專利名稱：一種新型昆蟲排卵用玻片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種家蠶等昆蟲轉(zhuǎn)基因過程中的排卵用玻片。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)基因昆蟲研究是當(dāng)今發(fā)展的前沿領(lǐng)域，不但可以用來研究新基因的功能，還可以用來改變昆蟲的遺傳結(jié)構(gòu)，有利于進(jìn)一步提高資源昆蟲的利用率或開辟新的害蟲防治途徑。對(duì)于提高資源昆蟲的利用率來說，主要以家蠶研究為主，長期以來人們一直專注于用家蠶作為生物反應(yīng)器來生產(chǎn)異源蛋白質(zhì)，早期的研究已經(jīng)清楚證明家蠶是一種非常好的異源蛋白生產(chǎn)反應(yīng)器。第一個(gè)報(bào)道的實(shí)例是用重組的編碼人類干擾素 (alpha-interferon)的桿狀病毒表達(dá)載體感染家蠶幼蟲(Metal et al.，1985)。這個(gè)研究顯示象這種人類蛋白也能夠在家蠶中高水平地轉(zhuǎn)錄生產(chǎn)，并很容易從其血淋巴中純化出所生產(chǎn)的蛋白。隨后，家蠶幼蟲被用來作為宿主成功生產(chǎn)了許多別的由桿狀病毒編碼的重組蛋白(Choudary et al. 1995)。除了被用來作為桿狀病毒介導(dǎo)的異源基因表達(dá)宿主外，也有通過轉(zhuǎn)基因家蠶來生產(chǎn)重組蛋白。這種方法牽涉到將外源基因插入到家蠶基因組中，隨后分離在缺乏桿狀病毒感染的情況下能永遠(yuǎn)表達(dá)外源基因產(chǎn)物的后代。轉(zhuǎn)基因昆蟲明顯的優(yōu)點(diǎn)就是在缺乏任何病毒感染的情況下可持久提供重組蛋白的源泉。目前將外源基因?qū)爰倚Q基因中主要有兩種明顯不同的方法，一種是通過桿狀病毒作為載體來實(shí)現(xiàn)，通常效率較低，轉(zhuǎn)基因后代低于0. (Yamao et al.，1999)。第二種方法是利用PiggyBac作為載體來實(shí)現(xiàn)的，轉(zhuǎn)基因效率比前者提高十倍左右(Tamura et al. 2000)。這種方法已經(jīng)被用來構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因家蠶來編碼和表達(dá)外源蛋白(Imamura et al. 2003 ；Inoue et al. 2005)。排卵是轉(zhuǎn)基因昆蟲方法中必須經(jīng)歷的步驟，然后才通過卵注射，篩選等鑒定出轉(zhuǎn)基因個(gè)體。目前排卵方法通常是采用普通載玻片，在上排上若干卵，在卵一側(cè)用膠固定。該方法所需操作時(shí)間長，而且用膠固定對(duì)卵有一定的傷害，影響卵的孵化率。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型目的在于設(shè)計(jì)一種新的玻片，以簡(jiǎn)化排卵方法，節(jié)省時(shí)間，提高所處理卵的孵化率。本實(shí)用新型的另一目的在于保護(hù)此種新型玻片在昆蟲轉(zhuǎn)基因過程中排卵的用途。本實(shí)用新型的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)一種新型昆蟲排卵用玻片，其特征在于所述玻片表面設(shè)有多條條狀排列的突起， 突起右邊設(shè)有多個(gè)半球形凹陷，凹陷緊貼突起的右邊。突起高為0.05厘米-0.15厘米；突起厚為0.02厘米-0.08厘米；突起之間間隔為0. 57厘米-0. 63厘米。[0012]每條突起的旁邊設(shè)有5-8個(gè)凹陷；玻片表面的突起為6-10條。凹陷表面直徑為0.05-0. 12厘米，深度為0. 03-0. 07厘米。凹陷之間的間隔為0.3-0. 5厘米。如此設(shè)置排卵玻片好處在于方便排列卵，卵嵌在凹陷里，和玻片表面粘著更牢固， 卵左邊有突起的條狀突起擋著，可防止從卵右邊注射時(shí)經(jīng)常導(dǎo)致的卵的移位。使用此新型玻片，卵不需用膠水加固，杜絕了膠水與卵的接觸，提高卵的孵化率。在玻片的另一面標(biāo)示每一凹陷處。本實(shí)用新型提供的技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果( 1)在排卵過程中，減少用黏膠在卵一側(cè)加固的工序，提高排卵速率。(2)卵不需用膠水加固，杜絕了膠水與卵的接觸，減少了對(duì)卵過多的人為操作，提
高其孵化率。( 3 )增加了每張玻片排卵數(shù)量，提高了卵的孵化效率。
圖1為本實(shí)用新型提供的新型玻片的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例11)家蠶品系為Wl-pnd，來自日本，用人工飼料飼養(yǎng)，溫度控制在25°C左右。2)將雌雄蠶配對(duì)，用圓錐形罩杯將成對(duì)的雌雄蠶蛾罩在產(chǎn)卵用的紙上，使其卵集中產(chǎn)在紙的特定部位上。3)取部分卵(附在紙上)，先用自來水沖洗，再用水在培養(yǎng)皿里泡上10分中左右，此時(shí)很容易將卵從紙上分開，集中在培養(yǎng)皿里。4)普通常用排卵載玻片，無突起，無凹陷。5)用普通載玻片排卵用細(xì)毛筆將蠶卵均勻排在載玻片上，共8排，每排6粒卵，每個(gè)卵的卵孔部位朝上，每個(gè)卵的卵窩部位朝右，在每個(gè)卵的左側(cè)和玻片間用木工膠涂上，使卵和玻片間粘著堅(jiān)固，室內(nèi)自然晾干后，用福爾馬林熏蒸4分鐘左右，進(jìn)行卵表面消毒。普通排卵100粒約需時(shí)間為90分鐘。6)在實(shí)體顯微鏡下進(jìn)行顯微注射，從卵右側(cè)進(jìn)行注射，注射后的卵孔用木工膠封上。7)注射后的蠶卵連著載玻片一起放進(jìn)25°C的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察孵化率等情況。孵化率為30%。實(shí)施例21)家蠶品系為Wl-pnd，來自日本，用人工飼料飼養(yǎng)，溫度控制在25°C左右。2)將雌雄蠶配對(duì)，用圓錐形罩杯將成對(duì)的雌雄蠶蛾罩在產(chǎn)卵用的紙上，使其卵集中產(chǎn)在紙的特定部位上。3)取部分卵(附在紙上)，先用自來水沖洗，再用水在培養(yǎng)皿里泡上10分中左右，此時(shí)很容易將卵從紙上分開，集中在培養(yǎng)皿里。4)新設(shè)計(jì)的載玻片該薄片長7. 6厘米，寬3. 6厘米，厚0. 1厘米；玻片表面設(shè)有10條條狀突起，每條突起高0. 08厘米，突起厚0. 05厘米，突起之間間隔為0. 6厘米，最左邊的突起距離玻片左邊緣1厘米，最右側(cè)的一條距離玻片右邊緣0. 7厘米；緊貼著每條嵴的右邊有6個(gè)半球形的凹陷，每凹陷表面直徑為0.12厘米，深0.05厘米，各凹陷之間的間隔，及上下頂端凹陷距離玻片上下邊緣的間隔均為0. 41厘米；在玻片的另一面，對(duì)著每一凹陷處，用紅色漆標(biāo)示。5)用新設(shè)計(jì)的載玻片排卵用細(xì)毛筆在條狀突起右邊的每凹陷里排入一個(gè)卵，共 10排，每排6粒卵，卵嵌在凹陷里，緊貼著條狀突起。每個(gè)卵的卵孔部位朝上，每個(gè)卵的卵窩部位朝右，室內(nèi)自然晾干后，用福爾馬林熏蒸4分鐘左右，進(jìn)行卵表面消毒。本實(shí)用新型排卵100粒約需時(shí)間為45分鐘。6)在實(shí)體顯微鏡下進(jìn)行顯微注射，從卵右側(cè)進(jìn)行注射，注射后的卵孔用木工膠封上。7)注射后的蠶卵連著載玻片一起放進(jìn)25°C的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察孵化率情況。孵化率為40%。
權(quán)利要求1.一種新型昆蟲排卵用玻片，其特征在于所述玻片表面設(shè)有多條條狀排列的突起，突起右邊設(shè)有多個(gè)半球形凹陷，凹陷緊貼突起的右邊。
2.如權(quán)利要求1所述的玻片，其特征在于所述突起高為0.05厘米-0. 15厘米；所述突起厚為0. 02厘米-0. 08厘米；突起之間間隔為0. 57厘米-0. 63厘米。
3.如權(quán)利要求1所述的玻片，其特征在于所述凹陷表面直徑為0.05厘米-0. 12厘米， 深度為0. 03厘米-0. 07厘米。
4.如權(quán)利要求3所述的玻片，其特征在于所述凹陷之間的間隔為0.3厘米-0. 5厘米。
5.如權(quán)利要求1所述的玻片，其特征在于在玻片的另一面標(biāo)示每一凹陷處。
6.如權(quán)利要求1所述的玻片，其特征在于每條突起的右邊設(shè)有5-8個(gè)凹陷；突起為 6-10 條。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種家蠶等昆蟲轉(zhuǎn)基因過程中的排卵用玻片。本實(shí)用新型是在普通排卵玻片表面設(shè)有多條條狀排列的突起，突起右邊設(shè)有多個(gè)半球形凹陷，凹陷緊貼突起的右邊。如此設(shè)置排卵玻片好處在于方便排列卵，卵嵌在凹陷里，和玻片表面粘著更牢固，卵左邊有突起的條狀突起擋著，可防止從卵右邊注射時(shí)經(jīng)常導(dǎo)致的卵的移位。使用此新型玻片，卵不需用膠水加固，杜絕了膠水與卵的接觸，提高卵的孵化率，同時(shí)在排卵過程中，減少用黏膠在卵一側(cè)加固的工序，提高排卵速率，簡(jiǎn)化排卵方法。
文檔編號(hào)G02B21/34GK202008548SQ201120017530
公開日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2011年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月20日
發(fā)明者王方海 申請(qǐng)人:中山大學(xué)