吡咯喹啉醌在化療后的輔助治療中的應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】吡咯喹啉醌在化療后的輔助治療中的應(yīng)用，本發(fā)明由于將吡咯喹啉醌應(yīng)用在化療后的輔助治療中，吡咯喹啉醌對(duì)化療后的貧血癥有治療作用，而且能增強(qiáng)化療后巨噬細(xì)胞的吞噬功能，具有有效減輕化療毒副作用、見(jiàn)效十分明顯和提高人體免疫力等優(yōu)點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
吡咯喹啉醌在化療后的輔助治療中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及提高人體免疫力方面醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及吡咯喹啉醌在化療后 的輔助治療中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤是威脅人類(lèi)健康的頭號(hào)殺手，目前癌癥治療主要是以手術(shù)、化療、放療三 種治療措施為主，手術(shù)是治療癌癥的首選治療辦法，在做過(guò)手術(shù)之后須放化療治療，但是放 化療的毒副作用很大，如使人體免疫力下降，出現(xiàn)貧血癥和巨噬細(xì)胞的吞噬功能降低等，如 何減輕化療帶來(lái)的毒副作用，已經(jīng)是很多患者的困擾。
[0003] 吡略喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone，PQQ)，是繼吡啶核苷酸和核黃素核苷酸 之后，于上世紀(jì)70年代末發(fā)現(xiàn)的第三種氧化還原型的輔酶，是多種氧化還原酶（例如，葡 萄糖脫氫酶和乙醇脫氫酶）的輔基，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)抗氧化能力最強(qiáng)的物質(zhì)，在體 內(nèi)發(fā)揮重要作用。PQQ呈紅棕色粉末狀，具有很好的水溶性。研究證實(shí)，PQQ在提高人體免 疫力方面有很好的效果，然而，在本發(fā)明之前，本領(lǐng)域從未對(duì)PQQ在化療后提高人體免疫力 方面做出研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服上述問(wèn)題，本發(fā)明向社會(huì)提供吡咯喹啉醌在化療后的輔助治療中的應(yīng) 用，對(duì)化療后的貧血癥有治療作用，并且能增強(qiáng)化療后巨噬細(xì)胞的吞噬功能，并減輕化療帶 來(lái)的毒副作用。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案是:提供吡咯喹啉醌在化療后的輔助治療中的應(yīng)用。
[0006] 作為對(duì)本發(fā)明的改進(jìn)，所述吡咯喹啉醌在化療后的輔助治療方面的應(yīng)用。
[0007] 作為對(duì)本發(fā)明的改進(jìn)，所述吡咯喹啉醌在化療后的治療貧血癥方面的應(yīng)用。
[0008] 作為對(duì)本發(fā)明的改進(jìn)，所述吡咯喹啉醌在化療后增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能方面的 應(yīng)用。
[0009] 作為對(duì)本發(fā)明的改進(jìn)，所述組合物的劑型包括:片劑、粉末劑、丸劑、糖漿、膠囊、溶 液劑或栓劑。
[0010] 作為對(duì)本發(fā)明的改進(jìn)，所述吡咯喹啉醌是通過(guò)微生物發(fā)酵制成的。
[0011] 本發(fā)明由于將吡咯喹啉醌應(yīng)用在化療后的輔助治療中，吡咯喹啉醌對(duì)化療后的貧 血癥有治療作用，而且能增強(qiáng)化療后巨噬細(xì)胞的吞噬功能，具有有效減輕化療毒副作用、見(jiàn) 效十分明顯和提高人體免疫力等優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說(shuō)明】
[0012 ]圖1是PQQ對(duì)化療后紅細(xì)胞的影響的直方圖。
[0013] 圖2是PQQ對(duì)化療后紅細(xì)胞減少癥的治療效率的直方圖。
[0014] 圖3是PQQ對(duì)化療后紅細(xì)胞的影響的圖片。
[0015]圖4是PQQ對(duì)化療后巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響的直方圖。
[0016]圖5是PQQ對(duì)化療后巨噬細(xì)胞吞噬功能降低癥的治療效率的直方圖。
[0017]圖6是PQQ對(duì)化療后巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響的圖片。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0019] 一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) (11)、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?考察PQQ對(duì)化療后的輔助治療作用，包括對(duì)化療后中性粒細(xì)胞減少癥、貧血癥、巨噬細(xì) 胞形成減少癥及巨噬細(xì)胞吞噬功能降低癥的影響。
[0020] (12)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中性粒細(xì)胞轉(zhuǎn)基因熒光斑馬魚(yú)，以自然成對(duì)交配繁殖方式進(jìn)行，共180尾，用于化療后 的中性粒細(xì)胞減少癥實(shí)驗(yàn);Albino系斑馬魚(yú)，以自然成對(duì)交配繁殖方式進(jìn)行，共540尾，用于 貧血癥、巨噬細(xì)胞形成減少癥及巨噬細(xì)胞吞噬功能降低癥實(shí)驗(yàn)，每組30尾斑馬魚(yú)。中性粒細(xì) 胞減少癥實(shí)驗(yàn)斑馬魚(yú)年齡為受精后2天（2 dpf)，貧血癥實(shí)驗(yàn)斑馬魚(yú)年齡為受精后3天（3 dpf)、巨噬細(xì)胞形成減少癥實(shí)驗(yàn)斑馬魚(yú)年齡為受精后2天（2 dpf)、巨噬細(xì)胞吞噬功能降低 癥實(shí)驗(yàn)斑馬魚(yú)年齡為受精后4天(4 dpf)。斑馬魚(yú)飼養(yǎng)于28 °C的養(yǎng)魚(yú)用水中（水質(zhì)：每IL反 滲透水中加入200 mg速溶海鹽，電導(dǎo)率為480~510 yS/cm;pH為6.9~7.2;硬度為53.7~ 71.6 mg/L CaC03)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為：SYXK (浙）2012-0171。飼養(yǎng)管理符合國(guó)際 AAALAC認(rèn)證的要求。
[0021] (13)、實(shí)驗(yàn)藥物 PQQ，無(wú)色液體，濃度21 mg/mL，由深圳某公司委托方提供，收到樣品后置于4°C冰箱避 光保存。
[0022] 長(zhǎng)春瑞濱，無(wú)色液體，濃度10 mg/mL，批號(hào)為140501，由江蘇豪森制藥公司生產(chǎn)，臨 用時(shí)用生理鹽水配制成0.125 mg/mL。
[0023] 去水衛(wèi)矛醇，白色粉末，批號(hào)為141201，臨用時(shí)用生理鹽水配制成濃度為0.2 mg/mL。
[0024] (14)、儀器與試劑 解剖顯微鏡（SZX7，OLYMPUS，Japan);電動(dòng)聚焦連續(xù)變倍熒光顯微鏡(AZ100，Nikon公 司）；6孔板(Nest Biotech);甲基纖維素(Aladdin, China);鄰聯(lián)茴香胺(紅色粉末，批號(hào) 119-90-4，Sigma0);中性紅(紅色粉末，批號(hào)553-24-2，Sigma)。
[0025] 二、PQQ對(duì)化療后紅細(xì)胞的影響 (21)、濃度組別 實(shí)驗(yàn)1組正常對(duì)照組 實(shí)驗(yàn)2組生理鹽水對(duì)照組 實(shí)驗(yàn)3組模型組 實(shí)驗(yàn)4組I/10PQQ組 實(shí)驗(yàn)5組1/3PQQ組 實(shí)驗(yàn)6組PQQ組 濃度確定依據(jù) 由于委托方未提供具體的樣品濃度，故按常規(guī)方法進(jìn)行，PQQ濃度設(shè)置為PQQ(濃度21 mg/mL)、1/3PQQ(濃度7mg/mL)及 1/10PQQ(濃度2 · lmg/mL)。
[0026] (22)、模型制作 血液循環(huán)注射0.125 mg/mL的長(zhǎng)春瑞濱10 nL，處理3 dpf斑馬魚(yú)Id(至4 dpf)，建立斑 馬魚(yú)貧血癥模型。
[0027] (23)、實(shí)驗(yàn)方法 _斑馬魚(yú)品系:Albino品系； -用長(zhǎng)春瑞濱處理斑馬魚(yú)，建立斑馬魚(yú)化療后貧血模型； -正常對(duì)照組:不作任何處理，暴露于3mL養(yǎng)魚(yú)用水中； -生理鹽水對(duì)照組:血液循環(huán)注射生理鹽水，暴露于3mL養(yǎng)魚(yú)用水中； -除正常對(duì)照組及生理鹽水對(duì)照組外，其余各組均血液循環(huán)注射長(zhǎng)春瑞濱，誘導(dǎo)化療后 貧血癥模型，模型組暴露于3mL養(yǎng)魚(yú)用水中，樣品組分別暴露于同體積I/1OPQQ、I/3PQQ及 PQQ 中； -每個(gè)實(shí)驗(yàn)組均處理30尾斑馬魚(yú)； -PQQ暴露處理結(jié)束后，鄰聯(lián)茴香胺染色紅細(xì)胞，每組隨機(jī)選取15尾斑馬魚(yú)，在顯微鏡下 觀察、拍照并保存； -用圖像處理軟件進(jìn)行圖像分析，定量斑馬魚(yú)心臟處紅細(xì)胞（S)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以 Mean 土 SE表不； -PQQ對(duì)貧血癥的治療效率計(jì)算公式如下： Efficacy(%) = X100% -統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用方差分析和Dunnett's T-檢驗(yàn)，p〈 0.05為差異性顯著； -提供具有代表性的實(shí)驗(yàn)圖譜。
[0028] (24)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1/10PQQ、1/3PQQ及PQQ對(duì)長(zhǎng)春瑞濱誘導(dǎo)的貧血癥的治療效率分別為31.6%、80.9%及 75 · 4%;與模型組比較，1/10PQQ組/7 >0 · 05; 1/3PQQ及PQQ組紅細(xì)胞顯著增多/7〈0 · 01，詳見(jiàn) 表1、圖1、圖2和圖3。在圖1中，A:正常對(duì)照組，B:生理鹽水對(duì)照組，C:模型組，D: 1/10PQQ組， E:1/3PQQ組，F(xiàn):PQQ組。在圖2中，A:1/10PQQ組，B:1/3PQQ組，C:PQQ組。在圖3中，虛線(xiàn)框內(nèi)部 分為鄰聯(lián)茴香胺染色的紅細(xì)胞，A:正常對(duì)照組，B:生理鹽水對(duì)照組，C:模型組，D: 1/10PQQ 組，E:1/3PQQ組，F(xiàn):PQQ組。 Γ 00291 =iR.Mpnn + ?ρ'ι 注:與模型組比較〈0.01。
[0030] (25)、實(shí)驗(yàn)結(jié)論 1/10PQQ、1/3PQQ及PQQ對(duì)貧血癥的治療效率分別為31.6%、80.9%及75.4%;與模型組比 較，1/10PQQ組p>0.05; 1/3PQQ及PQQ組p〈0.01，說(shuō)明PQQ對(duì)化療后的貧血癥有治療作用。 [0031] 三、PQQ對(duì)化療后巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 (31)、濃度組別 實(shí)驗(yàn)1組正常對(duì)照組 實(shí)驗(yàn)2組墨汁對(duì)照組 實(shí)驗(yàn)3組模型組 實(shí)驗(yàn)4組I/10PQQ組 實(shí)驗(yàn)5組1/3PQQ組 實(shí)驗(yàn)6組PQQ組 濃度確定依據(jù) 由于委托方未提供具體的樣品濃度，故按常規(guī)方法進(jìn)行，PQQ濃度設(shè)置為PQQ(濃度21 mg/mL)、1/3PQQ(濃度7mg/mL)及 1/10PQQ(濃度2 · lmg/mL)。
[0032] (32)、模型制作 血液循環(huán)注射0.2 mg/mL的去水衛(wèi)矛醇及墨汁混合物10 nL，處理4 dpf斑馬魚(yú)2d(至6 dpf)，建立斑馬魚(yú)巨噬細(xì)胞吞噬功能降低癥模型。
[0033] (33)、實(shí)驗(yàn)方法 _斑馬魚(yú)品系:Albino品系； -用去水衛(wèi)矛醇及墨汁混合物血液循環(huán)注射斑馬魚(yú)，建立斑馬魚(yú)化療后巨噬細(xì)胞吞噬 功能降低t吳型； -正常對(duì)照組:不作任何處理，暴露于3mL養(yǎng)魚(yú)用水中； -墨汁對(duì)照組:血液循環(huán)注射墨汁，暴露于3mL養(yǎng)魚(yú)用水中； -除正常對(duì)照組及生理鹽水對(duì)照組外，其余各組均血液循環(huán)注射去水衛(wèi)矛醇及墨汁，誘 導(dǎo)化療后巨噬細(xì)胞吞噬功能降低模型，模型組暴露于3mL養(yǎng)魚(yú)用水中，樣品組分別暴露于同 體積 l/l〇PQQ、l/3PQQ 及 PQQ 中； -每個(gè)實(shí)驗(yàn)組均處理30尾斑馬魚(yú)； -PQQ暴露處理結(jié)束后，中性紅染色，每組隨機(jī)選取15尾斑馬魚(yú)，在顯微鏡下觀察、拍照 并保存； -統(tǒng)計(jì)巨噬細(xì)胞吞噬個(gè)數(shù)(N)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以Mean土 SE表示； -PQQ對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能降低癥的治療效率計(jì)算公式如下：
-統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用方差分析和Dunnett's T-檢驗(yàn)，p〈 0.05為差異性顯著； -提供具有代表性的實(shí)驗(yàn)圖譜。
[0034] (34)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1/10PQQ、1/3PQQ及PQQ對(duì)去水衛(wèi)矛醇誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞吞噬功能下降的治療效率分別 為-30·4%、23·9%及78·3%;與模型組比較，1/10PQQ與 1/3PQQ組 p>0·05;PQQ組p〈0·05，顯示 PQQ組能顯著提高巨噬細(xì)胞的吞噬功能，詳見(jiàn)表2、圖4、圖5和圖6。在圖4中，A:正常對(duì)照組， B:生理鹽水對(duì)照組，C:模型組，D: I /I OPQQ組，E: I /3PQQ組，F(xiàn): PQQ組。在圖5中，A: I/1OPQQ組， B:1/3PQQ組，C:PQQ組。在圖6中，方框內(nèi)黑色巨噬細(xì)胞為巨噬細(xì)胞進(jìn)行了吞噬，A:正常對(duì)照 組，B:生理鹽水對(duì)照組，C:模型組，D: I /I OPQQ組，E: I /3PQQ組，F(xiàn): PQQ組。
[0035] 表2 PQQ對(duì)化療后巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響(/3 =15，Mean 土 SE)
注:與模型組比較*p〈〇.〇5。
[0036] (35)、實(shí)驗(yàn)結(jié)論 1/10PQQ、1/3PQQ及PQQ對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能減少癥的治療效率分別為-30.4%、23.9%及 78.3%;與模型組比較，1/10PQQ與1/3PQQ組p>0.05;PQQ組p〈0.05，說(shuō)明PQQ能增強(qiáng)化療后巨 噬細(xì)胞的吞噬功能。
[0037]本發(fā)明由于將PQQ應(yīng)用在化療后的輔助治療中，提高了人體免疫力，PQQ對(duì)化療后 的貧血癥有治療作用，而且能增強(qiáng)化療后巨噬細(xì)胞的吞噬功能，具有有效減輕化療毒副作 用、見(jiàn)效十分明顯和提高人體免疫力等優(yōu)點(diǎn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 吡咯喹啉醌在化療后的輔助治療中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述吡咯喹啉醌在化療后的治療貧血癥方 面的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述吡咯喹啉醌在化療后增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的 吞噬功能方面的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于:所述組合物的劑型 包括:片劑、粉末劑、丸劑、糖漿、膠囊、溶液劑或栓劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項(xiàng)權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于:所述吡咯喹啉醌是 通過(guò)微生物發(fā)酵制成的。
【文檔編號(hào)】A61P7/06GK105963297SQ201610309904
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年5月11日
【發(fā)明人】周新中
【申請(qǐng)人】深圳市太生源健康產(chǎn)業(yè)有限公司