專利名稱：新的治療劑傳遞系統(tǒng)的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)是下列兩件共同未決與相關(guān)申請(qǐng)的美國(guó)專利申請(qǐng)的部分繼續(xù)，它們都于1992年11月30日提出申請(qǐng)，申請(qǐng)?zhí)柛鳛?8/159,687和08/159,674。并且這兩件申請(qǐng)是1993年6月11日登記的共同未決申請(qǐng)U.S.076,250的部分接續(xù)，而申請(qǐng)?zhí)枮?76,250的美國(guó)申請(qǐng)則系在1991年6月18日登記的，共同未決申請(qǐng)U.S.716,899和717,084的部分接續(xù)，這兩件申請(qǐng)相應(yīng)地是1990年8月20日登記的申請(qǐng)?zhí)枮?69,828的美國(guó)專利申請(qǐng)的部分接續(xù)，而這個(gè)申請(qǐng)相應(yīng)地又是1989年12月22日登記的申請(qǐng)?zhí)枮?55,707的美國(guó)申請(qǐng)的部分接續(xù)。所有這些申請(qǐng)均可并入本發(fā)明作為參考。
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及治療劑傳遞系統(tǒng)，更具體地說，涉及含有含治療化合物的微球體的氣體前體，本發(fā)明進(jìn)一步涉及采用這樣的微球體作為治療劑傳遞系統(tǒng)的方法。發(fā)明背景由于藥物毒性問題，靶向性藥物傳遞方式就顯得格外重要。特定的治療劑傳遞方法有可能降低毒副作用，降低所需要的劑量，并能降低病人治病所需的費(fèi)用。本發(fā)明的目的在于滿足治療劑傳遞中這樣和/或那樣的重要需求。
在動(dòng)物和人類疾病的檢查和診斷中已采用了多種成像技術(shù)，而X射線是在診斷成像中首先使用的。通過這種技術(shù)得到的影像反映了被照射物體的電子密度。多年來，已采用對(duì)比試劑，如鋇或碘，來減弱或遮擋X射線，據(jù)知是有一定危險(xiǎn)的并且電離經(jīng)輻射的多種有害作用是積累的。
另一種重要的成像技術(shù)是核磁共振成像(MRI)，但是這一技術(shù)有很多缺陷，例如費(fèi)用問題和MRI掃描器的切面掃描使得它是靜止的，不能進(jìn)行移動(dòng)檢查。此外，很多醫(yī)療中心還不具備MRI。
在核醫(yī)學(xué)中采用的放射性核素又提供了一種成像技術(shù)。應(yīng)用這種技術(shù)時(shí)，放射性核素如锝標(biāo)記化合物被注入病人體內(nèi)同伽瑪相機(jī)可以得到影像。但是，核醫(yī)學(xué)技術(shù)具有立體拆分不好和使動(dòng)物或病人遭受到有害輻射影響的缺陷。而且，放射性核素的處理和運(yùn)輸也是問題。
超聲波提供了另一種診斷成像技術(shù)，不同于核醫(yī)學(xué)和X射線的是，它并不使病人暴露于電離化輻射的有害作用之下。而且，不象核磁共振成像，超聲波相對(duì)比較便宜且可以進(jìn)行移動(dòng)檢查。在應(yīng)用超聲波技術(shù)時(shí)，通過轉(zhuǎn)換器將聲音傳入病人或動(dòng)物體內(nèi)。當(dāng)聲波通過身體傳播時(shí)，它們會(huì)遇到組織和液體的界面，根據(jù)體內(nèi)組織和體液的聲學(xué)性質(zhì)，可部分或完全反射或吸收超聲波。當(dāng)聲波被界面反射時(shí)，它們被轉(zhuǎn)換器中的接受器發(fā)現(xiàn)并且形成一個(gè)影像，體內(nèi)組織和體液的聲學(xué)性質(zhì)決定了所成影像的對(duì)比。
近來在超聲波技術(shù)方面已取得了進(jìn)展，但是，盡管有各種技術(shù)上的改進(jìn)，超聲波技術(shù)在許多方面仍是一種不夠完善的工具，特別是有關(guān)肝，脾，腎，心臟和血管疾病的成像和檢查，以及對(duì)血流的測(cè)量，而要檢查和測(cè)量這些區(qū)域的能力取決于欲測(cè)組織或液體和周圍組織或液體間聲學(xué)性質(zhì)的差異。結(jié)果是需要尋求一種可增強(qiáng)欲測(cè)組織或液體和周圍組織或液體間聲學(xué)性質(zhì)差異的對(duì)比試劑以提供超聲波成像和疾病檢查的能力。
超聲波成像的原理指導(dǎo)著研究者尋求一種氣體對(duì)比試劑。聲學(xué)性質(zhì)或聲阻抗的變化多數(shù)是在密度或聲阻抗差別較大的不同物質(zhì)的界面產(chǎn)生特別是在固體，液體和氣體的容面。當(dāng)超聲波遇到這樣的界面時(shí)，聲阻抗的變化導(dǎo)致更強(qiáng)的反射并且在超聲波成像中產(chǎn)生更強(qiáng)的信號(hào)。影響聲音反射效果的另外一個(gè)因素是反射界面的彈性。反射界面的彈性越大，聲音反射的效率越高。某些物質(zhì)如氣泡具有高彈性界面。因此，作為前述原理的結(jié)果，研究者們集中研究在氣泡基礎(chǔ)上的或含氣體單位的超聲波對(duì)比試劑以及制備它們的有效方法。
Ryan等在美國(guó)專利4,544,545中公開了具有化學(xué)改良的膽固醇涂層的磷脂脂質(zhì)體。該膽固醇涂層可為單層或雙層。含有示蹤物、治療或細(xì)胞毒性劑的含水介質(zhì)被置于脂質(zhì)體中。脂質(zhì)體直徑0.001微米到10微米，是通過攪拌和超聲振動(dòng)制備的。
D’Arrigo在美國(guó)專利4,684,479和5,215,680中指出了一種液包氣乳化液以及從表面活性劑混合物中制備這種乳化液的方法。美國(guó)專利4,684,479公開了通過在空氣振蕩表面活性劑在液體介質(zhì)中的溶液而制備脂質(zhì)體的方法。美國(guó)專利5,215,680指出了大批量的制備微氣泡涂布的類脂的方法，包括在空氣中振蕩表面活性劑在液體介質(zhì)中的溶液或其它氣體混合物，并過濾滅菌所得溶液。
WO80/02365公開了含有被壓縮在可凝膠膜中的惰性氣體，如氮?dú)饣蚨趸嫉奈馀莸闹苽洹Ｖ|(zhì)體可在低溫下保存，可在對(duì)人體使用前或使用之時(shí)升溫。W082/01642描述了微氣泡前體和其制備方法。微氣泡是通過在液體中溶解固體物質(zhì)形成的，產(chǎn)生了充氣空隙，這里氣體是指1.)在固體前體聚集體微粒間空隙中產(chǎn)生的氣體，2.)吸附在前體顆粒表面的氣體，3.)前體顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)整體，4.)當(dāng)前體與液體發(fā)生化學(xué)反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生的氣體，以及5.)溶于液體中并且當(dāng)前體溶解被釋放出來的氣體。
此外，F(xiàn)einstein在美國(guó)專利4,718,433和4,77,958中指出了清蛋白涂布的微氣泡可應(yīng)用于超聲波。
Widder在美國(guó)專利4,572,203和4,844,822中公開了一種超聲成像的方法和微氣泡型成像劑。
Quay在W093/05819中描述了可形成含有根據(jù)已知的物理常數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)而特別選定的氣體的微氣泡的試劑的應(yīng)用，已知的物理常數(shù)包括1)氣泡的大小，2)氣體密度，3)氣體在周圍介質(zhì)中的溶解度，和4)氣體進(jìn)入介質(zhì)的困難程度。
Kaufman等在美國(guó)專利5,171,755中公開了含有高氟化有機(jī)化合物的乳液，不具備足夠表面活性或水溶性的油以及表面活性劑。Kaufman等也告知在醫(yī)學(xué)上應(yīng)用這個(gè)乳液的方法。
研究工作的另一個(gè)重要方面是在靶向性藥物傳遞方面。在現(xiàn)有技術(shù)中，可將遺傳物質(zhì)引入，例如活細(xì)胞中，的方法和物質(zhì)是有限的和無效的。目前為止已發(fā)現(xiàn)了幾種不同的機(jī)理可將遺傳物質(zhì)傳遞到活細(xì)胞中。這些機(jī)理包括技術(shù)例如磷酸鈣沉淀和電穿孔，載體如陽(yáng)離子聚合物和充水脂質(zhì)體。這些方法的體內(nèi)都是相對(duì)無效的，并且在細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)染方面的應(yīng)用也是有限的。這些方法無一有利于遺傳物質(zhì)向靶細(xì)胞的局部釋放，傳遞和整合。
需要對(duì)于治療劑如遺傳物質(zhì)的更好的傳遞方式來治療和動(dòng)物的大量疾病。人們?cè)诮o遺傳疾病定性和理解蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄方面已取得了很大進(jìn)展，但在將遺傳物質(zhì)傳遞到細(xì)胞中以治療人和動(dòng)物疾病的方面取得的進(jìn)步相對(duì)是很小的。
主要的困難就是從細(xì)胞外空間向細(xì)胞內(nèi)空間傳遞遺傳物質(zhì)，甚至是將遺傳物質(zhì)有效定位在選定細(xì)胞膜的表面。在體內(nèi)已嘗試了各種技術(shù)但無很大的成功。例如，已采用病毒如腺病毒和反轉(zhuǎn)錄病毒作為載體向細(xì)胞傳遞遺傳物質(zhì)。使用的是完整的病毒，但可被置于病毒被膜內(nèi)的遺傳物質(zhì)的量是有限的，而且可能由于活病毒導(dǎo)致有害的相互作用?？梢苑蛛x出病毒被膜的必要成份并用于向選定的細(xì)胞傳遞遺傳物質(zhì)。但是，在體內(nèi)傳遞載體不僅要識(shí)別特定的細(xì)胞，而且它也必須被傳遞到這些細(xì)胞。盡管在病毒載體方面作了大量的工作，但開發(fā)一種成功的在體內(nèi)可傳遞遺傳物質(zhì)的靶向病毒調(diào)節(jié)的載體是困難的。
常規(guī)的，在細(xì)胞培養(yǎng)中采用含液體脂質(zhì)體向細(xì)胞中傳遞遺傳物質(zhì)，但對(duì)于體內(nèi)遺傳物質(zhì)的細(xì)胞傳遞而言，這是相當(dāng)無效的。例如，陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)在體內(nèi)不是很有效的。需要開發(fā)更有效的方式以改善治療劑如對(duì)比試劑和遺傳物質(zhì)的細(xì)胞傳遞。
盡管已取得了進(jìn)展，但現(xiàn)有技術(shù)還沒有解決超聲波對(duì)比試劑發(fā)展中存在的許多問題。氣體可從穩(wěn)定的乳液式顆粒涂層中擴(kuò)散出來并使產(chǎn)品失效。在目前為止所開發(fā)的所有的用于超聲波的氣基對(duì)比介質(zhì)中，微球體相對(duì)是較大的，例如在2—7微米間，這為加強(qiáng)超聲對(duì)比提供了足夠強(qiáng)的逆向散射。這些顆粒的大小使得它們很難排出可能的污染物，這些污染物是從注射液如細(xì)菌中得來的并在注射過程中傳給病人的。近年來發(fā)展的充氣微球體在體內(nèi)是很不穩(wěn)定的并且不能保持足夠長(zhǎng)時(shí)間以提供理想的對(duì)比加強(qiáng)效果。
本發(fā)明的目的是為了滿足以前的，以及其它在超聲成像對(duì)比試劑領(lǐng)域和使治療劑有效靶定位傳遞的載體領(lǐng)域的重要需求。本發(fā)明是為了提供更好和更安全的用于超聲波診斷和遺傳物質(zhì)傳遞的對(duì)比試劑。
本發(fā)明概述本發(fā)明提供了利用充氣微球體，在專一位點(diǎn)釋放治療劑的治療劑傳遞系統(tǒng)。微球體含有可由于溫度而被激活的氣體前體，它在特定的溫度下被激活變成氣體。一旦這種微球體進(jìn)入病人體內(nèi)，治療化合物則通過聲能，微波能，磁能或高熱的作用被定向到特異性組織上，它們指向靶區(qū)域并使微球體破裂，釋放出治療化合物。
更具體地說，本發(fā)明提供了靶向性治療劑傳遞系統(tǒng)，該系統(tǒng)含有含治療化合物的可被溫度激活的充氣體前體微球體。
本發(fā)明還提供了使治療化合物受控傳遞到病人病灶區(qū)的方法，該方法包括(1)向病人施用含治療化合物的可被溫度激活的充氣體前體—微球體；(2)使用超聲波監(jiān)控微球體以確定氣體前體從液體變成氣體的相轉(zhuǎn)變以及確定在病灶區(qū)微球體的存在；以及(3)使用超聲破裂微球體而使治療化合物在病灶區(qū)釋放出來。
此外，本發(fā)明還提供了適合在對(duì)比試劑傳遞中作用的及可用作藥物傳遞劑的，可由于溫度激活的充氣體前體脂質(zhì)體的制備方法和所用設(shè)備。本發(fā)明優(yōu)選的方法提供了下述優(yōu)點(diǎn)，例如，制備含有治療化合物，可由于溫度激活的氣體前體—填充的微球體的過程的簡(jiǎn)單性和可能的費(fèi)用節(jié)省。
可由于溫度而被激活的，氣體前體填充的脂質(zhì)體在用作對(duì)比試劑和藥物載體方面是特別有用的。不同于現(xiàn)有技術(shù)中內(nèi)含液體，僅適用于密封水溶性藥物的脂質(zhì)體，本發(fā)明的可由于溫度激活的充氣體前體脂質(zhì)體在密封親脂藥物方面是特別有用的。而且，藥物的親脂衍生物也很容易加入類脂層中，例如，金屬茂二鹵化物的烷基化衍生物。參考Kuo等，J.Am.Chem.Soc.1991，113，9027—9045。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)之一確信包括通過微球體內(nèi)的氣體前體吸收超聲波能量，這是在特定的轉(zhuǎn)變溫度下使液氣前體轉(zhuǎn)變成氣體而進(jìn)行的，而微球體的破裂造成膜流動(dòng)性局部增加，因而可以增加治療化合物的細(xì)胞攝取量。
本發(fā)明的各種特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)將在下列附圖中更詳細(xì)解釋并描述如下。
附圖的概述附

圖1表示含有治療化合物的充氣體前體脂質(zhì)體，該治療化合物嵌在類脂微球體壁間，以及當(dāng)施加超聲波時(shí)治療劑的后續(xù)釋放。
附圖2表示含有治療化合物的充氣體前體脂質(zhì)體，該治療化合物在脂質(zhì)體微球體壁的內(nèi)層且暴露在充氣體前體的內(nèi)腔中，以及當(dāng)施加超聲波時(shí)治療劑的后續(xù)釋放。
附圖3表示含有治療化合物的充氣體前體脂質(zhì)體，該治療化合物嵌在脂質(zhì)體微球體壁的外層且暴露在充氣體前體的內(nèi)腔中，以及當(dāng)施加超聲波時(shí)治療劑的后續(xù)釋放。
附圖4表示含有治療化合物的充氣體前體脂質(zhì)體，該治療化合物嵌在脂質(zhì)體微球體壁的內(nèi)層和外層，并暴露在充滿氣體前體的內(nèi)腔和外環(huán)境中，以及當(dāng)施加超聲波時(shí)治療劑的后續(xù)釋放。
附圖5圖解說明了含有連接于脂質(zhì)體內(nèi)腔的治療化合物的充氣體前體脂質(zhì)體微球，以及當(dāng)施加超聲波時(shí)治療劑的后續(xù)釋放。
附圖6圖解說明了含有連接在脂質(zhì)體外壁的治療化合物的充氣體前體脂質(zhì)體微球，以及當(dāng)施加超聲波時(shí)治療劑的后續(xù)釋放。
附圖7圖解說明了含有治療化合物的充氣體前體脂質(zhì)體微球體，其中治療化合物如負(fù)電性藥物(A)或正電性藥物是連接在脂質(zhì)體微球的內(nèi)外壁上，以及當(dāng)施加超聲波時(shí)治療劑的后續(xù)釋放。
附圖8圖解說明了含有包裹在充氣體前體內(nèi)腔中的治療化合物的充氣體前體脂質(zhì)體微球，以及當(dāng)施加超聲波時(shí)治療劑的后續(xù)釋放。
附圖9為制備本發(fā)明含治療劑的充氣體前體脂質(zhì)體微球體的優(yōu)選設(shè)備的切面示意圖部分為簡(jiǎn)圖。
附圖10為表示過濾和/或分配本發(fā)明含治療劑的充氣體前體脂質(zhì)體微球體的優(yōu)選設(shè)備。
附圖11畫出了過濾和/或分配本發(fā)明含治療劑的充氣體前體脂質(zhì)體微球體的優(yōu)選設(shè)備。
附圖12為附圖11設(shè)備的部分展示圖。
附圖13給出了其內(nèi)部基本上無水且其中未密封有任何藥物的充氣脂質(zhì)體的dB反射，其中所述脂質(zhì)體通過真空干燥氣體滴注法制備。數(shù)據(jù)是在TM5200型成像掃描儀(A-coustic Imaging，Phoenix，Arizona)上利用7.5兆赫轉(zhuǎn)換器掃描得到并通過采用系統(tǒng)測(cè)試軟件測(cè)量反射比而產(chǎn)生。在各試驗(yàn)之前，采用已知聲阻抗的模擬來校準(zhǔn)這個(gè)系統(tǒng)。
附圖14給出了制備含藥物的，真空干燥氣體滴注的脂質(zhì)體的優(yōu)選設(shè)備，并且通過真空干燥氣體滴注法制備的含藥物的充氣脂質(zhì)體的內(nèi)部基本無水存在。
附圖15為顯微攝影照片，該照片展示了本發(fā)明充氣體前體類脂體在過濾前(A)和過濾之后(B)的大小。
附圖16圖解說明了本發(fā)明的充氣體前體脂質(zhì)體在過濾之前(A)和過濾之后(B)大小分布。
附圖17為脂質(zhì)體懸浮液通過過濾器壓出之前(A)和之后(B)的顯微攝影。
附圖18為在過濾和壓熱類脂懸浮液后形成的充氣體前體脂質(zhì)體的顯微攝影。所述顯微攝影攝于過濾篩分充氣體前體類脂體之前(A)和之后(B)。
附圖19圖解說明了在由溫度激活之前的可被溫度激活的充氣體前體脂質(zhì)體。這個(gè)脂質(zhì)體具有多層膜。
附圖20圖解說明了溫度激活的充液氣前體脂質(zhì)體在經(jīng)歷了溫度激活的液態(tài)向氣態(tài)的轉(zhuǎn)化之后，產(chǎn)生了多層膜和脂質(zhì)體直徑的增大。
本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了靶向性藥物傳遞系統(tǒng)，該系統(tǒng)是由含治療化合物的可由溫度激活的充氣體前體微球體組成。微球體被定義為具有內(nèi)空間且相對(duì)形狀為球形的結(jié)構(gòu)。根據(jù)需要，治療化合物可被嵌入在微球體球壁內(nèi)，也可密封在微球體內(nèi)和/或連接在微球體上。本申請(qǐng)中所用的與治療化合物的位置有關(guān)的術(shù)語″連接″或其同義詞是指治療化合物通過某些方式連接在微球體的內(nèi)部和/或外部，如通過共價(jià)或離子鍵，或其它化學(xué)或電化學(xué)連接或相互作用的方式連接，例如，如上所示的附圖5，6和7所述。本申請(qǐng)中所用的與治療化合物的位置有關(guān)的術(shù)語″密封″或其同義詞是指治療化合物位于微球體的內(nèi)腔中，例如如上附圖8所示。所用的與治療化合物位置有關(guān)的術(shù)語″嵌入″或其同義詞表示治療化合物位于微球體壁之內(nèi)，例如如上附圖1，2，3，和4所示。術(shù)語″含有治療藥物″表示所有不同類型的治療化合物在微球體中的位置。因此，治療化合物可以變化地被定位，例如包裹在充氣體前體微球體的內(nèi)腔內(nèi)，定位在充氣體前體微球體的氣體和內(nèi)壁之間，結(jié)合在充氣體前體微球的外表面和/或嚙合在微球體結(jié)構(gòu)本身之內(nèi)。本專業(yè)人員一旦了解國(guó)本申請(qǐng)的公開內(nèi)容還應(yīng)理解當(dāng)微球體包含類脂時(shí)，其壁可以含有多于一個(gè)類脂雙層。
本發(fā)明微球可以在體外或體內(nèi)用于靶向性治療藥物傳遞。優(yōu)選的是有超聲波作用時(shí)每個(gè)單一微球能釋放出基本上所有治療化合物。術(shù)語″基本上所有″是指至少的80％，優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選約100％。在某些方案中，所有治療化合物從全部微球體中的釋出是快速的；而在其它方案中，釋放則是逐步的。本專業(yè)人員一旦了解本申請(qǐng)的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)理解優(yōu)選的釋放速率將隨治療化合物結(jié)合的類型而改變。在一些優(yōu)選的方案中，例如治療化合物封裝在微球體內(nèi)，因此當(dāng)微球體破裂時(shí)幾乎所有治療化合物能從微球體內(nèi)快速釋出。進(jìn)一步，本專業(yè)人員掌握了本申請(qǐng)公開內(nèi)容之后還應(yīng)理解通過改變施加的超聲波的頻率和作用時(shí)間可以得到需要的治療化合物的釋出速率。
因此，如上所述，被傳遞的治療化合物可以封裝包裹在充氣微球體之內(nèi)，這些化合物可以是各種治療化合物；可以溶合在充氣微球體的表面，如用負(fù)電DNA涂層在陽(yáng)離子類脂上或?qū)⒄娝幬锿吭陉庪x子類脂上，和/或嵌入在充氣微球體的壁內(nèi)，這種藥物化合物如親脂治療劑。微球體可以以包含有治療劑的微球體形式制得，或者微球體以不包含治療劑的形式制得治療藥物在使用之前加到充氣體前體微球體中。對(duì)于后一種情況，治療化合物可入通過倒入加到含有充氣體前體微球體的水溶性介質(zhì)中，并振蕩以使用治療劑涂布微球。
這里所用的″可由于溫度活化的氣體前體″是指可在選定的活化或轉(zhuǎn)化溫度下由液態(tài)轉(zhuǎn)變成氣態(tài)的化合物?；罨蜣D(zhuǎn)化溫度等術(shù)語是指氣體前體的沸點(diǎn)，即在該溫度下氣體前體由液體向氣體的相轉(zhuǎn)變發(fā)生。可用的氣體前體是指其氣體的沸點(diǎn)在約-100℃到70℃之間的?；罨瘻囟葘?duì)每種氣體前體來說都是特定的。這個(gè)概念正如圖19和20說明的那樣?；罨瘻囟燃s為37℃或人的體溫對(duì)本發(fā)明氣體前體而言是優(yōu)選的。因此，液體氣體前體應(yīng)在37℃活化變成氣體。但是在本發(fā)明方法中應(yīng)用氣體前體時(shí)它也可處于液體或氣體狀態(tài)。合適的可由于溫度激活的氣體前體對(duì)于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員而言都是熟知的，例如乙酸甲酯，它是一種在人體組織或生理溫度或體溫下是液體的化合物。正如本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已認(rèn)識(shí)到的，這樣的化合物可在施用之前活化，或者以乙酸甲酯的情況而言，也可在注入病人體內(nèi)時(shí)活化。即使是在施用前才置于適當(dāng)?shù)臏囟认?，由處在液態(tài)或氣態(tài)的氣體前體制備的微球體比起廢棄的其中有密封氣體的微球體來說，也是一個(gè)更加穩(wěn)定的整體。因此其中密封有由溫度激活的氣體前體的微球體具備更長(zhǎng)的貨架壽命(Shelflife)，所得的含氣體前體的微球體在體內(nèi)很容易被檢測(cè)出來，這是由于它們與周圍身體結(jié)構(gòu)和器官相比具有較低的密度。此外，正如這一領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以認(rèn)識(shí)到的，這樣的溫度敏感的由氣體形成的微球體可用體內(nèi)溫度的指示劑。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的方案中，在環(huán)境溫度或室溫下，在施用給病人的時(shí)候，氣體前體由液相轉(zhuǎn)化成氣相。根據(jù)氣體前體的類型，在I.V.注射前對(duì)比介質(zhì)可冰凍保存和也可保持冷卻，例如通過保溫注射器保存。注射時(shí)，由于最大的超聲波增強(qiáng)，氣體前體隨之膨脹。
氣體前體的選擇是在進(jìn)入病人或動(dòng)物體內(nèi)時(shí)，在使用前，在保存或制備過程中，使得氣體能夠在靶組織或靶液體處就地形成(例如在施加超聲波，微波，磁能或光能(如激光或紅外)時(shí))。溫度激活的充氣體前體微球體的制備是在低于氣體前體沸點(diǎn)的溫度下進(jìn)行的。此時(shí)，氣體前體被封在微球中使得在制備過程中并不發(fā)生相轉(zhuǎn)化，不同的是，充氣體前體微球體是由液態(tài)氣體前體制備的。相轉(zhuǎn)化可在任何時(shí)候發(fā)生，這是由于允許溫度超過前體的沸點(diǎn)溫度。
對(duì)于低沸點(diǎn)氣體前體，可采用冷卻到低溫的微觀強(qiáng)化流態(tài)劑裝置將液體前體乳化。利用液體形式前體時(shí)，在液體介質(zhì)中使用溶劑也可以降低沸點(diǎn)。另外，運(yùn)用集中的高超聲波能可得約70℃的上限溫度。
作為本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，在體內(nèi)通過溫度調(diào)節(jié)相轉(zhuǎn)化使得氣體前體變成氣體，氣體前體也可用于制備穩(wěn)定的對(duì)比介質(zhì)并在進(jìn)入病人體內(nèi)之前轉(zhuǎn)變成氣態(tài)，其中氣體是由前體得到的。這方面的制備包括在生產(chǎn)過程中將氣體前體導(dǎo)入微球體。
氣體前體可用來制備穩(wěn)定的充氣微球體，該充氣微球是在使用前預(yù)先生成的。在本發(fā)明的這種形式中，是在低于各氣體前體液—?dú)庀噢D(zhuǎn)化溫度的條件下，將氣體前體加到含懸浮和/或穩(wěn)定介質(zhì)的容器中。隨著溫度隨后升高，在氣體前體和液體溶液間形成乳液，而氣體前體則經(jīng)歷了由液態(tài)向氣態(tài)的轉(zhuǎn)化。作為加熱和氣體形成的結(jié)果，氣體取代了液體懸浮液上端部位的空氣從而形成充氣類脂球，該球中封閉著從氣體前體轉(zhuǎn)化來的氣體，環(huán)境氣體(如空氣)，或共同殘余氣體或環(huán)境氣體。相轉(zhuǎn)化可用于對(duì)比介質(zhì)的理想混合及穩(wěn)定化。例如，氣體前體如全氟丁烷可能封閉在脂質(zhì)體中，而當(dāng)溫度上升到超過3℃(全氟丁烷沸點(diǎn))時(shí)，產(chǎn)生脂質(zhì)體封閉的全氟丁烷氣體。在一個(gè)另外的實(shí)例中，氣體前體氟丁烷可被懸浮在含乳化劑和穩(wěn)定劑的含水懸浮液中并在常用渦旋器中旋轉(zhuǎn)，乳化劑和穩(wěn)定劑如甘油或丙二醇。渦旋是在足夠低溫度下進(jìn)行的使得氣體前體為液體，并在樣品溫度升至超過由液態(tài)向氣態(tài)的相轉(zhuǎn)化溫度后繼續(xù)進(jìn)行。在這個(gè)過程中，在微滴乳化作用下前體被化成氣體。在適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑存在上，產(chǎn)生極其穩(wěn)定的充氣脂質(zhì)體。
類似地，室溫下為液體的全氟戊烷也可被封閉在類脂中。室溫下將少量(0.76—1.52uL)液體全氟戊烷前體加到類脂溶液(如82摩爾％二棕櫚酰磷脂酰膽堿，8摩爾％二棕櫚磷脂酰乙醇胺—PEG500和10摩爾％二棕櫚酰磷脂酸)的80體積％的鹽水和10體積％丙二醇的溶液中并振蕩。隨后懸浮液溫度上升超過相轉(zhuǎn)化溫度(例如超過30℃)激發(fā)了全戊烷氣體前體由液態(tài)向氣態(tài)的轉(zhuǎn)化。產(chǎn)生泡沫并得到充氣脂質(zhì)體。制得的充氣脂質(zhì)體的平均大小通常超過20微米，正如在Wig—L—BugTM上通過渦旋或振蕩制得的那樣。過濾脂質(zhì)體而單孔8微米的過濾器已足以除去99％的大小超過10微米的顆粒。由于脂質(zhì)體是有彈性和易變形的。過濾后它們變成了更小的類脂涂布的脂質(zhì)體。當(dāng)脂質(zhì)體冷卻到室溫或更低溫度時(shí)，殘余的全氟戊烷氣體前體回到液態(tài)，結(jié)果是將全氟戊烷毫微顆粒封閉在脂質(zhì)體中。溫度回升時(shí)(如注射入體內(nèi)時(shí))可形成適當(dāng)大小的脂質(zhì)體。
這里介紹封閉全氟戊烷氣體前體的另一種方法。將少量(0.76—1.54μL)全氟戊烷加到上述類脂的含水溶液中，并使用一種不同的攪拌方法。使物質(zhì)置于微觀強(qiáng)化流態(tài)劑(Microfludics，Newton，MA)中并于20℃16000psi條件下使它通過調(diào)整壓力和通過量，可相應(yīng)調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的大小，從而得到封閉有平均大小為約直徑5nm的全氟戊烷毫微顆粒的各平均直徑約為100nm的小脂質(zhì)體。溫度調(diào)節(jié)的氣體轉(zhuǎn)化(例如注入體內(nèi)時(shí))之后隨著膨脹，每個(gè)這一大小的毫微顆粒都可產(chǎn)生出直徑略小于10微米的脂質(zhì)體。在這種情況下，所得的脂質(zhì)體可用類脂部分涂布且所得脂質(zhì)體的大小是可控制的。在制備過程中，可有幾種方法除去殘余的全氟戊烷。首先，液體全氟戊烷的密度大并沉入底部，而封閉有毫微顆粒或微顆粒的脂質(zhì)則趨向于留在懸浮液中。其次，可溫?zé)釕腋∫?；較大的未被封閉的微顆粒比全氟戊烷的毫微顆粒形成更大的脂質(zhì)體，而這些更大的脂質(zhì)體將更快地上升容器上部而被除去。一個(gè)非常實(shí)際的方法就是采用過濾，這是在注入病人體內(nèi)過程中一個(gè)協(xié)調(diào)的方法。
可用微膠粒制品(Micelluar formulation)取代脂質(zhì)體(封閉有全氟戊烷毫微顆粒的類脂雙層結(jié)構(gòu))。微膠粒制品為類脂的適當(dāng)混合物，例如花生油與膽酸鈉，膽固醇和丙三醇混合(任選與部分聚乙二醇基(PEGlated)類脂混合)。微觀強(qiáng)化流態(tài)化過程可用來制備氣體前體微觀蜂窩狀形式和用來制備乳液的毫微顆?；蛭⒘?，其中每個(gè)顆粒封閉的全氟戊烷毫微顆粒的平均直徑約50nm上下。
當(dāng)在低于氣體前體相轉(zhuǎn)化溫度下操作時(shí)可采用超聲處理。在這種情況下，氣體前體可通過超聲處理而被乳化使得液體前體的毫微顆粒分散在懸浮介質(zhì)中(如分散在磷脂懸浮液中并以微毫顆粒形式被封閉在脂質(zhì)體中)。
因此，在制備過程中，貯藏時(shí)或使用前，可選擇本發(fā)明的氣體前體在體內(nèi)生成充氣脂質(zhì)體或設(shè)計(jì)現(xiàn)場(chǎng)制備脂質(zhì)體。已知在液氣體前體中液體的量，則可確定變成氣態(tài)時(shí)脂質(zhì)體的大小。
作為本發(fā)明的另一方面的實(shí)施方案，通過使氣體前體由液態(tài)轉(zhuǎn)化成含水乳液并保持已知顆粒大小，且一旦向氣態(tài)轉(zhuǎn)化完成，則可根據(jù)理想氣體定律估計(jì)微氣泡大小的最高值。理想氣體定律假定氣體立即形成且在新形成的微氣泡中沒有氣體由于擴(kuò)散到液體中而損失(自然界通常是含水的)。因此，從乳液已知的液體體積，的確可預(yù)測(cè)出氣體脂質(zhì)體大小的上限。
根據(jù)本發(fā)明，含所述顆粒大小含類脂氣體前體的液滴的乳液可被制備，使得達(dá)到特定溫度時(shí)，如達(dá)到氣體前體的沸點(diǎn)時(shí)液滴將膨脹形成所述大小的氣體脂質(zhì)體。所述大小是指實(shí)際大小的上限。由于諸如氣體向溶液的擴(kuò)散，氣體在大氣中的損失以及壓力加大等因素的影響，使得理想氣體定律不能完全符合。
理想氣體定律以及由液態(tài)向氣態(tài)轉(zhuǎn)化時(shí)增加的氣體體積的計(jì)算方程如下理想氣體定律PV＝nRT其中P＝壓力/大氣壓V＝體積/升n＝氣體摩爾數(shù)T＝溫度/KR＝理想氣體常數(shù)＝22.4L大氣壓·度-1·摩爾-1
根據(jù)液體乳液中液體體積，密度和溫度，液體前體的數(shù)量(如摩爾數(shù))以及液體前體的體積氣體體積，可以推測(cè)計(jì)算出來，即當(dāng)前體轉(zhuǎn)化成氣體時(shí)所膨脹成的脂質(zhì)體的體積也可以已知了，假定立即膨脹成氣體脂質(zhì)體并忽略膨脹過程中擴(kuò)散，則計(jì)算出的體積將反映氣體脂質(zhì)體的大小的上限。
因此，前體液滴靠在乳液液體狀態(tài)中的前體的穩(wěn)定性而成為球形，前體液滴的體積由以下公式求得體積(球)＝4/3πr3其中，r＝球半徑因此，一旦該體積得知，并已知在所需溫度下液體的濃度，則液滴中氣體前體的液體數(shù)量可以求得。更準(zhǔn)確地說，可以應(yīng)用以下公式V氣體＝4/3π(r氣體)3根據(jù)理想氣體定律，PV＝nRT替換得，V氣體＝nRT/P氣體或，(A)n＝4/3[π(r氣體)3]P/RT數(shù)量n＝4/3[π(r氣體)3]P/RT*MWn轉(zhuǎn)化回液體體積(B)V液＝[4/3[π(r氣體)3]P/RT]*MWn/D]其中D＝前體密度求液體液滴的直徑，(C)直徑/2＝[3/4π[4/3[π(r氣體)3]P/RT]*MWn/D]1/3推導(dǎo)出直徑＝2[(r氣體)3]P/RT]*MWn/D]]1/3為更進(jìn)一步體現(xiàn)所述發(fā)明，根據(jù)其體積和特定半徑，適當(dāng)大小的濾器能使氣體前體液滴形成適當(dāng)直徑的球。
一個(gè)代表性的氣體前體可用來形成確定大小的微球體，如10微米直徑。本例中，由于是在人體血流中形成的，所以典型的溫度是37℃或310°K。在一個(gè)大氣壓下用公式(A)，7.54×10-17摩爾的氣體前體需用來形成一個(gè)10微米直徑微球體的體積。
用上述計(jì)算出的氣體前體的數(shù)量，并使用1—氟丁烷，其分子量為76.11，沸點(diǎn)為32.5℃，密度為20℃下6.7789克/毫升，可進(jìn)一步計(jì)算出5.74×10-15克的該前體需用來形成一個(gè)10微米的微球體。根據(jù)濃度和公式(B)可進(jìn)一步推斷，8.47×10-16毫升的液體前體需用來形成一個(gè)具有10微米上限的微球體。
最后，運(yùn)用公式(C)，需要生成一個(gè)具有0.0272微米半徑或0.0544直徑的類脂滴的乳液用來形成具有10微米上限的氣體前體充成的微球體。
使用適當(dāng)大小的濾器可方便地生成具有這種大小的乳液，此外，當(dāng)濾器的大小是以來形成確定大小的氣體前體液滴時(shí)，該大小也足以濾除任何可能的細(xì)菌污染，所以可用來作為無菌過濾。
本發(fā)明的此實(shí)施方案可運(yùn)用于所有溫度激活的氣體前體。事實(shí)上，溶劑系統(tǒng)的冰點(diǎn)降低允許氣體前體在0℃以下進(jìn)行液體到氣體的相變，溶劑系統(tǒng)可被選用來提供一種氣體前體懸浮的介質(zhì)。例如，20％的丙二醇溶于緩沖鹽水中表現(xiàn)出的冰點(diǎn)比水本身的冰點(diǎn)有很大的降低，通過增加的丙二醇的量或加入諸如氯化鈉的物質(zhì)可進(jìn)一步降低冰點(diǎn)。
也可以用物理的方法來選擇適當(dāng)?shù)娜軇w系。當(dāng)物質(zhì)，固體或液體，這里稱作溶質(zhì)，溶解在溶劑中，如水緩沖液，冰點(diǎn)的降低程度依賴于溶液的組成。所以根據(jù)Wall的定義，冰點(diǎn)的降低可表述為InXa＝In(1—Xb)＝ΔHfus/R(1/T0—1/T)其中Xa＝溶劑的摩爾數(shù)Xb＝溶質(zhì)的摩爾數(shù)ΔHfus＝溶劑的熔化熱T0＝正常溶劑的冰點(diǎn)正常溶劑的冰點(diǎn)可產(chǎn)生。如果Xb小于Xa，則上述公式須改寫Xb＝ΔHfus/R[T＝T0/T0T]≈ΔHfusΔT/RT02上述公式假設(shè)溫度改變?chǔ)相對(duì)于T2是小的上述公式在假設(shè)溶質(zhì)的濃度以每千克溶劑摩爾數(shù)時(shí)可表達(dá)為重量摩爾濃度m。所以Xb＝m/[m＋1000/ma]≈mMa/1000其中Ma＝溶劑的分子量
m＝溶質(zhì)的每1000克摩爾數(shù)的重量摩爾濃度。
因此，替換Xb系數(shù)ΔT＝[MaRT02/1000ΔHfus]m或ΔT＝Kfn，其中Kf＝MaRT02/1000ΔHfusKf是摩爾的冰點(diǎn)等于在一個(gè)大氣壓下水的每單位摩爾的濃度1.86度。上述公式可運(yùn)用于準(zhǔn)確確定所述本發(fā)明中填充氣體前體的微球體溶液的摩爾冰點(diǎn)。
因此，可運(yùn)用上述公式估計(jì)冰點(diǎn)的降低以及確定適當(dāng)?shù)囊后w或固體溶質(zhì)濃度來降低溶劑的冰點(diǎn)至適當(dāng)?shù)闹怠?br> 準(zhǔn)備活化氣體前體填充脂質(zhì)體的溫度的方法包括渦旋本發(fā)明的充氣體前體脂質(zhì)體的含水懸浮液，這一方法的變化包括任意地加熱氣體前體和類脂的含水懸浮液，任意地給懸浮液的容器中通氣，任意地振蕩或使得氣體前體脂質(zhì)體同時(shí)形成并冷卻充氣體前體脂質(zhì)體懸浮液，可任意地加入高壓滅菌作為第一步驟(在約100℃至約130℃溫度下)，作為過濾取代了高壓滅菌的需要；任意地通過約0.22μm的濾器壓出氣體前體的含水懸浮液和類脂，過濾可在體內(nèi)施用所得脂質(zhì)體時(shí)進(jìn)行，這時(shí)所用的濾器在約0.22μm大??；微乳化法是指通過振蕩或渦旋轉(zhuǎn)乳化本發(fā)明充氣體前體脂質(zhì)體的含水懸浮液，并于患者給藥前加熱生成微球體；以及通過加熱，和/或振蕩在類脂懸浮液中形成氣體前體，這里密度較小的充氣體前體微球體通過膨脹浮到溶液的上面并取代了容器中其它的微球體，且使容器釋放出空氣。
在應(yīng)用振蕩氣體滴注之前，采用冷凍干燥除去類脂中的水和有機(jī)物?？刹捎酶稍铩?dú)怏w滴注法從脂質(zhì)體中除去水。通過溫?zé)岷笤诟稍镏|(zhì)體(即預(yù)先干燥)中預(yù)先封入氣體前體，可使得氣體前體膨脹而充滿脂質(zhì)體。在將其置入真空后，氣體前體也可用于填充干燥脂質(zhì)體由于干燥脂質(zhì)體是在低于凝膠態(tài)向液晶態(tài)的轉(zhuǎn)化溫度之下保存的，可以氣態(tài)氣體前體緩慢填充干燥室，例如，在3℃(全氟丁烷的沸點(diǎn))和40℃(類脂的相轉(zhuǎn)移溫度)之間用全氟丁烷填充由二棕櫚酰磷酰膽堿(DPPC)組成的干燥脂質(zhì)體。此時(shí)，在約4℃到約5℃間填充類脂體是優(yōu)選的。
充氣體前體微球體可與臨床技術(shù)手段如超聲波，微波輻射或電磁能結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)前體由液體向氣體的轉(zhuǎn)變，從而體內(nèi)調(diào)節(jié)定位的藥物傳遞。通過選擇沸點(diǎn)超過37℃的氣體前體，可形成具有長(zhǎng)血中半衰期的為穩(wěn)定毫微顆粒的充氣體前體微球體，或者，將其定位于預(yù)作用組織。然后，所需的超聲波，微波或電磁能集中作用在靶組織上并使得氣體前體轉(zhuǎn)化成氣體。在這個(gè)過程中，隨著微球體在體內(nèi)膨脹體積超過一倍，加合在氣體毫微顆粒的涂布或穩(wěn)定化乳液中的藥物和生物活性物質(zhì)被釋放出來。適當(dāng)?shù)臍怏w前體的一個(gè)好的實(shí)例為2—甲基—2—丁烯，其沸點(diǎn)為38.6℃。另外，這些氣體前體在溶解更加親水的藥物方面是特別有效的，例如蒽環(huán)類抗菌素，它們?cè)谒苿┲惺呛茈y溶解的。
正如本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所認(rèn)識(shí)到的那樣，可利用微乳化法，例如從溫度激活的氣體前體得到的充氣脂質(zhì)體的穩(wěn)定化作用，生產(chǎn)大量穩(wěn)定性提高的氣體微球體產(chǎn)品。
通過選擇適當(dāng)?shù)娜軇w系和氣體前體以及穩(wěn)定劑，可以得到比以前產(chǎn)品有改善的微球體產(chǎn)品，可選擇溶劑體系為氣體前體懸浮液提供配體介質(zhì)。實(shí)例之一，混入緩沖鹽水的20％丙二醇表現(xiàn)出的冰點(diǎn)比水本身的冰點(diǎn)有很大降低。通過增加丙二醇的量或加入諸如氯化鈉的物質(zhì)，可進(jìn)一步降低冰點(diǎn)。溶劑體系冰點(diǎn)降低的重要性在于使得我們可以應(yīng)用在0℃以下發(fā)生氣態(tài)向液態(tài)轉(zhuǎn)化的氣體前體。
應(yīng)用這些氣體前體的一個(gè)另外的優(yōu)點(diǎn)在于它們?cè)隗w內(nèi)比非前體氣體如空氣和氮?dú)夥€(wěn)定，這是因?yàn)橛汕绑w產(chǎn)生的氣體在含水介質(zhì)中通常比空氣或氮?dú)獠灰讛U(kuò)散和溶解，而所得的對(duì)比試劑通常比傳統(tǒng)的氣體或非前體對(duì)比試劑穩(wěn)定。
本發(fā)明可用由溫度激化的氣體前體。表I中列出了在接近正常體溫(37℃)時(shí)發(fā)生液態(tài)向氣態(tài)相轉(zhuǎn)化的氣體前體的實(shí)例以及形成大小為10微米的微球體所需的乳化液滴的大小。該表是由可生成具有所述大小的溫度激活的含氣體前體脂質(zhì)體的氣體前體組成的。列此表并非以任何方式限制本發(fā)明，而只是指出本發(fā)明可能的氣體前體。
表I氣體前體的物理特性以及可形成10μm微球體的乳化液滴的直徑
來源Chemical Rubber Company Handbook of Chem-istry and Physics Robert C.West and David R.Lide，eds.CRC Press，Inc.Boca Raton，F(xiàn)lorida(1989—1990)。
無論如何，氣體前體的實(shí)例并不限于表I。實(shí)際上，在針對(duì)大量不同的應(yīng)用時(shí)幾乎可以使用任何液體，只要它們處在適當(dāng)?shù)幕罨瘻囟葧r(shí)能夠發(fā)生向氣態(tài)的相轉(zhuǎn)移?？捎玫臍怏w前體實(shí)例包括下述，但絕不局限于這些；六氟丙酮；異丙基乙炔；丙二烯；四氟代丙二烯；三氟化硼；1，2—丁二烯；1，3—丁二烯；1，3—丁二烯；1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯；2—甲基—1，3—丁二烯；六氟代1，3—丁二烯；丁二炔；1—氟—丁烷；2—甲基丁烷；十氟代丁烷；1—丁烯；2—丁烯；2—甲基—1—丁烯；3—甲基—1—丁烯；全氟代—1—丁烯；全氟代—1—丁烯；全氟代—2—丁烯；1，4—苯基—3—丁烯—2—酮；2—甲基—1—丁烯—3—炔；硝酸丁酯；1—丁炔；2—丁炔；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔；3—甲基—1—丁炔；全氟代—2—丁炔；2—溴丁醛；羰基硫化物；丁烯腈；環(huán)丁烷；甲基環(huán)丁烷；八氟環(huán)丁烷；全氟環(huán)丁烯；3—氯環(huán)戊烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊烷；全氟己烷；環(huán)丙烷；1，2—二甲基環(huán)丙烷；1，1—二甲基環(huán)丙烷；1，2—二甲基環(huán)丙烷；乙基環(huán)丙烷；甲基環(huán)丙烷；聯(lián)乙炔；3—乙基—3—甲基二吖丙啶；1，1，1—三氟重氮乙烷；二甲胺；六氟代二甲胺；二甲基乙基胺；二(二甲膦)胺；2，3—二甲基降冰片烷；全氟代二甲基胺；二甲基氧氯化物；1，3—二氧戊環(huán)—2—酮；全氟化碳如但并不局限于此4—甲基—1，1，1，2—四氟代乙烷；但并不局限于此；1，1，1—三氟代乙烷；1，1，2，2—四氟代乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯乙烷；1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，3—五氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；氯乙烷；氯代五氟乙烷；二氯三氟乙烷；氟乙烷；六氟乙烷；硝基—五氟乙烷；亞硝基五氟乙烷；全氟代乙烷；全氟代乙胺；乙基乙烯基醚；1，1—二氯乙烯；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；甲烷；三氟化甲磺酰氯；三氟化甲磺酰氟；三氟化(五氟化硫代)甲烷；溴化二氟化亞硝基甲烷；溴化氟化甲烷；三氟化溴化甲烷；硝基二氟化氯化甲烷；二硝基氯化甲烷；氟化氯甲烷；三氟化氯化甲烷；二氟化氯化甲烷；二氟二溴甲烷；二氟二氯甲烷；氟化二氯化甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；二硅烷醇甲烷；氟化甲烷；碘化甲烷；三氟化碘化甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亞硝基甲烷；四氟甲烷；氟化三氯甲烷；三氟甲烷；三氟化甲亞硫酰氯；2—甲基丁烷；甲醚；甲基異丙基醚；乳酸甲酯；亞硝酸甲酯；甲基硫化物；甲基乙烯基醚；氖；新戊烷；氮?dú)?N2)；一氧化二氮；1，2，3—十九碳烷三—羰酸—2—羥基三甲基酯；1—十九碳烯—3—炔；氧氣(O2)；1，4—戊二烯；正戊烷；全氟戊烷；4—氨基—4—甲基—2—戊酮；1—戊烯(順)；2—戊烯(反)；3—溴代—1—戊烯；全氟化1—戊烯；四氯代鄰苯二甲酸；2，3，6—三甲基哌啶；丙烷；1，1，1，2，2，3—六氟代丙烷；1，2—環(huán)氧丙烷；2，2—二氟丙烷；2—氨基丙烷；2—氯丙烷；1—硝基七氟丙烷；1—亞硝基氟代丙烷；全氟丙烷；丙烯；2，3—二氯—1，1，1，2，3，3—六氟丙烷；1—氯丙烯；氯代丙烯(反)；2—氯代丙烯；3—氟代丙烯；全氟代丙烯；丙炔；3，3，3—三氟代丙炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫(S2F10)；2，4—二氨基甲苯；三氟乙腈；三氟甲基過氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化鎢；乙烯基乙炔；乙烯基醚；氬氣；氮?dú)?；空氣和其它環(huán)境氣體。
本發(fā)明優(yōu)選的氣體全氟化碳為氟氣，全氟甲烷，全氟乙烷；全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷；更優(yōu)選的為全氟乙烷，全氟戊烷，全氟丙烷和全氟丁烷；最優(yōu)選的為全氟戊烷，全氟丙烷全氟丁烷它們作為惰性較大的全氟化氣體且毒性較小。
上述的氣體在體內(nèi)比非前體氣體如空氣和氮?dú)夥€(wěn)定，這是因?yàn)閺臍怏w前體得到的氣體在含水介質(zhì)中比空氣或氮?dú)飧灰讛U(kuò)散和溶解，因此所得的治療劑傳遞系統(tǒng)通常比常規(guī)的氣體或非前體基對(duì)比試劑更加穩(wěn)定。
這里所述″充氣的″是指具有內(nèi)腔的微球體，該內(nèi)腔至少有10％氣體，優(yōu)選至少有約25％氣體；較優(yōu)選有至少約50％氣體，更優(yōu)選至少有約75％氣體，最優(yōu)選至少有約90％氣體。本專業(yè)人員在掌握了本申請(qǐng)內(nèi)容之后應(yīng)當(dāng)理解也可以使用氣體前體，隨后活化形成氣體。
各種生物可容性氣體均可用于本發(fā)明的充氣微球體內(nèi)。這類氣體包括空氣氫氣，氮?dú)?，二氧化碳，氧氣，氬氣，氟，氖氣，氖氣，氦氣，或任何所有這些氣體的組合。其它適宜氣體對(duì)于掌握了本申請(qǐng)內(nèi)容的專業(yè)人員而言是顯而易見的。
本發(fā)明的微球體優(yōu)選由不透性材料組成。不透性材料是指在典型的貯藏條件下或在超聲波誘發(fā)釋放發(fā)生之前的使用過程中不允許基本量微球囊內(nèi)含物滲出的材料。典型的貯藏條件例如為4℃維持48小時(shí)未脫氣的0.9NaCl水溶性溶液。所用的與不透性有關(guān)的術(shù)語″基本量″被定義為大于約50％內(nèi)含物，內(nèi)含物既包括氣體前體也包括治療劑。貯藏期間優(yōu)選不超過約25％的氣體，氣體前體和治療劑被釋放，更優(yōu)選不超過10％的氣體，氣體前體和治療劑被釋放，最優(yōu)選不超過約1％的氣體，氣體前體和治療劑被釋放。貯藏溫度優(yōu)選為低于形成微球體的材料的相變溫度和低于氣體前體活化溫度。但是氣體前體也在制備和貯藏過程中活化。
至少已部分發(fā)現(xiàn)充氣脂質(zhì)體的氣體不透性與其凝膠態(tài)至液晶態(tài)的相變溫度有關(guān)?！迥z態(tài)至液晶態(tài)的相變溫度″是指類脂雙層從凝膠態(tài)轉(zhuǎn)變成液晶態(tài)的溫度。例可參見Chapman等，J Biol，Chem.1974，249，2512—2521。一般認(rèn)為凝膠態(tài)至液晶態(tài)的相變溫度越高，在給定溫度下則脂質(zhì)體的氣體不透性越好。參見下表II和Derek Marsh，CRCHandbook of Lipid Bilayers(CRC Press，Boca Raton，F(xiàn)L1990)，P139，給出了飽和二?；鵖n—甘油基—3—膽堿磷酸的主鏈熔點(diǎn)轉(zhuǎn)變。然而，還值得注意的是從由具有較低凝膠態(tài)至液晶態(tài)相變溫度的類脂組成的充氣體前體脂質(zhì)體中釋出治療化合物一般只用較低能量。
當(dāng)所用類脂的凝膠態(tài)向液晶態(tài)的相轉(zhuǎn)化溫度高于室溫度時(shí)，可調(diào)整容器的溫度，例如，提供冷卻機(jī)制以冷卻含類脂溶液的容器。
因?yàn)楦鞣N氣體前體(如全氟丁烷)比其它氣體，如空氣，更不易溶解和擴(kuò)散，當(dāng)被封閉在脂質(zhì)體中時(shí)它們往往更加穩(wěn)定，即使脂質(zhì)體是由液晶態(tài)的類脂組成的情況下也是這樣。如由液晶態(tài)類脂如雞旦磷脂酰膽堿構(gòu)成的小的脂質(zhì)體可用于封閉全氟代丁烷的毫微顆粒。例如，直徑在約30nm至約50nm的類脂載體可用來封閉平均直徑約25nm的全氟代丁烷的毫微顆粒。溫度活化轉(zhuǎn)化之后，充前體脂質(zhì)體將產(chǎn)生直徑約10微米的微球體。在這種情況下，類脂通過小的類脂體限定了微球體的大小，類脂也可穩(wěn)定所得的微球體。在這種情況下，在生成封閉前體的脂質(zhì)體方面，某些技術(shù)手段如微乳化仍用是優(yōu)選的。在封閉有氣體前體的小脂質(zhì)體乳液的制備方面，微觀強(qiáng)化流態(tài)(Microfiudics，Newton，MA)是十分有用的。
表II飽二酰基—Sn—甘油基—膽堿磷酸主鏈從凝膠態(tài)向液晶態(tài)轉(zhuǎn)化的相轉(zhuǎn)化溫度
各種類脂的凝膠態(tài)到液晶態(tài)的相變溫度對(duì)本專業(yè)人員而言顯然是顯而易見的，并且這些溫度如Gregoriadis編輯的Liposone Technology，Vo1.I，1—18(CPC Press，1984)中被描述。
在某些優(yōu)選方案中，形成微球體的材料的相變溫度大于欲給藥病人的體內(nèi)溫度。例如，相變溫度大于37℃的微球體優(yōu)選用于人類給用。一般而言，優(yōu)選相變溫度大于約20℃的微球體。
在優(yōu)選的方案中，本發(fā)明微球體是穩(wěn)定的，穩(wěn)定性被定義為從微球體形成至施加超聲波作用的時(shí)間內(nèi)的抗破裂性。根據(jù)穩(wěn)定性可選擇如類脂類材料制造微球體。例如，由DSPC(二硬脂酰磷脂酰膽堿)組成的充氣體前體脂質(zhì)體比由DPPC(二棕櫚酰磷脂酰膽堿)組成的充氣體前體脂質(zhì)體更加穩(wěn)定，并且這兩種脂質(zhì)體也比卵磷脂酯酰膽堿(EPC)組成的充氣體前體脂質(zhì)體更穩(wěn)定。優(yōu)選從形成至施加超聲波作用，這段時(shí)間內(nèi)微球體的破裂不超過50％，較優(yōu)選微球體的破裂不超過約25％，更優(yōu)選微球體的破裂不超過10％，最優(yōu)選不超過1％微球體。
此外，已發(fā)現(xiàn)可采用與聚乙二醇聚合物共價(jià)連接的類脂穩(wěn)定本發(fā)明的充氣體前體脂質(zhì)體，這一共價(jià)連接的類脂通常被稱為PEG化的類脂。已發(fā)現(xiàn)向任何脂質(zhì)體膜內(nèi)加入至少少量帶負(fù)電荷的類脂，或帶凈負(fù)電荷的類脂，盡管這是非必要的但有助于得到無相互融合破裂傾向的脂質(zhì)體。″至少少量″是指總類脂量的約1到10摩爾百分比。適宜的負(fù)電脂質(zhì)對(duì)本專業(yè)人員是十分顯然的，包括例如磷酯酰絲氨酸和脂肪酸。具有最優(yōu)選的施加共振頻率超聲波作用時(shí)的破裂能力，回聲能力和穩(wěn)定性的脂質(zhì)體是由二棕櫚酰磷脂酰膽堿制成的脂質(zhì)體。
進(jìn)一步，本發(fā)明微球體最好在脈管系統(tǒng)內(nèi)要足夠穩(wěn)定以便它們經(jīng)受起再循環(huán)。充氣體前體微球體可被涂層以使網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吸入降至最低程度。有用的涂漬物包括例如神經(jīng)節(jié)苷脂，葡糖醛酸酯，半乳糖酸酯，guluronate，聚乙烯醇，葡聚糖，淀粉，磷酸化和磺酸化的單—，二—，三—，寡—和多糖類以及清蛋白。出于如避免被免疫系統(tǒng)識(shí)別的目的，也可將微球體涂層。
在優(yōu)選方案中，由于微球體的不透性，在它們到達(dá)需要治療患者的內(nèi)部病區(qū)和施加超聲波作用之前，至少約50％，優(yōu)選至少約75％，較優(yōu)選至少約90％且最優(yōu)選約100％的微球體內(nèi)治療藥物和氣體內(nèi)含物仍保留在微球體內(nèi)。
另外，用于構(gòu)成微球體的物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是生物相容的，生物相容物質(zhì)被定義為在所給用的量下它們對(duì)病人是無毒的，優(yōu)選不會(huì)產(chǎn)生疾病，最優(yōu)選是無害的。
用于構(gòu)成微球體的物質(zhì)還優(yōu)選為撓性的。在本申請(qǐng)中充氣體前體微球體的撓性被定義為結(jié)構(gòu)改變其形狀以通過大小小于微球體的孔洞的能力。由于類脂膜的撓性，它們有能力在壓力作用下改變直徑和硬度，因而，可非進(jìn)入性的通過反射的超聲波信號(hào)測(cè)量體內(nèi)的壓力。
由于脂質(zhì)體非常適合用于截留氣體，因此它們構(gòu)成了本發(fā)明的優(yōu)選方案。另外，由于它們的生物相容性以及容易接納親脂性治療化合物的能力，故優(yōu)選充氣體前體微球體，其中所述治療化合物在脂質(zhì)體破裂之后很容易穿過細(xì)胞膜。掌握了本申請(qǐng)內(nèi)容的專業(yè)技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到根據(jù)預(yù)期用途可選擇特殊的類脂。
當(dāng)由水合多層類脂懸浮液而不是由大的單層膜載體或干燥類脂制備時(shí)，從氣體前體得到的充氣類脂球的產(chǎn)率會(huì)提高。由類脂懸浮液制備的充氣微球體在其最終產(chǎn)品中未水合類脂的量減少了。未水合類脂是以大小不同的不定形團(tuán)出現(xiàn)的并且不是所期望的。多層類脂懸浮液可以高壓滅菌作為最終的滅菌步驟而對(duì)充氣體前體微球體的制備沒有損害。高壓滅菌不改變類脂顆粒的大小且不減弱類脂懸浮液封閉氣體前體或氣體的能力?？捎妙愔瑧腋∫禾畛錈o菌瓶或注射器，然后在現(xiàn)場(chǎng)通過高壓滅菌消毒。可在立即使用之前，通過手工攪拌在無菌容器中現(xiàn)場(chǎng)高壓滅菌之后將氣體注入類脂懸浮液中，例如通過旋轉(zhuǎn)，高壓密封法或其它機(jī)械攪拌，如振動(dòng)床。
假如微球體的循環(huán)半衰期足夠大，則當(dāng)微球體進(jìn)入人體內(nèi)時(shí)一般會(huì)通過靶組織。通過使聲波誘導(dǎo)的破裂聚集在所選擇的欲處理組織上，治療藥物將在靶組織上局部釋放，作為靶向性的另一幫助，也可將抗體，碳水化合物，肽，糖肽，糖脂，凝集素，復(fù)合糖及合成和天然聚合物摻合到微球體表面內(nèi)，聚合物但不局限于聚乙二醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯基醇，它們可通過烷基化，?；瘬胶系轿⑶蝮w的表面上。磷酯如二油?；字Ｒ掖及?DOPE)，二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)或二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)的甾醇基或其衍生的端基也可摻合到微球體的表面之內(nèi)。
當(dāng)類脂物質(zhì)用于制備微球體時(shí)，例如，形成脂質(zhì)體各種類脂均可在微球體的建造中應(yīng)用?？稍谥|(zhì)體制備中應(yīng)用的物質(zhì)包括任何本專業(yè)人員已知的適合脂質(zhì)體制備的物質(zhì)或它們的組合。所用的類脂可以是天然的或合成的。選擇特定的類脂以便優(yōu)選適合血清最好穩(wěn)定性和理想性質(zhì)如短血漿半衰期與長(zhǎng)血漿半衰期的比值。
充氣脂質(zhì)體中的類脂可以是單層雙層型或多層雙層型，優(yōu)選多層型。
用于形成脂質(zhì)體微球體的類脂包括但不局限于類脂如脂肪酸，溶血類脂類，具有飽和和不飽和類脂的磷脂酰膽堿，它包括二油酰磷脂酰膽堿；二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿；二(十五烷酰)磷脂酰膽堿；二月桂酰磷脂膽堿；磷脂酰乙醇胺類如二油酰磷脂酰乙醇胺；磷脂酰絲氨酸，磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；神經(jīng)鞘脂類如神經(jīng)鞘磷脂；糖基類脂如神經(jīng)節(jié)苷脂GMl和GM2；糖脂；硫苷脂；糖神經(jīng)鞘脂；磷脂酸；棕櫚酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；載有聚合物的類脂，所述聚合物如聚乙二醇，幾丁質(zhì)，透明質(zhì)酸或聚乙烯吡咯烷酮；載有磺化的單—，二—，寡—或聚糖的類脂；膽甾醇；膽甾醇硫酸酯以及膽甾醇半琥珀酸酯；維生素E半琥珀酸酯，含有通過醚和酯連結(jié)的脂肪酸的類脂，聚合類脂，二乙?；姿狨ィ送榘?stearylamine)，心磷脂，含有鏈長(zhǎng)為6—8個(gè)碳原子的短鏈脂肪酸的磷脂，具有不對(duì)稱酰基鏈的合成磷脂(如一條為6碳原子?；湺硪粭l為12碳原子?；湹慕M成磷脂)，6—(5—膽甾烯—3β—基氧基)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖二甘油酯，6—(5—膽甾烯—3β—基氧基)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—膽甾烯—3β—基氧基)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7’—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)—十八烷酸；N—[12—(((7’—二乙基氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八?；鵠—2—氨基棕櫚酸；4’—三甲銨基丁酸膽甾烯酯；N—琥珀酰二油酰磷脂酰乙醇胺；1，2—二油?！猄n—甘油；1，2—二棕櫚?！猄n—3—琥珀酰甘油；1，3—二棕櫚?！?—琥珀酰甘油；1—十六烷基—2—棕櫚酰甘油磷酰乙醇胺以及棕櫚酰高半胱氨酸，和/或它們的結(jié)合。脂質(zhì)體可以單層或雙層形式生成，可有或沒有涂層。
具有親水聚合物如聚乙二醇(PEG)的類脂，PEG包括但不限于PEG2000MW，PEG5000MW和PEG8000MW，在改善充氣體前體類脂體的穩(wěn)定性和大小分布方面是特別有用的。不同摩爾比的PEG化的類脂如具有PEG5000的二棕櫚酰磷酯酰乙醇胺，也是有用的；8摩爾百分比DPPE是優(yōu)選的。對(duì)封閉所體前體特別有用的一個(gè)優(yōu)選的產(chǎn)品含有83摩爾百分比DPPC，8摩爾百分比的DPPE—PEG5000MW和5摩爾百分比的二棕櫚酰磷脂酸。
另外，用于生成混合體系的化合物的實(shí)例包括(但絕不僅限于)月桂基三甲基溴化銨(十二烷基一)，鯨蠟基三甲基溴化銨(十六烷基—)，肉豆蔻基三甲基溴化銨(十四烷基—)，烷基二甲基芐基氯化銨(烷基＝C12，C14，C16)，芐基二甲基十二烷基溴/氯化銨，芐基二甲基十六烷基溴/氯化銨，芐基二甲基十四烷基溴/氯化銨，鯨蠟基二甲基乙基溴/氯化銨，或鯨蠟基溴/氯化吡啶。其它全氟化碳如五氟十八基碘，全氟辛基溴(PEOB)，全氟萘烷，全氟十二氫化萘，全氟辛基碘，全氟三丙基胺，和全氟三丁基胺?？梢杂矛F(xiàn)有技術(shù)中已知方法和美國(guó)專利4,865,836所述將全氟化碳夾在脂質(zhì)體或穩(wěn)定于乳液中，在懸浮液體積沒有明顯改變的情況下上述脂類懸浮液的實(shí)例也可以通過高壓釜滅菌，將本發(fā)明優(yōu)選產(chǎn)品混入作為混合溶劑體系的脂類，該本系為正常鹽水∶丙三醇∶丙二醇為8∶1∶1或9∶1∶1比例。
如果需要，陰離子或陽(yáng)離子脂類都可以用于連結(jié)陰離子或陽(yáng)離子藥物。陽(yáng)離子脂類可以用于將DNA和RNA類似物連結(jié)到填充氣體前體的微球體表面內(nèi)或表面上。各種陽(yáng)離子脂類如DOTM A，N—[1—(2，3—二油酰氧基)丙基]—N，N，N—三甲基氯化銨；DOTAP，1，2—二油酰氧基—3—(三甲基氨)丙烷；和DOTB，1，2—二油酰—3—(4′—三甲基氨)丁?；猻n丙三醇均可以使用。總之，在脂質(zhì)體中陽(yáng)離子脂類與非陽(yáng)離子脂類的摩爾數(shù)之比可以是，如比，1∶1000，1∶100，優(yōu)選在2∶1到1∶10之間，更優(yōu)選的是1∶1到1∶2.5之間，最優(yōu)選的是1∶1(陽(yáng)離子脂類與非陽(yáng)離子脂類摩爾量之比，例如，DPPC)。當(dāng)陽(yáng)離子脂類用于構(gòu)成微球體時(shí)，大量脂類可以由非陽(yáng)離子脂類組成。該非陽(yáng)離子脂類優(yōu)選二棕櫚酰卵磷脂，二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺或二油酰膦脂酰乙醇胺。代替上述陽(yáng)離子脂類，帶有陽(yáng)離子聚合物如多熔素或聚精氨酸的脂類也可以用于構(gòu)成微球體以及給微球體外部提供治療的束縛負(fù)電荷如遺傳材料。以陰離子脂類為例，它可以(但不限于)由十二烷基硫酸鈉，硬脂酸，棕櫚酸，磷脂酸和膽甾醇硫酸酯。
其它有用的脂類或其結(jié)合劑對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，它保持本發(fā)明精神并且屬于本發(fā)明范圍。例如，對(duì)于體內(nèi)靶向性可使用含烴脂類，如美國(guó)專利4,310,505所述，該公開全文在此引作參考。
最優(yōu)選的脂類為磷脂，優(yōu)選DPPC和DSPC，最優(yōu)選DPPC。
可以用于產(chǎn)生填充氣體前體的微球體的飽和和不飽和脂肪酸優(yōu)選包括(但不限于)具有12—22個(gè)直鏈或支鏈形式的碳原子的分子。也可以用由類異戊二烯單元組成和/或含異戊二烯基的烴基。可用的飽和脂肪酸的實(shí)例包括(但不限于)月桂酸，肉豆蔻酸，棕櫚酸和硬脂酸?？捎玫牟伙柡椭舅岬膶?shí)例包括(但不限于)異月桂酸，異肉豆蔻酸，異棕櫚酸，異硬脂酸，類異戊二烯和含異戊二烯基的基團(tuán)。
通常，用于制成含治療劑傳輸系統(tǒng)的氣體前體包括一種或多種乳化或穩(wěn)定劑。這些乳化/穩(wěn)定劑的目的有兩個(gè)。一是這些制劑可以幫助維持填充氣體前體的微球體的大小。正如上面所說，這些微球體的大小通常會(huì)影響最終充氣微球體的大小。二是乳化劑和穩(wěn)定劑可以用來包裹或穩(wěn)定從前體得到的微球體。含對(duì)比劑微球體的穩(wěn)定化對(duì)使自然條件下對(duì)比作用最大化是顯著的。雖然微球體的穩(wěn)定化是優(yōu)選的，但并非絕對(duì)需要的，因?yàn)閺臍怏w前體得到的充氣微球體比空氣穩(wěn)定，所以它們?nèi)员挥脕碓鰪?qiáng)對(duì)比，例如，它們通過繼周邊靜脈注射之后的肺循環(huán)，即使沒有特別被一個(gè)或多個(gè)包衣或乳化劑穩(wěn)定。然而，優(yōu)選一種或多種包衣或穩(wěn)定劑作為靈活的穩(wěn)定材料。由于這些穩(wěn)定化包衣更脆，壓力改變時(shí)更容易破碎，例如，通過心臟和動(dòng)脈時(shí)，所以由清蛋白或蛋白質(zhì)穩(wěn)定氣體微球體沒有多大效果。由于用這些化合物穩(wěn)定的微球體更靈活而且適于壓力變化，所以用脂族化合物制備的脂質(zhì)體是優(yōu)選的。
類脂或填充氣體前體的脂質(zhì)體的溶液可以，比如，通過添加多種粘度調(diào)節(jié)劑來穩(wěn)定，包括(但不限于)碳水化合物和它們的磷酸和磺酸衍生物聚類醚，優(yōu)選分子量在400—8000之間的；二—和三羥基烷和它們的聚合物，優(yōu)選分子量在800—8000之間的。丙三醇丙二醇，聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷和聚乙烯醇在本發(fā)明中也可以用作穩(wěn)定劑。多孔或半固體粒子如羥基磷灰石，金屬氧化物和凝膠共沉淀物，例如，透明質(zhì)酸和鈣可以用于制成一個(gè)中心或核心以穩(wěn)定氣體前體。當(dāng)然，固體粒子如石灰石，沸石和其它粒子一般被認(rèn)為不適宜用于注射到血管內(nèi)(空間)，然而，它們對(duì)于形成捕獲氣體前體的核心和作為有效的胃腸對(duì)比劑如對(duì)MRI或計(jì)算X線體層照相術(shù)的功能是相當(dāng)有用的。
乳化劑和/或溶解劑也可以與類脂和脂質(zhì)體一起使用。這些制劑包括(但不限于)阿拉伯膠，膽甾醇，二乙醇胺，單硬脂酸甘油酯，羊毛酯醇，卵磷脂，單—和二—甘油酸，單—乙醇胺，油酸，油醇，poloxamer，花生油，棕櫚酸，硬脂酸聚氧乙烯50，聚烴氧基35蓖麻油，聚烴氧基10油醚，聚烴氧基20cetostearyl醚，硬脂酸40聚烴氧基酯，聚山梨酸酯20，聚山梨酸酯40，聚山梨酸酯60，聚山梨酸酯80，丙二醇二乙酸酯，丙二醇單硬脂酸酯，月桂基硫酸鈉，硬脂酸鈉，脫水山梨醇單月桂酸酯，脫水山梨醇單油酸酯，脫水山梨醇單棕櫚酸酯，脫水山梨醇單硬脂酸酯，硬脂酸，三乙醇胺(trolamine)和乳化蠟。所有用全氟脂肪酸作類脂組分的類脂類代替發(fā)現(xiàn)于植物或動(dòng)物原始類脂類的飽和或不飽和烴脂肪酸都可以使用?？梢酝愔蛑|(zhì)體溶液一起使用的懸浮和/或粘度增加劑包括(但不限于)阿拉伯膠，瓊脂，藻酸，單硬脂酸鋁，膨潤(rùn)土，巖漿，carbomer 934P，羥甲基纖維素，鈣和鈉和鈉12，角叉菜膠，纖維素，糊精，明膠，瓜耳樹膠，羥乙基纖維素，羥丙基甲基纖維素，硅酸鋁鎂，甲基纖維素，果膠，聚環(huán)氧乙烷，聚乙烯醇，聚烯吡酮，丙二醇藻酸酯，二氧化硅，藻酸鈉，黃蓍膠和黃原膠。
各種治療劑中的任何一種都可以包封微球體。這里所用的治療劑是指對(duì)患者具有有益效果的制劑。這里所用的術(shù)語治療劑與對(duì)比劑和藥物是同義詞。
可以相信，某些前體的毫微粒和乳液對(duì)局部缺血和病變組織的累積有特效。這些前體可以用來通過超聲波探查局部缺血和病變組織，也可以將藥物傳遞到這些組織。依靠裝有包含氣體前體的乳液或毫微粒的藥物，然后所說藥物可以被傳遞到病變組織。例如，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷，八氟—2—丁烯或六氟丁—1，3—二烯或八氟環(huán)戊烯等乳液(27℃)可用于傳遞藥物如強(qiáng)心苷，血管生成因子和作用于血管的化合物到心肌的局部缺血區(qū)域。類似地，上述前體的乳液也可以用于傳遞反意DNA或化學(xué)治療劑到腫瘤。假定溫度，pH值和氧密度的微小變化對(duì)某些前體的累積，特別是在病變和局部缺血組織的沉積都有影響。這此前體可用作傳播載體或在超聲方法中傳遞藥物。
合適的治療劑包括(但不限于)順磁氣體如大氣，它含有微量氧17，或順磁離子如Mn+2，Gd+2，F(xiàn)e+3，以及超磁粒子(鐵酸鹽，氧化鐵Fe3O4)，并因此可以用作磁響應(yīng)成像(MRI)，不透射線金屬離子如碘，鋇，溴或鳥的磁化率對(duì)比劑，或用作X射線對(duì)比劑，四極矩核子氣體適于用作磁響應(yīng)對(duì)比劑，抗腫瘤劑如鉑化合物(例如，螺鉑，順鉑和碳鉑)，氨甲嘌呤，氟尿嘧啶，亞德里亞霉素，絲裂霉素，柄型菌素，博萊霉素，阿糖胞苷，阿糖腺嘌，呤巰基多熔素，長(zhǎng)春新堿，白血福恩，瘤可寧，米爾法蘭(例如，PAM，L—PAM或苯丙氨酸氮芥)，巰基嘌呤，鄰對(duì)滴滴滴，鹽酸甲基芐肼更生霉素(放線菌素D)，鹽酸柔毛霉素，鹽酸阿霉素，紫杉酚，絲裂霉素，皺褶霉素(光神霉素)，氨基導(dǎo)眠能，雌氮芥磷酸鈉，氟硝丁酰胺，亮丙瑞林乙酸鹽，乙酸孕甾酮，檸檬酸三苯氧胺，睪內(nèi)酯，腈環(huán)氧雄烷，胺苯吖啶(m—MASA)，天冬酰胺酶(L—天冬酰胺酶)，Erwina天冬酰胺酶，鬼臼乙叉甙(VP—16)，干擾素α—2a，干擾素α—2b，鬼臼噻吩甙(VM—26)，硫酸長(zhǎng)春花堿(VLB)，硫酸長(zhǎng)春新堿，爭(zhēng)光霉素，硫酸爭(zhēng)光霉素，氨甲嘌呤，阿霉素，阿拉伯糖苷，羥基脲，甲基芐肼，和氮烯咪胺；有絲分裂抑制劑如鬼臼乙叉甙和長(zhǎng)春花堿，射線藥劑如放射性碘和磷制品；激素如孕激素，雌激素和抗雌激素；抗蠕蟲，抗瘧疾和抗結(jié)結(jié)核藥物；生物制品如免疫血清，抗毒素和抗蛇毒血清；狂犬病預(yù)防制品；菌苗；病毒疫苗；氨基糖苷；呼吸制品如黃嘌呤衍生物茶堿和按茶堿；甲狀腺劑如碘制品和抗甲狀腺劑；心血管制品包括螯合劑和汞利尿劑和強(qiáng)心糖苷；胰高血糖素；血液制品如腸外鐵，氯化血紅素，血卟啉及其衍生物；生物相應(yīng)改良劑如胞壁酰二肽，胞壁酰三肽，微生物細(xì)胞壁成分，淋巴因子(例如，細(xì)菌內(nèi)素素如脂多糖，巨噬細(xì)胞活性因子)，亞單位細(xì)菌(如分支桿菌屬，棒狀桿菌屬)，合成二肽N—乙?；邗；狶—丙氨?；狣—異谷氨酰胺；抗霉菌劑如酮哌惡咪唑，制霉菌素，灰黃霉素，氟胞嘧啶(5—fc)，雙氯苯咪唑，兩性霉素B，蓖麻毒蛋白，環(huán)孢霉素和β—內(nèi)酰胺抗生素(例如，sulfazecin)；激素如生長(zhǎng)激素，黑素細(xì)刺激素，雌二醇，二丙酸氯地米松，倍他米松，乙酸倍他米松和倍他米松磷酸鈉，維他米松(vetamethasone)磷酸二鈉，維他米松磷酸鈉，乙酸可的松，地塞米松，乙酸地塞米松，地塞米松磷酸鈉，9—去氟膚輕松，氧化可的松，乙酸氧化可的松，氫化可的松環(huán)戊丙酸酯，氫化可的松磷酸鈉，氫化可的松琥珀酸鈉，甲基強(qiáng)的松龍，乙酸甲基強(qiáng)的松龍，甲基強(qiáng)的松龍琥珀酸鈉，乙酸對(duì)氟米松，強(qiáng)的松龍，乙酸強(qiáng)的松龍，強(qiáng)的松龍磷酸鈉，強(qiáng)的松龍叔丁乙酯，強(qiáng)的松，去炎松，丙炎松，雙醋去炎松，乙酸丙炎松，乙酸氟氫可的松，催產(chǎn)素，加壓素，和它們的衍生物；維生素如維生素B12neinoic酸，維生素A和衍生物如棕櫚酸維生素A，以及α—生育酚；肽如超氧化錳歧化酶；酶如堿性磷醇酶；抗過敏劑如amelexanox；阻凝劑如苯丙香豆素和肝素；循環(huán)藥物如荼心安；代謝增強(qiáng)劑如谷胱甘肽；抗結(jié)核藥如對(duì)—環(huán)水楊酸，異煙肼，卷曲霉素硫酸環(huán)絲氨酸，乙胺丁醇鹽酸乙硫異煙胺，吡嗪酰胺，利福平和硫酸鏈霉素；抗病毒藥物如無環(huán)鳥苷，金剛烷胺疊氮胸苷(AZT，DDI，膦甲酸，或疊氮胸苷)，三唑核苷和阿糖腺苷一水合物(阿糖腺苷，ara—A)；抗絞痛藥如硫氮卓酮，硝苯吡啶，戊脈安，四硝赤醇，硝異梨醇，硝酸甘油(三硝酸甘油酯)和硝酸戊四醇酯；抗凝藥如苯丙香豆素，肝素；抗生素如氨苯砜，氯霉素，新霉素，頭孢氯，頭孢羥氨芐，頭孢氨芐，頭孢環(huán)己烯紅霉素，氨林可霉素，林可霉素，羥氨芐青霉素，氨芐青霉素，氨芐青霉素碳酯，羧芐青霉素，雙氯青霉素，環(huán)青霉素，pi-cloxacillin，縮酮氨芐青霉素，甲氧苯青霉素，乙氧萘青霉素，苯唑青霉素，青霉素包括青霉素G和青霉素V，羧噻吩青霉素利福平和四環(huán)素；消炎藥如二氟苯水楊酸，異丁苯丙酸(布洛芬)，消炎痛，甲氮滅酸酯，甲滅酸，甲氧萘丙酸，羥基保泰松，保泰松，吡氧噻嗪，蘇靈大，甲苯酰吡酸，阿司匹林和水楊酸酯；抗原生動(dòng)物藥如氯喹，羥基氯喹，甲硝噠唑，奎寧和銻酸葡胺；抗風(fēng)濕藥如青霉胺；麻醉藥如復(fù)方樟腦酊；鴉片制劑如可待因，海洛因，美沙酮，嗎啡和鴉片；強(qiáng)心甙如去乙酰毛花甙C，洋地黃毒甙，異羥洋地黃毒甙(地高辛)，洋地黃甙和洋地黃；神經(jīng)肌肉組斷藥如atracurium mesylate，三乙碘化加拉明，溴化己勿銨，碘甲筒箭毒，溴化雙哌雄雙酯，氯化琥珀膽堿，氯化筒箭毒堿和維庫(kù)溴銨；鎮(zhèn)靜藥(催眠藥)如異戊巴比妥，異戊巴比妥鈉，烯丙異丙巴比妥，仲丁巴比妥鈉，水合氯醛，乙氯戊烯炔醇，炔己蟻胺，鹽酸氟胺安定，導(dǎo)眠能，鹽酸甲氧異丁嗪，甲乙哌啶酮，鹽酸咪唑二氮卓，副醛，戊巴比妥，戊巴比妥鈉，苯巴比妥鈉，司可巴比妥鈉，另丁烯丙巴比妥，羥基安定和三唑苯二氮卓；局部麻醉劑如鹽酸丁哌卡因，鹽酸氯普魯卡因，鹽酸衣鐵卡因，鹽酸利多卡因，鹽酸甲哌卡因，鹽酸普魯卡因和鹽酸丁卡因；全身麻醉劑如達(dá)派啶醇，甲芐咪酯，帶達(dá)哌啶醇的芬太尼檸檬酸酯，鹽酸氯胺酮，甲己炔巴比妥鈉和硫噴妥鈉；以及放射性粒子或離子如鍶，碘化錸和釔。
在某種優(yōu)選條件下，該治療劑是單克隆抗體，如具有與黑瘤抗原連接能力的單克隆抗體。
其它優(yōu)選的治療劑包括基因物質(zhì)如天然的或原始合成的核酸，RNA和DNA，包括重組體RNA和DNA以及反義RNA和DNA。可用的基因特質(zhì)的類型包括，比如，載在表達(dá)矢量如質(zhì)粒，噬菌粒，粘粒，酵母人工染色體(YACs)上的基因，以及缺陷或“援助者”病毒，抗基因核酸，單和雙鏈RNA和DNA以及它們的類似物，如寡脫氧核苷酸硫代磷酸酯和二硫代磷酸酯。另外，基因物質(zhì)例如可以與蛋白質(zhì)或其它聚合物合并。
可以使用的采用本發(fā)明微球體的基因治療劑的實(shí)例包括至少HLA基因治療劑的實(shí)例包括至少HLA基因部分編碼的DNA，至少營(yíng)養(yǎng)不良部分編碼的DNA，至少CFTR部分編碼的DNA，至少IL—2部分編碼的DNA，至少TNF部分編碼的DNA，具有連接至少Ras部分編碼的DNA能力的抗過敏寡核苷酸。
某些蛋白質(zhì)編碼DNA可以用于治療多種不同疾病。例如，腺苷脫氨酶可以用來治療ADA缺乏癥；腫瘤壞死素和/或白細(xì)胞介素—2可用于治療晚期癌癥；HDL受體可用于治療肝??；胸苷激酶可用于治療孵巢癌，腦瘤或HIV傳染；HLA—B7可用于治療惡性黑瘤；內(nèi)白細(xì)胞素—2可用于治療成神經(jīng)細(xì)胞瘤，惡性黑瘤或腎癌；內(nèi)白細(xì)胞素—4可用于治療癌癥；HIV env可用于治療HIV傳染；反義ras/p53可用于治療肺癌；因子VIII可用于治療血友病B。例如，參見Science258，744—746，1992。
如果需要，采用微球體的可用的治療劑不止一種。例如，一個(gè)微球體可含有不止一種治療劑或含不同治療劑的微球體結(jié)合使用。例如，有結(jié)合黑瘤抗原能力的單克隆抗體和至少IL—2部分編碼的寡核苷酸可同時(shí)給藥。這里所用短語“至少…部分”表示不必用寡核苷酸代表的全部基因，只要被代表的基因部分提供對(duì)基因表達(dá)式有效的阻礙。
類似地，藥物前體可以包封入微球體，并包括在術(shù)語治療劑的范圍內(nèi)，如這里所用的。現(xiàn)有技術(shù)中藥物前體是眾所周知的，它們包括非活性藥物前體，當(dāng)置于高溫，代謝酶，所蝕和/或壓力下時(shí)，在氧或其它存在下，或從微球體釋放出來時(shí)，形成活性藥物。這種藥物前體可用本發(fā)明方法活化，采用超聲波將其氣蝕，加熱，加壓和/或從微球體釋放作用在含藥物前體的微球體上。合物的藥物前體對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是明顯的，例如，Sinkula et al.，J.Pharm.Sci.1975，64，181—210上所述，該文獻(xiàn)全文在此引作參考。
例如，藥物前體可包含活性藥物的非活性形式，其中的藥物前體上存在使藥物非活性和/或賦予其溶解性或它性質(zhì)的化學(xué)基團(tuán)。這種形式的藥物前體通常是非活性的，但經(jīng)過加熱，氣蝕，加壓和/或周圍環(huán)境中酶的作用或其它情況，上述化學(xué)基團(tuán)將從藥物前體裂解，產(chǎn)生活性藥物。這樣的藥物前體在現(xiàn)有技術(shù)中已充分描述，而且它們包含很多種與化學(xué)基團(tuán)連接的藥物，連接是通過鍵如短、中或長(zhǎng)鏈脂族碳酸酯，有機(jī)磷酸、焦磷酸、硫酸半酯，酰胺，氨基酸，偶氮鍵，氨基甲酸酯，磷酰胺，葡糖苷酸酯，N—乙?；咸前焙挺隆咸擒?。
帶有母體分子和可逆改性體或鍵的藥物的實(shí)例如下帶有縮酮的鈴蘭毒甙，帶有烷基酯的妥因，帶有甘油或丙氨酸酯的氨甲酸氯酚甘油醚酯，帶有咖啡因復(fù)合物的撲熱息痛，帶有甘油或丙氨酸酯的氨甲酸氯酚甘油醚酯，帶有咖啡因復(fù)合物的撲熱息痛，帶有THAM鹽的乙酰水楊酸，帶有乙酰氨基苯基酯的乙酰水楊酸，帶有硫酸酯的烯丙基嗎啡酮，帶有甲酯的15—甲基前列腺素F2a，帶有聚乙二醇的普魯卡因，帶有烷基酯的紅霉素，帶有烷基酯或磷酸酯的氯林可霉素，帶有甜菜堿鹽的四環(huán)素，頭孢菌素包括帶有環(huán)—取代的酰氧芐基酯的7—酰胺基頭孢菌素，帶有苯基丙酸癸酸酯的諾龍，帶有烯醇醚乙縮醛的雌二醇，帶有乙酸乙酯的甲基強(qiáng)的松龍，帶有正乙?；被咸擒掌咸擒账狨?三甲基甲硅烷基)醚，帶有21—磷酸酯的氫化可的松或強(qiáng)的松龍或地塞米松。
藥物前體也可以設(shè)計(jì)為可逆藥物衍生物并用作改性劑以促進(jìn)藥物傳遞到特定部位組織。影響傳遞到特定部位組織并促進(jìn)治療效果的帶有母體分子和可逆改性體或鍵的藥物包括帶有鹵代烷基亞硝基脲的異氰酸酯，帶有丙酸酯的睪酮，帶有二烷基酯的甲氨嘌呤(3，5′—二氯甲氨嘌呤)，帶有5′—?；锏陌奏ぐ⑻擒?，帶有氨基甲基四環(huán)素的氮芥，帶有膽甾醇或雌二醇或去氫表雄酮酯的氮芥，以及帶有偶氮苯的氮芥。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，為改性所給治療劑而用的特殊化學(xué)基團(tuán)可以選來影響進(jìn)入微球體膜或內(nèi)部空間的比例。所選連接化學(xué)基團(tuán)與治療劑的鍵可以選來得到所需的代謝率，例如，在從填充氣體前體的微球體中釋放出來之后，在血清酯酶存在下，在酯鍵情況下水解。另外，特殊化學(xué)基團(tuán)可以選來影響用于帶有本發(fā)明微球體的填充氣體前體藥物治療劑的生物分布，例如用于卵巢腺癌的帶有環(huán)磷酰胺的N，N—雙(2—氯乙基)—二氨基磷酸。
另外，填充氣體前體的微球體中的藥物前體可設(shè)計(jì)成含有可逆衍生物，該衍生物可用作活性期間的改性劑以提供、延長(zhǎng)或儲(chǔ)存活性效果。例如，煙酸用葡聚糖和羧甲基葡聚糖酯修飾，鏈霉素用藻酸鹽，二氫鏈霉素用雙羥萘酸鹽，阿糖胞苷(ara—C)用5′—金剛烷酸酯，阿糖腺苷(ara—A)用5—棕櫚酸酯和5′—苯甲酸酯，兩性霉素B用甲酯，睪酮用17—β—烷基酯，雌二醇用甲酸酯，前列腺素用2—(4—咪唑基)乙胺鹽，多巴胺用氨基酸酰胺，氯霉素用單—或雙(三甲基甲硅烷基)醚，以及環(huán)氯胍用雙羥萘酸鹽。在此情形下，長(zhǎng)效藥物的存儲(chǔ)庫(kù)或罐可以在體內(nèi)從微球體中的充有氣體前體的前體藥物內(nèi)釋放出來。
另外，一般熱不穩(wěn)定化合物可用于生成無毒團(tuán)的化合物。優(yōu)選帶有高溫分解的偶氮鍵，過氧化物和二硫鍵的化合物。對(duì)于這種形式的藥物前體，含有偶氮，過氧和二硫鍵的化合物通過氣蝕和/或由高能超聲波相互作用產(chǎn)生的熱量活化，充有氣體前體的微球體從此處截留的藥物前體產(chǎn)生自由基串。許多藥物或化學(xué)品可構(gòu)成這些藥物前體，如偶氮化合物，如果兩個(gè)氮原子之間的鍵可以在體內(nèi)產(chǎn)生自由基產(chǎn)物，則這些化合物的一般結(jié)果是R—N＝N—R，其中R是烴鏈。
可用于產(chǎn)生自由基產(chǎn)物的藥物或化合物的實(shí)例包括含偶氮化合物如偶氮苯，2，2′—偶氮雙異丁腈，偶氮二甲酰胺，石蕊精，氮霉素，氯唑噻磺胺，偶氮磺酰胺，氧化偶氮苯，aztreonam，蘇丹III，柯衣定磺胺，柯衣定磺酰胺和抑氮磺胺吡啶，含二硫鍵的化合物如雙苯硫酮，硫胺二硫化物，硫藤黃菌素，二硫四甲秋蘭姆，含過氧化物的化合物如過氧化氫和苯甲?；^氧化物，2，2′—偶氮二異丁腈，2，2′—偶氮二(2—氨基丙烷)二鹽酸鹽，和2，2′—偶氮二(2，4—二甲基戊腈)。
用氧氣填充的氣體前體填充的微球體氣蝕后將產(chǎn)生充足的自由基。而且，過渡系列的金屬離子，尤其是錳，鐵和銅可增加由氧生成的反應(yīng)性中間體的形成率。通過將金屬離子包裹在微球體內(nèi)可增加體內(nèi)自由基的形成。這些金屬離子可以游離鹽，如EDTA，DTPA，DOTA或去鐵胺的復(fù)合物，或金屬離子氧化物的形式摻入微球體。另外，衍生的金屬離復(fù)合物可連接到脂類頭的基團(tuán)上，或親脂離子復(fù)合物可以摻入，例如，脂類雙層中。當(dāng)暴露于熱刺激時(shí)，例如氣蝕，這些金屬離子將增加反應(yīng)性氧中間體的形成率。而且，放射性致敏劑如甲硝噠唑和醚醇硝唑可摻入充有氣體前體的微球體由熱刺激產(chǎn)生自由基。
通過例舉的所用藥物前體的方法，?；幕瘜W(xué)基團(tuán)可以通過在體內(nèi)血清中酶的作用使酯鍵輕易地裂解而將其連接到藥物上。?；乃幬锴绑w被摻入本發(fā)明充有氣體前體的微球體內(nèi)。除烴和取代的烴烷基外，衍生物也可以由鹵取代基或全鹵取代基如全氟烷基組成。當(dāng)充有氣體前體的微球體被來自超聲波的聲脈沖沖擊時(shí)，被微球體包裹的藥物前體將暴露于血清。酯鍵將在血清中被酯酶裂解而后產(chǎn)生藥物。
類似地，超聲波不僅被用于破裂充有氣體前體的微球體，還被用于引起熱效率，該熱效率可以增加化學(xué)裂解率和活性藥物從藥物前體的釋放。
微球體可以設(shè)計(jì)成在微球體內(nèi)外兩側(cè)治療劑呈對(duì)稱或不對(duì)稱分布。
治療劑特定的化學(xué)結(jié)構(gòu)可被選擇或修飾達(dá)到所需的溶解性，從而使該治療劑既可以被包裹在微球體內(nèi)部充氣體前體的空間內(nèi)，也可以附在微球體上或網(wǎng)(enmeshed)在微球體內(nèi)。表面連接的治療劑可帶有一個(gè)或多個(gè)酰基鏈，這樣的話，在當(dāng)微球體被沖擊或通過氣蝕破裂時(shí)，?；闹委焺㈦x開表面和/或?qū)孽；溁瘜W(xué)基團(tuán)斷裂。類似地，其它治療劑可與在結(jié)構(gòu)上為芳香族的或甾醇的疏水基團(tuán)配制，摻入微球體表面。
除類脂外，其它可用于形成微球體的物質(zhì)包括，例如，蛋白質(zhì)如清蛋白，合成肽如聚谷氨酸，半乳糖、葡糖和其它己糖的直鏈和支鏈低聚物和聚合物，以及從磷?；突酋；焯呛图禾呛吞谴佳苌木酆衔铩Ｒ部捎锰妓衔锞酆衔锶缭逅?，葡聚酸，淀粉和HETA淀粉。其它天然聚合物如透明質(zhì)酸也可以使用。合成聚合物如聚乙二醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚交酯，聚乙烯亞胺(直鏈和支鏈)，聚紫羅烯或聚亞氨基羧酸也可以使用。
當(dāng)被微球體包裹的治療劑帶負(fù)電荷時(shí)，如基因物質(zhì)，陽(yáng)離子脂類或帶陽(yáng)離子基團(tuán)的全氟烷基化基團(tuán)可用于連接帶負(fù)電荷治療劑。例如，可用陽(yáng)離子類兩親性全氟烷基化聯(lián)吡啶，如Garelli和Vierling，Biochem，Biophys，Acta，1992，1127—48中所述，該文獻(xiàn)全文在此引作參考。
總之，帶負(fù)電荷治療劑如基因物質(zhì)可被連接到混合膠束成分如帶陽(yáng)離子類脂的非陽(yáng)離子類脂的親水性首基，例如DOTMA或十八烷基胺或取代烷基如三甲十八烷基胺。有用的混合膠束化合物包括(但不限于)月桂基三甲基溴化銨(十二烷基—)，鯨蠟基三甲基溴化銨(十六烷基—)，肉豆蔻基三甲基溴化銨(十四烷基—)，烷基二甲基芐基氯化銨(烷基＝C12，C14，C16)，芐基二甲基十二烷基溴/氯化銨，芐基二甲基十六烷基溴/氯化銨，芐基二甲基十四烷基溴/氯化銨，鯨蠟基二甲基乙基溴/氯化銨，或溴/氯化鯨蠟基吡啶鎓。
如果需要，含脂質(zhì)體治療劑的大小可用多種方法調(diào)節(jié)，包括擠壓，過濾，聲化，均化，用引入液體不混溶鞘中的液體芯的層狀流，加壓擠過固定大小的孔，以及類似的方法，以調(diào)節(jié)產(chǎn)生的脂質(zhì)體的生物分布和間隙。上述以及其它技術(shù)已在文獻(xiàn)中討論，例如，U.S.Patent No.4,728,578；U.K.Patent ApplicationGB2193095 A；U.S.Patent No.4,728,575；U.S.PatentNo.4,737,323；International Application PCT/US85/01161；Mayer et al.，Biochimica et Biophysica Acta，Vol.858，pp.161—168(1986)；Hope et al.，Biochimica et Bio-physica Acta，Vol.812，pp.55—65(1985)；U.S.PatentNo.4,533,254；Mayhew et al.，Methods in Enzymology，Vol.149，pp.64—77(1987)；Mayhew et al.，Biochimica etBiophysica Acta，Vol755，pp.169—74(1984)；Cheng et al，Investigative Radiology，Vol.22，pp.47—55(1987)；PCT/US89/05040，U.S.Patent No.4,162,282；U.S.Patent No.4,310,505；U.S.Patent No.4,921,706；and LiposomeTechnology，Gregoriadis，G.，ed.，Vol.I，pp.29—31，51—67 and 79—108(CRC Press Inc.，Boca Raton，F(xiàn)L1984).
上述專利，公開物和專利申請(qǐng)公開的全部在此引作參考。
選擇過濾器孔徑是為了篩分和除去潛在的污染。過濾器孔徑可以在10nm—20μm之間，優(yōu)選在30nm—10μm之間，更優(yōu)選在100nm—8μm之間，最優(yōu)選的為0.22μm。兩個(gè)或多個(gè)過濾器可聯(lián)成一串以使過濾效率最大。構(gòu)成過濾器的有用材料包括聚合物如聚硫酸酯，聚碳酸酯和聚偏二氯乙烯。除此之外，玻璃，陶瓷和金屬過濾器均可以使用。另外，金屬絲，聚合物或陶瓷篩也可以使用。也可以使用濾紙，或?qū)⑵渥鳛橹谱鬟^程或通過順序過濾給藥期間的一部分來實(shí)現(xiàn)。
充有氣體前體的微球體可以在通過過濾過程的最后一步被篩分。階級(jí)過濾器包括兩個(gè)或多個(gè)串聯(lián)過濾器，比如，10μm，接著是8μm，以增加產(chǎn)率。結(jié)果是得到具有高效率超聲波成像和藥物傳遞的穩(wěn)定的，均勻大小的高產(chǎn)率充有氣體前體的微球體。
利用理想氣體定律的原理，微球體從液相到氣相穩(wěn)定膨脹，該微球體小到可以在通過順序過濾器后注射，并在體內(nèi)提供必要的對(duì)比度。事實(shí)上，知道了微球體直徑從液體到氣體轉(zhuǎn)換時(shí)膨脹的變化，濾器體系可以設(shè)計(jì)成使微?；蛉橐和ㄟ^注射/過濾過程篩分。完成從液相到氣相的轉(zhuǎn)換之后，形成適當(dāng)大小的充氣微球體。知道氣體前體必要的體積和穩(wěn)定化材料對(duì)液滴有效直徑的貢獻(xiàn)，然后利用理想氣體定律，就可以計(jì)算用于篩分前體液的最佳過濾器直徑。反之，可以得到所需直徑的微球體。
充有氣體前體的微球體可以通過過濾器壓出這種簡(jiǎn)單方法篩出。過濾器孔徑控制著最終充有氣體前體的微球體的尺寸分布。通過使用兩個(gè)或多個(gè)階式或疊摞的過濾器，例如，10μm，接著8μm當(dāng)在氣體前體的相轉(zhuǎn)換溫度以上的溫度進(jìn)行壓出時(shí)，可以產(chǎn)生以7—9μm為中心的很窄范圍尺寸分布的充有氣體前體的微球體。過濾后，這些類脂包衣微球體保持24小時(shí)以上的穩(wěn)定，甚至可達(dá)一年或更長(zhǎng)時(shí)間。當(dāng)懸浮液在使用之前從滅菌瓶中除去時(shí)，過濾步驟可以并入過濾裝配，甚至更優(yōu)選地可以在使用期間將過濾裝配并入其注射器。本方法可用不同尺寸的濾器施行，以得到不同尺寸的微球體。
本發(fā)明微球體的尺寸將取決于其用途。由于微球體尺寸影響生物分布。不同尺寸的微球體可選來用于不同的目的。對(duì)于較小微球體，超聲波共振頻率一般比較大微球體高。
例如，對(duì)血管內(nèi)應(yīng)用，優(yōu)選的尺寸范圍是平均外徑在約30nm—約10μm之間，優(yōu)選的平均外徑為約5μm。
對(duì)于血管內(nèi)應(yīng)用更特別的是微球體平均外徑優(yōu)選為約10μm或以下，更優(yōu)選小于約7μm，更優(yōu)選不小于5nm。優(yōu)選地，微球體平均外徑不小于30nm。
為了將治療劑傳遞到器官如肝和從正常組織區(qū)分腫瘤，優(yōu)選平均外徑在30nm—約100nm的較小微球體。
對(duì)于組織如腎和肺栓塞，優(yōu)選平均外徑小于約200μm的微球體。
對(duì)于鼻內(nèi)，直腸內(nèi)或局部給藥，優(yōu)選平均外徑小于約100μm的微球體。
大微球體，例如，大小在1—10μm之間的微球體，一般被限定在血管內(nèi)空間直到它們被管內(nèi)襯細(xì)胞元素如內(nèi)襯毛細(xì)竇狀隙的巨噬細(xì)胞和Kuppfer細(xì)胞所清除。為了通過遠(yuǎn)離竇狀隙的細(xì)胞，可以使用較小微球體，例如，直徑小于約1μm，比如小于約300nm的微球體。
在優(yōu)選的方案中，微球體是單獨(dú)使用，而不是，例如，包含在基體中使用。
通常，本發(fā)明治療劑傳遞系統(tǒng)是以水懸浮液形式給藥，如在水或鹽水溶液(例如，磷酸緩沖鹽水)中。優(yōu)選地，水是經(jīng)滅菌的。還有，盡管如果需要鹽水溶液可以是低滲的(例如，約0.3—0.5％NaCl)，但仍優(yōu)選鹽水溶液是等滲鹽水溶液。如果需要，溶液也可以是緩沖溶液，使得pH范圍在約5—7.4之內(nèi)。所得充有氣體前體類脂球在室溫儲(chǔ)存一年或一年以上仍保持穩(wěn)定。另外，優(yōu)選葡萄糖包含在介質(zhì)中。其它可用于充有氣體前體的脂質(zhì)體給藥的溶液包括(但不限于)杏仁油，玉米油，棉籽油，油酸乙酯，肉豆蔻酸異丙酯，棕櫚酸異丙酯，礦物油，肉豆蔻醇，辛基—十二烷醇，橄欖油，花生油，桃仁油，芝麻油，大豆油，角鯊烯，油酸肉豆蔻酯，油酸鯨蠟酯，棕櫚酸肉豆蔻酯，以及酯化到烷基鏈脂肪酸(C＝2—22)的其它飽和和不飽和烷基鏈醇(C＝2—22)。
對(duì)于使用前的儲(chǔ)存，本發(fā)明微球體可以懸浮在水溶液如鹽水溶液(例如，磷酸緩沖鹽水溶液)或水中，優(yōu)選的儲(chǔ)藏溫度在約2—10℃之間，優(yōu)選約4℃。優(yōu)選地，水是經(jīng)滅菌的。最優(yōu)選地，盡管如果需要鹽水溶液可以是低滲的(例如，約0.3—0.5％Nacl)，但仍將微球體儲(chǔ)藏在等滲鹽水溶液中。溶液也可以是緩沖溶液，便得pH范圍在約5—7.4之內(nèi)。用于存儲(chǔ)介質(zhì)的適當(dāng)緩沖劑包括(但不限于)乙酸，檸檬酸，磷酸和碳酸氫鹽。
抑菌劑也可以包含在微球體內(nèi)以防止存儲(chǔ)時(shí)細(xì)菌降解。合適的抑菌劑包括(但不限于)殺藻銨，氯芐乙胺，苯甲酸，芐醇，尼泊金丁醇，氯化鯨蠟基吡啶鎓，氯丁醇，氯甲苯酚，尼泊金甲酯，苯酚，苯甲酸鉀，山梨酸鉀，苯甲酸鈉和山梨酸。在充有氣體前體的脂質(zhì)體中可以包含一種或多種抗氧化劑防止脂類氧化。合適的抗氧化劑包括生育酚，抗壞血酸和抗壞血酸基棕櫚酸酯。
控制將治療化合物傳遞到患者病區(qū)的方法包括下列步驟(i)給患者施用含有治療化合物的充有氣體前體微球體；(ii)用超聲波監(jiān)視微球體以探測(cè)氣體前體的液態(tài)到氣態(tài)的相轉(zhuǎn)變和確定病區(qū)內(nèi)微球體的存在；以及(iii)用超聲波破裂微球體，在病區(qū)內(nèi)釋放治療化合物。
用本發(fā)明的充有氣體前體的微球體，超聲波能量與氣體相互作用，破裂微球體，并允許治療劑如基因物質(zhì)被釋放和傳遞到細(xì)胞內(nèi)。當(dāng)聲能遇到組織或流體介質(zhì)內(nèi)的氣體界面時(shí)，聲能到熱能和動(dòng)能的局部轉(zhuǎn)化被大大加強(qiáng)。治療物質(zhì)從微球體中釋放出來并迅速地傳入細(xì)胞。盡管不想受任何特殊操作理論的束縛，但仍相信在細(xì)胞位置產(chǎn)生的熱能和動(dòng)能將促進(jìn)細(xì)胞對(duì)治療劑的吸收。
微球體的給藥途徑取決于其用途。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員能認(rèn)識(shí)的，本發(fā)明治療劑傳遞系統(tǒng)的給藥以多種方式進(jìn)行，如血管內(nèi)，淋巴內(nèi)，腸胃外，皮下，肌內(nèi)，鼻內(nèi)，直腸內(nèi)，腹膜內(nèi)，間質(zhì)，經(jīng)噴霧器進(jìn)入氣道，高壓，口服，表皮，或腫瘤內(nèi)，采用多種藥劑形式。一種優(yōu)選的藥途徑是血管內(nèi)的。對(duì)于血管內(nèi)使用，治療劑傳遞系統(tǒng)一般是靜脈注射，但也可以動(dòng)脈注射。本發(fā)明微球體也可以間質(zhì)注射或進(jìn)入任何體腔。
本發(fā)明用超聲波從微球體傳遞治療劑，對(duì)具有良好透聲窗(用于超聲波能量傳輸)的組織來說是再好不過的了。這是對(duì)體內(nèi)大多數(shù)組織如肌肉，心臟，肝臟和大部分其它生命結(jié)構(gòu)的情況。對(duì)于大腦，為了使超聲波能量直接通過顱骨，外科窗是必要的。
給藥的有用劑量和給藥方式依賴于要治療的動(dòng)物的年齡，重量和類型，以及要使用的特定治療劑。典型地，劑量從低水平開始，然后逐漸增加直到達(dá)到所需的治療效果。
盡管對(duì)于定位藥物傳遞的活化，超聲能是優(yōu)選的，但是在某些情況下可以利用其它形式的能量。例如，當(dāng)不能得到好的聲窗例如肺時(shí)，可利用微波射頻能。例如，可使用它在被加熱的身體某個(gè)區(qū)域中引起氣體前體進(jìn)行相轉(zhuǎn)變并從微球體表面釋放藥物。例如，包裹入2—甲基—2—丁烯的微球體和化療劑可通過用微波或超聲波在約38.5℃(僅高于體溫2℃)使局部超溫被活化。在磁誘導(dǎo)中，用振蕩磁場(chǎng)加熱。這可通過外部磁場(chǎng)(即患者外部磁鐵)和插入患者體內(nèi)(如腫瘤內(nèi))的強(qiáng)磁性探針實(shí)現(xiàn)。作為在腫瘤內(nèi)流過血管的微球體由于磁場(chǎng)振蕩它們將遇到某個(gè)區(qū)域的熱量。氣體前體此時(shí)形成氣體。破裂微球體并且釋放藥物。本發(fā)明特別新的方面是可以制備磁性微球體。這可通過在微球體中使用磁性材料來實(shí)現(xiàn)，例如在微球體中加入氧化鐵以及氣體前體和治療劑。當(dāng)微球體遇到附近的磁場(chǎng)，磁性顆粒吸收來自于振蕩磁場(chǎng)的能量并將其轉(zhuǎn)化為熱量。這又將液體氣體前體就地轉(zhuǎn)化為氣體并釋放出微球體中的物質(zhì)。在某些情況下，光能用于微球體的定向藥物傳遞。一般地，對(duì)于進(jìn)入體內(nèi)組織的深度，光比聲或射頻效率低，但是在某些應(yīng)用中，這種進(jìn)入水平是足夠的。例如對(duì)于傳遞藥物到皮膚，一般可局部使用填充氣體前體的微球體然后使用太陽(yáng)燈使其到達(dá)皮膚。也可以使用靜脈注射微球體并通過在靶定位皮膚上使用適當(dāng)能量的照射光到達(dá)皮膚。據(jù)信紅外光能與全氟碳基氣體前體一起使用引起光活化是特別有效的。對(duì)窺鏡應(yīng)用(例如治療結(jié)腸粘膜表面)光能也是相當(dāng)有用的。
用氣體前體微球體進(jìn)行定位藥物傳遞的優(yōu)選方法是使能量到達(dá)靶組織并且使治療劑從氣體前體微球體中釋放。最優(yōu)選的能量是超聲波。然而，在某些情況下，氣體前體微球體對(duì)于其本身局部傳遞藥物是非常有效的。據(jù)信在接近體溫下經(jīng)過液體到氣體相轉(zhuǎn)變的氣體前體在局部缺血和疾病組織中的累積是特別有效的。這種假定來自于用常規(guī)空氣填充的脂質(zhì)體進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。當(dāng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物輸入100％氧氣時(shí)，例如豬或狗，脂質(zhì)體流失非?？?。在接近體溫(例如37℃)經(jīng)過相轉(zhuǎn)變的氣體前體將在疾病或局部缺血組織中積累。腫瘤經(jīng)常是局部缺血的，因?yàn)樗鼘⒂绊懶募?，大腦和其它組織區(qū)。這時(shí)氣體前體可被用于進(jìn)行局部藥物傳遞。為此目的，特別優(yōu)選的是在溫度介于25℃和約40℃間經(jīng)過液體到氣體轉(zhuǎn)變的前體。通過將治療劑和具有氣體前體的微球體結(jié)合，這種微球體包入例如，全氟戊烷，2—甲基—1—丁烯—3，甲基乳酸酯或溴氯氟甲烷，則治療劑可有選擇性地被傳遞到局部缺血組織?？扇我鈱⒊暡ɑ蚱渌芰坑玫骄植咳毖M織以有利于藥物傳遞。
對(duì)于體外應(yīng)用，如細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用，可將填充氣體前體的微球體加到培養(yǎng)液的細(xì)胞中然后培養(yǎng)。然后將聲能應(yīng)用到含有細(xì)胞和微球體的培養(yǎng)介質(zhì)中。
可使用本發(fā)明控制治療劑傳遞到患者的區(qū)域，其中對(duì)患者以含有本發(fā)明微球體的治療劑給藥，用超聲波監(jiān)測(cè)微球體以確定在某個(gè)區(qū)域存在的微球體，然后用超聲波破壞微球體以在某個(gè)區(qū)域釋放治療劑。
患者可以是任何類型的動(dòng)物，但是優(yōu)選脊椎動(dòng)物，更優(yōu)選哺乳動(dòng)物，最優(yōu)選人。對(duì)于患者的區(qū)域，意指整個(gè)患者或患者的某個(gè)特別區(qū)域或部分。例如，用本發(fā)明方法，在患者心臟或患者血管(即靜脈或動(dòng)脈系統(tǒng))中治療劑的傳遞是有效的。本發(fā)明也特別用于傳遞治療劑到患者左心室。用治療劑傳遞不易到達(dá)的區(qū)域。治療劑也可容易地被傳遞到患者的肝，脾和腎區(qū)，以及其它區(qū)域。
另外，本發(fā)明特別用于傳遞治療劑到患者的肺。例如本發(fā)明的填充氣體前體的微球體比常規(guī)填充液體的脂質(zhì)體(它通常儲(chǔ)存在中間鄰近氣道中而不是到達(dá)肺的外周)輕。據(jù)信本發(fā)明的填充氣體前體的微球體可以改進(jìn)治療化合物到肺外周，包括末端氣道和肺泡的傳遞。對(duì)于在肺中的應(yīng)用，例如，可通過噴霧法使用填充氣體前體的微球體。
在應(yīng)用如靶肺(含有脂類)，治療劑可釋放在聚集具有脂襯靶組織的填充氣體前體脂微球體上。另外，在給藥后沒有使用超聲波這種填充氣體前體脂微球體可能破裂。因此，在上述給藥類型中不需使用超聲波釋放治療劑。
此外，本發(fā)明填充氣體前體的微球體特別適用于在水介質(zhì)中或暴露在氧氣和/或空氣中可以降解的治療劑。例如。對(duì)于使用不穩(wěn)定治療化合物，可以用惰性氣體如氮?dú)饣驓鍤馓畛湮⑶蝮w。另外，可用惰性氣體填充含氣體前體的微球體并常常包封住不穩(wěn)定治療劑用于病人的某個(gè)區(qū)域，該區(qū)域通常引治療劑暴露在空氣中，如在皮膚和眼睛的應(yīng)用。
填充氣體前體的微球體也特別適用于經(jīng)過皮膚傳遞，如斑傳遞系統(tǒng)。使用破裂超聲波可以增加治療化合物的經(jīng)皮膚傳遞。此外，機(jī)械可用來監(jiān)視和調(diào)節(jié)治療劑的傳遞。例如，診斷超聲波可于視覺監(jiān)測(cè)填充氣體微球體的破裂和調(diào)節(jié)治療的釋放和/或水聽器用于檢測(cè)破裂填充氣體前體的微球體的聲音和調(diào)節(jié)治療劑的傳遞。
用超聲波在峰共振頻率，微球體回波和破裂微球體的能力使得治療劑在患者的某個(gè)區(qū)域控制傳遞，即根據(jù)給藥予患者經(jīng)監(jiān)測(cè)微球體在所需區(qū)域的存在來監(jiān)測(cè)微球體并且用超聲波破壞微球體以在某個(gè)區(qū)域釋放治療劑。
從氣體前體制備的充氣微膠體用診斷超聲波是高效的。它們有大量氣體，以便它們具有高反射性并且是優(yōu)良的超聲波對(duì)抗劑?？捎酶吣艹暡?，優(yōu)選是連續(xù)波，約100毫瓦，釋放藥物，來自于Aerosomes生物活性和遺傳的物質(zhì)，進(jìn)行加強(qiáng)超聲波高溫治療和用于內(nèi)成腔組織破壞和藥物活化。
本發(fā)明微球體優(yōu)選具有反射性大于2dB，優(yōu)選介于4dB和20dB之間。在這個(gè)范圍內(nèi)，較大微球體，較高濃度微球體和/或當(dāng)使用高超聲頻率時(shí)將顯示最大反射性。
優(yōu)選地，本發(fā)明微球體的峰共振頻率介于約0.5mHz和10mHz間。當(dāng)然，在某種程度上，本發(fā)明填充氣體微球體的峰共頻率將依據(jù)微球體的直徑，彈性或柔韌而變化，較大和較高彈性或柔韌性的微球體比較小和較低彈性或韌性的微球體共振頻率低。
在將微球體給藥予患者或已經(jīng)到達(dá)某個(gè)區(qū)域后，用一定頻率的超聲波破裂含有治療劑的本發(fā)明的微球體并使其到達(dá)需治療的患者的某個(gè)區(qū)域是極其容易的。特別地，我們已經(jīng)意外發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用在含治療劑的填充氣體前體微球體相應(yīng)的峰共振頻率時(shí)，該微球體將破裂并釋放其中的成分。
峰共振頻率可在體內(nèi)或體外測(cè)定，但優(yōu)選體內(nèi)，即將微球體暴露于超聲波中，收到反射共振頻率信號(hào)并且用常規(guī)方法分析收到的信號(hào)譜以確定這種峰。如此確定的峰對(duì)應(yīng)于峰共振頻率(或有時(shí)稱作二次諧頻)。
當(dāng)暴露于較高強(qiáng)度(瓦數(shù))和持續(xù)(時(shí)間)的非峰共振頻超聲波中時(shí)，填充氣體前體的微球體也將。然而，這種較高的能將導(dǎo)致大大增加不需要的熱量，通過調(diào)節(jié)這種能量頻率以匹配峰共振頻率，破裂效率和治療劑的釋放將被改進(jìn)，通常不發(fā)生明顯的組織熱變(一般升溫不超過約2℃以上)，并且所需要總的能量少。因此，在不必要時(shí)使用峰共振頻率超聲波是最優(yōu)選的。
任何各種類型的診斷超聲波成像儀器在本發(fā)明的實(shí)施中都可以使用，對(duì)于本發(fā)明方法，儀器的具體類型和型號(hào)沒有限制。對(duì)于用超聲波進(jìn)行高熱治療而設(shè)計(jì)的儀器也是適合的，例如在U.S.專利4,620,546，4,658,828和4,586,512，中所述的那些儀器，因此，這些公開內(nèi)容在這里全部引作參考。優(yōu)選地，這種儀器使用共振頻率(RF)譜分析器。也可以在外部使用或安裝變頻探針。通常，在開始用低強(qiáng)度和短持續(xù)時(shí)間的超聲波，然后，優(yōu)選地在峰共振頻率，增加強(qiáng)度，時(shí)間和/或共振頻率直到微球體破裂。
由于應(yīng)用的各種原理對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見的，作為一般性指導(dǎo)，以前曾公開過，但是對(duì)填充氣體前體微膠體的平均外徑約1.5至10微米，則峰共振頻率一般約為1—10兆赫。通過調(diào)節(jié)中心靶組織(例如腫瘤)的焦距帶，在快速超聲波下可以看到填充氣體前體微膠體，因?yàn)樗鼈冊(cè)诎薪M織中積累，用7.5兆赫曲陣變頻作為例子，調(diào)節(jié)傳遞至變頻器使其達(dá)到最大并且在靶組織中調(diào)節(jié)焦距帶，立體峰瞬時(shí)平均(SPTA)；功率在水中將最大，約為5.31mW/cm2。該功率將引起一些治療劑從填充氣體前體微球體中釋放，但是用更大功率將有更多的釋放。
將變頻器切換到多普勒狀態(tài)，可以得到更大的功率輸出，從相同的變頻器高至2.5W/cm2。機(jī)器在多普勒狀態(tài)操作，可將動(dòng)力傳遞到靶組織內(nèi)部選定焦距帶并且可使填充氣體前體微球體釋放其治療劑。選擇變頻器匹配填充氣體微球體的共振頻率將使這種治療劑釋放方法更有效。
對(duì)于較大直徑的填充氣體微球體，例如平均外徑大于3微米，低頻率的變頻器在完成藥物釋放方面更有效。例如，3.5mHz的較低頻率變頻器(20mm，曲陣型)可被選擇用于對(duì)應(yīng)于填充氣體前體微球體的共振頻率。用這種變頻器101.6mW/cm2可被傳遞到焦點(diǎn)，切換到多普勒狀態(tài)將輸出功率(SPTA)增加至1.02W/cm2。
為了用氣蝕現(xiàn)象釋放和/或活化填充氣體前體微球體內(nèi)的藥物/藥物前體，可使用較低頻率的能量，氣蝕在較低頻率更有效。用較高電壓(高達(dá)300V)驅(qū)動(dòng)0.757mHz變頻器，填充氣體微球體溶液的氣蝕將在約5.2大氣壓的臨界值發(fā)生。
表III給出了從常規(guī)儀器如Piconics Inc.(Tyrasboro，MA)的診斷超聲波傳遞到組織的能量范圍，Protascan為一般目的掃描儀，具有接收器脈沖器1966型號(hào)6611，Picker(Cleveland，OH)Echoview 8L Scanner包括80C System或Medisonics(Mountain view，CA)Model D—9 Ver-satone Bidirectional Doppler。一般地，這些用于脈沖重復(fù)的能量范圍可用于監(jiān)測(cè)充氣微球體但不足以破裂本發(fā)明的填充氣體前體微球體。
表III*由診斷儀產(chǎn)生的功率和強(qiáng)度
從Carson et al.，Ultrasound in Med.&Biol.1978.3，341—350，得到的值，該文獻(xiàn)在此引作參考。
對(duì)于填充氣體微球體的活化，較高能量超聲波(如普通用于治療超聲儀器的)是優(yōu)選的。一般地，根據(jù)要被超聲波加熱的組織面積，治療超聲儀使用多達(dá)50％—100％占空因數(shù)。具有較大量肌肉君(即背部，股部)和較多血管組織如心臟需要較大占空因數(shù)，例如100％。
在用于監(jiān)測(cè)填充氣體前體微球的位置的診斷超聲波中，使用一種或幾種聲波脈沖而且該儀器在脈沖間暫停以接受反射的聲波信號(hào)。在診斷超聲波中所用有限值脈沖限制了被傳遞到成像組織的有效能量。
在治療超聲波中，連續(xù)波超聲波被用于傳遞更高能量。在使用本發(fā)明微球體中，聲能可以是脈沖的，但是連續(xù)波超聲波是優(yōu)選的。如果用脈沖，聲波將優(yōu)選一次回聲到長(zhǎng)度為至少8并且優(yōu)選至少20進(jìn)行脈沖。
固定頻率或調(diào)節(jié)頻率超聲波都可以使用。固定頻率的定義為在所有時(shí)間內(nèi)聲波的頻率為常數(shù)。調(diào)節(jié)頻率為在所有時(shí)間時(shí)聲波頻率是變化的，例如從高到低(PRICH)或從低到高(CHIRR)。例如具有聲能10mHz起始頻率的PRICH脈沖通過增加功率1—5W使其掃描至1MHz。聚焦頻率調(diào)節(jié)高能超聲波將增加微球體內(nèi)氣體膨脹并且破裂以提供治療劑的局部傳遞。
所用聲波頻率可從約0.025至100mHz變化。頻率范圍介于約0.75至3mHz是優(yōu)選的而且頻率介于約1至2mhz是最優(yōu)選的。通常所用治療頻率約3—7mHz也可以使用。對(duì)于很小的微球體，例如直徑低于0.5微米，較高的聲波頻率是優(yōu)選的，因?yàn)檫@些較小的微球體在較高聲波頻率時(shí)更有效地吸收聲能。當(dāng)使用很高頻率時(shí)，如高于10mHz，一般聲能將有限深度地穿透到流體和組織，外部使用對(duì)于皮膚和其它表面組織是優(yōu)選的，但是對(duì)于深層結(jié)構(gòu)，通過間隙式探針或血管內(nèi)超聲波導(dǎo)管的聲能應(yīng)用是優(yōu)選的。
在最優(yōu)方案中，本發(fā)明提供新的脂質(zhì)體對(duì)比劑和藥物傳遞系統(tǒng)。
一旦公開本發(fā)明，各種含填充氣體前體治療劑的微球體的制備方法對(duì)于本專業(yè)熟練技術(shù)人員是顯而易見的。優(yōu)選制備微球體的方法將在下面關(guān)于優(yōu)選脂質(zhì)體治療劑傳遞系統(tǒng)中討論。
具體地，在一個(gè)優(yōu)選方案中，制備本發(fā)明含溫度活化填充氣體前體脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)的方法包括在活化氣體前體溫度下，在低于類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度下和低于活化填充氣體前體脂質(zhì)體形成溫度活化填充氣體前體的溫度下，振蕩含類脂的水溶液，并加入治療化合物的步驟。在另一個(gè)優(yōu)選方案中，含有本發(fā)明溫度活化填充氣體前體脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)的制備方法包括在溫度活化氣體前體存在下，在低于類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度下和低于氣體前體活化溫度下，蕩包括脂類和治療化合物的水溶液的步驟。在其它方案中，制備含有本發(fā)明溫度活化填充氣體前體脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳送系統(tǒng)方法包括在溫度活化氣體前體存在下，振蕩包括脂類和治療化合物的水溶液，和分離治療使用的所得填充氣體前體脂質(zhì)體的步驟。由前述方法制備的脂質(zhì)體在此是指由膠狀振蕩氣體前體滴注法制備的并含有治療化合物的溫度活化的填充氣體前體脂質(zhì)體，或含治療劑的膠狀振蕩溫度活化的氣體前體滴注的脂質(zhì)體。
制備本發(fā)明微球體方法為在或接近氣體前體活化溫度進(jìn)行，以便形成充氣脂質(zhì)體。在該方案中，制備含本發(fā)明充氣微球體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)方法包括在氣體存在下，在低于類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度和低于形成充氣脂質(zhì)體的氣體前體的活化溫度下，振蕩含類脂的水溶液，并且加入治療化合物的步驟。在另一個(gè)優(yōu)選方案中制備含有本發(fā)明充氣脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)方法包括在氣體存在下，在低于類脂凝膠向液晶相轉(zhuǎn)化溫度下，振蕩包括脂類和治療化合物的水溶液步驟。在其它方案中，制備含充氣脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)方法包括在氣體存在下，振搖包括類脂和治療化合物的水溶液，并且分離所得治療用充氣脂質(zhì)體的步驟。由前述方法制備的脂質(zhì)體在此是指凝膠態(tài)振蕩氣體滴注法制備的并含有治療化合物的充氣脂質(zhì)體，或含治療劑凝膠態(tài)振蕩氣體滴注的脂質(zhì)體。
因此，本發(fā)明優(yōu)選方法是在溫度活化氣體前體存在下振蕩包括脂類和治療化合物的水溶。此處所用振蕩意指振動(dòng)水溶液以使氣體從周圍環(huán)境進(jìn)入水溶液的運(yùn)動(dòng)。因此，在形成充氣脂質(zhì)體或填充氣體前體脂質(zhì)體的溫度時(shí)進(jìn)行振蕩是優(yōu)選的。任何類型的振動(dòng)水溶液并導(dǎo)致氣體引入的運(yùn)動(dòng)都可用于振蕩。振蕩必須有足夠的力度使在一段時(shí)間后形成泡沫。優(yōu)選地振蕩有足夠力量使短時(shí)間，如30分鐘，優(yōu)選20分鐘內(nèi)，更優(yōu)選10分鐘內(nèi)形成泡沫。振蕩可以是旋動(dòng)(如渦旋)從一側(cè)到另一側(cè)或上下的運(yùn)動(dòng)。而且可以結(jié)合不同類型的運(yùn)動(dòng)。振蕩也可以振蕩裝有類脂水溶液的容器，或振蕩容器內(nèi)的水溶液而不振蕩容器本身。而且振蕩可以是手動(dòng)或機(jī)器操作的?？捎玫臋C(jī)器振蕩器包括，例如，振蕩臺(tái)如VWRScientific(Ceffitos，CA)振蕩臺(tái)和機(jī)器涂料混合器，以及其它已知的機(jī)器。產(chǎn)生振搖的其它方法包括高速高壓下氣體散發(fā)作用。應(yīng)該理解，優(yōu)選地，用大體積水溶液，總力量應(yīng)相應(yīng)地增加。劇烈振蕩意指至少每分鐘60次振蕩運(yùn)動(dòng)，并且是優(yōu)選的。劇烈振蕩的例子為至少每分鐘1000渦旋，上更優(yōu)選的。每分鐘1800渦旋是最優(yōu)選的。
填充氣體前體脂質(zhì)體的形成可根據(jù)振蕩時(shí)在水溶液頂部泡沫的存在進(jìn)行檢測(cè)。泡沫的形成與水溶液體積的減少相關(guān)聯(lián)，優(yōu)選地，最終泡沫體積至少約為最初類脂水溶液體積的2倍，更優(yōu)選地，最終泡沫體積至少約為最初水溶液體積的3倍，再優(yōu)選地，最終泡沫體積至少約為最初水溶液體積的4倍，最優(yōu)選地，所有類脂水溶液轉(zhuǎn)化為泡沫。
所需振蕩時(shí)間可通過檢測(cè)泡沫的形成來確定。例如，在50ml離心管中的10ml類脂溶液可被渦旋約15—20分鐘或直到填充氣體前體脂質(zhì)體的粘度變得足夠稠以使在旋轉(zhuǎn)時(shí)它不再附于側(cè)壁上。此時(shí)，泡沫使含填充氣體前體的脂質(zhì)體溶液升至30—35ml。
需要形成優(yōu)選的泡沫水平的類脂濃度將依據(jù)所用類脂類型變化。而且一旦公開本發(fā)明，本專業(yè)熟練技術(shù)人員很容易確定。例如，在優(yōu)選方案中，根據(jù)本發(fā)明方法用于形成填充氣體前體脂質(zhì)體的1，2—二棕櫚?；字Ｄ憠A(DP-PC)的濃度約為20mg/ml至30mg/ml鹽水溶液。用在優(yōu)選方案中的二硬脂?；字Ｄ憠A(DSPC)的濃度約為5mg/ml至10mg/ml鹽水溶液。
具體地，濃度為20Mg/ml至30mg/ml的DPPC經(jīng)振蕩產(chǎn)生總懸浮液和捕獲氣體體積比單獨(dú)懸浮液體積大4倍。濃度為10mg/ml的DSP經(jīng)振蕩后產(chǎn)生總體積中不含任何液體懸浮體積并且全部為泡沫。
一旦公開本發(fā)明，本專業(yè)熟練技術(shù)人員將類理解到可將類脂或脂質(zhì)體先處理隨后用于本發(fā)明方法。例如，可將類脂水合然后凍干，并通過冷凍或解凍循環(huán)或簡(jiǎn)單水合的方法。在優(yōu)選的方案中，在形成填充氣體前脂質(zhì)體之前將類脂水合然后凍干或水合，然后通過冷凍和解凍循環(huán)然后凍干的方法。
根據(jù)本發(fā)明方法，所用氣體可由局部周圍大氣提供。局部周圍大氣可以是密封在容器內(nèi)的空氣，或在非密封容器中，可以是外部環(huán)境。另外，在本發(fā)明優(yōu)選方案中，氣體或氣體前體可被注入或加入到含有類脂水溶液或其本身為類脂水溶液中以提供非空氣的氣體。將不比空氣重的氣體加到密封容器中，當(dāng)氣體比空氣重時(shí)，可被加到密封或非密封容器中。另外，本發(fā)明包括與氣體前體一起的共夾入空氣和/或其它氣體。
前述本發(fā)明的優(yōu)選方法優(yōu)選地在低于所用類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相變溫度的溫度下進(jìn)行?！蹦z態(tài)向液晶態(tài)相變溫度″意指類脂雙層將從凝膠態(tài)向液晶態(tài)轉(zhuǎn)化的溫度。參見，例如，Chapman et al.J.Biol.Chem.1974，249，2512—2521。各種類脂的膠凝態(tài)向液晶態(tài)相變溫度對(duì)于熟悉本專業(yè)的人員將是容易知道的，并且描述在，例如，Gregoriaclis，ed.，Liposome Technology，Vol.I，1—18(CRC Press，1984)和Derek Marsh，CRC Handbook of Lipid Bilayers(CRC Press，Boca Raton，F(xiàn)L1990)，P139中。也參見前面的表II。當(dāng)所用類脂的凝膠態(tài)向液晶態(tài)相變溫度高于室溫時(shí)容器的溫度可被，例如，通過用致冷機(jī)冷卻裝有類脂溶液的容器而調(diào)節(jié)。
本發(fā)明的方法優(yōu)選也在低于氣體前體的液相的轉(zhuǎn)變溫度下進(jìn)行。見上述表I。上述其它氣體前體的活化或轉(zhuǎn)變溫度對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，而且描述如于Chemi-cal Rubber Company Handbook of Chemistry and PhysicsRobert C.Weast and David R.Lide，es.CRC Press，Inc.Boca Raton，F(xiàn)lorida.(1989—199)?；蛘?，制備本發(fā)明微球體的方法也可在或接近氣體前體的活化溫度下進(jìn)行，以形成充氣脂質(zhì)體。
一般地，充水脂質(zhì)體在高于類脂的凝膠態(tài)向液晶態(tài)相變溫度的溫度下常規(guī)形成，因?yàn)樗鼈兏犴g因而以液晶態(tài)用于生物體系中。參見例如，Szoka and Papahadjopoulos，Proc.Natl.Acad.Sci.1978，75，4194—4198。相反，根據(jù)本發(fā)明方法的優(yōu)選方案制備的脂質(zhì)體主要是充氣的，它產(chǎn)生更大的柔韌性因?yàn)闅怏w更易壓縮并比水溶液更順從。因此溫度活化的填充氣體前體的脂質(zhì)體當(dāng)在低于類脂相變溫度形成時(shí)可被用于生物體系，盡管凝膠相更具剛性。
優(yōu)選的用凝膠態(tài)振蕩氣體滴注法生產(chǎn)含治療劑填充氣體前體類脂體的的設(shè)備示于附圖9中。類脂和含水介質(zhì)的混合物在氣體滴注方法中被劇烈攪動(dòng)，無論是分批還是連續(xù)加料來產(chǎn)生填充氣體前體脂質(zhì)體。對(duì)于附圖9，干燥的類脂51從類脂供應(yīng)管50通過導(dǎo)管59以連續(xù)流或間歇團(tuán)被加到混合器66中。如果用分批工藝，混合器66可包含相對(duì)較小的容器如注射器，試管，瓶子或圓底燒瓶，或大容器。如果用連續(xù)進(jìn)料工藝，混合器優(yōu)選地是大容器，如大桶。該設(shè)備是可以調(diào)節(jié)的以便在氣體前體相變溫度時(shí)產(chǎn)生充氣脂質(zhì)體，因此在低于相變溫度時(shí)產(chǎn)生填充氣體前體脂質(zhì)體。如下所示設(shè)備中，制備微球體的方法是在低于相變溫度下進(jìn)行的。然而該方法也可在相變溫度下進(jìn)行以產(chǎn)生充氣微球體。
可加入治療化合物，例如在氣體滴注工藝之前。對(duì)附圖9，治療化合物41從治療化合物供應(yīng)器40通過導(dǎo)管42加到混合器66中。另外，治療化合物可在氣體滴注工藝之后加入，如脂質(zhì)體的外層用治療化合物包裹。
除了類脂51和治療化合物41外，還需要通過導(dǎo)管61向容器66中加入來自水介質(zhì)供應(yīng)容器52的水介質(zhì)53如鹽水溶液。類脂51和水介質(zhì)53一起形成類脂水溶液74。另外，干燥的類脂51被引入混合容器66之前可被水合以便類脂被導(dǎo)入水溶液中。在用于制備脂質(zhì)體的優(yōu)選方法中，首先加入溶液74以便溶液僅占混合容器66的一部分容量。此外，在連續(xù)方法中，應(yīng)控制加入溶液74的速率和除去所產(chǎn)生的填充氣體前體脂質(zhì)體的速率以確保類脂溶液74的體積不超過混合容器66容積的預(yù)定百分比。
通過直接向類脂溶液74中引入高速加壓氣體前體噴射來進(jìn)行振蕩。另外，可通過機(jī)械地振蕩水溶液，手動(dòng)或機(jī)動(dòng)，來進(jìn)行振蕩。這種機(jī)械振蕩可通過振動(dòng)混合容器66或直接振動(dòng)水溶液74而不振動(dòng)混合容器本身來完成。如圖9所示，在優(yōu)選方案中，機(jī)械振蕩器75被連接在混合容器66上。振蕩應(yīng)具有足夠強(qiáng)度，如圖9所示以便在一段時(shí)間后，在水溶液74的頂部形成包含有填充氣體前體脂質(zhì)體的泡沫73控制泡沫73的形成可用控制振蕩時(shí)間的方法進(jìn)行；即不是振蕩預(yù)定時(shí)間，而應(yīng)繼續(xù)振蕩直到產(chǎn)生預(yù)定體積的泡沫。
上述設(shè)備中應(yīng)包含控制溫度的裝置以便該設(shè)備可以保持在一個(gè)制備脂質(zhì)體的方法溫度。例如，在優(yōu)選方案中，制備脂質(zhì)體方法在低于氣體前體沸點(diǎn)溫度下進(jìn)行。在優(yōu)選方案中，液體氣體前體填充在脂質(zhì)體的內(nèi)部空間?；蛘?，該設(shè)備可保持在約液體至氣體前體的氣體轉(zhuǎn)化溫度，以便氣體包含在脂質(zhì)體中。此外，通過制備脂質(zhì)體方法可調(diào)節(jié)該設(shè)備的溫度，以便氣體前體是液體，然而，氣體被加到所得脂質(zhì)體中。在該方案中，設(shè)備的溫度在制備脂質(zhì)體期間被調(diào)節(jié)，以便該方法在低于相變溫度時(shí)開始并且被調(diào)節(jié)至約脂質(zhì)體相變溫度。
在制備填充氣體前體脂質(zhì)體的設(shè)備的優(yōu)選方案中，其中所用類脂具有低于室溫的凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度，提供了冷卻類脂水溶液74的裝置。在該方案中，如圖9所示，可利用在混合容器66周圍配置外套管64以在容器周圍形成環(huán)形管進(jìn)行冷卻。如圖9所示，冷卻液體63分別通過外套管入口和出口62和63被推動(dòng)流過該環(huán)形管。通過調(diào)節(jié)冷卻液體63的溫度和流速，可將類脂水溶液74的溫度保持在所需溫度。
如圖9所示，氣體前體55與水溶液74一起被導(dǎo)入混合容器66中。通過使用未密封的混合容器可引入空氣以使水溶液連續(xù)地暴露在環(huán)境空氣中。在分批工藝中，通過密封混合容器66可引入固定量的現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境空氣。如果用比空氣重的氣體前體，容器不必密封。然而，引入不比空氣重的氣體前體則需要密封混合容器，例如，如圖9所示，使用蓋65氣體前體55可在混合容器66中被加壓，例如，如圖9所示，經(jīng)過導(dǎo)管57將混合容器與加壓氣體供應(yīng)罐54相連接。
振蕩完畢后，從混合容器66中提取含填充氣體前體脂質(zhì)體的泡沫。如圖10所示，將注射器100的針頭102插入泡沫73中經(jīng)抽出活塞106將預(yù)定量的泡沫抽到針筒104中即可進(jìn)行提取。如下進(jìn)一步討論的，可利用針頭102末端放入泡沫73中的位置來控制所提取填充氣體前體脂質(zhì)體的大小。
或者，如圖9所示，也可通過將提取管67插入混合容器66中來進(jìn)行提取，如前所述。如果混合容器66被加壓如前討論的，則可利用氣體55的壓力來推動(dòng)填充氣體前體脂質(zhì)體70經(jīng)過導(dǎo)管77從混合容器66中流的提取器76中。在混合容器66未被加壓的情況下，如圖9所示，可通過管道78將提取容器76與真空源58如真空泵相連接以產(chǎn)生足夠的負(fù)壓將泡沫73吸入提取容器76中。從提取容器76，將填充氣體前體脂質(zhì)體77引入到管形瓶82中，其中它們可被送到最終的使用者。經(jīng)加壓的氣體源56可與容器76連接以幫助排放填充氣體前體脂質(zhì)體。因?yàn)樨?fù)壓可導(dǎo)致填充氣體前體脂質(zhì)體大小的增加，因此正壓對(duì)于除去填充氣體前體脂質(zhì)體是優(yōu)選的。
為了獲得大小基本均一的填充氣體前體脂質(zhì)體，優(yōu)選進(jìn)行過濾。在某些優(yōu)選方案中，過濾裝配含有一個(gè)以上過濾器，優(yōu)選地，如圖12所示，過濾器相互之間并不緊密相連。過濾前，填充氣體前體類脂體大小范圍在約1微米至大于60微米之間(圖15A和16A)。通過單一過濾器過濾后，填充氣體前體脂質(zhì)體一般小于10微米但仍保留有大小為25微米的顆粒。通過兩個(gè)過濾器(用10微米接著8微米過濾器)過濾后幾乎所有脂質(zhì)體都小于10微米，大多數(shù)為5至7微米(圖15B和圖16B)。
如圖9所示，過濾可通過如下方法進(jìn)行，即將過濾元件72直接與提取管67的末端相結(jié)合以便僅低于預(yù)定大小的填充氣體前體類脂體可從混合容器66中提取出來。另外，如圖9所示，或除了提取管過濾器72外，將過濾器80和導(dǎo)管79相連以使填充氣體前體脂質(zhì)體77從提取器76中進(jìn)入管形瓶82中，以完成填充氣體前體脂質(zhì)體的大小篩分。如圖12所示，過濾器80可含有階式的過濾器裝配124。如圖12所示，階式過濾裝配124包含兩個(gè)連續(xù)過濾器116和120，過濾器120裝配在過濾器116上游。在優(yōu)選方案中，上游的過濾器120是“NUCLEPORE”10μm過濾器而下游過濾器116是“NUCLEPORE”8μm濾器。優(yōu)選在過濾器116的任一側(cè)安裝兩個(gè)0.15mm的金屬制篩盤。在一個(gè)優(yōu)選方案中，過濾器116和120通過TeflonTMO—形環(huán)，118隔開，最小距離為150μm。
除過濾外，也可利用填充氣體前體脂質(zhì)體依據(jù)大小的浮力來進(jìn)行大小的篩分。有利的是填充氣體前體脂質(zhì)體的密度小于水，因此可浮在混合容器66的頂部。由于最大的脂質(zhì)體其密度最小，它們會(huì)最快浮在頂層。最小的脂質(zhì)體通常最后升至頂層并且非填充氣體前體脂質(zhì)體部分將沉在底部。這種現(xiàn)象可有利于用差異浮迭法從混合容器66中除去填充氣體前體脂質(zhì)體以將其進(jìn)行大小篩分。因此將提取管67在混合容器66中垂直位置進(jìn)行調(diào)節(jié)可以控制所提取填充氣體脂質(zhì)體的大小。提取管越高則提取的填充氣體前體微球體越大。而且，間歇地或連續(xù)地在混合容器66調(diào)節(jié)提取管67垂直位置，在不斷發(fā)展的基礎(chǔ)上控制填充氣體前體脂質(zhì)體的大小。通過結(jié)合裝置68可使這種提取方便，此裝置為連接在提取管67的與穿過管72配合的穿過環(huán)71，它可將提取管67在提取容器66中的垂直位置精確調(diào)節(jié)。
凝膠態(tài)振蕩氣體前體滴注方法本身也可用于改進(jìn)填充氣體前體類脂基的微球體的大小篩分。通常振蕩能量的強(qiáng)度越大，所得填充氣體前體脂質(zhì)體越小。
本發(fā)明也包括制備含治療劑溫度活化的填充氣體前體脂質(zhì)體(被分送至最終使用)者的新方法。一旦形成了填充氣體前體脂質(zhì)體，則不能在引起破裂的溫度下加熱滅菌。因此，必須用滅菌成分形成填充氣體前體脂質(zhì)體并且盡可能少地進(jìn)行隨后的操作以避免污染的危險(xiǎn)。根據(jù)本發(fā)明可達(dá)到此目的，例如，如圖10所示，通過振蕩前將含類脂和水溶液的混合容器滅菌，并通過提取容器76將混合容器66中的填充氣體前體脂質(zhì)體77直接傳遞到滅菌注射器100的針筒104中而不需進(jìn)一步處理；即不同后續(xù)滅菌。裝滿填充氣體前體脂質(zhì)體77和經(jīng)適當(dāng)?shù)耐夥獍b的注射器100可被分送至最終使用者。此后，該產(chǎn)品不需要進(jìn)一步的操作以將填充氣體前體脂質(zhì)體用于患者，除去從包裝中取出針筒和從針頭102中到去外套(未標(biāo)出)并將針頭插入患者體內(nèi)或?qū)б汗苤小６?，?dāng)注射器柱塞106壓入針筒104時(shí)產(chǎn)生的壓力將會(huì)導(dǎo)致最大的填充氣體前體脂質(zhì)體破裂，因此，不用過濾即可得到一定的大小篩分。當(dāng)進(jìn)入患者體內(nèi)時(shí)，在前體相變溫度，填充氣體前體脂質(zhì)體變成充氣類脂體。而且，該方法可在前體的相變溫度時(shí)進(jìn)行以便將充氣脂質(zhì)體用于患者。
如圖10所示，在使用時(shí)需要過濾填充氣體前體脂質(zhì)體，例如用于未經(jīng)過濾即從提取容器76中取出來或需要進(jìn)一步過濾，注射器100可裝配其自身過濾器108。這將產(chǎn)生篩分的填充氣體前體脂質(zhì)體，即當(dāng)注射填充氣體前體脂質(zhì)體時(shí)，通過柱塞106的作用使填充氣體前體脂質(zhì)體從過濾器108中擠壓出來。因此，填充氣體前體脂質(zhì)體可被在一步中按大小篩分并注射到患者體內(nèi)。
為了在注射器套筒中使用一個(gè)或兩個(gè)過濾器，帶有套筒的非標(biāo)準(zhǔn)注射器是必要的。如圖3所示，這種裝有過濾器的套筒直徑約為1cm至2cm長(zhǎng)約1.0cm至3.0cm，內(nèi)徑約0.8cm，以便裝有過濾器。將過濾器裝于套筒中余下較大的空間是為使微球體通過套筒時(shí)尚有足夠的表面積以減小需要施于注射器柱塞上的壓力。以這種方式，微球體將不會(huì)受到作用于注射器上的巨大壓力，該壓力將引起微球體破裂。
如圖11所示，階式濾器套110可被直接安裝在注射器112上，因而在使用時(shí)可進(jìn)行過濾。如圖12所示，濾器套110包括前述的階式濾器裝配124，它被結(jié)合在具有阻螺紋的下層凸緣122和具有阱螺紋的凹形槽114之間。下層凸緣122裝配Lure鎖使其容易固定到注射器112上，上層凹槽114裝配針頭102。
在優(yōu)選方案中，將類脂溶液壓出通過濾器并將該類脂溶液在振蕩前加壓滅菌。當(dāng)氣體前體填充脂質(zhì)體形成，可按上文所述將其過濾以篩分大小。形成氣體前體填充脂質(zhì)體前的這些步驟的優(yōu)點(diǎn)是，例如，減少未水合的類脂的量，并因此顯著提高氣體前體填充脂質(zhì)體的產(chǎn)量，以及提供了方便患者使用的滅菌氣體前體填充脂質(zhì)體。例如，在混合容器如小瓶或注射器中注入過濾過的類脂懸浮液，然后通過如壓熱的方式在混合容器中將其滅菌。通過振蕩滅菌容器可將氣體前體注入類脂混懸液以形成氣體前體填充脂質(zhì)體。優(yōu)選地，在滅菌容器的適當(dāng)位置裝配濾器，以使氣體前體填充脂質(zhì)體在接觸患者前通過濾器。
該優(yōu)選方法的第一步，即將類脂溶液壓出通過濾器，可分散干燥類脂和暴露更大的水合面積，從而減少未水合類脂的量。優(yōu)選地。濾器微孔大約為0.1—5μm，更優(yōu)選地，0.1—4μm，還更優(yōu)選地，0.1—2μm，最優(yōu)選地，約為1μm。如圖17所示，當(dāng)類脂懸浮液被過濾時(shí)(圖17B)，與未經(jīng)預(yù)先過濾的類脂懸浮液(圖17A)相比未水合類脂的量降低。未水合的脂質(zhì)體表現(xiàn)為大小不一的無定形團(tuán)塊，是不需要的。
第二步，滅菌，提供了可方便患者使用的藥物組合物。優(yōu)選地，滅菌可通過熱，優(yōu)選在至少約100℃的溫度下壓熱該溶液，更優(yōu)選在給100℃到約130℃，還優(yōu)選在110℃到130℃，還更優(yōu)選在約120℃到130℃，最優(yōu)選在約130℃壓熱來完成。優(yōu)選地，加熱至少約1分鐘，更優(yōu)選地約1到30分鐘，還更優(yōu)選約10到20分鐘，最優(yōu)選約15分鐘。
只要不是通過在可導(dǎo)致氣體前體填充脂質(zhì)體破裂的溫度下加熱而滅菌，滅菌過程可優(yōu)選地在氣體前體填充脂質(zhì)體形成之后進(jìn)行。例如可在氣體前體填充脂質(zhì)體形成前后使用L線照射。
在水介質(zhì)中乳化之前通過0.22μm或更小的濾器可實(shí)現(xiàn)氣體前體的滅菌。這可通過將其滅菌過濾使其直接進(jìn)入含有預(yù)定定量經(jīng)相同滅菌和填充滅菌液的載體的管形瓶而容易地實(shí)現(xiàn)。
圖18說明了在130℃壓熱15分鐘，接著渦旋10分鐘后成功地形成氣體前體填充脂質(zhì)體的能力。進(jìn)一步，在壓出和滅菌步驟之后，振蕩步驟得到了無水類脂相很少到?jīng)]有殘存的氣體前體填充類脂體。圖18A表示壓熱后過濾前產(chǎn)生的氣體前體填充脂質(zhì)體，因而許多氣體前體填充脂質(zhì)體大于10μm。圖18B表示通過10μm“NUCLEPORE”濾器過濾后得到的氣體前體填充脂質(zhì)體，其大小均在10μm左右。
本發(fā)明在某些實(shí)施方案特指包括由真空干燥氣體滴注方法制備的，其中包囊治療劑(含有對(duì)比劑或藥物)的氣體前體填充脂質(zhì)體的治療劑傳遞系統(tǒng)，這樣的脂質(zhì)體在此有時(shí)被作為含治療劑的真空干燥滴注氣體的脂質(zhì)體。本發(fā)明也進(jìn)一步特指包括在其內(nèi)部基本上不含液體的含有治療劑充氣脂質(zhì)體的治療劑傳遞系統(tǒng)。該方法在氣體前體的相轉(zhuǎn)變溫度下進(jìn)行，其中的氣體是由氣體前體提供的。在相轉(zhuǎn)變溫度下，液態(tài)的前體變成氣體而被注入脂質(zhì)體中。
本發(fā)明的脂質(zhì)體的制備方法包括(1)將包含治療劑的脂質(zhì)體置于負(fù)壓下；(2)在負(fù)壓下將該脂質(zhì)體溫育足夠的時(shí)間以基本上從類脂體中除去所有的水；以及(3)將選定的氣體滴注入該脂質(zhì)體中直至達(dá)到環(huán)境氣壓。上述步驟使用的方法在本申請(qǐng)中被稱為制備含藥物脂質(zhì)體真空干燥氣體滴注法。
本申請(qǐng)還提供了使用真空干燥氣體滴注法制備本發(fā)明脂質(zhì)體的設(shè)備，所述設(shè)備包括(1)其中包含治療劑的脂質(zhì)體的容器；(2)給該容器提供負(fù)壓以從其中的脂質(zhì)體中除水的裝置；(3)連接負(fù)壓裝置與容器的導(dǎo)管，該導(dǎo)管引導(dǎo)上述水的流動(dòng)；以及(4)引導(dǎo)氣體進(jìn)入容器中脂質(zhì)體的裝置。
用于制備以真空干燥氣體滴注法制得的本發(fā)明氣休填充的脂質(zhì)體以及在其內(nèi)部基本上不含水的充氣脂質(zhì)體的真空干燥氣體滴注法意指下列方法。首先，按照該方法，將含藥物的脂質(zhì)體置于負(fù)壓(即，減壓或真空條件下)。接著，在負(fù)壓下將脂質(zhì)體溫育足夠的時(shí)間以從脂質(zhì)體中除去基本上全部的水，因此得到基本上無水的脂質(zhì)體。這里使用的短語，如除去基本上全部的水，和基本上無水的脂質(zhì)體，指至少除去90％的水，優(yōu)選至少除去95％的水，最優(yōu)選除去約100％水的脂質(zhì)體。盡管除去了水但分子量較高的治療劑被保留下來，并被包裹在脂質(zhì)體中。最后，通過向脂質(zhì)體提供氣體使其達(dá)到環(huán)境氣壓而完成該選擇性氣體向脂質(zhì)體的注入，因而得到本發(fā)明含治療劑的真空干燥氣體滴注脂質(zhì)體的，而本發(fā)明包含治療劑的氣體填充脂質(zhì)體在其內(nèi)部基本上避免了水的存在，。這里使用的短語，其內(nèi)部基本上避免了水的存在，指在其內(nèi)部至少除去90％的水，優(yōu)選至少除去95％的水，最優(yōu)選除去約100％的水的脂質(zhì)體。
意外地，按照本發(fā)明的方法制備的含治療劑的脂質(zhì)體具有許意外而有利的特性。本發(fā)明的脂質(zhì)體對(duì)超聲波具有強(qiáng)烈的回波發(fā)生特性，使用峰共振頻率的超聲波(以及其他足夠的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間的振動(dòng)頻率)可使其破裂，它對(duì)壓力很穩(wěn)定，和/或通常可長(zhǎng)期保存，不論干燥保存或懸浮于液體介質(zhì)中。該氣體前體填充脂質(zhì)體必具有如下優(yōu)點(diǎn)，例如，穩(wěn)定的粒度大小，低毒性和膜柔韌性。可以相信氣體前體填充脂質(zhì)體的膜有助于這些脂質(zhì)體在如腫瘤組織的積累或?qū)⑦@些組織靶定位。該脂質(zhì)體另一個(gè)令人意外的功能是在真空干燥氣體滴注過程中它可填充氣體并可恢復(fù)其原來的圓形而不是不可逆地破裂成杯形。
脂質(zhì)體的回波發(fā)生性和脂質(zhì)體在所用超聲波的峰共振頻率下破裂的能力使通過在對(duì)患者給藥后監(jiān)測(cè)脂質(zhì)體而測(cè)定液態(tài)前體向氣體的轉(zhuǎn)變，脂質(zhì)體在治療部位的存在，并使用超聲波在該部位破裂脂質(zhì)體以釋放治療劑，而達(dá)到治療劑對(duì)患者某部位的控制傳遞。優(yōu)選地，本發(fā)明脂質(zhì)體具有的反射率大于2dB，優(yōu)選從4dB到20dB。在此范圍內(nèi)，本發(fā)明脂質(zhì)體的最大反射率來自較大的脂質(zhì)體，較高的脂質(zhì)體濃度和/或使用較高的超聲波頻率。圖13圖示了未包裹任何藥物的，按真空干燥氣體滴注法制備的，其內(nèi)部基本上不含水的充氣脂質(zhì)體的dB反射率。優(yōu)選地，本發(fā)明脂質(zhì)體在約0.5mHz到約10mHz之間具有峰共振頻率。當(dāng)然，本發(fā)明氣體前體填充脂質(zhì)體和充氣脂質(zhì)體的峰共振頻率隨其直徑以及，在某種程度上，隨脂質(zhì)體彈性而變化，較大及彈性較強(qiáng)的脂質(zhì)體比較小彈性較強(qiáng)的脂質(zhì)體具有較低的共振頻率。
本發(fā)明脂質(zhì)體的穩(wěn)定性也具有非常實(shí)用的重要性。本發(fā)明類脂體比通過加壓或其它技術(shù)的已知方法制備的常規(guī)的液體的，含水的，和/或充氣的脂質(zhì)體具有更高的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性。例如，在形成72小時(shí)后，常規(guī)制備的含氣體的脂質(zhì)體通常基本上不含氣體，氣體已從脂質(zhì)體中滲出和/或脂質(zhì)體已經(jīng)破裂和/或融化，隨之導(dǎo)致了反射性的喪失。相反，本發(fā)明含治療劑的氣體前體填充脂質(zhì)體的儲(chǔ)存壽命期限超過約三周，優(yōu)選地儲(chǔ)存期限大于約四周，更優(yōu)選地儲(chǔ)存期限大于五周，還更優(yōu)選地儲(chǔ)存期限大于約三個(gè)月，通常儲(chǔ)存期限甚至更長(zhǎng)，如超過六個(gè)月，十二個(gè)月，甚至兩年。
該脂質(zhì)體另外一個(gè)令人意外的功能是在真空干燥氣體注入過程中，它可填充氣體并與恢復(fù)其原來的圓形，而不是如在先技術(shù)所可能導(dǎo)致的將其破裂成杯形結(jié)構(gòu)。見，例如，Crowe et al.，Archives of Biochemistry and Biophysics，Vol，220，99—477—484(1983)；Fukada et al.，J.Am.Chem.Soc.，Vol.，108，pp，2321—2327(1986)；Regem etal.，J.A m.Chem.Soc.，Vol.102，Pp.6638—6640(1980).
由本發(fā)明真空干燥氣體注入法制備的含治療劑的脂質(zhì)體也可按本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的任何常規(guī)脂質(zhì)體制備技術(shù)來制備。盡管可使用各種不同的技術(shù)，但優(yōu)選通過微乳化技術(shù)來制備含有治療劑的脂質(zhì)體。然后使用本發(fā)明真空干燥氣體滴注法將按常規(guī)方法制備的脂質(zhì)體制備成本發(fā)明的含治療劑的脂質(zhì)體。
可在使用本發(fā)明真空干燥注入法制備脂質(zhì)體的過程中使用的原料包括本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適用于脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的任何材料或其組合。
在氣體注入前可使用任何本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的常規(guī)脂質(zhì)體制備技術(shù)來制備脂質(zhì)體。這些技術(shù)包括冷凍—融化，以及超聲處理，螯合劑透析，勻漿，溶劑浸制，微乳化，自然形成，溶劑蒸發(fā)，F(xiàn)rench pressure cell technique，，受控洗滌劑透析及其它技術(shù)，各項(xiàng)技術(shù)都包括在含所需治療劑的溶液中制備各種形式的脂質(zhì)體。這樣可使該治療劑被包裹，絆纏或吸附在所得脂質(zhì)體中。兩者挑一地，可使用PH梯度技術(shù)將治療劑填充進(jìn)脂質(zhì)體，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，該技術(shù)特別適用于特殊PH下的蛋白鹽或脫蛋白鹽治療劑，見，例如，，Madden et a1.，Cehmistry and Physics of Lipids，1990，53，37—46，所有公開文獻(xiàn)在此作為整體收編為參考文獻(xiàn)。
對(duì)于真空干燥氣體注入法所用的含治療劑的脂質(zhì)體的制備，按一般工具書的方法，例如，可通過將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(二棕櫚酰卵磷脂)類脂懸浮于含有欲包裹的藥物的磷酸鹽緩沖的鹽水或水中，并將類脂加熱到約50℃，一個(gè)此二棕櫚酰磷脂酰膽堿類脂從凝膠態(tài)轉(zhuǎn)向液態(tài)所需的溫度410略高的溫度，以形成含治療劑的二棕櫚酰磷脂酰膽堿脂質(zhì)體。
脂質(zhì)體溶液保持50℃時(shí)，用手工輕輕地將脂質(zhì)體混合，可制備大小均勻地分布在2微米左右的多層微囊。然后將溫度降至室溫，而脂質(zhì)體保持完整。如果需要，可將二棕櫚酰磷脂酰膽堿脂質(zhì)體擠壓使其通過限定大小的聚碳酸酯濾器，使脂質(zhì)體的大小更均勻地分布。用于該方法的設(shè)備為裝有保溫筒的擠壓設(shè)備(Extruder DeviceTM，Lipex Biomembrances，Vancouver，Canada)，這樣可使擠壓在高于類脂膠態(tài)向液晶態(tài)轉(zhuǎn)變的相轉(zhuǎn)變溫度下方便地完成。
對(duì)于在水性介質(zhì)中不易溶解的親脂性治療劑可在形成脂質(zhì)體前將其與類脂本身結(jié)合。例如，兩性霉素可與無水類脂(例如。氯紡中的摩爾雙為8∶2的蛋磷脂和膽固醇并與類脂混合)一起被懸浮。然后蒸發(fā)氯紡(注意，基它合適的有機(jī)溶劑也可被使用，如乙醇或乙醚)并將含親脂性治療劑混合物的無水類脂再懸浮于如無菌水或生理鹽水的水性介質(zhì)中?？捎迷摲椒▽⒏鞣N親脂性藥物如皮質(zhì)類固醇結(jié)合進(jìn)脂質(zhì)體膜內(nèi)。然后將所得脂質(zhì)體干燥，進(jìn)行上述的真空氣體滴注法。
兩者挑一地，并按通常的指導(dǎo)方法，常規(guī)的冷凍一融化步驟可被用來制備寡層或單層二棕櫚酰磷脂酰膽堿脂質(zhì)體。冷凍—融化步驟之后，可對(duì)該脂質(zhì)體進(jìn)行上述的擠壓步驟。
然后，將如此制得的含治療劑的脂質(zhì)體進(jìn)行本發(fā)明的真空干燥氣體滴注過程，產(chǎn)生本發(fā)明含治療劑的真空干燥氣體滴注脂質(zhì)體，以及在其內(nèi)部基本上不含水的含治療劑溫度活化的氣體前體填充的脂質(zhì)體。按照本發(fā)明的方法，將含治療劑的脂質(zhì)體置于合適的容器使該脂質(zhì)體處于負(fù)壓下(即，減壓或真空條件下)，將負(fù)壓保持足夠的時(shí)間，以基本上除去脂質(zhì)體中的所有的水，結(jié)果得到實(shí)際上無水的類脂體。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，按本發(fā)明裝備后，各種不同的負(fù)壓都可被使用這是從脂質(zhì)體中除去基本上所有水的重要參數(shù)。一般地，將至少約700mmHg，優(yōu)選從約700mmHg到760mmHg的負(fù)壓(表壓)保持約24到72小時(shí)，以從脂質(zhì)體中除去基本上所有的水。根據(jù)本文的公開內(nèi)容，其它適當(dāng)?shù)膲毫统掷m(xù)時(shí)間對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。
最后，對(duì)脂質(zhì)體提供經(jīng)選擇的氣體，以使氣體注入脂質(zhì)體，直到壓力達(dá)到環(huán)境壓力，結(jié)果得到本發(fā)明含有藥物的真空干燥氣體注入的脂質(zhì)體，以及在內(nèi)部基本上不含水的含藥物的氣體前體填充類脂體。優(yōu)選地，氣體注入應(yīng)緩慢進(jìn)行，即注入時(shí)間至少為約4小時(shí)，最優(yōu)選約4到8小時(shí)。
可使用各種生物相容的氣體。這樣的氣體包括空氣，氮?dú)?，二氧化碳，氧氣，氬氣，氯氣，氖氣，氦氣或它們的任意及全部組合。其它合適的氣體為本領(lǐng)域技術(shù)人員所顯而易見，氣體的選擇僅受欲使用的脂質(zhì)體的限制。除這里公開的氣體前體之外，也可將該前體與其它氣體共同截留。例如，在含周圍氣體(如空氣)的密閉環(huán)境中氣體前體向氣體轉(zhuǎn)變過程中，兩種氣體可以混合，在微球體的攪拌和形成過程中，微球體所包含的氣體導(dǎo)致了兩種或多種氣體的混合物，這取決于被混合氣體的密度。
制備脂質(zhì)體的上述方法在下文中指的是真空干燥氣體注入法。
如果需要，在對(duì)脂質(zhì)體抽負(fù)壓前可將該脂質(zhì)體冷卻，而這種冷卻是優(yōu)選的。優(yōu)選地，在對(duì)脂質(zhì)體抽負(fù)壓前，將脂質(zhì)體冷卻到0℃以下，更優(yōu)選約-10℃到-20℃之間，最優(yōu)選-10℃。達(dá)到所需負(fù)壓時(shí)脂質(zhì)體溫度優(yōu)選地升到0℃以上，更優(yōu)選約10℃到20℃之間，最優(yōu)選10℃，直到實(shí)際上所有的水都已從脂質(zhì)體中除去，撤去負(fù)壓，使溫度恢復(fù)至室溫。
如果將脂質(zhì)體的溫度冷卻到0℃以下，那么用在冷凍保護(hù)劑存在下開始制備的脂質(zhì)體進(jìn)行真空干燥氣體注入過程，或者在進(jìn)行本發(fā)明的真空干燥氣體注入法之前加入冷凍保護(hù)劑都是優(yōu)選的。這樣的冷凍保護(hù)劑，不必強(qiáng)制性地加入，有助于低溫下保持脂質(zhì)體膜的完整，并也增強(qiáng)膜的極限穩(wěn)定性，優(yōu)選的冷凍保護(hù)劑為海藻糖，甘油，聚乙二醇(特別是分子量為400的聚乙二醇)，棉子糖，蔗糖和山梨醇，特別優(yōu)選海藻糖和聚乙二醇。
令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明脂質(zhì)體對(duì)壓力的變化具有高度的穩(wěn)定性。由于這種情況，可在需要時(shí)，在真空干燥及氣體滴注后將脂質(zhì)體壓出通過限定孔徑大小的濾器，得到相對(duì)均勻的限定孔徑大小的脂質(zhì)體。
本發(fā)明另一方面也提供了用于制備本發(fā)明含治療劑的真空干燥氣體滴注的脂質(zhì)體以及含治療劑的在其內(nèi)部基本上不含水的充氣脂質(zhì)體的設(shè)備。特別地，圖14顯示了真空干燥脂質(zhì)體并將氣體注入干燥的脂質(zhì)體的優(yōu)選設(shè)備。該設(shè)備包括裝含治療劑的脂質(zhì)體19的容器8。如果需要，該設(shè)備包括裝有干冰17，包圍容器8的冰浴5。冰浴5和干冰17使脂質(zhì)體被冷卻至0℃以下。真空泵1，通過導(dǎo)管15連接到容器8以提供持續(xù)的負(fù)壓，在優(yōu)選實(shí)施方案中，泵1可提供至少約700mmHg的負(fù)壓。優(yōu)選約700mmHg至760mmHg的負(fù)壓(表壓)。壓力計(jì)6連接在導(dǎo)管15上監(jiān)測(cè)提供給容器8的負(fù)壓。
為了防止從脂質(zhì)體中除去的水進(jìn)入泵1，一系列的阱被連到導(dǎo)管15以幫助收集從脂質(zhì)體吸出的水(和水蒸汽，統(tǒng)稱為水)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，兩個(gè)阱被應(yīng)用。第一個(gè)阱優(yōu)選地包括置于配有帶干冰17的冰浴4中的燒瓶7。第二個(gè)阱優(yōu)選地包括被管16螺旋環(huán)繞的柱3。柱3的頂端連接導(dǎo)管15而底端連接管16。管16的另一端連接導(dǎo)管15。如圖14所示。帶干冰17的冰浴2包圍著柱3和管16。如果需要，干冰17可用液氮，液化空氣或其他低溫物質(zhì)代替，冰浴2和4有助于收集水并將從脂質(zhì)體中吸出的水蒸汽冷凝收集在阱內(nèi)。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，冰阱2和4各保持在低于約-70℃的溫度下。
管塞14裝在容器8的上游導(dǎo)管15中以將選定的氣體從氣瓶18導(dǎo)入容器8并進(jìn)入脂質(zhì)體19中。
該設(shè)備也包含控制溫度的裝置以便該設(shè)備可保持在適于制備脂質(zhì)體的溫度。例如，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，脂質(zhì)體的制備在低于氣體前體的沸點(diǎn)下完成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，液態(tài)的氣體前體填充到脂質(zhì)體內(nèi)部空間。兩者挑一地，該設(shè)備可將溫度保持在氣體前體由液態(tài)向氣態(tài)的轉(zhuǎn)變溫度，以使氣體包含在脂質(zhì)體中。進(jìn)一步，在類脂體制備過程中，可調(diào)節(jié)該設(shè)備的溫度以使氣體前體作為液體開始，但是，作為氣體被結(jié)合進(jìn)所得脂質(zhì)體中。在此實(shí)施方案中，在脂質(zhì)體制備過程中設(shè)備的溫度被調(diào)節(jié)，使開始時(shí)的溫度低于相轉(zhuǎn)變溫度，隨后將溫度調(diào)節(jié)到接近氣體前體的相轉(zhuǎn)變溫度。
將含治療劑的脂質(zhì)體19置于本發(fā)明設(shè)備的容器8中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用干冰17將冰浴5中的脂質(zhì)體的溫度降低至0℃以下，更優(yōu)選在約-10℃到-20℃之間，最優(yōu)選-10℃。關(guān)閉管塞14和9，啟動(dòng)真空泵1。隨后小心地打開管塞10，11，12和13，使真空泵1對(duì)容器8抽真空。利用壓力計(jì)6測(cè)量壓力，直到負(fù)壓達(dá)到至少約700mmHg，優(yōu)選范圍為約700mmHg到760mmHg(表壓)之間。在優(yōu)選的本發(fā)明容器7的實(shí)施方案中，由使用干冰17的冰浴4冷卻7以及使用干冰17的冰浴2冷卻的柱3和盤管16，共同或單獨(dú)地從脂質(zhì)體中冷凝水蒸汽并收集液滴，以防止水和水蒸汽進(jìn)入真空泵1。在優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施方案中，冰阱2和4的溫度各保持在約-70℃以下。所需的負(fù)壓通常至少保持24小時(shí)，以便從容器8中的脂質(zhì)體19和容器3和7中的冰中除去水及水蒸汽。系統(tǒng)的壓力由壓力計(jì)6來測(cè)量，通常保持約24小時(shí)到72小時(shí)，在此時(shí)間內(nèi)，基本上所有的水都已從脂質(zhì)體中除去。這時(shí)，慢慢關(guān)閉管塞10并關(guān)閉真空泵1。隨后，逐漸打開管塞14，使氣體從氣瓶18通過管塞14經(jīng)導(dǎo)管15慢慢地導(dǎo)入系統(tǒng)，使氣體進(jìn)入容器8中的含治療劑的脂質(zhì)體19中。優(yōu)選地，氣體滴注的時(shí)間至少為約4小時(shí)，更優(yōu)選約4到8小時(shí)，直到系統(tǒng)的壓力達(dá)到環(huán)境壓力。
本發(fā)明含治療劑真空干燥氣體滴注的脂質(zhì)體和含治療劑的充氣脂質(zhì)體基本上可避免液體進(jìn)入其內(nèi)部，具有作為治療劑傳遞載體的優(yōu)越性。
根據(jù)本發(fā)明的方法制備的充氣脂質(zhì)體在某些方面，在物理性質(zhì)和功能方面，不同與現(xiàn)有技術(shù)中的脂質(zhì)體。例如，本發(fā)明的脂質(zhì)體實(shí)際上避免了水進(jìn)入其內(nèi)部。確切地講。現(xiàn)有技術(shù)中的脂質(zhì)體存在水介質(zhì)。例如，Dodand’s illustrated Med-ical Dictionary，p946，27th ed.(W.B，Saunders Company，Philadelphia 1988)。進(jìn)一步，本發(fā)明脂質(zhì)體令人驚奇地對(duì)超聲波具有強(qiáng)烈的回波發(fā)生特性，在該脂質(zhì)體峰值共振頻率易受超聲波影響而破裂，并具有長(zhǎng)的保存期限，特別有利于使用該脂質(zhì)體作為藥物傳遞系統(tǒng)。
因此，本發(fā)明設(shè)計(jì)的控制向患者局部傳遞治療劑的方法包括(1)對(duì)患者使用通過真空干燥氣體滴注法制備的并在其中密封著治療劑的充氣脂質(zhì)體，和/或基本上在其內(nèi)部避免液體存在的并在其中密封著治療劑的充氣脂質(zhì)體；(2)使用超聲波監(jiān)測(cè)脂質(zhì)體以確定氣體前體從液態(tài)向氣態(tài)的相轉(zhuǎn)變和測(cè)定該部位類脂體的存在；以及(3)使用超聲波破裂脂質(zhì)體，使治療劑在該部位釋放。
除這里詳述的用途外，本發(fā)明的脂質(zhì)體還有各種不同的用途。例如，包括作為超聲波熱增效劑和作為超聲波反射對(duì)比劑的用途。這些另外的用途和其它有關(guān)的物質(zhì)均為1991年6月18目的本申請(qǐng)人的專利申請(qǐng)，U.S.Serial No.716,793和U.S.Serial No.717,084中被描述并作為權(quán)利要求而提出，這里將其所公開的內(nèi)容作為一個(gè)整體收編為參考文獻(xiàn)。
在下列實(shí)施例中將進(jìn)一步描述本發(fā)明。實(shí)施例1和2為描述含治療劑的氣體前體填充微球體的制備，試驗(yàn)和使用的實(shí)際實(shí)施例。剩下所有實(shí)施例為預(yù)示性的。實(shí)施例3—21，描述含治療劑的氣體前體填充微球體的制備，試驗(yàn)和使用。實(shí)施例22—29說明在氣體存在下通過振蕩含類脂的水溶液而制備的氣體前體填充脂質(zhì)體的制備和試驗(yàn)。實(shí)施例30—36說明通過過濾和壓熱類脂懸浮液，接著振蕩該類脂溶液而制備的氣體前體填充脂質(zhì)體的制備及篩分。實(shí)施例37和38指示了含溫度活化的氣體前體填充脂質(zhì)體制備。下列實(shí)施例不應(yīng)被認(rèn)為是所附權(quán)利要求的范圍的限制。實(shí)施例1下面描述的方法說明治療劑如DNA可被截留在充滿氣體的微球體中。以及超聲波可被用來從填充氣體的微球體中釋放治療劑。如下所示，在接受相同能量的超聲波輻射后，截留有水和DNA的類脂體不能釋放該遺傳物質(zhì)。脂質(zhì)體中氣體的存在使超聲波能量得到更有效的捕獲，所以可用來釋放治療劑如遺傳物質(zhì)。
填充氣體的微球體按下述合成將純的二棕櫚酰磷脂膽堿(DPPC)，異丙醇極性類脂類(Avanti Polar Lipids)，雪花石膏，丙氯酸(Ala)懸浮于普通的鹽水中，然后使用Extrud-er Device(Lipex Bionenbran V ancourer，Canada)在800p.s.i通過2微米聚碳酸酯濾器(Nuclepore，Costar，Pleasanton，CA)壓出五次，然后按U.S.Serial No.716，89，filed 6/18/91所述將所得脂質(zhì)體減壓干燥，該文獻(xiàn)作為一個(gè)整體在此收編為參參文獻(xiàn)。徹底干燥后，將干燥的脂質(zhì)體按U.S.Serial No.716,899所述，慢慢地填充氮?dú)?。與環(huán)境壓力平衡后，將所得脂質(zhì)體懸浮于鹽水中(0.9％NaCl)并劇烈搖動(dòng)。
通過Coulter Counter(Bedfordshire England)試驗(yàn)所得充氣脂質(zhì)體的大小按Coulter Counter提供的參考手冊(cè)所述的校準(zhǔn)程序校準(zhǔn)儀器。將充氣脂質(zhì)體溶液用同中素II(Isoton II)稀釋并放置在玻璃容器中，在Coulter SamplingStand3檔攪拌。
首先使用100um孔徑管。用該孔徑管將500毫升溶液在各選擇的大小范圍試驗(yàn)一次，接著使用的是30μm孔徑管。用該管可將微球體篩分到約1μm，充氣微球體的平均直徑可在其中檢測(cè)。
將50毫升溶液試驗(yàn)一次，將微球體在各選擇的大小范圍計(jì)數(shù)。于Coulter Counter model ZM和Coulter CounterChannelyzer256收集數(shù)據(jù)。準(zhǔn)彈性光散射(QEL)和光顯微術(shù)也被使用。預(yù)定大小的乳液小球被用來校準(zhǔn)目鏡的柵格。這些柵格以10×，40×，100×，400×和1000×的倍率被校準(zhǔn)。然后將充氣微球體置于玻璃載片并在不同倍率下觀察。該技術(shù)不僅可以得到充氣脂質(zhì)體的大小，也可以得到類脂類微粒的大小。
使用Acoustic Imaging Model5200臨床超聲波設(shè)備(Acoustic Imaging Technologies Corp.Phoneix，AZ)和定制的臺(tái)面(bench top)設(shè)備的聲波能掃描充氣的脂質(zhì)體。臺(tái)面聲學(xué)實(shí)驗(yàn)室由Letroy 9410 Digital Oscilloscope(LecroyCorporation Corporate Headquartes，Chestnut Ridge，NY)，Panametrics model 5052 PR Pulser/Receiver(Panametrics，Inc.，Waltham，Mass)，具有2.25，3.5，5.0.7.5，和10.0MHz頻率的Panametrics浸沒式變送器(Panametrics，Inc.，Waltham，Mass)，和Testech，Inc.的校正系統(tǒng)(Testech，Inc.Exton，PA)組成一種參考標(biāo)準(zhǔn)，系列模擬模型(Tissue minicking phantom)，被用于建立延時(shí)補(bǔ)償(time—gain compensation)(TGC)并以此方式得到平均振幅。該系列模擬模型由Radiation Measurements，Inc。(Middleton，WI)制造。
如表III所示，在試驗(yàn)頻率范圍充氣脂質(zhì)體的反射率在這些實(shí)驗(yàn)使用的最高能量脈沖聲波下保持恒定。特別地，盡管掃描持續(xù)60分鐘，充氣脂質(zhì)體的dB反射率在4.5—8.4mW范圍的能量以及3.25mW/cm2的聲波強(qiáng)度((acousticImaging AI5200臨床超聲波機(jī)可產(chǎn)生的脈沖聲波的最高能量)下保持恒定。
表III充氣脂質(zhì)體反射率
用Rich—Mar Therapeutic ultrasound apparatus mod-el RM—25(Rich—Mar corp.，Inola，Ok)提供的超聲波能(表IV)持續(xù)照射充氣脂質(zhì)體溶液。表IV顯示了使用持續(xù)的超聲波產(chǎn)生的能量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)持續(xù)的超聲波能導(dǎo)致充氣脂質(zhì)體內(nèi)部的氣體從脂質(zhì)體逃逸，從而破裂脂質(zhì)體。在5瓦特功率及1MHz時(shí)完全破壞鹽水溶液中的充氣脂質(zhì)體需要大約20—30分鐘。在10瓦特及1MHz時(shí)，完全破壞充氣脂質(zhì)體大約需要5分鐘。在提供高能量前后通過光顯微術(shù)檢測(cè)充氣脂質(zhì)體，發(fā)現(xiàn)在照射后球形充氣脂質(zhì)體消失。
表IV持續(xù)超聲波的功率和強(qiáng)度
以系列實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)充氣微球體傳遞DNA的能力，按上述由DPPC制備脂質(zhì)體，只是在無水DPPC再懸浮時(shí)加入iCC生理鹽水中的，在7000bp質(zhì)粒上的2μgDNA(pCHl0pharmacia LKB，Biotechnoligy，Piscataway，NJ)然后按上述制備充氣脂質(zhì)體。在充氣脂質(zhì)體再懸浮后，外面的未截留的DNA可通過親合色譜法除去。將充氣脂質(zhì)體和DNA的懸浮液上柱(DNA specific Sephadex)用蠕動(dòng)泵(Econop-ump，Bib—Rad Laboratories，Hercules，CA)洗脫。DNA親合基質(zhì)結(jié)合并保留了未截留的DNA。充氣微球體洗脫出去。
也可按上述截留DNA的方法制備充水的脂質(zhì)體。只是省略了干燥氣體滴注的步驟。未截留的DNA經(jīng)層析而除去。然后將充氣脂質(zhì)體按上述進(jìn)行超聲波掃描。含DNA的充氣脂質(zhì)體對(duì)上述脈沖超聲波具相似的回波反應(yīng)，用上述持續(xù)的超聲波掃描后，微球體失去了其回波反應(yīng)性。
用持續(xù)的超聲波處理后通過碘化錠二聚物法檢定游離DNA(即，充氣脂質(zhì)體之外的DNA)并將其與含DNA的充氣類脂體(例如，未用持續(xù)的超聲波處理)的對(duì)照組比較。
首先，將2ml充氣微球體的等分試樣加入一支試管中。然后加入2mlPBS(磷酸鹽緩沖鹽水)并將該試管用帕拉膠膜密封。使試管倒置數(shù)次，并放置約5分鐘，接著分離微球體，然后用巴斯德吸移管以從試管中除去底部水層。將此程序重復(fù)三次以洗滌微球體。
接著，將2M1.05mg/ml DNA等分試樣加入微球體中，密封試管瓶倒置混合。放置約5分鐘后，用巴斯德吸移管抽提底部水層。然后加入2mlPBS等分試樣并重復(fù)洗滌未束敷的DNA。將此程序重復(fù)共五次，并將水層進(jìn)行掃描分析。
然后用2M1PBS稀釋微球體，使用超聲波，直到觀察不到充氣微球體的存在。
在使用超聲波檢測(cè)釋放的DNA后，將14ml濃度為2×10-5M的DMSO中的碘化錠二聚物(POPO—3碘化物，Molecular Probes，Inc.，Eugene，OR)。作為對(duì)照，將14ml碘化錠加入單一的PBS，以及0.25μg/ml的PBS中的DNA。
在Spex Flurolog 2 Spectrophotometer中使用534nm的激發(fā)頻率測(cè)量樣品的熒光。記錄558nm熒光發(fā)射，如下表V所示。通過基于對(duì)照的由PBS中碘化錠二聚物組成的PBS樣品的推斷，而測(cè)定各樣品中的DNA量的百分比。
表V
>洗滌過程可除去束敷的DNA。如表V所示，在五次洗滌后，充氣微球體仍含約21％的質(zhì)粒DNA。
因?yàn)榈饣V二聚物的螢光無明顯增強(qiáng)，未暴露在高能量超聲波下的含DNA的充氣微球體保持了大量的其內(nèi)部的DNA。但是，持續(xù)的超聲波照射后碘化錠的螢光顯著增強(qiáng)顯示持續(xù)的超聲波能導(dǎo)致了充氣微球體的DNA的大量釋放。因此，在使用超聲波前，DNA保留在微球體中。由于使用超聲波，截留的DNA被釋放。實(shí)施例2通過含磷脂酸和含氣體前體的脂質(zhì)體結(jié)合DNA。將7mM二硬脂酸—Sn—甘油基磷酸酯(DSPA)(Avanti PolarLipids，Alabaster，AL)懸浮于生理鹽水中，并在50℃渦旋。將該物質(zhì)冷卻至室溫，將40毫克pBA322質(zhì)粒DNA(Inter-national Biotechnologies Inc.New Haven，CT)加入類脂溶液中并輕輕搖動(dòng)。在Beckman TJ—6 Centrifuge)中將該溶液離心10分鐘。使使用Hoefer TKO—100DNA Fluo-rometer(Hoeter，San Francisco，CA)檢定DNA中的上層清液和沉淀。由于其使用間介的染料，對(duì)DNA特征的Hoechst 33258，檢測(cè)雙股DNA。令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，用磷脂酸制備的負(fù)電荷脂質(zhì)體結(jié)合了DNA。作為對(duì)照，使用中性脂質(zhì)體化合物DPPC重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。DPPC脂質(zhì)體中未檢測(cè)到DNA。使用由微球體中含87∶8∶5摩爾百分比的DPPC，DPPE—PEG500和DPPA的類脂混合物制備的充氣脂質(zhì)體重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)含二棕櫚酰磷脂堿的充氣脂質(zhì)體也結(jié)合了DNA。實(shí)施例3將一種陽(yáng)離子類脂，如DOTMA按1∶3體積摩爾比與DPPC混合，混合物溶于氯仿并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿。在此無水的材料中加入水并使用Extruder Device(LipexBiomembranes，Inc.，Vancourer，B，C)將此混合物壓濾過2μm濾器。然后按照申請(qǐng)于6/18/91的U.S.Serial No.717,084的方法制備帶正電荷的氣體前體填充脂質(zhì)體，該文獻(xiàn)作為整體在此收編為參考文獻(xiàn)。
通過加PBS，鹽水或其它合適的緩沖溶液(如HEPES緩沖液)將所得的干燥的，帶正電荷的氣體前填充脂質(zhì)體再水合；一種渦旋器可被用于保證混合的均勻。加入DNA并再次振蕩混合物。由于DNA結(jié)合在陽(yáng)離子氣體前體填充脂質(zhì)體表面，所以通過過濾或選擇性層析可除去未結(jié)合的DNA。到陽(yáng)離子類脂類被飽和為止，所有DNA實(shí)際上都結(jié)合上去。選擇性地，DNA可于在前的壓濾步驟中被加入接著進(jìn)行上述步驟。
然后將所得的DNA涂漬的脂質(zhì)體干燥并注入氣體前體產(chǎn)生含DNA的氣體前填充脂質(zhì)體。然后將所得脂質(zhì)體暴露于持續(xù)的超聲波并通過對(duì)超聲波的反射系數(shù)和吸收度試驗(yàn)脂質(zhì)體的破裂。
不論DNA被束敷在氣體前體填充脂質(zhì)體的里面還是外面，都可用聲波釋放遺傳物質(zhì)。氣體前體填充脂質(zhì)體外部的DNA的結(jié)合可允許微球體內(nèi)部有更大的空間以填充氣體。由于有效地增大了直徑，通?？筛行У厥褂贸暡芰繌奈⑶蝮w中釋放遺傳物質(zhì)。
可以相信，結(jié)合DNA的陽(yáng)離子類脂類具有優(yōu)越性，例如，當(dāng)聲能使脂質(zhì)體膜破裂時(shí)，疏水基幫助DNA進(jìn)入細(xì)胞，有助于通過細(xì)胞膜和亞細(xì)胞層。
上述陽(yáng)離子類脂類有具有中和DNA負(fù)電荷及兩親性的優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)這些陽(yáng)離子類脂類從脂質(zhì)體中釋放時(shí)，因?yàn)轭愔悶閮捎H的而細(xì)胞膜是可溶的，它們有助于促進(jìn)DNA進(jìn)入細(xì)胞以及亞細(xì)胞層實(shí)施例4制備由1∶2摩爾比的DOTMA和DPPC組成的氣體前體脂質(zhì)體并用編碼HLA(主要的組織相容性復(fù)合體)基因，HLA—B7的DNA涂漬。將涂漬DNA的脂質(zhì)體靜脈注射給患軟組織遷移性黑素瘤的患者。由于進(jìn)入患者體內(nèi)，氣體前體由液體轉(zhuǎn)變?yōu)闅怏w。將1.0兆赫的持續(xù)超聲波照射該軟組織使HLA—B7DNA在腫瘤上累積。可以相信某些腫瘤細(xì)胞將被HLA—B7基因傳染，導(dǎo)致可刺激病人T細(xì)胞排斥腫瘤的免疫反應(yīng)。實(shí)施例5對(duì)碎片腫瘤基因的反義低聚核苷酸被截留在由聚乙二醇二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺組成的脂質(zhì)體內(nèi)。將該脂質(zhì)體靜脈注射給轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌患者，由于進(jìn)入病人體內(nèi)，氣體前體由液體轉(zhuǎn)變?yōu)闅怏w。對(duì)轉(zhuǎn)移瘤提供1.0兆赫的持續(xù)超聲波能。
實(shí)施例6按上述使用卵磷脂酸膽堿和DOTMA，氯化N—[1—(2，3—二油酰氧)丙基]—N，N，N—三乙基銨制備氣體前體填充脂質(zhì)體，結(jié)合載有營(yíng)養(yǎng)不良基因的YAC表達(dá)媒介物。將該微粒體靜脈注射給Duchenne’s Muscular Dystrophy(or Becker’s MD)患者。對(duì)患者肌肉組織提供1.0兆赫持續(xù)的超聲波能量，可使肌肉的力量和質(zhì)量增加。
實(shí)施例7將YAC表達(dá)媒介物上的CFTR(囊纖維化轉(zhuǎn)移膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子)基因截留有1—氟丁烷氣體前體摩爾比的陽(yáng)離子類脂類和DPPC組成的微球體的微膠粒制劑。給囊纖維化患者靜脈注射該微球體并提供超聲波能量影響組織(例如，肺，胰；等)。由于達(dá)到患者的體溫，氣體前體由液體轉(zhuǎn)化為氣體?；颊叻握骋盒罘e減少，其它受影響的器官的功能也有提高。實(shí)施例8
給轉(zhuǎn)移性腎癌患者注射含DNA編碼白細(xì)胞介素—2(IL—2)基因的陽(yáng)離子微球體。監(jiān)測(cè)前體由液體向氣體的相轉(zhuǎn)為。用超聲波掃描病人腹部癌瘤。如微球體在腫瘤部位蓄積，來自腫瘤的反向散射及超聲波反射的頻譜諧波信號(hào)將有增加。增強(qiáng)超聲波能量，脈沖持續(xù)時(shí)間及脈沖重復(fù)頻率直到充氣微球體頻譜超聲波信號(hào)從腫瘤上消失。通過小心地控制能量，如用水聽器檢測(cè)，控制成腔。該處理的結(jié)果是IL—2基因轉(zhuǎn)染了一些腫瘤細(xì)胞。隨后T細(xì)胞淋巴細(xì)胞可對(duì)胞質(zhì)和浸潤(rùn)物反應(yīng)，摧毀腫瘤。實(shí)施例9給轉(zhuǎn)移腎癌患者注射傳遞DNA編碼腫瘤壞死因子(TNF)基因的的陽(yáng)離子微球體。監(jiān)測(cè)前體由液體向氣的相轉(zhuǎn)變。用超聲波掃描病人腹部腫瘤，微球體在腫瘤部位蓄積，來自腫瘤的反向散射及超聲波反射的頻譜諧波信號(hào)將有增加。增強(qiáng)超聲波能量，脈沖持續(xù)時(shí)間及脈沖重復(fù)頻率直互充氣微球體頻譜超聲波信號(hào)從腫瘤上消失。通過仔細(xì)地控制能量，如用水聽器檢測(cè)，控制成腔，該處理的結(jié)果是TNF基因轉(zhuǎn)染了一些腫瘤細(xì)胞。隨后腫瘤開始局部地產(chǎn)生TNF，并可導(dǎo)致大量凝固性壞死。實(shí)施10用抗腫瘤的單克隆(monoclonal)抗體制備由二棕櫚酰磷脂酰膽堿和結(jié)合DNA的陽(yáng)離子類脂類組成的微粒體。給轉(zhuǎn)移性黑素瘤患者靜脈注射涂漬抗黑素瘤抗原的單克隆抗體和含白細(xì)胞介素—2的微粒體。用診斷超聲波掃描患者并監(jiān)測(cè)前體由液體向氣體的轉(zhuǎn)變。軟組織中的腫瘤沉積物被充氣微球體反射為強(qiáng)光。當(dāng)用診斷超聲波檢測(cè)這些結(jié)時(shí)，將超聲波能量增加到5瓦特并聚焦于含腫瘤的轉(zhuǎn)移性沉積物。當(dāng)釋放能量時(shí)，檢測(cè)腫瘤的超聲波圖譜。當(dāng)反射由微球體定位的腫瘤的所有高頻譜信號(hào)消失時(shí)，將超聲波能量聚焦于具有指示微粒體的聲譜信號(hào)的新的腫瘤區(qū)。實(shí)施例11。
按照上述合成具有三種類型的表面結(jié)反義DNA的陽(yáng)離子充氣脂質(zhì)體。反義DNA為基因編碼c—myc，c—myb，平滑肌生長(zhǎng)因子，和肉皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子靶定位。將氣體前體填充脂質(zhì)體以動(dòng)脈內(nèi)給藥的形式傳遞到血管成型部位(an-gioplasty)。然后對(duì)血管成形部位提供5兆赫的持續(xù)超聲波，并檢測(cè)氣相的前體，可以相信由于微球體破裂而釋放反義RNA將改善內(nèi)皮功能，減少凝固傾向。實(shí)施例12將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(1克)，懸浮于10ml含阿霉素的磷酸鹽緩沖的鹽水中，將該混懸液加熱至50℃，然后用手在圓底燒瓶中回蕩約30分鐘。除去熱源，將混懸液再回蕩2小時(shí)，回蕩時(shí)使混懸液冷卻至室溫，以形成含藥物的脂質(zhì)體。
將制得的脂質(zhì)體放入與圖14相似的設(shè)備的容器中，冷卻至約10℃，然后對(duì)其抽真空。將脂質(zhì)體的溫度升至約10℃。高真空被保持48小時(shí)。48小時(shí)后，在四小時(shí)內(nèi)將由氣體前體提供的1—氟丁烷逐步注入該容器，4小時(shí)后，將壓力恢復(fù)到環(huán)境壓力。結(jié)果得到含藥物的真空干燥注入氣體的脂質(zhì)體，該充氣脂質(zhì)體在其內(nèi)部基本上避免了水的存在，然后將該脂質(zhì)體懸浮在10cc磷酸鹽緩沖的鹽水中，并渦旋10分鐘，然后在約4℃儲(chǔ)存約三個(gè)月。實(shí)施例13為試驗(yàn)實(shí)施例11的脂質(zhì)體的超聲波回聲，將250mg脂質(zhì)體樣品懸浮于300cc非脫氣的磷酸鹽緩沖的鹽水中。使用Acoustic Imaging Model5200掃描儀(Acoustic Imaging，Phoenix，AZ)并應(yīng)用測(cè)量dB反射率的系統(tǒng)試驗(yàn)軟件，在體外，于各個(gè)變化時(shí)間段內(nèi)，用7.5MHz變換器掃描類脂。
在試驗(yàn)類脂前用已知聲阻抗模型校準(zhǔn)該系統(tǒng)，該脂質(zhì)體顯示良好的dB反射率。實(shí)施例14將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(1克)和防凍海藻糖(Cry-oprorwctant trehalose)1克懸浮于10ml含兩性霉素—B藥物的磷鹽緩沖的鹽水，將此混懸液加熱到約50℃，然后用手在圓燒瓶中回蕩約30分鐘，除去熱源，將混懸液再回蕩2小時(shí)，回蕩時(shí)使混懸液冷卻至室溫，以形成脂質(zhì)體。
將制得的脂質(zhì)體真空干燥并注入氣體，大體上按實(shí)施例11所示的步驟進(jìn)行，得到含藥物的真空干燥的注入氣體的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體在其內(nèi)部基本上避免了水的存在。然后將該脂質(zhì)體懸浮在10cc磷酸鹽緩沖的鹽水中并渦旋，然后在4℃儲(chǔ)存約數(shù)星期。使用前，通過具有附加在中心軸上的濾器的濾管注射器將充氣脂質(zhì)體壓出10μm聚碳酸酯濾器(Nu-clepore，Costar，Pleasanton，CA)。
實(shí)施例15基本上按照實(shí)施例12的步驟試驗(yàn)實(shí)施例13脂體的超聲波回聲，該脂質(zhì)體顯示良好的dB反射率。實(shí)施例16將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(1克)懸浮于10ml含阿糖胞苷藥物的磷酸鹽緩沖的鹽水中，將該混懸浮加熱到50℃，然后用手在圓底燒瓶中回蕩約30分鐘，通過具有加熱套筒的擠壓設(shè)備((extruder Device TM，Lipex Biomembranes，VAn-couver，Canada)將混懸浮液壓出五個(gè)周期，擠壓前可進(jìn)行或不進(jìn)行常規(guī)的凍融處理，壓出期間保持約50℃的溫度。除去熱源.將混懸液再回蕩2小時(shí)，回蕩時(shí)使混懸液冷卻至室溫，以形成脂質(zhì)體。
基本上按照實(shí)施例11所示的步驟，將所制備的脂質(zhì)體真空干燥并滴注氣體，得到含藥物的真空干燥的滴注氣體的脂質(zhì)體。該充氣脂質(zhì)體在其內(nèi)部基本上避免了任何水的存在。該脂質(zhì)體然后懸浮在10cc磷酸鹽緩沖的鹽水中，在約4℃儲(chǔ)存數(shù)周。實(shí)施例17基本上按照實(shí)施例12的步驟試驗(yàn)實(shí)施例15的超聲波回聲。該脂質(zhì)體顯示良好的DB反射率實(shí)施例18為了試驗(yàn)本發(fā)明含藥物脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，用手將實(shí)施例11的脂質(zhì)體混懸浮通過如圖10所示的注射管中的10微米聚碳酸酯濾器。壓出處理后，按實(shí)施例12所述研究脂質(zhì)體的超聲波回聲。令人驚奇地，本發(fā)明脂質(zhì)體在壓出后仍基本上保持其回波產(chǎn)生。實(shí)施19使用振子頻率為3到7.5mHz的超聲波掃描實(shí)施例11的類脂體。結(jié)果顯示，在超聲波的高頻，回波產(chǎn)生更迅速地減弱，反映了相對(duì)高的共振頻率以及與較高頻率有關(guān)的較高能量。實(shí)施例20給癌癥患者靜脈注射包含藥物的真空干燥氣體滴注脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體基本上避免了其內(nèi)部的水，含于脂質(zhì)體的藥物是阿霉素。靜脈注射時(shí)通過自動(dòng)程序?qū)δ[瘤進(jìn)行超聲波掃描，并測(cè)定脂質(zhì)體的共振頻率，然后在脂質(zhì)體峰共振頻率將超聲波能量聚焦于腫瘤。超聲波能量不足以導(dǎo)致明顯的組織熱(即，無大于2℃的溫度變化)，但該超聲波能量足以導(dǎo)致腫瘤部位的脂質(zhì)體爆裂并釋放阿霉素。這樣，使用類脂體與超聲波完成了局部藥物傳遞。實(shí)施例21給嚴(yán)重的局部真菌感染的病人靜脈注射包含藥物的真空干燥滴注氣體的脂質(zhì)體的藥物。該充氣脂質(zhì)體其本上避免了基內(nèi)部的水，以基本上與實(shí)施10所述相似的方式使用超聲波完成局部藥物傳遞。含于脂質(zhì)體的藥物兩性霉素—B被有效地傳遞到感染部位。實(shí)施例22為了制備前體填充的脂質(zhì)體，將50mg1，2—棕櫚?！猄n—甘油基—3—膽堿磷酸(MW734.05，粉末，Lot No.160pc—183)(Avanti—Polar lipids，Alabaster，AL)稱重并用5.0ml鹽水(0.9％NaCl)或磷酸鹽緩沖的鹽水(0.8％Na-Cl，0.8％KCl，0.115％磷酸二鈉和0.002％磷酸一鉀，PH調(diào)節(jié)到7.4)，165μL1—氟丁烷，在離心管中水合。然后，將水合混懸液置于渦旋機(jī)(Soientific Industries，Bohemia，NY)中，在儀器6.5位振蕩10分鐘，然后記下12ml的總體積。鹽水溶液由5.0ml減少到約4ml。
然后通過光學(xué)顯微鏡測(cè)量經(jīng)這種新方法制備的氣體前體填充微球體的大小。發(fā)現(xiàn)最大的脂質(zhì)體約50到約60μm，而最小的約8μm，平均大小范圍為約15到約20μm。
然后通過10或12μm″NUCLEPORE″膜，使用Swin—Lok Filtration Products，Costar Corp.，Cambridge，NA)和20cc注射器(Becton Dickinson&Co.，Rutherford，NJ)過濾該氣體前體填充的脂質(zhì)體。濾膜為10或12μm″NU-CLEPORE″膜(Nuclepore Filtration Productsm CostarCorp.，Cambridge，MA)。將10.0μm濾器安裝在Swin—Lok Filter Holder，并安全地將蓋上緊。將脂質(zhì)體溶液振蕩并經(jīng)18號(hào)針(gauge needle)注入20cc注射器。大約12ml脂質(zhì)體溶液被置于注射器中，并將注射器擰到Swin—Lok Fil-ter Molder上。顛倒注射器和濾器支持物，以使較大的充氣脂質(zhì)體囊升至頂部。慢慢地推上注射順，以這種方式過濾充氣脂質(zhì)體。
通過10.0um濾器壓出充氣脂質(zhì)體的殘存率(擠壓過程后保存的充氣脂質(zhì)體時(shí))約為83—92％。壓出前，泡沫狀物的體積約為12ml而水溶液的體積約為4ml。壓出后，泡沫狀物的體積為10—11ml而水溶液的體積約為4ml。
再用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)壓出后充氣脂質(zhì)體大小的分配。檢測(cè)范圍為約25到約30μm的最大脂質(zhì)體和約5μm的最小脂質(zhì)體。平均大小的范圍為約8到約15um。
已發(fā)現(xiàn)過濾后，90％以上的充氣脂質(zhì)體小于15U m。實(shí)施例23將50mg1，2—二棕櫚?！猄n—甘油基—3—膽堿磷酸(MW723.05，粉末)(Avanti—Polar Lipids，Alabaster，AL)稱重并放入離心管中，然后用5.0ml鹽水溶液(0.9％NaCl)水合該類脂。將該類脂在儀器6.5檔渦旋10分鐘。渦旋后，將全部溶液在液氮中冷卻。然后將樣品放在冷凍干燥器中冷凍干燥。樣品在冷凍干燥器放置18小時(shí)。從冷凍干燥器中取出干燥的類脂并在5ml鹽水溶液中再水合，在6.5檔渦旋十分鐘。將該溶液的少量樣品移在載玻片上并在顯微鏡下觀察該溶液。然后測(cè)量充氣脂質(zhì)體的大小。檢測(cè)到最大的脂質(zhì)體約60μm，而最小的約20μm，平均大小范圍約30到約40μm實(shí)施例24將50mg1，2—二棕櫚?！猄n—甘油基—3—膽堿磷酸(MW734.05，粉末)(Avanti—Polar Lipids，Alabastar，AL.)稱重并放入離心管中，以盤卷的方式將大約兩英尺的膠管(6.25in.內(nèi)徑)繞在圓錐形離心管上。然后用絕緣膠布將膠管固定在離心管上。將膠管與恒溫循環(huán)浴(NWR Scien-tific Model1131)連接，該浴的溫度固定于60℃，循環(huán)水在管內(nèi)高速循環(huán)。在類脂溶液中放入溫度計(jì)。測(cè)得溫度在42℃和50℃之間，這是類脂的相轉(zhuǎn)變溫度。
將該類脂溶液在渦旋儀6.5檔渦旋10分鐘。顯然，很少類脂(相轉(zhuǎn)變溫度＝41℃)的泡沫未明顯地形成充氣脂質(zhì)體。光學(xué)顯微鏡中可明顯地看到溶液中大量類脂微粒。在此溫度下形成的充氣脂質(zhì)體的數(shù)量比在低于相轉(zhuǎn)變溫度的溫度下形成的數(shù)量少3％。將該溶液放置15分鐘至到溶液溫度與室溫(25℃)平衡。然后將溶液渦旋10分鐘。10分鐘后，充氣脂質(zhì)體明顯地形成。實(shí)施例25將50mg1，2—二棕櫚酰—Sn—甘油基—3—膽堿磷酸(MW734.05，粉末)(Avanti—Polar Lipids，Alabastar，A1.)稱重并放入離心管中。然后用5.0ml的0.9％NaCl水合該類脂。將類脂水溶液在渦旋器6.5檔渦旋10分鐘。渦旋后，將全部溶液在液氮中冷卻。然后將其在室溫(25℃)的水浴中融化。將冷凍熔化步驟重復(fù)八次。將水合的混懸液在渦旋儀6.5檔渦旋10分鐘。然后按實(shí)施21所述方法檢測(cè)充氣脂質(zhì)體。
實(shí)施例26準(zhǔn)備兩只離心管，各裝有50mgDPPC，將1mol％(～0.2mg of Duponol C lot No.2832)十二烷基硫酸鈉，一種乳化劑加入一只離心管中，在另一只離心管中加入10mol％(2.0mg of Duponol C lot No.2832).在兩只離心管中各加入5ml 0.9％NaCl。將兩只離心管都在液氮中冷卻冷凍干燥大約16小時(shí)。從冷凍干燥器中取出兩個(gè)樣品并各加5ml鹽水在6.5檔將兩離心管渦旋10分鐘。
經(jīng)測(cè)定，另1mol％十二烷基硫酸鈉形成的最大的充氣脂質(zhì)體約為75μm，而最小的約6μm。平均大小范圍為約15到40μm。加10mol％十二烷基硫酸鈉形成的最大充氣脂質(zhì)體約為90μm，而最小的約為6μm。平均大小的范圍為約15到約35μm。
含加入1mol％十二烷基硫酸鈉形成的充氣脂質(zhì)體的溶液的泡沫體積約為15ml。而水溶液體積約為3—4ml。含加入10mol％十二烷基硫酸鈉形成的充氣脂質(zhì)體的溶液的泡沫的體積也約為15ml而水溶液的體積也約為3—4ml。實(shí)施例27這個(gè)實(shí)施例測(cè)定是否可用聲能來制備充氣脂質(zhì)體。將50mg類脂，1，2—二棕櫚?！猄n—甘油基—3—膽堿磷酸(Avanti—Polar Lipids，Alabaster，A1)，稱重并用5m10.9％NaCl水合。使用Heat System Sonicator Ultrasonic Pro-cessor XL(Heat Systems，Inc.Farmigdale，NY)ModelXL2020向該水溶液發(fā)射聲能以代替渦旋。調(diào)節(jié)鈕位于4的聲波發(fā)生器發(fā)射頻率為20kHz連續(xù)聲波。使用一個(gè)微嘴(Micro tip)進(jìn)行聲波掃描10分鐘。聲波掃描后，在光學(xué)顯微鏡下觀察該溶液。充氣脂質(zhì)體已被制備。
接著除去微嘴，將其用超聲波發(fā)生器的端套代替。制備另一種溶液(每5ml鹽水50mg類脂)并用該嘴進(jìn)行聲波掃描。10分鐘后在顯微鏡下觀察溶液未發(fā)現(xiàn)充氣脂質(zhì)體。實(shí)施例28這個(gè)實(shí)施例測(cè)定是否有中止充氣脂質(zhì)體產(chǎn)生的類脂的低濃度限度。將10mg1，2—二棕櫚?！猄n—甘油基—3—膽堿磷酸(Avanti—Polar LIpids，Alabaster，Al)加入10ml鹽水溶液(0.9％NaCl)中。在6.5檔將類脂/鹽水溶液渦旋10分鐘。光學(xué)顯微鏡下觀察溶液的篩分。測(cè)定的最大脂質(zhì)體的大小的范圍為約30到約45μm而最小類脂體的大小為約7μm。平均大小范圍為約30到45μm。
顯然，由于該充氣脂質(zhì)體更易破裂，因此它們比前述的脂質(zhì)體更易碎。因此，類脂的濃度顯然是充氣脂質(zhì)體產(chǎn)生和穩(wěn)定性的一個(gè)因素。實(shí)施例29將未過濾的充氣脂質(zhì)體倒入50ml注射器中并通過串聯(lián)間距最小為150μm的，如圖11和12所示的″NUCLE-PORE″10um濾器和8μm濾器。兩者挑一地，例如，樣品也可通過相互緊密重迭的10μm和8μm濾器過濾。充氣脂質(zhì)體在使流速為20ml/min的壓力下通過濾器。然后，測(cè)量隨后過濾的充氣脂質(zhì)體以得到未過濾體積的80—90％中充氣類脂微球體的量。
以四種不同的方法篩分所得充氣脂質(zhì)體的以測(cè)量其大小和分布。篩分是在Particle Sizing Systems Model770光學(xué)篩分儀，與Universal Imaging制造的圖形處理軟件聯(lián)接的Zeiss Axiplan光學(xué)顯微鏡，和Coulter Counter(CoulterElectronics Limited，Luton Beds，England)上完成的。如圖15和圖16所示，該充氣脂質(zhì)體的大小比未過濾的脂質(zhì)體更均勻地分布在8—10μm。因此，經(jīng)過濾的充氣脂質(zhì)體具有更均勻的大小。實(shí)施例30將250mgDPPC(二棕櫚酰磷脂酰膽堿)和10m10.9％NaCl加入一只50ml Falcon離心管(Becto Dickinson，Lin-coln Park，NJ)中并保持室溫(大約20℃)。然后在氮?dú)鈮毫ο聦⒒鞈乙簲D壓通過1μm″NULEEPORE″(Costar.Plea-sonton，CA)聚碳酸酯膜。將所得混懸液用Particlc SizingSystems(Santa Barbara CA)Model370激光散射篩分儀篩分。所有類脂微粒的平徑外直徑為1μm或小于1μm。另外在18000p.s.i的壓力下將相同量的DPPC混懸液通過Mi-crofluidicsTM(Microfluidics Corporation Newton，MA)微流化器五次，將變得明亮的混懸液用Particle Sizing Systems(Santa Barbara，CA)Sub Particle Sizer Model310激光散射篩分儀篩分，發(fā)現(xiàn)其大小的均小于1μm。已知流化的混懸液的微粒大小可保持穩(wěn)定達(dá)六個(gè)月。實(shí)施例31將100mgDSPC(二硬脂酰磷酯酰膽堿)和10ml0.9％NaCl加入50ml Falcon離心管(becton—Dickinson，Lin-coln Park NJ)中。在300—800p.s.i.的氮?dú)鈮合聦⒒鞈乙簤撼鐾ㄟ^1um″NUCLEPORE″(Costar，Pleasanton，CA)聚碳酸酯膜。將所得的混懸液用Particle Sizing Systems(San-ta Barbara，CA)Sub Micron Particle Sizer Model370激光散射篩分儀篩分。發(fā)現(xiàn)所有微粒為1μm或更小。
另外，在18000p.s.i.的壓力下將相同量的DPPC混懸液通過MicrofluidicsTM(Microfludics Corporatic Newton，MA)微流化器五次。將變得明亮的混懸液用Sub MicronParicle Sizer System Model370激光散射篩分儀篩分，發(fā)現(xiàn)其大小均勻地小于1μm。
將實(shí)施例29和30的先篩的混懸液在Barnstead Model(57835)壓熱器(Barnstead/Thermolyen；Pubnqn IA)中壓熱。與室溫平衡后，滅菌的混懸液用于氣體的注入。實(shí)施例33將預(yù)先被壓出通過1μm濾器并壓熱二十分鐘的10ml25mg/ml 1，2，—二棕櫚酰磷脂酰膽堿在0.9％NaCl中的溶液加入Falcon 50ml離心管(Becton Dickins on LincolnPark，NJ.)中。類脂混懸液與室溫(大約20℃)平衡后，將此液體在VWR Genie—2(120V.0.5amp，60Hz)Scientific In-dustries，Inc.Bohenia)渦旋10分鐘，直到充氣脂質(zhì)體總體積至少為原來類脂水溶液體積的二或三倍。瓶底的溶液幾乎完全沒有無水類脂微粒，得到大量充氣脂質(zhì)體的泡沫。因此，預(yù)先壓熱不影響類類脂體的能力。壓熱不改變脂質(zhì)體的大小，不降低類脂混懸液形成充氣脂質(zhì)體的能力。實(shí)施例34將預(yù)先被壓出通過1um濾器并壓熱二十分鐘的10ml25mg/ml的1，2—二棕櫚酰磷酰膽堿在0.9％NaCl中的溶液加入Falcon 50ml離心管中(Becton—Dickinson，LincolnNJ)。類脂混懸液與室溫(大約50℃)平衡后。將離心管垂直放入V WR Scientific Orbital振蕩器(VWRScientific，Cer-riaos，CA)中。在300r.p.m檔振蕩30分鐘，在振蕩器臺(tái)上攪拌得到充氣脂質(zhì)體。實(shí)施35將預(yù)先被擠壓通過1μm過濾器并壓熱二十分鐘的10ml 25mg/ml的1，2—二棕櫚酰磷脂酰膽堿在0.9％NaC1中的溶液加入Falcon 50ml離心管(Becton—Dickinson，Lincoln Park，NJ)中，類脂混懸液與室溫(大約20℃)平衡后，將離心管固定在1加侖圓的家用噴涂器中，隨后放在機(jī)械噴涂混合器中作15分鐘的旋轉(zhuǎn)。渦旋混合后，取出離心管，顯然，充氣脂質(zhì)體已形成。實(shí)話例36將預(yù)先被壓出通過1μm濾器并壓熱二十分鐘的10ml25mg/ml的1，2—二棕櫚酰磷酰膽堿在0.9％NaCl中的溶液加入FAlcon 50ml離心管中(Becton—Dickinson，Lin-coln Park，NJ)中。類脂類混懸液與室溫(大約20℃)平衡后。用手將離心管有力地振蕩十分鐘。振蕩停止后，充氣脂質(zhì)體形成。實(shí)施例37按實(shí)施例32所述由DPPC制備充氣脂質(zhì)體。將所得未過濾的脂質(zhì)體倒入50ml注射器并由″NUCLEPORE″(costar，Pleasanton，CA)10μm濾器以150μm的間隔接著8μm濾器的階式過濾系統(tǒng)壓出。另外，對(duì)分離的樣品使用相互鄰疊的10um和8μm濾器裝配。充氣脂質(zhì)體在使其過濾速度為2.0ml/min的壓力下通過濾器。過濾過的充氣脂質(zhì)體的體積為未過濾的體積的80—90％。
以四種不同的方法篩分所得充氣脂質(zhì)體的測(cè)量其大小分布。篩分是在Particle sizing Systems(Santa Barbara，CA)Model770光學(xué)篩分儀，與Universal Imaging(Univer-sal Imaging West Chester)制造的圖形處理軟件聯(lián)接的Zeiss Axiplan光學(xué)顯微鏡和Coulter Counter(CoulterElectronics Limited，Lnton，Beds，England，上完成的。如圖18所示，該充氣脂質(zhì)體的大小比未過濾的脂質(zhì)體更一致地分布在8—10μm。實(shí)施38本實(shí)施例包括可在體溫為37℃或310°K的人體血液中形成10微米直徑的氣體微球體的微球體的制備。在一大氣壓下，填充10微米直徑微球體的體積需要7.54×10-17摩爾的氣體前體。
分子量為76.11，沸點(diǎn)為32.5℃，20℃時(shí)密度為6.7789克/mL的1—氟丁烷可被用作氣體前體。填充10微米直徑的微球體需要5.74×10-15克該前體。根據(jù)1—氟丁烷的密度，形成上限為10微米的微球體需要8.47×10－16mL的液態(tài)前體。
制備上限為10微米的微球體需要半徑為0.0272微米或直徑為0.0544微米的氣體前體液滴的乳液。通過使用大小適當(dāng)?shù)臑V器可容易地達(dá)到這樣的特定大小乳液。另外，由于可以知道形成規(guī)定大小的氣體前體液滴所需的濾器的大小，那么該濾器也可除去可能的細(xì)菌污染物，因此，它也能被用于滅菌過濾。
就產(chǎn)生10μm直徑微球體所需的液態(tài)前體1—氟丁烷液滴來說，多層穩(wěn)定的脂質(zhì)體層狀結(jié)構(gòu)可增加有效的大小為約0.0544μm到約0.1344μm的微粒或液滴。這樣大小的液滴可容易地通過0.22μm濾器。體內(nèi)的相轉(zhuǎn)變后，多層形式的氣體前體填充微球體可變?yōu)閱螌踊蚬褜游⑶蝮w。由于雙層涂希而對(duì)最終允氣脂質(zhì)體大小影響最小?？蛇x擇類脂雙層使類脂從凝膠態(tài)向液晶態(tài)的相轉(zhuǎn)變與氣體前體的沸點(diǎn)相配。這樣，類脂層將更容易促進(jìn)微球體膨脹。實(shí)施例39氣體前體，1—氟丁烷，或被截留在脂質(zhì)體中，當(dāng)溫度升高時(shí)，得到脂質(zhì)體中截留的氟丁烷氣體。氣體前體，1—氟丁烷，可被懸浮于含有乳化劑和穩(wěn)定劑如甘油或丙二醇的含水混懸液中并在商品渦旋儀中渦旋。渦旋在保持氣體前體為液態(tài)的低溫下開始并在可在越過由液態(tài)到氣態(tài)的相轉(zhuǎn)變溫度的溫度下繼續(xù)進(jìn)行。這樣，前體在微乳化過程中轉(zhuǎn)變成氣態(tài)。在適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑存在下，令人驚奇地得到了穩(wěn)定的氣體微球體。實(shí)施例40用六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷，八氟—2—丁烯或六氟丁—1，3—二烯或八氟環(huán)戊烯順序代替1—氟丁烷進(jìn)行與實(shí)施例39相同的實(shí)驗(yàn)，都用于氣體前體填充脂質(zhì)體的制備。
除這里顯示和描述的以外的本發(fā)明的各種修進(jìn)，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，由上述是顯而易見的。這樣的修進(jìn)也落入附加的權(quán)利要求的范圍。
權(quán)利要求
1.一種靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)，包括溫度活化的氣體前體填充的微球體，其中所述的氣體前體填充的微球體包括治療化合物。
2.權(quán)利要求1的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)，其中微球體包括選自以下物質(zhì)的氣體前體氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯，六氟丙酮，異丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，環(huán)丁烷，甲基環(huán)丁烷，八氟環(huán)丁烷，全氟環(huán)丁烯，3—氯環(huán)戊烯，環(huán)丙烷，1，2—二甲基環(huán)丙烷，1，1—二甲基—環(huán)丙烷，乙基環(huán)丙烷，甲基環(huán)丙烷，丁二炔，3—乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲胺，二甲基乙胺，雙(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊環(huán)—2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷，一亞硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二氟亞硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝基甲烷，三氟亞硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷，三氟甲基亞磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基異丙基醚，乳酸甲酯，亞硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧化二氮，2—羥基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(順式)，2—戊烯(反式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯鄰苯二甲酸，2，3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—環(huán)氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷，七氟—1—亞硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙腈，三氟甲基過氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化鎢，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，包括由選自下列物質(zhì)組成的類脂脂肪酸類；溶血類脂類；卵磷脂(磷脂酰膽堿)；二油酰基卵磷脂；二肉豆蔻酰基卵磷脂；二(十五?；?卵磷脂；二月桂?；蚜字欢王；蚜字欢貦磅；蚜字?；二硬脂?；蚜字?；磷脂酰乙醇胺；二油?；字Ｒ掖及罚涣字＝z氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神經(jīng))鞘脂類；(神經(jīng))鞘磷脂；糖脂(glycolipids)；神經(jīng)節(jié)苷脂GM1；神經(jīng)節(jié)苷脂GM2；糖脂類(glucolipids)；硫苷脂類；糖基鞘脂類；磷脂酸；棕櫚酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚合物如聚乙二醇，幾丁質(zhì)，透明質(zhì)酸或聚乙烯吡咯烷酮的類脂類；含磺?；瘑巍?，雙—，寡—或多糖類的類脂類；膽甾醇；膽甾醇硫酸酯；膽甾醇半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；連接醚和酯的脂肪酸的類脂類，聚合類脂類，二乙酰基磷酸酯，硬脂酰胺，心磷脂，具有短鏈長(zhǎng)為6—8個(gè)碳原子脂肪酸的磷脂類，具有不對(duì)稱酰基鏈的合成磷脂類，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘油酯，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—膽甾烯—3β—基氧己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酸；N—[12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八?；鵠—2—氨基棕櫚酸；膽甾烯基—4′—三甲銨丁酸鹽；N—琥珀酰基二油?；字Ｒ掖及?；1，2—二油?；猻n—甘油；1，2—二棕櫚?；猻n—3—琥珀?；视?；1，3—二棕櫚?；?—琥珀?；视停?—十六烷基—2—棕櫚酰基甘油磷(酸)乙醇胺；棕櫚?；甙腚装彼?；和/或它們的組合；月桂基三甲基溴化銨，十六烷基三甲基溴化銨，肉豆蔻基三甲基溴化銨，烷基二甲基芐基氯化銨，芐基二甲基十二烷基溴化銨，芐基二甲基十六烷基溴化銨，芐基二甲基十四烷基溴化銨，十六烷基二甲基乙基溴化銨，或十六烷基溴化吡啶鎓五氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，全氟dodecalin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁銨以及進(jìn)一步包括含由共價(jià)鍵鍵合聚合物的類脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的聚合物的分子量在400到200,000之間。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的聚合物的分子量在1,000到20,000之間。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的治療劑傳遞系統(tǒng),其中所述的聚合物的分子量在2,000到8,000之間。
7.根據(jù)權(quán)利要求3的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中含由共價(jià)鍵鍵合聚合物的類脂由式XCHY—(CH2)n—O—(CH2)n—YCHX組成，其中的X為醇基團(tuán)，Y為OH或烷基以及n為0到10,000。
8.根據(jù)權(quán)利要求3的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的聚合物選自聚乙二醇，聚乙烯吡咯咯烷酮，聚乙烯醇和聚丙二醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求3的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物為聚乙二醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求3的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的類脂的摩爾數(shù)占約1％到約20％。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，包括鹽水，甘油和丙二醇組成的混合類脂溶劑系統(tǒng)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，脂肪酸類；溶血類脂類；卵磷脂(磷脂酰膽堿)；二油?；蚜字?；二肉豆蔻?；蚜字?；二(十五酰基)卵磷脂；二月桂?；蚜字?；二油?；蚜字?；二棕櫚?；蚜字欢仓；蚜字涣字Ｒ掖及?；二油?；字Ｒ掖及?；磷脂酰絲氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神經(jīng))鞘脂類；(神經(jīng))鞘磷脂；糖脂(glycol-ipids)；神經(jīng)節(jié)苷脂GM1；神經(jīng)節(jié)苷脂GM2；糖脂類(glucol-ipids)；硫苷脂類；糖基鞘脂類；磷脂酸；棕櫚酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚合物如聚乙二醇，幾丁質(zhì)，透明質(zhì)酸或聚乙烯吡咯烷酮的類脂類；含磺?；瘑巍p—，寡—或多糖類的類脂類；膽甾醇；膽甾醇硫酸酯；膽甾醇半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；連接醚和酯的脂肪酸的類脂類，聚合類脂類，二乙酰基磷酸酯，硬脂酰胺，心磷脂，具有短鏈長(zhǎng)為6—8個(gè)碳原子脂肪酸的磷脂類，具有不對(duì)稱?；湹暮铣闪字?，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘油酯，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—膽甾烯—3β—基氧己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酸；N—[12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八?；鵠—2—氨基棕櫚酸；膽甾烯基—4′—三甲銨丁酸鹽；N—琥珀酰基二油酰基磷脂酰乙醇胺；1，2—二油?；猻n—甘油；1，2—二棕櫚?；猻n—3—琥珀?；视?；1，3—二棕櫚?；?—琥珀?；视?；1—十六烷基—2—棕櫚?；视土?酸)乙醇胺；棕櫚?；甙腚装彼幔缓?或它們的組合；月桂基三甲基溴化銨，十六烷基三甲基溴化銨，肉豆蔻基三甲基溴化銨，烷基二甲基芐基氯化銨，芐基二甲基十二烷基溴化銨，芐基二甲基十六烷基溴化銨，芐基二甲基十四烷基溴化銨，十六烷基二甲基乙基溴化銨，或十六烷基溴化吡啶鎓五氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，鎓dodecalin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁銨以及進(jìn)一步包括含凈負(fù)電荷的類脂。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的含凈負(fù)電荷類脂包括磷脂酸和磷脂酰甘油。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的含凈負(fù)電荷的類脂包括磷脂酸。
15.根據(jù)權(quán)利要求12的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的含凈電荷的類脂摩爾數(shù)約占1％到20％。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，進(jìn)一步包括一種或多種粘性活性化合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的粘性活性化合物選自醇類，聚醇類，丙二醇，甘油，山梨醇，纖維素，甲基纖維素，黃原膠，羥甲基纖維素，碳水化合物類，磷酸化的碳水化合物類，以及磺化碳水化合物類。
18.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，進(jìn)一步包括一種或多種選自下列組成的乳化劑阿拉伯膠，膽甾醇，二乙醇胺，單硬脂酸甘油酯，羊毛脂醇類，卵磷脂，單甘油酯，雙甘油酯，單乙醇胺，油酸，油醇，poloxamer，硬脂酸—50—聚氧乙烯酯，聚烴氧基—35—caster油，聚烴氧基—10—油基醚，聚烴氧基—20—十六烷基硬脂?；?，硬脂酸—40—聚烴氧基酯，聚山梨酸酯20，聚山梨酸酯40，聚山梨酸酯60，聚山梨酸酯80，二乙酸丙二醇酯，單硬脂酸丙二醇酯，月桂基硫酸鈉，硬脂酸鈉，脫水山梨醇單硬脂酸，trolamine，乳化蠟。
19.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，進(jìn)一步包括選自下列組成的懸浮劑阿拉伯膠，瓊脂，藻酸，單硬脂酸鋁，膨潤(rùn)土，糖糊，聚羧乙烯934P，羧甲基纖維素，鈣和鈉以及鈉12，鹿角膠，纖維素，糊精，明膠，瓜爾膠，羥乙基纖維素，羧丙基甲基纖維素，硅酸鎂鋁，甲基纖維素，果膠，聚環(huán)氧乙烷，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯酮，藻酸丙二醇酯，二氧化硅，藻酸鈉，黃蓍膠，黃原膠。
20.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，進(jìn)一步包括選自下列組成的載體(賦形劑)杏仁油，王米油，棉籽油，油酸乙酯，肉豆蔻酸異丙酯，棕檬酸異丙酯，礦物油，肉豆蔻醇，辛基十二醇，橄欖油，花生油，桃仁油芝麻油，豆油，以及角鯊烯。
21.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，包括一種或多種聚合物微粒類脂。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的聚合物具有約500到約150,000,000的分子量。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的聚合物為蛋白質(zhì)。
24.根據(jù)權(quán)利要求21的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的聚合物為合成聚合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的氣體前體是在體內(nèi)由溫度活化的。
26.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的氣體前體具有約37℃的活化溫度。
27.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的氣體前體具有-150℃到80℃的活化溫度。
28.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的氣體前體具有-125℃到70℃的活化溫度。
29.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的氣體前體具有-100℃到70℃的活化溫度。
30.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中微球體包括相轉(zhuǎn)變溫度大于約20℃的物質(zhì)。
31.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中微球體的外直徑小于約100μm。
32.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中微球體的外直徑小于約10μm。
33.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中治療化合物包括遺傳物質(zhì)。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中遺傳物質(zhì)為脫氧核糖核酸。
35.根據(jù)權(quán)利要求33的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中遺傳物質(zhì)為核糖核酸。
36.根據(jù)權(quán)利要求33的治療劑傳遞系統(tǒng)，包括反義核糖核酸或反義脫氧核糖核酸。
37.根據(jù)權(quán)利要求33的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中微球體進(jìn)一步包括陽(yáng)離子類脂物質(zhì)。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中陽(yáng)離子類脂包括N—[1—(2，3—二油酰氧基)丙基]—N，N，N—三甲基氯化銨。
39.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，包括類脂，選自二硬脂?；蚜字?，二棕櫚?；蚜柞ズ偷奥蚜柞?。
40.根據(jù)權(quán)利要求33的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中治療化合物包括編碼選自下列基因的至少一部分的脫氧核糖核酸人類主要組織兼容基因，營(yíng)養(yǎng)障礙，Cystic Fibrosis跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子，白介素—2和腫瘤壞死因子。
41.根據(jù)權(quán)利要求33的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中治療化合物包括能夠鍵合至少一部分編碼Ras脫氧核糖核酸的反義低核苷酸。
42.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中治療化合物包括單克隆抗體。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中單克隆抗體能夠結(jié)合黑素瘤抗原。
44.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中微球體包括氣體填充的脂質(zhì)體，在其內(nèi)部基本上無水，但其中包埋治療化合物。
45.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中微球體包括由真空干燥氣體滴注法制備的氣體填充的脂質(zhì)體，在其中包埋治療化合物。
46.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中微球體包括由振蕩氣體前體滴注法通過凝膠態(tài)制備的填充氣體前體的脂質(zhì)體。
47.將治療化合物控制傳遞到患者區(qū)域的方法，包括(i)以包含治療化合物的溫度活化的填充氣體前體的微球體對(duì)患者給藥；(ii)用能量監(jiān)測(cè)微球體以確定液態(tài)到氣態(tài)的相轉(zhuǎn)變，以及監(jiān)測(cè)微球體在病區(qū)的存在；(iii)用能量破裂微球體在病區(qū)釋放治療化合物的能量破裂微球體。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述的能量選自超聲，微波，射頻能，導(dǎo)磁振蕩能，以及光能。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中超聲能包括連續(xù)波超聲能。
50.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中所述的超聲能選自調(diào)幅和調(diào)頻脈沖。
51.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中所述的超聲能作為選自PRICH脈沖和CHIRP脈沖的脈沖應(yīng)用。
52.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中所述的光能選自激光和紅外能。
53.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述的能量從外部對(duì)患者施用。
54.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述的能量以內(nèi)診鏡形式應(yīng)用于患者。
55.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中微球體經(jīng)靜脈內(nèi)給藥。
56.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中微球體包括由選自下列物質(zhì)組成的類脂脂肪酸類；溶血類脂類；卵磷脂(磷脂酰膽堿)；二油酰基卵磷脂；二肉豆蔻?；蚜字?；二(十五?；?卵磷脂；二月桂?；蚜字?；二油酰基卵磷脂；二棕櫚?；蚜字欢仓；蚜字涣字Ｒ掖及?；二油酰基磷脂酰乙醇胺；磷脂酰絲氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神經(jīng))鞘脂類；(神經(jīng))鞘磷脂；糖脂(glycolipids)；神經(jīng)節(jié)苷脂GM1；神經(jīng)節(jié)苷脂GM2；糖脂類(glucolipids)；硫苷脂類；糖基鞘脂類；磷脂酸；棕櫚酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚合物如聚乙二醇，幾丁質(zhì)，透明質(zhì)酸或聚乙烯吡咯烷酮的類脂類；含磺?；瘑巍?，雙—，寡—或多糖類的類脂類；膽甾醇；膽甾醇硫酸酯；膽甾醇半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；連接醚和酯的脂肪酸的類脂類，聚合類脂類，二乙?；姿狨ィ仓０?，心磷脂，具有短鏈長(zhǎng)為6—8個(gè)碳原子脂肪酸的磷脂類，具有不對(duì)稱?；湹暮铣闪字?，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘油酯，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—膽甾烯—3β—基氧己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酸；N—[12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八?；鵠—2—氨基棕櫚酸；膽甾烯基—4′—三甲銨丁酸鹽；N—琥珀酰基二油?；字Ｒ掖及罚?，2—二油酰基—sn—甘油；1，2—二棕櫚酰基—sn—3—琥珀?；视?；1，3—二棕櫚?；?—琥珀?；视?；1—十六烷基—2—棕櫚?；视土?酸)乙醇胺；棕櫚?；甙腚装彼?；和/或它們的組合；月桂基三甲基溴化銨，十六烷基三甲基溴化銨，肉豆蔻基三甲基溴化銨，烷基二甲基芐基氯化銨，芐基二甲基十二烷基溴化銨，芐基二甲基十六烷基溴化銨，芐基二甲基十四烷基溴化銨，十六烷基二甲基乙基溴化銨，或十六烷基溴化吡啶鎓五氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，鎓dodecalin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁銨。
57.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中微球體用選自下列組成的氣體填充氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯，六氟丙酮，異丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，環(huán)丁烷，甲基環(huán)丁烷，八氟環(huán)丁烷，全氟環(huán)丁烯，3—氯環(huán)戊烯，環(huán)丙烷，1，2—二甲基環(huán)丙烷，1，1—二甲基—環(huán)丙烷，乙基環(huán)丙烷，甲基環(huán)丙烷，丁二炔，3—乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲胺，二甲基乙胺，雙(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊環(huán)—2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷，一亞硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二氟亞硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝基甲烷，三氟亞硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷，三氟甲基亞磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基異丙基醚，乳酸甲酯，亞硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧化二氮，2—羥基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(順式)，2—戊烯(反式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯鄰苯二甲酸，2，3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—環(huán)氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷，七氟—1—亞硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙腈，三氟甲基過氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化鎢，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
58.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中微球體以全氟丁烷填充。
59.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述的微球體包括含共價(jià)鍵鍵合聚合物的類脂。
60.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中所述的聚合物的分子量為400到200,000。
61.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中所述的聚合物的分子量為1,000到20,000。
62.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中所述的聚合物分子量為2,000到8,000。
63.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中所述的含共價(jià)鍵鍵合聚合物的類脂包括式XCHY—(CH2)n—O—(CH2)n—YCHX化合物，其中X為醇基團(tuán)，Y為OH或烷基，n為零到10,000。
64.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中所述的聚合物選自聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇和聚丙二醇。
65.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中所述的聚合物為聚乙二醇。
66.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中所述的類脂的摩爾數(shù)約占1％到20％。
67.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，包括鹽水，甘醇和丙二醇組成的混合類脂溶劑系統(tǒng)。
68.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，包括負(fù)電荷類脂。
69.根據(jù)權(quán)利要求68的方法，其中所述的負(fù)電荷類脂包括磷脂酸和磷脂酰甘油。
70.根據(jù)權(quán)利要求68的方法，其中所述的負(fù)電荷類脂包括磷脂酸。
71.根據(jù)權(quán)利要求68的方法，其中所述的負(fù)電荷類脂的摩爾數(shù)約占1％到20％。
72.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述的微球體在體內(nèi)活化。
73.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述的微球體懸浮于水溶性介質(zhì)中貯存。
74.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中微球體具有約2dB到約20dB的反射(率)。
75.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中微球體包括氣體填充的脂質(zhì)體，在其內(nèi)部基本上無水，但其中包囊治療化合物。
76.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中微球體包括由振蕩氣體前體滴注法通過凝膠態(tài)制備的氣體前體填充的脂質(zhì)體。
77.制備包括溫度活化的氣體前體填充的脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)的方法，所述方法包括在氣體前體存在下，低于類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變的溫度以及低于氣體前體活化溫度的溫度下，振蕩含類脂和治療化合物的水溶液的步驟。
78.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，其中所述的方法在氣體前體的活化溫度下進(jìn)行。
79.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，其中振蕩步驟包括渦旋。
80.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，進(jìn)一步包括過濾和熱消毒(殺菌)所述類脂溶液的步驟。
81.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，進(jìn)一步包括通過至少一個(gè)選定孔徑的濾器壓出氣體前體填充的脂質(zhì)體的步驟。
82.根據(jù)權(quán)利要求81的方法，其中孔經(jīng)約為10μm或更小。
83.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，進(jìn)一步包括水合干燥的類脂形成類脂水溶液。
84.制備包括氣體前體填充脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)的方法，所述方法包括步驟在氣體前體存在下，在低于類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變的溫度下振蕩類脂的水溶液，形成氣體前體填充的脂質(zhì)體；以及向所述的脂質(zhì)體中加入治療化合物。
85.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，其中所述的方法在氣體前體的活化溫度下進(jìn)行。
86.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，其中振蕩步驟包括渦旋。
87.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，進(jìn)一步包括過濾和加熱滅菌所述類脂水溶液。
88.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，進(jìn)一步包括通過至少一個(gè)選定孔徑的濾器壓出脂質(zhì)體。
89.根據(jù)權(quán)利要求88的方法，其中孔徑約10μm或更小。
90.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，進(jìn)一步包括水合干燥的類脂以形成類脂水溶液。
91.制備包含氣體前體填充的脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)的方法，所述方法包括在氣體前體存在下，振蕩含類脂和治療化合物的水溶液的步驟；以及分離所得的治療用氣體前體填充的脂質(zhì)體。
92.制備包含氣體前體填充的脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)的方法，所述方法包括步驟在氣體前體存在下，低于類脂的凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變的溫度下，振蕩含類脂的水溶液，形成氣體前體填充的脂質(zhì)體；加入治療化合物；以及分離治療用的所得氣體前體填充脂質(zhì)體。
93.制備含氣體前體填充的脂質(zhì)體微球體的方法，包括步驟a)將含類脂和治療化合物的水溶液引入容器中；b)將氣體前體引入容器中；c)在氣體前體存在下振蕩所述的類脂水溶液，以將至少部分所述的氣體前體滴注入所述的水溶液中，所述振蕩是在充分的強(qiáng)度和時(shí)間內(nèi)進(jìn)行以在上述水溶液上面產(chǎn)生含氣體前體填充的脂質(zhì)體泡沫；以及d)從所述的容器中提取至少部分所述的含氣體前體填充的脂質(zhì)體泡沫。
94.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，進(jìn)一步包括冷卻所述水溶液的步驟。
95.根據(jù)權(quán)利要求94的方法，其中冷卻所述水溶液的步驟包括在低于所述水溶液中的所述類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變的溫度下，冷卻所述水溶液。
96.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，進(jìn)一步包括加壓所述容器的步驟。
97.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，進(jìn)一步包括篩分所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的步驟。
98.根據(jù)權(quán)利要求97的方法，其中篩分所述氣體前體充的脂質(zhì)體的步驟包括控制從所述容器中提取的所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的大小。
99.根據(jù)權(quán)利要求97的方法，其中通過濾器提取所述氣體前體填充的脂質(zhì)體來控制從所述容器中提取的所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的大小。
100.根據(jù)權(quán)利要求97的方法，其中通過在所述的容器內(nèi)設(shè)定一個(gè)提取所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的位置，來控制從所述容器中提取的所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的大小。
101.根據(jù)權(quán)利要求97的方法，其中通過在從所述容器提取所述氣體前體填充的脂質(zhì)體步驟中，調(diào)節(jié)容器內(nèi)提取所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的位置，來控制從所述容器中提取所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的大小。
102.根據(jù)權(quán)利要求97的方法，其中篩分所述氣體前體填充的脂質(zhì)體步驟包括經(jīng)濾器壓出所述提取的氣體前體填充的脂質(zhì)體。
103.根據(jù)權(quán)利要求97的方法，其中篩分所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的步驟包括控制所述振蕩的強(qiáng)度。
104.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，進(jìn)一步包括將從所述容器中提取的所述氣體前體填充的脂質(zhì)體流入注射器而不進(jìn)一步處理的步驟。
105.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中振蕩所述水溶液的步驟包括以每分鐘至少60次的頻率振蕩的步驟。
106.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中振蕩所述水溶液的步驟包括渦旋所述水溶液的步驟。
107.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中振蕩所述水溶液的步驟包括振蕩述容器。
108.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中振蕩所述水溶液的步驟包括在小于約30分鐘內(nèi)以足夠的強(qiáng)度振蕩所述水溶液以產(chǎn)生所述的含氣體前體填充的脂質(zhì)體泡沫。
109.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中振蕩所述水溶液的步驟包括控制基于檢測(cè)所述含氣體前體填充的脂質(zhì)體泡沫所進(jìn)行的所述振蕩的時(shí)間的步驟。
110.根據(jù)權(quán)利要求109的方法，其中控制基于檢測(cè)所述含氣體前體的脂質(zhì)體泡沫所進(jìn)行的所述振蕩步驟包括振蕩至預(yù)確定體積的所述泡沫被檢測(cè)到為止。
111.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中所述方法在氣體前體的活化溫度下進(jìn)行。
112.制備含氣體填充的脂質(zhì)體治療劑的設(shè)備，包括a)容器；b)將由類脂和治療化合物組成的水溶液引入所述容器的裝置；c)將氣體前體引入所述容器的裝置；d)在所述容器中將所述氣體前體滴注入所述溶液中的裝置，由此在所述容器中產(chǎn)生含氣體前體填充的脂質(zhì)體的泡沫。
113.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，其中引入類脂水溶液的裝置包括引入干燥類脂的裝置，引入治療化合物的裝置，以及將水溶性介質(zhì)引入所述容器的裝置。
114.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，其中所述的滴注所述氣體前體入所述水溶液的裝置包括振蕩所述水溶液的裝置。
115.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，其中所述振蕩所述水溶液的裝置包括振蕩所述容器的裝置。
116.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，其中所述振蕩所述水溶液的裝置包括渦旋所述水溶液的裝置。
117.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，進(jìn)一步包括冷卻所述水溶液的裝置。
118.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，進(jìn)一步包括從所述容器中提取所述泡沫的裝置。
119.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，其中從所述容器提取所述泡沫的裝置包括調(diào)節(jié)垂直位置的裝置，此位置為從所述容器提取所述泡沫的位置。
120.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，進(jìn)一步包括將所述提取的氣體前體填充的脂質(zhì)體流經(jīng)濾器裝配的裝置。
121.根據(jù)權(quán)利要求120的設(shè)備，其中所述的濾器裝配包括占據(jù)預(yù)先確定分開距離的第一級(jí)和第二級(jí)濾器。
122.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，進(jìn)一步包括篩分所述氣體前體填充的脂質(zhì)體的裝置。
123.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，進(jìn)一步包括與所述容器流體連接的濾器。
124.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，進(jìn)一步包括加壓所述容器的裝置。
125.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，進(jìn)一步包括將所述容器中產(chǎn)生的所述氣體前體填充的脂質(zhì)體流入注射器而基本上不進(jìn)一步處理的裝置。
126.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，進(jìn)一步包括調(diào)節(jié)溫度的裝置。
127.根據(jù)權(quán)利要求126的設(shè)備，其中所述溫度調(diào)節(jié)至37℃。
128.由經(jīng)真空干燥氣體滴注方法制備的氣體填充的脂質(zhì)體組成的且其中包囊藥物的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述氣體由氣體前體提供。
129.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體由選自下述類脂物質(zhì)組成脂肪酸類，溶血類脂類，二棕櫚酰卵磷脂，二硬脂酰卵磷脂，卵磷脂，磷脂酸，(神經(jīng))鞘脂類，膽甾醇，硫酸膽甾醇酯，半琥珀酸膽甾醇酯，生育酚半琥珀酸酯，磷脂?；掖及?，磷脂酰基肌醇，糖基鞘脂類，糖脂類(glucolipids)，糖脂類(glycolipids)硫苷脂，含磺化單—，雙—，寡—或多糖類脂類，含醚和酯連接脂肪酸的類脂類，以及聚合物類脂類。
130.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中氣體前體選自氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯，六氟丙酮，異丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，環(huán)丁烷，甲基環(huán)丁烷，八氟環(huán)丁烷，全氟環(huán)丁烯，3—氯環(huán)戊烯，環(huán)丙烷，1，2—二甲基環(huán)丙烷，1，1—二甲基—環(huán)丙烷，乙基環(huán)丙烷，甲基環(huán)丙烷，丁二炔，3—乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲胺，二甲基乙胺，雙(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊環(huán)—2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷，一亞硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二氟亞硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝基甲烷，三氟亞硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷，三氟甲基亞磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基異丙基醚，乳酸甲酯，亞硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧化二氮，2—羥基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(順式)，2—戊烯(反式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯鄰苯二甲酸，2，3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—環(huán)氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷，七氟—1—亞硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙腈，三氟甲基過氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化鎢，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
131.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中微球體以全氟丁烷填充。
132.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，使一步包括含共價(jià)鍵鍵合的類脂。
133.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物的分子量在400到200,000。
134.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物的分子量在1,000到20,000。
135.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物的分子量在2,000到8,000。
136.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的含共價(jià)鍵鍵合聚合物的類脂包括式XCHY—(CH2)n—O—(CH2)n—YCHX化合物，其中X為醇基，Y為OH或烷基，n為0到10,000。
137.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物選自聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇和聚丙二醇。
138.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物為聚乙二醇。
139.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述類脂的摩爾數(shù)約占1％到約20％。
140.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述類脂包括鹽水，甘油和丙二醇的混合溶劑系統(tǒng)。
141.根據(jù)權(quán)利要求132的藥物傳遞系統(tǒng)，包括負(fù)電荷類脂。
142.根據(jù)權(quán)利要求141的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述負(fù)電荷類脂包括磷脂酸和磷脂?；视?。
143.根據(jù)權(quán)利要求141的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述負(fù)電荷類脂包括磷脂酸。
144.根據(jù)權(quán)利要求141的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述負(fù)電荷類脂摩爾數(shù)占約1％到約20％。
145.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體在體內(nèi)活化。
146.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體包括選自下列組成的類脂脂肪酸類；溶血類脂類；卵磷脂(磷脂酰膽堿)；二油?；蚜字?；二肉豆蔻?；蚜字?；二(十五?；?卵磷脂；二月桂?；蚜字欢王；蚜字?；二棕櫚?；蚜字欢仓；蚜字涣字Ｒ掖及?；二油?；字Ｒ掖及?；磷脂酰絲氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神經(jīng))鞘脂類；(神經(jīng))鞘磷脂；糖脂(g1ycolipids)；神經(jīng)節(jié)苷脂GM1；神經(jīng)節(jié)苷脂GM2；糖脂類(g1ucolipids)；硫苷脂類；糖基鞘脂類；磷脂酸；棕櫚酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚合物如聚乙二醇，幾丁質(zhì)，透明質(zhì)酸或聚乙烯吡咯烷酮的類脂類；含磺?；瘑巍p—，寡—或多糖類的類脂類；膽甾醇；膽甾醇硫酸酯；膽甾醇半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；連接醚和酯的脂肪酸的類脂類，聚合類脂類，二乙?；姿狨ィ仓０?，心磷脂，具有短鏈長(zhǎng)為6—8個(gè)碳原子脂肪酸的磷脂類，具有不對(duì)稱?；湹暮铣闪字悾?—(5—膽甾烯—3β—基氧)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘油酯，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—膽甾烯—3β—基氧己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酸；N—[12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酰基]—2—氨基棕櫚酸；膽甾烯基—4′—三甲銨丁酸鹽；N—琥珀?；王；字Ｒ掖及?；1，2—二油?；猻n—甘油；1，2—二棕櫚?；猻n—3—琥珀?；视停?，3—二棕櫚?；?—琥珀?；视?；1—十六烷基—2—棕櫚酰基甘油磷(酸)乙醇胺；棕櫚?；甙腚装彼?；和/或它們的組合；月桂基三甲基溴化銨，十六烷基三甲基溴化銨，肉豆蔻基三甲基溴化銨，烷基二甲基芐基氯化銨，芐基二甲基十二烷基溴化銨，芐基二甲基十六烷基溴化銨，芐基二甲基十四烷基溴化銨，十六烷基二甲基乙基溴化銨，或十六烷基溴化吡啶鎓五氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，鎓dodecalin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁銨。
147.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體由選自下列氣體填充1—氟丁烷，2—甲基丁烷，2—甲基—1—丁烯，2—甲基—2—丁烯，2—甲基—1—丁烯—3—炔，以及3—甲基—1—丁烯。
148.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體由1—氟丁烷填充。
149.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體懸浮于水溶介質(zhì)中貯存。
150.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體干燥貯存。
151.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體具有至少三周的穩(wěn)定性。
152.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體具有至少約2dB的反射率。
153.根據(jù)權(quán)利要求128的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體具有約2dB到約20dB的反射率。
154.由在其內(nèi)部基本上無水且在其中包囊藥物的氣體填充脂質(zhì)體組成的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述氣體由氣體前體提供。
155.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體包括選自下述物質(zhì)的類脂物質(zhì)脂肪酸，溶血類脂類，二棕櫚?；蚜字?，二硬脂酰基卵磷脂，卵磷脂，磷脂酸，鞘脂類，膽甾醇，膽甾醇半琥珀酸酯，生育酚半琥珀酸酯，磷脂酰基乙醇胺，磷脂酰基肌醇，糖基類脂類(glucolipids)，糖基類脂類(glycolipids)，硫苷脂類，含磺化單—，雙—，寡—或多糖的類脂類，與醚和酯鏈連脂肪酸的類脂類，以及聚合類脂類。
156.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體包括選自下列物質(zhì)組成的類脂脂肪酸類；溶血類脂類；卵磷脂(磷脂酰膽堿)；二油?；蚜字欢舛罐Ⅴ；蚜字欢?十五?；?卵磷脂；二月桂酰基卵磷脂；二油?；蚜字?；二棕櫚?；蚜字欢仓；蚜字?；磷脂酰乙醇胺；二油?；字Ｒ掖及?；磷脂酰絲氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神經(jīng))鞘脂類；(神經(jīng))鞘磷脂；糖脂(glycolipids)；神經(jīng)節(jié)苷脂GM1；神經(jīng)節(jié)苷脂GM2；糖脂類(g1ucolipids)；硫苷脂類；糖基鞘脂類；磷脂酸；棕櫚酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚合物如聚乙二醇，幾丁質(zhì)，透明質(zhì)酸或聚乙烯吡咯烷酮的類脂類；含磺?；瘑巍?，雙—，寡—或多糖類的類脂類；膽甾醇；膽甾醇硫酸酯；膽甾醇半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；連接醚和酯的脂肪酸的類脂類，聚合類脂類，二乙?；姿狨?，硬脂酰胺，心磷脂，具有短鏈長(zhǎng)為6—8個(gè)碳原子脂肪酸的磷脂類，具有不對(duì)稱?；湹暮铣闪字?，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘油酯，6—(5—膽甾烯—3β—基氧)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—膽甾烯—3β—基氧己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酸；N—[12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酰基]—2—氨基棕櫚酸；膽甾烯基—4′—三甲銨丁酸鹽；N—琥珀?；王；字Ｒ掖及?；1，2—二油?；猻n—甘油；1，2—二棕櫚?；猻n—3—琥珀酰基甘油；1，3—二棕櫚酰基—2—琥珀?；视停?—十六烷基—2—棕櫚?；视土?酸)乙醇胺；棕櫚?；甙腚装彼幔缓?或它們的組合；月桂基三甲基溴化銨，十六烷基三甲基溴化銨，肉豆蔻基三甲基溴化銨，烷基二甲基芐基氯化銨，芐基二甲基十二烷基溴化銨，芐基二甲基十六烷基溴化銨，芐基二甲基十四烷基溴化銨，十六烷基二甲基乙基溴化銨，或十六烷基溴化吡啶鎓五氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，鎓dodecalin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁銨。
157.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體由選自下述物質(zhì)的氣體填充1—氟丁烷，2—甲基丁烷，2—甲基—1—丁烯，2—甲基—2—丁烯，2—甲基—1—丁烯—3—炔，以及3—甲基—1—丁炔。
158.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體以1—氟丁烷填充。
159.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體懸浮于水溶性介質(zhì)中貯存。
160.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體干燥貯存。
161.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體具有貯存期限穩(wěn)定性至少約三周。
162.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體具有至少的2dB的反射率。
163.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的脂質(zhì)體具有約2dB到約20dB的反射率。
164.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中氣體前體選自下列物質(zhì)氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯，六氟丙酮，異丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，環(huán)丁烷，甲基環(huán)丁烷，八氟環(huán)丁烷，全氟環(huán)丁烯，3—氯環(huán)戊烯，環(huán)丙烷，1，2—二甲基環(huán)丙烷，1，1—二甲基—環(huán)丙烷，乙基環(huán)丙烷，甲基環(huán)丙烷，丁二炔，3—乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲胺，二甲基乙胺，雙(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊環(huán)—2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷，一亞硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二氟亞硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝基甲烷，三氟亞硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷，三氟甲基亞磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基異丙基醚，乳酸甲酯，亞硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧化二氮，2—羥基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(順式)，2—戊烯(反式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯鄰苯二甲酸，2，3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—環(huán)氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷，七氟—1—亞硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙腈，三氟甲基過氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化鎢，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
165.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中微球體用全氟丁烷填充。
166.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，進(jìn)一步包括由共價(jià)鍵鍵合聚合物的類脂。
167.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物的分子量為400到200,000。
168.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物的分子量為1,000到20,000。
169.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物的分子量為2,000到8,000。
170.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述含共價(jià)鍵鍵合聚合物的類脂包括式XCHY—(CH2)n—O—(CH2)n—YCHX化合物，其中X為醇基，Y為OH或烷基，n為0到10,000。
171.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的聚合物選自聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇和聚丙二醇。
172.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述聚合物為聚乙二醇。
173.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述類脂的摩爾數(shù)占約1％到約20％。
174.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述類脂包括由鹽水，甘油和丙二醇組成的混合溶劑系統(tǒng)。
175.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，包括負(fù)電荷類脂。
176.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述負(fù)電荷類脂包括磷脂酸和磷脂?；视汀?br> 177.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述負(fù)電荷類脂包括磷脂酸。
178.根據(jù)權(quán)利要求166的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述負(fù)電荷類脂的摩爾數(shù)占約1％到約20％。
179.根據(jù)權(quán)利要求154的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述脂質(zhì)體在體內(nèi)活化。
180.制備藥物傳遞系統(tǒng)的方法，包括下列步驟(i)將已在其中包囊藥物的脂質(zhì)體置于負(fù)壓下；(ii)在所述負(fù)壓下溫育所述脂質(zhì)體足夠的時(shí)間以從所述脂質(zhì)體上除去幾乎所有水；以及(iii)滴注氣體入所述脂質(zhì)體中直到達(dá)到環(huán)境壓力，其中所述氣體由氣體前體提供。
181.根據(jù)權(quán)利要求180的方法，進(jìn)一步包括使所述脂質(zhì)體先于步驟(i)和在步驟(i)進(jìn)行時(shí)冷卻至約—10℃到約—20℃，使所述的脂質(zhì)體在步驟(ii)進(jìn)行時(shí)熱至約10℃到約20℃，以及使所述的脂質(zhì)體在步驟(iii)進(jìn)行時(shí)熱至環(huán)境溫度。
182.根據(jù)權(quán)利要求180的方法，其中所述負(fù)壓在約700mmHg到約760mmHg，施加約24到約72小時(shí)。
183.根據(jù)權(quán)利要求180的方法，其中所述的氣體在約4到約8小時(shí)期間滴注入所述脂質(zhì)體中。
184.根據(jù)權(quán)利要求180的方法，其中所述氣體選自氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯，六氟丙酮，異丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，環(huán)丁烷，甲基環(huán)丁烷，八氟環(huán)丁烷，全氟環(huán)丁烯，3—氯環(huán)戊烯，環(huán)丙烷，1，2—二甲基環(huán)丙烷，1，1—二甲基—環(huán)丙烷，乙基環(huán)丙烷，甲基環(huán)丙烷，丁二炔，3—乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲胺，二甲基乙胺，雙(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊環(huán)—2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷，一亞硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二氟亞硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝基甲烷，三氟亞硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷，三氟甲基亞磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基異丙基醚，乳酸甲酯，亞硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧化二氮，2—羥基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(順式)，2—戊烯(反式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯鄰苯二甲酸，2，3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—環(huán)氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷，七氟—1—亞硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙腈，三氟甲基過氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化鎢，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
185.根據(jù)權(quán)利要求180的方法，其中所述氣體為1—氟丁烷。
186.根據(jù)權(quán)利要求180的方法，進(jìn)一步包括，在步驟(iii)后，通過至少一個(gè)選定孔徑的濾器壓出脂質(zhì)體。
187.制備藥物傳遞系統(tǒng)的方法，包括下列步驟(i)將已在其中包囊藥物的脂質(zhì)體冷卻到約-10℃到約-20℃；(ii)將所述脂質(zhì)體置于約700mmHg到約760mmHg的負(fù)壓下；(iii)在所述負(fù)壓下將所述脂質(zhì)體溫育約24到約72以除去所述脂質(zhì)體中幾乎全部水，同時(shí)將所述脂質(zhì)體熱至約10℃到約20℃；以及(iv)在約4到約8小時(shí)的期間內(nèi)滴注氣體入所述的脂質(zhì)體中，直至達(dá)到環(huán)境壓力，同時(shí)將所述脂質(zhì)體熱至環(huán)境溫度，其中所述氣體由氣體前體提供。
188.根據(jù)權(quán)利要求187的方法，其中所述氣體選自氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯，六氟丙酮，異丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，環(huán)丁烷，甲基環(huán)丁烷，八氟環(huán)丁烷，全氟環(huán)丁烯，3—氯環(huán)戊烯，環(huán)丙烷，1，2—二甲基環(huán)丙烷，1，1—二甲基—環(huán)丙烷，乙基環(huán)丙烷，甲基環(huán)丙烷，丁二炔，3—乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲胺，二甲基乙胺，雙(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊環(huán)—2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷，一亞硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二氟亞硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝基甲烷，三氟亞硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷，三氟甲基亞磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基異丙基醚，乳酸甲酯，亞硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧化二氮，2—羥基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(順式)，2—戊烯(反式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯鄰苯二甲酸，2，3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—環(huán)氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷，七氟—1—亞硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙腈，三氟甲基過氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化鎢，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
189.根據(jù)權(quán)利要求187的方法，其中所述的氣體為1—氟丁烷。
190.根據(jù)權(quán)利要求187的方法，進(jìn)一步包括，在步驟(iv)經(jīng)過至少一個(gè)選定孔徑的濾器壓出所述脂質(zhì)體。
191.制備藥物傳遞系統(tǒng)的設(shè)備，包括(i)含在其中已包囊藥物的脂質(zhì)體的容器；(ii)冷卻容器中脂質(zhì)體的裝置；(iii)對(duì)容器施加負(fù)壓以從容器中的脂質(zhì)體中吸出水的裝置；(iv)連接容器和負(fù)壓裝置的導(dǎo)管，導(dǎo)管引導(dǎo)水流；(v)收集導(dǎo)管中流水的裝置；(vi)將氣體引入容器中脂質(zhì)體的裝置；和(vii)調(diào)節(jié)容器溫度的裝置。
192.根據(jù)權(quán)利要求191的設(shè)備，其中負(fù)壓裝置為真空泵。
193.根據(jù)權(quán)利要求191的設(shè)備，進(jìn)一步包括冷卻容器中脂質(zhì)體的裝置。
194.根據(jù)權(quán)利要求191的設(shè)備，其中冷卻裝置中有將容器中脂質(zhì)體冷到約—10℃到約—20℃的裝置。
195.根據(jù)權(quán)利要求191的設(shè)備，其中冷卻裝置包括冷浴。
196.根據(jù)權(quán)利要求191的設(shè)備，其中進(jìn)一步包括收集導(dǎo)管中水流的裝置。
197.根據(jù)權(quán)利要求191的設(shè)備，其中收集裝置為一阱。
198.根據(jù)權(quán)利要求191的設(shè)備，進(jìn)一步包括冷卻阱的裝置。
199.根據(jù)權(quán)利要求198的設(shè)備，其中阱包括方便流體流經(jīng)其中的第一和第二構(gòu)件，構(gòu)件相互流體連結(jié)，且和導(dǎo)管相連，第二構(gòu)件螺旋安置在第一構(gòu)件周圍，所述阱包括冷卻裝置，其中冷卻裝置包括至少包裹一部分第一和第二構(gòu)件的冰浴。
200.控制藥物傳遞到患者體內(nèi)區(qū)域的方法，包括(a)對(duì)患者以藥物傳遞系統(tǒng)給藥，所述系統(tǒng)通過真空干燥氣體滴注方法制備，且已在其中包囊藥物，其中所述氣體由氣體前體提供；(b)用超聲監(jiān)測(cè)脂質(zhì)體以確定氣體前體從液體到氣體的相轉(zhuǎn)變，以及確定所述脂質(zhì)體在所述區(qū)域的存在；以及(c)用超聲破裂脂質(zhì)體，釋放藥物于所述區(qū)域。
201.根據(jù)權(quán)利要求200的方法，其中藥物在患者的左心區(qū)域傳遞。
202.用權(quán)利要求180方法制備的產(chǎn)品。
203.用權(quán)利要求187方法制備的產(chǎn)品。
204.用下列步驟組成的方法制備的藥物傳遞系統(tǒng)(i)將已在其中包囊藥物的脂質(zhì)體置于負(fù)壓下；(ii)在負(fù)壓下以足夠的時(shí)間培養(yǎng)所述脂質(zhì)體移去所述脂質(zhì)體中幾乎所有水；以及(iii)將氣體滴注入所述脂質(zhì)中直至達(dá)到環(huán)境壓力，其中所述氣體由氣體前體提供。
205.根據(jù)204的方法，其中所述方法在氣體前體的活化溫度下進(jìn)行。
206.顯影局部缺血和病變組織的方法，包括(a)對(duì)患者的靶位以包括氣體填充的、已包囊藥物于其中的微球體的藥物傳遞系統(tǒng)給藥，其中所述氣體由具有約為體溫活化溫度的氣體前體提供；(b)用能量監(jiān)測(cè)微球體以確定其于所述靶位的累積和氣體前體從液體向氣體的相轉(zhuǎn)變，以及確定所述微球體于所述區(qū)域的存在；以及(c)用能量破裂微球體來釋放藥物于所述區(qū)域。
207.對(duì)局部缺血和病變組織給藥的方法，包括對(duì)患者靶位以由已包囊一種或多種藥物于其中的氣體填充的微球體組成的藥物傳遞系統(tǒng)給藥，其中所述的氣體由具有約是體溫的活性溫度的氣體前體提供。
208.根據(jù)權(quán)利要求207的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)由傳遞到靶位的能量活化。
209.高溫時(shí)非侵入測(cè)量溫度的方法，包括(a)對(duì)患者的靶位以包括氣體填充的具有在其中已包囊藥物的微球體的藥物傳遞系統(tǒng)給藥，其中所述氣體由具有體溫或高于體溫的活化溫度的氣體前體提供；(b)用能量監(jiān)測(cè)微球體以確定微球體于所述靶位的累積和氣體前體從液體到氣體的相轉(zhuǎn)變，由此確定在所選溫度下所述微球體的活化。
210.根據(jù)權(quán)利要求95的方法，進(jìn)一步包括加壓容器的步驟。
211.根據(jù)權(quán)利要求117的設(shè)備，其中冷卻所述水溶液的裝置包括在低于所述水溶液中所述類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度下；冷卻所述水溶液。
212.根據(jù)權(quán)利要求211的設(shè)備，進(jìn)一步包括加壓所述容器的裝置。
213.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述微球體包括共價(jià)鍵合于聚乙二醇的二棕櫚酰基卵磷脂，二棕櫚酰基磷脂酸，以及二棕櫚?；字Ｒ掖及?。
214.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的微球體包括選自下列物質(zhì)的類脂二棕櫚?；蚜字?，二棕櫚?；字幔貦磅；字Ｒ掖及?，以及聚乙二醇。
215.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述微球體包括至少一種二棕櫚?；愔?。
216.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述治療劑選自碳水化合物類，肽類，糖類，糖基類脂類，植物凝血素類，糖基共軛物類(glycoconjugates)，所述的治療劑結(jié)合入所述微球體的表面。
217.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述治療劑結(jié)合入所述微球體表面是通過將所述治療劑連接到磷脂上來實(shí)現(xiàn)的。
218.根據(jù)權(quán)利要求42的治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述單克隆抗體結(jié)合入所述微球體表面是通過將所述治療劑連接到磷脂上來實(shí)現(xiàn)的。
219.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中所述容器是注射器針筒，所述注射器也至少由一個(gè)濾器和針頭組成；所述提取步驟包括通過經(jīng)所述濾器從所述針筒中壓出所述脂質(zhì)體來篩分所述氣體填充的脂質(zhì)體。
220.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中所述容器是注射器的針筒。
221.根據(jù)權(quán)利要求220的方法，其中所述注射器也包括至少一個(gè)濾器和針頭；所述提取步驟包括經(jīng)所述濾器壓出所述脂質(zhì)體篩分所述氣體填充的脂質(zhì)體。
222.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，包括將所述脂質(zhì)體吸入注射器，所述注射器包括針筒，至少一個(gè)濾器和針頭；由此所述濾器經(jīng)將所述脂質(zhì)體吸入所述針筒來篩分所述脂質(zhì)體。
223.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，包括將所述脂質(zhì)體壓進(jìn)注射器針筒，所述注射器也包括至少一個(gè)濾器和針頭；由此所述濾器通過從所述注射器中壓出所述脂質(zhì)體篩分所述脂質(zhì)體。
224.根據(jù)權(quán)利要求93的方法，其中所述提取的步驟包括將所述含氣體填充脂質(zhì)體的泡沫吸進(jìn)注射器，所述注射器包括針筒，至少一個(gè)濾器，和針頭；由此篩分所述脂質(zhì)體。
225.根據(jù)權(quán)利要求118的設(shè)備，其中所述容器為注射針筒，所述注射器也至少包含一個(gè)濾器和針頭；所述提取裝置包括經(jīng)所述濾器從所述針筒中壓出所述充氣脂質(zhì)體，其中的所述濾器裝在所述注射器上，它位于針筒和針頭之間，由此篩分所述脂質(zhì)體。
226.根據(jù)權(quán)利要求118的設(shè)備，其中所述容器為注射器的針筒。
227.根據(jù)權(quán)利要求226的設(shè)備，其中所述注射器包括針筒，至少一個(gè)濾器，和針頭；所述提取裝置包括通過所述針筒經(jīng)所述濾器壓出所述脂質(zhì)體而篩分所述充氣脂質(zhì)體。
228.根據(jù)權(quán)利要求112的設(shè)備，其中所述容器為注射器的針筒，所述注射器也包括至少一個(gè)濾器和針頭；此處所述濾器是在將所述脂質(zhì)體吸進(jìn)所述針筒時(shí)篩分所述脂質(zhì)體的裝置。
229.根據(jù)權(quán)利要求118的設(shè)備，其中所述容器是注射器的針筒，所述注射器也包括至少一個(gè)濾器和針頭；其中所述濾器是在將所述脂質(zhì)體從所述針筒中壓出時(shí)篩分所述脂質(zhì)體的裝置。
230.根據(jù)權(quán)利要求118的設(shè)備，其中所述提取裝置包括將所述含充氣脂質(zhì)體的泡沫吸進(jìn)注射器，所述注射器包括針筒，至少一個(gè)濾器和針頭；由此篩分所述脂質(zhì)體。
231.根據(jù)權(quán)利要求1的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述治療劑的位置選擇在所述微球體之內(nèi)，連結(jié)于所述微球體之外，以及包埋于所述微球體的所述壁間。
232.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，其中所述治療劑位于所述微球體內(nèi)部。
233.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，其中所述治療劑連結(jié)于所述微球體之外。
234.根據(jù)權(quán)利要求84的方法，其中所述微球體包括內(nèi)腔和壁，所述治療劑包埋于所述脂質(zhì)體的所述壁內(nèi)。
235.靶定位治療劑傳遞設(shè)備，包括具有針筒，濾器裝配，和針頭的注射器，所述濾器裝配置在所述針筒和所述針頭之間，以及包括至少一個(gè)濾器，所述針筒包含由溫度活化氣體前體填充的微球體組成的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)，其中所述的氣體前體填充的微球體包括治療化合物。
236.根據(jù)權(quán)利要求235的設(shè)備，其中所述濾器裝配為階式濾器裝配，包括具有針對(duì)針頭側(cè)和針對(duì)針筒側(cè)的第一級(jí)濾器，第二級(jí)濾器，分別位于所述第一級(jí)濾器的所述針對(duì)針頭側(cè)和所述針筒側(cè)的第一和第二金屬網(wǎng)盤，在所述第二金屬網(wǎng)盤和所述第二濾器間的O形環(huán)，以及其中所述的第二級(jí)濾器置于所述第一級(jí)濾器的針筒側(cè)約150μm。
237.根據(jù)權(quán)利要求236的設(shè)備，所述第一級(jí)濾器與第二級(jí)濾器有微孔，所述第二級(jí)濾器具有微孔徑約10μm，所述第一級(jí)濾器的微孔徑約為8μm。
238.根據(jù)權(quán)利要求235的設(shè)備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔具有約30nm到約20微米的大小。
239.根據(jù)權(quán)利要求235的設(shè)備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔具有約8μm的大小。
240.根據(jù)權(quán)利要求235的設(shè)備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔具有約0.22μm的大小。
241.根據(jù)權(quán)利要求229的設(shè)備，具有第一級(jí)濾器及第二級(jí)濾器，所述第一級(jí)濾器和第二級(jí)濾器具有微孔，所述第二級(jí)濾器具有約10μm的微孔，而第一級(jí)濾器具有約8μm的微孔。
242.根據(jù)權(quán)利要求229的設(shè)備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔具有約30nm到約20微米的大小。
243.根據(jù)權(quán)利要求229的設(shè)備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔有約8μm的大小。
244.根據(jù)權(quán)利要求229的設(shè)備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔具有約0.22μm的大小。
245.根據(jù)權(quán)利要求230的設(shè)備，所述第一級(jí)濾器和第二級(jí)濾器具有微孔，所述第二級(jí)濾器具有約10μm的微孔，所述第一級(jí)濾器具有約8μm的微孔。
246.根據(jù)權(quán)利要求230的設(shè)備，具有第一級(jí)濾器和第二級(jí)濾器，所述微孔具有約30nm到約20微米的大小。
247.根據(jù)權(quán)利要求230的設(shè)備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔具有約8μm的大小。
248.根據(jù)權(quán)利要求230的設(shè)備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔具有約0.22μm的大小。
249.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述的微球體經(jīng)噴霧器給藥。
250.根據(jù)權(quán)利要求249的方法，其中所述微球體靶定位于肺部。
251.根據(jù)權(quán)利要求250的方法，其中所述治療劑為反義ras/p53。
252.權(quán)利要求77的方法在高于環(huán)境壓力下操作。
253.權(quán)利要求84的方法在高于環(huán)境壓力下操作。
254.權(quán)利要求91的方法在高于環(huán)境壓力下操作。
255.權(quán)利要求92的方法在高于環(huán)境壓力下操作。
256.包括充氣微球體的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述充氣微球體包括治療化合物和氟化氣體。
257.根據(jù)權(quán)利要求256的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的氟化氣體選自氟氣，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟環(huán)丁烷；全氟環(huán)丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亞硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亞硝基溴甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亞硝基氯甲烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亞硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亞磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝基丙烷；七氟—1—亞硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲基過氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化鎢，五氟碘化十八烷，全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯。
258.根據(jù)權(quán)利要求257的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的氟化氣體選自氟氣，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，八氟環(huán)戊烯，十二氟戊烷，以及八氟環(huán)丁烷。
259.根據(jù)權(quán)利要求258的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的氟化氣體選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟環(huán)丁烷，以及六氟化硫。
260.根據(jù)權(quán)利要求259的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的氟化氣體選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，以及全氟丁烷。
261.根據(jù)權(quán)利要求260的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的氣體為全氟丙烷。
262.根據(jù)權(quán)利要求256的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的氟化氣體為全氟化碳?xì)怏w。
263.根據(jù)權(quán)利要求263的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，以及全氟環(huán)丁烷。
264.根據(jù)權(quán)利要求263的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，以及全氟丁烷。
265.根據(jù)權(quán)利要求264的藥物傳遞系統(tǒng)，其中所述的全氟化碳?xì)怏w為全氟丙烷。
266.制備包含充氣脂質(zhì)體的藥物傳遞系統(tǒng)的方法，所述方法包括在氟化氣體存在下，在類脂的凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變的溫度下，振蕩包含類脂和治療化合物的水溶液的步驟。
267.根據(jù)權(quán)利要求267的方法，其中所述的氟化氣體選自氟氣，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟環(huán)丁烷；全氟環(huán)丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亞硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亞硝基溴甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亞硝基氯甲烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亞硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亞磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝基丙烷；七氟—1—亞硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲基過氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化鎢，五氟碘化十八烷，全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯。
268.根據(jù)權(quán)利要求267的方法，其中所述的氟化氣體選自氟氣，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，八氟環(huán)戊烯，十二氟戊烷，以及八氟環(huán)丁烷。
269.根據(jù)權(quán)利要求268的方法，其中的所述氟化氣體選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟環(huán)丁烷，以及六氟化硫。
270.根據(jù)權(quán)利要求269的方法，其中所述的氟化氣體選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，以及全氟丁烷。
271.根據(jù)權(quán)利要求266的方法，其中所述的氟化氣體為全氟丙烷。
272.根據(jù)權(quán)利要求271的方法，其中所述的氟化氣體為全氟化碳?xì)怏w。
273.根據(jù)權(quán)利要求272的方法，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丁烷，以及全氟環(huán)丁烷。
274.根據(jù)權(quán)利要求273的方法，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，和全氟丁烷。
275.根據(jù)權(quán)利要求274的方法，其中所述的全氟化碳?xì)怏w為全氟丙烷。
276.制備由充氣脂質(zhì)體組成的靶定位的治療劑傳遞系統(tǒng)的方法，所述方法包括步驟在氟化氣體的存在下，在類脂的凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度下，振蕩含類脂水溶液，以形成充氣脂質(zhì)體；以及向所述脂質(zhì)體中加入治療化合物。
277.根據(jù)權(quán)利要求276的方法，其中所述氟化氣體選自氟氣，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟環(huán)丁烷；全氟環(huán)丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亞硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亞硝基溴甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亞硝基氯甲烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亞硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亞磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝基丙烷；七氟—1—亞硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲基過氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化鎢，五氟碘化十八烷，全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯。
278.根據(jù)權(quán)利要求277的方法，其中所述的氟化氣體選自氟氣，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，全氟環(huán)戊烯，十二氟戊烷，以及八氟環(huán)丁烷。
279.根據(jù)權(quán)利要求278的方法，其中所述的氟化氣體選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟環(huán)丁烷，以及六氟化硫。
280.根據(jù)權(quán)利要求279的方法，其中所述的氟化氣體選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，以及全氟丁烷。
281.根據(jù)權(quán)利要求280的方法，其中所述的氟化氣體為全氟丙烷。
282.根據(jù)權(quán)利要求281的方法，其中所述的氟化氣體為全氟化碳?xì)怏w。
283.根據(jù)權(quán)利要求276的方法，其中所述全氟化碳?xì)怏w選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，以及全氟環(huán)丁烷。
284.根據(jù)權(quán)利要求283的方法，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，如全氟丁烷。
285.根據(jù)權(quán)利要求284的方法，其中所述的全氟化碳?xì)鉃槿椤?br> 286.制備含充氣脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)的方法，所述方法包括在氟化氣體的存在下，振蕩含類脂和治療化合物的水溶液，以及分離所產(chǎn)生的充氣脂質(zhì)體治療用的步驟。
287.根據(jù)權(quán)利要求286的方法，其中所述的氟化氣體選自氟氣，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟環(huán)丁烷；全氟環(huán)丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亞硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亞硝基溴甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亞硝基氯甲烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亞硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亞磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝基丙烷；七氟—1—亞硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲基過氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化鎢，五氟碘化十八烷，全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯。
288.根據(jù)權(quán)利要求287的方法，其中所述的氟化氣體選自氟氣，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，八氟環(huán)戊烯，十二氟戊烷，以及全氟環(huán)丁烷。
289.根據(jù)權(quán)利要求288的方法，其中所述的氟化氣體選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟環(huán)丁烷，以及六氟化硫。
290.根據(jù)權(quán)利要求289的方法，其中所述的氟化氣體選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，以及全氟丁烷。
291.根據(jù)權(quán)利要求290的方法，其中所述的氟化氣體為全氟丙烷。
292.根據(jù)權(quán)利要求286的方法，其中所述的氟化氣體為全氟化碳?xì)怏w。
293.根據(jù)權(quán)利要求292的方法，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，以及全氟環(huán)丁烷。
294.根據(jù)權(quán)利要求293的方法其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，以及全氟丁烷。
295.根據(jù)權(quán)利要求294的方法，其中所述的全氟化碳?xì)怏w為全氟丙烷。
296.制備含充氣脂質(zhì)體的靶定位治療劑傳遞系統(tǒng)的方法，所述方法包括步驟，在氟化氣體存在下，在低于類脂凝膠態(tài)向液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變的溫度下，振蕩含類脂水溶液以形成充氣脂質(zhì)體；加入治療化合物；分離所得的充氣脂質(zhì)體供治療用。
297.根據(jù)權(quán)利要求296的方法，其中所述氟化氣體包括氟氣，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟環(huán)丁烷；全氟環(huán)丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亞硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亞硝基溴甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亞硝基氯甲烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亞硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亞磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝基丙烷；七氟—1—亞硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲基過氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化鎢，五氟碘化十八烷，全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟環(huán)戊烯。
298.根據(jù)權(quán)利要求297的方法，其中所述的氟化氣體選自氟氣，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，八氟環(huán)戊烯，十二氟戊烷，以及八氟環(huán)丁烷。
299.根據(jù)權(quán)利要求298的方法，其中所述的氟化氣體選全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟環(huán)丁烷，以及六氟化硫。
300.根據(jù)權(quán)利要求299的方法，其中所述的硫化氣體選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷，以及全氟丁烷。
301.根據(jù)權(quán)利要求300的方法，其中所述的氟化氣體是全氟丙烷。
302.根據(jù)權(quán)利要求296的方法，其中所述的氟化氣體是全氟化碳?xì)怏w。
303.根據(jù)權(quán)利要求302的方法，其中所述的氟化碳?xì)怏w選自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，以及全氟環(huán)丁烷。
304.根據(jù)權(quán)利要求303的方法，其中所述的全氟化碳?xì)怏w選自全氟丙烷，全氟環(huán)丁烷以及全氟丁烷。
305.根據(jù)權(quán)利要求304的方法，其中所述的全氟化碳?xì)怏w為全氟丙烷。
全文摘要
描述了包含氣體前體填充的包含治療劑的微球體的治療劑傳遞系統(tǒng)。也提供了使用這些微球體于治療劑傳遞應(yīng)用中的方法。包括其中包囊對(duì)比劑或藥物的氣體前體填充的治療劑傳遞系統(tǒng)是優(yōu)選的。也公開了制備這些脂質(zhì)體的方法和設(shè)備，以及這些脂質(zhì)體在治療劑傳遞應(yīng)用中的方法。
文檔編號(hào)B28B1/00GK1125393SQ94192403
公開日1996年6月26日 申請(qǐng)日期1994年5月19日 優(yōu)先權(quán)日1993年6月11日
發(fā)明者艾文C·安格爾, 托馬斯A·弗里茲, 特里·馬斯安納格, 瓦瑞德瑞簡(jiǎn)·拉馬斯瓦米, 大衛(wèi)·耶柔赫爾, 吳冠禮 申請(qǐng)人:ImaRx藥物公司