本發(fā)明涉及食用菌母種培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其是一種木腐食用菌母種培養(yǎng)基及其配制方法。

背景技術(shù)：

目前，食用菌的營(yíng)養(yǎng)早已被人們接受，已經(jīng)成為家家餐桌上的日常菜肴，市場(chǎng)需求量越來(lái)越大，因此，種植面積也越來(lái)越大。食用菌按其栽培所需的原材料可分為草腐菌和木腐菌，草腐菌所需栽培主要原料為作物秸稈以及禾木科秸稈原料，木腐菌栽培的主要原料為闊葉樹(shù)的木屑和棉籽殼。用作物秸稈為主要原料栽培的品種和棉籽殼栽培的品種的培養(yǎng)料必須要經(jīng)過(guò)堆制發(fā)酵。木腐食用菌是指生于枯木或活立木的死部分，分解吸收其養(yǎng)分，破壞其結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致木材腐朽的食用菌。由于木腐食用菌是從動(dòng)植物尸體或無(wú)生命的有機(jī)物質(zhì)中獲取養(yǎng)料，所以木腐型食用菌較易培養(yǎng)，當(dāng)前人工栽培食用菌中絕大多數(shù)，例如香菇、杏鮑菇、白靈菇、黑木耳、金耳、銀耳、榆耳、槐耳、平菇、金針菇等，都是木腐型食用菌。

傳統(tǒng)的木腐食用菌的母種分離和繼代培養(yǎng)，多采用馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000ml的PDA培養(yǎng)基，亦有在此基礎(chǔ)上加入MgSO(分析純)1.5g、4KHPO(分析純)3g的綜合PDA培養(yǎng)基用于母種低溫保存。實(shí)踐證明，在生產(chǎn)中若長(zhǎng)期使用該類培養(yǎng)基，部分食用菌品種易出現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)細(xì)弱、品種抗逆性降低或品種退化現(xiàn)象，給食用菌菌種生產(chǎn)、保存產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是要提供一種新的木腐食用菌母種培養(yǎng)基及其制備方法，該母種培養(yǎng)基適宜平菇、香菇、金針菇、黑木耳、靈芝等多種木腐食用菌的母種分離和繼代培養(yǎng)，且無(wú)菌絲生長(zhǎng)不良、品種抗逆性降低和退化現(xiàn)象發(fā)生。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種木腐食用菌母種培養(yǎng)基，所述木腐食用菌母種培養(yǎng)基主要以去皮涼薯、茅草、狗糞、杉樹(shù)皮、桂圓干、梧桐子、鴨蛋殼、松果、瓊脂和水為原料制成；所述水為涼開(kāi)水或純凈水。

進(jìn)一步地，所述木腐食用菌母種培養(yǎng)基主要由如下重量份的原料制成：去皮涼薯40-60份、茅草20-30份、狗糞10-15份、杉樹(shù)皮10-15份、桂圓干20-25份、梧桐子4-7份、鴨蛋殼3-6份、松果7-10份、瓊脂20-25份和水1100-1200份。

進(jìn)一步地，所述木腐食用菌母種培養(yǎng)基主要由如下重量份的原料制成：去皮涼薯50份、茅草25份、狗糞13份、杉樹(shù)皮13份、桂圓干23份、梧桐子5份、鴨蛋殼5份、松果9份、瓊脂23份和水1150份。

另外，本發(fā)明還提供了所述木腐食用菌母種培養(yǎng)基的配制方法，該配制方法包括以下步驟：

(1)按要求揀取所述原料；

(2)原料處理：將去皮涼薯切成1-2cm的小塊，將茅草和杉樹(shù)皮鍘成1-2cm長(zhǎng)度；

(3)制作：①煮料：將狗糞和100份水加熱煮沸后繼續(xù)小火煮15-20min，而后趁熱用6層紗布過(guò)濾，將濾液裝在燒杯內(nèi)，放于3℃以下低溫處?kù)o置過(guò)夜，然后吸取上清液；將桂圓干、梧桐子、鴨蛋殼、松果和步驟(2)處理后的去皮涼薯、茅草、杉樹(shù)皮分別反復(fù)沖洗干凈并瀝干，混合放入煎煮鍋中，再倒入剩余的水加熱煮沸后繼續(xù)小火煮30-40min，而后趁熱用4-6層紗布過(guò)濾，取濾液，得煎煮液；需要注意，在煮料過(guò)程中，需不停輕輕攪拌，防止粘鍋、溢鍋或焦底；②配制：將步驟①所得上清液和煎煮液與瓊脂混合放入煎煮鍋中中火加熱，直至瓊脂完全融化，停止加熱，而后趁熱用4-6層紗布過(guò)濾，取濾液，即得配制液；

(4)分裝、封口和捆扎：將步驟(3)所得配制液分裝入試管中，每個(gè)試管的裝入量為試管長(zhǎng)度的2/5，用硅膠塞封口，將封口后的試管每10支扎成一捆，每捆上部用牛皮紙包裹；

(5)滅菌和擺斜面：將步驟(4)中捆扎后的試管放入高壓滅菌鍋內(nèi)，關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥，通電，壓力表壓力上升至0.1MPa時(shí),開(kāi)始計(jì)時(shí)，維持壓力0.1～0.15MPa 20min，然后切斷電源，待壓力降到0.5MPa再將放氣閥打開(kāi)，使鍋內(nèi)熱蒸汽連同冷空氣一同排出，當(dāng)壓力降到零后，開(kāi)蓋，取出培養(yǎng)基，將試管擺成斜面，斜面長(zhǎng)度為試管總長(zhǎng)度的1/2，以待冷凝；該過(guò)程需要注意，打開(kāi)放氣閥時(shí)應(yīng)緩慢打開(kāi)，注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明中涼薯使用部分為肥大的塊根，富含糖類、蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素和硫胺素，還含有鈣、鐵、鋅、硒、磷、鉀、鈉、銅、鎂、錳等礦質(zhì)元素，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，含有的硫胺素是菌絲生長(zhǎng)的必需因子，不需額外添加；茅草、杉樹(shù)皮和松果，含有豐富的纖維素、木質(zhì)素和礦質(zhì)元素，為菌絲生長(zhǎng)提供豐富的碳源和礦質(zhì)元素；狗糞含有蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)物、脂肪、尿素、維生素K、維生素B等，提供豐富的氮源和生長(zhǎng)因子；桂圓干含碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪、粗纖維、維生素C、煙酸和維生素K等多種營(yíng)養(yǎng)成分，同時(shí)還含有菌絲生長(zhǎng)所需的大量元素鈣、磷、鎂和鉀等；梧桐子富含蛋白質(zhì)、磷和碳水化合物，提供碳源和氮源；鴨蛋殼主要以碳酸鈣形式存在，其余還有少量的鎂、鉀、銅和微量鐵，提供大量元素鎂、鉀、鈣和微量元素鐵；瓊脂是以藻類的石花菜屬及江蘺屬制成的明膠產(chǎn)品，作為培養(yǎng)基的凝固劑。

綜上所述，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明培養(yǎng)基所轉(zhuǎn)接培養(yǎng)的木腐食用菌菌種不論是純化、復(fù)壯或繼代培養(yǎng)，其菌絲生長(zhǎng)濃密度、整齊度及生長(zhǎng)速度均優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)基PDA，特別是用冰箱低溫保藏的母種，在使用硅膠塞情況下，保藏1～2年后轉(zhuǎn)接，其成活率仍可達(dá)到96％以上，且無(wú)品種退化、變異等現(xiàn)象發(fā)生。

【具體實(shí)施方式】

下面的實(shí)施例可以幫助本領(lǐng)域的技術(shù)人員更全面的理解本發(fā)明，但不可以以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1：

一種木腐食用菌母種培養(yǎng)基，主要由以下重量份的原料制得：去皮涼薯40份、茅草20份、狗糞10份、杉樹(shù)皮10份、桂圓干20份、梧桐子7份、鴨蛋殼6份、松果10份、瓊脂25份和水1200份。其中，所述水為涼開(kāi)水或純凈水。具體制備方法包括以下步驟：

(1)按要求揀取所述原料；

(2)原料處理：將去皮涼薯切成1-2cm的小塊，將茅草和杉樹(shù)皮鍘成1-2cm長(zhǎng)度；

(3)制作：①煮料：將狗糞和100份水加熱煮沸后繼續(xù)小火煮15-20min，而后趁熱用6層紗布過(guò)濾，將濾液裝在燒杯內(nèi)，放于3℃以下低溫處?kù)o置過(guò)夜，然后吸取上清液；將桂圓干、梧桐子、鴨蛋殼、松果和步驟(2)處理后的去皮涼薯、茅草、杉樹(shù)皮分別反復(fù)沖洗干凈并瀝干，混合放入煎煮鍋中，再倒入剩余的水加熱煮沸后繼續(xù)小火煮30-40min，而后趁熱用4-6層紗布過(guò)濾，取濾液，得煎煮液；需要注意，煮料過(guò)程需不停輕輕攪拌，防止粘鍋、溢鍋或焦底；②配制：將步驟①所得上清液和煎煮液與瓊脂混合放入煎煮鍋中中火加熱，直至瓊脂完全融化，停止加熱，而后趁熱用4-6層紗布過(guò)濾，取濾液，即得配制液；

(4)分裝、封口和捆扎：將步驟(3)所得配制液分裝入試管中，每個(gè)試管的裝入量為試管長(zhǎng)度的2/5，用硅膠塞封口，將封口后的試管每10支扎成一捆，每捆上部用牛皮紙包裹；

(5)滅菌和擺斜面：將步驟(4)中捆扎后的試管放入高壓滅菌鍋內(nèi)，關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥，通電，壓力表壓力上升至0.1MPa時(shí),開(kāi)始計(jì)時(shí)，維持壓力0.1～0.15MPa 20min，然后切斷電源，待壓力降到0.5MPa再將放氣閥打開(kāi)，使鍋內(nèi)熱蒸汽連同冷空氣一同排出，當(dāng)壓力降到零后，開(kāi)蓋，取出培養(yǎng)基，將試管擺成斜面，斜面長(zhǎng)度為試管總長(zhǎng)度的1/2，以待冷凝；該過(guò)程需要注意，打開(kāi)放氣閥時(shí)應(yīng)緩慢打開(kāi)，注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。

實(shí)施例2：

一種木腐食用菌母種培養(yǎng)基，主要由以下重量份的原料制得：去皮涼薯50份、茅草25份、狗糞13份、杉樹(shù)皮13份、桂圓干23份、梧桐子5份、鴨蛋殼5份、松果9份、瓊脂23份和水1150份。其中，所述水為涼開(kāi)水或純凈水。具體制備方法與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例3：

一種木腐食用菌母種培養(yǎng)基，主要由以下重量份的原料制得：去皮涼薯60份、茅草30份、狗糞15份、杉樹(shù)皮15份、桂圓干25份、梧桐子4份、鴨蛋殼3份、松果7份、瓊脂20份和水1100份。其中，所述水為涼開(kāi)水或純凈水。具體制備方法與實(shí)施例1相同。

對(duì)比試驗(yàn)：

對(duì)比組1：原料未采用桂圓干，其他原料、用量和制作方法同實(shí)施例2；

對(duì)比組2：原料采用馬鈴薯代替涼薯，且馬鈴薯取50份，其他原料、用量和制作方法同實(shí)施例2；

對(duì)比組3：鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000ml的PDA培養(yǎng)基。制作方法按照常規(guī)方法。

分別取生長(zhǎng)狀態(tài)相同的平菇、金針菇、香菇3種經(jīng)過(guò)活化的菌種，接到上述實(shí)施例1-3和對(duì)比組1-3的斜面培養(yǎng)基上，每個(gè)菌種每個(gè)培養(yǎng)基接10支試管，25℃恒溫培養(yǎng)，當(dāng)菌絲萌發(fā)后表現(xiàn)出良好的生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，每天定時(shí)在試管壁上劃線并觀察菌絲生長(zhǎng)密度。菌絲的日均生長(zhǎng)速度＝(第3～10d共8天的生長(zhǎng)長(zhǎng)度)/8，其中，第3～10d共8天的生長(zhǎng)長(zhǎng)度等于第3天和第10天試管壁上劃線的距離。各菌株在6種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)如下表1所示：

表1各菌株在6種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)

注:“++++”表示菌絲濃密，“+++”表示菌絲較密，“++”表示菌絲稀疏，“+”表示菌絲極稀。

由上表1可見(jiàn)，相對(duì)于改變本發(fā)明的原料組成(未采用本發(fā)明桂圓干、將涼薯?yè)Q為具有相同功效的馬鈴薯)，采用與實(shí)施例2相同的制作方法制得的培養(yǎng)基，本發(fā)明實(shí)施例2制得的培養(yǎng)基菌絲密度和生長(zhǎng)速度都高于對(duì)比組1和對(duì)比組2，改變?cè)戏N類，甚至是采用相同功效的原料進(jìn)行替換，對(duì)菌絲的生長(zhǎng)有一定的影響；由實(shí)施例2與對(duì)比組3對(duì)比可以看出，本發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲生長(zhǎng)濃密度、整齊度及生長(zhǎng)速度均優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)基PDA。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。