專利名稱：測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用高效液相色譜法測定特定樣品的方法，具體地說是用高效液相色譜法(HPLC)測定放射性注射液原料藥MIBI、ECD等含量和穩(wěn)定性的方法。
甲氧異腈(MIBI)是锝-99m-甲氧異腈(Tc-99m-MIBI)注射液的原料藥，Tc-99m-MIBI注射液是一種新型心肌冠柱顯像劑，為保證該放射性藥品的質(zhì)量，建立原料藥MIBI的定量和穩(wěn)定性分析方法是重要的。鹽酸雙半胱乙脂(ECD)是锝-99m-鹽酸雙半胱乙脂(Tc-99m-ECD)注射液的原料藥，Tc-99m-ECD注射液是一種新型腦血流灌注顯像劑，ECD是該藥質(zhì)量控制的關(guān)鍵。中華核醫(yī)學(xué)雜志1991年第3期公開了方平等人用碘量法測定ECD含量的方法，但未公開具體的工藝條件。
本發(fā)明的目的是為了提供一種快速、簡便，并且靈敏度好，精密度高，適于常規(guī)質(zhì)量控制的測定放射性注射液原料藥MIBI、ECD含量和穩(wěn)定性的方法。
本發(fā)明的目的是通過以下方案實現(xiàn)的。
測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法，其特征在于a.甲醇(g)∶水(g)∶磷酸二氫銨(g)＝100∶0～30∶0～1×10-2為流動相進(jìn)入溶劑儲瓶，通過輸液泵再進(jìn)入進(jìn)樣器；b.配制適量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液按進(jìn)樣量由小至大的順序進(jìn)入進(jìn)樣器隨流動相經(jīng)C18色譜柱分離，再通過紫外檢測器后收集；c.來自檢測器的輸出信號在數(shù)據(jù)處理機上得到樣品的分離譜圖、保留時間和色譜峰高的結(jié)果等；d.進(jìn)樣至少二次，取色譜峰高的結(jié)果的平均值與進(jìn)樣量制得標(biāo)準(zhǔn)曲線；e.供試品溶液經(jīng)上述色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣至少二次，取色譜峰高結(jié)果平均值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線的進(jìn)樣量，供試品進(jìn)樣量與標(biāo)準(zhǔn)曲線的進(jìn)樣量比值為供試品的含量；f.供試品溶液經(jīng)上述色譜系統(tǒng)，取色譜峰高的結(jié)果與供試品相同進(jìn)樣量的對照品色譜峰高結(jié)果的比值為供試品的穩(wěn)定性。供試品的進(jìn)樣量控制在2×10-7～4×10-6g范圍內(nèi)。
本發(fā)明提供的高效液相色譜法測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法，快速、簡便，在Tc-99m-MIBI注射液的原料藥MIBI含量的測定中理論塔板數(shù)大于7000，總分離時間小于4min，分離度大于4，色譜峰拖尾因子為1，測得MIBI的最小檢出量為4×10-7g，精密度為±5％，回收率為95～110％，以上數(shù)據(jù)好于中國藥典“高效液相色譜法”項的規(guī)定；穩(wěn)定性的測定中理論塔板數(shù)大于5400，總分離時間小于10min，分離度大于9，色譜峰拖尾因子為1，測得MIBI的最小檢出量為5×10-7g，精密度為±4％。已應(yīng)用于99mTc-甲氧異注射液的新藥申報工作中。在Tc-99m-ECD注射液的原料藥ECD穩(wěn)定性的測定中理論塔板數(shù)大于5000，總分離時間小于2.5min，分離度大于1.5，色譜峰拖尾因子為1，測得ECD的最小檢出量為1×10-7g，精密度為±4％，已應(yīng)用于99mTc-ECD注射液的新藥申報工作中。
本發(fā)明具有如下附圖。


圖1為高效液相色譜法的流程示意圖。
圖2為甲氧異腈的色譜圖。
圖3為標(biāo)準(zhǔn)品甲氧異腈的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
圖4為鹽酸雙半胱乙脂的色譜圖。
下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實施例1。
高效液相色譜法測定放射性注射液原料藥MIBI含量和穩(wěn)定性的方法。
試劑CH3OH、NH4H2PO4等均為分析純，水經(jīng)二次蒸餾。
樣品標(biāo)準(zhǔn)品為經(jīng)熔點等常數(shù)測定和各圖譜分析確證各項指標(biāo)均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，并在常規(guī)條件下儲存的MIBI；供試品為分別放置于40℃和60℃，相對濕度75％和92.5％以及光照2750LX的五種條件下的原料藥MIBI。標(biāo)準(zhǔn)品甲氧異腈含量＞99％和供試品甲氧異腈均為中國原子能科學(xué)研究院提供。
儀器美國WatersALC/GPC-244型高效液相色譜儀，包括M6000A泵，U6K進(jìn)樣器，M440紫外檢測器和M730數(shù)據(jù)處理機。電子天平，Mettle，AT250，瑞士產(chǎn)品。
采用甲醇(g)∶1mmol/L磷酸二氫銨(g)＝5∶1為流動相，色譜柱為NovapakC18，Ф3.9×150mm，紫外檢測波長254nm。高效液相色譜法流程圖，如圖1所示，流動相經(jīng)溶劑儲瓶通過輸液泵進(jìn)入進(jìn)樣器，樣品溶液隨流動相經(jīng)色譜柱被分離，再通過紫外檢測器后收集，來自檢測器的輸出信號在數(shù)據(jù)處理機上得到分離圖譜、保留時間和色譜峰高的結(jié)果等。將標(biāo)準(zhǔn)品甲氧異腈溶于流動相中，濃度為0.4mg/ml，按其進(jìn)樣量由小至大的順序依次注入色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣兩次，取色譜峰高結(jié)果的平均值與進(jìn)樣量制得標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3所示。供試品甲氧異腈溶于上述流動相中，濃度為0.4mg/ml，進(jìn)樣量為2μg，經(jīng)上述色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣二次，取色譜峰高結(jié)果平均值，如圖2所示，查標(biāo)準(zhǔn)曲線的進(jìn)樣量為1.98μg，供試品進(jìn)樣量與標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)樣量的比值為99％供試品甲氧異腈的含量。取色譜峰高結(jié)果的平均值與進(jìn)樣量為2μg的對照品色譜峰高結(jié)果的比值為供試品的穩(wěn)定性。
將原料藥MIBI分別放置于五種不同的條件下，于不同的時間間隔取樣和等量的對照品對比測定，結(jié)果如表1。
表1 在不同條件下儲存的MIBI分析結(jié)果
由表1可見，放置于40℃溫度下的MIBI在十天儲存期內(nèi)基本穩(wěn)定，其它樣品均有變化。
實施例2。
高效液相色譜法測定放射性注射液原料藥ECD穩(wěn)定性的方法。
試劑甲醇等均為分析純，水經(jīng)二次蒸餾。
樣品對照品為經(jīng)熔點等常數(shù)測定和各圖譜分析確證各項指標(biāo)均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，并在常規(guī)條件下儲存的ECD；供試品為分別放置于40℃和60℃，相對濕度75％和92.5％以及光照2258LX的五種條件下的原料藥ECD。對照品、供試品均為中國原子能科學(xué)研究院提供。
儀器美國Waters ALC/GPC-244型高效液相色譜儀，包括M510泵，U6K進(jìn)樣器，M486可調(diào)檢測器和M730數(shù)據(jù)處理機。電子天平，Mettle，AT250，瑞士產(chǎn)品。
流動相為甲醇，色譜柱為μBondapakC18，φ4×150mm，紫外檢測波長230nm。高效液相色譜法的流程圖，如圖1所示，流動相經(jīng)溶劑儲瓶通過輸液泵進(jìn)入進(jìn)樣器，樣品溶液隨流動相經(jīng)色譜柱被分離，再通過紫外檢測器后收集，來自檢測器的輸出信號在數(shù)據(jù)處理機上得到分離圖譜、保留時間和色譜峰高的結(jié)果等。將適量的對照品ECD溶于流動相中，濃度為1.0mg/ml，按其進(jìn)樣量由小至大的順序依次注入上述色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣兩次，取色譜峰高結(jié)果的平均值與進(jìn)樣量制得標(biāo)準(zhǔn)曲線。供試品ECD溶于上述流動相中，進(jìn)樣量為5μg，經(jīng)上述色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣二次，取色譜峰高結(jié)果平均值與進(jìn)樣量為5μg的對照品色譜峰高結(jié)果的比值為供試品的穩(wěn)定性。
將三批原料藥ECD分別放置于五種不同的條件下，于不同的時間間隔取樣和等量的對照品對比測定，結(jié)果如表2.
表2 存不同條件下儲存的ECD的分析結(jié)果。<
>*1批號1-970818，2-971020，3-971208*2高效液相色譜圖上有一小峰出現(xiàn)，說明供試品有變化。
由表2可見，放置于40℃和60℃以及光照2258LX這三種條件下的原料藥ECD在十天的儲存期內(nèi)均無明顯變化，基本上穩(wěn)定。而保存于相對濕度75％和92.5％的樣品則分別在第十天和第五天測定時發(fā)生變化，說明原料藥ECD不宜保存在高濕狀態(tài)下，應(yīng)注意干燥儲存如存放于保干器中。
權(quán)利要求
1.測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法，其特征在于包括以下步驟a.以甲醇(g)∶水(g)∶磷酸二氫銨(g)＝100∶0～30∶0～1×10-2為流動相進(jìn)入溶劑儲瓶，通過輸液泵再進(jìn)入進(jìn)樣器；b.配制適量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣量按由小至大的順序進(jìn)入進(jìn)樣器隨流動相經(jīng)C18色譜柱分離，再通過紫外檢測器后收集；c.來自檢測器的輸出信號在數(shù)據(jù)處理機上得到樣品的分離譜圖，保留時間和色譜峰高的結(jié)果等；d.取色譜峰高的結(jié)果的平均值與進(jìn)樣量制得標(biāo)準(zhǔn)曲線；e.供試品經(jīng)上述色譜系統(tǒng)，取色譜峰高結(jié)果查標(biāo)準(zhǔn)曲線的進(jìn)樣量，供試品進(jìn)樣量與標(biāo)準(zhǔn)曲線的進(jìn)樣量比值為供試品的含量；f.供試品溶液經(jīng)上述色譜系統(tǒng)，取色譜峰高的結(jié)果與供試品相同進(jìn)樣量的對照品色譜峰高結(jié)果的比值為供試品的穩(wěn)定性。
2.如權(quán)利要求1所述的測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法，其特征在于供試品的進(jìn)樣量控制在2×10-7～4×10-6g范圍內(nèi)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法，標(biāo)準(zhǔn)品、對照品或供試品溶液至少進(jìn)樣兩次。
4.如權(quán)利要求3所述的測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法，其特征在于供試品溶液的濃度與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度相同為最佳。
5.如權(quán)利要求3所述的測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法，其特征在于供試品溶液的濃度與對照品溶液的濃度相同為最佳。
全文摘要
本發(fā)明提供一種測定放射性注射液原料藥含量和穩(wěn)定性的方法,其特征在于以甲醇(g):水(g):磷酸二氫銨(g)=100∶0～30∶0～1X10
文檔編號G01N30/36GK1271097SQ0010904
公開日2000年10月25日 申請日期2000年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月2日
發(fā)明者陳素珍 申請人:中國原子能科學(xué)研究院