專利名稱：一種祛除面部紅血絲的中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種祛除面部紅血絲的中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紅血絲是面部毛細(xì)血管擴(kuò)張性能差、角質(zhì)層受損或一部分毛細(xì)血管位置表淺引起的面部現(xiàn)象，一絲絲縱橫交錯(cuò)，如蜘蛛網(wǎng)般，分散性分布，嚴(yán)重者會(huì)連成片狀，變成紅臉。面部紅血絲患者面部看上去比一般正常膚色紅，有的僅僅是兩側(cè)顴部發(fā)紅，邊界呈圓形。這種皮膚薄而敏感，過冷、過熱、情緒激動(dòng)時(shí)臉色更紅。嚴(yán)重者還會(huì)形成沉積性色斑。目前國內(nèi)外治療紅血絲的手段多以激光治療的物理方法為主，違背肌膚新陳代謝的自然規(guī)律，強(qiáng)制性的一次性祛除紅血絲，造成毛細(xì)血管僵死，表層皮膚失去彈性，甚至可能產(chǎn)生結(jié)塊、色素沉著，易復(fù)發(fā)；另一種手段是口服藥物治療方法，是藥三分毒，中藥的功效大多具有多面性，不能準(zhǔn)確界定有效成分。隨著社會(huì)的發(fā)展，生活水平的提高，人們對于化妝品的質(zhì)量和性能要求也越來越高。人們希望出現(xiàn)一系列對人體健康無害，又具有美容保健作用的天然原料制備的護(hù)膚化妝品。利用中草藥提取物作為美容護(hù)膚化妝品的添加劑， 具有藥效穩(wěn)定、持久、對皮膚作用溫和、刺激性小、安全性高、療效顯著等特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有祛除面部紅血絲功效的中藥提取物及其制備方法。本發(fā)明所提供的中藥提取物，是從下述中藥組合物中提取得到的；所述中藥組合物由大黃、槐米、黃芪和母菊按照質(zhì)量份數(shù)比30-50 15-25 15-25 5_15的比例組成。所述中藥組合物中大黃、槐米、黃芪和母菊的質(zhì)量份數(shù)比可進(jìn)一步為 45-50 20-25 15-20 5-10。所述中藥提取物的制備方法如下將大黃、槐米、黃芪和母菊粉碎后按照上述質(zhì)量份數(shù)比混合，得中藥組合物；將所述中藥組合物加丙二醇進(jìn)行提取，得到所述中藥提取物。所述提取過程中，所述中藥組合物與丙二醇的配比可為Ig (10_15)ml，優(yōu)選為 Ig IOml;所述提取為超聲提??；所述超聲提取的溫度為60-80°C，時(shí)間為45-60分鐘，超聲頻率為30-50KHZ ；所述大黃、槐米、黃芪和母菊粉碎后的粒度均為60-80目。本發(fā)明的方法還包括下述純化的步驟提取結(jié)束后，過濾、離心、收集上清液，對所述上清液進(jìn)行抽濾，收集濾液即為純化后的中藥提取物。在純化步驟中，所述過濾采用紗布進(jìn)行過濾，所述紗布為100-200目，優(yōu)選200目； 所述離心的轉(zhuǎn)速為4000-5000r/min，優(yōu)選為4000r/min ；離心的時(shí)間為10-15分鐘，優(yōu)選10 分鐘；所述抽濾中采用助濾劑硅藻土進(jìn)行抽濾。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供上述中藥提取物的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的中藥提取物的應(yīng)用是其在制備化妝品中的應(yīng)用；尤其是在制備具有祛除面部紅血絲功效化妝品中的應(yīng)用。
含有本發(fā)明中藥提取物的化妝品以及含有該中藥提取物的組合物也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明按照中醫(yī)“君臣佐使”組方思想，針對化學(xué)換膚刺激以及一些皮膚過敏所致的面部紅血絲的祛除進(jìn)行研制。不同于一般祛紅血絲添加劑只從單方面作用，本發(fā)明深入研究紅血絲形成機(jī)理，利用中醫(yī)思想科學(xué)組方原則，在皮膚科學(xué)基礎(chǔ)上從“增加角質(zhì)層厚度、降低血管通透性、增強(qiáng)膠原蛋白和彈性蛋白的活性”三方面達(dá)到全方位防治效果，具體配伍如下君藥降低毛細(xì)血管通透性，增強(qiáng)血管壁彈性——大黃；臣藥涼血逐淤，恢復(fù)正常微循環(huán)——槐米；佐藥增強(qiáng)膠原蛋白、彈性蛋白活力——黃芪；使藥增強(qiáng)皮膚屏障——母菊。以丙二醇為提取劑，利用超聲波在提取溶媒中產(chǎn)生“空化效應(yīng)”和機(jī)械作用進(jìn)行提取，其優(yōu)點(diǎn)為提取溫度低、提取效率高、提取時(shí)間短。以上中藥植物大部分功效成分易溶于丙二醇，且丙二醇具有天然防腐功效，無需在添加劑中再加入其它防腐劑，減少其刺激性， 且丙二醇具有促透的功效，使得添加劑加入到化妝品中易于皮膚吸收本發(fā)明提供的制備中藥提取物的方法，提取分離方法簡便，所得產(chǎn)品純度較高，產(chǎn)品質(zhì)量有了很大的改進(jìn)。所選用的中藥組合物具有降低血管通透性、恢復(fù)微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫功能、促進(jìn)皮膚代謝、增加膠原蛋白彈性蛋白等功效。對本發(fā)明得到的中藥提取物進(jìn)行功能測試，結(jié)果表明該提取物對Fltl酪氨酸激酶受體有很強(qiáng)的抑制作用，同時(shí)還具有增強(qiáng)皮膚水分含量的功效，以及降低細(xì)胞凋亡率的作用。


圖1為本發(fā)明提供的中藥提取物的生產(chǎn)工藝流程圖；圖2為不同濃度中藥提取物對Fltl的抑制率比較；圖3為中藥提取物減少水分流失TEWL值的測定曲線；圖4為中藥提取物增加皮膚水分含量MMV值的測定曲線；圖5為中藥提取物與成纖維細(xì)胞培養(yǎng)不同時(shí)間對成纖維細(xì)胞凋亡率的影響。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明的方法進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。實(shí)施例1、制備中藥提取物中藥提取物的生產(chǎn)工藝流程圖如圖1所示，具體過程如下取料液比1 10，即88g大黃、槐米、黃芪、母菊的混合物(粒度均為60-80目)， 其中，大黃45克，槐米20克，黃芪17. 5克，母菊5. 5克，之后加入IOOOmL丙二醇；超聲提取 45min(加蓋保鮮膜，減少蒸發(fā))(超聲頻率為50KHz)，溫度為75。C ；停止加熱，水循環(huán)冷卻到40°C，200目紗布粗濾；4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取上清液；真空硅藻土濾餅抽濾上清液，收集抽濾液，即為中藥提取物溶液(記為提取物質(zhì)量濃度100%的提取物溶液)。之后根據(jù)需要，可進(jìn)行后續(xù)操作，如洗桶，消毒，灌裝，裝箱，打碼，入庫。實(shí)施例2、制備中藥提取物中藥提取物的生產(chǎn)工藝流程圖如圖1所示，具體過程如下取料液比1 15，即105g大黃、槐米、黃芪、母菊的混合物(粒度均為60-80目)， 其中，大黃50克，槐米25克，黃芪20克，母菊10克，之后加入1500mL丙二醇；超聲提取 60min(加蓋保鮮膜，減少蒸發(fā))(超聲頻率為30KHz)，溫度為65°C ；停止加熱，水循環(huán)冷卻到40°C，200目紗布粗濾；4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取上清液；真空硅藻土濾餅抽濾上清液，收集抽濾液，即為中藥提取物溶液(記為提取物濃度100%的提取物溶液)。實(shí)施例3、中藥提取物的功能測定試驗(yàn)下述試驗(yàn)中所用的中藥提取物溶液，是將實(shí)施例1制備得到的中藥提取物溶液記為濃度為100%的提取物溶液，其它濃度的提取物溶液是將該溶液進(jìn)行相應(yīng)稀釋得到的。1、降低毛細(xì)血管通透性能力測定該測定方法按照如下文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行莊書斐，周彩紅，錢靜，錢幕， SHIBUYAMasabumi,葉其壯，新方法隨機(jī)篩選血管內(nèi)皮生長因子受體I激酶的抑制劑，中國藥理學(xué)報(bào)，2002年第23期117-123。VEGF作為生長因子結(jié)合到它的受體Fltl的細(xì)胞表面部分，促使受體從休眠態(tài)轉(zhuǎn)到活化態(tài)，發(fā)生自磷酸化，激活磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B (pl3k/Akt)的活性使得信號通路打開，進(jìn)而發(fā)生一系列級聯(lián)反應(yīng)，因其內(nèi)皮細(xì)胞分裂增生，血管內(nèi)皮通透性增加，因此抑制Fltl活性可以降低毛細(xì)血管的通透性。PolvE4Y是一個(gè)谷氨酸和酪氨酸多肽聚合物，與Fltl結(jié)合發(fā)生磷酸化，PolyE4Y中被磷酸化的酪氨酸基團(tuán)可以通過抗磷酸化單克隆抗體PY20來識別，然后辣根過氧化物酶HRP抗體作為第二抗體結(jié)合PY20，在辣根過氧化物酶作用下產(chǎn)生一種物質(zhì)在450nm進(jìn)行紫外吸收，加入Fltl抑制劑能夠與Fltl競爭和底物結(jié)合，使得紫外吸收降低，抑制Fltl活性。實(shí)驗(yàn)方法100μ L polyE4Y 溶液(lmg/L，在 20mmol/L，ρΗ7· 5Tris · HC1，140mmol/ LNaCl溶液中稀釋)添加到未經(jīng)處理的96孔板中每一個(gè)孔中。4°C下溶液在孔板上放置一夜，棄去上清液。該板在4°C下進(jìn)行儲(chǔ)存并在7d內(nèi)使用和被覆蓋。添加Fltl酪氨酸激酶 (GST-F，100nmol/L)和抑制劑(中藥提取物)(5g/L)到板上，并且在30°C下培養(yǎng)Ih0用 Tris/NaCl緩沖液清洗板后，室溫下用5% BSA封閉30min。用含有0. Tween的Tris/ NaCl緩沖液沖洗孔板，PY20 (每個(gè)孔100 μ L，20 μ g/L)添加到每個(gè)板孔中，在室溫下培養(yǎng)池。沖洗該板三次后，添加HRP-IgG (每板孔100 μ L，40 μ g/L)，然后在室溫下培養(yǎng)lh。最后該板用TBST緩沖液沖洗四次。顯像緩沖液(100 μ L，檸檬酸緩沖液0. lmol/L, ρΗ5· 5， H2O2L 3mmol/L, 0-鄰苯二胺10mmol/L)添加到每個(gè)板孔中。顏色變化后用100 μ L，lmol/L H2SO4終止反應(yīng)。在492nm下酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用Curve Expertl. 3軟件做雙Log 二次擬合曲線。陽性對照組為酪氨酸激酶。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。由圖可知，提取物在的濃度抑制率最高達(dá)到91%以上，而隨著濃度的增加抑制率略有降低。說明本發(fā)明提供的中藥提取物具有非常強(qiáng)的抑制Fltl酪氨酸激酶受體的功效。2、修復(fù)皮膚屏障保濕測定該方法按照如下文獻(xiàn)提供進(jìn)行溫竹，黃正梅，高艷玲，化妝品保濕功效評價(jià)，日用化學(xué)品科學(xué)，2009年第12期:26-28.皮膚水分流失TEffL對評估皮膚水分保護(hù)層的功能是非常重要的參數(shù)，在國際上已經(jīng)得到了廣泛的認(rèn)可。皮膚水分保護(hù)層越完好，皮膚角質(zhì)層屏障功能越強(qiáng)，水分的含量就會(huì)越高，皮膚水分流失TEflfL的數(shù)值也就越低。MMV (moisture measurement value)測定皮膚的水分含量，MMV值越大皮膚角質(zhì)層水分含量越高。實(shí)驗(yàn)方法(1)測試環(huán)境溫度21 士 1°C，濕度50士5%，并且進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測。(2)測前準(zhǔn)備用水清洗雙手手臂內(nèi)側(cè)，擦干后標(biāo)記受測部位，同一手臂可同時(shí)標(biāo)記多個(gè)區(qū)域，區(qū)域間隔1cm，測試產(chǎn)品和空白對照均隨機(jī)分布在左右手臂上，從左臂至右臂依次編號1-10 號，11號不涂抹樣品為空白參照。(3)測試所采用的中藥提取物溶液的質(zhì)量濃度為5%。對三十名志愿者進(jìn)行人體貼敷實(shí)驗(yàn)。清洗二十分鐘后測試敷面膜前水分含量值， 依次貼敷分別載有0. 2ml 1-10號樣品(中藥提取物質(zhì)量濃度5% )液面膜，十五分鐘后揭去面膜，用濕紙巾擦拭殘留在皮膚表面的樣品液，再用干紙巾擦干皮膚表面水分，待皮膚吸收二十分鐘后，再次檢測測試者貼敷處水分含量值(MMV值)和TEffL值。對皮膚水分含量的測量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較，采用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行顯著性分析檢驗(yàn)，其中ρ < 0. 05表示有顯著性差異。估計(jì)均數(shù)的抽樣誤差可計(jì)算該組數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)差或標(biāo)準(zhǔn)誤。當(dāng)個(gè)別數(shù)據(jù)偏差較大時(shí)，可根據(jù)t檢驗(yàn)剔除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，如符合標(biāo)準(zhǔn)則可剔除；當(dāng)剔除后的受試者人數(shù)少于30人時(shí)，應(yīng)增加受試者人數(shù)直至符合要求。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3、4所示，由圖可知，5%的中藥提取物具有明顯降低水分含量散失的功效。5%濃度的中藥提取物具有增強(qiáng)皮膚水分含量的功效，恢復(fù)受損角質(zhì)層，修復(fù)調(diào)整皮膚的正常厚度，使其最大程度的發(fā)揮生理功能，可以促進(jìn)皮膚保持健康的、自然的狀態(tài)。3、MTT法檢測成纖維細(xì)胞檢測該方法按照如下文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行王曦.黃芪甲苷對人皺紋與非皺紋皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D].四川四川大學(xué)，2005. 4。成纖維細(xì)胞是皮膚真皮中的主體細(xì)胞成分，它與自身分泌的膠原纖維，彈性纖維及基質(zhì)成分一同構(gòu)成了真皮的主體。通過體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，采用MTT (四甲基偶氮哇鹽)法檢測中藥提取物對體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，中藥提取物中所含有的黃芪多糖，具有促進(jìn)細(xì)胞生長的功效。實(shí)驗(yàn)方法(1)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)采用組織塊法(explant culture)。用D-Hanks液將新鮮皮膚標(biāo)本漂洗，剪去表皮和皮下組織。將真皮組織剪切成0. 5 Imm3組織塊放于培養(yǎng)瓶，倒置。加入適量培養(yǎng)液(DMEM培養(yǎng)液)，在37°C、5% CO2的飽和濕度條件下孵育2 3小時(shí)， 翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，上述條件下，每周更換培養(yǎng)液兩次。待原代培養(yǎng)液中長出的成纖維細(xì)胞融合， 用0. 25%胰蛋白酶液消化細(xì)胞，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
(2)MTT法測成纖維細(xì)胞增殖取處于對數(shù)生長期的皮膚成纖維細(xì)胞，用含EDAT的胰蛋白酶消化，再用含10%新生小牛血清的DMEM培養(yǎng)液吹打培養(yǎng)瓶底部，制成單細(xì)胞懸液。苔盼蘭染色計(jì)數(shù)，接種于96孔培養(yǎng)板中。次日取出細(xì)胞板，試驗(yàn)組向細(xì)胞板中加入 20 μ 1質(zhì)量濃度為的中藥提取液；對照組向細(xì)胞板中加入20 μ 1培養(yǎng)液。分別于培養(yǎng)時(shí)間結(jié)束前4 他取出培養(yǎng)板，依次在每孔中加入MTT溶液，繼續(xù)孵育至培養(yǎng)結(jié)束。棄去孔中培養(yǎng)上清液，再于每孔加入DMSO (二甲基亞砜)。在酶聯(lián)免疫檢測儀上選擇570nm波長，測定各孔光吸收值(0D值)。細(xì)胞凋亡率=(處理組OD值-對照組OD值)/對照組OD值X 100 %該實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示，由圖可知，加入1 %的中藥提取物，分別在Mh、72h、120h 對細(xì)胞凋亡率進(jìn)行測定，在120h后凋亡率由67. 3%降低到28. 8%。
權(quán)利要求
1.一種中藥提取物，是從下述中藥組合物中提取得到的；所述中藥組合物由大黃、槐米、黃芪和母菊按照質(zhì)量份數(shù)比30-50 15-25 15-25 5_15的比例組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥提取物，其特征在于所述中藥組合物中大黃、槐米、黃芪和母菊的質(zhì)量份數(shù)比為45-50 20-25 15-20 5_10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥提取物，其特征在于所述中藥提取物是按照權(quán)利要求4-7中任一項(xiàng)所述方法制備得到的。
4.一種制備權(quán)利要求1或2所述中藥提取物的方法，包括下述步驟將大黃、槐米、黃芪和母菊粉碎后按照權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量份數(shù)比混合，得到中藥組合物；將所述中藥組合物用丙二醇進(jìn)行提取，得到所述中藥提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述提取過程中，所述中藥組合物與丙二醇的配比為Ig (10-15)ml，優(yōu)選為Ig IOml ；所述提取為超聲提?。凰龀曁崛〉臏囟葹?0-80°C，時(shí)間為45-60分鐘，超聲頻率為30_50KHz ；所述大黃、槐米、黃芪和母菊粉碎后的粒度均為60-80目。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于所述方法還包括下述純化的步驟提取結(jié)束后，過濾、離心、收集上清液，對所述上清液進(jìn)行抽濾，收集濾液即為純化后的中藥提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述過濾采用紗布進(jìn)行過濾，所述紗布為 100-200目，優(yōu)選200目；所述離心的轉(zhuǎn)速為4000-5000r/min，優(yōu)選為4000r/min ；離心的時(shí)間為10-15分鐘，優(yōu)選10分鐘；所述抽濾中采用助濾劑硅藻土進(jìn)行抽濾。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的中藥提取物在制備化妝品中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述化妝品為具有祛除面部紅血絲功效的化妝品。
10.一種具有祛除面部紅血絲功效的化妝品，其特征在于所述化妝品含有權(quán)利要求 1-3中任一項(xiàng)所述的中藥提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有祛除面部紅血絲功效的中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用。該中藥提取物是從下述中藥組合物中提取得到的；所述中藥組合物由大黃、槐米、黃芪和母菊按照質(zhì)量份數(shù)比30-50∶15-25∶15-25∶5-15的比例組成。制備方法如下將大黃、槐米、黃芪和母菊粉碎后按比例混合，加入提取劑丙二醇浸潤，超聲提取，冷卻，過濾、離心，抽濾，取上清液，得到所述中藥提取物。本發(fā)明提供的中藥提取物的提取分離方法簡便，所得產(chǎn)品純度較高，產(chǎn)品質(zhì)量有了很大的改進(jìn)。所選用的中藥組合物具有降低血管通透性、恢復(fù)微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫功能、促進(jìn)皮膚代謝、增加膠原蛋白彈性蛋白等功效，故其提取物可作為祛除面部紅血絲添加劑。
文檔編號A61Q19/00GK102397175SQ20101028099
公開日2012年4月4日 申請日期2010年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月10日
發(fā)明者何聰芬, 劉文婷, 王領(lǐng), 董銀卯, 趙華 申請人:北京工商大學(xué)