本發(fā)明涉及蛹蟲草栽培領域，具體涉及一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法。

背景技術：

蛹蟲草為子囊菌門，肉座目，蟲草菌科、蟲草屬的模式種。英文學名為Cordyceps militaris，又名北冬蟲夏草、北蟲草等，有部分地區(qū)亦稱為踴蟲草，世界性分布，天然資源數(shù)量很少。1950年，德國科學家Cunningham觀察到被蛹蟲草寄生的昆蟲組織不易腐爛，進而從中分離出一種抗菌性物質，3'-脫氧腺苷，定名為蟲草素。由子座(即草部分，又稱子實體)與菌核(即昆蟲的尸體部分)兩部分組成的復合體，多感染鱗翅目昆蟲的蛹。

蟲草素一種天然來源的藥物，具有中醫(yī)醫(yī)理中冬蟲夏草一樣的陰陽同補和雙向調節(jié)人體平衡的功能；它在護肝、保腎、潤肺方面由于成分更純效果更好，而且大補氣血，能消除現(xiàn)在不能治愈的痛經(jīng)、偏頭痛、頸椎增生等疾病。從西醫(yī)醫(yī)理角度看蟲草素具有抗腫瘤、抗衰老、抗菌、抗病毒、免疫調節(jié)、改善新陳代謝、清除自由基等多種藥理作用，有良好的臨床應用前景。目前蟲草素的研究現(xiàn)正成為藥物化學、抗衰老、美容、保健品領域中一個極其活躍的領域。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種蛹蟲草人工培育方法，用以解決現(xiàn)有蛹蟲草人工培育方法得到的蛹蟲草的蟲草素含量較低的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開了以下技術方案：

本發(fā)明公開了一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法，所述蛹蟲草菌絲培養(yǎng)和所述蠶蛹蟲草培養(yǎng)均包括以下步驟：在固體培養(yǎng)基中進行菌種的活化和在液體培養(yǎng)基中進行液體菌種的培養(yǎng)，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基和所述液體培養(yǎng)基分別含有重量百分比0.083-0.81％的微量元素組合物，所述微量元素組合物選自四水硫酸鐵、八水硫酸鋅、五水硫酸銅、一水硫酸錳和二水鈷酸鈉中的一種或多種。

本發(fā)明公開的上述一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法中，所述液體培養(yǎng)基包括以下重量百分比的組分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氫鉀0.15-0.5％、硫酸鎂0.1-0.5％、維生素B1 0.001-0.01％、微量元素組合物0.083-0.81％，其余為純凈水或蒸餾水。

本發(fā)明公開的上述一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法中，所述液體培養(yǎng)基包括以下重量百分比的組分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氫鉀0.15-0.5％、硫酸鎂0.1-0.5％、維生素B1 0.001-0.01％、四水硫酸鐵0.01-0.1％、八水硫酸鋅0.05-0.5％、五水硫酸銅0.003-0.01％、一水硫酸錳0.01-0.1％和二水鈷酸鈉0.01-0.1％，其余為純凈水或蒸餾水。

本發(fā)明公開的上述一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法中，所述固體培養(yǎng)基包括以下重量百分比的組分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氫鉀0.15-0.5％、硫酸鎂0.1-0.5％、維生素B1 0.001-0.01％、瓊脂粉1.5％、微量元素組合物0.083-0.81％，其余為純凈水或蒸餾水。

本發(fā)明公開的上述一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法中，所述固體培養(yǎng)基包括以下重量百分比的組分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氫鉀0.15-0.5％、硫酸鎂0.1-0.5％、維生素B10.001-0.01％、瓊脂粉1.5％、四水硫酸鐵0.01-0.1％、八水硫酸鋅0.05-0.5％、五水硫酸銅0.003-0.01％、一水硫酸錳0.01-0.1％和二水鈷酸鈉0.01-0.1％，其余為純凈水或蒸餾水。

本發(fā)明公開的上述一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法中，所述蛹蟲草菌絲培養(yǎng)還包括以下步驟：在發(fā)酵罐培養(yǎng)基中進行發(fā)酵罐培養(yǎng)，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基分別含有重量百分比0.083-0.81％的微量元素組合物，所述微量元素組合物選自四水硫酸鐵、八水硫酸鋅、五水硫酸銅、一水硫酸錳和二水鈷酸鈉中的一種或多種。

本發(fā)明公開的上述一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法中，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基包括以下重量百分比的組分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氫鉀0.15-0.5％、硫酸鎂0.1-0.5％、維生素B1 0.001-0.01％、四水硫酸鐵0.01-0.1％、八水硫酸鋅0.05-0.5％、五水硫酸銅0.003-0.01％、一水硫酸錳0.01-0.1％和二水鈷酸鈉0.01-0.1％。

本發(fā)明公開的上述一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法中，所述蠶蛹蟲草培養(yǎng)還包括以下步驟：接種：將鮮活蠶蛹用臭氧水清洗消毒，將菌種用注射器注入蠶蛹的氣孔處，注射針頭插入不宜過深，避免碰到蠶蛹腸道；暗培養(yǎng)：接種后的蠶蛹避光培養(yǎng)，溫度控制在15℃，期間挑出污染壞蛹，10天蠶蛹僵化，25天蠶蛹表面長出白色菌絲；光培養(yǎng)：待蠶蛹表面菌絲長滿蛹體2/3時，將蠶蛹每天給予18h的光照，光照強度為150Lx左右，繼續(xù)培養(yǎng)25天，蠶蛹蟲草孢子成熟，即可采收。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點：

本發(fā)明通過在固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基加入微量元素組合物，其中，鈷離子是一些酶的激活劑，加入鈷離子可以提高蛹蟲草的產量；錳離子與糖代謝的多種的活性酶有關，同時對于羧化作用是必須的，高濃度的錳能誘導高蟲草素的產生；真菌有富鋅作用，高濃度的鋅能誘導高蟲草素的產生。另外，液體培養(yǎng)基中使用玉米肽，我國是農業(yè)大國，玉米是主要的經(jīng)濟作物，玉米深加工產品的研發(fā)和利用對我國農業(yè)發(fā)展至關重要，玉米肽是從玉米中提取的蛋白質，經(jīng)過定向酶切及特定小肽分離技術獲得的小分子多肽物質，玉米肽富含疏水性氨基酸，又成疏水性肽，攝取后能促進高血糖素的分泌，保持高運動量者的能量需要，有利運動成績提高，玉米肽氨基酸的組成中谷氨酰胺含量很高，谷氨酰胺是構成蛋白質的氨基酸。本發(fā)明公開的技術方案培養(yǎng)方法簡單且效率高。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

實施例1

本實施例中的一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法，包括蛹蟲草菌絲培養(yǎng)和蠶蛹蟲草培養(yǎng)，所述發(fā)酵罐蛹蟲草菌絲培養(yǎng)包括以下步驟：

1、在固體培養(yǎng)基中進行菌種的活化。

2、固體培養(yǎng)基每升中含以下物質：土豆201g、果糖20g、玉米肽10g、酵母浸膏粉3g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.3g、維生素B1 0.013g、瓊脂粉1.5g、微量元素組合物1.53g，其余為純凈水，其中，微量元素組合物具體為四水硫酸鐵0.1g、八水硫酸鋅0.5g、五水硫酸銅0.03g、一水硫酸錳0.8g、二水鈷酸鈉0.1g的混合物。

3、將所述固體培養(yǎng)基分裝于試管中，將蛹蟲草菌種在無菌條件下接入試管斜面20～25℃避光培養(yǎng)6～10天。

4、在液體培養(yǎng)基中進行液體菌種的培養(yǎng)。

5、液體培養(yǎng)基每升中含以下物質：土豆200g、果糖20g、玉米肽10g、酵母浸膏粉3g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1g、維生素B1 0.01g、微量元素組合物1.53g，其余為純凈水，其中，微量元素組合物具體為四水硫酸鐵0.1g、八水硫酸鋅0.5g、五水硫酸銅0.03g、一水硫酸錳0.8g和二水鈷酸鈉0.1g的混合物。

6、將液體培養(yǎng)基每瓶250ml分裝于500ml三角瓶中，高壓滅菌121℃、20min，待培養(yǎng)基溫度冷卻到25℃以下，在無菌條件下每瓶接入活化的斜面菌種，。將接好的菌種三角瓶放在培養(yǎng)室避光培養(yǎng)，先靜置24h后，放入搖床，120r/min，4天后即可得到用于生產發(fā)酵罐的菌種。

7、在發(fā)酵罐中培養(yǎng)：

當菌絲體靜置，達到培養(yǎng)基2/3時，轉入發(fā)酵罐培養(yǎng)，所述50L發(fā)酵罐培養(yǎng)基包括土豆10kg、果糖1kg、玉米肽0.5kg、酵母浸膏粉0.4kg、磷酸二氫鉀0.2kg、硫酸鎂0.2kg、維生素B1 1g、四水硫酸鐵5g、八水硫酸鋅200g、五水硫酸銅1.5g、一水硫酸錳5g和二水鈷酸鈉50g。Ph調至6.5左右，發(fā)酵罐封蓋，打開加熱開關，溫度調至120℃，高壓滅菌1h，打開冷卻水開關，使其降溫降壓，待溫度降至25℃以下，即可接種。23℃避光培養(yǎng)5天即可收集菌絲體。

經(jīng)測試，實施例1中所制得的蛹蟲草菌絲體含蟲草素8.96mg/g、腺苷1.68mg/g、多糖4.01mg/g。

用普通培養(yǎng)基所培養(yǎng)出菌絲體含蟲草素0.89mg/g左右、腺苷未檢出、多糖3.98mg/g左右。

實施例2

本實施例中的一種提高蛹蟲草菌絲及蠶蛹蟲草中蟲草素含量的培養(yǎng)方法，包括蛹蟲草菌絲培養(yǎng)和蠶蛹蟲草培養(yǎng)，所述蠶蛹蟲草培養(yǎng)包括以下步驟：

1、在固體培養(yǎng)基中進行菌種的活化和在液體培養(yǎng)基中進行液體菌種的培養(yǎng)。

2、液體培養(yǎng)基每升中含以下物質：土豆250g、果糖20g、玉米肽10g、酵母浸膏粉3g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂3g、維生素B1 0.01g、微量元素組合物1.83g，其余為純凈水，其中，微量元素組合物具體為四水硫酸鐵0.5g、八水硫酸鋅0.5g、五水硫酸銅0.03g、一水硫酸錳0.3g、二水鈷酸鈉0.5g的混合物。

3、固體培養(yǎng)基每升中含以下物質：土豆200g、果糖18g、玉米肽10g、酵母浸膏粉5g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂5g、維生素B1 0.01g、瓊脂粉1.5g、微量元素組合物6.13g，其余為純凈水，微量元素為四水硫酸鐵0.5g、八水硫酸鋅5g、五水硫酸銅0.03g、一水硫酸錳0.1g、二水鈷酸鈉0.5g的混合物。

4、將液體培養(yǎng)基每瓶250ml分裝于500ml三角瓶中，高壓滅菌121℃、20min，待培養(yǎng)基溫度冷卻到25℃以下，在無菌條件下每瓶接入活化的斜面菌種，。將接好的菌種三角瓶放在培養(yǎng)室避光培養(yǎng)，先靜置24h后，放入搖床，120r/min,每天平均搖瓶5次，每次10min，5天后即可得到用于生產的菌種。

5、蠶蛹蟲草培養(yǎng)包括以下步驟：

接種：將鮮活蠶蛹用臭氧水清洗消毒，將菌種用注射器注入蠶蛹的氣孔處，注射針頭插入不宜過深，避免碰到蠶蛹腸道。

暗培養(yǎng)：接種后的蠶蛹避光培養(yǎng)，溫度控制在15℃左右，期間挑出污染壞蛹，10天左右蠶蛹僵化，25天左右蠶蛹表面長出白色菌絲。

光培養(yǎng)：待蠶蛹表面菌絲長滿蛹體2/3時，將蠶蛹每天給予18h的光照，光照強度為150Lx左右，繼續(xù)培養(yǎng)25天左右，蠶蛹蟲草孢子成熟，即可采收。

經(jīng)測試，實施例2中所制得的蠶蛹蟲草含蟲草素8.80mg/g、腺苷1.98mg/g、多糖3.81mg/g。

用普通培養(yǎng)基所培養(yǎng)出蠶蛹蟲草含蟲草素1.02mg/g左右、腺苷0.78mg/g、多糖3.72mg/g左右。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施例對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。