專利名稱：漆酶的抗微生物活性的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組合使用能夠殺死或抑制微生物的漆酶和增效劑進(jìn)行抗微生物處理的方法，特別是處理存在于衣物中、硬表面上、皮膚、牙齒或粘膜上的微生物的方法，以及用于保存食品、化妝品、涂料、衣料等等，該組合物包含漆酶、作為電子供體的增效劑。
背景技術(shù)：
本領(lǐng)域中有許多酶的抗微生物組合物。例如，WO 94／04127公開了經(jīng)穩(wěn)定化的牙粉組合物，能夠產(chǎn)生抗微生物有效濃度的亞硫氰酸根離子(hypothiocyanite ion)。該組合物含有能夠產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶和能夠?qū)⑼ǔ４嬖谟谕僖褐械牧蚯杷岣x子(thiocyanate ion)氧化成抗微生物的亞硫氰酸根離子的過氧化物酶。合適的過氧化物酶包括乳過氧化物酶、髓過氧化物酶、唾液過氧化物酶和氯過氧化物酶。
在EP-A-0500387中公開的酶促抗微生物組合物包含鹵素過氧化物酶(haloperoxidase)，如髓過氧化物酶、嗜曙紅細(xì)胞氧化酶、乳過氧化物酶和氯過氧化物酶，當(dāng)過氧化物和鹵化物存在時(shí)它們能夠選擇性結(jié)合并抑制目標(biāo)微生物的生長。
WO 95／27046公開了包含釩氯過氧化物酶、鹵素離子和過氧化氫或過氧化氫發(fā)生劑的抗微生物組合物。
漆酶是根據(jù)下列通式催化底物氧化反應(yīng)的一種酶該酶已經(jīng)被用于造紙和紙漿工業(yè)(WO 94／29510)，在衣物洗滌中用于漂白目的(WO 91／05839，EP 91610032，DE4008894，JP-A64-60693)，但是還沒有提出將該酶用于抗菌目的的用途。
WO 96／10079公開了當(dāng)存在下式增效劑時(shí)用苯酚氧化酶將化合物氧化從而漂白溶液中的染料的方法
WO 97／28257和WO 97／00038公開了當(dāng)存在氧氣和增效劑時(shí)用來自芽孢桿菌屬細(xì)菌的多酚氧化酶滅活微生物或病毒的方法。
本發(fā)明的目的是提供針對微生物細(xì)胞或微生物體進(jìn)行抗微生物處理即消毒或防腐的方法，該方法容易使用，而且是已知消毒和防腐方法的有效替代方法。
發(fā)明概述微生物和／或病毒的處理包括當(dāng)存在氧氣(O2)時(shí)用有效量的真菌漆酶和有效量的一種或多種增效劑處理該微生物和／或病毒，增效劑通式如下
這種方法令人驚訝的顯示至今未知的協(xié)同抗微生物作用。
因此，基于這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明第一個(gè)方面提供一種酶促抗微生物方法，包括當(dāng)存在氧氣(O2)或氧氣(O2)源時(shí)用有效量的漆酶和所述增效劑處理微生物和／或病毒。
本發(fā)明在任何需要抗微生物處理的情況中都是有用的，例如可用于保存食品、飲料、化妝品、隱形眼鏡、食品成分、涂料或酶組合物；用于例如人或動(dòng)物皮膚、毛發(fā)、口腔、粘膜、傷口、瘀傷上或眼內(nèi)的抗微生物處理；用于衣物的抗微生物處理；以及用于與硬表面清潔或消毒有關(guān)的抗微生物處理。
因此，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了對存在于衣物上和／或用于浸泡、洗滌或漂洗衣物的液體中(例如洗衣機(jī)中)的微生物和／或病毒進(jìn)行抗微生物處理的方法；對人或動(dòng)物皮膚、毛發(fā)、口腔、粘膜、牙齒、眼睛、傷口、瘀傷上或中的微生物和／或病毒進(jìn)行抗微生物處理的方法；對化妝品中的微生物和／或病毒進(jìn)行抗微生物處理的方法；對隱形眼鏡上或中的微生物和／或病毒進(jìn)行抗微生物處理的方法以及對存在于硬表面上或中的微生物和／或病毒進(jìn)行抗微生物處理的方法。
圖的描述

圖1顯示了不同漆酶系統(tǒng)對銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)的抗微生物活性。使用的酶濃度是3mg／L，使用的增效劑濃度是0．1mM。測試的不同增效劑是1=無介質(zhì)；2=丁香酸甲酯；3=肉桂酸；4=綠原酸；5=PPT；6=丁香醛。不同組合的殺細(xì)菌活性以log cfu／ml表示，即每ml殺死的cfu(cfu=菌落形成單位)數(shù)目的對數(shù)。
圖2顯示了rMtL和MeS在pH6和40℃對銅綠假單胞菌的殺細(xì)菌活性的應(yīng)答面圖(response surface plot)(以每ml殺死的cfu數(shù)目的對數(shù)表示)。
圖3顯示了漆酶和丁香酸甲酯依賴pH的對表皮葡萄球菌的殺細(xì)菌活性(以每ml殺死的cfu數(shù)目的對數(shù)表示)。漆酶濃度=2mg／L；溫度=40℃；處理時(shí)間=20分鐘。使用了不同的漆酶和MeS濃度1=rPpL+25 mM MeS；2=rPpL+50mM MeS；3=rMtL+25mM MeS；4=rMtL+50mM MeS。
圖4顯示了不同丁香酸酯化合物與rMtL、rPpL或沒有漆酶的組合對表皮葡萄球菌的殺細(xì)菌活性(以每ml殺死的cfu數(shù)目的對數(shù)表示)。漆酶濃度是3mg／L；增效劑濃度是0．2mM；溫度=40℃；pH=6；處理時(shí)間=20分鐘。測試的增效劑是1=無增效劑；2=丁香酸甲酯；3=丁香酸乙酯；4=丁香酸丁酯；5=丁香酸月桂酯；6=乙酰丁香酮(acetosyringon)。虛線指示完全殺死測試的微生物。
圖5顯示了rPpL(1mg／L)和丁香酸甲酯及乙酰丁香酮在pH6和40℃對銅綠假單胞菌的殺細(xì)菌活性(用每ml殺死的cfu數(shù)目的對數(shù)表示)的應(yīng)答面圖。
發(fā)明的詳細(xì)描述定義在本文中，術(shù)語“抗微生物”理解為殺細(xì)菌、抑制細(xì)菌、殺真菌或抑制真菌。
在本文中，術(shù)語“殺細(xì)菌”理解為能夠殺死細(xì)菌細(xì)胞。
在本文中，術(shù)語“抑制細(xì)菌”理解為能夠抑制細(xì)菌生長，即抑制生長的細(xì)菌細(xì)胞。
在本文中，術(shù)語“殺真菌”理解為能夠殺死真菌細(xì)胞。
在本文中，術(shù)語“抑制真菌”理解為能夠抑制真菌生長，即抑制生長的真菌細(xì)胞。
術(shù)語“微生物”表示病毒、細(xì)菌或其細(xì)胞、真菌或其細(xì)胞。
此處使用的術(shù)語“硬表面”指本質(zhì)上微生物不能透過的任何表面。硬表面的實(shí)例是由金屬制造的表面，如不銹鋼合金、塑料／人工合成的聚合物、橡膠、木板、玻璃、木材、紙張、紡織品、混凝土、巖石、大理石、石膏和陶瓷材料，它們可任選地具有涂層，如用涂料、搪瓷、聚合物等等涂層。
抗微生物作用不受這種理論的束縛，相信在本發(fā)明漆酶／增效劑組合系統(tǒng)的抗微生物作用中的關(guān)鍵反應(yīng)是重要蛋白質(zhì)和酶的巰基或其它細(xì)胞位點(diǎn)的氧化反應(yīng)。
漆酶能夠催化電子供體如增效劑的依賴于O2的氧化反應(yīng)。被氧化的增效劑對微生物組分進(jìn)行親電攻擊，導(dǎo)致基本酶、轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)和其它功能組分的化學(xué)修飾。巰基尤其容易受到親電子攻擊，而且經(jīng)常以比其它易氧化基團(tuán)更大的量存在。芳香族氨基酸殘基同樣容易受到攻擊。抗微生物作用的多數(shù)方面可能與這些親核組分的化學(xué)修飾有關(guān)。抗微生物活性受惠于可提高被氧化劑穩(wěn)定性的一些影響，條件是這些影響不干擾它們的親電子特性、或它們穿透微生物膜的能力。雖然O2本身是氧化劑，但O2分子是穩(wěn)定的而且與生物學(xué)材料只發(fā)生緩慢反應(yīng)。漆酶催化的增效劑氧化反應(yīng)將氧化能O2轉(zhuǎn)變?yōu)楦菀装l(fā)生反應(yīng)的形式。
漆酶催化的反應(yīng)可以寫成
其中AHp和A是合適電子供體的還原和氧化形式；或在增效劑／通式中的試劑情況時(shí)如下
氧氣可以由空氣通過擴(kuò)散或通氣提供，或者可以由釋放氧氣的化合物產(chǎn)生。
可以產(chǎn)生針對多種微生物，如細(xì)菌、真菌和／或病毒的抗微生物作用。在本發(fā)明的特別實(shí)例中，對某些菌株的抗微生物作用可以比對其它菌株大，如對細(xì)菌比對真菌大或相反情況，或者對革蘭氏陽性細(xì)菌比對革蘭氏陰性細(xì)菌大或相反情況。
酶優(yōu)選下面提到的酶，尤其是重組的和／或基本純化的酶。
在本發(fā)明上下文中，“漆酶”包括酶分類E．C．1．10．3．2中的酶。
優(yōu)選的，使用的漆酶來自多孔菌屬之種(Polyporus sp．)的菌株，特別是Polyporus pinisitus或變色多孔菌(Polyporus versicolor)的菌株，或者毀絲霉屬之種(Myceliophthera sp．)的菌株，如嗜熱毀絲霉(M．thermophila)，或者絲核菌屬之種(Rhizoctonia sp．)的菌株，特別是Rhizoctonia praticola或立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)的菌株，或者Rhus sp．的菌株，特別是Rhus vernicifera的菌株。
在本發(fā)明的一些具體實(shí)例中，氧化還原酶是漆酶，諸如多孔漆酶，尤其是描述于WO 96／00290(Novo Nordisk Biotech．，Inc．)中的Polyporus pinisitus漆酶(也叫做Trametes villosa漆酶)；或是毀絲霉菌漆酶，尤其是描述于WO 95／33836(Novo Nordisk Biotech．，Inc．)中的嗜熱毀絲霉漆酶。
此外，漆酶可以是Scytalidium sp．漆酶，諸如描述于WO 95／33837(Novo Nordisk Biotech．，Inc．)中的S．thermophilium漆酶；或Pyricularia sp．漆酶，諸如可以從SIGMA以商品名SIGMA no．L5510購得的稻梨孢(P．oryzae)漆酶；或鬼傘(Coprinus sp．)漆酶，諸如灰蓋鬼傘(C．cinereus)漆酶，尤其是灰蓋鬼傘IFO 30116漆酶；或絲核菌漆酶，諸如立枯絲核菌漆酶，尤其是描述于WO 95／07988(Novo Nordisk A／S)、最佳pH范圍為pH6．0-8．5的中性立枯絲核菌漆酶。
漆酶還可以來自諸如金錢菌屬(Collybia)、層孔菌屬(Fomes)、香菇屬(Lentinus)、側(cè)耳屬(Pleurotus)、曲霉屬(Aspergillus)、脈孢菌屬(Neurospora)、柄孢殼屬(Podospora)、脈菌屬(Phlebia)如射脈菌(P．radiata)(WO 92／01046)、革蓋菌屬之種(Coriolus sp．)如毛革蓋菌(C．hirsitus)(JP 2-238885)、或葡萄孢屬(Botrytis)真菌。
增效劑已知出于多種目的有多種增效劑可作為漆酶的電子供體(如WO94／12620，WO 94／12621，WO 95／01626和WO 96／00179)。通式如下的一種或多種增效劑
在本發(fā)明上下文中顯示令人驚訝的有效。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)例中，該通式中的字母A表示諸如-D、-CH=CH-D、-CH=CH-CH=CH-D、-CH=N-D、-N=N-D、或-N=CH-D之類的基團(tuán)，其中D選自-CO-E、-SO2-E、-N-XY和-N+-XYZ，其中E可以是-H、-OH、-R或-OR，而X和Y和Z可以是相同的或不同的，并選自-H和-R；R是C1-C16烷基，優(yōu)選C1-C8烷基，這些烷基可以是飽和的或不飽和的、分支的或不分支的，并且任選地被羧基、磺基或氨基取代；B和C可以是相同的或不同的，并且選自CmH2m +1，其中m=1、2、3、4或5。
在上面提到的通式中，A可以位于羥基的間位而非顯示的對位。
在本發(fā)明的特殊實(shí)例中，增效劑選自通式如下的組
其中A是諸如-H、-OH、-CH3、-OCH3、-O(CH2)nCH3(其中n=1、2、3、4、5、6、7或8)的基團(tuán)。
所述增效劑的組合物可以適當(dāng)?shù)南嗬^或同時(shí)使用，而且可能具有額外的協(xié)同效應(yīng)，因?yàn)椴煌奈⑸飳μ囟ǖ脑鲂┛赡茱@示不同的敏感性。因此本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案涉及包含漆酶(EC 1．10．3．2)和至少兩種具有下列通式的不同增效劑的抗微生物組合物
其中A、B和C可以是如上文提到的取代基，而且漆酶和增效劑在組合物中以抗微生物有效量存在。組合物可以是固體顆?；蚍勰┲苿蛘呖梢允且后w。固體顆粒組合物可以如US 4，106，991、US 4，661，452、WO 97／31088或WO 95／33039中公開的方法制備，而且可以任選地用本領(lǐng)域的方法包被。液體組合物可以通過加入傳統(tǒng)的穩(wěn)定劑制備成穩(wěn)定的液體組合物、淤漿組合物或酶以受保護(hù)形式存在的組合物。受保護(hù)的酶可以根據(jù)EP 238，216 A或WO 97／41215中公開的方法制備。
所述增效劑可以商業(yè)購買或可以用本領(lǐng)域的方法制備。
漆酶的有效量漆酶可以以0．00001-100mg／L、優(yōu)選0．001-10mg／L、如0．1-5mg／L的濃度存在于要進(jìn)行抗微生物處理的介質(zhì)中，即洗滌液、化妝品、食品或飲料中；或者存在于要用來對其它物品進(jìn)行抗微生物處理的介質(zhì)中，即洗滌液、消毒液、防腐液、足浴液(foot bath)等等中。
增效劑的有效量漆酶可以以0．00001-500mM、優(yōu)選0．0001-5mM、如0．001-0．050mM的濃度存在于要進(jìn)行抗微生物處理的介質(zhì)即洗滌液、化妝品、食品或飲料中；或者存在于要用來對其它物品進(jìn)行抗微生物處理的介質(zhì)即洗滌液、消毒液、防腐液、足浴液等等中。
介質(zhì)漆酶和增效劑之間將會(huì)發(fā)生催化反應(yīng)的介質(zhì)優(yōu)選含水，而且可以是液體、氣溶膠、凝膠、糊或淤漿，這取決于本發(fā)明的預(yù)定用途。漆酶和增效劑還可分別或一起包含在用于制備所述介質(zhì)的固體制劑中。
本發(fā)明的抗微生物效率尤其取決于介質(zhì)的性質(zhì)，從而可以配合本發(fā)明的預(yù)期用途。受匹配的性質(zhì)可以是漆酶、增效劑和／或O2的可溶性或移動(dòng)性、催化反應(yīng)的速率等，這又取決于如介質(zhì)的pH、溫度和緩沖液。
介質(zhì)還可以影響增效劑通過與漆酶和O2的催化反應(yīng)形成的基團(tuán)的半壽期。不受任何理論的限制，目前推測介質(zhì)中基團(tuán)的半壽期和它的效率之間存在正相關(guān)性?；鶊F(tuán)的半壽期尤其取決于介質(zhì)的pH、溫度和緩沖液。
介質(zhì)還可以包含輔助試劑，諸如潤濕劑、增稠劑、緩沖液、穩(wěn)定劑、芳香劑、著色劑、填充劑、螯合劑等等(如來自洗滌劑組合物)。
有用的潤濕劑是表面活性劑，即非離子的、陰離子的、兩性的或兩性離子的表面活性劑。
正如已經(jīng)指出的，漆酶很適合用于本發(fā)明中，因?yàn)樗鼈冇煞肿友醮呋趸磻?yīng)，當(dāng)然還有其它原因。因而，在暴露于空氣的容器中(或在通入空氣或其它含氧氣體的其它反應(yīng)容器中)發(fā)生的而且涉及氧化酶的反應(yīng)將能夠利用氣態(tài)氧作為氧化劑；然而，在反應(yīng)過程中向液體介質(zhì)強(qiáng)制通氣以確保足夠氧供應(yīng)也可能比較合乎需要。
介質(zhì)的pH取決于漆酶的特性和采用的增效劑(和其它因素)，介質(zhì)中采用的pH通常位于5-11范圍內(nèi)，通常優(yōu)選6-10范圍內(nèi)，如pH6．5-8．5。
介質(zhì)的溫度在本發(fā)明的大量實(shí)例中，應(yīng)當(dāng)采用的溫度范圍是10-65℃，更優(yōu)選30-50℃。
處理時(shí)間處理時(shí)間取決于處理類型、待處理物品類型、介質(zhì)性質(zhì)，如溫度和pH以及所用酶和增效劑的類型和量，等等。
用于防腐目的時(shí)，處理時(shí)間可能取決于待保存物品的預(yù)期有效期。
用于消毒目的時(shí)，可以采取1-120分鐘范圍內(nèi)的處理時(shí)間。多數(shù)情況下，處理時(shí)間在5-20分鐘范圍內(nèi)比較合適。
處理衣物如上所述，本發(fā)明提供了用于對衣物上和／或例如洗衣機(jī)中用來浸泡、洗滌或漂洗衣物的液體中存在的微生物或病毒進(jìn)行抗微生物處理的方法?？梢詫⑵崦负驮鲂饺氲较礈靹┙M合物中。
洗滌劑化合物的表面活性劑體系本發(fā)明的洗滌劑組合物中含有表面活性劑體系，其中表面活性劑可以選自非離子型和／或陰離子型和／或陽離子型和／或兩性型和／或兩性離子型和／或半極性型表面活性劑。
表面活性劑一般以0．1-60％重量的量存在。
優(yōu)選將表面活性劑配制成與組合物中存在的酶組分相容。在液體或凝膠組合物中，最優(yōu)選將表面活性劑配制成能促進(jìn)或至少是不降低這些組合物中的任何酶的穩(wěn)定性。
根據(jù)本發(fā)明使用的優(yōu)選體系包括本文中所述的作為表面活性劑的一種或多種非離子和／或陰離子表面活性劑。
烷基酚的聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧丁烯縮合物適合用作本發(fā)明表面活性劑體系的非離子表面活性劑，其中優(yōu)選聚氧乙烯縮合物。這些化合物包括具有含約6-14個(gè)碳原子，優(yōu)選約8-14個(gè)碳原子直鏈或支鏈構(gòu)型之烷基的烷基酚與烯化氧的縮合產(chǎn)物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，環(huán)氧乙烷存在的量等于每摩爾烷基酚約2-25摩爾，更優(yōu)選約3-15摩爾的環(huán)氧乙烷。這類市售的非離子表面活性劑包括由GAF Corporation銷售的IgepalTMCO-630；和均由Rohm ＆ Haas Company銷售的TritonTMX-45、X-114、X-100和X-102。這些表面活性劑通常被稱之為烷基酚烷氧基化物(例如，烷基酚乙氧基化物)。
伯和仲脂族醇與約1-25摩爾環(huán)氧乙烷的縮合物適合用作本發(fā)明的非離子表面活性劑。該脂族醇的烷基鏈可以是直鏈或支鏈的、伯或仲的，并且通常含有約8-22個(gè)碳原子。優(yōu)選的是具有含約8-20個(gè)碳原子，更優(yōu)選約10-18個(gè)碳原子烷基的醇與每摩爾醇約2-10摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物。所述的縮合產(chǎn)物中每摩爾醇有約2-7摩爾的環(huán)氧乙烷，最優(yōu)選2-5摩爾的環(huán)氧乙烷?？蓮氖袌錾腺彽玫倪@類非離子表面活性劑的例子包括由Union Carbide Corporation銷售的TergitolTM15-S-9(C11-C15直鏈醇與9摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)和TergitolTM24-L-6 NMW(C12-C14伯醇與6摩爾環(huán)氧乙烷的窄分子量分布的縮合產(chǎn)物)；和由Shell Chemical Company銷售的NeodolTM45-9(C14-C15直鏈醇與9摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)、NeodolTM23-3(C12-C13直鏈醇與3．0摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)、NeodolTM45-7(C14-C15直鏈醇與7摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)、NeodolTM45-5(C14-C15直鏈醇與5摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)；由Procter ＆ Gamble Company銷售的KyroTMEOB(C13-C15醇與9摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)；和由Hoechst銷售的Genapol LA050(C12-C14醇與5摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物)。這些產(chǎn)物的HLB的優(yōu)選范圍是8-11，最優(yōu)選8-10。
也可用作本發(fā)明表面活性劑體系的非離子表面活性劑是在US4565647中公開的烷基多糖，該多糖具有含約6-30，優(yōu)選約10-16個(gè)碳原子的疏水基團(tuán)和含約1．3-10，優(yōu)選約1．3-3，最優(yōu)選約1．3-2．7個(gè)糖單元的多糖如多糖苷親水基團(tuán)?？梢允褂萌魏魏?或6個(gè)碳原子的還原糖，例如，可以用葡萄糖、半乳糖和半乳糖基部分代替葡萄糖基部分(任選地，在2-，3-，4-等位連接疏水基團(tuán)從而得到與葡萄糖苷或半乳糖苷不同的葡萄糖或半乳糖)。該糖間鍵可以在，例如，附加糖單元的1位和前一糖單元的2-，3-，4-，和／或6-位之間。
優(yōu)選的烷基多糖苷具有下式R2O(CnH2nO)t(糖基)x其中R2選自烷基、烷基苯基、羥基烷基、羥基烷基苯基、和其混合形式，其中烷基含有約10-18，優(yōu)選約12-14個(gè)碳原子；n是2或3，優(yōu)選2；t是0-約10，優(yōu)選0；x是約1．3-10，優(yōu)選約1．3-3，最優(yōu)選約1．3-2．7。該糖基優(yōu)選是從葡萄糖衍生的。為了制備這些化合物，先形成醇或烷基多乙氧基醇，然后與葡萄糖或葡萄糖源反應(yīng)，從而形成葡糖苷(在1-位連接)。然后另外的糖基單元在其1-位置與前面的糖基單元2-，3-，4-，和／或6-位置，優(yōu)選主要在2-位之間連接。
環(huán)氧乙烷與通過環(huán)氧丙烷與丙二醇縮合形成的疏水基之間的縮合產(chǎn)物也適合用作本發(fā)明的附加非離子表面活性劑體系。這些化合物的疏水部分的分子量優(yōu)選為約1500-1800并顯示出水不溶性。將聚氧乙烯部分加成到該疏水部分會(huì)增加整個(gè)分子的水溶性，在聚氧乙烯含量不超過該縮合產(chǎn)物總重量的約50％(相當(dāng)于與多達(dá)約40摩爾的環(huán)氧乙烷縮合)時(shí)，仍能保持該產(chǎn)品的液體性質(zhì)。這類化合物的例子包括某些可從市場上購得的由BASF銷售的PluronicTM表面活性劑。
也適合用作本發(fā)明非離子表面活性劑體系的非離子表面活性劑是環(huán)氧乙烷與從環(huán)氧丙烷和乙二胺反應(yīng)得到的產(chǎn)物的縮合產(chǎn)物。這些產(chǎn)物的疏水部分由乙二胺和過量環(huán)氧丙烷的反應(yīng)產(chǎn)物組成，并且分子量一般是約2500-3000。該疏水部分與環(huán)氧乙烷縮合，縮合程度為該縮合產(chǎn)物含有約40-80％重量的聚氧乙烯并且分子量為約5000-11000。這類非離子表面活性劑的例子包括某些可從市場上購得的由BASF銷售的TetronicTM化合物。
優(yōu)選用作本發(fā)明表面活性劑體系的非離子表面活性劑是烷基酚的聚氧乙烯縮合物、伯和仲脂族醇與約1-25摩爾環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物、烷基多糖、和其混合物。最優(yōu)選的是具有3-15個(gè)乙氧基的C8-C14烷基酚乙氧基化物和具有2-10個(gè)乙氧基的C8-C18(優(yōu)選平均為C10)醇乙氧基化物、和其混合物。
非常優(yōu)選的非離子表面活性劑是下式的多羥基脂肪酸酰胺表面活性劑
其中R1是H，或R1是C1-4烴基、2-羥基乙基、2-羥基丙基或其混合形式，R2是C5-31烴基，Z是具有直鏈烴基鏈、至少3個(gè)羥基直接連接到該鏈上的多羥基烴基，或其烷氧基化的衍生物。優(yōu)選地，R1是甲基，R2是直鏈C11-15烷基或C16-18烷基或鏈烯基鏈，例如椰油烷基，或其混合形式，Z是在還原性胺化反應(yīng)中從還原糖如葡萄糖、果糖、麥芽糖或乳糖衍生的。
非常優(yōu)選的陰離子表面活性劑包括烷基烷氧基化的硫酸鹽表面活性劑。其例子是式RO(A)mSO3M的水溶性鹽或酸，其中R是未取代的C10-C24烷基或具有C10-C24烷基部分的羥基烷基，優(yōu)選C12-C20烷基或羥基烷基，更優(yōu)選C12-C18烷基或羥基烷基，A是乙氧基或丙氧基單元，m大于0，一般為約0．5-6，更優(yōu)選約0．5-3，M是H或陽離子，該陽離子可以是例如金屬陽離子(如鈉、鉀、鋰、鈣、鎂等)、銨或取代銨陽離子。本文也涵蓋烷基乙氧基化硫酸鹽以及烷基丙氧基化硫酸鹽。取代銨陽離子的具體例子包括甲基、二甲基、三甲基銨陽離子和季銨陽離子如四甲基銨和二甲基哌啶鎓陽離子和從烷基胺如乙胺、二乙胺、三乙胺、其混合物衍生的那些陽離子等。舉例說明的表面活性劑是C12-C18烷基聚乙氧基化物(1．0)硫酸鹽(C12-C18E(1．0)M)、C12-C18烷基聚乙氧基化物(2．25)硫酸鹽(C12-C18E(2．25)M)、C12-C18烷基聚乙氧基化物(3．0)硫酸鹽(C12-C18E(3．0)M)、C12-C18烷基聚乙氧基化物(4．0)硫酸鹽(C12-C18E(4．0)M)，其中M方便地選自鈉和鉀。
適用的陰離子表面活性劑是烷基酯磺酸鹽表面活性劑，包括按照“The Journal of the American Oil Chemists Society”，52(1975)，pp．323-329用氣態(tài)SO3磺化的C8-C20羧酸(即脂肪酸)的直鏈酯。合適的原料包括從牛脂、棕櫚油等衍生的天然脂類物質(zhì)。
優(yōu)選的烷基酯磺酸鹽表面活性劑(尤其是用于洗衣用途的)包括下面結(jié)構(gòu)式的烷基酯磺酸鹽表面活性劑
其中R3是C8-C20烴基，優(yōu)選烷基，或其組合，R4是C1-C6烴基，優(yōu)選烷基，或其組合，M是與烷基酯磺酸根形成水溶性鹽的陽離子。合適的成鹽陽離子包括金屬陽離子(如鈉、鉀和鋰)和取代或未取代的銨陽離子(例如單乙醇胺、二乙醇胺、和三乙醇胺)。優(yōu)選地，R3是C10-C16烷基，R4是甲基、乙基或異丙基。特別優(yōu)選的是甲基酯磺酸鹽，其中R3是C10-C16烷基。
其它合適的陰離子表面活性劑包括烷基硫酸鹽表面活性劑，它們是式ROSO3M的水溶性鹽或酸，其中R優(yōu)選是C10-C24烴基，優(yōu)選具有C10-C20烷基部分的烷基或羥基烷基，更優(yōu)選C12-C18烷基或羥基烷基，M是H或陽離子，例如堿金屬陽離子(如鈉、鉀、鋰)，或者銨或取代銨(如甲基、二甲基和三甲基銨陽離子，和季銨陽離子例如四甲基銨和二甲基哌啶鎓陽離子，和從烷基胺例如乙胺、二乙胺、三乙胺和其混合形式衍生的季銨陽離子)等。一般地，對于較低的洗滌溫度(例如低于約50℃)，C12-C16烷基鏈?zhǔn)莾?yōu)選的，而對于較高的洗滌溫度(例如高于約50℃)，C16-C18烷基鏈?zhǔn)莾?yōu)選的。
其它對洗滌目的有用的陰離子表面活性劑也可以包括在本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物中。它們可以包括皂的鹽(包括，例如鈉、鉀、銨、和取代的銨如單、二和三乙醇胺鹽)、C8-C22伯或仲烷烴磺酸鹽、C8-C24烯烴磺酸鹽、通過堿土金屬檸檬酸鹽熱解產(chǎn)物的磺化制備的磺化多羧酸(例如在英國專利說明書號1082179中所述的)、C8-C24烷基聚二醇醚硫酸鹽(含有多達(dá)10摩爾的環(huán)氧乙烷)；烷基甘油磺酸鹽、脂肪?；视突撬猁}、脂肪油基甘油硫酸鹽、烷基酚氧乙烯醚硫酸鹽、石蠟烴磺酸鹽、烷基磷酸鹽、羥乙磺酸鹽如?；u乙磺酸鹽、N-?；；撬猁}、烷基琥珀酰胺酸鹽和磺基琥珀酸鹽、磺基琥珀酸的單酯(特別是飽和和不飽和C12-C18單酯)和磺基琥珀酸的二酯(特別是飽和和不飽和C6-C12二酯)、?；“彼猁}、烷基多糖的硫酸鹽例如烷基多葡糖苷(下面所述的非離子型非硫酸化的化合物)的硫酸鹽、支鏈伯烷基硫酸鹽、和烷基多乙氧基羧酸鹽例如那些式RO(CH2CH2O)k-CH2COO-M+的鹽，其中R是C8-C22烷基，k是1-10的整數(shù)，M是形成水溶性鹽的陽離子。樹脂酸及氫化的樹脂酸也是合適的，例如松香、氫化松香，以及存在于或衍生于松漿油的樹脂酸和氫化樹脂酸。
烷基苯磺酸鹽是非常優(yōu)選的。特別優(yōu)選的是線性(直鏈)烷基苯磺酸鹽(LAS)，其中該烷基優(yōu)選含有10-18個(gè)碳原子。
其它例子描述于“Surface Active Agents and Detergents”(Vol．ⅠandⅡ，Schwartz，Perry and Berch)中。各種這樣的表面活性劑也一般性地公開于US3929678中(第23欄58行-第29欄23行，該文獻(xiàn)引入本文作為參考)。
當(dāng)包括在其中時(shí)，本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物一般含有約1-40％，優(yōu)選約3-20％重量的上述陰離子表面活性劑。
本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物也可以含有陽離子、兩性、兩性離子和半極性表面活性劑，以及上文中并未述及的非離子和／或陰離子表面活性劑。
適用于本發(fā)明衣物洗滌劑組合物中的陽離子洗滌表面活性劑是具有一個(gè)長鏈烴基的那些表面活性劑。這樣的陽離子表面活性劑的例子包括銨表面活性劑例如烷基三甲基銨鹵化物，和具有下式的那些表面活性劑[R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X-其中R2是在烷基鏈中具有約8-18個(gè)碳原子的烷基或烷基芐基，每個(gè)R3選自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、-CH2CH2CH2-、和其混合形式；每個(gè)R4選自C1-C4烷基、C1-C4羥基烷基、由兩個(gè)R4連接在一起形成的芐基環(huán)結(jié)構(gòu)、-CH2CHOHCHOHCOR6CHOHCH2OH(其中R6是己糖或分子量低于約1000的己糖聚合物，并且當(dāng)y不是0時(shí)是氫)；R5與R4所述相同或是烷基鏈，其中R2+R5的總碳原子數(shù)不大于約18；每個(gè)y是0-約10，且該y值的和是0至約15；X是任何相容的陰離子。
非常優(yōu)選的陽離子表面活性劑是具有下式的、在本發(fā)明組合物中有用的水溶性季銨鹽化合物R1R2R3R4N+X-(ⅰ)其中R1是C8-C16烷基，每個(gè)R2、R3和R4各自獨(dú)立地是C1-C4烷基、C1-C4羥基烷基、芐基和-(C2H4O)xH(其中x的值為2-5)，X是陰離子。R2、R3、R4中不多于1個(gè)是芐基。
R1的優(yōu)選烷基鏈長度是C12-C15，當(dāng)該烷基是從椰油或棕櫚仁脂衍生的鏈長度的混合物，或是通過烯烴合成或OXO醇合成而合成衍生的時(shí)尤為如此。
用于R2、R3和R4的優(yōu)選基團(tuán)是甲基和羥基乙基，陰離子X可以選自鹵素離子、甲基硫酸根、醋酸根和磷酸根離子。
用于本文中的合適的式(Ⅰ)季銨化合物的例子是氯化或溴化椰油基三甲基銨；氯化或溴化椰油基甲基二羥基乙基銨；氯化癸基三乙基銨；氯化或溴化癸基二甲基羥基乙基銨；氯化或溴化C12-15二甲基羥基乙基銨；氯化或溴化椰油基二甲基羥基乙基銨；甲基硫酸肉豆蔻基三甲基銨；氯化或溴化月桂基二甲基芐基銨；氯化或溴化月桂基二甲基(乙氧基)4銨；膽堿酯(式(ⅰ)的化合物，其中R1是
二烷基咪唑啉[式(ⅰ)的化合物]。
其它在本文中有用的陽離子表面活性劑也描述于US4228044和EP000224中。
當(dāng)包括在其中時(shí)，本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物一般含有約0．2-25％，優(yōu)選約1-8％重量的上述陽離子表面活性劑。
兩性表面活性劑也適用于本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物中。這些表面活性劑可以概括地描述為仲或叔胺的脂族衍生物，或雜環(huán)仲或叔胺的脂族衍生物，其中脂族基團(tuán)可以是直鏈或支鏈的。其中1個(gè)脂族取代基含有至少約8個(gè)碳原子，一般約8-18個(gè)碳原子，并且至少一個(gè)脂族取代基含有陰離子型水增溶性基團(tuán)，例如羧基、磺酸根、硫酸根。見US3929678(第19欄18-35行)的兩性表面活性劑的例子。
當(dāng)包括在其中時(shí)，本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物一般含有約0．2-15％重量，優(yōu)選約1-10％重量的上述兩性表面活性劑。
兩性離子表面活性劑也適用于本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物中。這些表面活性劑可以概括地描述為仲或叔胺的衍生物，雜環(huán)的仲或叔胺的衍生物，或者季銨、季鏻或叔锍化合物的衍生物。見US3929678(第19欄38行-22欄48行)的兩性離子表面活性劑的例子。
當(dāng)包括在其中時(shí)，本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物一般含有約0．2-15％重量，優(yōu)選約1-10％重量的上述兩性離子表面活性劑。
半極性非離子表面活性劑是一特殊類型的非離子表面活性劑，它們包括含有1個(gè)約10-18個(gè)碳原子的烷基部分和選自含有約1-3個(gè)碳原子的烷基或羥基烷基的2個(gè)部分的水溶性氧化胺；含有1個(gè)約10-18個(gè)碳原子的烷基部分和選自含有約1-3個(gè)碳原子的烷基或羥基烷基的2個(gè)部分的水溶性氧化膦；和含有1個(gè)約10-18個(gè)碳原子的烷基部分和1個(gè)選自含有約1-3個(gè)碳原子的烷基或羥基烷基的部分的水溶性亞砜。
半極性非離子表面活性劑包括具有下式的氧化胺表面活性劑
其中R3是含有約8-22個(gè)碳原子的烷基、羥基烷基、或烷基苯基，或其混合形式；R4是含有約2-3個(gè)碳原子的亞烷基或羥基亞烷基或其混合形式；x是0-約3；每個(gè)R5是含有約1-3個(gè)碳原子的烷基或羥基烷基，或含有約1-3個(gè)氧乙烯基團(tuán)的多氧乙烯基。R5基團(tuán)可以彼此連接，例如通過氧或氮原子，從而形成環(huán)結(jié)構(gòu)。
特別地，這些氧化胺表面活性劑包括氧化C10-C18烷基二甲基胺和氧化C8-C12烷氧基乙基二羥基乙基胺。
當(dāng)包括在其中時(shí)，本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物一般含有約0．2-15％重量，優(yōu)選約1-10％重量的上述半極性非離子表面活性劑。
助洗劑體系本發(fā)明的組合物還可含有助洗劑體系。任何常規(guī)助洗劑體系都適用于本文中，其包括硅鋁酸鹽材料、硅酸鹽、多羧酸鹽和脂肪酸、諸如乙二胺四乙酸鹽的材料、金屬離子螯合劑例如氨基多膦酸鹽特別是乙二胺四亞甲基膦酸和二亞乙基三胺五亞甲基膦酸。盡管由于明顯的環(huán)境原因并不優(yōu)選，但本文中也可以使用磷酸鹽助洗劑。
合適的助洗劑可以是無機(jī)離子交換材料，通常是無機(jī)水合的硅鋁酸鹽材料，更具體地是水合的合成沸石，例如水合的沸石A、X、B、HS或MAP。
另一種合適的無機(jī)助洗劑材料是層狀硅酸鹽例如SKS-6(Hoechst)。SKS-6是由硅酸鈉(Na2Si2O5)組成的結(jié)晶層狀硅酸鹽。
合適的含有1個(gè)羧基的多羧酸鹽包括乳酸、乙醇酸和其醚衍生物的水溶性鹽，如在比利時(shí)專利號831368、821369和821370中所公開的。含有2個(gè)羧基的多羧酸鹽包括琥珀酸、丙二酸、(亞乙二氧基)二乙酸、馬來酸、二甘醇酸、酒石酸、丙醇二酸和富馬酸的水溶性鹽，以及在德國專利2446686和2446687及US3935257中所述的醚羧酸鹽，和在比利時(shí)專利號840623中所述的亞硫?；人猁}。含有3個(gè)羧基的多羧酸鹽具體地包括水溶性檸檬酸鹽、烏頭酸鹽(aconitrate)和檸康酸鹽以及琥珀酸鹽衍生物，例如，在英國專利號1379241中所述的羧基甲氧基琥珀酸鹽，在荷蘭申請7205873中所述的乳氧琥珀酸鹽(lactoxysuccinate)，和氧多羧酸鹽材料例如在英國專利號1387447中所述的2-氧雜-1，1，3-丙三羧酸鹽。
含有4個(gè)羧基的多羧酸鹽包括在英國專利號1261829中公開的氧聯(lián)二琥珀酸鹽、1，1，2，2-乙四羧酸鹽、1，1，3，3-丙四羧酸鹽和1，1，2，3-丙四羧酸鹽。含有磺基取代基的多羧酸鹽包括在英國專利號1398421和1398422和US3936448中公開的磺基琥珀酸鹽衍生物、和在英國專利號1082179中所述的磺化的熱解檸檬酸鹽，而英國專利號1439000中公開了含有膦取代基的多羧酸鹽。
脂環(huán)和雜環(huán)多羧酸鹽包括環(huán)戊烷-順，順，順-四羧酸鹽、環(huán)戊二烯五羧酸鹽(cyclopentadienide pentacarboxylate)、2，3，4，5-四氫呋喃-順，順，順-四羧酸鹽、2，5-四氫呋喃-順-二羧酸鹽、2，2，5，5-四氫呋喃-四羧酸鹽、1，2，3，4，5，6-己烷-六羧酸鹽和多元醇(例如山梨醇、甘露糖醇和木糖醇)的羧甲基衍生物。芳香族多羧酸鹽包括苯六甲酸、1，2，4，5，-苯四酸和在英國專利號1425343中公開的苯二甲酸衍生物。
在上面的多羧酸鹽中，優(yōu)選的多羧酸鹽是每分子含有最多達(dá)3個(gè)羧基的羥基羧酸鹽，更具體地是檸檬酸鹽。
用于本發(fā)明組合物中的優(yōu)選的助洗劑體系包括水不溶性硅鋁酸鹽助洗劑例如沸石A或?qū)訝罟杷猁}(SKS-6)的混合物，以及水溶性羧酸螯合劑例如檸檬酸。
包括在本發(fā)明洗滌劑組合物中的合適的螯合劑包括乙二胺-N，N’-二琥珀酸(EDDS)或其堿金屬、堿土金屬、銨或取代銨鹽，或其混合物。優(yōu)選的EDDS化合物是游離酸形式的和其鈉或鎂鹽。這樣的優(yōu)選EDDS鈉鹽的例子包括Na2EDDS和Na4EDDS。這樣的優(yōu)選EDDS鎂鹽的例子包括MgEDDS和Mg2EDDS。鎂鹽是最優(yōu)選包括在本發(fā)明組合物中的。
優(yōu)選的助洗劑體系包括水不溶性硅鋁酸鹽助洗劑例如沸石A和水溶性羧酸螯合劑例如檸檬酸的混合物。
可以形成用于粒狀組合物的助洗劑體系中一部分的其它助洗劑材料包括無機(jī)材料例如堿金屬碳酸鹽、碳酸氫鹽、硅酸鹽，和有機(jī)材料例如有機(jī)膦酸鹽、氨基多亞烷基膦酸鹽和氨基多羧酸鹽。
其它合適的水溶性有機(jī)鹽是均聚和共聚的酸或其鹽，其中該聚羧酸包括兩兩之間被不多于2個(gè)碳原子分開的至少兩個(gè)羧基。
這類聚合物公開于GB-A-1596756中。這樣的鹽的例子是MW2000-5000的聚丙烯酸鹽和其與馬來酸酐的共聚物，這樣的共聚物具有20000-70000，特別是約40000的分子量。
洗滌助洗劑鹽的量通常為組合物重量的5-80％。用于液體洗滌劑的助洗劑的優(yōu)選量是5-30％。
酶除了本發(fā)明的酶制劑外，優(yōu)選洗滌劑組合物還含有提供清洗性能和／或織物護(hù)理益處的其它酶。
這樣的酶包括蛋白酶、脂肪酶、角質(zhì)酶、淀粉酶、纖維素酶、過氧化物酶、其它氧化酶(例如漆酶)。
蛋白酶可以使用適用于堿性溶液的其它任何蛋白酶。合適的蛋白酶包括動(dòng)物、植物或微生物來源的。微生物來源是優(yōu)選的。包括化學(xué)或基因修飾的突變體。蛋白酶可以是絲氨酸蛋白酶，優(yōu)選堿性微生物蛋白酶或胰蛋白酶樣蛋白酶。堿性蛋白酶的例子是枯草桿菌蛋白酶，尤其是從芽孢桿菌衍生的那些，例如枯草桿菌蛋白酶Novo、枯草桿菌蛋白酶Carlsberg、枯草桿菌蛋白酶309、枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿菌蛋白酶168(描述于WO 89／06270中)。胰蛋白酶樣蛋白酶的例子是胰蛋白酶(例如豬或牛來源的)和描述于WO 89／06270中的鐮孢屬蛋白酶。
優(yōu)選的市售蛋白酶包括由Novo Nordisk A／S(Denmark)以商品名Alcalase、Savinase、Primase、Durazym和Esperase銷售的那些，由Genencor International以商品名Maxatase、Maxacal、Maxapem、Properase、Purafect、和Purafect OXP銷售的那些，和由SolvayEnzymes以商品名Opticlean和Optimase銷售的那些。按組合物重量計(jì)，可以以0．00001-2％，優(yōu)選0．0001-1％，更優(yōu)選0．001-0．5％，最優(yōu)選0．01-0．2％酶蛋白的量將蛋白酶摻入到本發(fā)明的組合物中。
脂肪酶可以使用任何適用于堿性溶液的脂肪酶。合適的脂肪酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)或基因工程修飾的突變體。
有用的脂肪酶的例子包括Humicola lanuginosa脂肪酶，例如描述于EP 258068和EP305216中的，Rhizomucor miehei脂肪酶，例如描述于EP 238023中的，假絲酵母屬脂肪酶例如C．a(chǎn)ntarctica脂肪酶，例如描述于EP214761中的C．a(chǎn)ntarctica脂肪酶A或B，假單胞菌屬脂肪酶例如描述于EP 218272中的產(chǎn)堿假單胞菌和類產(chǎn)堿假單胞菌脂肪酶、例如描述于EP 331376中的洋蔥假單胞菌脂肪酶、例如公開于GB1372034中的司徒茨氏假單胞菌脂肪酶，熒光假單胞菌脂肪酶，芽孢桿菌脂肪酶例如枯草芽孢桿菌脂肪酶(Dartois等，(1993)，Biochemica et Biophsica acta 1131，253-260)、嗜熱脂肪芽孢桿菌脂肪酶(JP 64／744992)和短小芽孢桿菌脂肪酶(WO 91／16422)。
此外，很多已克隆的脂肪酶也是有用的，包括Yamaguchi等在1991年《基因》103，61-67上描述的沙門氏柏干酪青霉脂肪酶、白地霉脂肪酶(Schimada，Y．等，(1989)，生物化學(xué)雜志，106，383-388)，和各種根霉屬脂肪酶例如德列馬根霉脂肪酶(Hass，M．J．等，(1991)，Gene 109，117-113)、雪白根霉脂肪酶(Kugimiya等，(1992)，Biosci．Biotech．Biochem．56，716-719)和米根霉脂肪酶。
其它類型的脂類分解酶，如角質(zhì)酶也是有用的，例如WO88／09867所述來自門多薩假單胞菌的角質(zhì)酶，來自Fusarium solani pisi的角質(zhì)酶(如WO90／09446所述)。
特別合適的脂肪酶是下面這些脂肪酶例如M1 LipaseTM、LumafastTM和LipomaxTM(Genecor)，LipolaseTM和Lipolase UltraTM(NovoNordisk A／S)，和Lipase P“Amano”(Amano Pharmacetical Co．Ltd．)。
按組合物重量計(jì)，一般以0．00001-2％，優(yōu)選0．0001-1％，更優(yōu)選0．001-0．5％，最優(yōu)選0．01-0．2％酶蛋白的量將脂肪酶摻入到本發(fā)明的洗滌劑組合物中。
淀粉酶可以使用適用于堿性溶液的任何淀粉酶(α和／或β)。合適的淀粉酶包括細(xì)菌和真菌來源的那些。包括化學(xué)或基因工程改性的突變體。淀粉酶包括例如，在GB1296839中詳細(xì)描述的從地衣芽孢桿菌的特定菌株得到的α-淀粉酶。市售的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM和BANTM(從Novo Nordisk A／S得到)和RapidaseTM和Maxamyl pTM(從Genencor得到)。
按組合物重量計(jì)，一般以0．00001-2％，優(yōu)選0．0001-1％，更優(yōu)選0．001-0．5％，最優(yōu)選0．01-0．2％酶蛋白的量將淀粉酶摻入到本發(fā)明的洗滌劑組合物中。
纖維素酶可以使用適用于堿性溶液的任何纖維素酶。合適的纖維素酶包括細(xì)菌和真菌來源的那些。包括化學(xué)或基因工程改性的突變體。合適的纖維素酶公開于US4435307(其中公開了從Humicolainsolens生產(chǎn)的真菌纖維素酶)，WO96／34108和WO96／34092(其中公開了來自芽孢桿菌的細(xì)菌嗜堿性纖維素酶BCE103)，WO94／21801、US5，475，101和US5，419，778(其中公開了木霉的EGIII纖維素酶)中。特別合適的纖維素酶是具有顏色護(hù)理益處的纖維素酶。這樣的纖維素酶的例子是描述于歐洲專利申請0495257中的纖維素酶。
市售的纖維素酶包括從一株Humicola insolens生產(chǎn)的CelluzymeTM(Novo Nordisk A／S)以及KAC-500(B)TM(KaoCorporation)。
按組合物重量計(jì)，一般以0．00001-2％，優(yōu)選0．0001-1％，更優(yōu)選0．001-0．5％，最優(yōu)選0．01-0．2％酶蛋白的量將纖維素酶摻入到本發(fā)明的洗滌劑組合物中。
過氧化物酶／氧化酶過氧化物酶與過氧化氫或其源(例如過碳酸鹽、過硼酸鹽或過硫酸鹽)一起使用。氧化酶與氧一起使用。兩種類型的酶均可用于“溶液漂白”，即在洗滌液中一起洗滌，優(yōu)選與例如WO94／12621和WO 95／01426中所述的增效劑一起洗滌所述織物時(shí)，防止染料從染色織物轉(zhuǎn)移到另一織物上。合適的過氧化物酶／氧化酶包括植物、細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)或基因工程修飾的突變體。
按組合物重量計(jì)，一般以0．00001-2％，優(yōu)選0．0001-1％，更優(yōu)選0．001-0．5％，最優(yōu)選0．01-0．2％酶蛋白的量將過氧化物酶和／或氧化酶摻入到本發(fā)明的洗滌劑組合物中。
在本文中包括上述酶的混合物，特別是蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和／或纖維素酶的混合物。
按組合物重量計(jì)，一般以0．00001-2％，優(yōu)選0．0001-1％，更優(yōu)選0．001-0．5％，最優(yōu)選0．01-0．2％酶蛋白的量將本發(fā)明的酶或摻入到洗滌劑組合物中的其它任何酶摻入到本發(fā)明的洗滌劑組合物中。
漂白劑可以包括在本發(fā)明洗滌劑組合物中的其它任選洗滌組分包括漂白劑，例如粒徑為400-800微米的PB1、PB4和過碳酸鹽。這些漂白劑組分可以包括一種或多種氧漂白劑，并且根據(jù)所選擇的漂白劑，可包括一種或多種漂白活化劑。當(dāng)存在氧漂白化合物時(shí)，其存在的量一般是約1-25％。通常，在非液體配方例如粒狀洗滌劑中，漂白化合物是任選加入的組分。
用于本文中的漂白劑組分可以是任何在洗滌劑組合物中有用的漂白劑，包括氧漂白劑以及本領(lǐng)域已知的其它漂白劑。
適合于本發(fā)明的漂白劑可以是活化的或未活化的漂白劑。
一類可以使用的氧漂白劑包括過羧酸漂白劑和其鹽。這類試劑的合適的例子包括單過氧鄰苯二甲酸鎂六水合物，間氯過苯甲酸、4-壬氨基-4-氧代過氧丁酸和雙過氧十二烷雙酸的鎂鹽。這樣的漂白劑公開于US4483781、US740446、EP0133354和US4412934中。非常優(yōu)選的漂白劑也包括如在US4634551所述的6-壬氨基-6-氧代過氧己酸。
另一類可以使用的漂白劑包括鹵素漂白劑。例如，次鹵酸鹽漂白劑的例子包括三氯異氰脲酸，以及二氯異氰脲酸的鈉和鉀鹽，和N-氯代和N-溴代烷烴磺基酰胺。這樣的材料通常以最終產(chǎn)品重量的0．5-10％、優(yōu)選1-5％的量加入。
可以將過氧化氫釋放劑與漂白活化劑一起使用，該漂白活化劑是例如四乙?；叶?TAED)、壬酰氧基苯磺酸鹽(NOBS，描述于US4412934中)、3，5-三甲基己酰氧基苯磺酸鹽(ISONOBS，描述于EP120591中)或五乙酰基葡萄糖(PAG)；將它們過水解后能形成過氧酸作為活性漂白物質(zhì)，導(dǎo)致改進(jìn)的漂白作用。另外，非常合適的是這些漂白活化劑C8(6-辛酰胺基己?；?羥苯磺酸鹽、C9(6-壬酰胺基己?；?羥苯磺酸鹽和C10(6-癸酰胺基己?；?羥苯磺酸鹽或其混合物。還合適的活化劑是?；臋幟仕狨?，例如在歐洲專利申請?zhí)?1870207．7所公開的。
可用于本發(fā)明清洗組合物中的有用的漂白劑，包括過氧酸和含有漂白活化劑和過氧漂白化合物的漂白體系描述于專利申請USSN08／136626中。
通過在洗滌和／或漂洗過程的開始或期間加入能夠生成過氧化氫的酶體系(即酶和其底物)，也可以存在過氧化氫。這樣的酶體系公開于歐洲專利申請EP0537381中。
除了氧漂白劑以外的漂白劑也是本領(lǐng)域已知的，并且可以在本文中使用。特別重要的一類非氧漂白劑包括光活化漂白劑，例如磺化的鋅和／或鋁酞菁。這些材料可以在洗滌期間沉積在被洗物上。當(dāng)存在氧時(shí)用光照射，例如通過將衣服掛出在日光中干燥時(shí)，該磺化的鋅酞菁被活化，結(jié)果該被洗物被漂白。優(yōu)選的鋅酞菁和光活化漂白方法描述于US4033718中。洗滌劑組合物一般含有約0．025-1．25％重量的磺化鋅酞菁。
漂白劑也可以包括錳催化劑。錳催化劑可以是例如在“低溫漂白的有效錳催化劑(Efficient manganese catalysts for low-temperature bleaching)”，自然369，1994，pp．637-639中所述的一種化合物。
抑泡劑另一個(gè)任選的組分是抑泡劑，例如硅氧烷和硅石-硅氧烷混合物。硅氧烷通常可以用烷基化的聚硅氧烷材料來表示，而硅石一般以細(xì)分散形式使用，例如二氧化硅氣凝膠和干凝膠和各種類型的疏水二氧化硅。這些材料可以作為顆粒加入，其中抑泡劑有利地可釋放地?fù)饺氲剿苄曰蛩稚⑿缘?、基本上無表面活性的洗滌劑不可滲透的載體中。另外，可以將抑泡劑溶解或分散在液體載體中并通過噴霧在一種或多種其它組分上來涂覆。
優(yōu)選的硅氧烷抑泡劑公開于US3933672中。其它特別有用的抑泡劑是德國專利申請DTOS2646126中所述的自乳化硅氧烷抑泡劑。這樣的化合物的例子是可從Dow Corning購得的DC-544，它是硅氧烷-二元醇共聚物。特別優(yōu)選的抑泡劑是含有硅油和2-烷基-鏈烷醇混合物的抑泡劑體系。合適的2-烷基-鏈烷醇是以商品名Isofol 12 R購得的2-丁基-辛醇。
這樣的抑泡劑體系公開于歐洲專利申請EP0593841中。
特別優(yōu)選的硅氧烷泡沫控制劑描述于歐洲專利申請92201649．8中。所述的組合物可以含有硅氧烷／硅石混合物以及熏制的無孔硅石例如AerosilR。
按組合物重量計(jì)，通常以0．001-2％，優(yōu)選0．01-1％的量使用上述的抑泡劑。
其它組分可以在洗滌劑組合物中使用的其它組分有例如污垢懸浮劑、污垢除去劑、熒光增白劑、磨料、殺菌劑、變色抑制劑、著色劑和／或包覆或未包覆的香料。
特別合適的包覆材料是由多糖基質(zhì)和多羥基化合物組成的水溶性膠囊，如在GB 1464616中所述的。
其它合適的水溶性包覆材料包括從取代二羧酸的未凝膠化淀粉酸酯衍生的糊精，例如在US3455838中所述的。這些酸酯糊精優(yōu)選是從諸如蠟質(zhì)玉米、蠟質(zhì)高粱、西米、木薯和馬鈴薯的淀粉制備的。所述的包覆材料的合適例子包括由National Starch制造的N-Lok。該N-Lok包覆材料由改性的玉米淀粉和葡萄糖組成。該淀粉是通過加上單官能取代基例如辛烯基琥珀酸酐改性的。
適合于本文中的防再污染劑和污垢懸浮劑包括纖維素衍生物，例如甲基纖維素、羧甲基纖維素和羥乙基纖維素，和均聚或共聚的聚羧酸或其鹽。這類聚合物包括上述作為助洗劑提到的聚丙烯酸鹽和馬來酸酐-丙烯酸共聚物，以及馬來酸酐與乙烯、甲基乙烯醚或甲基丙烯酸的共聚物，其中馬來酸酐至少構(gòu)成共聚物的20％摩爾。按組合物重量計(jì)，這些材料通常以組合物重量的0．5-10％，更優(yōu)選0．75-8％，最優(yōu)選1-6％的量使用。
優(yōu)選的熒光增白劑是陰離子性的，其例子是4，4’-雙-(2-雙乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-22’-二磺酸二鈉鹽、4，4’-雙-(2-嗎啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-22’-二磺酸二鈉、4，4’-雙-(2，4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-22’-二磺酸二鈉、4’，4”-雙-(2，4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2-磺酸一鈉、4，4’-雙-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羥乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-22’-二磺酸二鈉、4，4’-雙-(4-苯基-2，1，3-三唑-2-基)芪-22’-二磺酸二鈉、4，4’-雙-(2-苯胺基-4-(1-甲基-2-羥乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-22’-二磺酸二鈉、2(芪基-4”-(萘并-1’，2’4，5)-1，2，3-三唑-2”-磺酸鈉和4，4’-雙-(2-磺基苯乙烯基)聯(lián)苯。
其它有用的聚合物材料是聚乙二醇，特別是分子量為1000-10000，更具體是2000-8000和最優(yōu)選是約4000的那些。以0．20-5％重量，更優(yōu)選0．25-2．5％重量的量使用這些聚合物材料。這些聚合物和上述均聚或共聚的聚羧酸鹽對于存在過渡金屬雜質(zhì)時(shí)改進(jìn)白度維持性，織物灰分沉積和對粘土、蛋白質(zhì)性和可氧化性污垢的清洗性能是重要的。
在本發(fā)明組合物中有用的污垢除去劑是對苯二甲酸與乙二醇和／或丙二醇單元各種對比的常規(guī)共聚物或三元共聚物。這樣的聚合物的例子公開于US4116885和US4711730及EP0272033中。根據(jù)EP0272033特別優(yōu)選的聚合物具有下式(CH3(PEG)43)0．75(POH)0．25[(T-PO)2．8(T-PEG)0．4]T(POH)0．25((PEG)43CH3)0．75其中PEG是-(OC2H4)O-，PO是(OC3H6O)，T是(pOOC6H4CO)。
還非常有用的是作為二甲基對苯二甲酸酯、二甲基磺基間苯二酸酯、乙二醇和1，2-丙二醇無規(guī)共聚物的改性聚酯，該端基主要由磺基苯甲酸酯組成，還有一小部分是乙二醇和／或1，2-丙二醇的單酯。目的是“主要”得到在兩端由磺基苯甲酸基團(tuán)封端的聚合物，本文中是絕大多數(shù)本文所述共聚物是由磺基苯甲酸基團(tuán)封端的。然而，某些共聚物并未完全封端，因此其端基可以由乙二醇和／或1，2-丙二醇的單酯組成，其“次要”地由這樣的物質(zhì)組成。
本文中選擇的聚酯含有約46％重量的二甲基對苯二甲酸，約16％重量的1，2-丙二醇，約10％重量的乙二醇，約13％重量的二甲基磺基苯甲酸和約15％重量的磺基間苯二酸，并且其分子量為約3000。該聚酯和其制備方法詳細(xì)地?cái)⑹鲇贓P311342中。
柔軟劑可以將織物柔軟劑加入到本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物中。這些試劑在類型上可以是無機(jī)或有機(jī)的。無機(jī)柔軟劑的例子是在GB-A-1400898和US5019292中公開的綠土粘土。有機(jī)的織物柔軟劑包括如在GB-A-1514276和EP 0011340中公開的水不溶性叔胺，其與單C12-C14季胺鹽的混合物(公開于EP-B 0026528中)，和如在EP 0242919中所公開的二長鏈酰胺?？椢锶彳泟w系的其它有用有機(jī)組分包括高分子量的聚氧乙烯材料，如在EP 0299575和0313146中所公開的。
綠土粘土的含量一般在5-15％重量的范圍，更優(yōu)選8-12％重量，作為干混合組分材料加入到配方的其余部分中。以0．5-5％重量，一般1-3％重量的量加入有機(jī)織物柔軟劑，例如水不溶性叔胺或二長鏈酰胺材料，而以0．1-2％重量，一般0．15-1．5％重量的量加入高分子量聚氧乙烯材料和水溶性陽離子材料。盡管在某些情況下作為干混顆粒加入它們可以更方便，但一般將這些材料加到該組合物的噴霧干燥組分上，或者作為熔融的液體將它們噴霧到組合物的其它固體組分上。
聚合染料轉(zhuǎn)移抑制劑按照本發(fā)明的洗滌劑組合物還包括0．001-10％重量，優(yōu)選0．01-2％重量，更優(yōu)選0．05-1％重量的聚合染料轉(zhuǎn)移抑制劑。一般將所述的聚合染料轉(zhuǎn)移抑制劑加入到洗滌劑組合物中以便抑制染料從有色織物轉(zhuǎn)移到與其一起洗滌的織物上。在染料于洗滌中附著到其它物品上之前，這些聚合物會(huì)絡(luò)合或吸附從染色織物洗滌下來的短效染料。
特別合適的聚合染料轉(zhuǎn)移抑制劑是聚N-氧化胺聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯吡咯烷酮聚合物、聚乙烯基鎓唑烷酮和聚乙烯基咪唑，或其混合物。
加入這樣的聚合物也增強(qiáng)了本發(fā)明酶的性能。
本發(fā)明的洗滌劑組合物可以是液體、膏狀、凝膠、條狀或粒狀形式。
可以按例如US4106991和US4661452(兩者均是Novo Industri A／S的專利)中所公開的生產(chǎn)無塵的顆粒，并且該顆粒可以任選地用本領(lǐng)域已知的方法涂覆。蠟質(zhì)涂覆材料的例子是平均分子量為1000-20000的聚(氧乙烯)產(chǎn)品(聚乙二醇，PEG)；具有16-50個(gè)環(huán)氧乙烷單元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化的脂肪醇，其中該醇含有12-20個(gè)碳原子并且其中有15-80個(gè)環(huán)氧乙烷單元；脂肪醇；脂肪酸；和脂肪酸的單-、二-及三-甘油酯。在GB1483591中給出了適合于流化床技術(shù)涂覆的成膜涂覆材料的例子。
本發(fā)明的粒狀組合物也可以是“致密形式”的，即它們具有比常規(guī)的粒狀洗滌劑相對高的密度，即550-950g／l；在這樣的情況下，本發(fā)明的粒狀洗滌劑組合物將含有比常規(guī)顆粒洗滌劑更少量的“無機(jī)填料鹽”；一般的填料鹽是堿土金屬的硫酸鹽和氯化物，一般是硫酸鈉；“致密”的洗滌劑一般包括不多于10％的填料鹽。本發(fā)明的液體組合物也可以是“濃縮形式”的，在這樣的情況下，本發(fā)明的液體洗滌劑組合物將比常規(guī)的液體洗滌劑含有較低量的水。按組合物重量計(jì)，濃縮的液體洗滌劑的水含量一般低于30％，更優(yōu)選低于20％，最優(yōu)選低于10％。
例如，可以將本發(fā)明的組合物配制為手洗或機(jī)洗衣物洗滌劑組合物，包括洗衣添加劑組合物和適用于臟織物預(yù)處理的組合物，漂洗加入的織物柔軟劑組合物，和用于普通家庭硬表面清洗和碗碟洗滌的組合物。
下面的實(shí)例旨在舉例說明本發(fā)明的組合物，而不對本發(fā)明范圍作任何限制。
在洗滌劑組合物中，縮寫組分符號具有下面的意義LAS 直鏈C12烷基苯磺酸鈉TAS 牛脂烷基硫酸鈉XYAS C1X-C1y烷基硫酸鈉SS式2-丁基辛酸的仲皂表面活性劑25EY 與平均Y摩爾環(huán)氧乙烷縮合的主要為C12-C15的直鏈伯醇45EY 與平均Y摩爾環(huán)氧乙烷縮合的主要為C14-C15的直鏈伯醇XYEZS每摩爾與平均Z摩爾環(huán)氧乙烷縮合的C1X-C1Y烷基硫酸鈉非離子由BASF Gmbh以商品名Plurafax LF404銷售的、平均乙氧基化程度為3．8和平均丙氧基化程度為4．5的C13-C15混合乙氧基化／丙氧基化脂肪醇CFAA C12-C14烷基N-甲基葡糖酰胺TFAA C16-C18烷基N-甲基葡糖酰胺硅酸鹽無定型硅酸鈉(SiO2∶Na2O比=2．0)NaSKS-6 式d-Na2Si2O5的結(jié)晶層狀硅酸鹽碳酸鹽無水碳酸鈉磷酸鹽三聚磷酸鈉MA／AA1∶4的馬來酸／丙烯酸共聚物，平均分子量約80000聚丙烯酸酯BASF GmbH以商品名PA30銷售的平均分子量為約8000的聚丙烯酸酯均聚物沸石A 式Na12(AlO2SiO2)12．27H2O的水合硅鋁酸鈉，主要粒徑為1-10微米檸檬酸鹽 檸檬酸三鈉二水合物檸檬酸檸檬酸過硼酸鹽 無水過硼酸鈉一水合物漂白劑，經(jīng)驗(yàn)式為NaBO2·H2O2PB4無水過硼酸鈉四水合物過碳酸鹽 經(jīng)驗(yàn)式為2Na2CO3·3H2O2的無水過碳酸鈉漂白劑TAED 四乙?；叶稢MC羧甲基纖維素鈉DETPMP 由Monsanto以商品名Dequest 2060銷售的二乙三胺五(亞甲基膦酸)PVP聚乙烯吡咯烷酮聚合物EDDS 鈉鹽形式的乙二胺-N，N’-二琥珀酸，[S，S]異構(gòu)體抑泡劑 25％熔點(diǎn)為50℃的石蠟，17％的疏水性二氧化硅，58％的石蠟油顆粒抑泡劑 顆粒形式的12％硅氧烷／二氧化硅，18％的硬脂醇，70％的淀粉硫酸鹽 無水硫酸鈉HMWPEO 高分子量聚氧乙烯TAE 25 牛脂醇乙氧基化物(25)洗滌劑實(shí)施例Ⅰ可以按如下所示制備本發(fā)明粒狀織物清洗組合物線性C12烷基苯磺酸鈉 6．5硫酸鈉 15．0沸石A 26．0次氮基三醋酸鈉 5．0本發(fā)明的酶 0．1PVP 0．5TAED 3．0硼酸 4．0過硼酸鹽18．0苯酚磺酸鹽 0．1
次要組份至100洗滌劑實(shí)施例Ⅱ可以按如下所示制備本發(fā)明的致密粒狀織物清洗組合物(密度800g／l)45AS8．025E3S 2．025E53．025E33．0TFAA2．5沸石A 17．0NaSKS-612．0檸檬酸 3．0碳酸鹽 7．0MA／AA 5．0CMC 0．4本發(fā)明的酶 0．1TAED6．0過碳酸鹽 22．0EDDS0．3粒狀抑泡劑 3．5水／次要組份至100％洗滌劑實(shí)施例Ⅲ按如下所示制備在洗滌彩色織物中特別有用的本發(fā)明粒狀織物清洗組合物L(fēng)AS 10．7 -TAS 2．4 -TFAA - 4．0
45AS 3．110．045E7 4．0-25E3S- 3．068E111．8-25E5 - 8．0檸檬酸鹽 15．0 7．0碳酸鹽 - 10檸檬酸 2．53．0沸石A32．1 25．0NaSKS-6 - 9．0MA／AA 5．05．0DETPMP 0．20．8本發(fā)明的酶 0．10 0．05硅酸鹽 2．5-硫酸鹽 5．23．0PVP 0．5-聚(4-乙烯基吡啶)-N-氧化物／乙烯基- 0．2咪唑和乙烯基吡咯烷酮的共聚物過硼酸鹽 1．0-苯酚磺酸鹽 0．2-水／次要組份 至 100％洗滌劑實(shí)施例Ⅳ可按如下所示制備本發(fā)明具有“通過洗滌進(jìn)行軟化”的能力的粒狀織物清洗組合物45AS - 10．0LAS 7．6-68AS 1．3-45E7 4．0-
25E3 - 5．0氯化椰油烷基二甲基羥乙基銨 1．41．0檸檬酸鹽 5．03．0NaSKS-6 - 11．0沸石A15．0 15．0MA／AA 4．04．0DETPMP 0．40．4過硼酸鹽 15．0 -過碳酸鹽 - 15．0TAED 5．05．0綠土粘土 10．0 10．0HMWPEO - 0．1本發(fā)明的酶 0．10 0．05硅酸鹽 3．05．0碳酸鹽 10．0 10．0粒狀抑泡劑 1．04．0CMC 0．20．1水／次要組份 至 100％洗滌劑實(shí)施例Ⅴ可按如下制備本發(fā)明的重垢液體織物清洗組合物Ⅰ Ⅱ酸形式的LAS- 25．0檸檬酸 5．0 2．0酸形式的25AS 8．0 -酸形式的25AE2S 3．0 -25AE7 8．0 -CFAA 5 -DETPMP 1．0 1．0
脂肪酸 8 -油酸 - 1．0乙醇 4．06．0丙二醇 2．06．0本發(fā)明的酶 0．10 0．05氯化椰油烷基二甲基羥乙基銨 - 3．0綠土粘土 - 5．0PVP 2．0-水／次要組份 至 100％人或動(dòng)物部分的處理本發(fā)明提供了對人或動(dòng)物皮膚、毛發(fā)、口腔、粘膜、牙齒、眼睛、傷口或淤傷處存在的微生物或病毒進(jìn)行抗微生物處理的方法。
因此，本發(fā)明可用于消毒，例如痤瘡或其它皮膚感染、眼及口的感染、足上及腋窩、牙齒(口腔護(hù)理)、傷口、淤傷處等的微生物生長的處理。這種處理可以通過利用含有所述漆酶和所述增效劑的氣溶膠、液體、乳劑、凝膠、淤漿、糊或固體而進(jìn)行?；瘖y品、食品或飲料或者其它產(chǎn)品的處理本發(fā)明可用于保存食品、飲料、化妝品諸如洗液、面霜、凝膠、油膏、肥皂、香波、調(diào)節(jié)劑、止汗劑、除臭劑、口腔清洗劑、隱形眼鏡產(chǎn)品、足浴產(chǎn)品、酶制劑或產(chǎn)品成分。本發(fā)明可以以能夠達(dá)到所希望的抗微生物作用的有效量應(yīng)用于未經(jīng)過防腐處理的食品、飲料、化妝品、食品成分。隱形眼鏡的處理本發(fā)明可用于隱形眼鏡的清洗和／或抗微生物處理。硬表面的處理總的說來，可以認(rèn)為本發(fā)明提供了可用于對如前面定義的任何硬表面進(jìn)行抗微生物處理的方法。這種處理可應(yīng)用于常規(guī)消毒目的，如醫(yī)院病房、手術(shù)室、要求消毒的食品加工或其它用途的房間的消毒。硬表面還可以是冷卻塔、水處理廠、牛奶場、食品或食品添加劑加工廠、化學(xué)藥品或藥物加工廠的加工設(shè)備部分。硬表面還可以是醫(yī)療設(shè)備或水衛(wèi)生設(shè)備。因此，本發(fā)明提供了可用于傳統(tǒng)的原位清洗(cleaning-in-place，C-I-P)系統(tǒng)的抗微生物方法。本發(fā)明中采用的漆酶和增效劑通過介質(zhì)可與所討論的表面發(fā)生接觸，并應(yīng)當(dāng)以具有抗微生物作用的量存在。
涂料的保存／防腐罐裝涂料產(chǎn)品的保存在本領(lǐng)域通過向涂料中加入非酶促的有機(jī)殺菌劑而達(dá)到。在本發(fā)明的文章中，涂料理解為包含溶解或分散于液體載體諸如水、有機(jī)溶劑和／或油中的固體著色物的物質(zhì)，當(dāng)涂抹在表面上，變干，剩下一層薄的有色的裝飾性和／或保護(hù)性覆料。通常將異噻唑啉酮類(isothiazolione)，諸如5-氯-2-甲基-4-噻唑啉-3-酮(5-chlor-2-methyl-4-thia-zoli-3-on)，作為殺生物劑以大約0．05-0．5％的用量范圍加入到涂料中以抑制／防止微生物在涂料中生長。本發(fā)明的方法仍然可以合適應(yīng)用于這個(gè)領(lǐng)域，通過用與環(huán)境相容的酶取代有毒有機(jī)殺菌劑，從而解決了使用這些有毒有機(jī)殺生物劑永遠(yuǎn)存在的危害環(huán)境生物的問題。這樣，本發(fā)明提供了一種涂料保存的方法，包括使所述涂料與本發(fā)明的漆酶和一種或多種增效劑接觸。此外，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的漆酶和一種或多種增效劑的涂料組合物。
涂料優(yōu)選基于水的涂料，即涂料固體散布于水溶液中。涂料可含有0-20％，優(yōu)選0-10％，如0-5％有機(jī)溶劑。
可將酶加入到涂料中，其量是每升涂料0．0001-100mg活性酶蛋白質(zhì)，優(yōu)選0．001-10mg，如0．01-1mg，同時(shí)可加入增效劑，其量為涂料組合物中10-500μM，優(yōu)選25-250μM，如100μM。
本發(fā)明由下列非限制性實(shí)施例舉例說明。
實(shí)施例1漆酶與不同增效劑的抗細(xì)菌活性重組毀絲霉漆酶(rMtL，WO 95／33836)和重組多孔菌漆酶(rPpL，WO 96／00290)的殺微生物活性(即殺細(xì)菌活性)在pH 6、通過使用丁香酸甲酯(MeS)、肉桂酸、綠原酸、丁香醛和PPT作為增效劑進(jìn)行測試。
在0．05M MES緩沖液(2-[N-嗎啉代]乙烷磺酸)(pH 6)(在過濾除菌前通氣5 min)中測定殺細(xì)菌活性。殺細(xì)菌活性是對銅綠假單孢菌(ATCC 10145)和表皮葡萄球菌(DSM 20042)進(jìn)行測定的。細(xì)胞在胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基(Tryptone Soya Broth)(Oxoid CM129)中于30℃生長24h，并在MES緩沖液中將細(xì)胞稀釋到終濃度大約104cfu／ml。將細(xì)胞懸浮液與漆酶(3mg／L)和增效劑(0．1mM)在40℃混合20min。殺細(xì)菌活性通過在Malthus中保溫進(jìn)行測定。使用標(biāo)準(zhǔn)曲線將用Malthus儀器測量的檢測時(shí)間轉(zhuǎn)換成cfu／ml。當(dāng)計(jì)數(shù)總存活細(xì)胞時(shí)，直接或間接Malthus測量都可以使用(Malthus Flexi M2060，Malthus儀器有限公司)。如果采用直接測量，則通過測量生長培養(yǎng)基中的電導(dǎo)測定細(xì)胞新陳代謝。如果采用間接測量，則將3ml生長培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到間接Malthus加樣室的外間，并將0．5ml無菌KOH(0．1M)轉(zhuǎn)移到內(nèi)間。細(xì)胞懸浮液在酶處理之后轉(zhuǎn)移到Malthus加樣室的外間。隨著細(xì)胞在外間生長，它們產(chǎn)生CO2并溶解于內(nèi)間的KOH中從而改變KOH的電導(dǎo)。幸免于酶處理的呼吸細(xì)胞產(chǎn)生的CO2的量用來估計(jì)存活細(xì)胞的數(shù)目。當(dāng)電導(dǎo)變化可通過Malthus測量時(shí)，記錄檢測時(shí)間(dt)。通過使用聯(lián)系cfu／ml和dt的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將dt轉(zhuǎn)換成菌落計(jì)數(shù)(Johansen等人，1995，應(yīng)用細(xì)菌學(xué)雜志(Journal of Applied Bacteriology)78297-303；Johansen等人，1997，應(yīng)用和環(huán)境微生物學(xué)(Appliedand Environmental Microbiology)633724-3728)。
在pH 6、漆酶=3mg／L而增效劑=0．1mM(使用丁香酸甲酯(MeS)作為增效劑)得到rPpL和rMtL的殺細(xì)菌活性(log(cfu／ml)=殺死細(xì)胞數(shù)目的對數(shù))。其它增效劑在這些實(shí)驗(yàn)條件下都不導(dǎo)致殺菌活性(圖11=無增效劑；2=丁香酸甲酯；3=肉桂酸；4=綠原酸；5=PPT；6=丁香醛)，然而，漆酶／增效劑系統(tǒng)的殺細(xì)菌活性取決于pH等因素，因而其它增效劑可能在如高pH有利。
rMtL／MeS或rPpL／MeS的殺細(xì)菌活性對表皮葡萄球菌尤其有效(圖1)，它被rPpL／MeS 100％殺死(pH6)而用rMtL／MeS處理只有少數(shù)細(xì)胞能存活。然而對銅綠假單孢菌的殺細(xì)菌活性觀察到為細(xì)胞減少1-2對數(shù)單位(圖1)。
實(shí)施例2毀絲霉漆酶和丁香酸甲酯的殺細(xì)菌活性毀絲霉漆酶(rMtL)和丁香酸甲酯(MeS)的抗微生物活性(即殺細(xì)菌活性)使用32因子設(shè)計(jì)在pH 6和40℃在MES緩沖液中如實(shí)施例1中描述的方法進(jìn)行測定，但是使用更高的細(xì)胞濃度(107-108cfu／ml)。測試的rMtL水平是0-2．5-5mg／L，MeS水平是0-5-10mM。
在MeS濃度為5-10mM之間時(shí)對銅綠假單胞菌(ATCC 10145)有殺細(xì)菌活性。將rMtL的濃度從2．5提高到5mg／L導(dǎo)致殺細(xì)菌活性的降低，因而在這些特定條件下酶對銅綠假單胞菌的殺細(xì)菌活性的最佳濃度低于5mg／L。在高M(jìn)eS濃度和pH 6得到的殺細(xì)菌活性與100％殺細(xì)菌活性非常接近(圖2)。在pH 4得到100％殺細(xì)菌活性。
在pH 5-6且MeS濃度高于0．5mM時(shí)，用rMtL／MeS處理100％殺死革蘭氏陽性菌株表皮葡萄球菌。MeS在使用的濃度下對這兩種測試生物體無殺細(xì)菌性，除非與漆酶組合。
實(shí)施例3漆酶／丁香酸甲酯抗微生物活性的最佳pHrMtL和rPpL與MeS作為增效劑一起的抗微生物活性(即殺細(xì)菌活性)在pH 4-10通過使用下列緩沖系統(tǒng)進(jìn)行測定homopipes(pH 4和5)、MES(pH 6)、HEPES(pH 7和8)、HEPES／CAPS(pH 9)和CAPS(pH 10)。如實(shí)施例1中描述的方法在40℃對表皮葡萄球菌評估殺細(xì)菌活性。
rPpL和rMtL在低pH都具有殺細(xì)菌活性(圖31=(rPpL=2mg／L，MeS=25mM)；2=(rPpL=2mg／L，MeS=50mM)；3=(rMtL=2mg／L，MeS=25mM)；4=(rMtL=2mg／L，MeS=50mM))。rPpL和rMtL的殺細(xì)菌活性隨pH降低而升高，然而，在測試的MeS濃度下，殺細(xì)菌活性僅限于pH值高于5的情況下。
通過升高M(jìn)eS濃度可以在更高的pH值下得到顯著的殺細(xì)菌活性，這樣，在pH 9使用如rMtL=5mg／L和Mes=5mM，得到對表皮葡萄球菌的殺細(xì)菌活性。
通過挑選在特定的期望條件下有活性的漆酶和增效劑，可以在不同條件(pH、溫度等)下獲得殺細(xì)菌活性。
實(shí)施例4毀絲霉和多孔菌漆酶使用不同丁香酸酯的抗微生物活性毀絲霉漆酶(rMtL)和多孔菌漆酶(rPpL)的抗微生物活性(即殺細(xì)菌活性)對表皮葡萄球菌在pH 6于MES緩沖液中如實(shí)施例1中描述的方法進(jìn)行測定，漆酶使用濃度3mg／L。在0．2mM濃度評估作為電子供體的乙酰丁香酮、丁香酸甲酯、丁香酸乙酯、丁香酸丁酯和丁香酸月桂酯的殺細(xì)菌活性。
所有丁香酸酯化合物當(dāng)與漆酶組合使用時(shí)都具有殺細(xì)菌活性。丁香酸月桂酯和乙酰丁香酮不與漆酶一起使用時(shí)確實(shí)也顯示殺細(xì)菌活性，然而，當(dāng)加入漆酶時(shí)其殺細(xì)菌活性顯著升高(圖41=無增效劑；2=丁香酸甲酯；3=丁香酸乙酯；4=丁香酸丁酯；5=丁香酸月桂酯；6=乙酰丁香酮；虛線=殺死總數(shù))。
當(dāng)與多孔菌漆酶組合使用時(shí)，乙酰丁香酮、丁香酸甲酯、丁香酸乙酯和丁香酸丁酯對表皮葡萄球菌有100％殺細(xì)菌活性。然而用毀絲霉漆酶和乙酰丁香酮得到的殺細(xì)菌活性與用多孔菌漆酶得到的活性和用其它丁香酸酯化合物得到的活性相比都降低了。還對比表皮葡萄球菌更有抵抗力的銅綠假單胞菌評估了不同的丁香酸酯化合物。發(fā)現(xiàn)乙酰丁香酮是對銅綠假單胞菌最有效的殺菌增效劑。
實(shí)施例5不同增效劑組合的協(xié)同效應(yīng)各種微生物的敏感性取決于使用的增效劑，因而通過組合不同的增效劑并同時(shí)應(yīng)用它們可以得到廣譜的抗微生物活性。如果使用增效劑混合物，預(yù)計(jì)對不同微生物的混合培養(yǎng)液的總抗微生物活性會(huì)顯著升高。
在亞致死濃度(少于100％殺菌活性)測試增效劑，而且以不同的組合對不同生理學(xué)的微生物進(jìn)行測試。協(xié)同效應(yīng)可以通過漆酶和增效劑如乙酰丁香酮、丁香酸甲酯、丁香酸乙酯、丁香酸丁酯和丁香酸月桂酯的多因子實(shí)驗(yàn)測定。
實(shí)施例6兩種增效劑的組合的協(xié)同抗微生物作用漆酶與兩種增效劑的抗微生物活性對銅綠假單胞菌(ATCC 10145)和表皮葡萄球菌(DSM 20042)在pH 6如實(shí)施例1中描述的方法進(jìn)行測定。使用丁香酸甲酯和乙酰丁香酮作為增效劑，漆酶是rPpL(1mg／L)，使用32因子實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)測定抗微生物活性。
當(dāng)組合使用兩種增效劑時(shí)發(fā)現(xiàn)有協(xié)同抗微生物活性(圖5A=丁香酸甲酯；B=乙酰丁香酮)。乙酰丁香酮導(dǎo)致銅綠假單胞菌細(xì)胞減少大約1．5個(gè)對數(shù)單位，丁香酸甲酯導(dǎo)致細(xì)胞減少大約3個(gè)對數(shù)單位，然而組合使用時(shí)導(dǎo)致殺死總數(shù)相當(dāng)于細(xì)胞減少大約6-7個(gè)對數(shù)單位的測試有機(jī)體(圖5)。
實(shí)施例7涂料的保存涂料的保存可以通過加入一定量的漆酶和增效劑而制備包含酶促抗微生物系統(tǒng)的涂料樣品實(shí)現(xiàn)，如向無菌罐中的100mL無菌的基于水的涂料中加入1mg毀絲霉漆酶和10μmol丁香酸甲酯(過濾除菌)。然后向此涂料樣品和向不含酶系統(tǒng)的涂料的100mL無菌參照樣品中加入200μL 108cfu／ml假單孢菌和芽孢桿菌的混合培養(yǎng)液。將培養(yǎng)液和涂料混合，封罐并放置在30或40℃。3或4天后，使用傳統(tǒng)技術(shù)，從每個(gè)罐中取樣并在瓊脂培養(yǎng)板上涂板，計(jì)數(shù)來自所有樣品的生長菌落。重復(fù)這個(gè)過程大約10次(30或40天)，將來自含酶系統(tǒng)的涂料樣品的菌落計(jì)數(shù)與來自參照樣品的計(jì)數(shù)進(jìn)行比較。
權(quán)利要求
1．微生物和／或病毒的抗微生物處理方法，包括用有效量的真菌漆酶(EC 1．10．3．2)和一種或多種增效劑在存在氧O2的條件下處理所述微生物和／或病毒，所述增效劑通式如下
該式中A是諸如-D、-CH=CH-D、-CH=CH-CH=CH-D、-CH=N-D、-N=N-D、或-N=CH-D之類的基團(tuán)，其中D選自-CO-E、-SO2-E、-N-XY、和-N+-XYZ，其中E可以是-H、-OH、-R或-OR，而X和Y和Z可以是相同的或不同的并選自-H和-R；R是C1-C16烷基，優(yōu)選C1-C8烷基，該烷基可以是飽和的或不飽和的、分支的或不分支的并任選地被羧基、磺基或氨基取代；B和C可以是相同的或不同的，并選自CmH2m+1，其中1≤m≤5。
2．包含漆酶(EC 1．10．3．2)和至少兩種具有下列通式的不同增效劑的抗微生物組合物
該式中A是諸如-D、-CH=CH-D、-CH=CH-CH=CH-D、-CH=N-D、-N=N-D、或-N=CH-D之類的基團(tuán)，其中D選自-CO-E、-SO2-E、-N-XY、和-N+-XYZ，其中E可以是-H、-OH、-R、或-OR，而X和Y和Z可以是相同的或不同的并選自-H和-R；R是C1-C16烷基，優(yōu)選C1-C8烷基，該烷基可以是飽和的或不飽和的、分支的或不分支的并任選地被羧基、磺基或氨基取代；B和C可以是相同的或不同的，并選自CmH2m+1，其中1≤m≤5。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中增效劑選自通式如下的組
其中A是諸如-H、-OH、-CH3、-OCH3、-O(CH2)nCH3之類的基團(tuán)，其中n=1、2、3、4、5、6、7或8。
4．根據(jù)權(quán)利要求1和3的方法，其中所述處理包括同時(shí)使用兩種不同的增效劑。
5．根據(jù)權(quán)利要求1和3的方法，其中所述處理包括同時(shí)使用三種不同的增效劑。
6．根據(jù)權(quán)利要求1和3中任何一項(xiàng)的方法，其中所述漆酶得自選自毀絲霉、多孔菌、鬼傘、絲核菌、Scytalidium和Pyricularia的真菌。
7．根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述漆酶可得自嗜熱毀絲霉或Polyporus pinisitus。
8．根據(jù)權(quán)利要求1和3-7的方法，其用于對存在于衣物上和／或用來浸泡、洗滌或漂洗衣物的液體中的微生物和／或病毒進(jìn)行抗微生物處理。
9．根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述衣物在洗衣機(jī)中處理。
10．根據(jù)權(quán)利要求1和3-7的方法，其用于對存在于人或動(dòng)物皮膚、毛發(fā)、口腔、粘膜、牙齒、眼睛、傷口或瘀傷上的微生物和／或病毒進(jìn)行抗微生物處理。
11．根據(jù)權(quán)利要求1和3-7的方法，其用于對化妝品中的微生物和／或病毒進(jìn)行抗微生物處理。
12．根據(jù)權(quán)利要求1和3-7的方法，其用于對隱形眼鏡進(jìn)行抗微生物處理(防腐或消毒)。
13．根據(jù)權(quán)利要求1和3-7的方法，其用于硬表面的抗微生物處理。
14．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述硬表面是要求消毒的設(shè)施。
15．根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述設(shè)施是醫(yī)院的房間、食品或食品添加劑的加工間、水處理室、紙張和／或紙漿的加工間、或者化學(xué)品或藥品的加工間。
16．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述硬表面是冷卻塔、水處理廠、牛奶場、食品或食品添加劑的加工廠、紙張和／或紙漿加工廠、化學(xué)品或藥品加工廠中的加工設(shè)備。
17．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述硬表面是水衛(wèi)生設(shè)備的表面。
18．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述硬表面是醫(yī)療設(shè)備的表面。
19．根據(jù)權(quán)利要求1和3-7和11-18的方法，其用于原位清洗(C-I-P)系統(tǒng)的抗微生物處理。
20．根據(jù)權(quán)利要求1和3-7的方法，其用于保存水基涂料，包括用權(quán)利要求1的漆酶(EC 1．10．3．2)和一種或多種增效劑接觸所述涂料。
21．包含涂料、漆酶(EC 1．10．3．2)和增效劑的組合物。
全文摘要
對微生物和/或病毒進(jìn)行抗微生物處理的方法,包括在有氧O
文檔編號C11D3/20GK1278703SQ9881098
公開日2001年1月3日 申請日期1998年11月4日 優(yōu)先權(quán)日1997年11月10日
發(fā)明者C·約翰森, A·H·派德森, C·C·福格爾桑 申請人:諾沃挪第克公司