專利名稱：一種藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子及其制備方法和應用背景技術基因工程操作中重要的元件一之是啟動子，啟動子對于啟動基因及其高效表達具有重要意義，目前已有細菌及真核生物來源的啟動子，但這些啟動子應用于藻類基因工程操作并不總能發(fā)揮作用，而藻類來源的啟動子更是空白，影響了藻類基因工程的發(fā)展和應用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子，它能彌補現(xiàn)有技術的上述不足。
一種藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子，其特征是它用如下的核酸序列表征TCAAATCGGGCTTCAACTCCTTCGATGAAGGTGGCGGGTTGTCCCAAACTCTCCAACACGGAGTTGACGTCAGACCGTAAAATACGGAGTTCCTCGGCGACCTCCTTTACGGGGGTTGCCGAGACCACCTCTTGGAGGGATTTTAGTTCCCCTACAAGGGAGTCATGGGCGGTCCACAGAGCGCGGACCTGGGATTCCAGGGAAGTCCCCTGAAGGGTGTTATCGCCCGTTCCACGGGGGCTTGAAACCGCGACAGCGGGAGCAGGCCGGGGTGCCTGGGGCACTGCGGCAACAGCCGGAGTCGATGCTGCATTCCCCTGCGGGGGTGATAACGAGGGCAAAAGGAGGTTCCGGGGTTCCCGGTCGGGGGTATCATTCCGCGATGAAGCGGCGCCAGTACGGCTGGAACTTTTCCGTATAGGGATACTAATACATCAGATGATAAAAAATAACAGCTGAAACAGCTAAGTCCTTTATATTAAAATTTAAGGAGAGCTCT一種藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子的制備方法，其特征是將引物P1TCAAATCGGGCTTCAAC和P2AGAGCTCTCCTTAAATT，用聚合酶鏈式反應，以龍須菜基因組DNA為模板，進行擴增。
藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子用于紅藻或藍藻細胞特異性的基因載體的構建。
本發(fā)明的藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子對藻類基因工程的發(fā)展和應用有重要意義。
具體實施方案在如下的50μl聚合酶鏈式反應體系中1×聚合酶鏈式反應緩沖液；3mM Mg2+；50pmol引物P1，TCAAATCGGGCTTCAAC，和P2；AGAGCTCTCCTTAAATT；200μMdNTP；50ng龍須菜基因組DNA為模板，以如下的循環(huán)參數(shù)擴增94℃ 8min預變性，94℃ 1min，50℃ 2min，72℃ 2min，30循環(huán)，得到的產物即藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子，它可用如下的核酸序列表征TCAAATCGGGCTTCAACTCCTTCGATGAAGGTGGCGGGTTGTCCCAAACTCTCCAACACGGAGTTGACGTCAGACCGTAAAATACGGAGTTCCTCGGCGACCTCCTTTACGGGGGTTGCCGAGACCACCTCTTGGAGGGATTTTAGTTCCCCTACAAGGGAGTCATGGGCGGTCCACAGAGCGCGGACCTGGGATTCCAGGGAAGTCCCCTGAAGGGTGTTATCGCCCGTTCCACGGGGGCTTGAAACCGCGACAGCGGGAGCAGGCCGGGGTGCCTGGGGCACTGCGGCAACAGCCGGAGTCGATGCTGCATTCCCCTGCGGGGGTGATAACGAGGGCAAAAGGAGGTTCCGGGGTTCCCGGTCGGGGGTATCATTCCGCGATGAAGCGGCGCCAGTACGGCTGGAACTTTTCCGTATAGGGATACTAATACATCAGATGATAAAAAATAACAGCTGAAACAGCTAAGTCCTTTATATTAAAATTTAAGGAGAGCTCT。用低熔點凝膠回收藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子后，連入含綠色熒光蛋白報告基因的啟動子檢測載體-pEGFP，重組體用電激儀轉入藍藻-集胞藻，以無藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子插入的空載體做為空對照相比，電激轉化后24小時在熒光顯微鏡下觀察，可見樣品中的綠色熒光，而對照沒有綠色熒光。而若將同樣的含啟動子的重組體導入大腸桿菌及真核生物哺乳動物細胞中，卻沒有報告基因的表達，又由于該啟動子來源于紅藻，說明本發(fā)明的藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子對報告基因有對紅藻和藍藻的細胞特異性基因表達啟動活性。
權利要求
1.一種藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子，其特征是它用如下的核酸序列表征TCAAATCGGGCTTCAACTCCTTCGATGAAGGTGGCGGGTTGTCCCAAACTCTCCAACACGGAGTTGACGTCAGACCGTAAAATACGGAGTTCCTCGGCGACCTCCTTTACGGGGGTTGCCGAGACCACCTCTTGGAGGGATTTTAGTTCCCCTACAAGGGAGTCATGGGCGGTCCACAGAGCGCGGACCTGGGATTCCAGGGAAGTCCCCTGAAGGGTGTTATCGCCCGTTCCACGGGGGCTTGAAACCGCGACAGCGGGAGCAGGCCGGGGTGCCTGGGGCACTGCGGCAACAGCCGGAGTCGATGCTGCATTCCCCTGCGGGGGTGATAACGAGGGCAAAAGGAGGTTCCGGGGTTCCCGGTCGGGGGTATCATTCCGCGATGAAGCGGCGCCAGTACGGCTGGAACTTTTCCGTATAGGGATACTAATACATCAGATGATAAAAAATAACAGCTGAAACAGCTAAGTCCTTTATATTAAAATTTAAGGAGAGCTCT
2.一種藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子的制備方法，其特征是將引物P1TCAAATCGGGCTTCAAC和P2AGAGCTCTCCTTAAATT，用聚合酶鏈式反應，以龍須菜基因組DNA為模板，進行擴增。
3.藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子應用于紅藻和藍藻細胞特異性的基因載體的構建。
全文摘要
一種藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子，其特征是它用核酸序列表征制備時將引物P1TCAAATCGGGCTTCAAC和P2AGAGCTCTCCTTAAATT，用聚合酶鏈式反應，以龍須菜基因組DNA為模板，進行擴增。本發(fā)明的藻紅蛋白β和α亞基基因啟動子對藻類基因工程的發(fā)展和應用有重要意義。
文檔編號C07H21/00GK1528911SQ0313506
公開日2004年9月15日 申請日期2003年9月29日 優(yōu)先權日2003年9月29日
發(fā)明者隋正紅, 張學成, 任雪瑩, 臧曉南, 茅云翔 申請人:中國海洋大學