專利名稱：用于在放射免疫療法之前測定血液學(xué)毒性的新臨床參數(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明報(bào)道用于預(yù)報(bào)血液學(xué)毒性的新臨床參數(shù)，這能夠根據(jù)放射性標(biāo)記的治療性抗-CD20抗體以及其他具有定向免疫細(xì)胞潛力的治療性抗體給藥加以預(yù)測。本發(fā)明的臨床參數(shù)是在治療之前用γ-放射性標(biāo)記的抗體進(jìn)行劑量測定法試驗(yàn)的有用的替代選擇。
背景技術(shù)：
脊椎動物(例如靈長動物，包括人、無尾猿、猴等)的免疫系統(tǒng)由大量器官和細(xì)胞類型組成，它們已經(jīng)進(jìn)化為準(zhǔn)確和特異性地識別侵入脊椎動物宿主的外來微生物(“抗原”)；特異性地與這類外來微生物結(jié)合；消除/破壞這類外來微生物。淋巴細(xì)胞以及其他細(xì)胞類型對免疫系統(tǒng)起決定性作用。淋巴細(xì)胞是在胸腺、脾和骨髓(成年)中產(chǎn)生的，占到人(成年)循環(huán)系統(tǒng)中總白細(xì)胞的約30％。
淋巴細(xì)胞有兩種主要的亞種群T細(xì)胞和B細(xì)胞。T細(xì)胞負(fù)責(zé)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，B細(xì)胞負(fù)責(zé)抗體的產(chǎn)生(體液免疫)。不過，T細(xì)胞和B細(xì)胞可以被認(rèn)為是相互依賴的——在典型的免疫應(yīng)答中，抗原片段與抗原呈遞細(xì)胞表面上的主要組織相容性復(fù)合體(“MHC”)糖蛋白結(jié)合，當(dāng)T細(xì)胞受體再與該抗原片段結(jié)合時(shí)，T細(xì)胞被活化；這類活化導(dǎo)致生物遞質(zhì)(“白介素”)的釋放，它從本質(zhì)上刺激B細(xì)胞分化和產(chǎn)生對抗該抗原的抗體(“免疫球蛋白”)。
宿主內(nèi)的每個B細(xì)胞在其表面上表達(dá)不同的抗體——因而一個B細(xì)胞將表達(dá)一種抗原特異性的抗體，另一個B細(xì)胞將表達(dá)不同抗原特異性的抗體。因此，B細(xì)胞是相當(dāng)多樣的，這種多樣性對免疫系統(tǒng)起決定性作用。在人類中，每個B細(xì)胞能夠產(chǎn)生大量的抗體分子(即約107至108個)。當(dāng)外來抗原已被中和時(shí)，這類抗體產(chǎn)生大多通常停止(或者基本上減少)。不過，特定B細(xì)胞的增殖偶爾將繼續(xù)不減弱；這類增殖能夠?qū)е卤环Q為“B細(xì)胞性淋巴瘤”的癌癥。
T細(xì)胞和B細(xì)胞都包含細(xì)胞表面蛋白，它們能夠用作分化和鑒定的“標(biāo)記”。一種這類人B細(xì)胞標(biāo)記是人B淋巴細(xì)胞限制性分化抗原Bp35，稱為“CD20”。CD20是一種B淋巴細(xì)胞限制性分化抗原，它在前B細(xì)胞發(fā)育早期被表達(dá)，并保留至血漿細(xì)胞分化。有人認(rèn)為CD20分子可以調(diào)節(jié)B細(xì)胞活化過程中細(xì)胞周期引發(fā)與分化所需的步驟。而且，CD20通常在瘤性(“腫瘤”)B細(xì)胞上被高水平表達(dá)。CD20抗原滿足定向療法的要求，因?yàn)樗幻撀?、調(diào)制或內(nèi)在化。因而，CD20表面抗原是B細(xì)胞性淋巴瘤“定向”的有力候選。
本質(zhì)上，這類定向可以概括如下將B細(xì)胞的CD20表面抗原特異性抗體例如注射給患者。這些抗-CD20抗體特異性地結(jié)合(表面上)正常與惡性B細(xì)胞的CD20細(xì)胞表面抗原；與CD20表面抗原結(jié)合的抗-CD20抗體可以引起瘤性B細(xì)胞的破壞和消耗。另外，具有破壞腫瘤潛力的化學(xué)試劑或放射性標(biāo)記能夠與抗-CD20抗體綴合，以便試劑被特異性地釋放至例如瘤性B細(xì)胞。無論什么方法，主要目標(biāo)都是破壞腫瘤所采用的特定抗-CD20抗體決定了具體方法，因而，可用于定向CD20抗原的方法可能是各不相同的。
例如，已經(jīng)報(bào)道了針對這種CD20表面抗原定向所作的努力。據(jù)報(bào)道將鼠(小鼠)單克隆抗體1F5(一種抗-CD20抗體)通過連續(xù)靜脈內(nèi)輸注對B細(xì)胞性淋巴瘤患者給藥。據(jù)報(bào)道為消耗循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞需要極高水平(＞2克)的1F5，結(jié)果被描述為“瞬時(shí)的”。Pres s等“人B細(xì)胞性淋巴瘤的單克隆抗體1F5(抗-CD20)血清療法”《血液》69/2584-591(1987)。
這種方法的潛在問題是非人類單克隆抗體(例如鼠單克隆抗體)通常缺乏人效應(yīng)器功能性，也就是它們尤其不能通過抗體依賴性細(xì)胞毒性或Fc-受體介導(dǎo)的吞噬作用介導(dǎo)補(bǔ)體依賴性溶胞作用或者溶解人靶細(xì)胞。此外，非人類單克隆抗體可能被人宿主識別為外來蛋白質(zhì)；因此，這類外來抗體的反復(fù)注射可能誘導(dǎo)引起有害過敏反應(yīng)的免疫應(yīng)答。關(guān)于基于鼠的單克隆抗體，這經(jīng)常被稱為人抗小鼠抗體應(yīng)答，或“HAMA”應(yīng)答。另外，這些“外來”抗體可以受到宿主免疫系統(tǒng)的攻擊，以致它們實(shí)際上在到達(dá)它們的靶部位之前即被中和。
一種致力于補(bǔ)償鼠抗體效應(yīng)器功能缺乏的方法是將這類抗體綴合在毒素或放射性標(biāo)記上。淋巴細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞天生對放射療法敏感。因此，B細(xì)胞惡性腫瘤是放射免疫療法(RIT)的有力目標(biāo)，這有若干原因放射性標(biāo)記抗體電離放射的局部發(fā)射可以殺死帶有或沒有靶抗原(例如CD20)的細(xì)胞，靶抗原非?？拷c抗原結(jié)合的抗體；穿透輻射、即β發(fā)射體可以避免在龐大或多血管化腫瘤中接近抗體有限的問題；可以減少所需抗體總量，從而減輕潛在HAMA應(yīng)答的嚴(yán)重性。放射性核素發(fā)射放射性粒子，能夠損害細(xì)胞DNA至細(xì)胞修復(fù)機(jī)理不能使細(xì)胞繼續(xù)存活的程度；因此，如果靶細(xì)胞是腫瘤，那么放射性標(biāo)記有益于殺死腫瘤細(xì)胞。按照定義，放射性標(biāo)記抗體包括放射性物質(zhì)的使用，這可能要求預(yù)先警告患者(即可能的骨髓移植)以及健康護(hù)理人員(也就是在放射性條件下工作時(shí)需要高度謹(jǐn)慎)。
現(xiàn)已公開了大量特異性抗體可與放射性標(biāo)記或毒素綴合，以便該標(biāo)記或毒素定位于腫瘤部位。例如，上述IF5抗體已經(jīng)用碘-131(131I)“標(biāo)記”，據(jù)報(bào)道評價(jià)了兩名患者的生物分布。參見Eary，J.F.等“B細(xì)胞性淋巴瘤的造影與治療”《核醫(yī)學(xué)雜志》31/81257-1268(1990)；另見Press，O.W.等“用放射性標(biāo)記的MB-1(抗-CD37)抗體治療頑固性非何杰金氏淋巴瘤”《臨床腫瘤學(xué)雜志》7181027-1038(1989)(指出用131I標(biāo)記IF5治療的一名患者達(dá)到“部分應(yīng)答”)；Goldenberg，D.M.等“用碘-131標(biāo)記LL2單克隆抗體定向B細(xì)胞性淋巴瘤和劑量測定法與放射免疫療法”《臨床腫瘤學(xué)雜志》9/4548-564(1991)(據(jù)報(bào)道接受多次注射的八名患者中有三名發(fā)展為HAMA應(yīng)答)；Appelbaum，F(xiàn).R.“非何杰金氏淋巴瘤治療中的放射性標(biāo)記單克隆抗體”《Hem./Onc.Clinics of N.A.》5/51013-1025(1991)(評論文章)；Press，O.W.等“帶有自體骨髓支架的B細(xì)胞性淋巴瘤的放射性標(biāo)記抗體療法”《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》329/171219-1223(1993)(碘-131標(biāo)記的抗-CD20抗體IF5和B1)；Kaminski，M.G.等“使用131I抗-B1(抗-CD20)抗體的B細(xì)胞性淋巴瘤的放射免疫療法”《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》329/7(1993)(碘-131標(biāo)記的抗-CD20抗體B1；另見Kaminski的美國專利No.5,843,398)。還已將毒素(即化學(xué)治療劑，例如阿霉素或絲裂霉素C)與抗體綴合。例如參見PCT公布的申請WO 92/07466(1992年5月14日公布)。
美國申請08/475,813、08/475,815和08/478,967引用在此作為參考文獻(xiàn)，其中公開了用于定向和破壞B細(xì)胞性淋巴瘤和腫瘤細(xì)胞的放射性標(biāo)記的治療性抗體。特別是公開了Y2B8抗體，它是一種抗人CD20鼠單克隆抗體2B8，經(jīng)由雙官能螯合劑MX-DTPA與釔-[90](90Y)連接。選擇這種放射性核素用于治療有若干原因。90Y長達(dá)64小時(shí)的半衰期足以允許腫瘤的抗體蓄積，例如不象131I，它是一種高能的純β發(fā)射體，在其衰退中不伴有γ輻射，范圍為100至1000個細(xì)胞直徑。最小穿透放射量允許90Y標(biāo)記抗體對門診病人給藥。此外，殺死細(xì)胞不要求標(biāo)記抗體的內(nèi)在化，電離放射的局部發(fā)射對缺乏靶抗原的相鄰腫瘤細(xì)胞應(yīng)當(dāng)是致命性的。
涉及螯合劑和螯合劑綴合物的專利是本領(lǐng)域已知的。例如，Gansow的美國專利No.4,831,175涉及多取代的二亞乙基三胺五乙酸螯合物和含有它的蛋白質(zhì)綴合物，和它們的制備方法。Gansow的美國專利No.5,099,069、5,246,692、5,286,850和5,124,471也涉及多取代的DTPA螯合物。這些專利全文引用在此作為參考文獻(xiàn)。
選擇在申請08/475,813、08/475,815和08/478,967中用于促進(jìn)螯合作用的具體雙官能螯合劑，因?yàn)樗鼘θ齼r(jià)金屬具有較高親合性，增加腫瘤-非腫瘤之比，減少骨攝取，并且提供更多的放射性核素在靶部位、即B細(xì)胞性淋巴瘤部位的體內(nèi)滯留。不過，其他雙官能螯合劑也是本領(lǐng)域已知的，對腫瘤療法也是有益的。
未決申請08/475,813、08/475,815和08/478,967還報(bào)道了放射性標(biāo)記的Y2B8綴合物以及未標(biāo)記的嵌合抗-CD20抗體的給藥，導(dǎo)致B細(xì)胞成淋巴細(xì)胞腫瘤小鼠的腫瘤顯著減少。而且，其中所報(bào)道的人臨床試驗(yàn)顯示輸注嵌合抗-CD20抗體顯著消耗淋巴瘤患者的B細(xì)胞。事實(shí)上，嵌合2B8最近已被宣布為美國第一種經(jīng)過FDA批準(zhǔn)的抗癌單克隆抗體，名稱為Rituximab(在美國為Rituxan，在英國為Mabthera)。
另外，美國申請08/475,813公開了Rituxan與釔標(biāo)記的Y2B8鼠單克隆抗體的順序給藥。盡管用于這種聯(lián)合療法的放射性標(biāo)記抗體是鼠抗體，不過最初用嵌合抗-CD20抗體治療足以消耗B細(xì)胞種群，以便減少HAMA應(yīng)答，從而有利于聯(lián)合治療與診斷制度。而且，美國申請08/475,813顯示，治療學(xué)上有效劑量的釔標(biāo)記抗-CD20抗體在Rituxan之后給藥足以(a)清除所有未被嵌合抗-CD20抗體清除的剩余外周血液B細(xì)胞；(b)開始消耗淋巴結(jié)中的B細(xì)胞；或(c)開始消耗其他組織中的B細(xì)胞。
因而，放射性標(biāo)記與癌治療性抗體的綴合作用提供了有價(jià)值的臨床工具，它可以用于增強(qiáng)或補(bǔ)充嵌合抗體的腫瘤殺死潛力。根據(jù)抗-CD20抗體在非何杰金氏淋巴瘤治療中的確定功效和已知的淋巴細(xì)胞對放射性的敏感性，若這類治療性抗體成為商業(yè)上可得到的試劑盒將是非常有利的，由此它們可以容易地被放射性標(biāo)記所修飾，在臨床背景下直接對患者給藥。
為此，美國申請No.09/259,337公開了用于實(shí)現(xiàn)抗體的放射性標(biāo)記的方法、試劑和試劑盒。這類試劑盒是適宜將這些試劑置于臨床背景下的載體，使它們易于制備，并且可以在放射性標(biāo)記顯著衰退或者抗體由于放射性標(biāo)記的存在而顯著破壞之前對患者給藥。申請No.09/259,337引用在此作為參考文獻(xiàn)，其中所公開的試劑盒克服了現(xiàn)有技術(shù)的很多缺陷，這些缺陷制止了這類方便工具的引入，以使這種有價(jià)值的技術(shù)商業(yè)化。
放射性標(biāo)記試劑盒引入市場緩慢的原因可能是有些已知的標(biāo)記方案證明結(jié)合效率差，和在放射性標(biāo)記操作之后需要對試劑進(jìn)行柱純化。這類試劑盒的延緩開發(fā)也可能部分由于以前缺乏獲得純放射性同位素商品的手段，后者可以用于有效產(chǎn)生標(biāo)記產(chǎn)物，無需隨后純化?；蛘?，這類試劑盒一般不可得到的原因也許是實(shí)際上缺乏能夠象Rituxan在人淋巴瘤患者的治療中都已經(jīng)實(shí)現(xiàn)的那樣獲得批準(zhǔn)或者具有功效的抗體。
例如，美國專利4,636,380引用在此作為參考文獻(xiàn)，正如其中所討論的，科學(xué)界普遍認(rèn)為為了發(fā)現(xiàn)放射性藥物的臨床實(shí)用性，必須容忍長期和沉悶的分離和純化過程。向患者注射未結(jié)合的放射性標(biāo)記的確不是可取的。對額外純化步驟的需求賦予在臨床背景下放射性標(biāo)記抗體的過程以不可能性，特別是對醫(yī)生來說，他們既沒有設(shè)備也沒有時(shí)間來純化他們自己的治療劑。
此外，放射性標(biāo)記的蛋白質(zhì)可能是天生不穩(wěn)定的，特別是用輻解同位素、例如90Y標(biāo)記的那些，與靠近的抗體連接的時(shí)間越長，它們就越具有導(dǎo)致?lián)p害的趨勢。這類輻解作用由于放射性標(biāo)記的喪失和/或與靶抗原的結(jié)合減少而依次導(dǎo)致治療效率不可靠，并且可以引起所不需要的針對變性蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答。盡管沒有就地標(biāo)記和純化抗體的設(shè)施，醫(yī)師沒有別的選擇，只有定購已經(jīng)標(biāo)記過的治療性抗體，或者在另處的有關(guān)設(shè)施上標(biāo)記它們，標(biāo)記之后運(yùn)輸，對患者給藥。所有這類操作增加了標(biāo)記與給藥之間的寶貴時(shí)間，從而加大治療劑的不穩(wěn)定性，實(shí)際上減少放射性標(biāo)記試劑盒在臨床背景下的實(shí)用性。
其他人主張開發(fā)適用于不要求單獨(dú)純化步驟的試劑盒的放射性標(biāo)記方案(Richardson等(1987)“111In免疫閃爍照相術(shù)常用DTPA-標(biāo)記抗體試劑盒的優(yōu)化和成批制備”《核醫(yī)學(xué)通訊》8347-356；Chinol和Hnatowich(1987)“發(fā)生器產(chǎn)生的放射免疫療法用釔-[90]”《核醫(yī)學(xué)雜志》28(9)1465-1470)。不過，這類方法不能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明人利用本文公開的方案所實(shí)現(xiàn)的結(jié)合水平，本方案導(dǎo)致結(jié)合水平為至少95％。這樣一種結(jié)合水平提供額外的增加安全性的益處，事實(shí)上沒有因放射結(jié)合率低而使未結(jié)合的標(biāo)記注射給患者。
公開在美國申請No.09/259,337中的發(fā)明試劑盒所包括的方案允許快速標(biāo)記，因標(biāo)記而異，可以在大約半小時(shí)內(nèi)或者短至五分鐘內(nèi)進(jìn)行。而且，正如上面所討論的，公開在該申請中的試劑盒方案的標(biāo)記效率超過95％，從而放棄對進(jìn)一步純化的需要。由于放棄對進(jìn)一步純化的需要，放射性標(biāo)記的半衰期和抗體的完整性出于它所標(biāo)記的治療目的得以保存。
不過，在用β發(fā)射性放射性同位素、例如90Y放射性標(biāo)記的免疫治療劑的方便臨床使用上仍然存在一些障礙。與111In不同，90Y不能用于造影目的，因?yàn)槿狈εc之有關(guān)的γ放射。因而，診斷性“造影”放射性核素、例如111In通常在治療性嵌合抗體或90Y-標(biāo)記抗體的給藥之前和/或之后用于測定腫瘤的位置和相對大小。另外，銦-標(biāo)記的抗體能夠進(jìn)行劑量測定，這被普遍認(rèn)為需要在使用90Y-標(biāo)記的抗體之前進(jìn)行，因?yàn)樗鼈儽还俏盏男Я挖厔菹鄬^高。
例如，Kaminski等的美國專利No.5,843,398公開了將90Y標(biāo)記的抗體對淋巴瘤患者給藥的方法，但是堅(jiān)持需要對90Y進(jìn)行劑量測定。為了進(jìn)行劑量測定，Kaminski在90Y-標(biāo)記的抗體給藥之前使用111In-標(biāo)記的抗體，不過也承認(rèn)預(yù)期有一定的不精確性，因?yàn)閮煞N放射性同位素的藥動學(xué)特征不同。另外，Kaminski的專利建議還可以謹(jǐn)慎地增加90Y-標(biāo)記的抗體劑量，以減少產(chǎn)生不可逆毒性的機(jī)會。
這種對在治療性抗體給藥之前進(jìn)行劑量測定評價(jià)的要求使在臨床背景下使用免疫療法治療患者的方便性大打折扣，浪費(fèi)了患者可能接受實(shí)際上有助于減輕疾病的治療的寶貴時(shí)間，增加了患者和醫(yī)生與放射性的接觸。而且，使用定向相同細(xì)胞表面分子的診斷抗體作為治療性抗體，必須為診斷抗體分配更多的時(shí)間以廓清系統(tǒng)，目的是使治療性抗體具有澄清的路徑達(dá)到它們的位于惡性B細(xì)胞表面上的靶。如果所開發(fā)的預(yù)報(bào)放射性標(biāo)記的抗體對每名特定患者的毒性的方法使醫(yī)師能夠放棄對診斷性放射性標(biāo)記抗體的劑量測定的需要，這將有助于免疫治療劑領(lǐng)域，并進(jìn)一步有利于這類治療劑在臨床背景下的使用。
發(fā)明概述本發(fā)明提供新的臨床參數(shù)，用于在給藥之前評估放射性標(biāo)記的抗體對特定患者的血液學(xué)毒性。這類臨床參數(shù)特別適合于預(yù)報(bào)90Y-標(biāo)記的抗體毒性，特別是定向癌性細(xì)胞、特別是B細(xì)胞表面上的分子的那些，并且特別是用于治療淋巴瘤或白血病的那些，例如抗-CD20、抗-CD19抗體或抗-CD22抗體。所公開的參數(shù)驚人地提供了比標(biāo)準(zhǔn)的劑量測定法更加準(zhǔn)確的骨髓消融危險(xiǎn)預(yù)報(bào)，可以用于在免疫療法之前測量對骨髓收獲與移植的需要。
發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明涵蓋預(yù)報(bào)血液學(xué)毒性嚴(yán)重性的方法，該毒性將是由放射性標(biāo)記的抗體對癌癥患者、特別是B細(xì)胞性淋巴瘤患者給藥而引起的，在放射性標(biāo)記的抗體給藥之前使用這樣一種預(yù)報(bào)來制止或減少這類血液學(xué)毒性。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)兩種臨床參數(shù)、特別是基線血小板數(shù)和骨髓牽連程度是比劑量測定法參數(shù)更好的、關(guān)于非何杰金氏B細(xì)胞性淋巴瘤患者血液學(xué)毒性的預(yù)報(bào)變量。
本文公開的預(yù)報(bào)然后制止放射免疫治療劑毒性的方法可以包含各種步驟，包括(a)測量基線活組織檢查中的骨髓牽連程度或基線血小板數(shù)；和(b)如果所述基線骨髓牽連程度高于5％，那么將治療學(xué)上有效量未標(biāo)記的嵌合抗體或人抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于5％?；貞浺迷诖俗鳛閰⒖嘉墨I(xiàn)的美國申請No.08/475,813，公開了Rituxan(嵌合抗-CD20抗體)與釔-標(biāo)記的Y2B8鼠單克隆抗體的順序給藥，還公開了該嵌合抗體可以用于在該放射性標(biāo)記的抗體給藥之前消耗B細(xì)胞種群，從而有利于聯(lián)合的治療與診斷方案。本發(fā)明人已經(jīng)驚人地發(fā)現(xiàn)，這類未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記抗體給藥也有效減少骨髓中癌細(xì)胞水平升高的患者的骨髓牽連程度，以便這些患者可以是放射免疫療法的更好的候選者。
因而，可以用在本發(fā)明中的消耗抗體包括未標(biāo)記的抗體，在B細(xì)胞性淋巴瘤中優(yōu)選為未標(biāo)記的抗-CD20抗體，其中所述抗-CD20抗體是人嵌合抗體或人化抗體。優(yōu)選地，所述抗體是嵌合的或人抗-CD20抗體，優(yōu)選地，該嵌合抗-CD20抗體是Rituximab。不過，也可以使用針對其他B細(xì)胞表面分子的抗體，只要這類細(xì)胞表面分子是在惡性細(xì)胞表面上被表達(dá)的即可。特別是也可以使用抗-CD19和抗-CD22抗體。
為了在放射性標(biāo)記的抗體給藥之前消耗骨髓中的B細(xì)胞，嵌合抗-CD20抗體給藥按至少50mg/m2的劑量給藥至少一次，更優(yōu)選為按每周至少50mg/m2的劑量給藥至少兩周。最優(yōu)選的劑量范圍每周從約100至約500mg/m2達(dá)至少兩周，特別包括每周約375mg/m2達(dá)四周的劑量方案。
可能有這樣一種情況，測量本文所述臨床參數(shù)時(shí)，沒有在先治療是減少骨髓牽連水平所必需的。在這類情況下，本發(fā)明的方法可以被描述為用放射性標(biāo)記的治療性抗體治療B細(xì)胞性淋巴瘤患者的改進(jìn)方法，其中所述改進(jìn)包括(a)使用基線骨髓活組織檢查和/或基線血小板數(shù)作為血液學(xué)毒性的指征；和(b)根據(jù)最初的骨髓牽連百分比或基線血小板數(shù)，將治療學(xué)上有效量的放射性標(biāo)記的抗體給藥。當(dāng)然，如果臨床參數(shù)確實(shí)提示骨髓牽連水平將引起血液學(xué)毒性，也就是如果最初的骨髓牽連百分比提示將存在血液學(xué)毒性，特別是如果骨髓牽連水平大于5％，更特別是大于15％，最特別是如果骨髓牽連水平大于25％，那么本發(fā)明的改進(jìn)方法可以進(jìn)一步包含將一定劑量或劑量方案的未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記的抗體給藥。
盡管任何定向存在于惡性細(xì)胞表面的細(xì)胞表面分子的抗體都可以用于釋放放射性同位素，不過優(yōu)選地所述放射性標(biāo)記的抗體與B細(xì)胞表面分子結(jié)合。最優(yōu)選的是抗-CD20抗體，其中所述放射性標(biāo)記的抗-CD20抗體是用α-或β-發(fā)射性同位素標(biāo)記的。鑒于衰退粒子的范圍和效力，最優(yōu)選的同位素是β-發(fā)射性同位素。優(yōu)選的β-發(fā)射體包括90Y和131I，不過90Y優(yōu)選于131I，后者也發(fā)出一定的γ輻射。90Y也比131I釋放更多的能量(2.3MeV對0.81MeV)，具有更長的路徑長度(5-10mm對1-2mm)，這有益于更大面積疾病的治療，其中與腫瘤外緣細(xì)胞結(jié)合的抗體可以殺死腫瘤內(nèi)部的細(xì)胞，無需與表面結(jié)合。其他適合用在本發(fā)明中的放射性核素包括188Re與186Re、199Au和67Cu。美國專利No.5,460,785提供了適合的放射性同位素列表，引用在此作為參考文獻(xiàn)。
優(yōu)選用在本發(fā)明中的放射性標(biāo)記的抗體是Y2B8，它是一種通過雙官能螯合劑與90Y綴合的鼠抗-CD20抗體。Y2B8的制備和使用公開在美國申請08/475,813、08/475,815和08/478,967中，引用在此作為參考文獻(xiàn)。盡管由于半衰期相對較短，就放射性同位素對人患者給藥而言鼠抗體一般優(yōu)選于嵌合抗體，不過也可以使用人的、嵌合的、結(jié)構(gòu)域缺失的或人化抗體作為放射免疫治療劑。這類抗體可以要求不同的劑量，這取決于所綴合的放射性標(biāo)記和它們的體內(nèi)穩(wěn)定性。
本發(fā)明方法的一個重要目標(biāo)是利用未標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞定向抗體消耗位于尋求接受放射免疫療法的患者骨髓中的腫瘤細(xì)胞。因而，用在所公開的方法中的未標(biāo)記抗體的治療學(xué)上有效量是有效減少骨髓牽連程度至低于指定水平的量。特別是如果所述基線骨髓牽連程度高于15％，那么將本發(fā)明的未標(biāo)記抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于15％。更特別是如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將本發(fā)明的未標(biāo)記抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于25％。最理想地，如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將本發(fā)明的未標(biāo)記抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于15％，最優(yōu)選為小于5％。實(shí)際的劑量將取決于患者的敏感性、所用抗體的類型、所定向的抗原、骨髓牽連水平和基線血小板數(shù)。
本發(fā)明方法的另一個目標(biāo)是能夠用放射性標(biāo)記的免疫治療性抗體治療癌癥患者，特別是B細(xì)胞性淋巴瘤患者，以便不需要在先的造影或經(jīng)典的劑量測定法。本文所公開的臨床參數(shù)可以取代這類劑量測定法評價(jià)，實(shí)際上是比用銦-[111]-標(biāo)記的抗體進(jìn)行的劑量測定法判斷更好的、預(yù)期在放射性標(biāo)記的抗體對特定患者給藥后產(chǎn)生的血液學(xué)毒性的預(yù)報(bào)變量。當(dāng)與美國申請No.09/259,337所公開的放射性標(biāo)記方法和試劑盒結(jié)合使用時(shí)，這類方法是特別有用的，有利于快速標(biāo)記和放射性標(biāo)記的抗體的方便給藥，無需在先純化。
放射性標(biāo)記的抗體的劑量當(dāng)然將取決于特定的患者、特定的抗體、特定的靶和特定的放射性標(biāo)記。與之有關(guān)的還有最初的骨髓牽連程度和在先用未標(biāo)記的消耗抗體治療的功效。但是關(guān)于90Y-標(biāo)記的抗-CD20抗體、特別是Y2B8，優(yōu)選的劑量將從約0.1至0.5mCi/kg。技術(shù)人員通過常規(guī)的優(yōu)化方法可以確定關(guān)于任何特定抗體的適當(dāng)劑量。
本發(fā)明的方法將有益于任何類型的癌癥患者，這些類型可能涉及惡性細(xì)胞滲入骨髓，即淋巴瘤或白血病型癌癥，其中這類患者將另外受益于使用定向這類癌性細(xì)胞表面上的細(xì)胞表面分子的抗體的放射免疫療法。被定向的腫瘤細(xì)胞可以包括任何具有浸潤骨髓能力的細(xì)胞，包括T細(xì)胞和B細(xì)胞。
證明本文所公開的方法有用的基礎(chǔ)觀察結(jié)果之一是，當(dāng)放射性標(biāo)記的抗體定向骨髓中的細(xì)胞時(shí)，具有骨髓牽連的患者對放射免疫療法特別敏感。骨髓中的放射性同位素消融甚至不可能表達(dá)被定向的細(xì)胞表面分子的正常祖代細(xì)胞，從而消耗在正常情況下將有利于放射免疫療法之后的免疫系統(tǒng)重建的免疫細(xì)胞種群。而且，具有骨髓牽連的患者的確不會受益于自體骨髓收獲和移植，因?yàn)檫@類移植僅將腫瘤細(xì)胞再輸注回到患者體內(nèi)。因而，在放射免疫療法之前鑒定和矯正骨髓牽連的常規(guī)方法將是淋巴瘤治療領(lǐng)域中有價(jià)值的附加措施。在這點(diǎn)上，本文所公開的臨床參數(shù)同樣也將指示由用其他細(xì)胞毒部分、例如毒素標(biāo)記的抗體所帶來的骨髓毒性的程度。因而，本文所公開的參數(shù)還可以用于預(yù)報(bào)和制止由細(xì)胞毒性抗體給藥引起的毒性和骨髓消融。
本發(fā)明的方法可以用于治療各種癌癥，特別是B細(xì)胞性淋巴瘤和白血病，若所述B細(xì)胞性淋巴瘤是非何杰金氏淋巴瘤(NHL)則是特別有用的。Rituximab已被批準(zhǔn)可用于低級濾泡性NHL的治療，但是本發(fā)明人已經(jīng)驚人地發(fā)現(xiàn)Rituximab也有益于中級與高級NHL、包括大面積疾病的治療。因此，可用本發(fā)明方法治療的淋巴瘤包括低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級擴(kuò)散性NHL、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、高級成免疫細(xì)胞性NHL、高級成淋巴細(xì)胞性NHL、高級小未分裂細(xì)胞性NHL、大面積NHL、外膜細(xì)胞性淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤和瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥，或者任何潛在伴有骨髓牽連的淋巴瘤類型，骨髓牽連可能使放射免疫療法的功效復(fù)雜化。
現(xiàn)在將以下列數(shù)據(jù)為例，闡述所公開的臨床參數(shù)的使用示范。
用Y2B8對五十八名復(fù)發(fā)性或頑固性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)患者(6％小淋巴細(xì)胞性、65％濾泡性、24％ DLC & DMC、6％外膜細(xì)胞性)進(jìn)行I/II期研究。在治療前一周，所有患者用111In-標(biāo)記的抗體(In2B8)進(jìn)行造影和劑量測定(也公開在申請08/475,813、08/475,815和08/478,967中，引用在此作為參考文獻(xiàn))。將Rituximab250mg/m2先于造影和放射性標(biāo)記的治療性抗體之前給藥。對第2和第3組50名門診患者給以0.2、0.3或0.4mCi/kg的單一劑量。選擇輕微血小板減少患者(血小板100-150/mm3)給以0.4mCi/kg和0.3mCi/kg的II期劑量。
接受0.4mCi/kg或0.3mCi/kg的II期患者的骨髓劑量測定法(包括全血T1/2與AUC、得自血液與骶骨的骨髓劑量測定法)對血液學(xué)毒性級別分析沒有證明有顯著的相關(guān)性。不過，在淋巴瘤牽連骨髓的程度與4級底點(diǎn)(血小板≤25,000/mm3；ANC≤500/mm3)發(fā)生率之間證明有顯著相關(guān)性。無骨髓牽連的患者有百分之八(2/25)發(fā)展為4級血小板減少，骨髓牽連0.1-5％的患者有25％(1/4)、骨髓牽連5-20％的患者有45％(5/11)和骨髓牽連20-25％的患者100％(6/6)發(fā)展為4級血小板減少?？傊?，僅有5名(10％)患者發(fā)展到血小板數(shù)小于10,000/mm3。
經(jīng)過一年對立期，平均血清免疫球蛋白保持正常。所有劑量下的全部組織學(xué)檢查結(jié)果中，ORR為67％(26％CR和41％PR)，低級NHL中為82％。根據(jù)Kaplan-Meier法的預(yù)報(bào)，應(yīng)答者的中位TTP為12.9+月，應(yīng)答持續(xù)時(shí)間為11.7+月。基線脾大患者中，4/8(50％)患者有應(yīng)答，無脾大患者為74％(29/39)(p＝0.1761)。
這些結(jié)果提示，包括基線血小板數(shù)和淋巴瘤牽連骨髓的程度在內(nèi)的臨床參數(shù)能夠代替劑量測定法，用于Y2B8和其他放射性標(biāo)記的抗體對NHL患者安全給藥。Y2B8的血液學(xué)毒性明顯與存在于骨髓中的淋巴瘤細(xì)胞的治療性抗體定向有關(guān)。
權(quán)利要求
1.預(yù)報(bào)由放射性標(biāo)記的抗體對癌癥患者給藥所致血液學(xué)毒性的嚴(yán)重性并且制止或減少該血液學(xué)毒性的方法，包含(a)測量基線活組織檢查中的骨髓牽連程度；和(b)如果所述基線骨髓牽連程度高于5％，那么將治療學(xué)上有效量非標(biāo)記的消耗抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于5％。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述癌癥患者患有淋巴瘤或白血病型癌癥。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述非標(biāo)記的消耗性抗體是人的、嵌合的、結(jié)構(gòu)域缺失的或人化抗體。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述抗體是一種抗-CD20抗體。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述抗-CD20抗體是一種人的、嵌合的或人化抗體。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體是Rituximab。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按至少50mg/m2的劑量給藥至少一次。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周至少50mg/m2的劑量給藥至少兩周。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周約100至約500mg/m2的劑量給藥至少兩周。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周約375mg/m2的劑量給藥至少四周。
11.用放射性標(biāo)記的治療性抗體治療癌癥患者的改進(jìn)方法，所述改進(jìn)包含(a)使用基線骨髓活組織檢查作為血液學(xué)毒性的指征；和(b)根據(jù)最初的骨髓牽連百分比，將治療學(xué)上有效量的放射性標(biāo)記的抗體給藥。
12.權(quán)利要求11的改進(jìn)方法，其中所述癌癥患者患有淋巴瘤或白血病型癌癥。
13.權(quán)利要求12的方法，如果最初的骨髓牽連百分比大于5％，那么進(jìn)一步包含將一定劑量或劑量方案的未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記的抗體給藥。
14.權(quán)利要求13的方法，如果最初的骨髓牽連百分比大于15％，那么進(jìn)一步包含將最初劑量或劑量方案的未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記的抗體給藥。
15.權(quán)利要求14的方法，如果最初的骨髓牽連百分比大于25％，那么進(jìn)一步包含將最初劑量或劑量方案的未標(biāo)記抗體先于放射性標(biāo)記的抗體給藥。
16.權(quán)利要求11的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗體是一種抗-CD20抗體。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗-CD20抗體是用α-或β-發(fā)射性同位素標(biāo)記的。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗-CD20抗體是用β-發(fā)射性同位素標(biāo)記的。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述β-發(fā)射性同位素是90Y或131I。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗體是Y2B8。
21.權(quán)利要求13的方法，其中的未標(biāo)記抗體是一種抗-CD20抗體。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述未標(biāo)記抗-CD20抗體是人的、嵌合的、結(jié)構(gòu)域缺失的或人化抗體。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述抗體是嵌合抗-CD20抗體。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體是Rituximab。
25.權(quán)利要求23的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按至少50mg/m2的劑量給藥至少一次。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周至少50mg/m2的劑量給藥至少兩周。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周約100至約500mg/m2的劑量給藥至少兩周。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體按每周約375mg/m2的劑量給藥至少四周。
29.權(quán)利要求1的方法，其中如果所述基線骨髓牽連程度高于15％，那么將所述治療學(xué)上有效量的非標(biāo)記消耗性抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于15％。
30.權(quán)利要求1的方法，其中如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將所述治療學(xué)上有效量的非標(biāo)記消耗性抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于25％。
31.權(quán)利要求1的方法，其中如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將所述治療學(xué)上有效量的非標(biāo)記消耗性抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于15％。
32.權(quán)利要求1的方法，其中如果所述基線骨髓牽連程度高于25％，那么將所述治療學(xué)上有效量的非標(biāo)記消耗性抗體給藥，以便所述骨髓牽連程度減少至小于5％。
33.治療患有淋巴瘤或白血病型癌癥的癌癥患者的方法，包含將治療學(xué)上有效量的放射性標(biāo)記的抗體對所述患者給藥，無需在先的造影或劑量測定法。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗體選自由抗-CD20、抗-CD19和抗-CD22抗體組成的組。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗-CD20抗體是用α-或β-發(fā)射性同位素標(biāo)記的。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述抗體是用90Y或131I標(biāo)記的。
37.權(quán)利要求34的方法，其中所述放射性標(biāo)記的是抗-CD20抗體。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述抗體是Y2B8。
39.權(quán)利要求36的方法，其中所述抗體是利用放射性標(biāo)記試劑盒的材料和說明書提供和標(biāo)記的。
40.權(quán)利要求38的方法，其中所述放射性標(biāo)記的抗體的治療學(xué)上有效量是約0.1至0.5mCi/kg。
41.權(quán)利要求33的方法，進(jìn)一步包含在所述放射性標(biāo)記的抗體給藥之前的步驟，其中(a)進(jìn)行基線活組織檢查，以測定骨髓牽連的程度；和(b)在放射性標(biāo)記的抗體給藥之前，用有效減少骨髓牽連百分比量的未標(biāo)記抗體治療患者。
42.權(quán)利要求41的方法，其中所述未標(biāo)記抗體是抗-CD19或抗-CD20抗體或抗-CD22抗體。
43.權(quán)利要求42的方法，其中所述抗體是抗-CD20抗體。
44.權(quán)利要求43的方法，其中所述未標(biāo)記抗-CD20抗體是人的、嵌合的、結(jié)構(gòu)域缺失的或人化抗體。
45.權(quán)利要求44的方法，其中所述抗體是嵌合抗-CD20抗體。
46.權(quán)利要求45的方法，其中所述嵌合抗-CD20抗體是Rituximab。
47.權(quán)利要求1的方法，其中所述癌癥選自由低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級擴(kuò)散性NHL、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、高級成免疫細(xì)胞性NHL、高級成淋巴細(xì)胞性NHL、高級小未分裂細(xì)胞性NHL、大面積NHL、外膜細(xì)胞性淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥和T細(xì)胞性淋巴瘤與白血病組成的組。
48.權(quán)利要求11的方法，其中所述癌癥選自由低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級擴(kuò)散性NHL、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、高級成免疫細(xì)胞性NHL、高級成淋巴細(xì)胞性NHL、高級小未分裂細(xì)胞性NHL、大面積NHL、外膜細(xì)胞性淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥和T細(xì)胞性淋巴瘤與白血病組成的組。
49.權(quán)利要求33的方法，其中所述B細(xì)胞性淋巴瘤選自由低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級擴(kuò)散性NHL、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、高級成免疫細(xì)胞性NHL、高級成淋巴細(xì)胞性NHL、高級小未分裂細(xì)胞性NHL、大面積NHL、外膜細(xì)胞性淋巴瘤、與AIDS有關(guān)的淋巴瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥和T細(xì)胞性淋巴瘤與白血病組成的組。
50.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包含在所述放射性標(biāo)記的抗體給藥之前測量基線血小板數(shù)。
51.權(quán)利要求11的方法，進(jìn)一步包含在所述放射性標(biāo)記的抗體給藥之前測量基線血小板數(shù)。
52.用放射性標(biāo)記的治療性抗體治療患有B細(xì)胞性淋巴瘤的淋巴瘤或白血病患者的改進(jìn)方法，所述改進(jìn)包含(a)使用基線血小板數(shù)作為血液學(xué)毒性的指征；和(b)根據(jù)所述基線血小板數(shù)將治療學(xué)上有效量的放射性標(biāo)記的抗體給藥。
全文摘要
報(bào)道了新的臨床參數(shù)，它們可以充當(dāng)與放射性標(biāo)記的治療性抗體有關(guān)的血液學(xué)毒性的預(yù)報(bào)變量，特別是定向具有定位于骨髓趨勢的淋巴瘤細(xì)胞的那些抗體。
文檔編號C07K16/18GK1596985SQ20041005902
公開日2005年3月23日 申請日期2000年7月31日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月11日
發(fā)明者W·拉斯泰特, C·懷特 申請人:拜奧根Idec公司