本發(fā)明屬于真菌培養(yǎng)
技術領域：
，具體涉及一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術：
：牛樟芝(Antrodiacamphorata)別名樟芝、牛樟菇、樟內(nèi)菇或紅樟菇等，隸屬于擔子菌綱，多孔菌目，多孔菌科，薄孔菌屬，是20世紀90年代在中國臺灣發(fā)現(xiàn)的食(藥)用真菌，有“森林紅寶石”之美譽。牛樟芝具有多種生理活性成分，包括多糖類、固醇類、三萜類、腺苷類、不飽和脂肪酸和免疫蛋白等。近些年的研究證實樟芝具有解酒保肝、消除腫瘤、補腎強心、益胃整腸、強化免疫、鎮(zhèn)痛抗菌等作用，特別在治療肝癌和子宮頸癌方面具有顯著功效。牛樟芝為木材腐朽真菌。野生樟芝只生長在百年以上的牛樟(Cinnamomumkanehirae)樹干腐朽之心材內(nèi)壁，或枯死倒伏之牛樟樹木材潮濕表面。野生牛樟芝生長速度非常緩慢，數(shù)量非常稀少，其價格一度高升至15000美元/kg。牛樟樹生長緩慢，能生長牛樟芝的老樹非常少見，牛樟芝資源遠遠不能滿足市場需求，因而牛樟芝的人工栽培就具有重要的意義。樟芝人工培養(yǎng)有液態(tài)培養(yǎng)、固態(tài)培養(yǎng)、椴木栽培和皿培式培養(yǎng)。皿培式培養(yǎng)法以瓊脂為固形物并添加適當?shù)臓I養(yǎng)源作為基質(zhì)，配合優(yōu)質(zhì)菌種在合適的環(huán)境下進行調(diào)控，讓牛樟芝生長在培養(yǎng)皿上。皿培式培養(yǎng)以培養(yǎng)皿作為培養(yǎng)容器，培養(yǎng)條件可控性強，不僅可減少單位間的雜菌交叉污染，也避免了重金屬污染，有助于增加單位栽培面積的產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本，易于實現(xiàn)量化生產(chǎn)，但是，目前的皿培式培養(yǎng)的培養(yǎng)基上栽培的樟芝存在生長速度慢，易感染雜菌，產(chǎn)量低，不適合規(guī)?；a(chǎn)等缺陷。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基及其制備方法。一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基，由如下重量份數(shù)的原料制成，馬鈴薯浸出粉200-300份，葡萄糖20-40份，可溶性大豆粉0-20份，麥芽萃取物1-20份，硫酸鎂0.5-1.5份，樟屬植物混合物10-60份，磷酸二氫鉀0.5-1.5份，維生素B10.01-0.05份，氯霉素0-0.1份，瓊脂15-25份，超純水1000份。所述麥芽萃取物的制備方法為：粉碎麥芽，加4-6倍重量份數(shù)的去離子水，用0.5mm的濾網(wǎng)過濾，室溫下輕柔攪拌混勻2h，6000g，30min，去上清，用鹽酸調(diào)pH至7.2，121℃高壓滅菌15min，冷凍干燥成粉。所述樟屬植物混合物的制備方法為：樟屬植物先粉碎成粉末，60℃烘干，加入超純水121℃萃取20min，過濾后重復萃取一次，制成。所述樟屬植物為樟樹、牛樟、香樟、黃樟、大葉樟、沉水樟、肉桂中的一種或多種。所述牛樟芝皿培培養(yǎng)基pH為4.5-5.5。所述牛樟芝皿培培養(yǎng)基還加入脆葉金毛蘚提取物10-20份。所述脆葉金毛蘚提取物的制備方法為：將脆葉金毛蘚粉碎，加4-6倍重量份數(shù)的去離子水，用0.5mm的濾網(wǎng)過濾，室溫下輕柔攪拌混勻2h，6000g，30min，去上清，用鹽酸調(diào)pH至7.2，121℃高壓滅菌15min，冷凍干燥成粉。上述牛樟芝皿培培養(yǎng)基的制備方法，按照如下步驟進行：先制備樟屬植物混合物，然后各組分溶解混勻，調(diào)pH至4.5-5.5，121℃高壓滅菌20min，滅菌后的培養(yǎng)基在超凈工作臺倒平板，每板20-30ml培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基凝固后接種牛樟芝菌種。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明培養(yǎng)基用培養(yǎng)皿來培養(yǎng)牛樟芝，培養(yǎng)條件可控性強，簡化培養(yǎng)程序，可減少雜菌污染，也避免了重金屬污染，亦可提高牛樟芝菌絲體或子實體的生長量，降低生產(chǎn)成本。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。下述實施例中：所述麥芽萃取物的制備方法為：粉碎麥芽，加5倍重量份數(shù)的去離子水，用0.5mm的濾網(wǎng)過濾，室溫下輕柔攪拌混勻2h，6000g，30min，去上清，用鹽酸調(diào)pH至7.2，121℃高壓滅菌15min，冷凍干燥成粉。所述樟屬植物混合物的制備方法為：樟屬植物先粉碎成粉末，60℃烘干，加入超純水121℃萃取20min，過濾后重復萃取一次，制成。所述樟屬植物為樟樹、牛樟、香樟、黃樟、大葉樟、沉水樟、肉桂中的一種或多種。所述脆葉金毛蘚提取物的制備方法為：將脆葉金毛蘚粉碎，加5倍重量份數(shù)的去離子水，用0.5mm的濾網(wǎng)過濾，室溫下輕柔攪拌混勻2h，6000g，30min，去上清，用鹽酸調(diào)pH至7.2，121℃高壓滅菌15min，冷凍干燥成粉。所述臍草提取物的制備方法為：將臍草粉碎，加5倍重量份數(shù)的去離子水，用0.5mm的濾網(wǎng)過濾，室溫下輕柔攪拌混勻2h，6000g，30min，去上清，用鹽酸調(diào)pH至7.2，121℃高壓滅菌15min，冷凍干燥成粉。實施例1一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基，由如下原料制成，馬鈴薯浸出粉250g，葡萄糖30g，可溶性大豆粉10g，麥芽萃取物10g，硫酸鎂1g，樟屬植物混合物30g，磷酸二氫鉀1g，維生素B10.03g，氯霉素0.05g，瓊脂20g，超純水1L。先制備樟屬植物混合物，然后各組分溶解混勻，調(diào)pH至5.0，121℃高壓滅菌20min，滅菌后的培養(yǎng)基在超凈工作臺倒平板，每板25ml培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基凝固后接種牛樟芝菌種，在25℃條件下培養(yǎng)140天收獲菌絲體或子實體。實施例2一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基，由如下原料制成，馬鈴薯浸出粉200g，葡萄糖20g，可溶性大豆粉2g，麥芽萃取物3g，硫酸鎂0.5g，樟屬植物混合物10g，磷酸二氫鉀0.5g，維生素B10.01g，氯霉素0.01g，瓊脂15g，超純水1L。先制備樟屬植物混合物，然后各組分溶解混勻，調(diào)pH至4.5，121℃高壓滅菌20min，滅菌后的培養(yǎng)基在超凈工作臺倒平板，每板20ml培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基凝固后接種牛樟芝菌種，在20℃條件下培養(yǎng)180天收獲菌絲體或子實體。實施例3一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基，由如下原料制成，馬鈴薯浸出粉300g，葡萄糖40g，可溶性大豆粉20g，麥芽萃取物20g，硫酸鎂1.5g，樟屬植物混合物60g，磷酸二氫鉀1.5g，維生素B10.05g，氯霉素0.1g，瓊脂25g，超純水1L。先制備樟屬植物混合物，然后各組分溶解混勻，調(diào)pH至5.5，121℃高壓滅菌20min，滅菌后的培養(yǎng)基在超凈工作臺倒平板，每板30ml培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基凝固后接種牛樟芝菌種，在28℃條件下培養(yǎng)90天收獲菌絲體或子實體。實施例4一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基，由如下原料制成，馬鈴薯浸出粉220g，葡萄糖28g，可溶性大豆粉8g，麥芽萃取物8g，硫酸鎂0.8g，樟屬植物混合物35g，脆葉金毛蘚提取物15g，磷酸二氫鉀0.9g，維生素B10.03g，氯霉素0.06g，瓊脂20g，超純水1L。先制備樟屬植物混合物，然后各組分溶解混勻，調(diào)pH至4.8，121℃高壓滅菌20min，滅菌后的培養(yǎng)基在超凈工作臺倒平板，每板22ml培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基凝固后接種牛樟芝菌種，在25℃條件下培養(yǎng)120天收獲菌絲體或子實體。實施例5一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基，由如下原料制成，馬鈴薯浸出粉250g，葡萄糖30g，可溶性大豆粉10g，麥芽萃取物10g，臍草提取物10份，硫酸鎂1g，樟屬植物混合物30g，磷酸二氫鉀1g，維生素B10.03g，氯霉素0.05g，瓊脂20g，超純水1L。先制備樟屬植物混合物，然后各組分溶解混勻，調(diào)pH至5.0，121℃高壓滅菌20min，滅菌后的培養(yǎng)基在超凈工作臺倒平板，每板25ml培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基凝固后接種牛樟芝菌種，在25℃條件下培養(yǎng)140天收獲菌絲體或子實體。對比例1一種牛樟芝皿培培養(yǎng)基，由如下原料制成，馬鈴薯浸出粉250g，葡萄糖30g，可溶性大豆粉10g，硫酸鎂1g，樟屬植物混合物30g，磷酸二氫鉀1g，維生素B10.03g，氯霉素0.05g，瓊脂20g，超純水1L。先制備樟屬植物混合物，然后各組分溶解混勻，調(diào)pH至5.0，121℃高壓滅菌20min，滅菌后的培養(yǎng)基在超凈工作臺倒平板，每板25ml培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基凝固后接種牛樟芝菌種，在25℃條件下培養(yǎng)140天收獲菌絲體或子實體。檢測例：采用香草醛-高氯酸顯色法來測定牛樟芝子實體三萜類化合物的總含量；采用苯酚-硫酸法測定牛樟芝子實體中多糖含量，檢測結(jié)果如表1所示：表1檢測例三萜類化合物的總含量多糖含量實施例135mg/g4.6mg/g實施例233mg/g4.5mg/g實施例334mg/g4.4mg/g實施例455mg/g7.4mg/g實施例556mg/g7.2mg/g對比例118mg/g2.5mg/g由表1可以看出，實施例1-5中牛樟芝子實體三萜類化合物的總含量和多糖含量均較高，大大高于對比例1，對比例1中沒有加入麥芽萃取物，其他條件與實施例1相同，證明麥芽萃取物在此起到了關鍵作用，實施例4-5的三萜類化合物的總含量和多糖含量高于實施例1-3，因為加入了脆葉金毛蘚提取物或臍草提取物，證明上述物質(zhì)在此起到了關鍵作用。以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的任何修改、等同替換、改進等，或直接或間接運用在其他相關的
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，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。當前第1頁1 2 3