專利名稱：一種竹葉黃酮提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種竹葉黃酮提取物的制備方法。竹葉黃酮是從禾本科(Poaceae)竹 亞科(Bambusoideae)的竹葉中提取分離得到，有多種生物學(xué)功效，在保健品、化妝品及食 品添加劑方面應(yīng)用廣泛。
背景技術(shù)：
竹葉中含有豐富的黃酮類物質(zhì)，經(jīng)動物實驗證明，竹葉提取物中的黃酮及其甙類 化合物具有明顯的降血脂和降血清膽固醇的作用；藥理研究表明，竹葉黃酮具有抗整體動 物缺氧的作用，能有效擴張冠脈血管，增加冠脈流量，增加心肌收縮力，明顯改善心肌缺血 及縮小心梗范圍，降低血小板聚集程度，有效抑制凝血和血栓形成，對腦缺血有一定的保護 作用；研究又發(fā)現(xiàn)富含黃酮的竹葉提取物有多種生物學(xué)功效，如清除自由基、抗氧化、抗衰 老、抗菌、抗病毒等功能，在保健品、化妝品及食品添加劑方面應(yīng)用廣泛。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在以我國資源十分豐富、且尚未得到有效開發(fā)利用的竹葉為植物 材料，提供一種高效的竹葉黃酮提取物的制備方法，并應(yīng)用于食品、保健品、化妝品中。
—種竹葉黃酮提取物的制備方法，其步驟為 (1)稱取粉碎至20目的竹葉粉于圓底燒瓶中，在所述的圓底燒瓶中加入60%的 乙醇溶液形成竹葉粉乙醇溶液，所述竹葉粉質(zhì)量與所述60%的乙醇溶液體積的比值范圍為
i : io至i : 8，所述竹葉粉質(zhì)量單位為克，所述60%的乙醇溶液體積單位為毫升，所述
60 %的乙醇溶液事先用6M鹽酸調(diào)pH值至3-4 ; (2)將所述竹葉粉乙醇溶液室溫放置2小時，使竹葉粉得到充分的浸泡，得到浸泡 后的竹葉粉乙醇溶液； (3)將所述浸泡后的竹葉粉乙醇溶液在電熱套中加熱至沸騰，加熱回流3小時后， 將竹葉粉乙醇溶液冷卻至35-40°C ，傾倒出乙醇溶液，傾倒過程盡量不要將竹葉粉倒出，此 乙醇溶液為乙醇第一次提取液； (4)將傾倒出所述乙醇第一次提取液后剩余的竹葉粉殘渣再加入60%的乙醇溶 液，所述竹葉粉質(zhì)量與所述60%的乙醇溶液體積的比值范圍為1 : 5至1 : 6，其中60% 的乙醇溶液體積單位為毫升，所述竹葉粉質(zhì)量單位為克，所述的60%乙醇溶液用6M鹽酸調(diào) pH至3-4，加熱回流2小時，將竹葉粉乙醇溶液冷卻至35-4(TC ，傾倒出乙醇溶液，傾倒過程 盡量不要將竹葉粉倒出，此乙醇溶液為乙醇第二次提取液； (5)將所述乙醇第一次提取液和所述乙醇第二次提取液混合，得到乙醇提取液，將 乙醇提取液采用高速冷凍離心機離心除沉淀，所述高速冷凍離心機的轉(zhuǎn)速為每分鐘8000 轉(zhuǎn)，在2(TC的情況下離心30分鐘，得到上清液； (6)將所述上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行濃縮，脫除溶劑，其中所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空 度為0. 09Mpa，水浴溫度控制在50-55t:之間，脫除溶劑至脫溶瓶中剩余少量料液且能傾倒出來，停止脫溶，將脫除溶劑后的料液倒入表面皿中，置于真空冷動干燥機中冷凍至干，得 竹葉黃酮提取物。


圖1.調(diào)酸至pH3-4與不調(diào)酸得到的竹葉黃酮乙醇提取液色譜圖
圖2.綠竹葉黃酮提取物液相色譜圖
具體實施例方式
以下，關(guān)于本發(fā)明的竹葉黃酮提取物的制備方法，基于實施方式進行說明。
—種竹葉黃酮提取物的制備方法，其步驟為 (1)稱取粉碎至20目的竹葉粉于圓底燒瓶中，在所述的圓底燒瓶中加入60%的 乙醇溶液形成竹葉粉乙醇溶液，所述竹葉粉質(zhì)量與所述60%的乙醇溶液體積的比值范圍為
i : io至i : 8，所述竹葉粉質(zhì)量單位為克，所述60%的乙醇溶液體積單位為毫升，所述
60 %的乙醇溶液事先用6M鹽酸調(diào)pH值至3-4 ; (2)將所述竹葉粉乙醇溶液室溫放置2小時，使竹葉粉得到充分的浸泡，得到浸泡 后的竹葉粉乙醇溶液； (3)將所述浸泡后的竹葉粉乙醇溶液在電熱套中加熱至沸騰，加熱回流3小時后， 將竹葉粉乙醇溶液冷卻至35-40°C ，傾倒出乙醇溶液，傾倒過程盡量不要將竹葉粉倒出，此 乙醇溶液為乙醇第一次提取液； (4)將傾倒出所述乙醇第一次提取液后剩余的竹葉粉殘渣再加入60%的乙醇溶 液，所述竹葉粉質(zhì)量與所述60%的乙醇溶液體積的比值范圍為1 : 5至1 : 6，其中60% 的乙醇溶液體積單位為毫升，所述竹葉粉質(zhì)量單位為克，所述的60%乙醇溶液用6M鹽酸調(diào) pH至3-4，加熱回流2小時，將竹葉粉乙醇溶液冷卻至35-4(TC ，傾倒出乙醇溶液，傾倒過程 盡量不要將竹葉粉倒出，此乙醇溶液為乙醇第二次提取液； (5)將所述乙醇第一次提取液和所述乙醇第二次提取液混合，得到乙醇提取液，將 乙醇提取液采用高速冷凍離心機離心除沉淀，所述高速冷凍離心機的轉(zhuǎn)速為每分鐘8000 轉(zhuǎn)，在2(TC的情況下離心30分鐘，得到上清液； (6)將所述上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行濃縮，脫除溶劑，其中所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空 度為0. 09Mpa，水浴溫度控制在50-55t:之間，脫除溶劑至脫溶瓶中剩余少量料液且能傾倒 出來，停止脫溶，將脫除溶劑后的料液倒入表面皿中，置于真空冷動干燥機中冷凍至干，得 竹葉黃酮提取物。 得到的竹葉黃酮提取物的特征是竹葉黃酮產(chǎn)品得率12-14%，其中總黃酮 3. 74-5. 88 % ，可溶性總糖17. 9-33. 9 % ，蛋白質(zhì)5. 99-15. 79 % ，粗脂肪8. 9-19. 9 % ，水分 6. 84-9. 97 % ，灰分11. 67-15. 46 % 。 本發(fā)明在提取過程中所述的60%乙醇溶液需事先用鹽酸調(diào)pH至3-4，用此酸性 溶液提取竹葉黃酮的提取率遠遠高于不調(diào)酸的溶液提取率，原因是弱酸性條件下，竹葉黃 酮化合物結(jié)構(gòu)不僅不被破壞，而且乙醇溶液更容易穿透竹葉表面的蠟質(zhì)層，加之在提取之 前竹葉粉在60%乙醇溶液中浸泡2小時，這些都使得葉片組織中的黃酮化合物得到充分的 提取。為了驗證60%乙醇溶液調(diào)酸的效果，本發(fā)明在其他提取條件都相同的情況下，分別用鹽酸調(diào)pH至3-4的60%乙醇溶液與不調(diào)酸度的60%乙醇溶液按照步驟(1) 、 (2) 、 (3)、 (4)提取竹葉黃酮，得到步驟(5)所述的乙醇提取液，分別將調(diào)酸與不調(diào)酸得到的乙醇提取 液做液相色譜測試，所得圖譜見附圖l，從附圖l可以看出，調(diào)節(jié)pH至3-4得到的乙醇提取 液總黃酮的峰面積與不調(diào)酸的峰面積比值接近3。 竹葉黃酮提取物的制備方法中，得到的乙醇提取液中有大量的沉淀物，該沉淀物
顆粒粒徑極小，使用常規(guī)的布氏漏斗過濾的方法，濾紙需頻繁更換，濾液會有很大的損失，
而且耗用時間較長，本發(fā)明采用高速離心機進行離心，使沉淀物分離，此種方法不僅保證了
乙醇提取液損失少、操作所需時間短，而且也滿足了除去大量沉淀物的要求。 本發(fā)明所述的竹葉黃酮提取物制備方法，采用的是乙醇-水體系，實現(xiàn)了整個過
程的無污染操作。 對本發(fā)明中制備得到的竹葉黃酮提取物進行大鼠體內(nèi)抗氧化活性研究，采用的研 究方案是體重80-100g的3周雄性大鼠購置于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實驗中心，圈養(yǎng)在不銹 鋼網(wǎng)籠內(nèi)，室內(nèi)溫度21-23°C ，相對濕度55-60 % ，將大鼠隨機分為5組，每組7只，分別為空 白、負(fù)對照、正對照、低劑量提取物和高劑量提取物組?？瞻捉M大鼠喂養(yǎng)未加膽固醇飼料和 每天灌生理鹽水；負(fù)對照組大鼠喂養(yǎng)加膽固醇飼料和每天灌生理鹽水；正對照組大鼠喂養(yǎng) 加膽固醇飼料和每天灌VE， VE的用量按0. 0025g/kg體重計算；低、高劑量組大鼠是喂養(yǎng)加 膽固醇飼料和每天灌高、低劑量的竹葉黃酮提取物，其中高、低劑量組所用的竹葉黃酮提取 物用量是按400mg/kg體重和100mg/kg體重計算。每組小鼠在喂養(yǎng)6周并禁食12小時之 后，隨機取7只大鼠測試肝臟和腎臟的SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA數(shù)據(jù)，表1為數(shù)據(jù)結(jié)果。
表1.膽固醇喂養(yǎng)、灌胃VE及竹葉黃酮提取物大鼠肝臟和腎臟的SOD、CAT、GSH-Px 活性及MDA數(shù)據(jù)結(jié)果(n = 7)
飼料SOD活力CAT活力GSH-Px活力MDA
(U/mg protein)(U/ml)(酶活力單位)(nmol/mg protein)
肝臟
空白200.29±26.59A45.76±8.33B660.00±50.46A6.80±1.19Be
負(fù)對照212.08±22.83A53.86±16.20^658.94±56.15A11.73±2.62A
正對照220.27±33.31A42.45±13.88B634.19±65.02A7.32±1.88B
低劑量205.02±28.40A58.42±10.98A651.11 ±57.29A6.89± 1.22BC
高齊慢167.84±26.95B47.89±4.43^493.38±63.54B5.18土0.67e
腎臟
空白205.41±13.11A123.79±25.68A405.57± 69.08A16.62±2.03^
負(fù)對照207.60±13.18A92.71±20.40B431.06± 96.56A18.27± 1.54A
正對照195.25±12.98^100.63±18.27B399.49±48.71A14.92±2.02B
低劑量189.62±19.54B89.72±16.96B403.35±73.18A10.63± 2.60e
高劑量172.53±14.63e100.29±22.33B333.90±73.76B1U8± 1.36e 注不同的上標(biāo)字母表示差異顯著(p < 0. 05) 從表1可以看出，肝臟組織中，SOD活力高劑量組(喂膽固醇飼料及高劑量竹葉黃 酮提取物)最小，與其他組的差異顯著(p<0.05);腎臟中SOD活力同樣是高劑量組最小， 與其他組的差異顯著(P < 0. 05)，其次是低劑量組(喂膽固醇飼料及低劑量竹葉黃酮提取物)，高低劑量組差異顯著(p〈0.05)，空白(喂無膽固醇基礎(chǔ)飼料)、負(fù)對照(喂膽固醇飼 料)及正對照組(喂膽固醇飼料及VE)的SOD活力偏大，與高劑量組差異顯著(p < 0. 05); 肝腎組織中高劑量組的SOD活力值都是最低的。 肝臟中，低劑量組的CAT活力最大，與負(fù)對照組和高劑量組差異不顯著(p > 0.05)，與空白組及正對照組差異顯著(p<0.05);腎臟中，空白組的CAT活力最大，與其他 組差異顯著(P < 0. 05)。 關(guān)于GSH-Px活力，肝臟中，高劑量組的值最低，與其它四組差異顯著(p<0.05); 腎臟中，高劑量組的也偏低，但差異不顯著(P > 0. 05)。 關(guān)于MDA值，肝臟中，高劑量組的值最低，與正負(fù)對照組差異顯著(p < 0. 05)，與空 白和低劑量組差異不顯著(P > 0.05)，其中最高的是負(fù)對照組，它與其它各組差異顯著(p <0.05);腎臟中，高、低劑量組的偏低，兩組間差異不顯著(pX).05)，與其它三組差異顯 著，負(fù)對照組的MDA值最大，其次是空白組，這兩組間差異不顯著(p > 0. 05)，正對照組的 MDA值居于中間，與其它四組差異顯著(p<0. 05)。 從表1的大鼠肝腎的四個指標(biāo)可以看出，酶活力指標(biāo)高劑量組普遍偏低，MDA值也 出現(xiàn)高劑量組偏低的現(xiàn)象。竹葉黃酮提取物對大鼠灌胃給藥后有明顯的抗氧化損傷作用， 使肝腎組織中的過氧化脂質(zhì)降解代謝產(chǎn)物中的MDA含量明顯減少，尤其是高劑量給藥組效 果最明顯，好于其它各組。 所獲得的竹葉黃酮提取物可以應(yīng)用于食品、保健品及化妝品中。作為天然食品添 加劑和抗氧化劑，可應(yīng)用到焙烤食品中，制備具有竹葉清香的蛋糕、蛋撻、月餅或蜜汁糕團， 起到抗氧化、防腐保鮮作用；竹葉黃酮提取物可制備成糕點、糖果營養(yǎng)羹、飲品(即營養(yǎng)保 健露)、茶、竹葉酒等各種食品、營養(yǎng)保健品；竹葉黃酮提取物也可以通過螯合Cu"，以抑制 酪氨酸酶的活性，從而減少黑色素的生成，在化妝品中添加竹葉黃酮提取物即可起到美白 功效，竹葉黃酮提取物可用于護膚膏霜、護膚乳液、潔膚膏霜、潔膚乳液等化妝品中。
實施例1.制備綠竹葉黃酮提取物 稱取200g粉碎至20目的綠竹(Dendrocalamopsis oldhami (Munro) Keng f )葉 粉于圓底燒瓶中，加入2000mL60 %乙醇溶液，60 %乙醇溶液事先用6M鹽酸調(diào)至pH3_4，加 熱之前竹葉粉乙醇溶液室溫浸泡2hr，然后在電熱套中加熱至沸騰，加熱回流3hr，冷卻至 35-40°C ，傾倒出乙醇溶液，料液為乙醇第一次提取液，竹葉粉殘渣再用1200mL60 %乙醇溶 液(pH3-4)進行二次提取，加熱回流2hr，冷卻35-4(TC后出料，料液為乙醇第二次提取液。 合并乙醇第一次提取液及乙醇第二次提取液，將得到的乙醇提取液用高速冷凍離心機離心 除沉淀，離心機轉(zhuǎn)速為每分鐘8000轉(zhuǎn)，在20°C的情況下離心30分鐘，得到上清液，將上清液 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上脫除溶劑，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空度為0. 09Mpa，水浴溫度控制在50-55t:之間， 脫除溶劑至脫溶瓶中剩余少量料液且能傾倒出來，停止脫溶，將脫除溶劑后的料液倒入表 面皿中，置于真空冷動干燥機中冷凍至干，得綠竹葉黃酮提取物。HPLC法計算提取物中總黃 酮的含量為3. 74%。附圖2為綠竹葉黃酮提取物液相色譜圖。
實施例2.竹葉黃酮食品添加劑 竹葉黃酮提取物4g，氧化鋅0. 4g，，維生素C 0. 4g，分別用8g， 2g， 2g水溶解，在 4(TC以下攪拌均勻即可。 實施例3.竹葉黃酮護膚乳液的制備
配方 Wt% 1.竹葉黃酮提取物 0. 1 2.凡士林 2.0 3.蜂蠟 0. 5 4.脫水山梨醇倍半油酸酯 0.8 5.角鯊?fù)?5.0 6.聚氧乙烯油醚 1. 2 7. 1，3-丁二醇 5.0 8.乙醇 5.0 9.2%漢生膠 20.0 10.精制水 剩余量 具體制法在7(TC加熱成分1、7、8和IO，得到混合物A ;在7(TC加熱成分2、3、4、 5、6，得到混合物B。在A中加入B，再加入9，均質(zhì)乳化，冷卻到3(TC，得到竹葉黃酮護膚乳液。 以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，雖 然本發(fā)明已以較佳實施例揭露如上，然而并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)，當(dāng)可利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容做出些許更動或修 飾為等同變化的等效實施例，但凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì) 對以上的實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍 內(nèi)。
權(quán)利要求
一種竹葉黃酮提取物的制備方法，其特征在于(1)稱取粉碎至20目的竹葉粉于圓底燒瓶中，在所述的圓底燒瓶中加入60％的乙醇溶液形成竹葉粉乙醇溶液，所述竹葉粉質(zhì)量與所述60％的乙醇溶液體積的比值范圍為1∶10至1∶8，所述竹葉粉質(zhì)量單位為克，所述60％的乙醇溶液體積單位為毫升，所述60％的乙醇溶液事先用6M鹽酸調(diào)pH值至3-4；(2)將所述竹葉粉乙醇溶液室溫放置2小時，使竹葉粉得到充分的浸泡，得到浸泡后的竹葉粉乙醇溶液；(3)將所述浸泡后的竹葉粉乙醇溶液在電熱套中加熱至沸騰，加熱回流3小時后，將竹葉粉乙醇溶液冷卻至35-40℃，傾倒出乙醇溶液，傾倒過程盡量不要將竹葉粉倒出，此乙醇溶液為乙醇第一次提取液；(4)將傾倒出所述乙醇第一次提取液后剩余的竹葉粉殘渣再加入60％的乙醇溶液，所述竹葉粉質(zhì)量與所述60％的乙醇溶液體積的比值范圍為1∶5至1∶6，其中60％的乙醇溶液體積單位為毫升，所述竹葉粉質(zhì)量單位為克，所述的60％乙醇溶液用6M鹽酸調(diào)pH至3-4，加熱回流2小時，將竹葉粉乙醇溶液冷卻至35-40℃，傾倒出乙醇溶液，傾倒過程盡量不要將竹葉粉倒出，此乙醇溶液為乙醇第二次提取液；(5)將所述乙醇第一次提取液和所述乙醇第二次提取液混合，得到乙醇提取液，將乙醇提取液采用高速冷凍離心機離心除沉淀，所述高速冷凍離心機的轉(zhuǎn)速為每分鐘8000轉(zhuǎn)，在20℃的情況下離心30分鐘，得到上清液；(6)將所述上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行濃縮，脫除溶劑，其中所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空度為0.09Mpa，水浴溫度控制在50-55℃之間，脫除溶劑至脫溶瓶中剩余少量料液且能傾倒出來，停止脫溶，將脫除溶劑后的料液倒入表面皿中，置于真空冷動干燥機中冷凍至干，得竹葉黃酮提取物。
2. 如權(quán)利要求1所述的竹葉黃酮提取物的制備方法，所述的制備方法采用乙醇_水體系。
全文摘要
本發(fā)明提供一種制備竹葉黃酮提取物的方法，以竹葉為原料，經(jīng)粉碎、浸泡、回流提取、冷卻、離心、減壓脫溶、真空冷凍干燥后得竹葉黃酮提取物，得到的竹葉黃酮提取物含有黃酮化合物、可溶性總糖、蛋白質(zhì)、粗脂肪、水分、礦物質(zhì)等，具有顯著的抗氧化、清除自由基、降壓降血脂的作用，可廣泛應(yīng)用于食品、保健品、化妝品及清潔用品中。該工藝使用乙醇-水體系，實現(xiàn)了無污染操作，同時，黃酮提取率較高，純度及抗氧化活性亦較高。
文檔編號A61Q19/00GK101704849SQ20091022392
公開日2010年5月12日 申請日期2009年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月20日
發(fā)明者呂兆林, 姚永紅, 張柏林, 秦嬌 申請人:北京林業(yè)大學(xué)