專(zhuān)利名稱(chēng)：Ccr-3受體拮抗劑v的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及某些1，2-二氨基環(huán)戊烷衍生物，其是CCR-3受體拮抗劑，因此用于治療具有由CCR-3受體介導(dǎo)的疾病狀態(tài)的哺乳動(dòng)物。本發(fā)明還涉及包含這些化合物的藥物，它們的用途，和用于制備它們的方法和中間體。
組織嗜曙紅細(xì)胞增多是許多病理狀態(tài)例如哮喘，鼻炎，濕疹和寄生蟲(chóng)傳染病的特征(參閱Bousquet，J.等，N.Eng.J.Med.3231033-1039(1990)和Kay，A.B.和Corrigan，C.J.，Br.Med.Bull.4851-64(1992))。哮喘時(shí)，嗜曙紅細(xì)胞的積聚和活化與支氣管上皮損傷及縮肌介體的過(guò)度響應(yīng)有關(guān)。已經(jīng)了解趨化因子如RANTES，eotaxin和MCP-3活化嗜曙紅細(xì)胞((參閱Baggiolini，M.和Dahinden，C.A.，Immunol.Today.15127-133(1994)，Rot，A.M.等，J.Exp.Med.176，1489-1495(1992)和Ponath，P.D.等，J.Clin.Invest.，97卷，#3，604-612(1996))。然而，與也誘導(dǎo)其他類(lèi)型白血球細(xì)胞遷移的RANTES和MCP-3不同，eotaxin選擇性地對(duì)嗜曙紅細(xì)胞有趨化性(參閱Griffith-Johnson，D.A.等，Biochem.Biophy.Res.Commun.1971167(1993)和Jose，P.J.等，Biochem.Biophy.Res.Commun.207，788(1994))。無(wú)論通過(guò)皮下或腹膜內(nèi)注射或氣霧劑吸入，在eotaxin給藥位置觀察到特異的嗜曙紅細(xì)胞的積聚。(參閱Griffith-Johnson，D.A.等，Biochem.Biophy.Res.Commun.1971167(1993)；Jose，P.J.等，J.Exp.Med.179，881-887(1994)；Rothenberg，M.E.等，J.Exp.Med.181，1211(1995)及Ponath，P.D.，J.Clin.Invest.，97卷，#3，604-612(1996))。
已使用糖腎上腺皮質(zhì)激素如地塞米松，甲脫氫皮甾醇和氫化可的松治療很多嗜曙紅細(xì)胞相關(guān)的疾病，包括支氣管哮喘(R.P.Schleimer等，Am.Rev.Respir.Dis.，141，559(1990))。認(rèn)為糖腎上腺皮質(zhì)激素抑制這些疾病中生存的IL-5，IL-3介導(dǎo)的嗜曙紅細(xì)胞。然而，延長(zhǎng)使用糖腎上腺皮質(zhì)激素能導(dǎo)致副作用，如患者中的青光眼，骨質(zhì)疏松癥和生長(zhǎng)延遲(參閱Hanania，N.A.等，J.Allergy and Clin.Immunol.，96卷，571-579(1995)和Saha，M.T.等，Acta Paediatrica，86卷，#2，138-142(1997))。因此，需要有一種備選的方法來(lái)治療嗜曙紅細(xì)胞相關(guān)的疾病，而不引起那些不受歡迎的副作用。
最近，CR-3受體被鑒定為嗜曙紅細(xì)胞用于它們對(duì)eotaxin、RANTES和MCP-3的響應(yīng)的主要趨化因子受體。當(dāng)被感染鼠前-β淋巴瘤系時(shí)，CCR-3與eotaxin，RANTES和MCP-3結(jié)合并使得這些細(xì)胞對(duì)eotaxin，RANTES和MCP-3趨化響應(yīng)(參閱Ponath，PD.等，J.Exp.Med.183，2437-2448(1996))。CCR-3受體在嗜曙紅細(xì)胞，T-細(xì)胞(亞型Th-2)，嗜堿細(xì)胞和柱狀細(xì)胞表面上表達(dá)并對(duì)eotaxin有高選擇性。研究已經(jīng)表明用抗-CCR-3 mAb對(duì)嗜曙紅細(xì)胞預(yù)處理能完全抑制嗜曙紅細(xì)胞對(duì)eotaxin，RANTES和MCP-3的趨化現(xiàn)象(參閱Heath，H.等，J.Clin.Invest.，99卷，#2，178-184(1997))。
申請(qǐng)人的已授權(quán)的美國(guó)專(zhuān)利6,140,344和6,166,015以及公開(kāi)的EP申請(qǐng)EP903349(其在1999年3月24日公開(kāi))，公開(kāi)了抑制通過(guò)趨化因子如eotaxin的嗜曙紅細(xì)胞募集的CCR-3拮抗劑。
因此，阻滯CCR-3受體結(jié)合RANTES，MCP-3和eotaxin的能力，從而防止嗜曙紅細(xì)胞的募集，這將為嗜曙紅細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥疾病提供治療。
本發(fā)明涉及新型的1，2-二氨基環(huán)戊烷衍生物，它們能夠抑制eotaxin與CCR-3受體的結(jié)合，從而提供一種抗嗜曙紅細(xì)胞誘導(dǎo)的疾病如哮喘的方法。
在第一方面，本發(fā)明提供式(I)的化合物或其鹽 其中
R1是氫或烷基；R2是芳烷基；R3是氫，烷基，?；?，芳基，或芳烷基；R4是-W-X-Y-Z；W不存在或是亞烷基；X不存在，羰基，氧，-S(O)n-，或-N(Ra)-；Y是亞芳基或雜亞芳基；并且Z是氫，芳基，雜芳基，芳氧基，雜芳氧基，芳烷基，或雜芳烷基；Ra是氫，烷基，?；?，芳基，芳烷基，烷氧羰基，或芐氧羰基；并且n為0，1，或2。
此外，在如上定義的化合物(在下面它們將被稱(chēng)為(i))中，優(yōu)選下列化合物(ii)(i)的化合物，其中R1是氫，或者R3是氫或甲基。
(iii)(ii)的化合物，其中R1是氫。
(iv)(iii)的化合物，其中R2是苯基烷基，其中所述苯基任選地被1個(gè)，2個(gè)或3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立地選自烷基，鹵素，氰基，硝基，烷氧基，鹵代烷氧基，羥基，氨基，酰氨基，烷基氨基，和二烷基氨基。
(v)(iv)的化合物，其中R2是苯基烷基，其中所述苯基被1個(gè)，2個(gè)或3個(gè)鹵代取代基取代。
(vi)(v)的化合物，其中R2是苯基烷基，其中所述苯基被1個(gè)鹵代取代基取代。
(vii)(vi)的化合物，其中R2是(4-氯苯基)烷基。
(viii)(vii)的化合物，其中R2是2-(4-氯苯基)乙基，或3-(4-氯苯基)丙基。
(ix)(i)的化合物，其中R3是氫或甲基。
(x)(ix)的化合物，其中W和X不存在。
(xi)(x)的化合物，其中Y是亞芳基并且Z是氫。
(xii)(xi)的化合物，其中Y-Z是4-甲磺酰苯基。
(xiii)(ix)的化合物，其中W是亞烷基。
(xiv)(xiii)的化合物，其中X是羰基，氧，-S(O)n-，或-N(Ra)-。
(xv)(xiv)的化合物，其中X是-S-。
(xvi)(xv)的化合物，其中Y是雜亞芳基。
(xvii)(xvi)的化合物，其中Z是芳基。
(xviii)(xvii)的化合物，其中Y-Z是5-芳基-嘧啶-2-基。
(xix)(ix)的化合物，其中W不存在并且X是-NH-。
(xx)(xix)的化合物，其中Y是亞芳基并且Z是氫。
(xxi)(xx)的化合物，其中Y-Z是3，4，5-三甲氧基苯基。
(xxii)(i)的化合物，其中-Y-Z是4-甲磺酰苯基；3，4，5-三甲氧基苯基；或5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基。
(xxiii)(i)的化合物，其中R4是4-甲磺酰苯基；3，4，5-三甲氧基苯基氨基；或5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫代甲基。
(xxiv)(i)的化合物，其中Y-Z是5-芳基-嘧啶-2-基。
(xxv)(i)的化合物或其藥用鹽，所述化合物是(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]-環(huán)戊基}-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基(sulfanyl)]乙酰胺；(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]環(huán)戊基}-4-甲磺酰基苯甲酰胺；(±)-反-1-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]-環(huán)戊基}-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-4-甲磺?；郊柞０?；(±)-反-1-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-1-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}環(huán)戊基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-N-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-甲磺?；郊柞０?；(±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-甲磺酰基苯甲酰胺；(±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；
(±)-反-N-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；(±)-反-1-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；或(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺。
第二方面，本發(fā)明提供一種藥物，其包含治療有效量的式(I)化合物或其藥用鹽，和藥用賦形劑。
第三方面，本發(fā)明提供式(I)化合物用于制備藥物的用途，所述藥物包含一種或多種式(I)的化合物，用于治療通過(guò)CCR-3受體拮抗劑能治療的疾病，如包括哮喘的呼吸疾病。
第四方面，本發(fā)明提供制備式(I)化合物的方法。
第五方面，本發(fā)明提供用于制備式(I)化合物的新型中間體。
第六方面，本發(fā)明提供用于醫(yī)學(xué)治療或診斷(例如用于治療哮喘)的式(I)的化合物或其藥用鹽。
除非另外說(shuō)明，在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的下列術(shù)語(yǔ)的含義如下“?；笔侵?C(O)R基，其中R是氫，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，苯基或苯基烷基，其中烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，和苯基烷基如本文所定義。典型的實(shí)例包括但不限于甲?；阴；?，環(huán)己基羰基，環(huán)己基甲基羰基，苯甲?；S基羰基。
“酰氨基”是指-NR’C(O)R基團(tuán)，其中R’是氫或烷基，并且R是氫，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，苯基或苯基烷基，其中烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，和苯基烷基如本文所定義。典型的實(shí)例包括但不限于甲酰氨基，乙酰氨基，環(huán)己基羰基氨基，環(huán)己基甲基-羰基氨基，苯甲?；被S基羰基氨基。
“烷氧基”是指-OR基，其中R是本文定義的烷基，例如甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基。
“烷氧羰基”是指-C(O)-R基，其中R是如本文所定義的烷氧基。
“鏈烯基”是指含有至少一個(gè)雙鍵的2-6個(gè)碳原子的直鏈一價(jià)烴基或3-6個(gè)碳原子的支鏈一價(jià)烴基，例如乙烯基，丙烯基。
“烷基”是指1-6個(gè)碳原子的直鏈飽和一價(jià)烴基或3-6個(gè)碳原子的支鏈飽和一價(jià)烴基，例如甲基，乙基，丙基，2-丙基，正丁基，異丁基，叔丁基，戊基。
“烷基氨基”是指-NHR基，其中R表示本文定義的烷基，環(huán)烷基，或環(huán)烷基烷基。典型的實(shí)例包括但不限于二甲氨基，甲基乙氨基，二(1-甲基乙基)氨基，(環(huán)己基)(甲基)氨基，(環(huán)己基)(乙基)氨基，(環(huán)己基)(丙基)氨基，(環(huán)己基甲基)(甲基)氨基，(環(huán)己基甲基)(乙基)氨基。
“亞烷基”是指1-6個(gè)碳原子的直鏈飽和二價(jià)烴基或3-6個(gè)碳原子的支鏈飽和二價(jià)烴基，例如亞甲基，亞乙基，2，2-二甲基亞乙基，亞丙基，2-甲基亞丙基，亞丁基，亞戊基。
“烷基磺酰基”是指-S(O)2R基，其中R是本文定義的烷基，環(huán)烷基，或環(huán)烷基烷基，例如甲基磺?；?，乙基磺?；?，丙基磺?；』酋；?，環(huán)己基磺?；?。
“烷基亞磺?；笔侵?S(O)R基，其中R是本文定義的烷基，環(huán)烷基，或環(huán)烷基烷基，例如甲基亞磺?；一鶃喕酋；鶃喕酋；?，丁基亞磺?；h(huán)己基亞磺?；?。
“烷硫基”是指-SR基，其中R是如上定義的烷基，例如甲硫基，乙硫基，丙硫基，丁硫基。
“芳基”是指6-10個(gè)環(huán)原子的一價(jià)單環(huán)或雙環(huán)芳香烴基，其任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基，優(yōu)選一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)取代基取代，這些取代基優(yōu)選選自烷基，鹵代烷基，羥烷基，雜烷基，?；０被?，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，烷硫基，烷基亞磺酰基，烷基磺?；?，-SO2NR’R”(其中R’和R”獨(dú)立地為氫或烷基)，烷氧基，鹵代烷氧基，烷氧羰基，氨基甲?；?，羥基，鹵素，硝基，氰基，巰基，亞甲二氧基或亞乙二氧基。更具體地，術(shù)語(yǔ)芳基包括但不限于苯基，氯苯基，氟苯基，甲氧基苯基，1-萘基，2-萘基，及其衍生物。
“亞芳基”是指以上定義的二價(jià)芳基。
“芳烷基”是指其中烷基的一個(gè)氫原子被芳基取代的本文定義的烷基。典型的芳烷基包括但不限于芐基，2-苯基乙-1-基，萘基甲基，2-萘基乙-1-基，萘芐基，2-萘苯乙-1-基。
“芳氧基”是指-O-R基，其中R是本文定義的芳基。
“氨基甲?；笔侵?C(＝O)NH2基。
“環(huán)烷基”指3-7個(gè)環(huán)碳的飽和單價(jià)環(huán)烴基團(tuán)，例如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)己基，4-甲基環(huán)己基。
“環(huán)烷基烷基”是指-RxRy，其中Rx是亞烷基，Ry是本文定義的環(huán)烷基，例如環(huán)己基甲基。
“二烷基氨基”是指-NRR’基，其中R和R’獨(dú)立地表示本文定義的烷基，環(huán)烷基，或環(huán)烷基烷基。典型的實(shí)例包括但不限于二甲氨基，甲基乙氨基，二(1-甲基乙基)氨基，(環(huán)己基)(甲基)氨基，(環(huán)己基)(乙基)氨基，(環(huán)己基)(丙基)氨基，(環(huán)己基甲基)(甲基)氨基，(環(huán)己基甲基)(乙基)氨基。
“鹵素”指氟，氯，溴，或碘，優(yōu)選氟和氯。
“鹵代烷基”是指用一個(gè)或多個(gè)相同或不同的鹵原子取代的本文定義的烷基，例如-CH2Cl，-CF3，-CH2CF3，-CH2CCl3。
“鹵代烷氧基”是指用一個(gè)或多個(gè)相同或不同的鹵原子取代的本文定義的烷氧基，例如-OCH2Cl，-OCF3，-OCH2CF3，-OCH2CCl3。
“雜芳基”是指5-12個(gè)環(huán)原子的至少包含一個(gè)芳香環(huán)的單環(huán)或雙環(huán)基團(tuán)，其包含一個(gè)，兩個(gè)，或三個(gè)選自N，O，或S的環(huán)雜原子，其余的環(huán)原子是C，條件是雜芳基的連接點(diǎn)將在芳香環(huán)上。該芳香烴基任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基，優(yōu)選一或兩個(gè)取代基獨(dú)立地取代，這些取代基選自烷基，鹵代烷基，羥烷基，雜烷基，?；?，酰氨基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，烷硫基，烷基亞磺酰基，烷基磺?；?，-SO2NR’R”(其中R’和R”獨(dú)立地為氫或烷基)，烷氧基，鹵代烷氧基，烷氧羰基，氨基甲?；u基，鹵素，硝基，氰基，巰基，亞甲二氧基或亞乙二氧基。更具體地，術(shù)語(yǔ)雜芳基包括但不限于吡啶基，呋喃基，噻吩基，噻唑基，異噻唑基，三唑基，咪唑基，異噁唑基，吡咯基，吡唑基，嘧啶基，苯并呋喃基，四氫苯并呋喃基，異苯并呋喃基，苯并噻唑基，苯并異噻唑基，苯并三唑基，吲哚基，異氮(雜)茚基，苯并噁唑基，喹啉基，四氫喹啉基，異喹啉基，苯并咪唑基，苯并異噁唑基或苯并噻吩基及其衍生物。
“雜亞芳基”是指如上定義的二價(jià)雜芳基。
“雜芳烷基”是指本文定義的烷基，其中烷基的一個(gè)氫原子被本文定義的雜芳基取代。
“雜芳氧基”是指-O-R基，其中R是本文定義的雜烷基(hateroaryl)。
“雜烷基”是指含有一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)取代基的本文定義的烷基，所述取代基獨(dú)立地選自-ORa，-NRbRc，和-S(O)nRd(其中n是0-2的整數(shù))，條件是雜烷基的連接點(diǎn)是通過(guò)雜烷基的碳原子。Ra是氫，酰基，烷基，環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基。Rb和Rc彼此獨(dú)立地是氫，酰基，烷基，環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基。Rd是氫(條件是n為0)，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，氨基，酰氨基，單烷基氨基或二烷基氨基。典型的實(shí)例包括例如2-羥乙基，2，3-二羥丙基，2-甲氧基乙基，芐氧甲基，2-甲磺?；?乙基。
“羥烷基”是指被一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)羥基取代的本文定義的烷基，條件是相同的碳原子不攜帶一個(gè)以上的羥基。典型的實(shí)例包括但不限于2-羥乙基，2-羥丙基，3-羥丙基，1-(羥甲基)-2-甲基丙基，2-羥丁基，3-羥丁基，4-羥基丁基，2，3-二羥基丙基，2-羥基-1-羥甲基乙基，2，3-二羥基丁基，3，4-二羥基丁基和2-(羥甲基)-3-羥丙基，優(yōu)選2-羥乙基，2，3-二羥丙基和1-(羥甲基)-2-羥乙基。因此，本文所用的術(shù)語(yǔ)“羥烷基”用于定義雜烷基的子集。
“離去基團(tuán)”具有常規(guī)與合成有機(jī)化學(xué)相關(guān)的含義，即能夠被親核試劑取代的原子或基團(tuán)，包括鹵素(如氯，溴，和碘)，烷基磺酰氧基，芳基磺酰氧基，烷基羰氧基(例如乙酰氧基)，芳基羰氧基，甲磺酰氧基，甲苯磺酰氧基，三氟甲磺酰氧基，芳氧基(例如2，4-二硝基苯氧基)，甲氧基，N，O-二甲基羥基氨基。
“任選的”或“任選地”表示其后所描述的事件或情況可以發(fā)生，但不必須發(fā)生，并且該描述包括事件或情況發(fā)生的實(shí)例和不發(fā)生的實(shí)例。例如，“任選地被烷基單-或雙-取代的芳基”是指該烷基可以但不必須存在，并且該描述包括芳基被烷基單-或雙-取代的情形，和芳基沒(méi)有被烷基取代的情形。
“藥用賦形劑”是指用于制備藥用組合物的賦形劑，該組合物通常是安全的，無(wú)毒的并且既在生物學(xué)上也在其他方面均符合要求，包含的賦形劑對(duì)獸醫(yī)使用和人類(lèi)制藥使用均是合格的。在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的“藥用賦形劑”包括一種和多于一種的該賦形劑。
化合物的“藥用鹽”是指一種鹽，它是藥物可接受的并具有該母體化合物合乎要求的藥物活性。這樣的鹽包括(1)與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成的酸加成鹽，無(wú)機(jī)酸如鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等；有機(jī)酸如醋酸，丙酸，己酸，環(huán)戊烷丙酸，羥基乙酸，丙酮酸，乳酸，丙二酸，丁二酸，蘋(píng)果酸，順丁烯二酸，反丁烯二酸，酒石酸，檸檬酸，苯甲酸，3-(4-羥基苯甲酰基)-苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，甲磺酸，乙磺酸，1，2-乙烷-二磺酸，2-羥基乙磺酸，苯磺酸，4-氯代苯磺酸，2-萘磺酸，4-甲苯磺酸，樟腦磺酸，4-甲基雙環(huán)[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸，葡庚糖酸，3-苯基丙酸，三甲基乙酸，叔丁基乙酸，月桂基硫酸，葡萄糖酸，谷氨酸，羥基萘甲酸，水楊酸，硬脂酸，粘康酸；或(2)當(dāng)母體化合物中存在的酸性質(zhì)子被金屬離子，例如堿金屬離子，堿土金屬離子，或鋁離子取代；或與有機(jī)堿如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，氨基丁三醇(tromethamine)，N-甲基葡糖胺配位所形成的鹽。
“保護(hù)基”指當(dāng)與分子中的反應(yīng)基相連時(shí)掩蔽(mask)、減少或阻止其反應(yīng)性的原子的分組。保護(hù)基的實(shí)例可以在T.W.Green和P.G.Futs，Protective Groups in Organic Chemistry，(Wiley，第二版，1991)以及Harrison和Harrison等，Compendium of Synthetic Organic Methods，卷1-8(John Wiley & Sons，1971-1996)中發(fā)現(xiàn)。典型的氨基保護(hù)基包括甲?；?，乙?；?，三氟乙?；?，芐基，芐氧羰基(CBZ)，叔丁氧羰基(Boc)，三甲代甲硅烷基(TMS)，2-三甲代甲硅烷基-乙磺?；?SES)，三苯甲基和取代的三苯甲基，烯丙氧羰基，9-芴基甲氧羰基(FMOC)，硝基-藜蘆氧羰基(NVOC)。典型的羥基保護(hù)基包括其中羥基為?；蛲榛哪切?，如芐基，和三苯甲基醚以及烷基醚，四氫吡喃基醚，三甲代甲硅烷基醚和烯丙基醚。
疾病的“治療”或“治療法”包括(1)預(yù)防疾病，即促使疾病的臨床癥狀不在哺乳動(dòng)物中發(fā)展，這些哺乳動(dòng)物可能暴露于或易患疾病，但還未經(jīng)歷或顯示疾病的癥狀；(2)抑制疾病，即阻止或減少疾病或其臨床癥狀的發(fā)展；或(3)減輕疾病，即促使疾病或其臨床癥狀消退。
“治療有效量”是指當(dāng)對(duì)哺乳動(dòng)物給藥治療疾病時(shí)足以實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病治療的化合物的量。“治療有效量”將依據(jù)化合物，疾病及其嚴(yán)重性和待治療哺乳動(dòng)物的年齡，體重等而變化。
具有相同的分子式但性質(zhì)或它們?cè)拥逆I合順序，或它們?cè)拥目臻g排列不同的化合物稱(chēng)作“異構(gòu)體”。它們?cè)拥目臻g排列不同的異構(gòu)體稱(chēng)作“立體異構(gòu)體”。彼此不成鏡像的立體異構(gòu)體稱(chēng)作“非對(duì)映異構(gòu)體”，和相互成不可重疊鏡像的立體異構(gòu)體稱(chēng)作“對(duì)映異構(gòu)體”。當(dāng)一種化合物有一個(gè)不對(duì)稱(chēng)中心，例如一個(gè)碳原子連接四個(gè)不同的基團(tuán)，可有一對(duì)對(duì)映異構(gòu)體。對(duì)映異構(gòu)體可通過(guò)其不對(duì)稱(chēng)中心的絕對(duì)構(gòu)型來(lái)表征，通過(guò)Cahn和Prelog的R-和S-順序規(guī)則，或通過(guò)該分子旋轉(zhuǎn)偏振光平面的方式并標(biāo)明為右旋或左旋(即分別為(+)或(-)-異構(gòu)體)來(lái)描述。一種手性化合物可以以單獨(dú)的對(duì)映異構(gòu)體或其混合物存在。含有相等比例對(duì)映異構(gòu)體的混合物稱(chēng)作“外消旋混合物”。
本發(fā)明化合物可具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱(chēng)中心；因此該化合物可以以單獨(dú)的(R)-或(S)-立體異構(gòu)體或以它們的混合物來(lái)生產(chǎn)這樣的化合物。除非另外說(shuō)明，在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，一個(gè)具體化合物的描述或命名意思是同時(shí)包括單獨(dú)的對(duì)映異構(gòu)體和它們的外消旋或其他混合物。立體化學(xué)的測(cè)定和立體異構(gòu)體的分離方法在本領(lǐng)域中是眾所周知的(參閱“高等有機(jī)化學(xué)”第4章中的討論，第4版J.March，John Wiley andSons，紐約，1992年)。
用于本申請(qǐng)的命名法基本基于IUPAC推薦原則。例如，式(I)的化合物，其中R1是氫；R2是2-(4-氯苯基)乙基；R3是氫；并且R4是4-甲磺酰苯基，被稱(chēng)為(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]-環(huán)戊基}-4-甲磺?；郊柞０贰?br> 式(I)的典型化合物在下表中顯示。


雖然上面描述了本發(fā)明最寬的定義，式(I)的某些化合物是優(yōu)選的。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R1是氫或甲基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R2是苯基烷基的式(I)的化合物，其中所述苯基任選地被1個(gè)，2個(gè)或3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立地選自烷基，鹵素，氰基，硝基，烷氧基，鹵代烷氧基，羥基，氨基，酰氨基，烷基氨基，和二烷基氨基。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R2是苯基烷基的式(I)的化合物，其中所述苯基被1個(gè)，2個(gè)或3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立地選自烷基，鹵素，氰基，硝基，烷氧基，鹵代烷氧基，羥基，氨基，酰氨基，烷基氨基，和二烷基氨基。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R2是苯基烷基的式(I)的化合物，其中所述苯基被1個(gè)，2個(gè)或3個(gè)鹵代取代基取代。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R2是苯基烷基的式(I)的化合物，其中所述苯基被1個(gè)或2個(gè)鹵代取代基取代。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R2是苯基烷基的式(I)的化合物，其中所述苯基被1個(gè)鹵代取代基取代。
本發(fā)明更優(yōu)選的一種化合物是其中R2是(4-氯苯基)烷基的式(I)的化合物。
本發(fā)明還更優(yōu)選的一種化合物是其中R2是2-(4-氯苯基)乙基，或3-(4-氯苯基)丙基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R3是氫或甲基，優(yōu)選氫的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R3是烷基，?；?，芳基，或芳烷基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中W不存在的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中W是亞烷基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中X不存在的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中X是羰基(-C(＝O)-)，氧(-O-)，，-S(O)n-或-N(Ra)-的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中X是硫的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中Y是芳基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中Y是雜芳基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中-Y-Z是4-甲磺酰苯基；或3，4，5-三甲氧基苯基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中R4是4-甲磺酰苯基；3，4，5-三甲氧基苯基氨基；或5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫代甲基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中Z是氫的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是其中Z是芳基，雜芳基，芳氧基，雜芳氧基，或芳烷基，或雜芳基亞烷基的式(I)的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的一種化合物是式(I)的化合物，其中本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物是(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]環(huán)戊基}-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]環(huán)戊基}-4-甲磺酰基苯甲酰胺；(±)-反-1-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]-環(huán)戊基}-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-4-甲磺酰基苯甲酰胺；(±)-反-1-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-1-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}環(huán)戊基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-N-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-甲磺?；郊柞０罚?±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-甲磺?；郊柞０?；(±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；(±)-反-N-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；
(±)-反-1-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；或(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；或其藥用鹽。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員了解可用許多方法制備本發(fā)明的化合物。優(yōu)選的方法包括但不限于以下所述的常規(guī)合成步驟。
用于制備這些化合物的原料和試劑或由商業(yè)供應(yīng)商提供，如Aldrich化學(xué)公司(美國(guó)威斯康星州密爾沃基市)，Bachem(美國(guó)加里福尼亞州托倫斯市)，Enika-Chemie，或Sigma(美國(guó)密蘇里州圣路易斯市)，Maybridge(DistRyan Scientific，P.O.Box 6496，Columbia，S.C.92960)，BionetResearch Ltd.，(Cornwall PL32 9QZ，UK)，Menai Organics Ltd.，(Gwynedd，N.Wales，UK)，Butt Park Ltd.，(Dist.Interchim，Montlucon Cedex，F(xiàn)rance)，或通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法按照文獻(xiàn)闡述的步驟來(lái)制備，所述參考文獻(xiàn)如用于有機(jī)合成的Fieser和Fieser’試劑，1-17卷(John Wiley和Sons，1991)；碳化合物的Rodd’s化學(xué)，1-5卷和附錄(Elsevier Science Publishers，1989)，有機(jī)反應(yīng)，1-40卷(John Wiley和Sons，1991)，March’s高等有機(jī)化學(xué)，(John Wiley和Sons，1992)，和Larock’s有機(jī)轉(zhuǎn)化大全(VCHPublishers Inc.，1989)。這些方案流程僅舉例說(shuō)明了可合成本發(fā)明化合物的一些方法，涉及這一公開(kāi)內(nèi)容的本領(lǐng)域技術(shù)人員可對(duì)這些方案進(jìn)行修改或提出建議。
如果需要，原料和反應(yīng)中間體可使用常規(guī)技術(shù)來(lái)分離和純化，常規(guī)技術(shù)包括但不限于過(guò)濾，蒸餾，結(jié)晶，層析等?？墒褂贸Ｒ?guī)方法對(duì)這些材料進(jìn)行表征，常規(guī)方法包括物理常數(shù)和光譜數(shù)據(jù)。
通常，如下列方案說(shuō)明可以制備其中R1是H并且R2是2-(4-氯苯基)乙基或3-(4-氯苯基)丙基的式(I)化合物。
本發(fā)明還提供方法制備其中R1是氫的式(I)的化合物的方法，其包含將相應(yīng)的式(III)的化合物脫保護(hù) 其中Pg是氮保護(hù)基。
本發(fā)明還提供制備其中R1是烷基的式(I)化合物的方法，其包含使用所需的其中L為離去基團(tuán)的羧酸衍生物R-C(＝O)-L，烷基化相應(yīng)的式(V)化合物 可以用于本發(fā)明方法中的羧酸衍生物包括羧酸，以及活性羧酸衍生物(例如羧酸氯化物，溴化物，或酐)。?；返倪m當(dāng)?shù)臈l件和試劑在本領(lǐng)域是眾所周知的。例如，參閱“高等有機(jī)化學(xué)，反應(yīng)，機(jī)理，和結(jié)構(gòu)”Jerry March，第4版，(1992)，John Wiley & Sons，紐約。
本發(fā)明還提供制備式(III)的化合物的方法 其中Pg是氮保護(hù)基；R2是芳烷基；R3是氫，烷基，酰基，芳基，或芳烷基；R4是-W-X-Y-Z；W不存在或是亞烷基；X不存在，羰基，氧，-S(O)n-，或-N(Ra)-；Y是亞芳基或雜亞芳基；Z是氫，芳基，雜芳基，芳氧基，雜芳氧基，芳烷基，或雜芳基亞烷基；Ra是氫，烷基，?；?，芳基，芳烷基，烷氧羰基，或芐氧羰基；其包含使用所需的其中L為離去基團(tuán)的羧酸衍生物R-C(＝O)-L，?；?IV)的化合物
制備式(I)化合物的特別有用的一個(gè)中間體是式(II)的化合物 其中R1和R2具有任何值或本文提供的優(yōu)選值。
制備式(I)化合物的特別有用的另一中間體是式(III)的化合物 其中R2-R4具有任何值或本文提供的優(yōu)選值；Pg是氮保護(hù)基(例如叔丁氧羰基)。
制備式(I)化合物的特別有用的另一中間體是式(IV)的化合物 其中R2和R3具有任何值或本文提供的優(yōu)選值Pg是氮保護(hù)基(例如叔丁氧羰基)。
制備式(I)化合物的特別有用的另一中間體是式(V)的化合物 其中R2和R3具有任何值或本文提供的優(yōu)選值；R1是烷基基。
通常，除非另外說(shuō)明，所有非水相反應(yīng)是在氮?dú)鈿夥障逻M(jìn)行并且將Na2SO4用來(lái)干燥所有有機(jī)層。典型地通過(guò)在硅膠(230-400目)上的快速層析或在來(lái)自Analtech，Inc.，Newark，德國(guó)的Uniplate Silica Gel GF PLCPlates(20×20cm，1000microns)上的制備TLC進(jìn)行純化。礬土是堿性的，含有6重量％H2O(Brockmann III)。未校正在毛細(xì)管中獲得的熔點(diǎn)。在KBr中測(cè)定IR光譜。NMR譜是在CDCl3中進(jìn)行，除非另外說(shuō)明。1H NMR譜是在75.5MH下記錄。質(zhì)譜分析是使用電霧化電離完成的。在裝備二極管陣列分光光度計(jì)(范圍190-300nm；Hewlett Packard)的Shimadzu系統(tǒng)上進(jìn)行分析反相HPLC。固定相是Zorbax SB-苯基快速分離柱(4.6mm×50mm；Hewlett Packard)，流動(dòng)相A是0.1％三氟乙酸，流動(dòng)相B是CH3CN。采用5分鐘內(nèi)20-55％B梯度，流速2.5ml/min，然后5分鐘內(nèi)55-20％B。
本發(fā)明化合物是CCR-3受體拮抗劑，抑制CCR-3的趨化因子如RANTES，eotaxin，MCP-2，MCP-3和MCP-4引起的嗜曙紅細(xì)胞募集。本發(fā)明化合物和含有它們的組合物在治療嗜曙紅細(xì)胞誘導(dǎo)的疾病中是有用的，所述疾病如炎性或過(guò)敏性疾病，并且包括呼吸過(guò)敏性疾病如哮喘，過(guò)敏性鼻炎，過(guò)敏性肺病，超敏性肺炎，嗜酸細(xì)胞性肺炎(例如慢性嗜酸細(xì)胞性肺炎)；炎性腸疾病(例如局限性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)；和銀屑病和炎性皮膚病如皮炎和濕疹。
本發(fā)明化合物的CCR-3拮抗活性可通過(guò)體外試驗(yàn)測(cè)定，如配體結(jié)合試驗(yàn)和趨化性試驗(yàn)，在實(shí)施例14，15和16中有更詳細(xì)的說(shuō)明?？梢酝ㄟ^(guò)Balb/c小鼠模型中卵清蛋白誘導(dǎo)的哮喘進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)，在實(shí)施例17中有更詳細(xì)的說(shuō)明。
通常，依據(jù)任何公認(rèn)的適于相同應(yīng)用的藥劑的給藥方式，本發(fā)明化合物以治療有效量給藥。本發(fā)明化合物即活性成分的實(shí)際量將取決于諸多因素如被治療疾病的嚴(yán)重性，受試者的年齡和相對(duì)健康，所使用化合物的效力，給藥的途徑和形式及其他因素。
式(I)化合物治療的有效量可以是接受者每千克體重每天大約0.01-20mg；優(yōu)選大約0.1-10mg/kg/天。這樣，給70kg的人用藥，最優(yōu)選劑量范圍為每天大約7mg-0.7g。
通常，本發(fā)明化合物作為藥用組合物通過(guò)下列任何一個(gè)途徑給藥口服，吸入(例如鼻內(nèi)或經(jīng)口吸入)或腸胃外(例如肌內(nèi)，靜脈內(nèi)或皮下)給藥。優(yōu)選給藥方式是口服，使用常規(guī)的按日劑量服用，可根據(jù)病情程度調(diào)節(jié)。組合物可做成片劑，丸劑，膠囊，半固體，粉劑，持續(xù)釋放制劑，溶液，混懸液，脂質(zhì)體，酏劑，或任何其他適當(dāng)?shù)慕M合物。用于給藥本發(fā)明化合物的另一優(yōu)選方式是吸入。這對(duì)于將治療劑直接傳遞到呼吸道來(lái)治療疾病如哮喘和其它類(lèi)似或相關(guān)的呼吸道疾病是有效的方式(參閱美國(guó)專(zhuān)利5,607,915)。
劑型的選擇根據(jù)多種因素如藥物的給藥方式和藥物的生物利用度。對(duì)于吸入給藥的傳遞方式，該化合物可以制成的劑型為液體溶液或混懸液，氣溶膠型噴射劑或干粉裝入適當(dāng)?shù)挠糜诳诜姆稚?。有三種藥物吸入裝置噴霧器吸入劑，計(jì)量劑量吸入劑(MDI)，和干粉吸入劑(DPI)。噴霧器裝置產(chǎn)生一高速氣流，它使治療藥物(其已制成液體劑型)成霧狀噴射，該噴霧進(jìn)入患者的呼吸道。MDI通常將制劑用壓縮氣體包裝。刺激后，該裝置通過(guò)壓縮氣體釋放一定量的治療藥物，由此提供了一種給藥一定量藥物的可靠方法。DPI給藥劑型是將自由流動(dòng)的粉末劑型的藥物在裝置吸入時(shí)可以將其分散至患者的呼吸道氣流。為了獲得自由流動(dòng)的粉末，治療藥物可以與賦型劑如乳糖制成制劑?？蓽y(cè)定量的藥物儲(chǔ)存在膠囊劑型中，通過(guò)每次激活分配給患者。最近，已開(kāi)發(fā)出藥物制劑特別用于生物利用度差的藥物，它是根據(jù)通過(guò)增加表面積即減少粒徑可以增加生物利用度的原則。例如，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,107,288描述了粒徑范圍在10-1,000nm的藥物制劑，其中活性物質(zhì)被加載到高分子的交聯(lián)骨架上。美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,145,684描述了一種藥物制劑，其中藥物在表面改性劑存在下被研磨成毫微顆粒(平均粒徑400nm)，然后分散到液體介質(zhì)中，得到表現(xiàn)出具有相當(dāng)高的生物利用度的藥物劑型。
通常，上述組合物包括式(I)化合物，它與至少一種藥用賦形劑組合?？山邮艿馁x形劑是無(wú)毒的，它幫助給藥并且對(duì)式(I)化合物的治療益處無(wú)不利影響。該賦形劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員通?？捎玫娜我夤腆w，液體，半固體或在氣霧劑組合物中為氣體的賦形劑。
固體藥物賦型劑包括淀粉、纖維素、滑石粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、白明膠、麥芽、稻米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸鹽、氯化鈉、干脫脂乳等。液體和半固體賦型劑可以選自甘油、丙二醇、水、和多種油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來(lái)源的油，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。優(yōu)選的液體載體，特別是用于注射溶液的液體載體包括水、鹽水、葡萄糖溶液和二醇等。
壓縮氣體可以在氣溶膠劑型中用于分散本發(fā)明的化合物。適合用于該目的的惰性氣體為氮?dú)?、二氧化碳等?br> 對(duì)于非胃腸道或口服傳遞藥物的脂質(zhì)體劑型，脂質(zhì)被溶解到適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中，例如叔丁醇、環(huán)己烷(1％乙醇)。該溶液被凍干，脂質(zhì)混合物被分散到允許形成脂質(zhì)體的緩沖劑溶液中。如果必要，可以通過(guò)超聲處理減少脂質(zhì)體的粒徑。(參見(jiàn)Frank Szoka，Jr.和DemetriosPapahadjopoulos，“脂質(zhì)泡(脂質(zhì)體)制劑的比較性質(zhì)和方法”，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.，9467-508(1980)，和D.D.Lasic“脂質(zhì)體的新應(yīng)用”Trends in Biotech.，16467-608，(1998))。
其它適合的藥物賦型劑和它們的劑型在Remington’s PharmaceuticalSciences中描述，由E.W.Martin編輯(Mack Publishing Company，第18版，1990)。
制劑中化合物的量可以在本領(lǐng)域技術(shù)人員通常使用的范圍內(nèi)改變。通常，該制劑含有，根據(jù)重量百分比0.01-99.99重量％的式(I)化合物(基于制劑總重量)，其余用一種或多種適當(dāng)?shù)乃幬镔x型劑補(bǔ)足。優(yōu)選地，該化合物存在量為1-80wt％。含有式(I)化合物的有代表性的制劑在實(shí)施例13中描述。
實(shí)施例合成實(shí)施例常規(guī)方法A(使用異氰酸酯形成脲)用指定的異氰酸酯(1.1-2當(dāng)量)處理0-20℃的CH2Cl2或CH2Cl2和DMF中的0.1-0.6M胺溶液(1當(dāng)量)，攪拌0.5-1.5小時(shí)，并在CH2Cl2和飽和NaHCO3之間分配。用CH2Cl2萃取水相并將萃取物干燥和濃縮。通過(guò)柱層析或制備TLC純化粗制脲，或者不進(jìn)一步純化而用于下一步驟。常規(guī)方法B(使用異氰酸酯形成脲，接著形成鹽酸鹽)用指定的異氰酸酯(1.1-2當(dāng)量)處理0-20℃的CH2Cl2或CH2Cl2和DMF中的0.1-0.6M胺溶液(1當(dāng)量)，攪拌0.5-1.5小時(shí)，并在CH2Cl2和飽和NaHCO3之間分配。用CH2Cl2萃取水相并將萃取物干燥和濃縮。通過(guò)柱層析或制備TLC純化粗制脲，或者不進(jìn)一步純化而用于下一步驟。用Et2O中的1 N HCl處理CH2Cl2中的游離堿溶液并濃縮以產(chǎn)生鹽酸鹽。常規(guī)方法C(使用1-羥基苯并三唑和1-(3-二甲氨基-丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽形成酰胺)連續(xù)用1-羥基苯并三唑水合物(HOBt)(0.2-0.5當(dāng)量)和1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(DEC)(1.3-2當(dāng)量)處理0℃的CH2Cl2中的0.1-0.4M胺溶液(1當(dāng)量)和指定的羧酸(1.2-1.5當(dāng)量)，在0-20℃下攪拌2-72小時(shí)，并在CH2Cl2和飽和NaHCO3之間分配。用CH2Cl2萃取水相并將萃取物干燥和濃縮。通過(guò)柱層析和/或制備TLC純化粗制酰胺。
常規(guī)方法D(使用1-羥基苯并三唑和1-(3-二甲氨基-丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽形成酰胺，接著形成鹽酸鹽)連續(xù)用1-羥基苯并三唑水合物(HOBt)(0.2-0.5當(dāng)量)和1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(DEC)(1.3-2當(dāng)量)處理0℃的CH2Cl2中的0.1-0.4M胺溶液(1當(dāng)量)和指定的羧酸(1.2-1.5當(dāng)量)，在0-20℃下攪拌2-72小時(shí)，并在CH2Cl2和飽和NaHCO3之間分配。用CH2Cl2萃取水相并將萃取物干燥和濃縮。通過(guò)柱層析和/或制備TLC純化粗制酰胺。用Et2O中的1 N HCl處理CH2Cl2中的游離堿溶液并濃縮以產(chǎn)生鹽酸鹽。
實(shí)施例1(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]環(huán)戊基}-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺鹽酸鹽 在室溫下攪拌10％HCl/MeOH(30ml)中的(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-(2-{2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰氨基}環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯(185mg，純度80％，～0.23mmol)過(guò)夜。蒸發(fā)MeOH并將殘?jiān)贑H2Cl2和飽和NaHCO3之間分配。用CH2Cl2萃取水相并用鹽水洗滌萃取液，干燥并濃縮。通過(guò)使用10∶0.95∶0.05 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH的制備TLC純化產(chǎn)生無(wú)色油狀的游離堿(98mg，0.18mmol)。用Et2O中的1 N HCl(0.3ml，0.3mmol)處理CH2Cl2中的游離堿溶液，并濃縮以產(chǎn)生黃色固體產(chǎn)物(104mg，67％來(lái)自(±)-反-(2-氨基-環(huán)戊基)-[3-(4-氯苯基)-丙基]-氨基甲酸叔丁酯)熔點(diǎn)95.3-111.3℃；MS m/z 541(M+1)+。
如下制備中間體(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-(2-{2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰氨基}環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯。
步驟A制備6-(4-硝基苯磺?；?-6-氮雜-雙環(huán)[3.1.0]己烷
在20分鐘期間用CH2Cl2(35ml)中的6-氮雜-雙環(huán)[3.1.0]己烷(3.8g，45.8mmol)[Zhang，Z.da；Scheffold，R.Helv.Chim.Acta 1993，76，2602]和Et3N(7.0ml，50.4mmol)溶液逐滴處理-20℃的CH2Cl2(15ml)中的4-硝基-苯磺酰氯(10.2g，46.0mmol)溶液，使其在30分鐘內(nèi)升溫至10℃，并在CH2Cl2和1 N NaH2PO4之間分配。用CH2Cl2萃取水相并用H2O，5％NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。在12∶4∶3己烷∶CH2Cl2∶甲基叔丁酯(methyl tert-butyl ester)中結(jié)晶以產(chǎn)生淺棕色固體產(chǎn)物(10.1g，82％)MS m/z 269.1(M+1)+。
步驟B制備(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]-環(huán)戊基}-4-硝基苯磺酰胺 將6-(4-硝基苯磺酰基)-6-氮雜-雙環(huán)[3.1.0]己烷(2.7g，10mmol)，3-(4-氯苯基)丙胺(1.7g，10mmol)[Fujimura，K.-i.；Matsumoto，J；Niwa，M.；Kobayashi，T.；Kawashima，Y.；In，Y.；Ishida，T.Bioorg.Med.Chem.1997，5，1675]和Et3N(0.27ml，2mmol)的THF(10ml)溶液回流15小時(shí)，使冷卻到室溫，并濃縮。用100∶0.95∶0.05-50∶0.95∶0.05 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH層析產(chǎn)生褐色泡沫產(chǎn)物(1.88g，43％)MS m/z 438.1(M+1)+。
步驟C制備(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-[2-(4-硝基-苯磺?；被?-環(huán)戊基]-氨基甲酸叔丁酯 用二碳酸二叔丁酯(458mg，2.1mmol)處理(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]-環(huán)戊基}-4-硝基-苯磺酰胺(920mg，2.1mmol)和Et3N(0.35ml，2.5mmol)的CH2Cl2溶液(15ml)，并且在室溫下攪拌23小時(shí)，期間加入另外的Et3N(0.2ml，1.43mmol)和二碳酸二叔丁酯(200mg，0.92mmol)。在CH2Cl2和飽和NaHCO3之間分配反應(yīng)混合物，用CH2Cl2萃取水相，用鹽水洗滌萃取物，干燥(MgSO4)并濃縮以產(chǎn)生1.34g棕色油狀產(chǎn)物MS m/z 538.1(M+1)+，其直接用于下一步驟。
步驟D制備(±)-反-(2-氨基環(huán)戊基)-[3-(4-氯苯基)丙基]-氨基甲酸叔丁酯 在80℃下攪拌(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-[2-(4-硝基-苯磺酰基氨基)環(huán)戊基]-氨基甲酸叔丁酯(1.34g，約2.1mmol)，PhSH(0.86ml，8.4mmol)，K2CO3(1.5g，10.9mmol)和40∶1 CH3CN∶DMSO(40ml)的混合物過(guò)夜，并使冷卻到室溫。將白色固體濾出并濃縮濾液。在CH2Cl2和H2O之間分配殘?jiān)?，并用H2O和鹽水洗滌有機(jī)相，干燥并濃縮。使用CH2Cl2的殘?jiān)鼘游龊蠼又?00∶0.95∶0.05-5∶0.95∶0.05 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH產(chǎn)生黃色油狀產(chǎn)物(571mg，77％)MS m/z 353.2(M+1)+。
步驟E制備(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-(2-{2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰氨基}環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯 使用常規(guī)方法C，在0℃下使用HOBt(8mg，0.06mmol)和DEC(77mg，0.40mmol)在CH2Cl2(3ml)中使(±)-反-(2-氨基環(huán)戊基)-[3-(4-氯苯基)丙基]氨基甲酸叔丁酯(95mg，0.27mmol)和[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酸(90mg，0.30mmol)(如Rogers，D.H.，Saunders，J.，和Williams，J.P.“Preparation of N-Pyrrolidinylmethylalkanoamides and analogs as CCR-3receptor antagonists”；DE19955794 Al 20000531中所述制備)偶合2小時(shí)。使用100∶0.95∶0.05 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH的制備TLC純化粗制品產(chǎn)生185mg無(wú)色油狀產(chǎn)物(純度～80％)MS m/z 641(M+1)+。
實(shí)施例2(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]環(huán)戊基}-4-甲磺?；郊柞０符}酸鹽 在室溫下攪拌(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-[2-(4-甲磺?；郊柞；被?環(huán)戊基]氨基甲酸叔丁酯在10％HCl/MeOH(25ml)中的溶液過(guò)夜。蒸發(fā)MeOH并在CH2Cl2和飽和NaHCO3之間分配殘?jiān)Ｓ肅H2Cl2萃取水相并用鹽水洗滌萃取液，干燥并濃縮。用10∶0.95∶0.05 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH的制備TLC純化殘?jiān)a(chǎn)生無(wú)色油狀的游離堿(116mg，0.27mmol)。用Et2O中的1 N HCl(0.3ml，0.3mmol)處理CH2Cl2中的游離堿溶液，并濃縮以產(chǎn)生白色固體產(chǎn)物(123mg，61％)熔點(diǎn)192.3-196.8℃；MS m/z 435(M+1)+。
如下制備中間體(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-[2-(4-甲磺?；郊柞；被?環(huán)戊基]氨基甲酸叔丁酯。
步驟A.制備(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-[2-(4-甲磺?；郊柞；被?環(huán)戊基]氨基甲酸叔丁酯使用常規(guī)方法C，在0℃下使用HOBt(12mg，0.09mmol)和DEC(106mg，0.66mmol)在CH2Cl2(3ml)中使(±)-反-(2-氨基環(huán)戊基)-[3-(4-氯苯基)丙基]氨基甲酸叔丁酯(155mg，0.44mmol)和4-甲磺酰苯甲酸(105mg，0.53mmol)偶合2.5小時(shí)，以產(chǎn)生250mg無(wú)色油狀(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-[2-(4-甲磺酰基苯甲?；被?環(huán)戊基]氨基甲酸叔丁酯。
實(shí)施例3(±)-反-1-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]-環(huán)戊基}-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲鹽酸鹽 在室溫下攪拌(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-{2-[3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)脲基]環(huán)戊基}氨基甲酸叔丁酯(165mg，0.29mmol)在10％HCl/MeOH(25ml)中的溶液過(guò)夜。蒸發(fā)MeOH并在CH2Cl2和飽和NaHCO3之間分配殘?jiān)?。用CH2Cl2萃取水相并用鹽水洗滌萃取液，干燥并濃縮。用10∶0.95∶0.05CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH的制備TLC純化殘?jiān)a(chǎn)生無(wú)色油狀的游離堿。用Et2O中的1 N HCl(0.4ml，0.4mmol)處理CH2Cl2中的游離堿溶液，并濃縮以產(chǎn)生棕褐色固體產(chǎn)物(104mg，72％)熔點(diǎn)91.3-96.0℃；MS m/z 462(M+1)+。
如下制備中間體(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-{2-[3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)脲基]環(huán)戊基}氨基甲酸叔丁酯。
步驟A制備(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-{2-[3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)脲基]環(huán)戊基}氨基甲酸叔丁酯
使用常規(guī)方法A，在0℃下在CH2Cl2(2ml)中使(±)-反-(2-氨基環(huán)戊基)-[3-(4-氯苯基)丙基]-氨基甲酸叔丁酯(152mg，0.43mmol)和5-異氰酸基-1，2，3-三甲氧基苯(108mg，0.52mmol)偶合1.5小時(shí)。用10∶0.95∶0.05CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH的制備TLC純化粗制品產(chǎn)生無(wú)色油狀產(chǎn)物(168mg，70％)MS m/z 562.2(M+1)+。
實(shí)施例4(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-4-甲磺?；郊柞０符}酸鹽 使用類(lèi)似于實(shí)施例3的方法，除了用(±)-反-[2-(4-氯苯基)乙基]-[2-(4-甲磺?；郊柞；被?環(huán)戊基]氨基甲酸叔丁酯替代其中使用的(±)-反-[3-(4-氯苯基)丙基]-{2-[3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲基]環(huán)戊基}氨基甲酸叔丁酯以外，制備標(biāo)題化合物；MS m/z 421(M+1)+。
使用類(lèi)似實(shí)施例1的方法制備中間體(±)-反-[2-(4-氯苯基)乙基]-[2-(4-甲磺酰基苯甲?；被?環(huán)戊基]氨基甲酸叔丁酯，除了用2-(4-氯苯基)-乙胺替代步驟B中所用的3-(4-氯苯基)丙胺，并用所需要的酸替代步驟E中所用的酸以外。
實(shí)施例5(±)-反-1-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲鹽酸鹽
使用以上的常規(guī)方法B，從(±)-反-N-[3-(4-氯苯基)丙基]-N-甲基環(huán)戊烷-1，2-二胺和5-異氰酸基-1，2，3-三甲氧基苯制備標(biāo)題化合物；MS m/z 476(M+1)+。
中間體(±)-反-N-[3-(4-氯苯基)丙基]-N-甲基環(huán)戊烷-1，2-二胺制備如下。
步驟A制備(±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-硝基苯磺酰胺 用NaBH(OAc)3(456mg，8.6mmol)處理(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]環(huán)戊基}-4-硝基苯磺酰胺(940mg，2.15mmol)和37％HCHO水溶液(0.16ml，2.15mmol)的1，2-二氯甲烷溶液(10ml)，并在室溫下攪拌24小時(shí)，期間加入另外的37％HCHO水溶液(0.05ml，0.67mmol)。在1，2-二氯甲烷和飽和NaHCO3之間分配反應(yīng)混合物，用EtOAc萃取水相，用鹽水洗滌萃取液，干燥并濃縮。使用25∶0.95∶0.05 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH的殘?jiān)膶游霎a(chǎn)生黃色油狀產(chǎn)物(965mg，100％)MS m/z 452.1(M+1)+。
步驟B制備(±)-反-N-[3-(4-氯苯基)丙基]-N-甲基環(huán)戊烷-1，2-二胺
在80℃下將(±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-硝基苯磺酰胺(960mg，2.12mmol)，PhSH(1.09ml，10.6mmol)，K2CO3(1.9g，13.8mmol)和40∶1 CH3CN∶DMSO(40ml)的混合物攪拌過(guò)夜，并使冷卻到室溫。將白色固體濾出并濃縮濾液。在CH2Cl2和H2O之間分配殘?jiān)?，并用H2O和鹽水洗滌有機(jī)相，干燥并濃縮。使用100％CH2Cl2，接著100∶0.95∶0.05-5∶0.95∶0.05 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH層析殘?jiān)a(chǎn)生棕色油狀產(chǎn)物(300mg，53％)MS m/z 267.1(M+1)+。
實(shí)施例6(±)-反-1-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}環(huán)戊基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲鹽酸鹽 使用上述常規(guī)方法B，從(±)-反-N-[2-(4-氯苯基)乙基]-N-甲基環(huán)戊烷-1，2-二胺和5-異氰酸基-1，2，3-三甲氧基苯制備標(biāo)題化合物MS m/z 462(M+1)+。
如實(shí)施例5所述制備中間體(±)-反-N-[2-(4-氯苯基)乙基]-N-甲基環(huán)戊烷-1，2-二胺，除了用通過(guò)類(lèi)似實(shí)施例1，步驟B的方法制備的(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基(ethylylamino)]環(huán)戊基}-4-硝基苯磺酰胺替代步驟A中所用的(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]環(huán)戊基}-4-硝基苯磺酰胺以外。
實(shí)施例7(±)-反-N-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-甲磺?；郊柞０?使用常規(guī)方法D，如實(shí)施例2中步驟A所述，從(±)-反-N-[2-(4-氯苯基)乙基]-N-甲基環(huán)戊烷-1，2-二胺和4-甲磺酰苯甲酸制備標(biāo)題化合物MSm/z 435(M+1)+。
實(shí)施例8-9使用常規(guī)方法D，從(±)-反-N-[3-(4-氯苯基)丙基]-N-甲基環(huán)戊烷-1，2-二胺和所需羧酸制備下列化合物。
實(shí)施例8(±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-甲磺?；郊柞０符}酸鹽；MS m/z 449(M+1)+。
實(shí)施例9(±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺鹽酸鹽；MS m/z 555(M+1)+。
實(shí)施例10(±)-反-N-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺鹽酸鹽；MS m/z 541(M+1)+。
使用常規(guī)方法D從(±)-反-N-[2-(4-氯苯基)乙基]-N-甲基環(huán)戊烷-1，2-二胺和所需羧酸制備標(biāo)題化合物。
實(shí)施例11(±)-反-1-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲鹽酸鹽；MS m/z 448(M+1)+。
使用實(shí)施例1所述的方法，從(±)-反-[2-(4-氯苯基)乙基]-{2-[3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲基]-環(huán)戊基}氨基甲酸叔丁酯制備標(biāo)題化合物。
通過(guò)用(±)-反-(2-氨基環(huán)戊基)-[2-(4-氯苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯替換其中所用的(±)-反-(2-氨基環(huán)戊基)-[3-(4-氯苯基)丙基]氨基甲酸叔丁酯，如實(shí)施例3所述制備中間體(±)-反-[2-(4-氯苯基)乙基]-{2-[3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲基]-環(huán)戊基}氨基甲酸叔丁酯。
實(shí)施例12(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺鹽酸鹽。
使用實(shí)施例1所述的方法，從(±)-反-[2-(4-氯苯基)乙基]-(2-{2-[5-(3，4-二甲氧基-苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰氨基}環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯制備標(biāo)題化合物；MS m/z 527(M+1)+。
通過(guò)用2-(4-氯苯基)乙胺替代步驟B中所用的3-(4-氯苯基)丙胺，如實(shí)施例1所述制備中間體(±)-反-[2-(4-氯苯基)乙基]-(2-{2-[5-(3，4-二甲氧基-苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰氨基}環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯。
實(shí)施例13配方實(shí)施例下列是包含式(I)化合物的典型藥物配方。
片劑配方充分混合下列成分，并將其壓成單一刻痕(scored)的片劑。
成分每片數(shù)量，mg本發(fā)明化合物 400玉米淀粉 50交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 25乳糖 120硬脂酸鎂 5
膠囊配方充分混合下列成分，并將其裝入硬殼明膠膠囊。
成分每膠囊數(shù)量，mg本發(fā)明化合物 200乳糖，噴霧干燥148硬脂酸鎂 2混懸液配方混合下列成分以形成用于口服給藥的混懸液。
成分量本發(fā)明化合物 1.0g反丁烯二酸0.5g氯化鈉2.0g對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.15g對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.05g粒狀糖25.5g山梨醇(70％溶液) 12.85gVeegum K(Vanderbilt公司) 1.0g調(diào)味劑0.035ml色素 0.5mg蒸餾水補(bǔ)足到100ml注射劑配方混合下列成分形成注射劑配方。
成分量本發(fā)明化合物 0.2g乙酸鈉緩沖溶液， 0.4M 2.0mlHCl(1N)或NaOH(1N)數(shù)量補(bǔ)到適當(dāng)?shù)膒H水(蒸餾，無(wú)菌) 數(shù)量補(bǔ)足到20ml脂質(zhì)體配方混合下列成分形成脂質(zhì)體配方。
成分量本發(fā)明化合物 10mgL-.α.-磷脂酰膽堿150mg叔丁醇 4ml冷凍干燥樣品，凍干過(guò)夜。用1ml 0.9％鹽水溶液重新調(diào)配樣品。通過(guò)超聲波降解可以減少脂質(zhì)體的粒徑。
實(shí)施例14體外CCR-3受體結(jié)合檢測(cè)本發(fā)明化合物的CCR-3拮抗活性可通過(guò)它們抑制125I eotaxin與CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染細(xì)胞結(jié)合的能力來(lái)測(cè)定(參閱Ponath，P.D.等，J.Exp.Med.，183卷，2437-2448，(1996))。
試驗(yàn)在Costar 96-孔聚丙烯圓底平板中進(jìn)行。將測(cè)試化合物溶解在DMSO中，然后用結(jié)合緩沖液(50mM HEPES，1mM CaCl.sub.2，5mMMgCl2，0.5％牛血清清蛋白(BSA)，0.02％疊氮化鈉，pH 7.24)稀釋以使DMSO的終濃度為2％。將25μl測(cè)試溶液或只含有DMSO的緩沖液(對(duì)照試樣)加至每個(gè)孔，接著加入25μl125I-eotaxin(100pmol)(NEX314，New England Nuclear，Boston，Mass.)和25μl結(jié)合緩沖液中的1.5×105CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染細(xì)胞。最終反應(yīng)體積為75μl。
在室溫下溫育反應(yīng)混合物1小時(shí)以后，通過(guò)將反應(yīng)混合物濾過(guò)聚氮丙啶處理的Packard Unifilter GF/C濾板(Packard，Chicago，Ill.)終止反應(yīng)。用冰冷的包含10mm HEPES和0.5M氯化鈉的洗滌緩沖液(pH 7.2)洗滌濾器4次，并在65℃下干燥約10分鐘。加入25μl/孔Microscint-20閃爍液(Packard)并通過(guò)使用Packard TopCount測(cè)定保留在濾器上的放射性。
本發(fā)明的化合物在該測(cè)定中有活性。典型數(shù)據(jù)如下所示。
實(shí)施例15抑制Eotaxin介導(dǎo)的CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染細(xì)胞的趨化性-體外試驗(yàn)本發(fā)明化合物的CCR-3拮抗活性可通過(guò)使用一種少許改進(jìn)的方法測(cè)量抑制eotaxin介導(dǎo)的CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染細(xì)胞的趨化性來(lái)測(cè)定，在Ponath，P.D.等，J.Clin.Invest.97604-612(1996)中描述了該方法。試驗(yàn)在24-孔的化學(xué)趨化皿(協(xié)作生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)品)中進(jìn)行。在培養(yǎng)基中培養(yǎng)CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染細(xì)胞，所述培養(yǎng)基含有RPMI 1640，10％Hyclone胎牛血清，55mM 2-巰基乙醇和遺傳霉素418(0.8mg/ml)。測(cè)定前18-24小時(shí)，用正丁酸以5mM/1×106個(gè)細(xì)胞/ml的終濃度處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，分離該細(xì)胞并以1×107個(gè)細(xì)胞/ml的水平再懸浮在測(cè)定介質(zhì)中，測(cè)定介質(zhì)含有相等份的RPMI 1640和培養(yǎng)基199(M199)及0.5％牛血清白蛋白。
將1mg/ml懸浮在磷酸鹽緩沖液中的人eotaxin加入到底腔中，使最終濃度為100nm。將微孔尺寸為3微米的Transwell培養(yǎng)插入物(Costar公司，Cambridge，Mass.)插入每個(gè)孔，并將L1.2細(xì)胞(1×106)以最終體積為100μl加到頂腔中。將DMSO中的測(cè)試化合物加到頂腔和底腔兩腔中使得最終DMSO的體積為0.5％。測(cè)定是相對(duì)于兩組對(duì)照進(jìn)行的。陽(yáng)性對(duì)照在頂腔中包含細(xì)胞，無(wú)測(cè)試化合物，并在下腔中僅有eotaxin。陰性對(duì)照在頂腔中包含細(xì)胞，無(wú)測(cè)試化合物，而在下腔中既無(wú)eotaxin，也無(wú)測(cè)試化合物。平板在37℃下溫育。4小時(shí)后，從腔中移去插入物，遷移到底腔的細(xì)胞的計(jì)數(shù)是用移液管從下腔吸出500μl細(xì)胞懸浮液，移到1.2ml Cluster管(Costar)中并在FACS上計(jì)數(shù)30秒來(lái)對(duì)它們計(jì)數(shù)。
實(shí)施例16抑制Eotaxin介導(dǎo)人嗜曙紅細(xì)胞的趨化性-體外試驗(yàn)本發(fā)明化合物抑制eotaxin介導(dǎo)的人嗜曙紅細(xì)胞趨化性的能力可使用一種稍微改進(jìn)的方法來(lái)評(píng)估，該程序在Carr，M.W.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，913652-3656(1994)中有描述。實(shí)驗(yàn)是使用24-孔化學(xué)趨化皿(Costar公司，Cambridge，Mass.)進(jìn)行。嗜曙紅細(xì)胞使用在PCT申請(qǐng)，公開(kāi)號(hào)WO 96/22371中描述的方法從血液中分離。使用的內(nèi)皮細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞系ECV 304，其從歐洲動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物保藏(Porton Down，Salisbury，英國(guó))處得到。內(nèi)皮細(xì)胞在直徑為6.5mm，孔徑為3.0μM的Biocoat.RTM.Transwell組織培養(yǎng)插入物(Costar公司，Cambridge MA)上培養(yǎng)。ECV 304細(xì)胞的培養(yǎng)基由M199，10％胎牛血清，L-谷氨酰胺和抗生素組成。測(cè)定介質(zhì)由相等份的RPMI 1640和M199及0.5％牛血清白蛋白組成。測(cè)定前24小時(shí)，將2×105ECV 304鋪在24-孔化學(xué)趨化皿的各插入物上并在37℃下溫育。將在測(cè)定介質(zhì)中稀釋的20nM eotaxin加入到底腔，底腔最終體積是600μl。將內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋的組織培養(yǎng)插入物插入每個(gè)孔中。將懸浮在100μl測(cè)定緩沖液中的106個(gè)嗜曙紅細(xì)胞加到頂腔中。將測(cè)試化合物溶解在DMSO中，加到頂腔和底腔兩處，使得各孔中最終DMSO體積是0.5％。相對(duì)于兩組對(duì)照進(jìn)行測(cè)定。陽(yáng)性對(duì)照在頂腔中含有細(xì)胞，并在下腔中有eotaxin。陰性對(duì)照在頂腔中含有細(xì)胞，而在下腔中僅有測(cè)定緩沖液。趨化皿在5％ CO2/95％空氣中在37℃下溫育1-1.5小時(shí)。
遷移到底腔的細(xì)胞用流動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。從下腔取500μl細(xì)胞懸浮液，移到一個(gè)管子中，通過(guò)一組30秒鐘的時(shí)間周期取得的結(jié)果得到相對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)。
實(shí)施例17通過(guò)CCR-3拮抗劑抑制嗜曙紅細(xì)胞流入卵清蛋白敏化的Balb/c小鼠的肺中-體內(nèi)試驗(yàn)本發(fā)明化合物抑制白血球滲入肺中的能力可以在用氣霧劑抗原激發(fā)后，測(cè)量嗜曙紅細(xì)胞在卵清蛋白(OA)-敏化的balb/c小鼠的支氣管肺泡灌洗(BAL)液體中的聚集的抑制來(lái)測(cè)定。簡(jiǎn)要地說(shuō)，重量為20-25g的雄性balb/c小鼠用OA(10μg在0.2ml氫氧化鋁溶液中)在第1天和第14天腹膜內(nèi)敏化。1星期之后，老鼠被分為10組。腹膜內(nèi)，皮下或口服給藥測(cè)試化合物或僅載體(對(duì)照組)或抗eotaxin抗體(陽(yáng)性對(duì)照)。1小時(shí)后，老鼠被置于樹(shù)脂玻璃箱內(nèi)，被暴露在由PARISTAR.TM.噴霧器(PARI，Richmond，Va.)產(chǎn)生的OA氣霧劑中20分鐘。未被敏化或者激發(fā)的老鼠被包括在內(nèi)作為陰性對(duì)照。在24或72小時(shí)后，將老鼠麻醉(氨基甲酸乙酯，大約1g/kg，i.p.)，插入套管導(dǎo)管(PE 60管狀材料)，用0.3ml PBS將肺灌洗4次。BAL液體被轉(zhuǎn)移到塑料管中并在冰上保存。20μl的BAL液體等分試樣中的總白血球用Coulter Counter.TM.測(cè)定。使用一般形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)光學(xué)顯微鏡在Cytospin.TM.制劑上進(jìn)行白血球分類(lèi)計(jì)數(shù)，該制劑已經(jīng)用修飾的Wright白血球染色劑(DiffQuick.TM.)染色。
為了清楚和理解的目的，通過(guò)舉例說(shuō)明和實(shí)施例已經(jīng)稍微詳細(xì)地描述了前述發(fā)明。顯然本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在后附權(quán)利要求的范圍內(nèi)進(jìn)行變化和改進(jìn)。因此，應(yīng)當(dāng)理解上述描述是意欲舉例說(shuō)明而不是限制性的。因此本發(fā)明的范圍不應(yīng)參考上述描述限定，而應(yīng)該參考下列后附的權(quán)利要求，以及該權(quán)利要求被授權(quán)的等效物的全部范圍來(lái)限定。
本發(fā)明引用的所有專(zhuān)利，專(zhuān)利申請(qǐng)和出版物完整的引用作為參考，以便似乎單個(gè)專(zhuān)利，專(zhuān)利申請(qǐng)或出版物是這樣被單獨(dú)地指明。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物或其藥用鹽 其中R1是氫或C1-6烷基；R2是芳基C1-6烷基；R3是氫，C1-6烷基，?；?，芳基，或芳基C1-6烷基；R4是-W-X-Y-Z；W不存在或是C1-6亞烷基；X不存在，羰基，氧，-S(O)n-，或-N(Ra)-；Y是亞芳基或雜亞芳基；并且Z是氫，芳基，雜芳基，芳氧基，雜芳氧基，芳基C1-6烷基，或雜芳基C1-6烷基；Ra是氫，C1-6烷基，?；?，芳基，芳基C1-6烷基，C1-6烷氧羰基，或芐氧羰基；并且每個(gè)n為0，1，或2；其中“?；敝?C(O)R基，其中R是氫，C1-6烷基，C3-7環(huán)烷基，C3-7環(huán)烷基C1-6烷基，苯基或苯基C1-6烷基，“芳基”指單環(huán)或雙環(huán)芳香烴基，其任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自C1-6烷基，鹵代C1-6烷基，羥基C1-6烷基，雜烷基，?；?，酰氨基，氨基，C1-6烷基氨基，二C1-6烷基氨基，C1-6烷硫基，C1-6烷基亞磺?；?，C1-6烷基磺?；?，-SO2NR’R”(其中R’和R”獨(dú)立地為氫或C1-6烷基)，C1-6烷氧基，鹵代C1-6烷氧基，C1-6烷氧羰基，氨基甲?；?，羥基，鹵素，硝基，氰基，巰基，亞甲二氧基或亞乙二氧基，“亞芳基”指二價(jià)芳基，“雜芳基”指5-12個(gè)環(huán)原子的含有至少一個(gè)芳香環(huán)的單環(huán)或雙環(huán)基團(tuán)，其包含一個(gè)，兩個(gè)，或三個(gè)選自N，O，或S的環(huán)雜原子，其余的環(huán)原子是C，條件是所述雜芳基的連接點(diǎn)將在芳香環(huán)上，并且所述芳香烴基任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基獨(dú)立地取代，所述取代基選自C1-6烷基，鹵代C1-6烷基，羥基C1-6烷基，雜烷基，?；?，酰氨基，氨基，C1-6烷基氨基，二C1-6烷基氨基，C1-6烷硫基，C1-6烷基亞磺酰基，C1-6烷基磺酰基，-SO2NR’R”(其中R’和R”獨(dú)立地為氫或C1-6烷基)，C1-6烷氧基，鹵代C1-6烷氧基，C1-6烷氧羰基，氨基甲?；?，羥基，鹵素，硝基，氰基，巰基，亞甲二氧基或亞乙二氧基，“雜亞芳基”指二價(jià)雜芳基，“雜烷基”指含有一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)取代基的C1-6烷基，所述取代基獨(dú)立地選自-ORa，-NRbRc，和-S(O)nRd，其中Ra是氫，酰基，C1-6烷基，C3-7環(huán)烷基或C3-7環(huán)烷基C1-6烷基，Rb和Rc彼此獨(dú)立地是氫，?；珻1-6烷基，C3-7環(huán)烷基或C3-7環(huán)烷基C1-6烷基，Rd是氫(條件是n為0)，C1-6烷基，C3-7環(huán)烷基，C3-7環(huán)烷基C1-6烷基，氨基，酰氨基，單C1-6烷基氨基或二C1-6烷基氨基，并且n是0-2的整數(shù)，條件是雜烷基的連接點(diǎn)是通過(guò)雜烷基的碳原子。
2.按照權(quán)利要求1的化合物，其中R1是氫，或者R3是氫或甲基。
3.按照權(quán)利要求2的化合物，其中R1是氫。
4.按照權(quán)利要求3的化合物，其中R2是苯基C1-6烷基，其中所述苯基任選地被1個(gè)，2個(gè)或3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立地選自C1-6烷基，鹵素，氰基，硝基，C1-6烷氧基，鹵代C1-6烷氧基，羥基，氨基，酰氨基，C1-6烷基氨基，和二C1-6烷基氨基。
5.按照權(quán)利要求4的化合物，其中R2是苯基C1-6烷基，其中所述苯基被1個(gè)，2個(gè)或3個(gè)鹵代取代基取代。
6.按照權(quán)利要求5的化合物，其中R2是苯基C1-6烷基，其中所述苯基被1個(gè)鹵代取代基取代。
7.按照權(quán)利要求6的化合物，其中R2是(4-氯苯基)C1-6烷基。
8.按照權(quán)利要求7的化合物，其中R2是2-(4-氯苯基)乙基或3-(4-氯苯基)丙基。
9.按照權(quán)利要求2的化合物，其中R3是氫或甲基。
10.按照權(quán)利要求9的化合物，其中W和X不存在。
11.按照權(quán)利要求10的化合物，其中Y是亞芳基并且Z是氫。
12.按照權(quán)利要求11的化合物，其中Y-Z是4-甲磺酰苯基。
13.按照權(quán)利要求9的化合物，其中W是C1-6亞烷基。
14.按照權(quán)利要求13的化合物，其中X是碳基，氧，-S(O)n-，或-N(Ra)-。
15.按照權(quán)利要求14的化合物，其中X是-S-。
16.按照權(quán)利要求15的化合物，其中Y是雜亞芳基。
17.按照權(quán)利要求16的化合物，其中Z是芳基。
18.按照權(quán)利要求17的化合物，其中Y-Z是5-芳基-嘧啶-2-基。
19.按照權(quán)利要求9的化合物，其中W不存在并且X是-NH-。
20.按照權(quán)利要求19的化合物，其中Y是亞芳基并且Z是氫。
21.按照權(quán)利要求20的化合物，其中Y-Z是3，4，5-三甲氧基苯基。
22.按照權(quán)利要求1的化合物，其中-Y-Z是4-甲磺酰苯基；3，4，5-三甲氧基苯基；或5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基。
23.按照權(quán)利要求1的化合物，其中R4是4-甲磺酰苯基；3，4，5-三甲氧基苯基氨基；或5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫代甲基。
24.按照權(quán)利要求1的化合物，其中Y-Z是5-芳基-嘧啶-2-基。
25.按照權(quán)利要求1的化合物，其是(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]-環(huán)戊基}-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；(±)-反-N-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]環(huán)戊基}-4-甲磺酰基苯甲酰胺；(±)-反-1-{2-[3-(4-氯苯基)丙氨基]-環(huán)戊基}-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-4-甲磺?；郊柞０?；(±)-反-1-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-1-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}環(huán)戊基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；(±)-反-N-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-甲磺?；郊柞０?；(±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-4-甲磺?；郊柞０罚?±)-反-N-(2-{[3-(4-氯苯基)丙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；(±)-反-N-(2-{[2-(4-氯苯基)乙基]甲氨基}-環(huán)戊基)-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；(±)-反-1-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)脲；或(±)-反-N-{2-[2-(4-氯苯基)乙氨基]環(huán)戊基}-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺；或其藥用鹽。
26.一種藥物，其包含治療有效量的按照權(quán)利要求1-25中任何一項(xiàng)的化合物，或其鹽；以及賦形劑。
27.按照權(quán)利要求1-25中任何一項(xiàng)的化合物，其用作治療活性物質(zhì)。
28.按照權(quán)利要求1-25中任何一項(xiàng)的化合物或其鹽在制備用于治療能通過(guò)CCR-3受體拮抗劑治療的疾病的藥物中的用途，所述藥物包含一種或多種按照權(quán)利要求1-25中任何一項(xiàng)的化合物。
29.按照權(quán)利要求28的用途，其中所述疾病是哮喘。
30.用于制備按照權(quán)利要求1的其中R1是氫的化合物的方法，其包含將式(III)的化合物脫保護(hù) 其中R2，R3和R4如權(quán)利要求1中所定義，并且Pg是氮保護(hù)基。
31.用于制備式(III)化合物的方法 其中R2，R3和R4如權(quán)利要求1中所定義，并且Pg是氮保護(hù)基，該方法包含使用其中R4如權(quán)利要求1中所定義，并且L為離去基團(tuán)的所需羧酸衍生物R4-C(＝O)-L酰化式(IV)化合物
32.制備按照權(quán)利要求1的其中R1是C1-6烷基的化合物的方法，其包含使用其中R4如權(quán)利要求1中所定義，并且L為離去基團(tuán)的所需羧酸衍生物R4-C(＝O)-L?；?V)化合物 其中R1是C1-6烷基，并且R2和R3如權(quán)利要求1中所定義。
33.此前描述的本發(fā)明，特別是關(guān)于新化合物，中間體，用途和方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的1，2－二氨基環(huán)戊烷衍生物，其中R
文檔編號(hào)C07D239/38GK1555358SQ02818081
公開(kāi)日2004年12月15日 申請(qǐng)日期2002年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月13日
發(fā)明者D·J·杜波依斯, D J 杜波依斯 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司