一種微生物葉面肥的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物肥料制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種微生物葉面肥的制備方法。該微生物葉面肥的制備方法包括如下操作步驟：(1)培養(yǎng)基配制；(2)菌種活化；(3)液體種子制備；(4)液態(tài)發(fā)酵；(5)煙末浸出液制備；(6)葉面肥制備。該制備方法簡(jiǎn)單操作簡(jiǎn)單，成本低，制得的微生物葉面肥既能防治植物病害，又能促進(jìn)植物生長(zhǎng)，大大減少了化肥和農(nóng)藥的使用量，改善了農(nóng)田環(huán)境質(zhì)量，提高了農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)；通過在發(fā)酵底物中添加鉬酸銨，提升了發(fā)酵產(chǎn)物中枯草芽孢桿菌數(shù)量，通過枯草芽孢桿菌的代謝產(chǎn)物與鉬酸銨螯合，將鉬元素固定在微生物體內(nèi)；通過煙末和海藻液的加入，與活菌體培養(yǎng)物有機(jī)結(jié)合，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，充分發(fā)揮出更好的殺蟲效果和促生長(zhǎng)效果。
【專利說明】
一種微生物葉面肥的制備方法
(一)
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及微生物肥料制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種微生物葉面肥的制備方法。
(二)
【背景技術(shù)】
[0002]葉面肥是植物吸收營(yíng)養(yǎng)成分的一種重要補(bǔ)充，可彌補(bǔ)根系吸收養(yǎng)分的不足，其特點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)吸收快、作用強(qiáng)、用量省、效率高、環(huán)境友好。然而，隨著植物生長(zhǎng)過程中各種病蟲害的影響的加劇，現(xiàn)有葉面肥已無法滿足既能促進(jìn)植物生長(zhǎng)又能拮抗植物病害的要求，不利于植物、作物的增產(chǎn)增收，無法滿足農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化及農(nóng)戶效益，損害了農(nóng)戶經(jīng)濟(jì)利益。
[0003]現(xiàn)有葉面肥應(yīng)用上，有報(bào)道采用枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)制備的菌劑用于防治多種作物的白粉病、霜露病、疫病、灰霉病等病害;然而，作為新型菌種，篩選過程繁瑣、周期長(zhǎng)，獲得功效穩(wěn)定且高產(chǎn)的菌株成本較高。通過現(xiàn)有研發(fā)的優(yōu)良菌株，進(jìn)行葉面肥制作原料及制備方法上的改進(jìn)，獲取既能促進(jìn)植物生長(zhǎng)又能拮抗植物病害要求的微生物葉面肥成為當(dāng)前節(jié)約成本、綜合利用資源的科研創(chuàng)新新渠道。
(三)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種應(yīng)用枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)SZXll制備微生物葉面肥的方法，制得的微生物葉面肥既能防治植物病害，又能促進(jìn)植物生長(zhǎng)，解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題。
[0005]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0006]—種微生物葉面肥的制備方法，包括如下操作步驟:
[0007](I)培養(yǎng)基配制:分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用;
[0008]所述菌種活化培養(yǎng)基為:糖蜜20g，酵母膏5g，鉬酸銨l_3g，加水至IL，pH7.0-7.5；
[0009]所述種子培養(yǎng)基為:MgSO41.0g, KH2PO4 5.0g,NaCl 5.0g,K2HPO4 15.0g，糖蜜200g，酵母膏50g，鉬酸銨20-50g，加水至1L，pH 7.0-7.5；
[0010]所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:MgSO420g,KH2PO4 100g，NaCl 100g,K2HPO4 300g，(NH4)2SO40.5kg,糖蜜 6kg，豆餅粉 3kg，鉬酸銨 0.5-1.2kg，加水至 200L，pH7.0-7.5；
[0011 ] (2)菌種活化:挑取斜面保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtil is) SZXl I接種于步驟(I)制得的菌種活化培養(yǎng)基中，于35°C，150-200r/min搖床振蕩培養(yǎng)16-24h，得活化枯草芽孢桿菌菌液；
[0012](3)液體種子制備:按3%_8% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(2)活化的枯草芽孢桿菌菌液接種于步驟(I)制得的種子培養(yǎng)基中，于45-55°C，通空氣培養(yǎng)16-24h，得到液體種子；
[0013](4)液態(tài)發(fā)酵:按3%_8% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(3)制得的液體種子接種于步驟(I)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于35-45°C，通無菌空氣培養(yǎng)15-24h，經(jīng)平板細(xì)菌計(jì)數(shù)，活菌數(shù)達(dá)3 X 109-9 X 109CFU/mL，即得活菌體培養(yǎng)物；
[0014](5)煙末浸出液制備:將45-55kg的廢次煙末放入桶中，加入45-55kg的水浸提20-24h，期間每隔2h進(jìn)行攪拌;將浸出液用紗布反復(fù)過濾后得到清液，即為煙末浸出液，備用；
[0015](6)葉面肥制備:向步驟(4)制得的活菌體培養(yǎng)物中分別加入步驟(5)制得的煙末浸出液和市售海藻液以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的甘氨酸、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的尿素和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%-2%的吐溫80，攪拌均勻;其中，活菌體培養(yǎng)物與煙末浸出液、海藻液、甘氨酸、尿素和吐溫的體積配比為60-70: 15-20: 5-10: 0.5-1:3-5:1-5，即得微生物葉面肥。
[0016]所述枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)SZXlI，已于2013年9月16號(hào)保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC N0.8188，保藏單位地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編:100101。
[0017]上述微生物葉面肥的使用方法:使用時(shí)用水稀釋100-200倍，在農(nóng)作物的苗期和蕾期葉面噴施。
[0018]本發(fā)明的有益效果是:
[0019]1、本發(fā)明枯草芽孢桿菌兼具促進(jìn)植物生長(zhǎng)和拮抗植物病原菌功能，經(jīng)其發(fā)酵制備所得的微生物葉面肥兼具促進(jìn)作物生長(zhǎng)和防治植物葉面的病害的雙重作用，大大減少了化肥和農(nóng)藥的使用量，改善了農(nóng)田環(huán)境質(zhì)量，提高了農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)。本發(fā)明枯草芽孢桿菌可成功定殖于植物根際、體表或體內(nèi)，同病原菌競(jìng)爭(zhēng)植物周圍的營(yíng)養(yǎng)、分泌抗菌物質(zhì)抑制病原菌生長(zhǎng)，同時(shí)誘導(dǎo)植物防御系統(tǒng)抵御病原菌入侵，從而具有生防的效果;枯草芽孢桿菌還能夠產(chǎn)生類似細(xì)胞分裂素、植物生長(zhǎng)激素的物質(zhì)，促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，對(duì)于多種作物的白粉病、霜露病、疫病、灰霉病等病害有很好的防治效果。
[0020]2、在本發(fā)明制備方法中，通過在發(fā)酵底物中添加鉬酸銨，提升了發(fā)酵產(chǎn)物中枯草芽孢桿菌的數(shù)量;通過微生物的代謝以及微生物代謝產(chǎn)物與鉬酸銨的螯合作用，將鉬元素固定在微生物體內(nèi)，鉬是固氮酶和硝酸還原酶的組成元素，因此，含鉬葉面肥可以促進(jìn)葉際微生物的固氮作用，促進(jìn)植物中硝酸鹽的轉(zhuǎn)化，能降低葉菜類的硝酸鹽含量，提高蔬菜品質(zhì)，鉬還能促進(jìn)作物對(duì)磷的吸收和無機(jī)磷向有機(jī)磷的轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)有機(jī)磷農(nóng)藥的降解，降低農(nóng)藥殘留，此外，鉬在維生素C和碳水化合物的生成、運(yùn)轉(zhuǎn)和轉(zhuǎn)化中都有重要作用，能夠顯著提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)。該制備方法所制備的葉面肥噴在葉面后能使鉬元素緩慢釋放，減少雨水沖刷等帶來的流失，提升鉬酸銨的利用率及微生物葉面肥的作用。
[0021]3、本發(fā)明制備方法在活菌體培養(yǎng)物中加入了煙末浸出液、市售海藻液以及甘氨酸、尿素和吐溫，煙末是香煙工業(yè)的副產(chǎn)物，目前多數(shù)作為垃圾處理，本方法不僅充分利用了煙末資源，而且利用了煙末中殘余的煙堿、果膠、煙酸等物質(zhì)，發(fā)揮出更好的殺蟲效果;海藻液中含有天然植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、酚類多聚化合物、甜菜堿、海藻酸及天然抗生素等物質(zhì)，具有顯著的抑菌抗病毒、驅(qū)蟲效果，真正起到肥藥作用，大幅增強(qiáng)作物的抗寒、抗旱、抗病、抗倒伏、抗鹽堿能力;通過上述各成分的有機(jī)結(jié)合，在充分發(fā)揮活菌體促植物生長(zhǎng)的同時(shí)，能保證植物或作物的整個(gè)生長(zhǎng)周期內(nèi)發(fā)揮最有效的生物殺蟲劑作用，增強(qiáng)植物或作物抵抗病蟲害的能力，降低土壤施肥量、提高利用率高、減少流失，從而大大降低了環(huán)境污染的風(fēng)險(xiǎn)。
(四)
【具體實(shí)施方式】
[0022]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于此。
[0023]實(shí)施例1:
[0024]—種微生物葉面肥的制備方法，包括如下操作步驟:
[0025](I)培養(yǎng)基配制:分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用;
[0026]所述菌種活化培養(yǎng)基為:糖蜜20g，酵母膏5g，鉬酸銨lg，加水至lL，pH7.0-7.5;
[0027]所述種子培養(yǎng)基為:MgSO41.0g, KH2PO4 5.0g,NaCl 5.0g,K2HPO4 15.0g，糖蜜200g，酵母膏50g，鉬酸銨20g，加水至1L，pH 7.0-7.5;
[0028]所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:MgS0420g,KH2PO4 100g，NaCl 10g,K2HPO4 300g, (NH4)2SO40.5kg,糖蜜6kg，豆餅粉3kg，鉬酸銨0.5kg，加水至200L，pH 7.0-7.5；
[0029](2)菌種活化:挑取斜面保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)SZXll接種于步驟(I)制得的菌種活化培養(yǎng)基中，于35°C，150r/min搖床振蕩培養(yǎng)16h，得活化枯草芽孢桿菌菌液；
[0030](3)液體種子制備:按3% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(2)活化的枯草芽孢桿菌菌液接種于步驟(I)制得的種子培養(yǎng)基中，于45-55°C，通空氣培養(yǎng)16h，得到液體種子；
[0031](4)液態(tài)發(fā)酵:按3% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(3)制得的液體種子接種于步驟(I)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于35-45°C，通無菌空氣培養(yǎng)15h，經(jīng)平板細(xì)菌計(jì)數(shù)，活菌數(shù)達(dá)9X I O9CFlVmL，即得活菌體培養(yǎng)物；
[0032](5)煙末浸出液制備:將50kg的廢次煙末放入桶中，加入50kg的水浸提22h，期間每隔2h進(jìn)行攪拌;將浸出液用紗布反復(fù)過濾后得到清液，即為煙末浸出液，備用；
[0033](6)葉面肥制備:取60L步驟(4)制得的活菌體培養(yǎng)物，分別加入15L步驟(5)制得的煙末浸出液、5L市售海藻液、0.5L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的甘氨酸、3L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的尿素和IL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的吐溫80，攪拌均勻，即得微生物葉面肥。
[0034]上述市售海藻液購(gòu)自青島海大生物集團(tuán)。
[0035]上述方法制得的微生物葉面肥的使用方法:使用時(shí)用水稀釋100-200倍，在農(nóng)作物的苗期和蕾期葉面噴施。
[0036]實(shí)施例2:
[0037]—種微生物葉面肥的制備方法，包括如下操作步驟:
[0038](I)培養(yǎng)基配制:分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用;
[0039]所述菌種活化培養(yǎng)基為:糖蜜20g，酵母膏5g，鉬酸銨3g，加水至lL，pH7.0-7.5;
[0040]所述種子培養(yǎng)基為:MgSO41.0g, KH2PO4 5.0g,NaCl 5.0g,K2HPO4 15.0g，糖蜜200g，酵母膏50g，鉬酸銨50g，加水至1L，pH 7.0-7.5;
[0041]所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:MgS0420g,KH2PO4 100g，NaCl 10g,K2HPO4 300g, (NH4)2SO40.5kg,糖蜜6kg，豆餅粉3kg，鉬酸銨I.2kg，加水至200L，pH 7.0-7.5；
[0042](2)菌種活化:挑取斜面保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)SZXll接種于步驟(I)制得的菌種活化培養(yǎng)基中，于35°C，200r/min搖床振蕩培養(yǎng)24h，得活化枯草芽孢桿菌菌液；
[0043](3)液體種子制備:按8% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(2)活化的枯草芽孢桿菌菌液接種于步驟(I)制得的種子培養(yǎng)基中，于45-55°C，通空氣培養(yǎng)24h，得到液體種子；
[0044](4)液態(tài)發(fā)酵:按8% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(3)制得的液體種子接種于步驟(I)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于35-45°C，通無菌空氣培養(yǎng)24h，經(jīng)平板細(xì)菌計(jì)數(shù)，活菌數(shù)達(dá)7X I O9CFlVmL，即得活菌體培養(yǎng)物；
[0045](5)煙末浸出液制備:將45kg的廢次煙末放入桶中，加入45kg的水浸提24h，期間每隔2h進(jìn)行攪拌;將浸出液用紗布反復(fù)過濾后得到清液，即為煙末浸出液，備用；
[0046](6)葉面肥制備:取70L步驟(4)制得的活菌體培養(yǎng)物，分別加入20L步驟(5)制得的煙末浸出液、1L市售海藻液、IL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的甘氨酸、5L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的尿素和5L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為I %的吐溫80，攪拌均勻，即得微生物葉面肥。
[0047]上述市售海藻液購(gòu)自青島海大生物集團(tuán)。
[0048]上述方法制得的微生物葉面肥的使用方法同實(shí)施例1制得的微生物葉面肥的使用方法。
[0049]實(shí)施例3:
[0050]—種微生物葉面肥的制備方法，包括如下操作步驟:
[0051 ] (I)培養(yǎng)基配制:分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用;
[0052]所述菌種活化培養(yǎng)基為:糖蜜20g，酵母膏5g，鉬酸銨2g，加水至lL，pH7.0-7.5;
[0053]所述種子培養(yǎng)基為:MgSO41.0g, KH2PO4 5.0g,NaCl 5.0g,K2HPO4 15.0g，糖蜜200g，酵母膏50g，鉬酸銨35g，加水至1L，pH 7.0-7.5;
[0054]所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:MgS0420g,KH2PO4 100g，NaCl 10g,K2HPO4 300g, (NH4)2SO40.5kg,糖蜜6kg，豆餅粉3kg，鉬酸銨0.8kg，加水至200L，pH 7.0-7.5；
[0055](2)菌種活化:挑取斜面保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)SZXll接種于步驟(I)制得的菌種活化培養(yǎng)基中，于35°C，150r/min搖床振蕩培養(yǎng)20h，得活化枯草芽孢桿菌菌液；
[0056](3)液體種子制備:按5% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(2)活化的枯草芽孢桿菌菌液接種于步驟(I)制得的種子培養(yǎng)基中，于42°C，通空氣培養(yǎng)20h，得到液體種子；
[0057](4)液態(tài)發(fā)酵:按5% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(3)制得的液體種子接種于步驟(I)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于35-45°C，通無菌空氣培養(yǎng)20h，經(jīng)平板細(xì)菌計(jì)數(shù)，活菌數(shù)達(dá)6X I O9CFlVmL，即得活菌體培養(yǎng)物；
[0058](5)煙末浸出液制備:將55kg的廢次煙末放入桶中，加入55kg的水浸提20h，期間每隔2h進(jìn)行攪拌;將浸出液用紗布反復(fù)過濾后得到清液，即為煙末浸出液，備用；
[0059](6)葉面肥制備:取62L步驟(4)制得的活菌體培養(yǎng)物，分別加入16L步驟(5)制得的煙末浸出液、6L市售海藻液、0.8L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的甘氨酸、4L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的尿素和2L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的吐溫80，攪拌均勻，即得微生物葉面肥。
[0060]上述市售海藻液購(gòu)自青島海大生物集團(tuán)。
[0061]上述方法制得的微生物葉面肥的使用方法同實(shí)施例1制得的微生物葉面肥的使用方法。
[0062]實(shí)施例4
[0063]—種微生物葉面肥的制備方法，包括如下操作步驟:
[0064](I)培養(yǎng)基配制:分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用;
[0065]所述菌種活化培養(yǎng)基為:糖蜜20g，酵母膏5g，鉬酸銨1.5g，加水至IL，pH 7.0-7.5；
[0066]所述種子培養(yǎng)基為:MgSO41.0g, KH2PO4 5.0g,NaCl 5.0g,K2HPO4 15.0g，糖蜜200g，酵母膏50g，鉬酸銨25g，加水至1L，pH 7.0-7.5；
[0067]所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:MgS0420g,KH2PO4 100g，NaCl 10g,K2HPO4 300g, (NH4)2SO40.5kg,糖蜜6kg，豆餅粉3kg，鉬酸銨I kg，加水至200L，pH 7.0-7.5；
[0068](2)菌種活化:挑取斜面保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)SZXll接種于步驟(I)制得的菌種活化培養(yǎng)基中，于35°C，150r/min搖床振蕩培養(yǎng)22h，得活化枯草芽孢桿菌菌液；
[0069](3)液體種子制備:按6% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(2)活化的枯草芽孢桿菌菌液接種于步驟(I)制得的種子培養(yǎng)基中，于45-50°C，通空氣培養(yǎng)22h，得到液體種子；
[0070](4)液態(tài)發(fā)酵:按5% (體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(3)制得的液體種子接種于步驟(I)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于40°C，通無菌空氣培養(yǎng)20h，經(jīng)平板細(xì)菌計(jì)數(shù)，活菌數(shù)達(dá)8 XI O9CFUAiL，即得活菌體培養(yǎng)物；
[0071](5)煙末浸出液制備:將50kg的廢次煙末放入桶中，加入50kg的水浸提23h，期間每隔2h進(jìn)行攪拌;將浸出液用紗布反復(fù)過濾后得到清液，即為煙末浸出液；
[0072](6)葉面肥制備:取65L步驟(4)制得的活菌體培養(yǎng)物，分別加入18L步驟(5)制得的煙末浸出液、8L市售海藻液、0.7L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的甘氨酸、4L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的尿素和3L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的吐溫80，攪拌均勻，即得微生物葉面肥。
[0073]上述市售海藻液購(gòu)自青島海大生物集團(tuán)。
[0074]上述方法制得的微生物葉面肥的使用方法同實(shí)施例1制得的微生物葉面肥的使用方法。
[0075]將采用本發(fā)明方法制得的微生物葉面肥應(yīng)用于黃瓜種植，具體試驗(yàn)如下:
[0076]采用蔬菜大棚小區(qū)實(shí)驗(yàn)，在常年種植蔬菜的大棚中設(shè)置12個(gè)條件完全相同的實(shí)驗(yàn)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)100m2，3個(gè)小區(qū)為I組平行試驗(yàn)，共分成4組，種植黃瓜。在黃瓜幼苗期，第I組的3個(gè)小區(qū)噴施200倍稀釋的本發(fā)明制備的微生物葉面肥，每10天左右噴施I次，直到結(jié)果期停止噴施，共噴施4-5次。第2組的3個(gè)小區(qū)不噴施葉面肥，與第I組相同方法噴水作為對(duì)照。第3組的3個(gè)小區(qū)噴施不含鉬酸銨的培養(yǎng)基發(fā)酵的枯草芽孢桿菌稀釋液，稀釋倍數(shù)與第I組相同。第4組的3個(gè)小區(qū)噴施鉬酸銨的水溶液，鉬酸銨含量與第I組相同。其他管理方式與常規(guī)大棚黃瓜管理方式相同。由于蔬菜大棚中濕度較高，溫度適宜，黃瓜葉片非常容易感染各種病害，如:白粉病、霜霉病、黑星病等。在實(shí)驗(yàn)過程中，第I組和第3組黃瓜的病情指數(shù)比第2組和第4組顯著降低，期間，第I組和第3組減少了2次化學(xué)防治(噴施殺菌劑)。在黃瓜的收獲期，檢測(cè)黃瓜中硝酸鹽的含量，第I組比第2組降低33%左右，第3組和第4組黃瓜中硝酸鹽含量與第2組差別不顯著。黃瓜的總產(chǎn)量第I組和第3組比第2組提高17%左右，第4組與第2組產(chǎn)量相當(dāng)。
[0077]由試驗(yàn)結(jié)果可見，施加本發(fā)明制備的微生物葉面肥所種植的黃瓜，較不施加肥料、施加不含鉬酸銨培養(yǎng)基發(fā)酵的葉面肥以及噴施鉬酸銨水溶液的黃瓜，病情指數(shù)顯著降低，化肥使用量及施用次數(shù)降低;所收獲的黃瓜中硝酸鹽含量明顯降低，黃瓜總產(chǎn)量明顯提高。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種微生物葉面肥的制備方法，其特征是:包括如下操作步驟: (1)培養(yǎng)基配制:分別配制菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，高溫滅菌后備用； 所述菌種活化培養(yǎng)基為:糖蜜20g，酵母膏5g，鉬酸銨l_3g，加水至IL，pH 7.0-7.5; 所述種子培養(yǎng)基為:MgSO4 1.0g,KH2PO4 5.0g,NaCl 5.0g,K2HPO4 15.0g，糖蜜200g，酵母膏50g，鉬酸銨20-50g，加水至1L，pH 7.0-7.5； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:MgSO4 20g,KH2PO4 100g，NaCl 10g,K2HPO4 300g, (NH4)2SO40.5kg,糖蜜6kg，豆餅粉3kg，鉬酸銨0.5-1.2kg，加水至200L，pH 7.0-7.5； (2)菌種活化:挑取斜面保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtil is) SZXl I接種于步驟(I)制得的菌種活化培養(yǎng)基中，于35°C，150-200r/min搖床振蕩培養(yǎng)16-24h，得活化枯草芽孢桿菌菌液； (3)液體種子制備:按3%-8%(體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(2)活化的枯草芽孢桿菌菌液接種于步驟(I)制得的種子培養(yǎng)基中，于45-55°C，通空氣培養(yǎng)16-24h，得到液體種子； (4)液態(tài)發(fā)酵:按3%-8%(體積百分?jǐn)?shù))的接種量將步驟(3)制得的液體種子接種于步驟(I)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于35-45°C，通無菌空氣培養(yǎng)15-24h，經(jīng)平板細(xì)菌計(jì)數(shù)，活菌數(shù)達(dá)3 X 109-9 X 109CFU/mL，即得活菌體培養(yǎng)物； (5)煙末浸出液制備:將45-55kg的廢次煙末放入桶中，加入45-55kg的水浸提20-24h，期間每隔2h進(jìn)行攪拌;將浸出液用紗布反復(fù)過濾后得到清液，即為煙末浸出液，備用； (6)葉面肥制備:向步驟(4)制得的活菌體培養(yǎng)物中分別加入步驟(5)制得的煙末浸出液和市售海藻液以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的甘氨酸、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的尿素和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5 % -2 %的吐溫80，攪拌均勻;其中，活菌體培養(yǎng)物與煙末浸出液、海藻液、甘氨酸、尿素和吐溫的體積配比為60-70: 15-20:5-10:0.5-1:3-5:1-5,即得微生物葉面肥。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微生物葉面肥的制備方法，其特征是:步驟(5)所述活菌體培養(yǎng)物與煙末浸出液、海藻液、甘氨酸、尿素和吐溫的體積配比為65:18:8:0.7:4:3。
【文檔編號(hào)】C05G3/00GK106007967SQ201610343041
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月19日
【發(fā)明人】李慶增, 李玉潔, 劉浩, 白志輝, 謝慶祥, 王明國(guó), 汪秋生
【申請(qǐng)人】山東農(nóng)保姆肥業(yè)科技有限公司