專利名稱：葛根素提取物的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物藥用成分提取、分離和純化方法領(lǐng)域，具體地說，涉及中草藥中葛根素的提取分離方法。
背景技術(shù)：
葛根為豆科植物(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)的塊根，又叫甘葛、粉葛、黃葛根、葛麻茹。葛根的藥用和食用歷史悠久，作為一種常用中藥，在我國現(xiàn)存最早的一部藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有較詳細的記載，列為中品。葛根味甘辛、性平，具有降低血管阻力，改善心、腦血液循環(huán)，減慢心率，降低心肌耗氧量等藥理作用。葛根素為中藥葛根主要有效成分，此外還有其它異黃酮類化合物大豆苷元、芒柄花素、大豆苷、4，7-二葡萄糖大豆苷、3’-甲氧基葛根素、7-木糖一-根素、4’，6’-二乙?；?葛根素等，但以葛根素的含量最高。葛根素(結(jié)構(gòu)如下)化學(xué)名為8-C-β-D-葡萄糖基-7，4’-二羥基-異黃酮(8-C-8-D-Glucopyranosyl-7，4’-hydroxy-isoflavone)，呈白色針狀結(jié)晶，能溶于水，但溶解度小(6.24g·L-1)，其水溶液為無色或微黃色。具有改善心腦血管循環(huán)、降低心肌耗氧量，降低血糖，防止高血壓及動脈硬化，抗肝臟毒，抗炎，祛痰，解熱，提高機體免疫力，抗菌，抗病毒等多種藥理作用，還具有提高視力等功能?！案鸶匾远拘孕?，安全范圍廣，療效好而極具臨床應(yīng)用價值。在國內(nèi)，1974年方起程等成功地提取了葛根素，1993年葛根素被衛(wèi)生部批準用于臨床。
隨著葛根素的藥理作用的研究深入，葛根素的提取也越來越受到人們的重視。目前葛根素主要是從葛根中提取，其提取方法主要有以下幾種水提醇沉法、正丁醇-水萃取法、氧化鋁脫色法、聚丙烯酰胺層析法、冰醋酸結(jié)晶法等提取、純化方法。上述方法環(huán)節(jié)多、大量使用易燃、有毒的有機溶劑，易造成環(huán)境污染和對操作者的健康損害，且產(chǎn)品中的有害雜質(zhì)去除困難，生產(chǎn)成本高，周期長，葛根素含量低。
中國專利1169820C公開了一種葛根素的制備方法將野葛根部原材料粉碎后，水煮、過濾、濃縮、干燥得到水提物，再經(jīng)過兩次大孔吸附樹脂層析、一次硅膠柱層析后，得到葛根素。該方法工藝步驟多、生產(chǎn)周期長，所用藥材樹脂比高及使用乙醇以外的大量的有機溶媒，不僅生產(chǎn)成本高，而且如果進行規(guī)模生產(chǎn)安全性無保證，尤其未進行中試規(guī)模以上的生產(chǎn)驗證，是否適合大生產(chǎn)仍是一個未知數(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
所要解決的技術(shù)問題本發(fā)明提供了一種工藝操作簡捷、生產(chǎn)周期短、生產(chǎn)成本低，適合于上業(yè)化生產(chǎn)的葛根素生產(chǎn)方法。
技術(shù)方案為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種葛根素的生產(chǎn)方法，包括下述工藝步驟(1)將葛屬(Pueraria spp.)的根部原材料粉碎后煎煮；(2)煎煮液過離子交換型大孔樹脂層析柱；(3)過大孔吸附樹脂層析柱。
其中在第一步和第二步之間還可以包括水解的步驟，因為水解工藝可以除去以碳-氧-糖連接的類似結(jié)構(gòu)的化合物，提高葛根素提取物的純度。因鹽酸分子小，比較活潑，鹽酸催化水解反應(yīng)對設(shè)備的腐蝕性大，環(huán)境污染嚴重，不利于大生產(chǎn)，而硫酸的分子較大，催化水解效果好，綜合考慮，優(yōu)選硫酸作為催化劑。硫酸液優(yōu)選4倍量1-2％(V/V)硫酸液，水解時間3-4小時。
其中，步驟(1)的原材料可以加水或含醇的水煎煮，優(yōu)選加水煎煮，均為兩次。
其中，步驟(2)使用的離子交換型樹脂，該類型樹脂用于葛根素類的分離純化，是首次采用。離子交換型大孔樹脂可以是D-392或D-290樹脂，優(yōu)選D-392樹脂，因為該樹脂能很好地吸附保留葛根素及相關(guān)結(jié)構(gòu)類似物，洗脫能力好且易再生；所處理的藥材和樹脂的重量比為1∶1.0-2.5，最好為1∶2；洗脫時，先以2-4倍柱體積的水洗脫，優(yōu)選為3倍柱體積的水，再以4-6倍柱體積的60％乙醇洗脫，優(yōu)選5倍柱體積的乙醇，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得濃縮液或粉末。經(jīng)過離子交換型大孔樹脂層析柱后的提取物的HPLC圖譜見圖1。
其中，步驟(3)使用的大孔吸附樹脂，該類型樹脂用于葛根素類的分離純化，是首次采用。該大孔吸附樹脂可以是AB-8、S-8樹脂，優(yōu)選S-8樹脂，因為該樹脂容量大，能很好地吸附保留葛根素及相關(guān)結(jié)構(gòu)類似物，且易洗脫和再生活化；所處理的藥材和樹脂的重量比為3-5∶1，最好為4∶1；洗脫時先以2-4倍柱體積，優(yōu)選為3倍柱體積的水洗脫，再以5-7倍柱體積，優(yōu)選6倍體積的20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量可達到近80％，收率約2.5％。經(jīng)過大孔吸附樹脂層析柱的提取物的HPLC圖譜見圖2。
在步驟(3)用20％乙醇洗脫液洗脫后，還可以用6倍柱體積70％乙醇洗脫收集70％乙醇洗脫液，回收乙醇可以得到另一具有多種藥理活性的物質(zhì)——大豆苷元提取物，收率約1％，含量未測定。
本發(fā)明所采用的葛屬原材料，可以是野葛或粉葛，優(yōu)選野葛。
有益效果本發(fā)明的葛根素生產(chǎn)方法，采用了獨特的樹脂柱組合，均為首次使用，所用的藥材樹脂比例低，水提液不經(jīng)濃縮和任何純化處理，直接上層析柱，工藝操作簡單，生產(chǎn)周期短，只有3天，生產(chǎn)成本低，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1是經(jīng)過離子交換型大孔樹脂層析柱后的提取物的HPLC圖譜圖2是經(jīng)過大孔吸附樹脂層析柱的提取物的HPLC圖譜具體實施方式
以下用實施例進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在具體實施例范圍內(nèi)。實施例中葛根素的測定方法按照中華人民共和國藥典2005年版的方法進行。
實施例1稱取50kg野葛根藥材，粉碎后，加入400L水煎煮3小時，再以300L的水煎煮0.5小時，合并煎煮液，冷卻，經(jīng)過重量為100kg的大孔樹脂D-392，先以3倍柱體積的水洗脫，再以5倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末，加入4倍量的水，經(jīng)過重量為12.5kg的大孔吸附樹脂S-8，先以3倍柱體積水洗脫，再以6倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量為60％，出粉率為1.9％。
實施例2稱取50kg粉葛根藥材，粉碎后，加入400L水煎煮2小時，再以300L的水煎煮1小時，合并煎煮液，冷卻，經(jīng)過重量為100kg的大孔樹脂D-392，先以3倍柱體積的水洗脫，再以5倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末，加入4倍量的1％的(V/V)濃硫酸后水解3小時，水解液調(diào)pH至6.5，在水解液的基礎(chǔ)上再稀釋5倍體積，濾過得濾液，濾液經(jīng)過重量為12.5kg的大孔吸附樹脂S-8，先以3倍柱體積水洗脫，再以6倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量為77％，出粉率為2.5％。
實施例3稱取200kg粉葛根藥材，粉碎后，加入1600L水煎煮2小時，再以1200L的水煎煮1小時，合并煎煮液，冷卻，經(jīng)過重量為300kg的大孔樹脂D-392，先以2倍柱體積的水洗脫，再以4倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末，加入4倍量的1.5％的(V/V)濃硫酸后水解4小時，水解液調(diào)pH至6.5，在水解液的基礎(chǔ)上再稀釋5倍體積，濾過得濾液，濾液經(jīng)過重量為50kg的大孔吸附樹脂S-8，先以3倍柱體積水洗脫，再以7倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量為79％，出粉率為2.4％。
實施例4稱取200kg野葛根藥材，粉碎后，加入1600L水煎煮2小時，再以1200L的水煎煮1小時，合并煎煮液，冷卻，經(jīng)過重量為300kg的大孔樹脂D-392，先以3倍柱體積的水洗脫，再以6倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末，加入4倍量的2％的(V/V)濃硫酸后水解3小時，水解液調(diào)pH至6.5，在水解液的基礎(chǔ)上再稀釋6倍體積，濾過得濾液，濾液經(jīng)過重量為50kg的大孔吸附樹脂S-8，先以3倍柱體積水沖洗，再以6倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量為76％，出粉率為2.2％。
實施例5稱取1000kg野葛根藥材，粉碎后，加入8000L水煎煮2小時，再以6000L的水煎煮1小時，合并煎煮液，冷卻，經(jīng)過重量為2000kg的大孔樹脂D-392，先以2倍柱體積的水洗脫，再以6倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末，加入4倍量的1.5％的(V/V)濃硫酸后水解4小時，水解液調(diào)pH至6.5，在水解液的基礎(chǔ)上再稀釋5倍體積，濾過得濾液，濾液經(jīng)過重量為250kg的大孔吸附樹脂S-8，先以3倍柱體積水沖洗，再以7倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量為78％，出粉率為2.6％。
實施例6稱取50kg粉葛根藥材，粉碎后，加入400L水煎煮2小時，再以300L的水煎煮1小時，合并煎煮液，冷卻，經(jīng)過重量為100kg的大孔樹脂D-290，先以3倍柱體積的水洗脫，再以5倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末，加入4倍量的1％的(V/V)濃硫酸后水解3小時，水解液調(diào)pH至6.5，在水解液的基礎(chǔ)上再稀釋5倍體積，濾過得濾液，濾液經(jīng)過重量為12.5kg的大孔吸附樹脂S-8，先以3倍柱體積水洗脫，再以6倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量為71％，出粉率為2.0％。
實施例7稱取50kg粉葛根藥材，粉碎后，加入400L水煎煮2小時，再以300L的水煎煮1小時，合并煎煮液，冷卻，經(jīng)過重量為100kg的大孔樹脂D-290，先以3倍柱體積的水洗脫，再以5倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末，加入4倍量的1％的(V/V)濃硫酸后水解3小時，水解液調(diào)pH至6.5，在水解液的基礎(chǔ)上再稀釋5倍體積，濾過得濾液，濾液經(jīng)過重量為120kg的大孔吸附樹脂AB-8，先以3倍柱體積水洗脫，再以6倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量為72％，出粉率為1.9％。
實施例8稱取50kg粉葛根藥材，粉碎后，加入400L水煎煮2小時，再以300L的水煎煮1小時，合并煎煮液，冷卻，經(jīng)過重量為50kg的大孔樹脂D-392，先以3倍柱體積的水洗脫，再以5倍柱體積的60％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末，加入4倍量的1％的(V/V)濃硫酸后水解3小時，水解液調(diào)pH至6.5，在水解液的基礎(chǔ)上再稀釋5倍體積，濾過得濾液，濾液經(jīng)過重量為12.5kg的大孔吸附樹脂S-8，先以3倍柱體積水洗脫，再以6倍柱體積20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物，其中葛根素含量為72％，出粉率為2.0％。
權(quán)利要求
1.一種葛根素提取物的生產(chǎn)方法，包括步驟(1)將葛屬(Pueraria spp.)的根部原材料粉碎后煎煮；(2)進行離子交換型大孔樹脂層析；(3)乙醇洗脫液處理后過大孔樹脂層析柱。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，在步驟(2)和步驟(3)之間還包括水解的步驟。
3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其中水解所用的催化劑是硫酸。
4.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟(2)使用的大孔樹脂是D-392樹脂。
5.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟(2)是先以2-4倍柱體積的水洗脫，再以4-6倍柱體積的60％乙醇洗脫。
6.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟(3)使用的大孔樹脂是S-8樹脂。
7.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟(3)是先以2-4倍柱體積的水洗，再以5-7倍柱體積的20％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得粉末。
8.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟(2)使用樹脂的重量和藥材重量之比為1.0-2.5∶1。
9.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟(3)使用樹脂的重量和藥材重量之比為1∶3-6。
10.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟(1)使用的葛屬的根部原材料是野葛的根部原材料。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物藥用成分提取分離方法領(lǐng)域，具體地說，涉及中草藥葛根素的提取分離方法，包括下述工藝步驟將葛屬(Pueraria spp.)的根部原材料粉碎后煎煮，進行離子交換型大孔樹脂層析，再經(jīng)過大孔樹脂層析，先以2－4倍柱體積的水洗，再以5－7倍柱體積的20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇得葛根素提取物。該方法工藝操作簡捷、生產(chǎn)周期短、生產(chǎn)成本低，適合于工業(yè)化生產(chǎn)，獲得葛根素含量很高的葛根素提取物。
文檔編號C07H1/00GK1927876SQ20051001500
公開日2007年3月14日 申請日期2005年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月7日
發(fā)明者楊悅武, 湯樹良, 鄭智剛, 劉長青, 陸文亮 申請人:天津天士力現(xiàn)代中藥資源有限公司