專利名稱：用作免疫調節(jié)藥和抗癌藥的雷公藤內酯醇內酯環(huán)衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用作免疫抑制藥，抗炎藥和抗癌藥的化合物。
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背景技術：
免疫抑制藥廣泛用于治療自體免疫疾病，和治療或預防移植排斥，包括治療移植物對抗宿主疾病(GVHD)。常見的免疫抑制藥包括硫唑嘌呤、皮質類固醇、環(huán)磷酰胺、氨甲蝶呤、6-巰基嘌呤、長春新堿和環(huán)孢霉素A?？偟膩碚f，這些藥物中沒有一種是完全有效的，且大多數受到嚴重毒性的限制。例如，環(huán)孢霉素A，是一種廣泛使用的藥物，對腎臟有明顯的毒性。此外，有效治療需要的劑量會提高患者對各種機會性侵入病菌感染的敏感性。
已經鑒定出從中藥植物雷公藤(Tripterygium wilfordii)(TW)獲得的化合物雷公藤內酯醇及其特定的衍生物和前體藥物具有免疫抑制活性，例如，治療自體免疫疾病和治療或預防移植排斥，包括治療移植物對抗宿主疾病(GVHD)。參見，例如，共有的U.S.專利No.5,962,516(免疫抑制化合物和方法)、5,843,452(免疫治療組合物和方法)、5,759,550(抑制異種移植排斥的方法)、5,663,335(免疫抑制化合物和方法)、5,648,376(免疫抑制二萜化合物)和6,150,539(具有高度水溶性的雷公藤內酯醇前體藥物)，將這些專利引入作為參考。還已經報道了雷公藤內酯醇及其特定的衍生物和前體藥物具有抗癌活性；參見，例如，Kupchan等，1972，1977，以及共有的U.S.專利No.6,620,843(2003年9月)，在此將其引入作為參考。
盡管雷公藤內酯醇的衍生物和前體藥物已經在如藥物動力學或生物分布方面具有了相對于天然雷公藤內酯醇的優(yōu)點，但是，由于例如脂質或水溶解度的差異，或由于作為前體藥物的活性，雷公藤內酯醇衍生物本身的生物活性通常明顯低于天然雷公藤內酯醇。

發(fā)明內容
一方面，本發(fā)明提供了用于免疫抑制、抗炎和抗癌治療的化合物?；衔锸怯赏ㄊ絀表示的雷公藤內酯醇的衍生物 其中R1是烷基、烯基、炔基、芳基烷基、芳基、芳基?；駽(OH)R4R5，
其中R4和R5獨立地是氫、烷基、環(huán)烷基、烯基和環(huán)烯基，其中任何一個，除了氫以外，都可以由烷氧基、羥基、酰氧基或芳基取代；CR2R3是CHOH或C＝O，和基團X中的至多一個是羥基，且剩余的基團X是氫。
在結構I的優(yōu)選實施方案中，CR2R3是CHOH，優(yōu)選具有β-羥基構象。在進一步的實施方案中，每個基團X是氫。
優(yōu)選地，結構I化合物中存在的每個所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基和酰氧基部分包括至多四個碳原子，每個所述的環(huán)烷基和環(huán)烯基部分包括至多六個碳原子，且每個所述的芳基部分是單環(huán)和非雜環(huán)的(即，由氫和碳原子組成)。
在結構I選定的實施方案中，R1是烷基、烯基或C(OH)R4R5，其中優(yōu)選地，每個R4和R5獨立地是氫、烷基或烯基。在進一步的實施方案中，R1是烷基，優(yōu)選C1-C3烷基，或羥基烷基。在一個實施方案中，R1是甲基。另一個實施方案中，R1是芳基?；?，優(yōu)選苯甲?；?C(O)C6H5)。
在相關方面，本發(fā)明提供了結構II的化合物 其中每個R6獨立地選自烷基、烯基、炔基或芳基；CR2R3是CHOH或C＝O；基團X中的至多一個是羥基，且剩余的基團X是氫。
在結構II的優(yōu)選實施方案中，CR2R3是CHOH，優(yōu)選具有β-羥基構象。在進一步的實施方案中，每個基團X是氫。
優(yōu)選地，結構II化合物中存在的每個所述的烷基、烯基和炔基部分都包括至多四個碳原子，且每個所述的芳基部分是單環(huán)和非雜環(huán)的；例如，取代或未取代的苯基。
在結構II選定的實施方案中，每個R6是芳基；優(yōu)選地，每個R6是未取代的苯基。
在另一方面，本發(fā)明提供了影響患者免疫抑制的方法，通過將有效量的具有如上所述的結構I或II的化合物給藥到需要治療的患者。進一步的方面中，本發(fā)明提供了在細胞中誘導凋亡的方法，其可用于抗增生性治療，尤其是用于抗癌治療。根據該方法，將細胞與有效量的具有如上所述的結構I和II的化合物接觸?；蛘?，本發(fā)明包括結構I或II的化合物用于影響免疫抑制或用于在細胞內誘導凋亡的用途，或用于制備影響免疫抑制或誘導細胞凋亡的藥物的用途。通常在藥物學上可接受的載體中來提供所述化合物。方法和用途的特定實施方案可以使用如上所述的通式I和II的任一特定實施方案。
當結合附圖閱讀以下的發(fā)明詳述時，本發(fā)明的上述和其他目的和特征將變得更全面清楚。


圖1顯示了本發(fā)明的化合物19-甲基雷公藤內酯醇(命名為PG795)，與雷公藤內酯醇相比較(命名為PG490)，在Jurkat細胞中的細胞毒性效應(實施例3)。
圖2顯示了本發(fā)明的化合物18-脫氧-19-脫氫-18-苯甲酰氧-19-苯甲酰雷公藤內酯醇(命名為PG796)，與雷公藤內酯醇14-琥珀酸酯(命名為PG490-88)相比較，在Jurkat細胞中的細胞毒性效應，有和沒有在小鼠或人血清中預孵育(實施例3)。
圖3顯示了本發(fā)明的化合物19-甲基雷公藤內酯醇(命名為PG795)，與雷公藤內酯醇相比較，對Jurkat細胞中對IL-2產生的抑制(實施例4)；和圖4顯示了PG796，與雷公藤內酯醇14-琥珀酸酯相比較，對Jurkat細胞中對IL-2產生的抑制，有和沒有在小鼠或人血清中預孵育(實施例4)。
發(fā)明詳述I.定義“烷基”指的是含有碳和氫的飽和非環(huán)單價基團，其可以是直鏈或支鏈的。烷基的實例是甲基、乙基、正丁基、叔丁基、正庚基和異丙基。“環(huán)烷基”指的是含有碳和氫的完全飽和的環(huán)狀單價基團，其可以進一步由烷基取代。環(huán)烷基的實例是環(huán)丙基、甲基環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、乙基環(huán)戊基和環(huán)己基?！暗图壨榛敝傅氖蔷哂?個至6個碳原子的基團，優(yōu)選具有1至4個碳原子。
“烯基”指的是含有碳和氫的非環(huán)單價基團，其可以是直鏈或支鏈的，且其含有至少一個碳-碳雙鍵(C＝C)?！叭不敝傅氖呛刑己蜌涞姆黔h(huán)單價基團，其可以是直鏈或支鏈的，且其含有至少一個碳-碳三鍵(C≡C)?！暗图壪┗被颉暗图壢不边@樣的基團具有二至六個碳原子，優(yōu)選具有二至四個碳原子。
“?；敝傅氖蔷哂?(C＝O)R形式的基團，其中R是烷基(烷基?；?或芳基(芳基?；?。“酰氧基”指的是具有-O(C＝O)R形式的基團。
“芳基”指的是具有單環(huán)(例如，苯)或兩個稠合環(huán)(例如，萘基)的單價芳香族基團。如在此所用的，芳基優(yōu)選是單環(huán)和碳環(huán)的(非雜環(huán))，例如，苯(苯基)環(huán)或取代的苯環(huán)?！叭〈摹币馑际且粋€或多個氫由基團如鹵素(例如，氟、氯或溴)、低級烷基、硝基、氨基、低級烷基氨基、羥基、低級烷氧基或鹵代(低級烷基)所取代。
“芳基烷基”指的是烷基，優(yōu)選低級(C1-C4，更優(yōu)選C1-C2)烷基，進一步由芳基取代的取代基；實例是芐基和苯乙基。
“雜環(huán)”指的是非芳香族環(huán)，優(yōu)選5-至7-元環(huán)，其環(huán)原子選自碳、氮、氧或硫。優(yōu)選地，環(huán)原子包括3至6個碳原子。這樣的雜環(huán)包括，例如，吡啶、哌啶、哌嗪和嗎啉。
為了本發(fā)明公開的目的，將以下編號的略圖用于雷公藤內酯醇和雷公藤內酯醇衍生物。
II.雷公藤內酯醇衍生物本發(fā)明的化合物是雷公藤內酯醇或羥基化雷公藤內酯醇的衍生物，源自呋喃(內酯)環(huán)的烷基化或?；?，如下所述。
更具體地，本發(fā)明提供了由結構I表示的化合物 其中R1是烷基、烯基、炔基、芳基烷基、芳基、芳基?；駽(OH)R4R5，其中R4和R5獨立地是氫、烷基、環(huán)烷基、烯基和環(huán)烯基，其中任何一個，除了氫以外，可以由烷氧基、羥基、酰氧基或芳基取代；CR2R3是CHOH或C＝O，和基團X中的至多一個是羥基，且剩余的基團X是氫。
結構I的優(yōu)選實施方案中，CR2R3是CHOH，優(yōu)選具有β-羥基構象。
優(yōu)選地，每個X是氫；然而，在選定的實施方案中，實際上所示基團X之一是羥基。羥基取代的優(yōu)選位置包括碳2和16，如以上編號略圖中所示的。
優(yōu)選地，結構I化合物中存在的每個所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基和酰氧基部分包括至多四個碳原子，每個所述的環(huán)烷基和環(huán)烯基部分包括至多六個碳原子，且每個所述的芳基部分是單環(huán)和非雜環(huán)的。
在結構I的選定實施方案中，R1是烷基、烯基、炔基、芳基烷基、芳基或C(OH)R4R5，優(yōu)選為烷基、烯基或C(OH)R4R5，其中優(yōu)選地，每個R4和R5獨立地是氫、烷基或烯基。在進一步的實施方案中，R1是烷基，優(yōu)選C1-C3烷基，或羥基烷基。在一個實施方案中，其包括在此命名為PG795的化合物，R1是甲基。在另一實施方案中，其包括化合物19-苯甲酰雷公藤內酯醇，R1是芳基?；?，優(yōu)選為苯甲?；?。
在相關方面中，本發(fā)明提供了結構II的化合物 其中每個R6獨立地選自烷基、烯基、炔基或芳基；CR2R3是CHOH或C＝O；基團X中的至多一個是羥基，且剩余的基團X是氫。
在結構II的優(yōu)選實施方案中，CR2R3是CHOH，優(yōu)選具有β-羥基構象。優(yōu)選地，每個X是氫；然而，在選定的實施方案中，實際上所示的基團X之一是羥基。羥基取代的優(yōu)選位置包括碳2和16，如以上編號略圖中所示的。
優(yōu)選地，結構II化合物中存在的每個所述的烷基、烯基、炔基部分包括至多四個碳原子，且每個所述的芳基部分是單環(huán)和非雜環(huán)的；例如，取代的或非取代的苯基。
在結構II的選定實施方案中，每個R6是芳基；優(yōu)選地，每個R6是苯基。這包括在此命名為PG796的化合物，其中每個R6是未取代的苯基。
A.制備本發(fā)明的化合物可以從雷公藤內酯醇或其羥基化衍生物制得。后者包括雷公藤羥基內酯醇(2-羥基雷公藤內酯醇)和16-羥基雷公藤內酯醇，其和雷公藤內酯醇一起，可以從中藥植物雷公藤(Tripterygiumwilfordii)(TW)的根木質部或從其他已知來源獲得。所述TW植物發(fā)現于中國的福建省和其他南部省份；TW植物原料通常在中國可以獲得，或在美國通過商業(yè)來源獲得。制備雷公藤內酯醇、雷公藤羥基內酯醇和16-羥基雷公藤內酯醇的方法是本領域已知的并描述于，例如，Kupchan等(1972，1977)；Lipsky等(1994)；Pu等(1990)；和Ma等(1992)。
可以通過二氧化硒氧化雷公藤內酯醇來制得雷公藤內酯醇的5-羥基衍生物，如共有的美國臨時申請系列號no.60/532,702中所述的那樣。簡而言之，在通常的制備中，將雷公藤內酯醇溶液和約2.2當量在二噁烷中的二氧化硒在約90℃在N2下攪拌72小時。
用短刺小克銀漢霉菌(Cunninghamella blakesleana)孵育雷公藤內酯醇，如L.Ning等(Tetrahdron 59(23)4209-4213，2003)所述的那樣，會產生上述羥基化衍生物以及1β-羥基雷公藤內酯醇、15-羥基雷公藤內酯醇(triptolidenol)、19α-羥基雷公藤內酯醇和19β-羥基雷公藤內酯醇。
可以通過將羥基保護的雷公藤內酯醇和強堿如LDA反應來制備通式I的化合物，接著將中間產物烯醇化物的烷基化。如以下的方案1中所示的，其中碘甲烷用于烷基化，還可以形成異構的呋喃醇鹽。如實施例1中所述的，將這些化合物分離并通過與氯化汞反應來分別去保護。
以下的方案說明了使用溴化烯丙基作為烷化劑，來獲得通式I的化合物，其中R1＝烯丙基(-CH2CH＝CH2)。相似地，使用溴化芐基來獲得通式I的化合物，其中R1＝芐基(-CH2C6H5)。
如下所示，中間產物烯醇化物與酮的反應，可以用于產生醇取代物；即，其中R1是C(OH)R4R5的通式I的化合物。
可以通過使中間產物烯醇化物與過量的?；噭┤珲；u化合物反應來制備通式II化合物，如以下的方案中所示。在這種情況中，雙取代的化合物可以用酸水溶液水解來產生單衍生的共軛的烯酮。
B.生物活性如實施例3中所述的，使用標準的MTT測試來評價通式I化合物19-甲基雷公藤內酯醇(命名為PG795)和通式II化合物18-脫氧-19-脫氫-18-苯甲酰氧-19-苯甲酰雷公藤內酯醇(命名為PG796)的細胞毒性活性。如實施例4中所述的，用標準的IL-2抑制試驗來評價這些化合物的免疫抑制活性。這些試驗的結果顯示于附圖1-4中。
PG795在兩個試驗中都顯示出明顯的活性，如附圖1和3所示，盡管活性低于雷公藤內酯醇(附圖中命名為PG490)。
PG796在兩個試驗中顯示出高于已知前體藥物雷公藤內酯醇14-琥珀酸酯(命名為PG490-88)的活性水平，如附圖2和4所示。特別地，在這些試驗中，在人血清孵育的雷公藤內酯醇14-琥珀酸酯的活性比在小鼠血清中孵育的雷公藤內酯醇14-琥珀酸酯的活性低得多，而在兩種情況中PG796顯示出高的、且基本上相等的活性。(孵育是期望能使雷公藤內酯醇14-琥珀酸酯轉化成雷公藤內酯醇，并將PG796轉化成單衍生的化合物，19-苯甲酰雷公藤內酯醇，如以上的合成方案中所示)。
III.治療組合物含有本發(fā)明的雷公藤內酯醇衍生物的制劑可以采用固體、半固體、凍干粉或液體劑型的形式，如片劑、膠囊、粉末、持續(xù)釋放的制劑、溶液、懸浮液、乳濁液、膏劑、洗液或氣溶膠，優(yōu)選為適于精確劑量簡單給藥的單位劑型形式。組合物通常包括常規(guī)的藥物學載體或賦性劑，并可以另外包括其他藥劑、載體或佐劑。
優(yōu)選地，組合物包括約0.5重量％至75重量％的一種或多種本發(fā)明的化合物，剩余的由合適的藥物學賦性劑構成。對于口服給藥，這樣的賦形劑包括藥物級的麥芽糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、明膠、蔗糖、碳酸鎂等。如果需要，所述組合物還可以含有少量的無毒輔助物質如潤濕劑、乳化劑或緩沖劑。
可以將所述組合物口服、經皮或非腸道給藥至患者，例如，通過靜脈內、皮下、腹膜內或肌內注射。對于采用口服液體制劑形式的使用，可以將所述組合物制成溶液、懸浮液、乳濁液或糖漿，以液體形式或適于在水或生理鹽水中水合的干燥形式來提供。對于非腸道給藥，用于非腸道給藥的注射組合物通常在合適的靜脈內溶液如無菌生理鹽溶液中含有雷公藤內酯醇衍生物。
通過將雷公藤內酯醇衍生物(約0.5％至約20％)和任選的藥物學佐劑溶解或分散于藥物學上可接受的載體中，如例如，鹽水、葡萄糖水溶液、甘油或乙醇中，形成溶液或懸浮液來制備液體組合物。
所述化合物還可以通過吸入給藥，以氣溶膠顆粒的形式，固體或液體，優(yōu)選可吸入的尺寸。這樣的顆粒足夠小使得在吸入時通過口腔和喉并進入支氣管和肺泡。通常，大小為約1至10微米，且優(yōu)選小于約5微米的顆粒是可吸入的。用于吸入的液體組合物包括分散于含水載體如無菌的無熱原鹽水或無菌的無熱原水中的活性劑。如果需要，可以將組合物與推進劑混和以促進組合物的噴霧并形成氣溶膠。
制備這樣劑型的方法是已知的或對本領域技術人員而言是顯而易見的，例如，參見Remingtn’s Pharmaceutical Sciences(第20版，LippincottWilliams & Wilkins，2000)。待被給藥的組合物將含有有效量的選定化合物以能在患者體內產生免疫抑制或在靶細胞內導致凋亡。
例如，如Phnchagnula等(2000)所述的，藥劑的分配系數或logP可以影響其用于各種給藥途徑的適用性，包括口服生物利用率。在此所述的化合物(通過使一個或多個羥基經氟取代)，被期望具有高于母體化合物雷公藤內酯醇的logP值，使得它們對于口服利用率來說是更好的候選物。
IV.免疫調節(jié)和抗炎治療因此，本發(fā)明包括本發(fā)明的化合物作為免疫抑制藥的用途，例如，作為移植方法的輔助或在自體免疫疾病治療中用途。本發(fā)明的化合物能有效抑制細胞或生物體中的免疫應答，如細胞因子的產生。如附圖3-4中所示的，通式I化合物19-甲基雷公藤內酯醇(命名為PG795)，和通式II化合物18-脫氧-19-脫氫-18-苯甲酰氧-19-苯甲酰雷公藤內酯醇(命名為PG796)，以劑量依賴性的方式抑制Jurkat細胞中的IL-2產生(參見實施例4)。
已經證明免疫調節(jié)異常存在于多種自體免疫和慢性炎癥疾病中，包括全身性紅斑狼瘡、慢性類風濕性關節(jié)炎、I型和II型糖尿病防護炎癥性腸病、膽汁性肝硬化、葡萄膜炎、多發(fā)性硬化和其他疾病如節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結腸炎、類天皰瘡、類肉狀瘤病、牛皮癬、魚鱗病、格雷夫斯眼病和哮喘。盡管這些病癥中每一種的基礎發(fā)病機理差別很大，但它們具有相同的各種自體抗體和自我反應淋巴細胞的表象。這樣的自我反應性可能部分是因為失去了自我平衡控制，正常免疫系統(tǒng)在該平衡控制下運行。
相似地，從含有成熟淋巴細胞的供體組織源移植骨髓或移植其他造血干細胞后，經轉移的淋巴細胞將宿主組織抗原識別為外源的。這些細胞變成激活的并發(fā)起對宿主(移植對宿主應答)致命的攻擊。此外，器官移植后，宿主淋巴細胞識別器官移植的外源組織抗原并引起細胞和抗體介導的免疫應答(宿主對移植應答)，導致移植破壞和排斥。
自體免疫或排斥反應的一個結果是由炎癥細胞及其釋放的介質引起的組織損傷。抗炎藥物如NSAID主要通過阻斷這些介質的效果或分泌來起作用，但沒有改變疾病的免疫基礎。另一方面，細胞毒素藥，如環(huán)磷酰胺，以這樣的非特異性方式起作用，切斷了正常的和自體免疫應答。實際上，用這樣的非特異性免疫抑制藥治療的患者很可能和死于自體免疫疾病一樣死于感染。
本發(fā)明的組合物可用于該應用中，因為已經證明雷公藤內酯醇及其前體藥物和其他衍生物是有效的，例如，用在免疫抑制治療中，如治療自身免疫疾病，預防移植排斥，或治療或預防移植對宿主疾病(GVHD)。參見，例如，共有的美國專利No.6,150,539，在此將其引入作為參考。雷公藤內酯醇和本發(fā)明的衍生物也可用于治療其他炎癥疾病，如外傷炎癥，和降低男性生育力。
組合物可用于抑制來自不相容人供體的實體器官移植、組織移植和細胞移植的排斥，因此延長移植物的存活和功能，并使接受者存活。這種用途包括，但不限于，實體器官移植(如心臟，腎臟和肝臟)、組織移植(如皮膚、小腸、胰腺、生殖腺、骨和軟骨)和細胞移植(如來自胰腺、腦和神經組織、肌肉、皮膚、骨、軟骨和肝臟的細胞)。
組合物還可用于抑制異種移植(種間)排斥；即，預防來自非人動物的實體器官移植、組織移植和細胞移植的排斥，不管是來自天然構成或經生物工程化(遺傳操縱)來表達人基因的、RNA、蛋白質、肽或其他非天然的異種基因分子，或經生物工程化使動物的天然基因、RNA、蛋白質、肽或其他正常表達分子缺乏表達。本發(fā)明還包括用如上所述的組合物來延長這樣的來自非人動物的實體器官移植物、組織移植物或細胞移植物存活的用途。
本發(fā)明還包括了治療自體免疫疾病或具有自體免疫表征的疾病的方法，如艾迪生氏病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫甲狀腺炎、節(jié)段性回腸炎、糖尿病(I型)、格雷夫斯氏病、吉巴綜合征、全身性紅斑狼瘡(SLE)、狼瘡腎炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、牛皮癬、夏科氏肝硬變、類風濕性關節(jié)炎和葡萄膜炎、哮喘、動脈硬化癥、Hashimoto’s甲狀腺炎、過敏性腦脊髓炎、血管球性腎炎和各種過敏癥。
本發(fā)明更多的用途包括治療和預防炎癥和超增生皮膚疾病和免疫介導的皮膚表征疾病，如牛皮癬、特應性皮炎、天皰瘡、蕁麻疹、皮膚嗜曙紅細胞增多、痤瘡和脫發(fā)；各種眼病如結膜炎、葡萄膜炎、角膜炎和結節(jié)??；粘膜和血管的炎癥如胃潰瘍，由缺血性病癥和血栓形成引起的脈管損傷、缺血性腸病、炎癥腸病和引起壞死的小腸結腸炎；腸炎癥/過敏癥如腹腔病和潰瘍性結腸炎；腎病如間質性腎炎、古德帕斯丘綜合征、溶血-尿毒癥綜合征和糖尿病性腎??；造血疾病，如先天性血小板減少癥紫癜和自體免疫溶血性貧血；皮膚疾病如皮肌炎和皮膚T細胞淋巴瘤；循環(huán)系統(tǒng)疾病如動脈硬化和動脈粥樣硬化；腎病如缺血性急性腎機能不全和慢性腎機能不全；和貝赫切特病。
本發(fā)明的組合物和方法還可用于治療炎癥疾病如哮喘，內源性和外因性的表征，例如，支氣管哮喘、過敏性哮喘、內源性哮喘、外因性氣喘和粉塵哮喘，尤其是慢性或長期形成的哮喘(例如，哮喘晚期和氣道超響應性)。所述組合物和方法還可以用于治療其他炎癥疾病，包括外傷炎癥、拉姆病中的炎癥、慢性支氣管炎(慢性感染性肺病)、慢性竇炎與急性呼吸道窘迫綜合征相關的膿毒病和肺結節(jié)病。對于呼吸道病癥如哮喘的治療，優(yōu)選通過吸入給藥組合物，但也可以使用任何常規(guī)的給藥途徑。
治療自體免疫病癥中，以定期方式，例如每周1-2次，并以足以減輕癥狀和提高患者舒適度的劑量水平將組合物給藥到患者。對于治療類風濕性關節(jié)炎，尤其是，可以通過靜脈內注射或通過直接注射至受到影響的關節(jié)中來給藥所述組合物。在患者疾病癥狀發(fā)作后的幾周時間內，以至少24小時的重復間隔來治療患者。給藥的劑量優(yōu)選為1-25mg/kg患者體重每天，對于非腸道給藥優(yōu)選用較低劑量，對于口服給藥，優(yōu)選用較高劑量。根據本領域已知的方法通過常規(guī)實驗來測定最佳劑量。
對于移植物排斥的治療，該方法特別用于治療心臟、腎臟、肝臟、細胞和骨髓移植的排斥，還可以用于治療GVHD。治療通常開始于圍手術期(perioperatively)，在外科移植手術前不久或手術后不久，并以每日的劑量給藥方案繼續(xù)治療，持續(xù)至少幾周的時間，用于治療急性移植排斥。在治療階段的過程中，對患者定期測試免疫抑制水平，例如，通過涉及異源淋巴細胞的混合淋巴細胞反應，或通過移植組織的活體切片檢查。
此外，可以長期給藥所述組合物來預防移植排斥，或治療晚期移植物排斥的急性發(fā)作。如上，給藥的劑量優(yōu)選為1-25mg/kg患者體重每天，對于非腸道給藥優(yōu)選較低劑量，對于口服給藥優(yōu)選較高劑量。劑量可以適當提高或降低，取決于患者的應答，和在治療階段內，患者抵抗排斥的能力。
治療或預防移植對宿主疾病中(該疾病是由將配對或錯配的骨髓、脾細胞、胚胎組織、臍血或調動的或其他收集的干細胞移植至接受者體內而引起的)，劑量優(yōu)選為0.25-2mg/kg體重/天，優(yōu)選為0.5-1mg/kg/天，通過口服或非腸道來給藥。
本發(fā)明范圍內還包括含有通式I的化合物和一種或多種常規(guī)免疫抑制藥的聯(lián)合治療。本發(fā)明范圍內的這些免疫抑制藥包括，但不限于，Imurek(硫唑嘌呤鈉)、白瑞夸爾鈉，SpanidinTW(gusperimus三鹽酸化物，也稱為脫氧精液蛋白)、咪唑立賓(也稱為布雷青霉素)，Cellcept(霉酚酸莫啡酯)、Neoral(環(huán)孢霉素A；還以商標Sandimmune以不同的制劑形式銷售)，PrograftTM(血流譜，也稱為FK-506)，Rapimmune(sirolimus，也稱為雷帕霉素)，來氟米特(也稱為HWA-486)，Zenapax，糖皮質激素，如氫化潑尼松及其衍生物，抗體如正交克隆(OKT3)，和antithymyocyte球蛋白如胸腺球蛋白。當同時與另一種免疫抑制藥物用于如上所述的免疫抑制治療時，所述化合物用作增效劑。因此，常規(guī)免疫抑制藥物，如上所述那些可以以遠遠低于單獨給藥的量來給藥化合物(例如，標準劑量的20％至50％)。或者，本發(fā)明化合物和免疫抑制藥物的給藥量是使得所得到的免疫抑制效果高于以相同劑量單獨使用該藥物和本發(fā)明化合物所得到的免疫抑制效果。通常，在至少2周的時間段內以規(guī)則的間隔給藥免疫抑制藥物和增效劑。
本發(fā)明的組合物也可以與常規(guī)的一種或多種抗炎藥一起給藥，其中，該藥物或藥物的給藥量本身對于誘導適當的抑制或抑制炎癥是無效的。
通過使用本領域已知的已建立的動物模型來評價化合物的體內免疫抑制活性。這樣的測試可用于評價免疫抑制化合物的相對功效，及估計免疫抑制治療的適當劑量。這些測試包括例如由Ono和Lindsey(1969)所述的充分表征的同種異體移植的大鼠模型系統(tǒng)，其中將移植的心臟與同種接受動物的腹部大血脈相連，通過心臟在受體動物中搏動的能力來測定移植心臟的生存能力。Wang(1991)和Murase(1993)描述了異種移植模型，其中受體動物為不同的種系。評價對抗GVHD功效的模型包括給正常F1小鼠注射親本脾細胞；小鼠產生GVHD綜合征，其特征為脾腫大和免疫抑制(Komgold，1978；Gleichmann，1984)。從單個的脾制備單細胞懸浮液，并在伴刀豆球蛋白A存在和不存在下建立微孔培養(yǎng)物來評價致有絲分裂響應的程度。
V.抗癌治療如附圖1-2所示，通式I化合物19-甲基雷公藤內酯醇(命名為PG795)，和通式II化合物18-脫氧-19-脫氫-18-苯甲酰氧-19-苯甲酰雷公藤內酯醇(命名為PG796)，每一個以劑量依賴性的方式對Jurkat細胞是細胞毒性的(參見實施例2)。因此本發(fā)明包括本發(fā)明的化合物作為細胞毒素劑的用途，尤其是用于治療癌癥。如在此所用的，“癌癥”指的是在哺乳動物尤其是人類中發(fā)現的所有類型的癌癥或腫瘤或惡性腫瘤，包括白血病、肉瘤、癌和黑素瘤。
術語“白血病”泛指血液形成器官的累積性惡性疾病，通常其特征為血液和骨髓中的白細胞及其前體的不正常增生和發(fā)育。術語“肉瘤”通常指由物質如連接組織的胚胎形成的瘤，且通常由包埋于纖維或均質體中的緊密填充細胞構成。術語“黑素瘤”指由皮膚和其他器官的黑素細胞系統(tǒng)引起的瘤。術語“癌”指上皮細胞構成的惡性新生長，趨于滲透周圍組織并引起轉移。
例如，所包括的癌癥涉及源于再生組織的細胞(如足細胞，生殖細胞，發(fā)育中的或更成熟的精原細胞，精細胞或精母細胞和滋養(yǎng)細胞，卵巢的生殖細胞和其他細胞)、淋巴或免疫系統(tǒng)(如霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤)、造血系統(tǒng)和上皮細胞(如皮膚，包括惡性黑素瘤和胃腸道)、實體器官、神經系統(tǒng)，例如神經膠質瘤(參見Y.X.Zhou等，2002)和肌骨骼組織。所述化合物可用于治療各種癌細胞類型，包含但不限于，腦，包括成神經管細胞瘤、頭和頸、乳房、結腸、小細胞肺、大細胞肺、甲狀腺、睪丸、膀胱、前列腺、肝臟、腎臟、胰腺、食道、胃、卵巢、子宮頸或淋巴腫瘤。尤其希望能治療乳房、結腸、肺和前列腺腫瘤。
可以通過如上述的常規(guī)給藥途徑將組合物給藥至遭受癌癥和/或白血病折磨的患者。該方法可用于減緩腫瘤生長、預防腫瘤生長、誘導腫瘤局部消退和誘導腫瘤完全消退直至完全消失。該方法還可用于預防源自實體腫瘤的轉移瘤生長。
本發(fā)明的組合物可作為單獨治療來給藥，或與對患者無抗癌效果的其他支持性或治療性處理結合來給藥。該方法還包括以在患者中具有預期抗癌效果的有效量將本發(fā)明組合物結合常規(guī)抗癌藥物或生物蛋白劑一起給藥，其中，該藥物或藥劑量本身不能有效誘導適當的癌癥生長抑制。這些抗癌藥物包括放線菌素D、喜樹堿、卡鉑、順鉑、環(huán)磷酰胺、阿拉伯糖胞苷、道諾霉素、阿霉素、鬼臼乙叉苷、氟達拉濱、5-氟尿嘧啶、羥基尿素、吉西他濱、伊立替康、氨甲蝶呤、絲裂霉素C、米拖蒽醌、帕尼特西、泰索帝、替尼泊苷、托泊替康、長春堿、長春新堿端基去乙酰長春酰胺和長春瑞賓?？拱┥锏鞍讋┌[瘤壞死因子(TNF)、TNF相關的細胞凋亡誘導配體(TRAIL)、其他TNF相關或TRAIL相關的配體和因子、干擾素、白細胞間介素-2、其他白細胞間介素、其他細胞因子、趨化因子和因子、腫瘤相關分子或受體的抗體(如抗-BER2抗體)以及與這些試劑反應或結合的試劑(如受體的TNF超家族成員，其他受體，受體拮抗劑和這些試劑特異性的抗體)。
通過使用公認的動物模型如Fidler等，來評價特定組合物的體內抗腫瘤活性，如在美國專利6,620,843中所述的那樣。按照臨床醫(yī)生已知的方法，基于如疾病的嚴重程度和患者的所有癥狀因素來確定臨床劑量和給藥方案。
VI.其他說明本發(fā)明的化合物也可以用于治療某些特定的CNS疾病。谷氨酸鹽可實現許多生理學功能，包括在各種神經和精神病的病理生理學中的重要作用。谷氨酸鹽的興奮毒性和神經毒性涉及組織缺氧、局部缺血和損傷，以及慢性神經變性或神經代謝疾病、阿爾茨海默癥、亨延頓疾病和帕金森疾病。考慮到已報道的雷公藤內酯醇神經保護作用，特別是可保護由谷氨酸鹽誘導的細胞死亡(Q.He等，2003；X.Wang等，2003)，因此本發(fā)明的化合物有望可拮抗谷氨酸鹽的神經毒作用并因此可能是這種疾病的新治療手段。
來自復發(fā)MS病人的最新證據表明腦中谷氨酸鹽的動態(tài)平衡發(fā)生了改變。在MS病人中出現的神經中毒發(fā)作可能是造成少突細胞和神經元細胞死亡的原因。在MS病人中，通過用本發(fā)明的化合物治療拮抗谷氨酸鹽受體介導的興奮毒性具有治療學意義。其他CNS疾病如吉-巴綜合征，梅尼埃病，多神經炎，多發(fā)性神經炎，單神經炎和神經根病也可以用本發(fā)明的化合物來治療。
本發(fā)明的化合物也可以用于治療特定的肺病。自發(fā)肺纖維化(PF)為病原未知的漸進性間質肺病。PF的特征在于細胞內基質和膠原質在肺間質組織中的過度沉積，且作為炎癥和纖維化的結果逐漸由疤痕組織取代氣泡。隨著疾病的發(fā)展，疤痕組織的增加干擾了氧從肺轉移至血流的能力。已經報道了雷公藤內酯醇的14-琥珀酸酰亞胺酯可阻斷博來霉素誘導的PF(G.Krishna等，2001)。因此，本發(fā)明的化合物可用于治療PF。還認為本發(fā)明的化合物可治療其他呼吸道疾病，如肉狀瘤病，纖維化肺以及自發(fā)性間質性肺炎。
其他涉及肺并預期通過本發(fā)明的化合物可治療的疾病包括嚴重急性呼吸道綜合征(SARS)和急性呼吸道窘迫征(ARDS)。特別地，關于SARS，如下所示，在疾病發(fā)展到高峰前減少病毒含量(SARS-CoV)以及采用皮質類固醇治療的有效性表明SARS最嚴重的致命影響的發(fā)展可能源于身體對感染的過度應答(免疫響應過度)，而不是病毒本身的影響。(還可以參見共同未決的和共有的美國臨時申請S.N.60/483,335，該申請在此將其引入作為參考)。皮質類固醇治療已經用于SARS患者中來抑制表征免疫活動過度階段的細胞因子的大量釋放，希望在下一階段中停止肺病的進展。皮質類固醇治療已經產生了良好的臨床結果，減少了一些SARS的主要癥狀。然而，存在幾種與治療相關的副作用，且非常需要更有選擇性的免疫抑制劑和/或抗炎劑。
實施例以下實施例用來說明本發(fā)明，而不是以任何途徑來限制本發(fā)明。
實施例1.19-甲基雷公藤內酯醇(PG795)的制備A.14-羥基的保護 向DMSO(8.5mL，0.12mol)雷公藤內酯醇(命名為PG490)(0.56g，1.6mmol)溶液中加入醋酸(28mL，.49mol)和醋酸酐(5.6mL，59mol)。將透明無色的溶液在室溫下攪拌五天。將反應混合物倒入200mL的水中并用固體碳酸氫鈉中和，分幾個部分加入。用乙酸乙酯(3×150mL)來提取混合物，并將提取物通過無水硫酸鈉來干燥。減壓濃縮獲得油狀粗產物。硅層析純化(3∶2己烷/乙酸乙酯)獲得作為白色泡沫的14-(甲基硫代)甲氧基衍生物(命名為PG691)(0.45g，69％)。1H NMR(CDCl3)δ0.83(d，J＝6.8Hz，3H)，1.01(d，J＝6.8Hz，3H)，1.10(s，3H)，1.20(m，1H)，1.61(m，1H)，1.92(dd，J＝14.7，13.4Hz，1H)，2.19(s，3H)，2.10-2.42(m，4H)，2.70(m，1H)，3.24(d，J＝5.5Hz，1H)，3.51(d，J＝3.1Hz，1H)，3.68(s，1H)，3.79(d，J＝3.1Hz，1H)，4.68(m，2H)，4.95(d，J＝11.8Hz，1H)，5.09(d，J＝11.8Hz，1H)
B.甲基化 向無水THF(10mL)PG691(0.22g，0.52mmol)的溶液中，在-78℃逐滴加入庚烷/THF/乙苯LDA溶液(0.30mL的2.0M溶液，0.60mmol)。將所得到的溶液在該溫度攪拌15分鐘，接著逐滴加入碘甲烷(50μL，0.80mmol)。將反應混合物在-78℃攪拌2h，然后使其變成室溫過夜。
用1N HCl來中和反應混合物，并用EtOAc(10mL×3)來提取兩相溶液。用5％硫代硫酸鈉溶液洗滌EtOAc溶液(10mL×2)并通過無水硫酸鈉來干燥。減壓濃縮獲得了油狀物。柱層析純化(硅膠，3∶2己烷/乙酸乙酯)獲得了兩種產物，甲基硫代甲基保護的19-甲基雷公藤內酯醇(45.9mg，20％)，1H NMR(CDCl3)δ0.84(d，J＝6.9Hz，3H)，1.03(d，J＝6.9Hz，3H)，1.10(s，3H)，1.16(m，1H)，1.44(d，J＝6.6Hz，3H)，1.59(m，1H)，1.92(t，J＝14.0Hz，1H)，2.19(s，3H)，2.10-2.42(m，4H)，2.62(m，1H)，3.25(d，J＝5.5Hz，1H)，3.31(d，J＝3.1Hz，1H)，3.69(s，1H)，3.79(d，J＝3.2Hz，1H)，4.89(m，1H)，4.95(d，J＝11.8Hz，1H)，5.09(d，J＝11.8Hz，1H)，和甲基硫代甲基保護的18-甲氧基呋喃雷公藤內酯醇(33.1mg，15％)，1H NMR(CDCl3)δ0.84(d，J＝6.9Hz，3H)，1.01(s，3H)，1.02(d，J＝6.9Hz，3H)，1.30(s，3H)，1.37(m，2H)，1.69(m，2H)，1.95(dd，J＝15.0，12.6Hz，1H)，2.10(m，1H)，2.19(s，3H)，2.27-2.47(m，2H)，3.19(d，J＝5.3Hz，1H)，3.54(d，J＝3.3Hz，1H)，3.67(s，1H)，3.93(d，J＝3.3Hz，1H)，4.94(d，J＝11.9Hz，1H)，5.08(d，J＝11.9Hz，1H)，6.44(d，J＝2.0Hz，1H)。
C.去保護
向1.5mL乙腈/水(4∶1)中的如上制備的甲基硫代甲基保護的19-甲基雷公藤內酯醇(45.9mg，0.106mmol)溶液中一次性加入氯化汞(0.285g，1.05mmol)。將所得到的溶液在室溫攪拌過夜。通過Celite過濾從溶液中移出沉淀出的白色固體，并用乙酸乙酯來沖洗。用5％NH4OAc溶液將EtOAc溶液洗滌兩次。將有機相干燥(Na2SO4)，并減壓濃縮來獲得粗產物。柱層析純化(硅膠，1∶1己烷/乙酸乙酯)獲得純產物(39.5mg，99％)。1H NMR(CDCl3)δ0.88(d，J＝6.8Hz，3H)，1.01(d，J＝6.8Hz，3H)，1.11(s，3H)，1.16(dt，J＝11.5，2.0Hz，1H)，1.43(d，J＝6.6Hz，3H)，1.54(ddd，J＝12.4，6.4，1.3Hz，1H)，1.92(dd，J＝ 14.9，13.4Hz，1H)，2.10-2.36(m，4H)，2.62(m，1H)，2.74(d，J＝10.8Hz，1H)，3.38(d，J＝5.5Hz，1H)，3.42(d，J＝10.8Hz，1H)，3.53(dd，J＝3.1，0.9Hz，1H)，3.90(d，J＝3.1Hz，1H)，4.88(m，1H)；IR(CH2CI2)1754，1047cm-1。
實施例2.18-脫氧-19-脫氫-18-苯甲酰氧-19-苯甲酰雷公藤內酯醇(PG796)的制備A.?；?向無水THF(5mL)如上制備的PG691(73.1mg，0.174mmol)的溶液中，在-78℃逐滴加入庚烷/THF/乙苯中的LDA溶液(0.17mL的2.0M溶液，0.34mmol)。將所得到的溶液在該溫度攪拌15分鐘，接著逐滴加入純的苯甲酰氯(100μL，0.86mmol)。將反應物在-78℃攪拌2h。用水來停止反應，并用乙酸乙酯(25mL×3)來提取混合物。將合并的有機溶液通過無水硫酸鈉來干燥。減壓濃縮獲得油。柱層析純化(硅膠，3∶2己烷/乙酸乙酯)獲得14-保護的產物(51.2mg，47％)。1HNMR(CDCl3)δ0.78(d，J＝6.8Hz，3H)，0.91(d，J＝6.8Hz，3H)，1.13(s，3H)，1.17(m，1H)，1.58(m，1H)，1.86(m，1H)，2.13(s，3H)，2.17-2.39(m，3H)，2.45(d，J＝6.0Hz，1H)，2.58-2.76(m，2H)，3.21(s，1H)，3.39(d，J＝3.1Hz，1H)，3.70(d，J＝3.1Hz，1H)，4.85(d，J＝11.87Hz，1H)，4.95(d，J＝11.8Hz，1H)，7.34-7.48(m，3H)，7.56-7.65(m，2H)，7.65-7.71(m，1H)，7.71-7.78(m，2H)，8.21-8.29(m，2H)。
B.去保護 向1.5mL乙腈/水(4∶1)中的如上制備的14-甲基硫代甲基保護的產物(51.2mg，0.0814mmol)的溶液中一次性加入氯化汞(0.22g，0.81mmol)。將所得到的溶液在室溫攪拌過夜。通過Celite過濾從溶液移出沉淀出的白色固體，并用乙酸乙酯沖洗。用5％的NH4OAc溶液將EtOAc溶液洗滌兩次。將有機相干燥(Na2SO4)，并減壓濃縮獲得粗產物。柱層析純化得到純的產物(32.8mg，71％)。1HNMR(CDCl3)δ0.82(d，J＝6.9Hz，3H)，0.92(d，J＝6.9Hz，3H)，1.15(s，3H)，1.17(m，1H)，1.54(m，1H)，1.88(m，1H)，2.18(七重峰，J＝6.9Hz)，2.30-2.40(m，2H)，2.53(d，J＝10.4Hz，1H)，2.56(d，J＝7.1Hz，1H)，2.61(m，1H)，2.72(ddd，J＝15.0，6.4，4.2Hz，2H)，2.98(d，J＝10.2Hz，1H)，3.40(d，J＝3.0Hz，1H)，3.81(d，J＝3.0Hz，1H)，7.35-7.47(m，3H)，7.54-7.63(m，2H)，7.63-7.71(m，1H)，7.71-7.78(m，2H)，8.21-8.28(m，2H)；IR(CH2Cl2)1768，1751，1236，1123cm-1。
實施例3.細胞毒性(MTT)測試將測試化合物以20mM的濃度溶解于DMSO中。在補充10％胎牛血清(HyClone Laboratories，Logan，UT)的RPMI1640培養(yǎng)基中(GIBCO，Rockville，MD)中進一步進行稀釋。
在標準的MTT測試中，使用細胞擴增試劑盒I(#1465007，RocheDianostics，Mannheim，Germany)來測定化合物的細胞毒性。簡而言之，在連續(xù)3倍稀釋的測試化合物存在下或在與含有作為每個稀釋點的測試樣品的相同濃度DMSO培養(yǎng)基的存在下，將人T細胞淋巴瘤(Jurkat)細胞(4×105/孔)在96孔的組織培養(yǎng)板中培養(yǎng)24小時。然后將培養(yǎng)物補充10μl/孔的MTT試劑4小時，隨后用0.1ml/孔的增溶劑補充另外的16小時。在ThermoScan微量平板讀數儀(MolecularDevices，Menlo Park，CA)上測量570nm處的光密度(OD570)。
以OD570值對化合物濃度來表示數據。附圖1中給出了19-甲基雷公藤內酯醇(PG795)與雷公藤內酯醇(PG490)和培養(yǎng)基對照相比較的結果。附圖2中給出了PG796與雷公藤內酯醇14-琥珀酸酯(PG490-88)和培養(yǎng)基對照相比較的結果。這種情況下，提供了人血清和小鼠血清中孵育的兩種化合物的數據，且對于PG796沒有孵育。
實施例4IL-2產生的分析將測試樣品在完全組織培養(yǎng)基中稀釋至1mM。將等份試樣置于已經涂覆抗CD3抗體(用于刺激通過Jurkat細胞產生的IL-2)的微量培養(yǎng)平板上并制備連續(xù)稀釋度使得終濃度包括以對數增加的0.001-10,000nM的范圍。收集Jurkat人T細胞系指數增加培養(yǎng)物的細胞(#TIB-152，購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA)，通過離心洗滌一次，重懸浮于完全組織培養(yǎng)基中并稀釋至2×106細胞/ml的濃度。將50μl體積的Jurkat細胞(1×105細胞)加入含有100μl稀釋化合物的孔中，向每個孔中加入50μl PMA(10ng/ml)，并將平板在5％CO2的恒溫箱中37℃培養(yǎng)。24小時后，將平板離心來沉淀細胞，從每個孔中取出150μl上清液并將樣品存儲于-20℃。使用Luminex 100(Luminex Corporation，Austin，TX)來分析所存儲上清液的人IL-2濃度，Luminex微球體結合抗-IL-2捕獲抗體，且熒光染料結合抗-IL-2檢測抗體。數據以pg/ml的IL-2來表示。
以化合物濃度對IL-2濃度將數據作曲線。附圖3中給出了19-甲基雷公藤內酯醇(PG795)與雷公藤內酯醇(PG490)和培養(yǎng)基對照相比較的結果。附圖4中給出了PG796與雷公藤內酯醇14-琥珀酸酯(PG490-88)和培養(yǎng)基對照相比較的結果。這種情況下，提供了人血清和小鼠血清中孵育的兩種化合物的數據，及沒有孵育的PG796的數據。
權利要求
1.具有結構I的化合物 其中R1是烷基、烯基、炔基、芳基烷基、芳基、芳基?；駽(OH)R4R5，其中R4和R5獨立地是氫、烷基、環(huán)烷基、烯基或環(huán)烯基，其中的任何一個，除了氫以外，可以由烷氧基、羥基、酰氧基或芳基取代；CR2R3是CHOH或C＝O；和基團X中的至多一個是羥基，且剩余的基團X是氫。
2.根據權利要求1所述的化合物，其中CR2R3是CHOH。
3.根據權利要求2所述的化合物，其中CR2R3是CHOH(β-羥基)。
4.根據權利要求1所述的化合物，其中每個X是氫。
5.根據權利要求1所述的化合物，其中每個所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基和酰氧基包括至多四個碳原子，每個所述的環(huán)烷基和環(huán)烯基包括至多六個碳原子，且每個所述的芳基是單環(huán)和非雜環(huán)的。
6.根據權利要求5所述的化合物，其中R1是烷基、烯基或C(OH)R4R5。
7.根據權利要求6所述的化合物，其中R4和R5獨立地是氫、烷基或烯基。
8.根據權利要求1所述的化合物，其中R1是烷基或羥基烷基。
9.根據權利要求9所述的化合物，其中R1是C1-C3烷基或羥基烷基。
10.根據權利要求10所述的化合物，其中R1是甲基。
11.根據權利要求1所述的化合物，其中R1是芳基?；?。
12.根據權利要求11所述的化合物，其中R1是苯甲?；?C(O)C6H5)。
13.根據權利要求4所述的化合物，其中R1是苯甲酰基。
14.具有結構II的化合物 其中每個R6獨立地選自烷基、烯基、炔基或芳基；CR2R3是CHOH或C＝O；基團X中的至多一個是羥基，且剩余的基團X是氫。
15.根據權利要求14所述的化合物，其中CR2R3是CHOH。
16.根據權利要求15所述的化合物，其中CR2R3是CHOH(β-羥基)。
17.根據權利要求14所述的化合物，其中每個X是氫。
18.根據權利要求14所述的化合物，其中每個所述的烷基、烯基和炔基包括至多四個碳原子，且每個所述的芳基是單環(huán)和非雜環(huán)的。
19.根據權利要求14所述的化合物，其中每個R6是芳基。
20.根據權利要求19所述的化合物，其中每個R6是苯基。
21.一種影響免疫抑制的方法，包括將在藥物學上可接受載體中的有效量的權利要求1或權利要求14所述的化合物給藥于需要這樣治療的患者。
22.一種誘導細胞凋亡的方法，包括將所述的細胞與有效量的權利要求1或權利要求14所述的化合物接觸。
23.根據權利要求1或權利要求14所述的化合物的用途，在藥物學上可接受的載體中，用于在患者體內影響免疫抑制，通過將有效量的所述化合物給藥到所述患者。
24.根據權利要求1或權利要求14所述的化合物用于在細胞內誘導凋亡的用途，通過將所述細胞與有效量的所述化合物接觸。
全文摘要
本發(fā)明公開了基于雷公藤內酯醇和羥基化雷公藤內酯醇的內酯環(huán)改造的化合物，用于治療用途，如抗增生、抗癌和免疫抑制治療。
文檔編號C07D307/00GK1925852SQ200580006875
公開日2007年3月7日 申請日期2005年3月2日 優(yōu)先權日2004年3月2日
發(fā)明者H·袁, J·H·馬瑟, D·戴 申請人:美國泛華醫(yī)藥公司