-甲基-D-葡萄糖胺用量(重量百分 含量)作對(duì)照實(shí)驗(yàn)，如表2， 表2發(fā)酵配方中不同誘導(dǎo)物用量對(duì)發(fā)酵酶活的影響_
從表1可W看出，不同誘導(dǎo)物N-甲基-D-葡萄糖胺用量對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)產(chǎn)酶有很大影響，用 量在0.01~0.05%之間都可大幅提高酶活力。
[0014] 實(shí)施例3 如圖1所示，一種轉(zhuǎn)葡糖巧酶的制備方法，按
【發(fā)明內(nèi)容】
所述的生產(chǎn)步驟，黑曲霉經(jīng)斜面 培養(yǎng)7天后，制得成熟抱子，加無(wú)菌水制得斜面抱子懸浮液，接入裝有PDY培養(yǎng)基搖瓶中，在 32°C，150r/min條件下培養(yǎng)4她，按10%的比例在裝有100ML液體培養(yǎng)基的500ML搖瓶中接入 搖瓶抱子懸浮液。其中優(yōu)化液體發(fā)酵培養(yǎng)基組分的重量百分含量如下：薦糖5%，蛋白腺8%， 酵母提取物0.5%，K2HP04 1%，N-甲基-D-葡萄糖胺0.05%，NaCl l%，MgS〇4 0.05%，其余為水，經(jīng) 混合均勻制得，初始P冊(cè).01，在32°C，180r/min條件下培養(yǎng)60h，取發(fā)酵液離屯、5000r/min，2 分鐘，取上清液檢測(cè)酶活力，制得的粗酶液活力為20850U/ML。
[001引 實(shí)施例4 如圖1所示，一種轉(zhuǎn)葡糖巧酶的制備方法，按
【發(fā)明內(nèi)容】
所述的生產(chǎn)步驟，黑曲霉經(jīng)斜面 培養(yǎng)7天后，制得成熟抱子，加無(wú)菌水制得斜面抱子懸浮液，接入裝有PDY培養(yǎng)基搖瓶中，在 32°C，150r/min條件下培養(yǎng)4她，按10%的比例在裝有100ML液體培養(yǎng)基的500ML搖瓶中接入 搖瓶抱子懸浮液。其中優(yōu)化液體發(fā)酵培養(yǎng)基組分的重量百分含量如下：薦糖7%，蛋白腺5%， 酵母提取物0.3%瓜冊(cè)04 0.5%，N-甲基-D-葡萄糖胺0.05%，化C1 0.5%，MgS04 0.02%，其余為 水，經(jīng)混合均勻制得，初始P冊(cè).02，在32°C，180r/min條件下培養(yǎng)60h。制得的粗酶液經(jīng)實(shí)測(cè) 活力為 22550u/ML。
[0016] 實(shí)施例5 如圖1所示，一種轉(zhuǎn)葡糖巧酶的制備方法，按
【發(fā)明內(nèi)容】
所述的生產(chǎn)步驟，黑曲霉經(jīng)斜面 培養(yǎng)7天后，制得成熟抱子，加無(wú)菌水制得斜面抱子懸浮液，接入裝有PDY培養(yǎng)基搖瓶中，在 32°C，150r/min條件下培養(yǎng)4她，按10%的比例將搖瓶抱子懸浮液接入發(fā)酵罐中。其中優(yōu)化液 體發(fā)酵培養(yǎng)基組分的重量百分含量如下：薦糖7%，蛋白腺5%，酵母提取物0.3%，K2HP化0.5%， N-甲基-D-葡萄糖胺0.05%，化C1 0.5%，MgS〇4 0.02%，其余為水，經(jīng)混合均勻制得，初始 pH6.02，在32°C，180r/min，罐壓0.05Mpa條件下培養(yǎng)72h。酶粗液的純化濃縮依照下面步驟 進(jìn)行： 1) 壓濾:孔徑1皿，操作壓力為0.20MPa，溫度20°C，取濾液； 2) 微濾:孔徑0.25皿，操作壓力為0.25MPa，溫度20°C，取濾液； 3)超濾:截留分子量為100邸a,操作壓力為0.20MPa，溫度20°C，取截留液，即純化的濃 縮酶液;經(jīng)檢測(cè)活力為311500U/ML。
[0017] 實(shí)施例6 成品分析:取實(shí)施例5制備得到的轉(zhuǎn)葡糖巧酶，另取市售同類(lèi)產(chǎn)品作對(duì)照，采用現(xiàn)有常 規(guī)生產(chǎn)流程，如圖2所示W(wǎng)玉米淀粉為原料，制成30%(重量百分比）淀粉乳，P冊(cè).0,加入耐高 溫曰-淀粉酶，用量為10單位/克干淀粉，在l〇5°C下液化至DE值為10,在130°C滅酶5分鐘后， 調(diào)節(jié)pH值為5.5，溫度為58°C，加入真菌α-淀粉酶用量為20單位/克干淀粉和轉(zhuǎn)葡糖巧酶(實(shí) 施例5)300單位/克干淀粉，反應(yīng)48小時(shí)，即得粗酶制品，在130°C滅酶5分鐘后，添加娃藻± 助濾劑后用板框過(guò)濾，濾液再經(jīng)活性炭脫色，用板框過(guò)濾除炭、取濾液進(jìn)強(qiáng)酸性苯乙締系陽(yáng) 離子交換樹(shù)脂D001，收集流出液，再先后通過(guò)弱堿性苯乙締系陰離子樹(shù)脂D201和弱堿性苯 乙締系陰離子樹(shù)脂D301、收集流出液，進(jìn)行真空濃縮溫度為55°C±3°C，糖液含量濃縮至 75%即得低聚異麥芽糖漿，將精制后的糖液直接噴霧干燥即得粉末低聚異麥芽糖，根據(jù)GB/ T 20881-2007中低聚異麥芽糖含量測(cè)定方法，對(duì)粉末低聚異麥芽糖的含量進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明：優(yōu)化工藝得到的轉(zhuǎn)葡糖巧酶的低聚異麥芽糖轉(zhuǎn)化率為60-65%;而市售產(chǎn)品中低 聚異麥芽糖轉(zhuǎn)化率僅為50%。
[0018] W上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施案例和應(yīng)用案例而已，并不局限于本發(fā)明，對(duì)于 本領(lǐng)域及相關(guān)領(lǐng)域的科研與技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明很容易有各種更改和變化。凡在本發(fā)明 的思路和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、方法改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范 圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種轉(zhuǎn)葡糖苷酶的制備方法，其特征是包括以下步驟： (1) 斜面培養(yǎng) 在裝有察氏固體培養(yǎng)基的試管中接入黑曲霉菌株，靜置培養(yǎng)制得成熟孢子，加無(wú)菌水 制得斜面孢子懸浮液； (2) 搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng) 在裝有PDY培養(yǎng)基的搖瓶中接入斜面孢子懸浮液，搖動(dòng)培養(yǎng)，得搖瓶孢子懸浮液； (3) 液體深層發(fā)酵 按10%質(zhì)量百分濃度搖瓶孢子懸浮液的量接種于經(jīng)高壓滅菌后的優(yōu)化液體發(fā)酵培養(yǎng)基 進(jìn)行培養(yǎng);其中：所述的優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基配方由下述重量百分含量組成:蔗糖5-12%，蛋白胨 2-8%，酵母提取物0· 1-〇·5%，Κ2ΗΡ〇4 0.1-1%，NaCl 0.1-1%，MgS〇4 0·01-0·05%，Ν-甲基-D-葡萄糖胺〇. 〇1_〇. 05%，余量純水； (4) 發(fā)酵液經(jīng)離心，取上清液即得轉(zhuǎn)葡糖苷酶粗酶液。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種轉(zhuǎn)葡糖苷酶的制備方法，其特征是優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基配 方由下列組分按照重量百分含量組成：蔗糖7%，蛋白胨5%，酵母提取物0.3%，K 2HP〇4 0.5%， NaCl 0.5%，MgS〇4 0·02%，Ν-甲基-D-葡萄糖胺0.05%，余量純水。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)葡糖苷酶的制備方法，主要解決低聚異麥芽糖生產(chǎn)中轉(zhuǎn)苷率低的技術(shù)問(wèn)題。為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案為：以黑曲霉菌株（中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，CGMCC？No.3.6478）為原始菌株，采用液體發(fā)酵培養(yǎng)基，并特別添加誘導(dǎo)物，經(jīng)斜面培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、液體深層發(fā)酵、離心分離四個(gè)步驟誘導(dǎo)黑曲霉分泌大量的高效轉(zhuǎn)葡糖苷酶，制得高密度轉(zhuǎn)葡糖苷酶發(fā)酵液。產(chǎn)品可應(yīng)用于低聚異麥芽糖生產(chǎn)的關(guān)鍵步驟-轉(zhuǎn)化階段。
【IPC分類(lèi)】C12R1/685, C12N9/10
【公開(kāi)號(hào)】CN105505896
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610086467
【發(fā)明人】王方明, 謝永強(qiáng), 徐保弟, 張宇
【申請(qǐng)人】上海青瑞食品科技有限公司, 濟(jì)南青瑞生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2016年2月16日