，術(shù)語化合物的"治療有效的量"和"有 效的量"指該量足夠在疾病的治療、預(yù)防和/或控制中提供治療益處，以延 遲與待治療疾病或病癥相關(guān)的一種或多種癥狀或使其最小化。術(shù)語"治療 有效的量"和"有效的量"可以包括可改善總體治療、減少或避免疾病或 病癥的癥狀或原因、或提高另 一種治療藥的治療效果的量。術(shù)語"共同施用"和"聯(lián)合施用"包括同時(shí)、并行或按順序施用兩種 治療藥，而沒有具體時(shí)間限制。在一個(gè)實(shí)施方案中，兩種藥物同時(shí)出現(xiàn)在 個(gè)體體內(nèi)，或者同時(shí)發(fā)揮它們的生物學(xué)或治療效果。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述兩種治療藥處于相同的組合物或單位劑型中。在另 一個(gè)實(shí)施方案中， 所述兩種治療藥處于獨(dú)立的組合物或單位劑型中。術(shù)語"膳食補(bǔ)充劑"指按照1994年膳食補(bǔ)充健康和教育法案第3部分， Public Law 103-417， 1994年10月25日被定義為膳食補(bǔ)充劑的物質(zhì)。膳食 補(bǔ)充劑是口服產(chǎn)品，其中包含用于補(bǔ)充飲食的"膳食成分"。"膳食成分" 包括本發(fā)明的載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的組合物和任選的一種或多種其它膳食成分，例如維生素、礦物質(zhì)、草藥或其它藥用植物、氨基酸和物質(zhì)如酶、 器官組織、腺體和代謝物。膳食補(bǔ)充劑還可以是提取物或濃縮物，并且可 以在許多形式如片劑、膠囊、軟膠囊、軟明膠膠囊、液體或粉末中找到。5.2發(fā)明實(shí)施方案本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防肥胖或超重的組合物和方法。在某些實(shí)施 方案中，所述組合物和方法可以通過凋亡減少個(gè)體體內(nèi)的脂肪細(xì)胞數(shù)目。 該方法不同于減少體重的常規(guī)方法，包括抑制食欲、限制食物攝入或從身 體單個(gè)區(qū)域內(nèi)除去脂肪細(xì)胞。凋亡是基因指導(dǎo)的細(xì)胞主動(dòng)自毀滅過程，也稱為"程序性細(xì)胞死亡"。 該過程的標(biāo)志是細(xì)胞收縮、細(xì)胞膜變化和DNA斷裂。因此程序性細(xì)胞死亡 不同于由細(xì)胞損傷引起的死亡，由細(xì)胞損傷引起的死亡被稱為壞死。以前已經(jīng)顯示胎兒血清對各種癌癥細(xì)胞以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤具有蛋白酶 敏感性凋亡誘導(dǎo)活性。同時(shí)，從血清中分離出了鋅結(jié)合蛋白，稱為胎球蛋 白或a-2-HS-糖蛋白(AHSG)。純化的胎球蛋白可以誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞凋亡。通 過用鋅裝載胎球蛋白可極大地增強(qiáng)這種凋亡活性。此外，還顯示消化載鋅 胎球蛋白所產(chǎn)生的肽片段混合物也可誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞凋亡(Yu， CL和Tsai， M.H., (2001) Cancer Letters 166:173-184; Yu， CL和Tsai, M.H.， (2001) Anticancer Research 21:1839-1856)。除了胎球蛋白外，胎兒和成年動(dòng)物(牛、羊、小鼠和大鼠)以及人血清還 包含其它鋅結(jié)合蛋白，包括a-l-酸糖蛋白(AAG)、 a-l-抗胰蛋白酶(AAT)。 現(xiàn)在公開這些蛋白當(dāng)用裝載鋅時(shí)，這些蛋白質(zhì)(胎球蛋白、AAG和AAT) 具有對3T3-L1小鼠脂肪細(xì)胞系的凋亡誘導(dǎo)活性。此外，通過蛋白酶消化這些蛋白質(zhì)獲得的片段也可誘導(dǎo)3T3-L1小鼠脂肪細(xì)胞系的凋亡。相反，如果 不裝栽鋅，則在相同條件下，無論蛋白質(zhì)還是片段均不能誘導(dǎo)凋亡。盡管 不希望受任何具體運(yùn)行理論的限制，相信載鋅部分地是本方法組合物的治 療活性的基礎(chǔ)。如下面部分中所述，載鋅所得的組合物具有與例如天然血 清蛋白或乳蛋白完全不同的結(jié)合鋅?，F(xiàn)在進(jìn)一步公開，除了血清外，抗肥胖蛋白質(zhì)片段可以源自乳。當(dāng)用 鋅和蛋白酶處理全乳以獲得載鋅時(shí)，蛋白酶會(huì)消化乳蛋白。所得載鋅的、 經(jīng)蛋白酶消化的乳蛋白也可誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞系的凋亡。為了測試體內(nèi)抗肥胖性質(zhì)，將從蛋白酶消化載鋅AAG所得的片段靜脈 內(nèi)施用至實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。盡管以特定的高脂肪飲食哏養(yǎng)，但所述動(dòng)物的體重并 未增加，也沒有遭受有害副作用。為了進(jìn)一步測試抗肥胖性質(zhì)，將AAG片 段每天兩次給人個(gè)體口服。在十天后，人個(gè)體的體重減少了 4.4磅。5.3組合物及其制備本文提供了可以用于在有需要的個(gè)體中治療或預(yù)防肥胖或超重的組合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含有效量的用于本發(fā)明方法的 載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述量 可有效地治療肥胖。在某些實(shí)施方案中，所述量可有效地治療超重。在某 些實(shí)施方案中，所述量可有效地預(yù)防肥胖。在某些實(shí)施方案中，所述量可 有效地預(yù)防超重。在某些實(shí)施方案中，所述量可有效地減少個(gè)體體重增加。 在某些實(shí)施方案中，所述量可有效地誘導(dǎo)個(gè)體體重減少。在某些實(shí)施方案 中，所述量可有效地誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡。在某些實(shí)施方案中，所述量可有效地調(diào)節(jié)胰島素受體活性。所述蛋白質(zhì)可以來自本領(lǐng)城技術(shù)人員明知的任何來源。在某些實(shí)施方 案中，從血清中分離所述蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，從乳中分離所述蛋 白質(zhì)。所述血清或乳可以來自動(dòng)物，例如牛、羊、小鼠、大鼠或人。所述 血清可以是成年或胎兒血清?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員明知的任何技術(shù)獲 得和/或制備所述乳或血清。在某些實(shí)施方案中，可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)，從重組來 源制備和分離所述蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員 已知的合成或半合成技術(shù)制備所述蛋白質(zhì)。所述乳或血清蛋白可以是對本文所述方法有效的任何乳或血清蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述血清蛋白或乳蛋白選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸 糖蛋白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述血 清蛋白或乳蛋白是a-2-HS-糖蛋白。在某些實(shí)施方案中，所迷血清蛋白或乳 蛋白是a-l-酸糖蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述血清蛋白或乳蛋白是a-l-抗胰蛋白酶。在某些實(shí)施方案中，所述血清蛋白或乳蛋白是白蛋白。在某 些實(shí)施方案中，所述血清蛋白或乳蛋白是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋 白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白的多種血清蛋白或乳蛋 白。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋 白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白的兩種血清蛋白或乳蛋 白。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋 白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白的三種血清蛋白或乳蛋 白。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白的四種血清蛋白或乳蛋 白。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋 白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白的五種血清蛋白或乳蛋白。在本發(fā)明的組合物中，所述血清蛋白或乳蛋白是載鋅的(zinc-charged)。 如下所述，載鋅所得的組合物具有與天然血清或乳可能包含的痕量鋅完全 不同的結(jié)合鋅?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員明知的任何技術(shù)為所述血清蛋白 或乳蛋白裝載鋅。示例技術(shù)描述于例如美國專利5，994，298號(hào)、6，258，779號(hào)、 6,720,311號(hào)和6，737,402號(hào)，這些文獻(xiàn)的全部內(nèi)容被納入本文作為參考。通 過除去結(jié)合離子如金屬離子，然后使蛋白質(zhì)與鋅離子接觸，可以為蛋白質(zhì) 裝載鋅?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員明知的任何技術(shù)除去結(jié)合離子，所述技 術(shù)包括例如透析、過濾、螯合劑等。在某些實(shí)施方案中，通過使蛋白質(zhì)與 有效量的螯合劑如EDTA或EGTA接觸來除去結(jié)合離子。示例條件包括例 如約5mM至約100mMEDTA用于約40礮蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中， 在除去結(jié)合離子后，通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如過濾、透析、色譜法或分子篩從蛋白 質(zhì)中除去螯合劑。通過與鋅裝載蛋白質(zhì)有效量的任何形式的鋅接觸，可以用鋅裝栽蛋白 質(zhì)。鋅的示例形式包括鋅鹽如氯化鋅、乙酸鋅和疏酸鋅。在下面的工作實(shí) 施例中，用乙酸鋅裝載蛋白質(zhì)。示例條件包括例如約50至約500 mM鋅鹽， 如乙酸鋅、氯化鋅或*克酸鋅用于40礮蛋白質(zhì)。具體條件包括約50至約 500 mM乙酸鋅用于40礮蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如過 濾、透析、色譜法或分子篩從蛋白質(zhì)中除去過量的鋅。在本發(fā)明的組合物中，所述蛋白質(zhì)是經(jīng)蛋白酶消化的?？梢栽谘b栽鋅之前、在裝載鋅的過程中或在裝載鋅后用蛋白酶消化所述蛋白質(zhì)。在下面 的工作實(shí)施例中，在蛋白酶消化之后裝栽鋅。所迷蛋白酶可以是本領(lǐng)城技包括木瓜蛋白酶。在適合產(chǎn)生對本發(fā)明方法有效的片段的條件下，使蛋白質(zhì)與蛋白酶接觸。在某些實(shí)施方案中，使蛋白質(zhì)與木瓜蛋白酶在37。C接觸 約兩小時(shí)或更長時(shí)間。在某些實(shí)施方案中，通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如過濾、透析、 色諳法或分子篩從蛋白質(zhì)中除去木瓜蛋白酶。在某些實(shí)施方案中，可以通 過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它技術(shù)如冷凍-解凍技術(shù)消化蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，本文所述載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳 蛋白大小基本上小于100kDa、 50kDa、 25 kDa、 20kDa、 15 kDa、 10kDa、 5kDa或3kDa。術(shù)語"大小基本上小于"指不超過50%、 75%、 90%或95% 經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳蛋白片段大于該大小限制?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域 技術(shù)人員明知的任何技術(shù)將載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳蛋白分 大小，所述技術(shù)包括例如過濾、透析、色誥法或分子篩。通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，包括下文所述的那些，可以將組合物配制成下面部分 所述的形式，例如膳食補(bǔ)充劑、食品添加劑、食品組合物、營養(yǎng)制品組合 物或藥物組合物。5.4使用方法本文提供了使用 一種或多種本發(fā)明的組合物治療或預(yù)防肥胖或超重的方法。在某些實(shí)施方案中，本文提供了使用一種或多種本發(fā)明的組合物治療 肥胖的方法。所述方法包括向有需要的個(gè)體施用有效量的本發(fā)明組合物以治療肥胖的步驟。在某些實(shí)施方案中，本文提供了用一種或多種本發(fā)明的 組合物預(yù)防肥胖的方法。所速方法包括向有需要的個(gè)體施用有效量的本發(fā) 明組合物以預(yù)防肥胖的步驟。在某些實(shí)施方案中，本文提供了使用一種或多種本發(fā)明的組合物治療 超重的方法。所述方法包括向有需要的個(gè)體施用有效量的本發(fā)明組合物以 治療超重的步驟。在某些實(shí)施方案中，本文提供了用一種或多種本發(fā)明的 組合物預(yù)防超重的方法。所述方法包括向有需要的個(gè)體施用有效量的本發(fā) 明組合物以預(yù)防超重的步驟。在某些實(shí)施方案中，本文提供了使用一種或多種本發(fā)明的組合物減少 體重增加的方法。所述方法包括向有需要的個(gè)體施用有效量的本發(fā)明組合 物以減少體重增加的步驟。在某些實(shí)施方案中，本文提供了用一種或多種 本發(fā)明的組合物預(yù)防體重增加的方法。所述方法包括向有需要的個(gè)體施用 有效量的本發(fā)明組合物以預(yù)防體重增加的步驟。在某些實(shí)施方案中，本文提供了使用一種或多種本發(fā)明的組合物謙導(dǎo) 體重減少的方法。所述方法包括向有需要的個(gè)體施用有效量的本發(fā)明組合 物以誘導(dǎo)體重減少的步驟。在某些實(shí)施方案中，所述體重減少是出于醫(yī)學(xué) 原因。在某些實(shí)施方案中，所述體重減少是化妝性體重減少。在某些實(shí)施方案中，本文提供了治療或預(yù)防涉及超重或肥胖的疾病或 病癥的方法。所述疾病或病癥包括例如高血液壓力、高血壓、高血液膽固 醇水平、糖尿病、胰島素抗性、葡萄糖不耐受、冠心病和心理病變?nèi)缫钟?和進(jìn)食障礙。所述方法包括向有需要的個(gè)體施用有效量的本發(fā)明組合物以 治療或預(yù)防所述疾病或病癥的步驟。在某些實(shí)施方案中，本文提供了使用一種或多種本發(fā)明的組合物謙導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡的方法。所述方法包括4吏脂肪細(xì)胞與有效量的本發(fā)明組合物 接觸以i秀導(dǎo)凋亡的步驟。所速脂肪細(xì)胞可以是本領(lǐng)城技術(shù)人員已知的任何 脂肪細(xì)胞，包括體內(nèi)、體外或離體脂肪細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述脂 肪細(xì)胞可能是個(gè)體內(nèi)的。在某些實(shí)施方案中，本文提供了使用一種或多種本發(fā)明的組合物調(diào)節(jié)細(xì)胞表皮生長因子受體(EGFR)功能的方法。所述方法包括使表達(dá)EGFR的 細(xì)胞與有效量的本發(fā)明組合物接觸以調(diào)節(jié)受體活性的步驟。所述表達(dá)EGFR 的細(xì)胞可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的表達(dá)EGFR的任何細(xì)胞，包括體內(nèi)、 體外或離體的表達(dá)EGFR的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述表達(dá)EGFR的 細(xì)胞可能是個(gè)體內(nèi)的。在某些實(shí)施方案中，本文提供了使用一種或多種本發(fā)明的組合物調(diào)節(jié) 細(xì)胞胰島素受體功能的方法。所述方法包括使表達(dá)胰島素受體的細(xì)胞與有 效量的本發(fā)明組合物接觸以調(diào)節(jié)受體活性的步驟。所迷表達(dá)胰島素受體的 細(xì)胞可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的表達(dá)胰島素受體的任何細(xì)胞，包括體內(nèi)、 體外或離體的表達(dá)胰島素受體的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述表達(dá)胰島 素受體的細(xì)胞可能是個(gè)體內(nèi)的。5.4.1個(gè)體人群所述個(gè)體可能是需要本發(fā)明方法的任何個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，所 述個(gè)體是動(dòng)物。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在某些實(shí)施方案中， 所述個(gè)體是患者。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是處于肥胖危險(xiǎn)中的人。在某些實(shí)施方 案中，所述個(gè)體是肥胖的人。在用于本文時(shí)，"肥胖"指被本領(lǐng)域從業(yè)者認(rèn)為是肥胖的個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，"肥胖"指體表指數(shù)(BMI)為30kg/m2 或更大的人。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是處于超重危險(xiǎn)中的人。在某些實(shí)施方 案中，所述個(gè)體是超重的人。在用于本文時(shí)，"超重"指被本領(lǐng)域從業(yè)者認(rèn) 為是超重的個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，"超重"指體表指數(shù)(BMI)為25kg/m2 或更大的人。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是BMI大于30 kg/m2、35 kg/m2、40 kg/m2、 45 kg/m2或50 kg/m2的人。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是BMI小于25 kg/m2的人，例如是本領(lǐng)域從業(yè)者認(rèn)為需要減少體重或體重增加的BMI小 于25 kg/m2的人。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是健康的。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè) 體除超重或肥胖以外是健康的。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是不健康的。 在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體除超重或肥胖以外仍是不健康的。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是健康或不健康的，可出于任何原因施 用本發(fā)明的組合物以減少體重增加或誘導(dǎo)體重減少。5.4.2聯(lián)合在另一方面，本發(fā)明提供了向有需要的個(gè)體聯(lián)合施用本發(fā)明的組合物 和可有效治療或預(yù)防肥胖的第二藥物，以治療或預(yù)防超重、實(shí)現(xiàn)體重減少 或減少體重增力口的方法。在某些實(shí)施方案中，所述第二藥物可調(diào)節(jié)a-促黑激素(a-MSH)。在一些 實(shí)施方案中，所述第二藥物選自選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑(SSRI)、 5-羥色胺2C激動(dòng)藥和5-羥色胺1B激動(dòng)藥。在其它實(shí)施方案中，所述第二藥物選自例如安非他酮、氟西汀、氟伏沙明、舍曲林、帕羅西汀、西酞普蘭、 依他普侖、西布曲明、度洛西汀和文^立法辛及其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。在其它實(shí)施方案中，所述第二藥物可抑制神經(jīng)肽Y的活性。在其它實(shí)施方 案中，所述第二藥物選自NPY拮抗藥、ghrelin拮抗藥和廋蛋白(l印tin)。在 一些實(shí)施方案中，所述第二藥物可激動(dòng)NPYY2受體。在一些實(shí)施方案中， 所述第二藥物是NPY受體拮抗藥。本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括這樣的實(shí)施 方案，其中所述第二藥物選自，氨基丁酸(GABA)抑制劑、GABA受體拮抗 藥和GABA通道拮抗藥。所述GABA抑制劑可以是5-HT lb激動(dòng)藥或可抑 制GABA神經(jīng)元活性的另一種藥物。在其它實(shí)施方案中，所述第二藥物是 多巴胺再吸收抑制劑。芬特明是多巴胺再吸收抑制劑的例子。在某些實(shí)施 方案中，所述第二藥物是去甲腎上腺素再吸收抑制劑。去甲腎上腺素再吸 收抑制劑的例子包括thionisoxetine和瑞波西汀。其它實(shí)施方案包括其中所 述第二藥物是多巴胺激動(dòng)藥的實(shí)施方案?？稍谑袌錾汐@得一些多巴胺激動(dòng) 藥，包括卡麥角林、金剛烷胺、利舒脲、培高利特、羅匹尼羅、普拉克索 和溴隱亭。在其它實(shí)施方案中，所述第二藥物是去甲腎上腺素釋放劑如安 非拉酮，或混合的多巴胺/去甲腎上腺素再吸收抑制劑如阿托西汀。在某些 其它實(shí)施方案中，所述第二藥物是5-HTlb激動(dòng)藥，例如舒馬曲坦、阿莫曲 普坦、那拉曲坦、夫羅曲普坦、利扎曲普坦、佐米曲普坦和elitriptan。在其 它實(shí)施方案中，所述第二藥物是抗驚厥藥。所述抗驚厥藥可以選自唑尼沙 胺、托吡酯、戊巴比妥、勞拉西泮、氯硝西泮、氯氮卓、噻加賓、加巴噴 丁、磷苯妥英、苯妥英、卡馬西平、丙戊酸鹽、非爾氨酯、左乙拉西坦、 奧卡西平、拉莫三嗪、甲琥胺和乙琥胺。在一些實(shí)施方案中，所述第二藥 物是大麻素受體拮抗藥。在某些實(shí)施方案中，所述第二藥物本身可以是兩種或多種藥物的組合。 例如，所速第二藥物可以是多巴胺再吸收抑制藥與去甲腎上腺素再吸收抑制藥，例如馬吲哚的組合。或者，所迷第二藥物可以是SSRI與去曱腎上腺 素再吸收抑制劑，例如西布曲明、文拉法辛和度洛西汀的組合。5.5膳食補(bǔ)充劑和藥物組合物本發(fā)明的組合物可以以食品、食品添加劑、膳食補(bǔ)充劑、營養(yǎng)制品或 藥物的形式使用。所述組合物可以包含載體、稀釋劑或賦形劑。根據(jù)預(yù)期 用途，所述載體、稀釋劑或賦形劑可以被選擇為適合人或獸醫(yī)使用、食品 添加劑、補(bǔ)充劑或藥物使用。在某些實(shí)施方案中，在與乳的混合物中提供本發(fā)明的組合物。在某些 實(shí)施方案中，以干粉末的形式提供本發(fā)明的組合物。可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù) 人員已知的任何技術(shù)干燥本發(fā)明的組合物，所述技術(shù)包括凍干、冷凍干燥、 噴霧干燥和蒸發(fā)干燥。所述粉末可以包括本發(fā)明的組合物和任選的本文所 述或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何載體、稀釋劑、賦形劑或其它添加劑。在 某些實(shí)施方案中，以液體的形式提供本發(fā)明的組合物。所述液體可以包括體、稀釋劑、賦形劑或其它添加劑。所述液體可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為 有用的任何體積，例如方便給藥和施用途徑的體積。在用于本文時(shí)，"食品"或"食品組合物"是主要由蛋白質(zhì)、碳水化合 物和/或脂肪組成的材料，其被用于有機(jī)體的機(jī)體以維持生長、修復(fù)和生命 過程并供應(yīng)能量。食品還可以包括補(bǔ)充物質(zhì)如礦物質(zhì)、維生素和調(diào)味品。 術(shù)語"食品"包括適合人或動(dòng)物消費(fèi)的飲料。在用于本文時(shí)，"食品添加劑"按照FDA在21 CFR 170.3(e)(l)中的定義，包括直接和間接添加劑?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)配制技術(shù)將本文所提供的組合物配制成軟明膠膠嚢、茶、 片齊'J等。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版，Mack Publishing, Easton Pa. (1990)。如本文所述，可以將本發(fā)明的組合物配制成 膳食補(bǔ)充劑或藥物制劑，用于施用至個(gè)體以治療或預(yù)防肥胖或超重。本發(fā)明組合物的合適形式包括食品添加劑、食品組合物(包括飲料組合 物)和膳食補(bǔ)充劑?？梢詫⒈景l(fā)明的組合物添加到各種食品中以供同時(shí)消費(fèi)。 作為食品添加劑，可以按照與常規(guī)食品添加劑相同的方式使用本發(fā)明的組 合物，因此只需要將本發(fā)明的組合物與其它食品組分混合。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，膳食補(bǔ)充劑并非必需使用與藥物組合物相同的劑型成分， 或具有與藥物組合物相同的無菌和其它FDA要求。所述膳食補(bǔ)充劑可以是 液體形式，例如溶液、糖漿或懸浮液，或者可以是用于在使用前與水或任 何其它合適的液體重組的產(chǎn)品形式?？梢酝ㄟ^常規(guī)手段制備所述液體制劑， 例如茶、健康飲料、膳食飲料、液體濃縮物或可溶于液體的片劑、膠囊、 丸劑或粉末，從而可以通過將可溶于液體的片劑、膠囊、丸劑或粉末溶于 液體內(nèi)并消費(fèi)所得飲料來制備飲料?；蛘?，所述膳食補(bǔ)充劑可以采用片劑 或膠囊的形式，所述形式通過常規(guī)手段制備并任選地包括其它膳食補(bǔ)充劑， 包括維生素、礦物質(zhì)、其它草藥補(bǔ)充劑、粘合劑、填充劑、潤滑劑、崩解 劑或潤濕劑，如上面所述的那些?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域公知的方法將片劑包衣。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述膳食補(bǔ)充劑可以采用膠囊或粉末的形式，供溶于 液體中用于口服消費(fèi)?；钚猿煞衷诩膊』虿“Y的治療或預(yù)防中的食用劑量將根據(jù)待治療疾病 或病癥的嚴(yán)重性以及施用途徑而變化。所述劑量和可能的給藥頻率還將根據(jù)消費(fèi)者或患者的年齡、體重、反應(yīng)和過往藥史而變化。通過考慮這些因 素，本領(lǐng)城技術(shù)人員可以容易地選擇合適的給藥方案。摻入食物產(chǎn)品中的本發(fā)明組合物的量將取決于食品的種類和所需的效 果。通常，單次供應(yīng)所舍的本發(fā)明組合物的量占食品組合物的約0.1%至約100%、或約0.1%至約50%、或約0.5%至約20%。在某些實(shí)施方案中，食 物產(chǎn)品所含的本發(fā)明組合物的量占食品組合物的約1%至約10%。食品的例子包括但不限于糖果如甜味劑(冰糖、凝膠劑、果醬等)、樹膠、 豆糊、烘焙的糖果或制模的糖果(餅干、點(diǎn)心等)、蒸汽糖果、可可或可可產(chǎn) 品(巧克力和可可)、冰凍的糖果(冰淇淋、冰等)、飲料(果汁、軟飲料、碳酸 飲料)、健康飲料、健康棒和茶(綠茶、紅茶等)。本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括包含食品、膳食補(bǔ)充劑或藥物，和指示存在本 發(fā)明化合物的標(biāo)簽的包裝。任選地，所述標(biāo)簽可以指示本發(fā)明的組合物、 本發(fā)明組合物的有益性質(zhì)和使用說明書。在優(yōu)選實(shí)施方案中，供施用的組合物是藥物組合物或單個(gè)單位劑型。 藥物組合物和單個(gè)單位劑型可以包括預(yù)防或治療有效量的一種或多種預(yù)防 或治療藥、和通常一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。在 具體實(shí)施方案和本文的語境中，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的"指由聯(lián)邦或州政 府規(guī)則機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)或列于美國藥典或其它公認(rèn)藥典用于動(dòng)物的，或者更具體 地用于人的。術(shù)語"載體"指與治療藥一起施用的稀釋劑、佐劑(例如弗氏 佐劑(完全和不完全))、賦形劑或運(yùn)載體。所述藥物載體可以是無菌液體， 例如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來源的那些，例如花生油、大 豆油、礦物油、芝麻油等。當(dāng)靜脈內(nèi)施用所述藥物組合物時(shí)，水是優(yōu)選的 載體。鹽水溶液、葡萄糖溶液和甘油溶液也可以被用作液體載體，尤其對于可注射的溶液。合適的藥物載體的例子描述于E. W. Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences"。營養(yǎng)制品組合物可以但不必需包括一種或多種活 性或無活性成分，所述成分不必需被本領(lǐng)域的當(dāng)前從業(yè)者認(rèn)為是藥學(xué)上可 接受的。根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的判斷，可以通過任何途徑施用本發(fā)明的藥物或 營養(yǎng)制品組合物，這些途徑包括但不限于口服、靜脈內(nèi)、胃內(nèi)、十二指腸 內(nèi)、腹膜內(nèi)或腦室內(nèi)。典型的藥物或營養(yǎng)制品組合物和劑型包括 一 種或多種賦形劑。合適的 賦形劑對藥學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員是公知的，合適賦形劑的非限制性例子包括 淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、面粉、白灰、硅膠、硬脂 酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、干脫脂乳、甘油、丙二醇、水、 乙醇等。具體的賦形劑是否適合摻入藥物或營養(yǎng)制品組合物或劑型中，這 取決于本領(lǐng)域公知的各種因素，所述因素包括但不限于劑型將要施用至患 者的方式和劑型內(nèi)的具體活性成分。如果需要，所述組合物或單個(gè)單位劑 型還可以包含少量潤濕劑或乳化劑、或pH緩沖劑。本發(fā)明的無乳糖組合物可以包含本領(lǐng)域公知的賦形劑，例如。列于美 國藥典(USP) SP (XXI)/NF (XVI)的賦形劑。通常，無乳糖組合物包含活性成 分、以及藥物相容的和藥學(xué)上可接受量的粘合劑/填充劑和潤滑劑。示例的 無乳糖劑型包括活性成分、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉和硬脂酸鎂。本發(fā)明還包括施用含有一種或多種化合物的藥物或營養(yǎng)制品組合物和 劑型，所述化合物可減少活性成分將要分解的速率。所述化合物在本文中 稱為"穩(wěn)定劑"，包括但不限于抗氧化劑如抗壞血酸、pH緩沖劑或鹽緩沖 劑。所述藥物或營養(yǎng)制品組合物和單個(gè)單位劑型可以采用溶液、懸浮液、 乳液、片劑、丸劑、膠囊、粉末、緩釋劑型等形式?？诜┬涂梢园?biāo) 準(zhǔn)載體如藥用級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳 酸鎂等。所述組合物和劑型將包舍預(yù)防或治療有效量的預(yù)防或治療藥，優(yōu) 選為純化形式，以及合適量的載體，從而提供用于正確施用至患者的形式。 所述劑型應(yīng)適合施用模式。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述藥物組合物或單個(gè)單 位劑型是無菌的，適合施用至個(gè)體，優(yōu)選動(dòng)物個(gè)體，更優(yōu)選哺乳動(dòng)物個(gè)體， 最優(yōu)選人個(gè)體。本發(fā)明的藥物或營養(yǎng)制品組合物被配制成與其預(yù)期施用途徑相容。施 用途徑的例子包括但不限于胃腸外施用，例如靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、 皮下、口服、口腔、鞘內(nèi)、吸入、鼻內(nèi)、透皮、局部、透粘膜、腫瘤內(nèi)、 滑液內(nèi)和直腸施用。在具體實(shí)施方案中，根據(jù)常規(guī)程序?qū)⑺鼋M合物配制 成適合靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、口服、鼻內(nèi)或局部施用至人類的藥物或營養(yǎng) 制品組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)常規(guī)程序?qū)⑺幬锝M合物配制用于皮 下施用至人類。通常，用于靜脈內(nèi)施用的組合物是溶在無菌等張水性緩沖 劑中的溶液。當(dāng)必需時(shí)，所述組合物還可以包括增溶劑和局麻藥如利多卡 因，以減少注射位置的疼痛。劑型的例子包括但不限于片劑；囊片；膠囊如軟彈性明膠膠囊；扁 囊劑；藥片；錠劑；分散體；栓劑；油青；糊劑(泥敷劑)；貼劑；粉末；敷 料；乳膏；膏藥；溶液；貼片；氣霧劑(例如鼻噴霧或吸入劑)；凝膠；適合 口服或粘膜施用至患者的液體劑型，包括懸浮液(例如水性或非水性液體懸 浮液、水包油乳液或油包水液體乳液)、溶液和酏劑；適合胃腸外施用至患 者的液體劑型；和可以被重組以提供適合胃腸外施用至患者的液體劑型的無菌固體(例如晶體或無定型固體)。組合物劑型的組成、形狀和類型通常將根據(jù)它們的用途而變化。例如， 與用于慢性治療相同病癥的劑型相比，用于急性治療病癥的劑型可以包含 較大量的一種或多種組合物。而且，不同疾病或病癥類型的治療有效劑型 可能不同。類似地，與用于治療相同疾病或病癥的口服劑型相比，胃腸外 劑型可以包含較少量的 一種或多種活性成分。本發(fā)明包括具體劑型的這些 和其它方式將彼此不同，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是容易明白的。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)。通常，包含所述組成的組合物成分可以分開提供，或者在單位劑型中 混合到 一起，例如作為指示活性成分?jǐn)?shù)量的密封容器如安瓿或藥囊中的凍 干粉或無水濃縮物。當(dāng)要通過灌輸施用組合物時(shí)，可以用包含無菌藥用級 水或鹽水的輸液瓶來分配它。當(dāng)要通過注射施用組合物時(shí)，可以提供一安 瓿無菌注射用水或鹽水，從而在施用前混合成分。本發(fā)明方法中施用的典型劑型所含的本發(fā)明組合物的量為約O.lmg至 約400 mg/天、1 mg至100 mg/天或1 mg至15 mg/天，作為單個(gè)每曰 一次 劑量或作為全天的分劑量給予。本發(fā)明的具體劑型包含約0.1、 0.2、 0.25、 0.3、 0.5、 0.75、 1.0、 2.0、 2.5、 3.0、 5.0、 7.5、 10.0、 15.0、 20.0、 25.0、 40.0、 50.0、 60.0或100 mg組合物。示例劑型是蛋白質(zhì)濃度為0.1 mg/ml的3、 5、 7.5或15 ml液體組合物。適合口服施用的用于本發(fā)明方法的藥物組合物可以作為離散劑型存 在，例如但不限于片劑(例如咀嚼片)、囊片、膠囊和液體(例如調(diào)味糖漿)。 所述劑型包含預(yù)定量的活性成分，可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的藥劑方法制備。 一般參見Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版，Mack Publishing, Easton PA (1990)。在某些實(shí)施方案中，口服劑型是固體，并在無水條件下用無水成分制 備，如上面部分中的詳述。然而，本發(fā)明的范圍超出了無水固體口服劑型。 因此，本文還描述了其它形式。根據(jù)常規(guī)藥物配制技術(shù)，通過將勻質(zhì)混合物中的活性成分于至少一種 賦形劑組合來制備典型的口服劑型。賦形劑可以采用廣泛的形式，這取決 于希望施用的制劑形式。例如，適合在口服液體或氣霧劑劑型中使用的賦 形劑包括但不限于水、乙二醇、油、醇、調(diào)味劑、防腐劑和著色劑。適合 在固體口服劑型(例如粉末、片劑、膠囊和囊片)中使用的賦形劑例子包括但 不限于淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、粘合劑和崩解 劑?？梢杂糜诒景l(fā)明口服劑型的賦形劑例子包括但不限于粘合劑、填充劑、 崩解劑和潤滑劑。適合用于藥物組合物和劑型的粘合劑包括但不限于玉米 淀粉、馬鈴薯淀粉或其它淀粉、明膠、天然和合成橡膠如阿拉伯膠、藻酸 鈉、海藻酸、其它藻酸鹽、粉狀黃芙膠、瓜爾膠、纖維素及其衍生物(例如 乙基纖維素、乙酸纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉)、聚乙烯吡 咯烷酮、甲基纖維素、預(yù)膠化淀粉、羥丙基甲基纖維素(例如型號(hào)2208、 2906、 2910)、微晶纖維素及其混合物。用于本文所述的藥物組合物和劑型的填充劑例子包括但不限于滑石、 碳酸鈣(例如顆?；蚍勰?、微晶纖維素、粉狀纖維素、葡萄糖合劑、高嶺土、 甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、預(yù)膠化淀粉及其混合物。本發(fā)明藥物組合 物中粘合劑或填充劑的含量通常占所述藥物組合物或劑型的約50至約99重量百分比。徵晶纖維素的合適形式包括但不限予作為AVICEL-PH-101 、 AVICEL-PH-103、 AVICELRC-581、 AVICEL-PH-105(獲自FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA)出售的材泮+及其混 合物。具體的粘合劑是作為AVICELRC-581出售的微晶纖維素與羧甲基纖 維素鈉的混合物。合適的無水或低濕賦形劑或添加劑包括 AVICEL-PH-103tm和淀粉1500 LM。本發(fā)明的組合物使用崩解劑以提供在暴露于水性環(huán)境時(shí)崩解的片劑。 包含太多崩解劑的片劑可能在貯存時(shí)崩解，而包含太少崩解劑的片劑可能 不會(huì)以所需的速率或在所需的條件下崩解。因此，應(yīng)該使用不太多也不太 少從而不損害活性成分釋放的充足量的崩解劑來形成本發(fā)明的固體口服劑 型。所用的崩解劑量基于劑型的類型而變化，可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容 易地識(shí)別。典型的藥物組合物包含約0.5至約15重量百分比的崩解劑，具 體為約1至約5重量百分比的崩解劑?？梢杂糜诒景l(fā)明的藥物組合物和劑型的崩解劑包括但不限于瓊脂-瓊 脂、海藻酸、碳酸鈣、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、 聚克立林鉀、淀粉羥乙酸鈉、馬鈴薯或木薯淀粉、預(yù)膠化淀粉、其它淀粉、 粘土、其它藻膠、其它纖維素、樹膠及其混合物?？梢杂糜诒景l(fā)明的藥物組合物和劑型的潤滑劑包括但不限于硬脂酸 鈣、硬脂酸鎂、礦物油、輕質(zhì)礦物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、 其它二醇、硬脂酸、十二烷1^1酸鈉、滑石、氫化植物油(例如花生油、棉 籽油、葵花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油)、硬脂酸鋅、油酸乙酯、 月桂酸乙酯、瓊脂及其混合物。額外的潤滑劑包括例如syloid硅膠(AEROSIL200 ，由W.R. Grace Co. of Baltimore, MD制造)、合成二氧化硅的凝結(jié)氣霧 劑(由Degussa Co. of Piano， TX出售)、CAB-O-SIL(由Cabot Co. of Boston, MA出售的高熱二氧化硅產(chǎn)品)及其混合物。如果全部使用，則潤滑劑的含 量通常小于它們摻入的藥物組合物或劑型的約1重量百分比。5.6施用劑量&頻率有效地預(yù)防、治療、控制或緩解病癥或其一種或多種癥狀的本發(fā)明方 法中的組合物的量根據(jù)疾病或病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重性、以及活性成分的施用 途徑而變化。所述頻率和劑量也將根據(jù)每位患者的具體情況而變化，取決 于所施用的具體療法(例如治療藥或預(yù)防藥)，病癥、疾病或病癥的嚴(yán)重性， 施用途徑，以及患者的年齡、體重、反應(yīng)和過往藥史?？梢杂稍醋泽w外或 動(dòng)物模型測試體系的劑量-響應(yīng)曲線外推出有效劑量。本發(fā)明組合物的示例劑量包括毫克或微克量的總蛋白質(zhì)/千克個(gè)體或樣 品重量(例如約1微克/千克至約10毫克/千克)。對于本發(fā)明所用的組合物， 施用至患者的劑量可以為0.001 mg/kg至約100mg/kg。在某些實(shí)施方案中， 施用至患者的劑量為0.001 mg/kg至約10 mg/kg。在某些實(shí)施方案中，按組 合物中蛋白質(zhì)的重量計(jì)，劑量為約0.02mg/kg至約4.0mg/kg患者體重。在 純蛋白質(zhì)(例如重組蛋白質(zhì)或市售蛋白質(zhì))作為原料的實(shí)施方案中，劑量可以 處于所述范圍的下端。在由乳或血清制備蛋白質(zhì)的實(shí)施方案中，劑量可以 處于所述范圍的上端。通常，本發(fā)明方法中用于本文所述病癥的組合物的推薦每日劑量范圍 為約O.l mg至約100mg/天，作為每天的單次劑量或多次劑量。本領(lǐng)域從 業(yè)者根據(jù)例如個(gè)體年齡、體重、BMI或其它因素可以確定實(shí)際劑量。在某些實(shí)施方案中，總每日劑量范圍可以為約O.l mg至約25mg/天，更具體為 約1 mg至約15 mg/天。所述組合物可以作為單個(gè)每日 一次劑量施用，或者作為全天內(nèi)的分劑 量施用。在一些實(shí)施方案中，以相等的分劑量每天兩次施用每日劑量。在 某些實(shí)施方案中，每天三次施用每日劑量。在具體實(shí)施方案中，以相等的 分劑量每天三次施用每日劑量。在具體實(shí)施方案中，以相等的分劑量每天 四次施用每日劑量。所本文所述，重量優(yōu)選基于載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的蛋白質(zhì)的重量。 在某些實(shí)施方案中，可以每天重復(fù)施用本發(fā)明的組合物。在某些實(shí)施 方案中，施用可以間隔至少1天、2天或3天。本文所述組合物的有效量將提供治療益處而基本上不會(huì)引起毒性。 通過細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)藥物程序，例如通過確定LD5()(50% 群體的致死劑量)或LDu)o(100n/Q群體的致死劑量)，可以確定組合物的毒性。 毒性與治療效果之間的劑量比是治療指數(shù)。具有高治療指數(shù)的化合物是優(yōu) 選的。從這些細(xì)胞培養(yǎng)測定和動(dòng)物研究中獲得的數(shù)據(jù)可以用于闡明人用的 無毒劑量范圍。本文所述化合物的劑量優(yōu)選處于循環(huán)濃度的范圍內(nèi)，該范 圍包括具有低毒或無毒的有效劑量。劑量可以在該范圍內(nèi)變化，取決于所 用的劑型和所用的施用途徑。個(gè)體醫(yī)師可以根據(jù)患者的病癥選擇確切的劑 型、施用途徑和劑量(參見例如Fingl等，1996， In: The Pharmacological Basis of Therapeutics,第9版，第2章，第29頁，Elliot M. Ross)。6.實(shí)施例6.1實(shí)施例l:栽鋅蛋白質(zhì)的制備方法l:用8ml0.1MEDTA或EGTA(溶于水)將40毫升血清(來自各種 動(dòng)物)培育1小時(shí)。通過用4升去離子水透析3小時(shí)，除去EDTA或EGTA。 用乙酸鋅(最終Zn濃度為50mM)將經(jīng)EDTA或EGTA處理的血清培育至少 4小時(shí)。通過離心除去沉淀物。用去離子水將40ml血清透析兩輪以除去過 量的鋅第一次用10升去離子水透析18小時(shí)，然后用4升新鮮的去離子 水再透析4小時(shí)。方法2:用8ml0.1MEDTA或EGTA(溶于水)將40毫升乳(來自各種動(dòng) 物)培育1小時(shí)。通過用4升去離子水透析3小時(shí)，除去EDTA或EGTA。 用乙酸鋅(最終Zn濃度為50mM)將經(jīng)EDTA處理的乳培育至少4小時(shí)。通 過離心除去沉淀物。用去離子水將40ml乳透析兩輪以除去過量的鋅第一 次用10升去離子水透析18小時(shí)，然后用4升新鮮的去離子水再透析4小 時(shí)。方法3:在室溫下，用25 mM EDTA或EGTA的10 ml鹽水溶液將蛋 白質(zhì)溶液(a-2-HS-糖蛋白(AHSG或胎球蛋白)、a-l-酸糖蛋白(AAG)、 a-l-抗 胰蛋白酶(AAT)、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白各40礮)培育1小時(shí)，所 述鹽水溶液包含2mMHEPES, pH7.0。通過用截留分子量為lOKDa的分 子篩重復(fù)過濾除去EDTA或EGTA。用250mM乙酸鋅將蛋白質(zhì)溶液(40艦) 培育18小時(shí)。通過用20倍體積鹽水溶液(pH 7.0)濃縮四輪來除去過量的鋅 離子，每次均使用分子篩，這導(dǎo)致稀釋因子為6X10"的鋅離子。由蛋白質(zhì) 溶液的10KDa膜濾液確定游離鋅離子濃度為約5-10艦，之前已經(jīng)在該濃 度下觀察過沒有細(xì)胞毒性。方法4:在室溫下，用5mMEDTA或EGTA的10ml鹽水溶液將蛋白 質(zhì)溶液(a-2-HS-糖蛋白(AHSG或胎球蛋白)、a-l-酸糖蛋白(AAG)、 a-l-抗胰蛋白酶(AAT)、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白各40艦)培育1小時(shí)，所述 鹽水溶液包含2mMHEPES， pH7.0。通過用截留分子量為10 KDa的分子 篩重復(fù)過濾除去EDTA或EGTA。用80艦乙酸鋅將蛋白質(zhì)溶液(40碾)培 育18小時(shí)。方法5:在室溫下，用25 mM EDTA或EGTA的10 ml鹽水溶液將蛋 白質(zhì)溶液(a-2-HS-糖蛋白(AHSG或胎球蛋白)、a-l-酸糖蛋白(AAG)、 a-l-抗 胰蛋白酶(AAT)、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白各40礮)培育1小時(shí)，所 述鹽水溶液包含2mMHEPES, pH7.0。通過用截留分子量為10 KDa的分 子篩重復(fù)過濾除去EDTA或EGTA。用50 mM乙酸鋅將蛋白質(zhì)溶液(40礮) 培育18小時(shí)。通過用1000倍體積去離子水透析2小時(shí)，除去過量的鋅離 子。6.2實(shí)施例2:用蛋白酶消化載鋅蛋白質(zhì)方法l:在37。C用木瓜蛋白酶(2，500單位，來自木瓜乳汁)將上述制備 的栽鋅血清(40ml)培育2小時(shí)。通過使培育混合物通過截留分子量為3KDa 到高至lOKDa的分子篩收集片段。方法2:在37°。用木瓜蛋白酶(2，500單位，來自木瓜乳汁)將上述制備 的載鋅乳(40 ml)培育2小時(shí)。通過使培育混合物通過截留分子量為3 KDa 到高至lOKDa的分子篩收集片段。方法3:在37匸用木瓜蛋白酶(468單位，來自木瓜乳汁)將上述制備的 載鋅蛋白質(zhì)(5 ml，包含a-2-HS-糖蛋白(AHSG或胎球蛋白)、a-l-酸糖蛋白 (AAG)、 a-l-抗胰蛋白酶(AAT)、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白各40礮)培 育2小時(shí)。通過使培育混合物通過截留分子量為3KDa的分子篩收集片段。6.3實(shí)施例3:動(dòng)物研究將保持高脂肪飲食和隨意水的三只A/J ,J、鼠(6周大，18-20克)放在籠中。 在4天后，以2mg/Kg體重的量，給小鼠尾靜脈內(nèi)注射按上述方法制備的 AAG片段，持續(xù)6天。每天測量體重。A4G ^沒浙浙V、！雄f潛血如圖1所示，注射按照上述方法制備的AAG片段會(huì)引起小鼠體重增加 穩(wěn)定(第5-11天)。小鼠體重在注射所述片段結(jié)束后6天內(nèi)保持恒定(第12-17 天)。6.4實(shí)施例4:人體實(shí)驗(yàn)將來自按上述方法制備的血清的組合物每天兩次口服施用給保持正常 飲食的人個(gè)體，持續(xù)十天。給予的劑量為0.02 mg/kg體重，但有效范圍可 以為例如0.02 mg/kg體重至4 mg/kg體重。每天測量體重。釆々j^;薩W蛋冷^^發(fā)會(huì)f/趟乂沐f4'^圖2顯示人個(gè)體每天兩次服用來自按上述方法制備的血清的組合物(3 mg/kg體重)十天后的體重減少。發(fā)現(xiàn)保持正常飲食的人個(gè)體在用所述片段 治療10天后失去4.4磅。6.5實(shí)施例5:本發(fā)明的組合物抑制小鼠和大鼠胰島素受體 使來自小鼠脂肪細(xì)胞系3T3-L1和大鼠胰島素受體(Sigma)的細(xì)胞溶解 產(chǎn)物接觸按實(shí)施例2制備的本發(fā)明組合物。如圖3所示，本發(fā)明的組合物 可抑制所述細(xì)胞系內(nèi)的胰島素受體信號(hào)活性，這由用于酪氨酸激酶活性的比色ELISA測定法顯示(K-LISA PTK篩選試劑盒，Calbiochem目錄號(hào) 539701)。在圖3A中，提供的孔l&2具有對所述3T3-L1細(xì)胞溶解產(chǎn)物的基礎(chǔ)酪 氨酸激酶活性。添加本發(fā)明的組合物可抑制基礎(chǔ)酪氨酸激酶活性(孔3&4; 兩份)。當(dāng)將胰島素添加到脂肪細(xì)胞溶解產(chǎn)物中時(shí)，IR的酪氨酸激酶活性變 得更強(qiáng)(孔5&6)。添加本發(fā)明的組合物可中止大部分胰島素誘導(dǎo)的IR酪氨 酸激酶活性(孔7&8)。在圖3B中，提供的孔l&2具有對所述大鼠肝胰島素受體的基礎(chǔ)酪氨 酸激酶活性。添加本發(fā)明的組合物可抑制基礎(chǔ)酪氨酸激酶活性(孔3&4;兩 份)。當(dāng)添加胰島素時(shí)，IR的酪氨酸激酶活性變得更強(qiáng)(孔5&6)。添加本發(fā) 明的組合物可中止大部分胰島素誘導(dǎo)的IR酪氨酸激酶活性(孔7&8)6.6實(shí)施例6:本發(fā)明的組合物降低人體胰島素水平本實(shí)施例提供了本發(fā)明組合物對人個(gè)體的血液化學(xué)的影響。本發(fā)明的 組合物可顯著降低個(gè)體的禁食胰島素水平。在實(shí)驗(yàn)階段，人個(gè)體在一個(gè)月內(nèi)攝入按照實(shí)施例2制備的本發(fā)明組合 物。在對照相階段中，在一個(gè)月內(nèi)監(jiān)測未攝入本發(fā)明組合物的人個(gè)體。在這個(gè)月內(nèi)的3個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)采集血樣。使用ELSA測定法檢驗(yàn)每個(gè) 樣品(雙份)的禁食胰島素和IGF-1水平。實(shí)驗(yàn)階段的胰島素水平為1.38 +/- 0.04磺/ml。對照階段的胰島素水平 為2.02+/-0.07嬉/ml。本發(fā)明的組合物將個(gè)體的胰島素水平降低了 32%。實(shí)驗(yàn)階段的IGF-1水平為96 +/- 7.8 ng/ml。對照階段的IGF-1水平為 98 +/- 2.4 ng/ml 。本發(fā)明的組合物沒有明顯改變IGF-1水平。此外，在實(shí)驗(yàn)相和對照相過程中測量了個(gè)體的血液化學(xué)。顯然，本發(fā)明的組合物明顯降低了個(gè)體的尿酸(從9.4至7.3)、明顯降低了個(gè)體的甘油 三酯(從178至95)并輕微提高了個(gè)體的HDL(從37至44)。6.7實(shí)施例7:本發(fā)明的組合物誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞的凋亡 本實(shí)施例提供了本發(fā)明組合物對脂肪細(xì)胞的影響。在較低劑量下，本發(fā)明的組合物可抑制脂肪細(xì)胞內(nèi)的油滴形成。在較高劑量下，本發(fā)明的組合物可誘導(dǎo)凋亡。前脂肪細(xì)胞被誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞。在20磺/ml的劑量下，本發(fā)明實(shí) 施例2的組合物在6至8小時(shí)內(nèi)引起凋亡(參見圖4A)。前脂肪細(xì)胞祐:誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞。在2磺/ml的劑量下，本發(fā)明實(shí)施 例2的組合物可減少或消除脂肪細(xì)胞內(nèi)的油滴形成(參見圖4B)。6.8實(shí)施例8:本發(fā)明的組合物減少高脂肪飲食小鼠的體重增加本實(shí)施例提供了本發(fā)明的組合物對以高脂肪飲食喂養(yǎng)的小鼠的影響。 本發(fā)明的組合物可明顯減少實(shí)驗(yàn)期內(nèi)的體重增加。在實(shí)驗(yàn)前以高脂肪飲食喂養(yǎng)小鼠(11=6)以誘導(dǎo)肥胖。用運(yùn)載體和高脂肪 飲食治療對照小鼠。通過腹膜內(nèi)注射(3天)、然后是靜脈內(nèi)注射(7天)，用本 發(fā)明的組合物治療實(shí)驗(yàn)小鼠。對照小鼠的體重增加(平均16%)是實(shí)驗(yàn)小鼠的體重增加(平均7.69%)的 兩倍。在該實(shí)驗(yàn)內(nèi)，腹膜內(nèi)注射沒有減少體重增加，但靜脈內(nèi)注射的確明 顯減少了體重增加(圖5)。6.9實(shí)施例9:高脂肪飲食小鼠體重增加的減少對本發(fā)明組合物劑量的 依賴性本實(shí)施例提供了本發(fā)明組合物對以高脂肪飲食喂養(yǎng)的小鼠的影響。用 本發(fā)明的組合物治療相同的小鼠，然后停止處理，以觀察進(jìn)行和未進(jìn)行所 述治療的體重變化。本發(fā)明的組合物在施用過程中和施用后兩天內(nèi)明顯減 少了體重增力口。在實(shí)驗(yàn)前以高脂肪飲食喂養(yǎng)小鼠以誘導(dǎo)肥胖。用本發(fā)明的組合物通過 靜脈內(nèi)注射治療實(shí)驗(yàn)小鼠(8天)，然后在剩下的天數(shù)內(nèi)用對照靜脈內(nèi)注射治療。在施用本發(fā)明組合物的過程中或在至少隨后的兩天中，小鼠體重沒有 增加。在用本發(fā)明的組合物治療后幾天，小鼠恢復(fù)了體重增加(圖6)。6.10實(shí)施例10:本發(fā)明組合物在大鼠體內(nèi)的口服活性 本實(shí)施例提供了本發(fā)明組合物在實(shí)驗(yàn)大鼠體內(nèi)的口服活性。 通過每日口詢，用本發(fā)明的組合物(『3)或?qū)φ?水；n-3)治療大鼠。 如圖7所示，用本發(fā)明的組合物經(jīng)口服施用治療明顯減少了實(shí)驗(yàn)大鼠 的體重增加。6.11實(shí)施例ll:在用本發(fā)明組合物治療的大鼠中脂肪肝的減少 在脂肪肝中，脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)累積。簡單的脂肪肝通常不會(huì)損害肝。 當(dāng)脂肪占肝的至少10%時(shí)，患者就具有脂肪肝。它最常伴隨肥胖、胰島素 耐受和高脂血癥，這些都是代謝綜合征的成員。脂肪肝的可能解釋包括脂 肪從身體其它部分轉(zhuǎn)移到了肝中，或者從腸提供給肝的脂肪提取物增加。另一個(gè)解釋是由于肝不能將脂肪轉(zhuǎn)化為可以被消除的形式，所以脂肪才累 積下來。在2004年開展的研究暗示近1/3接受調(diào)查的美國成年人真有脂肪 肝。按實(shí)施例IO所述治療大鼠。用油滴的染色劑油紅O將肝樣品染色。如 圖8所示，用本發(fā)明組合物口服施用治療明顯減少了被治療大鼠肝內(nèi)的油滴沉積o6.12實(shí)施例12:本發(fā)明的組合物在60天內(nèi)減少人的體重 本實(shí)施例提供了在60天內(nèi)的長期人體體重減少。 在60天內(nèi)，人個(gè)體每天三次口服5mg本發(fā)明的組合物。如圖9所示， 個(gè)體在60天內(nèi)逐步減重16磅。個(gè)體沒有經(jīng)歷總的副作用。6.13實(shí)施例13:本發(fā)明的組合物在人個(gè)體體內(nèi)的有效劑量 本實(shí)施例提供了減少本發(fā)明組合物在實(shí)施例12的人個(gè)體體內(nèi)的劑量的影響。人個(gè)體才聶入3 ml(O.l mg/ml)、 10 ml(O.l mg/ml)和15 ml(O.l mg/ml)本發(fā) 明的組合物。在獨(dú)立的7天內(nèi)向相同的人個(gè)體施用每個(gè)劑量。如圖10所示， 15 ml劑量導(dǎo)致充分的體重減少，但3和10 ml劑量沒有。在該實(shí)驗(yàn)和該個(gè)體中，15 ml劑量比3 ml或10 ml劑量更有效。6.14實(shí)施例14:本發(fā)明組合物的每日兩次劑量減少人的體重 本實(shí)施例提供了當(dāng)實(shí)施例12的人個(gè)體每日兩次服用時(shí)的長期體重減少。在32天內(nèi)，人個(gè)體每天兩次口服7.5 ml(O.l mg/ml)本發(fā)明的組合物。 一個(gè)劑量在早晨攝入，第二個(gè)劑量在傍B免攝入。如圖11所示，個(gè)體在32 天內(nèi)減重了8磅。初始重量為144磅，最終重量為136磅。在該個(gè)體和該實(shí)驗(yàn)條件下，每日兩次的劑量與每日三次的劑量 一 樣有效。6.15實(shí)施例15:本發(fā)明的組合物減少人的體重如前面的實(shí)施例所述，本實(shí)施例提供了在總共四個(gè)月內(nèi)人的長期體重 減少。如前所述，劑量為3mg/天、10 mg/天或15 mg/天。如前所述，劑量 每天施用三次或每天施用兩次。在總共四個(gè)月的時(shí)間內(nèi)，人個(gè)體(年齡55歲)減重了29磅。他的最終身 體脂肪為16%(22.4磅)，他的最終瘦體重為83.6%(114.6磅)。血液化學(xué)顯示 減少了尿酸(9.4至7.3)、總膽固醇(256至225)和甘油三酯(178至126)。在進(jìn)一步的研究中，六名人個(gè)體中的五名在施用本發(fā)明的組合物時(shí)體 重減少。圖12提供了體重減少相對體表指數(shù)增加。具有正?；虻虰MI的個(gè) 體響應(yīng)較少，而具有較高BMI的個(gè)體顯示出更大的響應(yīng)。6.16實(shí)施例15:本發(fā)明的組合物減少人的體重本實(shí)施例提供了人個(gè)體在施用本發(fā)明組合物后的血液葡萄糖水平減少。在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，個(gè)體在分別的一天內(nèi)攝入15 ml(O.l mg/ml)本發(fā)明的組 合物或?qū)φ?。?0分鐘后，個(gè)體攝入15g葡萄糖。在140分鐘內(nèi)監(jiān)測血液 葡萄糖。如圖13A所示，本發(fā)明的組合物明顯降低了葡萄糖^^聶入后的葡萄糖峰值。在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中，個(gè)體完成了進(jìn)餐。在分別的一天內(nèi)在進(jìn)餐一小時(shí)后， 個(gè)體攝入15 ml(O.l mg/ml)本發(fā)明的組合物或?qū)φ?。在攝入組合物或?qū)φ蘸?140分鐘內(nèi)監(jiān)測血液葡萄糖。如圖13B所示，在施用本發(fā)明的組合物后， 個(gè)體的血液葡萄糖水平更快地恢復(fù)到了基線。在第三個(gè)實(shí)驗(yàn)中，個(gè)體禁食過夜。在從上午6點(diǎn)開始的240分鐘內(nèi)監(jiān) 測血液葡萄糖。在上午8點(diǎn)11分，個(gè)體攝入15 ml(O.l mg/ml)本發(fā)明的組合 物。如圖13C所示，本發(fā)明的組合物暫時(shí)降低了禁食狀態(tài)下個(gè)體的基線血 液葡萄糖水平。因此，本發(fā)明的組合物可以減少在用蔗糖挑戰(zhàn)后的血液葡萄糖峰值， 可以加速使進(jìn)餐后的血液葡萄糖恢復(fù)到基線，并可以至少暫時(shí)減少禁食狀 態(tài)下的基線血液葡萄糖水平。本說明書引用的所有公開、專利和專利申請都被納入本文作為參考， 如同具體和單獨(dú)地指示每個(gè)單獨(dú)的公開或?qū)＠暾埍患{入本文作為參考一 樣。盡管為了清楚理解的目的，已經(jīng)通過說明和舉例詳述地描述了前面的 發(fā)明，但通過本發(fā)明的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易地明白，在不背離所 附權(quán)利要求書的精神或范圍的情況下，可以對其進(jìn)行某些改變和修改。
權(quán)利要求
1.組合物，其包含誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡治療有效量的載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳蛋白，和可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
2. 權(quán)利要求l的組合物，其為膳食補(bǔ)充劑。
3. 權(quán)利要求l的組合物，其為食品添加劑或食品組合物。
4. 權(quán)利要求l的組合物，其為藥物組合物。
5. 權(quán)利要求l的組合物，其為營養(yǎng)制品組合物。
6. 權(quán)利要求l的組合物，其中所述經(jīng)蛋白酶消化的載鋅血清蛋白或乳 蛋白選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵 蛋白和a-胎蛋白。
7. 權(quán)利要求l的組合物，其包含選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋白、 a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白的兩種經(jīng)蛋白酶消化的載鋅 血清蛋白或乳蛋白。
8. 權(quán)利要求l的組合物，其包含選自a-2-HS-糖蛋白、a-l-酸糖蛋白、 a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白的三種經(jīng)蛋白酶消化的載鋅血清蛋白或乳蛋白。
9. 權(quán)利要求l的組合物，其中所述經(jīng)蛋白酶消化的載鋅血清蛋白或乳 蛋白小于10千道爾頓。
10. 權(quán)利要求l的組合物，其中所述經(jīng)蛋白酶消化的載鋅血清蛋白或乳 蛋白小于3千道爾頓。
11. 權(quán)利要求l的組合物，其基本上不包含大于10千道爾頓的蛋白質(zhì)片段。
12. 權(quán)利要求l的組合物，其基本上不包含大于3千道爾頓的蛋白質(zhì)片段。
13. 對有需要的個(gè)體治療或預(yù)防肥胖或超重的方法，該方法包含向所述 個(gè)體施用有效量的權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物的步驟。
14. 權(quán)利要求13的方法，其中所述有效量足以誘導(dǎo)所述個(gè)體的脂肪細(xì) 胞的凋亡。
15. 權(quán)利要求13的方法，其中所述個(gè)體是人，所述有效量至少約為0.02 mg/kg。
16. 權(quán)利要求13的方法，其中所述個(gè)體是人，所述有效量最多為約4 mg/kg個(gè)體體重。
17. 權(quán)利要求13的方法，其中所述個(gè)體是人，所述有效量為約0.02 mg/kg至約4 mg/kg。
18. 權(quán)利要求13的方法，其中所述個(gè)體是人，所述有效量為約1 mg/天至約400 mg/天。
19. 在有需要的個(gè)體中減少體重增加或誘導(dǎo)體重減少的方法，該方法包含向所述個(gè)體施用有效量的權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物的步驟。
20. 誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡的方法，該方法包含使脂肪細(xì)胞與有效量的權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物接觸的步驟。
21. 調(diào)節(jié)表皮生長因子受體的方法，該方法包含使表皮生長因子受體與有效量的權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物接觸的步驟。
22. 調(diào)節(jié)胰島素受體的方法，該方法包括使胰島素受體與有效量的權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物接觸的步驟。
23. 制備權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物的方法，該方法包括如下步驟a. 使所述血清蛋白或乳蛋白與螯合劑接觸；b. 除去所述螯合劑；c. 使所述血清蛋白或乳蛋白與鋅接觸；d. 使所述血清蛋白或乳蛋白與所述蛋白酶接觸；和e. 使所迷血清蛋白或乳蛋白與所述栽體、賦形劑或稀釋劑接觸。
24. 權(quán)利要求21的方法，其還包括將所述血清蛋白或乳蛋白與大于10 千道爾頓的分子分離的步驟。
25. 權(quán)利要求21的方法，其還包括將所述血清蛋白或乳蛋白與大于3 千道爾頓的分子分離的步驟。
26. 權(quán)利要求21的方法，其中所述血清蛋白或乳蛋白在鹽水溶液中， 濃度為40礮。
27. 權(quán)利要求21的方法，其中所述螯合劑為約25至約50 mM的EDTA 或EGTA。
28. 權(quán)利要求21的方法，其中通過過濾或透析除去所述螯合劑。
29. 權(quán)利要求21的方法，其中所述鋅為約250mM乙酸鋅的形式。
30. 權(quán)利要求21的方法，其中所述蛋白酶為木瓜蛋白酶。
31. 權(quán)利要求21的方法，其中所述血清蛋白或乳蛋白選自a-2-HS-糖蛋 白、a-l-酸糖蛋白、a-l-抗胰蛋白酶、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和a-胎蛋白。
32. 對有需要的人進(jìn)行治療或預(yù)防肥胖或超重的方法，該方法包括向人 施用組合物的步驟，該組合物包含約0.02mg/kg至約4mg/kg載鋅的、經(jīng)蛋 白酶消化的血清蛋白或乳蛋白，以及藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
33. 載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳蛋白在制備治療或預(yù)防個(gè)體 肥胖或超重的藥物中的用途。
34. 權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳 蛋白在制備治療或預(yù)防個(gè)體肥胖或超重的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防例如超重或肥胖的組合物和方法。所提供的組合物包含載鋅的、經(jīng)蛋白酶消化的血清蛋白或乳蛋白。以治療有效的量施用組合物以預(yù)防或預(yù)防例如超重或肥胖。
文檔編號(hào)C07K1/00GK101228178SQ200680022824
公開日2008年7月23日 申請日期2006年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月26日
發(fā)明者大衛(wèi)·蔡 申請人:阿姆布利克斯生物科技公司