從裂壺藻中濃縮和純化dha、epa的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法，包括裂壺藻預處理，尿素包合法分離飽和脂肪酸和低不飽和脂肪酸，銀離子絡(luò)合法分離DHA和EPA的步驟。采用2種技術(shù)聯(lián)合萃取工藝，DHA和EPA純度可達90%以上，不需要復雜昂貴的設(shè)施，不需要極端生產(chǎn)條件如超低溫，高壓等，絕大部分試劑和剩余物可以回收利用，因而沒有大量的三廢排放，可以規(guī)模化分離，利于產(chǎn)業(yè)化開發(fā)。
【專利說明】從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]二十二碳六烯酸(DHA)是一種具有重要生理意義和經(jīng)濟價值的多不飽和脂肪酸。它不僅是嬰幼兒大腦、視覺正常發(fā)育的必需物質(zhì)，而且還具有延緩老年人大腦和視覺功能衰退和降低血脂、抑制血栓生成、抗自身免疫反應、抑制腫瘤等功效。因此，DHA己廣泛用于生產(chǎn)嬰幼兒食品、保健食品和輔助治療劑等產(chǎn)品，其制備和加工方法也日受關(guān)注。目前DHA的主要制備方法是從深海魚油中提取。由于魚油資源有限、成份復雜，這種制備方法存在供應不穩(wěn)定、產(chǎn)量有限、成本較高等問題，限制了 DHA的進一步應用。更不利的是，由于海洋環(huán)境污染的惡化，這種方法的安全性受到了越來越多的質(zhì)疑。
[0005]從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法很多，如低溫結(jié)晶法，溶劑分離法，超臨界氣體萃取法，分子蒸餾法，超聲強化絡(luò)合法等，均各有利弊，且沒有一種技術(shù)在生產(chǎn)上能完全純化DHA和EPA。
[0006]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了克服現(xiàn)有【技術(shù)領(lǐng)域】存在的上述缺陷，本發(fā)明的目的在于，提供一種從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法，解決現(xiàn)有技術(shù)從深海魚油中提取DHA存在供應不穩(wěn)定、產(chǎn)量有限、成本較高的問題，解決沒有一種工藝完成DHA和EPA兩種物質(zhì)的分離純化的問題。
[0008]本發(fā)明提供的從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法，包括以下步驟:
一、裂壺藻預處理，高溫噴霧干燥法，調(diào)整發(fā)酵液中生物量為20%左右，處理溫度120°C，用噴霧干燥器，噴霧快速脫水，干燥，藻壁快速收縮開裂，得到破壁裂壺藻；在破壁裂壺藻中加入是其質(zhì)量2倍石油醚攪拌30min，用碟式離心機連續(xù)離心，去除固形物，石油醚置蒸餾器50°C，蒸餾回收石油醚，剩余物為裂壺藻油脂；
二、尿素包合法分離飽和脂肪酸和低不飽和脂肪酸，將尿素加入無水甲醇中，加熱至50°C，攪拌成尿素乙醇飽和溶液；將裂壺藻油脂1份和甲醇3份相互混合，同時加入固體重量為油脂重量1%的NAOH攪拌加熱，溫度在50-70°C間，回流20min，得到裂壺藻脂肪酸甲酯及甘油和未反應的藻油甘油甲酯，冷卻后，水洗其甘油；將脂肪酸甲酯加入其2倍量尿素甲醇溶液,攪拌加熱50°C，反應30min，冷卻至0°C，包合數(shù)小時，形成尿素包合體,液相部分為高度不飽和脂肪酸；用碟式離心機，固液分離，收集液相部分，固相脲包物回收油脂；液相部分用70°C進行蒸餾，回收甲醇，保留多不飽和脂肪酸甲酯；多不飽和脂肪酸甲酯經(jīng)冷水洗出殘余尿素，靜止，分層，棄除水相，油相為含有高比值的DHA ;三、銀離子絡(luò)合法分離DHA和EPA，多不飽和脂肪酸甲酯溶解于丙酮中成丙酮溶液，硝酸銀溶于蒸餾水中，濃度為20%，成硝酸銀溶液，硝酸銀溶液和丙酮溶液等量相混，在0°C狀態(tài)，攪拌30min，繼續(xù)靜止2小時，成DHA硝酸銀絡(luò)合物水溶液，油水分離；用正己烷從DHA硝酸銀絡(luò)合物水溶液中提取DHA，抽提3次，合并正己烷，蒸餾，加溫至69°C，揮發(fā)回收正己烷，最后產(chǎn)物為DHA ;配制成75%濃度的硝酸銀溶液，提取油相中EPA，溫度為45°C，攪拌30min，靜止2小時，用正己烷提取油相中的EPA，蒸餾揮發(fā)回收正己烷，產(chǎn)物為EPA ；
它還包括廢液的回收，脲包物加水和鹽酸，加熱至80°C，使包合物分解，以石油醚溶劑抽提，抽提物為飽和脂肪酸及低不飽和脂肪酸油脂；將硝酸銀殘液用石油醚萃取3次，萃取出有機物，硝酸銀小溶液在水浴上濃縮至液面起膜后，放置0°C，得到硝酸銀結(jié)晶，過濾得固體硝酸銀結(jié)晶。
[0009]本發(fā)明提供的從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法，其有益效果在于，采用2種技術(shù)聯(lián)合萃取工藝，DHA和EPA純度可達90%以上，不需要復雜昂貴的設(shè)施，不需要極端生產(chǎn)條件如超低溫，高壓等，絕大部分試劑和剩余物可以回收利用，因而沒有大量的三廢排放，可以規(guī)模化分離，利于產(chǎn)業(yè)化開發(fā)。
[0010]
【具體實施方式】[0011]下面結(jié)合一個實施例，對本發(fā)明提供的從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法進行詳細的說明。
[0012]
實施例
[0013]本實施例的從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法，包括以下步驟:
一、裂壺藻預處理，高溫噴霧干燥法，調(diào)整發(fā)酵液中生物量為20%左右，處理溫度120°C，用噴霧干燥器，噴霧快速脫水，干燥，藻壁快速收縮開裂，得到破壁裂壺藻；在破壁裂壺藻中加入是其質(zhì)量2倍石油醚攪拌30min，用碟式離心機連續(xù)離心，去除固形物，石油醚置蒸餾器50°C，蒸餾回收石油醚，剩余物為裂壺藻油脂；
二、尿素包合法分離飽和脂肪酸和低不飽和脂肪酸，將尿素加入無水甲醇中，加熱至50°C，攪拌成尿素乙醇飽和溶液；將裂壺藻油脂1份和甲醇3份相互混合，同時加入固體重量為油脂重量1%的NAOH攪拌加熱，溫度在50-70°C間，回流20min，得到裂壺藻脂肪酸甲酯及甘油和未反應的藻油甘油甲酯，冷卻后，水洗其甘油；將脂肪酸甲酯加入其2倍量尿素甲醇溶液,攪拌加熱50°C，反應30min，冷卻至0°C，包合數(shù)小時，形成尿素包合體,液相部分為高度不飽和脂肪酸；用碟式離心機，固液分離，收集液相部分，固相脲包物回收油脂；液相部分用70°C進行蒸餾，回收甲醇，保留多不飽和脂肪酸甲酯；多不飽和脂肪酸甲酯經(jīng)冷水洗出殘余尿素，靜止，分層，棄除水相，油相為含有高比值的DHA;
三、銀離子絡(luò)合法分離DHA和EPA，多不飽和脂肪酸甲酯溶解于丙酮中成丙酮溶液，硝酸銀溶于蒸餾水中，濃度為20%，成硝酸銀溶液，硝酸銀溶液和丙酮溶液等量相混，在0°C狀態(tài)，攪拌30min，繼續(xù)靜止2小時，成DHA硝酸銀絡(luò)合物水溶液，油水分離；用正己烷從DHA硝酸銀絡(luò)合物水溶液中提取DHA，抽提3次，合并正己烷，蒸餾，加溫至69°C，揮發(fā)回收正己烷，最后產(chǎn)物為DHA ;配制成75%濃度的硝酸銀溶液，提取油相中EPA，溫度為45°C，攪拌30min，靜止2小時，用正己烷提取油相中的EPA，蒸餾揮發(fā)回收正己燒，產(chǎn)物為EPA ；
它還包括廢液的回收，脲包物加水和鹽酸，加熱至80°C，使包合物分解，以石油醚溶劑抽提，抽提物為飽和脂肪酸及低不飽和脂肪酸油脂；將硝酸銀殘液用石油醚萃取3次，萃取出有機物，硝酸銀小溶液在水浴上濃縮至液面起膜后，放置0°C，得到硝酸銀結(jié)晶，過濾得固體硝酸銀結(jié)晶，回收率為98%。
[0014]提取出的DHA和 EPA的純度分別為98%和99%。
【權(quán)利要求】
1.一種從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法，其特征在于:包括以下步驟: 一、裂壺藻預處理，高溫噴霧干燥法，調(diào)整發(fā)酵液中生物量為20%左右，處理溫度120°C，用噴霧干燥器，噴霧快速脫水，干燥，藻壁快速收縮開裂，得到破壁裂壺藻；在破壁裂壺藻中加入是其質(zhì)量2倍石油醚攪拌30min，用碟式離心機連續(xù)離心，去除固形物，石油醚置蒸餾器50°C，蒸餾回收石油醚，剩余物為裂壺藻油脂； 二、尿素包合法分離飽和脂肪酸和低不飽和脂肪酸，將尿素加入無水甲醇中，加熱至50°C，攪拌成尿素乙醇飽和溶液；將裂壺藻油脂1份和甲醇3份相互混合，同時加入固體重量為油脂重量1%的NAOH攪拌加熱，溫度在50-70°C間，回流20min，得到裂壺藻脂肪酸甲酯及甘油和未反應的藻油甘油甲酯，冷卻后，水洗其甘油；將脂肪酸甲酯加入其2倍量尿素甲醇溶液,攪拌加熱50°C，反應30min，冷卻至0°C，包合數(shù)小時，形成尿素包合體,液相部分為高度不飽和脂肪酸；用碟式離心機，固液分離，收集液相部分，固相脲包物回收油脂；液相部分用70°C進行蒸餾，回收甲醇，保留多不飽和脂肪酸甲酯；多不飽和脂肪酸甲酯經(jīng)冷水洗出殘余尿素，靜止，分層，棄除水相，油相為含有高比值的DHA ; 三、銀離子絡(luò)合法分離DHA和EPA，多不飽和脂肪酸甲酯溶解于丙酮中成丙酮溶液，硝酸銀溶于蒸餾水中，濃度為20%，成硝酸銀溶液，硝酸銀溶液和丙酮溶液等量相混，在0°C狀態(tài)，攪拌30min，繼續(xù)靜止2小時，成DHA硝酸銀絡(luò)合物水溶液，油水分離；用正己烷從DHA硝酸銀絡(luò)合物水溶液中提取DHA，抽提3次，合并正己烷，蒸餾，加溫至69°C，揮發(fā)回收正己烷，最后產(chǎn)物為DHA ;配制成75%濃度的硝酸銀溶液，提取油相中EPA，溫度為45°C，攪拌30min，靜止2小時，用正己烷提取油相中的EPA，蒸餾揮發(fā)回收正己烷，產(chǎn)物為EPA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從裂壺藻中濃縮和純化DHA、EPA的方法，其特征在于:它還包括廢液的回收，脲包物加水和鹽酸，加熱至80°C，使包合物分解，以石油醚溶劑抽提，抽提物為飽和脂肪酸及低不飽和脂肪酸油脂；將硝酸銀殘液用石油醚萃取3次，萃取出有機物，硝酸銀小溶液在水浴上濃縮至液面起膜后，放置0°C，得到硝酸銀結(jié)晶，過濾得固體硝酸銀結(jié)晶。`
【文檔編號】C01G5/00GK103880647SQ201210561597
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月22日
【發(fā)明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權(quán)汗, 李之詳, 許團輝 申請人:青島中仁藥業(yè)有限公司