一種高效降解阿特拉津的生物肥及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高效降解阿特拉津的生物肥及其制備方法。該生物肥通過復(fù)配對該菌株存活和生長有益的小麥秸稈、草木灰、鋸末和自制發(fā)酵菌肥料，添加微小桿菌屬菌株BTAH1和粒申氏桿菌菌株HBZA0511發(fā)酵而成，其中自制發(fā)酵肥料由餅粕、麥麩、玉米秸稈、魚骨粉等營養(yǎng)基質(zhì)添加枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌進(jìn)行發(fā)酵而成。將該肥料撒到田間，可以使土壤中阿特拉津除草劑殘留量迅速減少95％以上，有利于土壤中生物修復(fù)，進(jìn)行綠色農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)，同時可以增加土壤中有機(jī)質(zhì)含量。
【專利說明】
一種高效降解阿特拉津的生物肥及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種高效降解阿特拉津的生物肥及其制備方法，屬于生物肥技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿特拉津是一種廣泛使用的三嗪類除草劑，主要用于玉米田，我國半數(shù)以上的玉 米田施用阿特拉津進(jìn)行除草。由于阿特拉津的持效期長，在長期使用過程中土壤中的阿特 拉津長期殘留，其殘留物容易對部分后茬作物(如小麥、水稻、大豆等)產(chǎn)生毒害。其在水中 和土壤中滯留期較長，且具有生物蓄積性，此外還能夠?qū)ι鷳B(tài)環(huán)境造成一定程度的破壞和 污染，進(jìn)而威脅動物和人類的健康。生物法降解是去除土壤中殘留阿特拉津污染的主要方 式，由于其降解速度快、費(fèi)用低、效果好、不產(chǎn)生二次污染等優(yōu)點(diǎn)，也成為環(huán)境污染治理的常 用措施。
[0003] 目前，國內(nèi)外對阿特拉津生物降解的研究主要集中在阿特拉津降解菌株的篩選及 降解機(jī)理研究等方面。自1993年以來，幾個不同的實(shí)驗(yàn)室都分離到能礦化阿特拉津并以之 為唯一碳氮源生長的細(xì)菌。據(jù)報道，不動桿菌DNS32、菌株M91-3、假單胞菌ADP、FR等在人工 培養(yǎng)條件下可完全降解阿特拉津，但處于復(fù)雜農(nóng)田環(huán)境時，菌株普遍存在生長緩慢，降解性 能不穩(wěn)定等問題。推其原因，一方面可能是環(huán)境條件(如PH、水分含量、溫度、有機(jī)質(zhì)含量)等 變化直接影響到微生物降解阿特拉津的活性；另一方面，投放到環(huán)境中去的降解菌會受到 抑制物的影響，或受到環(huán)境中土著菌群的影響，甚至受到拮抗作用而不能生長等，這些都可 能造成接種的微生物不能成為優(yōu)勢菌從而失去降解阿特拉津的活性。因此，目前進(jìn)行的阿 特拉津生物降解研究多停留在實(shí)驗(yàn)室水平，市場上尚無商業(yè)化阿特拉津生物降解菌劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明克服了上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種高效降解阿特拉津的生物肥及其 制備方法。該生物肥根據(jù)發(fā)酵菌的好氧特性和發(fā)酵特點(diǎn)，復(fù)配了有益于菌群存活和生長的 有機(jī)和無機(jī)原料，將該肥料撒到田間，既能快速降解土壤中殘留的阿特拉津，有利于土壤中 生物修復(fù)，又能增加土壤中的有機(jī)質(zhì)。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種高效降解阿特拉津的生物肥的制備方法，其特征是，
[0006] (1)制備發(fā)酵菌肥
[0007] a.將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌進(jìn)行活化，分別得到活化發(fā)酵液，備用；
[0008] b.將植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌進(jìn)行活化，然后采用麥芽汁培養(yǎng)基（加1%的紅 糖)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后，分別得到植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的擴(kuò)大發(fā)酵液，備用；
[0009] C.發(fā)酵物料準(zhǔn)備:將餅柏、麥麩、玉米秸桿和魚骨粉按照質(zhì)量比（8~12): (8~12): (45~55): 1 (優(yōu)選10:10:50:1)的比例進(jìn)行混合，滅菌晾干后作為發(fā)酵物料，備用；
[0010] d.發(fā)酵:將植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的擴(kuò)大發(fā)酵液各按2.5~3.5 %的接種量分 別加入到發(fā)酵物料中，再將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活化發(fā)酵液各按0.4~0.6%的 接種量分別加入到發(fā)酵物料中；混合均勻后加入涼開水，以混合后的物料用手攥時成團(tuán)，掉 到地上松散時為宜;然后再于28~32°C下靜置發(fā)酵1.5~2.5天;最后進(jìn)行高溫殺菌后，即可 得到成熟的發(fā)酵菌肥料。
[0011] (2)發(fā)酵菌株的活化
[0012] 采用微小桿菌屬菌株BTAH1(保藏號為CGMCC No. 1113)和粒申氏桿菌菌株 HBZA0511 (保藏號為CGMCC No. 1801)這兩種菌株，將其活化后，分別得到種子液備用；
[0013] ⑶菌株發(fā)酵
[0014] 將步驟(2)的兩種種子液各按質(zhì)量比4.5~5.5 %的接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵得 到液體發(fā)酵液;發(fā)酵溫度為28~32°C，發(fā)酵時間為50~70小時；
[0015] 發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖 l%，（NH4)2S〇4 l%，K2HP〇4 0.2%，MgS〇4 0.05%，NaCl 0.01 %，酵母膏0.02%，蛋白胨0.05%，pH值7.2。
[0016] (4)固體物料的準(zhǔn)備
[0017]將小麥秸桿、草木灰、鋸末和步驟（1)制備的發(fā)酵菌肥按照質(zhì)量比（3~5): (1.5~ 2.5): (0.8~1.2): 1(優(yōu)選4:2:1:1)的比例進(jìn)行混合，制成固體物料，備用；
[0018] (5)生物肥的固體發(fā)酵:將液體發(fā)酵液與固體物料按照1:8~12的質(zhì)量比例混合， 通風(fēng)處靜置1.5~2.5天，即成。透氣性編織袋包裝。
[0019] 上述生產(chǎn)路線如圖1所示。
[0020] 優(yōu)選的，玉米秸桿、小麥秸桿均粉碎至2mm-3mm。
[0021 ]所述餅柏，包括豆餅柏、棉籽餅柏、菜籽餅柏、花生餅柏、芝麻餅柏、胡麻餅柏、葵花 餅柏、玉米餅柏、玉米胚芽餅等。
[0022]優(yōu)選的，所述步驟（1)的a步驟具體為:枯草芽孢桿菌(或地衣芽孢桿菌)采用LB液 體培養(yǎng)基，搖床中28~32 °C下，培養(yǎng)10~15小時；
[0023]優(yōu)選的，所述步驟（1)的b步驟具體為:將植物乳桿菌(或鼠李糖乳桿菌）的凍干粉 按0.8~1.2%的用量加入到滅菌后的MRS液體培養(yǎng)基中，35~38°C下靜置培養(yǎng)10~15小時； 測得0D值為0.45~0.55時再轉(zhuǎn)接一次;待0D值再次達(dá)到0.45~0.55時，按8~12 %的接種量 用麥芽汁培養(yǎng)基(加1 %的紅糖)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)至0D值為0.45~0.55，得到植物乳桿菌和鼠 李糖乳桿菌擴(kuò)大發(fā)酵液備用。
[0024] 優(yōu)選的，所述步驟（2 )具體為：微小桿菌屬菌株B T A H1 (或粒申氏桿菌菌株 HBZA0511)采用1/10的LB培養(yǎng)基為活化培養(yǎng)基，28~32°C下?lián)u床培養(yǎng)20~28小時，待0D值達(dá) 到0.5~0.6時，得到種子液，備用；
[0025] 上述方法制備的生物肥含有大量的活菌，能夠快速有效降解土壤中阿特拉津類除 草劑。該產(chǎn)品在土壤含水量在15~18%時進(jìn)行撒施，每畝用量30~50斤，撒施后立即進(jìn)行淺 耕，深度為8~10厘米，2~3天后即可進(jìn)行作物播種。
[0026] 本發(fā)明的有益效果是:該生物肥根據(jù)發(fā)酵菌的好氧特性和發(fā)酵特點(diǎn)，復(fù)配了有益 于菌群存活和生長的有機(jī)和無機(jī)原料，以提高阿特拉津降解菌的田間適應(yīng)性和降解穩(wěn)定 性。將該肥料撒到田間，可以使土壤中阿特拉津除草劑殘留量迅速減少95%以上，有利于土 壤中生物修復(fù)，進(jìn)行綠色農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)，同時可以增加土壤中有機(jī)質(zhì)含量。
【附圖說明】
[0027]圖1為本發(fā)明生物肥的生產(chǎn)路線。
【具體實(shí)施方式】
[0028]實(shí)施例1:制備發(fā)酵菌肥
[0029] 1、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活化
[0030] 將枯草芽孢桿菌的凍干粉(活菌數(shù)多1000億個/克）按1 %的用量加入到滅菌后的 LB液體培養(yǎng)基中，放置到搖床中，30°C下，轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分鐘活化培養(yǎng)12小時;地衣芽孢桿 菌的活化同枯草芽孢桿菌；
[0031] LB液體培養(yǎng)基:蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化鈉10g/L，pH 7.0;
[0032 ] 2、植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的活化
[0033]將植物乳桿菌的凍干粉(活菌數(shù)彡1000億個/克)按1 %的用量加入到滅菌后的MRS 液體培養(yǎng)基中，37 °C下靜置培養(yǎng)12小時，測得0D值為0.5 ;然后再轉(zhuǎn)接一次，0D值再次達(dá)到 0.5時;按10%的接種量用麥芽汁培養(yǎng)基(加1 %的紅糖)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)至0D值為0.5，得到擴(kuò) 大發(fā)酵液;鼠李糖乳桿菌的活化同植物乳桿菌；
[0034] MRS液體培養(yǎng)基:蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HP〇4 2g，檸檬酸二銨2g，乙酸 鈉5g，葡萄糖20g，吐溫80 lmL，MgS04.7H20 0.58g，MnS〇4 4H20 0.25g，瓊脂 15~20g，蒸餾水 1000mL，pH至6.2~6.4;
[0035]麥芽汁培養(yǎng)基:麥芽膏粉130g/L，瓊脂15g/L，氯霉素0.1g/L，最終pH 5.8~6.2;上 述基礎(chǔ)上另外加入1 %的紅糖。
[0036] 3、發(fā)酵物料準(zhǔn)備
[0037]取玉米的植株掰掉玉米后趁靑收割，曬干后用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎細(xì)度為2mm-3mm之間，得到玉米秸桿;將豆餅柏、麥麩、玉米秸桿、魚骨粉按照質(zhì)量比10:10:50:1的比例 進(jìn)行混合，80°C均勻滅菌20分鐘，晾曬，作為發(fā)酵物料，備用；
[0038] 4、發(fā)酵
[0039] 將植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌擴(kuò)大發(fā)酵液各按3%的接種量分別加入到滅菌晾曬 后的發(fā)酵用物料中，再將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活化發(fā)酵液各按0.5%的量分別 加入到發(fā)酵物料中；將發(fā)酵劑和物料混合均勻，然后加入涼開水，以感覺混合后的物料用手 攥時成團(tuán)，掉到地上松散即可;然后再于30°C發(fā)酵2天;然后再于80°C維持20分鐘對發(fā)酵菌 活性進(jìn)行抑制，即可得到成熟的發(fā)酵菌肥料;發(fā)酵成功的發(fā)酵菌肥料的活菌數(shù)多1〇〇億/g。
[0040] 實(shí)施例2制備生物肥
[0041] 1、發(fā)酵菌株的活化
[0042] 采用微小桿菌屬菌株階4111(保藏號為0611(^心.1113)和粒申氏桿菌菌株 HBZA0511 (保藏號為CGMCC No. 1801)這兩種菌株；
[0043]將微小桿菌屬菌株BTAH1加入到活化培養(yǎng)基（1/10的LB培養(yǎng)基）中，30°C下轉(zhuǎn)速120 轉(zhuǎn)/分鐘，搖床培養(yǎng)24小時，待0D值達(dá)到0.5以后，得到種子液，備用；粒申氏桿菌菌株 HBZA0511的活化同微小桿菌屬菌株BTAH1;
[0044] 1/10的LB培養(yǎng)基:即每1000毫升含有0.5g酵母膏，1克蛋白胨和lg氯化鈉。
[0045] 2、菌株發(fā)酵：將種子液按照質(zhì)量比10%的接種量(兩種菌的種子液各按5%的用 量)轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐；發(fā)酵溫度為30°C，攪拌轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分鐘，通入無氧空氣的通氣量為1: 0.6-1.2，發(fā)酵時間為60小時，得到液體發(fā)酵液，活菌數(shù)多100億/g;
[0046]發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖l%，（NH4)2S〇4 l%，K2HP〇4 0.2%，MgS〇4 0.05%，NaCl 0.01 %，酵母膏0.02%，蛋白胨0.05%，pH值7.2。
[0047] 3、固體物料的準(zhǔn)備：
[0048] 小麥秸桿用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎細(xì)度為2mm-3mm;將小麥秸桿、草木灰、鋸末和實(shí) 施例1的發(fā)酵菌肥料按照質(zhì)量比4:2:1:1的比例進(jìn)行混合，制成固體物料，備用；
[0049] 4、生物肥的固體發(fā)酵:將液體發(fā)酵液與固體物料按照1:10的質(zhì)量比例混合，通風(fēng) 處靜置2天，即成?；罹鷶?shù)多10億/g。
[0050] 5、包裝方式:透氣性編織袋。
[00511以下結(jié)合玉米地田間試驗(yàn)來進(jìn)一步說明其有益效果。
[0052] 本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了 4個處理。處理1為A1:阿特拉津(降解菌空白對照）；處理2為A2:阿特 拉津+生物肥(實(shí)施例1的發(fā)酵菌肥料，不加降解菌）；處理3為A3:阿特拉津+降解阿特拉津生 物肥1(即本發(fā)明采用的方案，實(shí)施例2的生物肥）；處理4為A4:阿特拉津+降解生物肥2(實(shí)施 例2中僅采用微小桿菌屬菌株BTAH1-種降解菌，其于同實(shí)施例2)。每個實(shí)驗(yàn)小區(qū)面積按 15m 2計(jì)，每種處理需做3個重復(fù)，小區(qū)周邊土壤用地膜覆蓋防止噴施農(nóng)藥或菌劑時交互影 響。小區(qū)中每一行為一個重復(fù)實(shí)驗(yàn)，為減少不同小區(qū)地力差異及操作導(dǎo)致的誤差，每一行中 的小區(qū)排列順序通過隨機(jī)抽取確定。
[0053]降解效果如表1所示。在本試驗(yàn)所設(shè)計(jì)的4個處理中，處理3(本發(fā)明所涉及的生物 肥)對乙草胺的降解效果最好，處理7天殘留量低于0.01mg/kg，效果顯著。
[0054] 表1田間阿特拉津降解效果
[0056]植株生長情況如表2所示，在播種期相同的條件下，以處理3效果最好，表現(xiàn)為玉米 出苗快，較其它處理早出苗1天，營養(yǎng)生長好，地上莖葉生長好于其它處理，表現(xiàn)葉綠素含量 尚，葉面積大等。
[0057] 表2玉米產(chǎn)區(qū)示范結(jié)果
[0059]實(shí)施例3:制備發(fā)酵菌肥
[0060] 1、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活化
[0061 ] 同實(shí)施例1。
[0062 ] 2、植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的活化
[0063] 同實(shí)施例1。
[0064] 3、發(fā)酵物料準(zhǔn)備
[0065] 取玉米的植株掰掉玉米后趁靑收割，曬干后用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎細(xì)度為2mm-3mm之間，得到玉米秸桿;將棉籽餅柏、麥麩、玉米秸桿、魚骨粉按照質(zhì)量比9:9:48:1的比例 進(jìn)行混合，80°C均勻滅菌20分鐘，晾曬，作為發(fā)酵物料，備用；
[0066] 4、發(fā)酵
[0067] 將植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌擴(kuò)大發(fā)酵液各按2.8 %的接種量分別加入到滅菌晾 曬后的發(fā)酵用物料中，再將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活化發(fā)酵液各按0.5%的量分 別加入到發(fā)酵物料中；將發(fā)酵劑和物料混合均勻，然后加入涼開水，以感覺混合后的物料用 手攥時成團(tuán)，掉到地上松散即可;然后再于30 °C發(fā)酵2天;然后再于80°C維持20分鐘對發(fā)酵 菌活性進(jìn)行抑制，即可得到成熟的發(fā)酵菌肥料;發(fā)酵成功的發(fā)酵菌肥料的活菌數(shù)多1〇〇億/ g°
[0068] 實(shí)施例4制備生物肥 [0069] 1、發(fā)酵菌株的活化
[0070] 同實(shí)施例2。
[0071] 2、菌株發(fā)酵:將種子液按照質(zhì)量比9%的接種量(兩種菌的種子液各按4.5%的平 均用量)轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐;發(fā)酵溫度為30°C，攪拌轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分鐘，通入無氧空氣的通氣量為 1:0.8-1.0，發(fā)酵時間為65小時，得到液體發(fā)酵液，活菌數(shù)多100億/g;
[0072]發(fā)酵培養(yǎng)基配方同實(shí)施例2。
[0073] 3、固體物料的準(zhǔn)備：
[0074] 小麥秸桿用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎細(xì)度為2mm-3mm;將小麥秸桿、草木灰、鋸末和實(shí) 施例3的發(fā)酵菌肥料按照質(zhì)量比4.5:1.5:1:1的比例進(jìn)行混合，制成固體物料，備用；
[0075] 4、生物肥的固體發(fā)酵:將液體發(fā)酵液與固體物料按照1:9的質(zhì)量比例混合，通風(fēng)處 靜置2天，即成?；罹鷶?shù)多10億/g。
[0076]實(shí)施例5:制備發(fā)酵菌肥
[0077] 1、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活化
[0078] 同實(shí)施例1。
[0079 ] 2、植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的活化
[0080] 同實(shí)施例1。
[0081 ] 3、發(fā)酵物料準(zhǔn)備
[0082]取玉米的植株掰掉玉米后趁靑收割，曬干后用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎細(xì)度為2mm-3mm之間，得到玉米秸桿;將豆餅柏、麥麩、玉米秸桿、魚骨粉按照質(zhì)量比11:11:52:1的比例 進(jìn)行混合，80°C均勻滅菌20分鐘，晾曬，作為發(fā)酵物料，備用；
[0083] 4、發(fā)酵
[0084] 將植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌擴(kuò)大發(fā)酵液各按3.2%的接種量分別加入到滅菌晾 曬后的發(fā)酵用物料中，再將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活化發(fā)酵液各按〇. 45%的量分 別加入到發(fā)酵物料中；將發(fā)酵劑和物料混合均勻，然后加入涼開水，以感覺混合后的物料用 手攥時成團(tuán)，掉到地上松散即可;然后再于30 °C發(fā)酵2天;然后再于80°C維持20分鐘對發(fā)酵 菌活性進(jìn)行抑制，即可得到成熟的發(fā)酵菌肥料;發(fā)酵成功的發(fā)酵菌肥料的活菌數(shù)多100億/ g°
[0085]實(shí)施例6制備生物肥 [0086] 1、發(fā)酵菌株的活化
[0087] 同實(shí)施例2。
[0088] 2、菌株發(fā)酵:將種子液按照質(zhì)量比11 %的接種量(兩種菌的種子液各按5.5%的平 均用量)轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐;發(fā)酵溫度為30°C，攪拌轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分鐘，通入無氧空氣的通氣量為 1:0.8-1.0，發(fā)酵時間為58小時，得到液體發(fā)酵液，活菌數(shù)多100億/g;
[0089]發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：同實(shí)施例3。
[0090] 3、固體物料的準(zhǔn)備：
[0091] 小麥秸桿用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎細(xì)度為2mm-3mm;將小麥秸桿、草木灰、鋸末和實(shí) 施例3的發(fā)酵菌肥料按照質(zhì)量比4.5:1.5:1:1的比例進(jìn)行混合，制成固體物料，備用；
[0092] 4、生物肥的固體發(fā)酵:將液體發(fā)酵液與固體物料按照1:9的質(zhì)量比例混合，通風(fēng)處 靜置2天，即成?；罹鷶?shù)多10億/g。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高效降解阿特拉津的生物肥的制備方法，其特征是， (1) 制備發(fā)酵菌肥 a. 將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌進(jìn)行活化，分別得到活化發(fā)酵液，備用； b. 將植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌進(jìn)行活化，然后采用加1%的紅糖的麥芽汁培養(yǎng)基進(jìn) 行擴(kuò)大培養(yǎng)后，分別得到植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的擴(kuò)大發(fā)酵液，備用； c. 發(fā)酵物料準(zhǔn)備:將餅柏、麥麩、玉米秸桿和魚骨粉按照質(zhì)量比（8~12): (8~12): (45 ~55): 1的比例進(jìn)行混合，滅菌晾干后作為發(fā)酵物料，備用； d. 發(fā)酵:將植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌的擴(kuò)大發(fā)酵液各按2.5~3.5 %的接種量分別加 入到發(fā)酵物料中，再將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活化發(fā)酵液各按0.4~0.6%的接種 量分別加入到發(fā)酵物料中；混合均勻后加入涼開水，以混合后的物料用手攥時成團(tuán)，掉到地 上松散時為宜;然后再于28~32 °C下靜置發(fā)酵1.5~2.5天;最后進(jìn)行高溫殺菌后，即可得到 成熟的發(fā)酵菌肥料； (2) 發(fā)酵菌株的活化 采用微小桿菌屬菌株BTAH1和粒申氏桿菌菌株HBZA0511這兩種菌株，將其活化后，分別 得到種子液備用； (3) 菌株發(fā)酵 將步驟(2)的兩種種子液各按質(zhì)量比4.5~5.5 %的接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵得到液 體發(fā)酵液;發(fā)酵溫度為28~32°C，發(fā)酵時間為50~70小時； 發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖l%，（NH4)2S〇4 1%，Κ2ΗΡ〇4 0.2%，MgS〇4 0.05%，NaCl 0.01%， 酵母膏0.02%，蛋白胨0.05%，pH值7.2; (4) 固體物料的準(zhǔn)備 將小麥秸桿、草木灰、鋸末和步驟（1)制備的發(fā)酵菌肥按照質(zhì)量比（3~5) :(1.5~2.5): (0.8~1.2):1的比例進(jìn)行混合，制成固體物料，備用； (5) 生物肥的固體發(fā)酵:將液體發(fā)酵液與固體物料按照1:8~12的質(zhì)量比例混合，通風(fēng) 處靜置1.5~2.5天，即成。2. 如權(quán)利要求1所述的一種高效降解阿特拉津的生物肥的制備方法，其特征是，所述玉 米猜桿、小麥猜桿均粉碎至2mm-3mm。3. 如權(quán)要求1或2所述的一種高效降解阿特拉津的生物肥的制備方法，其特征是，所述 步驟（1)的a步驟具體為:枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌采用LB液體培養(yǎng)基，搖床中28~32 °(：下，培養(yǎng)10~15小時。4. 如權(quán)要求1或2所述的一種高效降解阿特拉津的生物肥的制備方法，其特征是，所述 步驟(1)的b步驟具體為:將植物乳桿菌或鼠李糖乳桿菌的凍干粉按0.8~1.2 %的用量加入 到滅菌后的MRS液體培養(yǎng)基中，35~38°C下靜置培養(yǎng)10~15小時;測得OD值為0.45~0.55時 再轉(zhuǎn)接一次;待OD值再次達(dá)到0.45~0.55時，按8~12 %的接種量用加1 %的紅糖的麥芽汁 培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)至OD值為0.45~0.55，得到植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌擴(kuò)大發(fā)酵液備 用。5. 如權(quán)要求1或2所述的一種高效降解阿特拉津的生物肥的制備方法，其特征是，所述 步驟(2)具體為:微小桿菌屬菌株BTAH1或粒申氏桿菌菌株HBZA0511采用1/10的LB培養(yǎng)基為 活化培養(yǎng)基，28~32 °C下?lián)u床培養(yǎng)20~28小時，待OD值達(dá)到0.5~0.6時，得到種子液，備用。6. 如權(quán)利要求1或2所述的一種高效降解阿特拉津的生物肥的制備方法，其特征是，所 述步驟（1)的c步驟中將餅柏、麥麩、玉米秸桿和魚骨粉按照質(zhì)量比10:10:50:1的比例進(jìn)行 混合。7. 如權(quán)利要求1或2所述的一種高效降解阿特拉津的生物肥的制備方法，其特征是，所 述步驟(4)中將小麥秸桿、草木灰、鋸末和步驟(1)制備的發(fā)酵菌肥按照質(zhì)量比4:2:1:1的比 例進(jìn)行混合。8. 權(quán)利要求1或2所述的制備方法制備的生物肥。9. 權(quán)利要求8所述的生物肥的施用方法，其特征是，在土壤含水量在15~18%時進(jìn)行撒 施，每畝用量30~50斤，撒施后立即進(jìn)行淺耕，深度為8~10厘米，2~3天后進(jìn)行作物播種。
【文檔編號】A01C21/00GK105967943SQ201610291897
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月5日
【發(fā)明人】劉孝永, 周慶新, 趙雙枝, 陳相艷, 辛雪, 陳蕾蕾, 孫華, 張翔
【申請人】山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所