本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)廢棄物再利用技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用大蔥蔥葉廢棄物生產(chǎn)木霉生物有機(jī)肥的方法。

背景技術(shù)：

大蔥，味辛，性微溫，具有發(fā)表通陽，有解毒調(diào)味，發(fā)汗抑菌和舒張血管的作用。在東亞國家以及各處華人地區(qū)中，蔥常作為一種很普遍的香料調(diào)味品或蔬菜食用，在東方烹調(diào)中占有重要的角色。

大蔥在生產(chǎn)加工處理時(shí)產(chǎn)生的蔥葉等廢棄物占到大蔥總產(chǎn)量的30%。由于這些大蔥廢棄物隨意傾倒和堆積于農(nóng)村田間地頭、溝渠內(nèi)、道路旁，利用轉(zhuǎn)化率低，無害化處理不到位，腐爛變質(zhì)后造成了較為嚴(yán)重的環(huán)境污染，影響到了居民生活質(zhì)量以及大蔥產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，成為了農(nóng)村新的污染源。大蔥葉子主要成分是葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖及多種低果聚糖和少量淀粉、半纖維素、α-纖維素和木質(zhì)素等，含水量約為70%。做好大蔥尾菜處理利用工作、減少資源浪費(fèi)、防止環(huán)境污染，已成為當(dāng)前大蔥產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展亟需解決的新問題。

木霉菌（Trichoderma spp.）是一種廣泛存在于土壤中的一類真菌，作為一種有益真菌，它對(duì)植物的生長(zhǎng)具有明顯的影響。它能活化土壤中的難溶的磷、鉀及微量元素等，補(bǔ)充植物生活環(huán)境中的營養(yǎng)，并能通過根際定殖和產(chǎn)生激素促進(jìn)植物生長(zhǎng)。因此，木霉菌適用于微生物肥料的開發(fā)利用。

如何獲得大量的分生孢子、菌絲體或者厚垣孢子是木霉制劑加工的關(guān)鍵技術(shù)之一。固體發(fā)酵技術(shù)是目前公認(rèn)的獲得分生孢子最有效的方法，目前報(bào)道的木霉菌分生孢子的生產(chǎn)多采用小麥、玉米等糧食及其副產(chǎn)物為培養(yǎng)基主要成分，也有利用廢水等生產(chǎn)制劑的，但以大蔥蔥葉生產(chǎn)木霉分生孢子的方法還未見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述存在的缺陷而提供一種利用大蔥蔥葉廢棄物生產(chǎn)木霉生物有機(jī)肥的方法。利用大蔥蔥葉廢棄物作為培養(yǎng)基主要成分，通過接種木霉進(jìn)行固體發(fā)酵獲得大量分生孢子，然后加入腐熟有機(jī)肥，生產(chǎn)出具有抑菌功能的木霉生物肥料。本發(fā)明技術(shù)方案不僅為大蔥蔥葉廢棄物的資源化利用提供了一條新途徑，而且生產(chǎn)的木霉生防菌劑可用于田間施用，起到防治多種植物病原真菌、促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)和改良土壤的多重功效。

本發(fā)明的一種利用大蔥蔥葉廢棄物生產(chǎn)木霉生物有機(jī)肥的方法技術(shù)方案為，利用大蔥蔥葉作為培養(yǎng)基主要成分，通過接種木霉進(jìn)行固體發(fā)酵獲得大量分生孢子，然后加入腐熟有機(jī)肥，生產(chǎn)出木霉生物有機(jī)肥。

所述的木霉為綠色木霉菌（Trichoderma Viride）LTR-2，其在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，其保藏編號(hào)是CGMCC No.1498，保藏日期是2005年10月20日。已于2006年6月14日在公開號(hào)為CN1786150A的專利申請(qǐng)上公開。

所述的一種利用大蔥蔥葉廢棄物生產(chǎn)木霉生物有機(jī)肥的方法，包括以下步驟：

（1）大蔥蔥葉處理：大蔥收獲后產(chǎn)生的蔥葉廢棄物立刻進(jìn)行高溫干燥，粉碎后待用；

（2）液體菌種制備：以保存的綠色木霉（Trichoderma Viride）LTR-2為菌種，活化，培養(yǎng)液體菌種；

（3）大蔥蔥葉固體發(fā)酵培養(yǎng)得到固體發(fā)酵物；

（4）木霉生物有機(jī)肥的制備：將步驟（3）培養(yǎng)得到的木霉固體發(fā)酵物與有機(jī)肥混合即得木霉生物有機(jī)肥。

步驟（2）具體為：將綠色木霉（Trichoderma Viride）LTR-2于PDA固體培養(yǎng)基上活化后，接種至滅菌的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，28℃，150-180rpm振蕩培養(yǎng)3-5天后作為液體菌種。

步驟（3）具體為：將干燥粉碎后的大蔥蔥葉與麩皮混合，121℃滅菌25min；將步驟（2）培養(yǎng)得到的液體菌種按質(zhì)量百分比10%-15%的接種量接種后，28℃發(fā)酵培養(yǎng)7-10天得到固體發(fā)酵物。

干燥粉碎后的大蔥蔥葉與麩皮混合質(zhì)量比3:2-3:3，調(diào)整pH為4-5，含水量質(zhì)量百分比為55%-60%。

步驟（3）發(fā)酵得到的固體發(fā)酵物中木霉孢子含量達(dá)到25-30×10⁸個(gè)/g以上。

步驟（4）具體為：以充分腐熟的有機(jī)肥為載體，將步驟（3）培養(yǎng)得到的固體發(fā)酵物與有機(jī)肥按質(zhì)量比1：80～100充分混合即得木霉生物有機(jī)肥。

木霉生物有機(jī)肥中木霉孢子數(shù)大于2×10⁷個(gè)/g，總氮磷鉀養(yǎng)分≥5％，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量≥45％。

所述的一種利用大蔥蔥葉廢棄物生產(chǎn)木霉生物有機(jī)肥的方法，具體包括以下步驟：

（1）大蔥蔥葉廢棄物處理：大蔥收獲后產(chǎn)生的蔥葉廢棄物立刻進(jìn)行高溫干燥，粉碎后待用；

（2）生產(chǎn)用液體菌種制備：將綠色木霉（Trichoderma Viride）LTR-2于PDA固體培養(yǎng)基上活化后，接種至滅菌的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，28℃，150-180rpm振蕩培養(yǎng)3-5天后作為液體菌種；

（3）大蔥蔥葉固體發(fā)酵培養(yǎng)得到固體發(fā)酵物：將干燥粉碎后的大蔥蔥葉與麩皮按質(zhì)量比3:2-3:3混合，調(diào)整pH為4-5，含水量質(zhì)量百分比為55%-60%，121℃滅菌25min；將步驟（2）中的液體菌種按質(zhì)量百分比10%-15%的接種量接種后，28℃發(fā)酵培養(yǎng)7-10天，發(fā)酵物中木霉孢子含量達(dá)到25×10⁸個(gè)/g以上，得到固體發(fā)酵物。

（4）木霉生物有機(jī)肥的制備：以充分腐熟的有機(jī)肥為載體，將步驟（3）得到的固體發(fā)酵物與有機(jī)肥按質(zhì)量比1：80～100充分混合即得木霉生物有機(jī)肥。

木霉生物有機(jī)肥所用的載體為糖渣、淀粉渣、秸稈、雞糞等工農(nóng)業(yè)固體廢物中的至少一種好氧發(fā)酵后充分腐熟后的堆肥。腐熟后堆肥溫度降至40℃以下，且各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到國家要求。

本發(fā)明的有益效果為：通過本發(fā)明方法發(fā)酵生產(chǎn)木霉生物有機(jī)肥，可產(chǎn)生大量的分生孢子，生產(chǎn)過程環(huán)保無污染，木霉生物有機(jī)肥中木霉孢子數(shù)大于2×10⁷個(gè)/g，總氮磷鉀養(yǎng)分≥5％，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量≥45％，對(duì)玉米、黃瓜、番茄等蔬菜作物促生效果好。本發(fā)明技術(shù)方案為大蔥蔥葉廢棄物的資源化利用提供了一條新途徑，有效解決了大蔥蔥葉廢棄物難以資源化利用的問題，通過向充分腐熟的有機(jī)肥中添加木霉固體發(fā)酵物，保證了生物有機(jī)肥中的活性，生產(chǎn)的木霉生物有機(jī)肥可用于田間施用，起到防治多種植物病原真菌、促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)和改良土壤的多重功效。

說明書附圖

圖1所示為不同pH對(duì)固體發(fā)酵的影響；

圖2所示為培養(yǎng)基不同含水量對(duì)發(fā)酵的影響。

具體實(shí)施方式：

為了更好地理解本發(fā)明，下面用具體實(shí)例來詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但是本發(fā)明并不局限于此。

實(shí)施例１

綠色木霉LTR-2菌株活化及種子液制備

綠色木霉菌（Trichoderma Viride）LTR-2，其在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，其保藏編號(hào)是CGMCC No.1498，保藏日期是2005年10月20日。已于2006年6月14日在公開號(hào)為CN1786150A的專利申請(qǐng)上公開。

將-70℃保存的LTR-2菌株接種于PDA固體培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)2天后，挑取新鮮菌塊接種至滅菌的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，28℃，150-180 rpm振蕩培養(yǎng)3-5天后作為液體菌種。

實(shí)施例2

大蔥蔥葉廢棄物培養(yǎng)綠色木霉

將干燥粉碎后的大蔥蔥葉與麩皮按一定比例混合，調(diào)整含水量，分裝于食用菌培養(yǎng)袋中，121℃滅菌25min后接種液體菌種， 28℃左右培養(yǎng)10天后取樣，活菌計(jì)數(shù)法檢測(cè)發(fā)酵物料中LTR-2的分生孢子數(shù)。分別研究了蔥葉含量、pH值、含水量等因素對(duì)大蔥蔥葉廢棄物培養(yǎng)木霉LTR-2的影響。具體請(qǐng)見表1，以及說明書附圖圖1和圖2所示。

表1 大蔥蔥葉與麩皮不同配比對(duì)木霉LTR-2產(chǎn)孢量的影響

。

從表1可以看出，蔥葉與麩皮比例為2:3-3:3，發(fā)酵結(jié)束時(shí)時(shí)可以獲得較高數(shù)量的分生孢子，最高可以達(dá)到31.5×10⁸個(gè)/克（干重）。從圖1和圖2可以看出，固體培養(yǎng)基初始pH和含水量對(duì)木霉分生孢子的產(chǎn)生影響較大，若獲得高產(chǎn)需調(diào)整pH至5左右，含水量調(diào)整為50%-60%。

實(shí)施例3

木霉生物有機(jī)肥的制備

木霉生物有機(jī)肥所用的載體為糖渣、淀粉渣、秸稈、雞糞等工農(nóng)業(yè)固體廢物好氧發(fā)酵后充分腐熟后的堆肥。待腐熟后堆肥溫度降至40℃以下，檢測(cè)堆肥各項(xiàng)指標(biāo)是否達(dá)到國家要求，然后按1%左右接種蔥葉木霉分生孢子培養(yǎng)物（分生孢子數(shù)為30×10⁸cfu/g左右），混合均勻后，40-50℃暖風(fēng)干燥至含水率在15-20%左右，即得含分生孢子在0.2×10⁸cfu/g以上的木霉生物有機(jī)肥。木霉生物有機(jī)肥中木霉孢子數(shù)大于2×10⁷個(gè)/g，總氮磷鉀養(yǎng)分≥5％，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量≥45％。

實(shí)施例4

木霉生物有機(jī)肥對(duì)黃瓜生長(zhǎng)的影響

利用本發(fā)明研制的木霉生物有機(jī)肥進(jìn)行了黃瓜的盆栽試驗(yàn)。試驗(yàn)采取隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，設(shè)3個(gè)處理。處理1：不施木霉生物有機(jī)肥直接播種；處理2：將本發(fā)明實(shí)施例3制備的木霉生物有機(jī)肥按10%的比例與土壤充分混勻作為栽培用土，直接播種；處理3：將用本發(fā)明方法制備的的蔥葉木霉固體培養(yǎng)物（分生孢子數(shù)為30×10⁸cfu/g左右）按1%的用量進(jìn)行拌種處理。

以上處理分別種植在直徑20cm、高45cm的花盆中，按每盆分別播種10粒黃瓜種子，設(shè)6次重復(fù)，以不加木霉制劑為對(duì)照，一周后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率；每盆定苗3株，30天后分別測(cè)定株高、鮮重、干重等指標(biāo)。

表2木霉生物有機(jī)肥對(duì)黃瓜發(fā)芽及幼苗生長(zhǎng)的影響

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從以上結(jié)果可以看出，施用本發(fā)明方法制備的木霉生物有機(jī)肥對(duì)黃瓜根系的生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用。