藻酸鹽低聚物作為血液抗凝劑的應用
【專利摘要】本發(fā)明提供一種在臨床和非臨床應用(包括體內(nèi)、離體和體外環(huán)境)中用作血液抗凝劑的具有2至75個單體殘基的藻酸鹽低聚物，其中所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。本發(fā)明還提供所述藻酸鹽低聚物在制備產(chǎn)品或裝置中的應用，所述產(chǎn)品或裝置具有降低的促進血液凝集能力，其中，所述藻酸鹽低聚物設置在所述產(chǎn)品或裝置的表面處或其表面上。所述產(chǎn)品或裝置形成本發(fā)明的另一方面。
【專利說明】藻酸鹽低聚物作為血液抗凝劑的應用
[0001 ]本發(fā)明涉及藻酸鹽低聚物作為血液抗凝劑的應用，血液抗凝劑是能夠預防或抑制 在全血或血漿中形成纖維蛋白凝塊的試劑。因此，本發(fā)明提供一種用于預防或抑制血液凝 集并從而調(diào)節(jié)血液凝集的方法。在臨床和非臨床情況中均需要對血液凝結(jié)的調(diào)節(jié)或控制。 因此本發(fā)明的方法可應用于與不需要的血液凝集(血栓形成）相關的疾病和病癥的治療和 手術管理，也可應用于處理全血、血漿或包含全血、血漿的組合物，以及用于處理在使用時 與血液或血液衍生產(chǎn)物接觸的材料、產(chǎn)物或裝置、或其部分。還提供了含有和/或涂覆有藻 酸鹽低聚物的用于所述應用的產(chǎn)物和裝置。
[0002] 血液凝集(或血液凝結(jié)，這些術語在本文可互換地使用）是脊椎動物進化出的抵消 和修復循環(huán)系統(tǒng)損傷的生理機制。簡而言之，血液凝集過程導致產(chǎn)生細胞和蛋白質(zhì)基質(zhì)的 聚集團，其物理性塞住由損傷引起的破壞循環(huán)系統(tǒng)完整性的破損處。
[0003] 更具體地，體內(nèi)凝集過程是一個復雜的分兩支的蛋白水解級聯(lián)反應，所述反應最 終通過可溶的纖維蛋白原變?yōu)椴蝗艿睦w維蛋白的轉(zhuǎn)化導致液體血液轉(zhuǎn)化為固體凝膠。所述 纖維蛋白原向纖維蛋白的轉(zhuǎn)化產(chǎn)生包住血細胞及其它血液成分的蛋白質(zhì)細絲基質(zhì)。不論所 得到的實體的確切組成如何，該實體被稱為血凝塊或在臨床上稱為血栓。
[0004] 所述體內(nèi)凝集過程是分兩支的，其中所認識到的兩個不同起始點在因子X點處交 匯，因子X是將凝血酶原轉(zhuǎn)化成凝血酶的蛋白，凝血酶進而催化纖維蛋白原向纖維蛋白的轉(zhuǎn) 化。其中一支的凝集通路被稱為"內(nèi)源性通路"或由于最初觀察到所述通路在血液與人造表 面接觸時被激活而被稱為"接觸激活通路"。這個過程中的基本介質(zhì)都存在于血液中，因此 將其定義為"內(nèi)源性"。另一支凝集通路被稱為"外源性通路"或由于需要外來細胞表面介質(zhì) "組織因子"的引發(fā)而稱為"組織因子通路"。組織損傷后立即發(fā)生組織因子的暴露，因此外 源性通路被視為體內(nèi)主要的通路。
[0005] 盡管血液凝集是脊椎動物抵御損傷的基本防御機制，但在臨床環(huán)境中不需要的或 不適當?shù)哪瘯鹧ㄐ约膊?，其中血液凝塊會在血管或心臟中引起阻塞。所述事件經(jīng) 常導致下游組織缺氧，甚至是梗塞?？山又l(fā)生組織或器官損傷，而且取決于缺血的位置， 血栓形成或?qū)е碌慕M織損傷可以表現(xiàn)為諸如高血壓、低血氧合、腦卒中、心肌梗塞、肺栓塞 和心絞痛等病癥。
[0006] 不依賴于基于組織的介質(zhì)的接觸激活通路的存在意味著在體外可觀察到全血的 凝集。此外，含全血凝血因子的產(chǎn)品（例如血漿)可以表現(xiàn)出凝集，甚至在所述產(chǎn)品缺乏細胞 和/或血小板時也可以表現(xiàn)出凝集。在這些實施方式中，會形成不溶的纖維蛋白網(wǎng)絡，盡管 在缺少血細胞時所述凝塊的整體外現(xiàn)與在全血中形成的不同。因此血液凝集通路在體外處 理血液和血液產(chǎn)物的情況下也是重要的。
[0007] 治療或預防血栓性疾病的藥物干預是存在的，但其在數(shù)量上有限，并且具有毒性、 藥物相互作用和給藥和遞送途徑限制等問題。需要具有更好的安全性、更易于給藥且在施 用途徑上具有較少限制的替代性抗凝劑。此外，已知的是，提供在使用時與血液或血液衍生 產(chǎn)物接觸的材料、產(chǎn)品或裝置、或其部分，所述產(chǎn)品或裝置或其部分的表面(例如，表面涂 層)包含設計為使所述表面上的血液凝集最小化的血液相容性化合物。需要替代性的(優(yōu)選 為改進的)血液相容性化合物，以用作或用于這樣的表面涂層。在體外抵消凝集的添加劑也 是存在的，不過總是需要替代性產(chǎn)品，特別是可安全用于打算施用于人或非人類動物受試 者的血液廣品的替代性廣品。
[0008] 藻酸鹽是天然存在的多糖，已發(fā)現(xiàn)其在臨床(例如在傷口敷料中、作為藥物載質(zhì)、 和在抗胃燒灼制劑中）和非臨床(例如在食品制劑中）中具有許多應用。它們是（1-4)連接的 β-D-甘露糖醛酸(M)和/或其C-5差向異構(gòu)體α-L-古洛糖醛酸(G)的直鏈聚合物。藻酸鹽的一 級結(jié)構(gòu)可以變化很大。M和G殘基可組織為連續(xù)M或G殘基的均聚嵌段，組織為交替的M和G殘 基的嵌段并且可發(fā)現(xiàn)單個M或G殘基間隔了這些嵌段結(jié)構(gòu)。藻酸鹽分子可以包括某些或者全 部上述結(jié)構(gòu)，并且這種結(jié)構(gòu)可在整個聚合物中不均勻地分布。在極端的情況下，存在古洛糖 醛酸的均聚物(聚古洛糖醛酸鹽)或甘露糖醛酸的均聚物(聚甘露糖醛酸鹽）。
[0009] 藻酸鹽分離自海洋褐藻（例如，叢梗藻（Durvi I lea)、巨藻（Lessonia)和昆布 (Laminaria)的某些種屬)和諸如銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和棕色固氮菌 (Azotobacter vinelandii )等細菌。其它假單胞菌（例如焚光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens)、惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)和門多薩假單胞菌(Pseudomonas mendocina)保留產(chǎn)生藻酸鹽的遺傳能力，但在野生條件下，它們不產(chǎn)生可檢測水平的藻酸 鹽。通過突變，可以誘導這些不產(chǎn)生藻酸鹽的假單胞菌穩(wěn)定產(chǎn)生大量的藻酸鹽。
[0010] 藻酸鹽被合成為聚甘露糖醛酸鹽，且通過差向異構(gòu)酶(特別是C-5差向異構(gòu)酶)對 所述聚合物中M殘基的的作用形成G殘基。對于從藻類中提取的藻酸鹽，所述G殘基主要組織 為G嵌段，因為在藻類的藻酸鹽生物合成中涉及的酶優(yōu)選在另一個G相鄰位置引入G，從而將 M殘基段轉(zhuǎn)化為為G-嵌段。這些生物合成系統(tǒng)的闡明使得可以產(chǎn)生具有特定的一級結(jié)構(gòu)的 藻酸鹽（W0 94/09124，Gimmestad，M等，Journal of Bacteriology，2003，Vol 185(12) 3515-3523和WO 2004/011628)。
[0011] 藻酸鹽通常從天然來源中作為大的高分子量聚合物(例如平均分子量為300,000 至500，000道爾頓)分離。然而，已知這種大的藻酸鹽聚合物可被降解或分解，例如通過化學 或酶水解產(chǎn)生低分子量的藻酸鹽結(jié)構(gòu)。工業(yè)上使用的藻酸鹽通常具有100，〇〇〇至300,000道 爾頓的平均分子量(這樣的藻酸鹽仍然被認為是大聚合物），不過在藥學中已經(jīng)使用平均分 子量為約35,000道爾頓的藻酸鹽。
[0012]最近已經(jīng)提出將更小尺寸(分子量)的藻酸鹽低聚物用于臨床應用，最值得注意的 是用于降低粘液的粘度，特別是包括例如發(fā)生在囊性纖維化和其它呼吸系統(tǒng)疾病的患者中 的高粘粘液的粘度(參見WO 2007/039754和WO 2008/125828)，或用于抗微生物、抗生物膜 (W0 2009/068841)和多藥耐藥菌(W0 2010/13957)。
[0013]現(xiàn)已出乎意料地發(fā)現(xiàn)，藻酸鹽低聚物、特別是2至75個單體的非硫酸鹽藻酸鹽低聚 物可抑制甚至預防血液的凝集，從而調(diào)節(jié)和控制血液凝集，因此提出將所述藻酸鹽低聚物 在預防或抑制人或動物體任何外部或內(nèi)部情境中的全血或包含血液凝集因子的組合物(例 如血液產(chǎn)品）的血液凝集的方法中用作血液抗凝劑。所述情境可包括在使用時與血液或血 液衍生產(chǎn)物接觸(在人或動物體的外部或內(nèi)部)的任何材料、產(chǎn)品或裝置上或在其中抑制或 預防血液凝集。在這些方面，藻酸鹽低聚物可設置在所述材料、產(chǎn)品或裝置的表面處或表面 上（即，以被固定的形式）。藻酸鹽低聚物易于以這樣的形式提供。所述情境也包括利用藻酸 鹽低聚物在人或動物體中作為抗凝治療劑的抗凝作用，其可以以非固定形式提供。藻酸鹽 低聚物無毒，易于管理和給藥，且已知不顯示藥物相互作用，因此，這些化合物解決了某些 或全部的上述各種缺陷。
[0014] 因此，本發(fā)明的第一方面提供一種用于預防或抑制血液凝集的方法，所述方法包 括使含有血漿(優(yōu)選全血）的組合物、或與所述組合物接觸或可接觸的材料與2至75個單體 殘基的藻酸鹽低聚物接觸，其中所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。
[0015] 術語"接觸"包括直接或間接地將藻酸鹽低聚物遞送至包含血漿的組合物(或使組 合物接觸藻酸鹽低聚物）的任何方式。藻酸鹽可以以游離和/或固定的形式提供，例如攜帶 或包含在使用時可與包含血漿的組合物接觸的表面。藻酸鹽低聚物可施涂到或結(jié)合到形成 表面的材料中，或可用所述低聚物浸漬所述材料，例如可在所述材料的表面上涂覆藻酸鹽 低聚物，或作為表面涂層的一部分提供。這可發(fā)生在表面形成之前、期間或之后，并且可以 通過共價或非共價相互作用（例如離子或靜電相互作用）來進行，或更一般而言，通過任何 方式的吸附進行。特別是，合適的單體組合物的藻酸鹽低聚物可設置表面上作為陽離子引 發(fā)的凝膠或其部分。
[0016] 本發(fā)明中的藻酸鹽低聚物當設置在材料表面處或表面上時，使該材料更具有血液 相容性，因此在某些實施方式中可被認為是血液相容的層或涂層。
[0017] 在另一些實施方式中，藻酸鹽低聚物被設置或包含在含有一種或多種其他血液相 容性化合物的血液相容性涂層中，所述一種或多種其他血液相容性化合物例如為肝素、硫 酸乙酰肝素、透明質(zhì)酸、聚乙二醇或葡聚糖、或?qū)嶋H上具有抗凝活性或性質(zhì)的任何生物活性 劑或有助于減少凝集的任何試劑或材料，例如，減少血小板活化和/或結(jié)合凝集所需的血液 成分(例如蛋白質(zhì)）的任何試劑或材料。
[0018] 其它實施方式中的藻酸鹽低聚物不以固定形式使用。通常在這種實施方式中，藻 酸鹽低聚物以其天然形式或作為組合物(例如藥學上可接受的制劑)的一部分施用。
[0019] 特別是，使所述組合物接觸藻酸鹽低聚物的步驟可包括將藻酸鹽低聚物施用于受 試者，特別是需要這種治療的受試者（例如，有血栓形成風險的受試者、或其正在發(fā)生或已 經(jīng)發(fā)生或者疑似正在發(fā)生或已經(jīng)發(fā)生血栓形成（即，血栓正在形成或已經(jīng)形成或者疑似正 在形成或已經(jīng)形成）的受試者。
[0020] 因此本發(fā)明可用于在人或動物體外的任何環(huán)境中抑制或預防血液凝集，特別是在 體外或離體使用時與血液或血液衍生產(chǎn)物接觸的任何材料、產(chǎn)品或裝置之上或其中抑制或 預防血液凝集，但在其它方面，藻酸鹽低聚物的抗凝作用在人或動物體環(huán)境中被利用，例 如，作為治療劑或作為可植入或留置醫(yī)療裝置的工程化表面的一部分。因此可以理解，包括 了醫(yī)學和非醫(yī)學方法，例如，包括了體外和離體方法也包括了體內(nèi)方法。如以下更詳細地描 述，明確包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是:不在人或非人動物體內(nèi)或之上進行的方法，或與之相關 的全部或部分包含在人或非人脊椎動物體內(nèi)或其上的裝置或材料。
[0021] 因此，本發(fā)明提供一種用作治療性血液抗凝劑的藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽 低聚物包含2至75個單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。換言之，本發(fā)明提供一 種用作抗血栓形成劑的藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物包含2至75個單體殘基，且 所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。
[0022] 本發(fā)明進一步提供一種用于抗凝(或抗血栓)治療的藻酸鹽低聚物，其中，所述藻 酸鹽低聚物包含2至75個單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。更具體地，本發(fā)明 提供一種藻酸鹽低聚物，該藻酸鹽低聚物用于治療或預防血栓形成、或與血液凝集(或血栓 形成)相關的疾病和病癥的方法，其中，所述藻酸鹽低聚物包含2至75個單體殘基，且所述單 體殘基不攜帶硫酸鹽基團。
[0023] 另一方面，本發(fā)明提供一種用于生產(chǎn)用以抗血液凝集(或抗血栓)治療的藥物的藻 酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物包含2至75個單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸 鹽基團。更具體地，本發(fā)明提供一種用于制造藥物的藻酸鹽低聚物，所述藥物用于治療或預 防血栓形成、或與血液凝集(或血栓形成)相關的疾病和病癥，其中，所述藻酸鹽低聚物包含 2至75個單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。
[0024] 因此，本發(fā)明也提供一種抗凝(或抗血栓)治療的方法，所述方法包括給需要所述 治療的人或非人脊椎動物受試者施用藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物包含2至75個 單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。
[0025] 因此，本發(fā)明也提供用于治療或預防血栓形成、或與血液凝集(或血栓形成）相關 的疾病和病癥的方法，所述方法包括給需要所述治療的人或非人脊椎動物受試者施用藻酸 鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物包含2至75個單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸鹽 基團。
[0026]在所述治療性實施方式中，以有效抑制或預防血液凝集(例如，治療或預防與血液 凝集有關的靶標疾病或病況)的量施用藻酸鹽低聚物。
[0027] 本發(fā)明的治療方法之前可具有如下步驟:受試者被鑒定或診斷為具有血栓形成風 險的受試者、或血栓正在或已經(jīng)形成或者疑似血栓正在或已經(jīng)形成的受試者，例如，患有、 或疑似患有與血液凝集相關的疾病或病況、或具有與血液凝集相關的疾病或病況的風險的 受試者。
[0028] 在其它實施方式中，本發(fā)明的治療方法之后可具有下述步驟:對受試者監(jiān)測對血 栓形成的效果、和/或病癥或臨床狀態(tài)的變化。例如，對受試者監(jiān)測血凝塊的形成、或血凝塊 的數(shù)量，和/或檢測已存在的血凝塊的尺寸變化、形狀和/或完整性的變化，例如使用下文詳 述的技術進行監(jiān)測。在其它實施方式中，該額外的步驟可以是對受試者監(jiān)測與血液凝集相 關的疾病或病況的發(fā)病、或預先存在的與血液凝集相關的疾病或病況的變化的步驟。在其 它實施方式中，該額外的步驟可以是測定受試者的血液以評估(例如使用下文詳述的凝集 測試)其凝集能力的步驟。
[0029]如上所述，藻酸鹽通常作為平均分子量為至少35,000道爾頓的聚合物存在，即約 175至約190個單體殘基，不過通常更高，且根據(jù)本發(fā)明的藻酸鹽低聚物可被定義為通過將 藻酸鹽聚合物(通常是天然存在的藻酸鹽)片段化（即尺寸減小)得到的材料。更特別的是， 根據(jù)本發(fā)明使用的藻酸鹽低聚物含有2至75個，優(yōu)選為2至50個，更優(yōu)選為2至40個、2至35個 或2至30個殘基。因此，根據(jù)本發(fā)明使用的藻酸鹽低聚物通常平均分子量為350至15,000道 爾頓，優(yōu)選為350至10,000道爾頓，更優(yōu)選為350至8000道爾頓、350至7000道爾頓，或350至 6,000道爾頓。
[0030]作為另一個選擇，所述藻酸鹽低聚物的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度(DPn)可為2至 75，優(yōu)選為2至50，更優(yōu)選為2至40、2至35、2至30、2至28、2至25、2至22、2至20、2至18、2至17、 2至15或2至12。
[0031] 其它代表性的范圍（無論是殘基的數(shù)量、DP或DPn)包括3、4、5、6、7、8、9、10或11中 的任何一個至 50、45、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、 21、20、19、18、17、16、15、14、13 或 12 中的任何一個。
[0032] 其它代表性的范圍（無論是殘基的數(shù)量、DP或DPn)包括8、9、10、11、12、13、14或15 中的任何一個至 50、45、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、 21、 20、19、18、17或16中的任何一個。
[0033] 其它代表性的范圍（無論是殘基的數(shù)量、DP或DPn)包括11、12、13、14、15、16、17或 18 中的任何一個至 50、45、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、 22、 21、20或19中的任何一個。
[0034] 如上所述，藻酸鹽低聚物可含有(或包括)古洛糖醛酸鹽或古洛糖醛酸(G)和/或甘 露糖醛酸鹽和甘露糖醛酸(M)殘基或單元。根據(jù)本發(fā)明的藻酸鹽低聚物將優(yōu)選僅由、或基本 上僅由（即基本上由）糖醛酸鹽/糖醛酸殘基組成，更特別的是僅由或基本上僅由G和/或M殘 基組成。作為另一種表達方式，在本發(fā)明中使用的藻酸鹽低聚物中，至少80%，更特別地至 少85 %、90 %、95 %或99 %的單體殘基可以是糖醛酸鹽/糖醛酸殘基，或者，更特別的是G和/ 或M殘基。換句話說，所述藻酸鹽低聚物優(yōu)選將不包含其它殘基或單元（例如，其它的糖殘 基，或者更特別的是其它糖醛酸鹽/糖醛酸殘基）。
[0035] 所述藻酸鹽低聚物優(yōu)選為直鏈低聚物。
[0036] 更特別地是，在優(yōu)選的實施方式中，藻酸鹽低聚物的至少30%的單體殘基是G殘基 (即古洛糖醛酸鹽或古洛糖醛酸）。換句話說，所述藻酸鹽低聚物將包含至少30%的古洛糖 醛酸鹽(或古洛糖醛酸)殘基。因此，具體的實施方式包括具有(例如包含)30%_70%的G(古 洛糖醛酸鹽)殘基或70%_100%的G(古洛糖醛酸鹽)殘基的藻酸鹽低聚物。因此，根據(jù)本發(fā) 明使用的代表性藻酸鹽低聚物可包含至少70%的G殘基（即，藻酸鹽低聚物的至少70%的單 體殘基是G殘基）。
[0037] 優(yōu)選地，至少50 %或60 %，更特別地是至少70 %或75 %，甚至更特別地是至少 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的單體殘基為古洛 糖醛酸鹽。在一個實施方式中，藻酸鹽低聚物可以是低聚古洛糖醛酸鹽（即G的均低聚體或 100% 的G) 〇
[0038]在進一步優(yōu)選的實施方式中，上述本發(fā)明的藻酸鹽具有其中大部分G殘基在所謂 的G-嵌段中的一級結(jié)構(gòu)。優(yōu)選為G殘基的至少50%、更優(yōu)選為至少70%或75%、及最優(yōu)選為 至少80%、85%、90%、92%或95%在G-嵌段中。G嵌段為至少兩個G殘基的連續(xù)序列，優(yōu)選為 至少3個連續(xù)的G殘基，更優(yōu)選為至少4個或5個連續(xù)的G殘基，最優(yōu)選為至少7個連續(xù)的G殘 基。
[0039] 特別是至少90%的G殘基1-4連接到另一個G殘基。更特別地是至少95%、更優(yōu)選為 至少98%、最優(yōu)選藻酸鹽的至少99 %的G殘基1-4連接到另一個G殘基。
[0040] 本發(fā)明中使用的藻酸鹽低聚物優(yōu)選為3-mer至35-mer，更優(yōu)選為3-mer至28-mer， 特別是4_mer至25-mer，例如5_mer至2〇-mer，尤其是6_mer至22-mer，特別是8_mer至20-mer，尤其是I Oner至15-mer，例如，所述藻酸鹽低聚物的分子量為350至6400道爾頓或350 至6000道爾頓，優(yōu)選為550至5500道爾頓，優(yōu)選為750至5000道爾頓，尤其是750至4500道爾 頓或2000至3000道爾頓或900至3500道爾頓。如上所述，其它代表性的藻酸鹽低聚物包括具 有5、6、7、8、9、10、11或12至50、45、40、35、28、25、22或20個殘基的低聚物。
[0041]它可以是單一化合物，或者可以是例如在一定聚合度范圍內(nèi)的化合物的混合物。 如上所述，藻酸鹽低聚物中的單體殘基可以是相同的或不同的，并且不是均需攜帶帶電基 團，不過優(yōu)選大部分(例如，至少60%，優(yōu)選為至少80%，更優(yōu)選為至少90%)攜帶帶電基團。 優(yōu)選絕大多數(shù)例如至少80%、更優(yōu)選為至少90%的帶電基團具有相同的極性。在所述藻酸 鹽低聚物中，羥基與帶電基團的比率優(yōu)選為至少2:1，更特別為至少3:1。
[0042]本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度(DPn)可為3-28、4-25、 6-22、8-20 或 10-15、或 5-18 或 7-15 或 8-12,特別是 10。
[0043]本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度(DPn)可為5-50、5-40、 5-35、5-30、5-28、5-25、5-22、5-20、5-18、5-16、5-15或5-14。
[0044] 本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度(DPn)可為8-50、8_40、 8- 35、8-30、8-28、8-25、8-22、8-20、8-18、8-16、8-15或8-14。
[0045] 本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度(DPn)可為9-50、9_40、 9- 35、9-30、9-28、9-25、9-22、9-20、9-18、9-16、9-15或9-14。
[0046] 本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度(DPn)可為10_50、10_ 40、10-35、10-30、10-28、10-25、10-22、10-20、10-18、10-16、10-15或10-14。
[0047]本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度DPn)可為12-50、12-40、 12-35、12-30、12-28、12-25、12-22、12-20、12-18、12-16、12-15或12-14。
[0048] 本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度(DPn)可為15_50、15_ 40、15-35、15-30、15-28、15-25、15-22、15-20、15-18或15-16。
[0049] 本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有的聚合度(DP)、或數(shù)均聚合度(DPn)為18-50、18-40、 18-35、18-30、18-28、18-25、18-22或18-20。
[0050] 本發(fā)明的藻酸鹽低聚物優(yōu)選基本上不含、優(yōu)選為實質(zhì)上不含本文公開的聚合度范 圍之外的藻酸鹽低聚物。這可以表不為本發(fā)明的藻酸鹽低聚物的分子量分布，例如DP在相 關范圍之外的根據(jù)本發(fā)明使用的藻酸鹽低聚物的每摩爾百分數(shù)。分子量分布優(yōu)選的是，不 超過10%、優(yōu)選不超過9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%摩爾的0?比0?"相關上限 大3、2或1。同樣，優(yōu)選的是，不超過10%、優(yōu)選為不超過9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2% 或1 %摩爾的DP比DPn相關下限小3、2或1。
[0051 ]適合的藻酸鹽低聚物在W02007/039754、W02007/039760、W0 2008/125828和 W02009/068841中描述，其公開內(nèi)容以其整體通過參考明確并入本文。
[0052]代表性的適合的藻酸鹽低聚物具有5至30的DPn、至少0.80的古洛糖醛酸鹽/半乳 糖醛酸鹽分數(shù)(Fg)、不超過0.20的甘露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且至少95%摩爾的DP不超過25。 [0053]其他適合的藻酸鹽低聚物具有7至15(優(yōu)選為8至12)的數(shù)均聚合度、至少0.85(優(yōu) 選至少0.90)的古洛糖醛酸鹽/半乳糖醛酸鹽分數(shù)(F c)、不超過0.15(優(yōu)選不超過0.10)的甘 露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且至少95%摩爾的聚合度小于17(優(yōu)選小于14)。
[0054]其他適合的藻酸鹽低聚物具有5至18(特別是7至15)的數(shù)均聚合度、至少0.80(優(yōu) 選至少0.85，甚至至少0.92)的古洛糖醛酸鹽/半乳糖醛酸鹽分數(shù)(Fg)、不超過0.20(優(yōu)選不 超過0.15,甚至不超過0.08)的甘露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且至少95%摩爾的聚合度小于20 (優(yōu)選小于17)。
[0055]其他適合的藻酸鹽低聚物具有5至18的數(shù)均聚合度、至少為0.92的古洛糖醛酸鹽/ 半乳糖醛酸鹽分數(shù)(Fg)、不超過0.08的甘露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且至少95%摩爾的聚合度小 于20。
[0056]其他適合的藻酸鹽低聚物具有5至18(優(yōu)選為7至15,更優(yōu)選為8至12,特別是約10) 的數(shù)均聚合度、至少〇. 80 (優(yōu)選為至少0.85，更優(yōu)選為至少0.90，特別是至少0.92，最特別是 至少0.95)的古洛糖醛酸鹽/半乳糖醛酸鹽分數(shù)(Fg)、不超過0.20(優(yōu)選為不超過0.15,更優(yōu) 選為不超過0.10,特別是不超過0.08,最特別是不超過0.05)的甘露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且 至少95%摩爾的聚合度小于20(優(yōu)選為小于17,更優(yōu)選為小于14)。
[0057]其他適合的藻酸鹽低聚物具有7至15(優(yōu)選為8至12)的數(shù)均聚合度、至少0.92(優(yōu) 選至少0.95)的古洛糖醛酸鹽/半乳糖醛酸鹽分數(shù)(Fg)、不超過0.08(優(yōu)選不超過0.05)的甘 露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且至少95%摩爾的聚合度小于17(優(yōu)選為小于14)。
[0058]其他適合的藻酸鹽低聚物具有5至18的數(shù)均聚合度、至少0.80的古洛糖醛酸鹽/半 乳糖醛酸鹽分數(shù)(Fg)、不超過0.20的甘露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且至少95%摩爾的聚合度小于 20 〇
[0059] 其他適合的藻酸鹽低聚物具有7至15的數(shù)均聚合度、至少0.85的古洛糖醛酸鹽/半 乳糖醛鹽分數(shù)(Fe)、不超過0.15的甘露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且至少95%摩爾的聚合度小于 17。
[0060] 其他適合的藻酸鹽低聚物具有7至15的數(shù)均聚合度、至少0.92的古洛糖醛酸鹽/半 乳糖醛酸鹽分數(shù)(Fg)、不超過0.08的甘露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)，且至少95%摩爾的聚合度小于 17。
[0061 ]其他適合的藻酸鹽低聚物具有5至20的數(shù)均聚合度、至少0.85的古洛糖醛酸鹽分 數(shù)(Fe)、不超過0.15的甘露糖醛酸鹽分數(shù)(Fm)。
[0062]因此，可以看出，根據(jù)本發(fā)明有利的特定種類的藻酸鹽低聚物是定義為所謂的"高 G"或"G-嵌段"低聚物的藻酸鹽低聚物，即，其具有高含量的G殘基或G-嵌段(例如，其中，至 少70%的單體殘基為G，優(yōu)選排列在G-嵌段內(nèi)）。然而，也可使用其它類型的藻酸鹽低聚物， 特別是包括"高M"或"M-嵌段"的低聚物或MG-嵌段的低聚物，其在下文進一步描述。因此，特 別優(yōu)選的低聚物是具有高比例單一單體類型的藻酸鹽低聚物，并且該類型的所述單體主要 存在于所述單體類型的連續(xù)序列中，例如低聚物中至少70%的單體殘基是1-4連接到另一 個G殘基的G殘基，或更優(yōu)選低聚物中至少75 %，最優(yōu)選至少80 %、85 %、90%、92 %、93 %、 94%、95%、96%、97%、98%、99%的單體殘基是1 -4連接到另一個G殘基的G殘基。兩個G殘 基間的這種1-4連接還可以表達為結(jié)合到相鄰古洛糖醛單元的古洛糖醛單元。
[0063]在其他實施方式中，藻酸鹽低聚物的至少50%、更特別是超過50%的單體殘基可 以是M殘基（即甘露糖醛酸鹽或甘露糖醛酸）。換句話說，所述藻酸鹽低聚物將包含至少50 % 或者超過50%的甘露糖醛酸鹽(或甘露糖醛酸)殘基。具體的實施方式因此包括具有(例如 包含)50%至70%的M(甘露糖醛酸鹽）、或例如70%至100%的M(甘露糖醛酸鹽)殘基的藻酸 鹽低聚物。其他【具體實施方式】還包括含有71 %至85%的M殘基或85%至100%M殘基的低聚 物。因此，根據(jù)本發(fā)明的此實施方式使用的代表性的藻酸鹽低聚物將包含超過70%的M殘基 (即，藻酸鹽低聚物中超過70%的單體殘基將為M殘基）。
[0064] 在其它實施方式中，至少50%或60%，更特別的至少70%或75%，甚至更特別的至 少80%、85%、90%、95%或99%的單體殘基為甘露糖醛酸鹽。在一個實施方式中，藻酸鹽低 聚物可以是低聚甘露糖醛酸鹽(即，M的均聚低聚物或100%M)。
[0065] 在其他實施方式中，本發(fā)明的上述藻酸鹽的一級結(jié)構(gòu)中，大部分的M殘基在所謂的 M-嵌段中。在此實施方式中，優(yōu)選為至少50%，更優(yōu)選為至少70%或75%，及最優(yōu)選為至少 80%、85%、90%或95%的M殘基在M-嵌段中。M嵌段為至少兩個M殘基的連續(xù)序列，優(yōu)選為至 少3個連續(xù)的M殘基，更優(yōu)選為至少4個或5個連續(xù)的M殘基，最優(yōu)選為至少7個連續(xù)的M殘基。
[0066] 特別是，至少90%的M殘基1-4連接到另一個M殘基。更特別地是，藻酸鹽中至少 95%，更優(yōu)選為至少98%，最優(yōu)選為至少99%的M殘基1-4連接到另一個M殘基。
[0067]其它優(yōu)選的低聚物為這樣的藻酸鹽低聚物:該低聚物中至少70%的單體殘基是ΙΑ 連接到另一個 M 殘基的 M 殘基 ，或者更優(yōu)選低聚物 中至少 75 % ， 最優(yōu)選為至少 80 % 、 85 % 、 90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的單體殘基是 1-4連接到另一個M殘基 的M殘基。兩個M殘基間的這種1-4連接還可以表達為甘露糖醛單元連接到相鄰的甘露糖醛 單元。
[0068]在其他實施方式中，本發(fā)明的藻酸鹽低聚物包含M和G殘基交替的序列。至少三個， 優(yōu)選為至少四個交替的M和G殘基的序列代表MG嵌段。本發(fā)明的藻酸鹽低聚物優(yōu)選包含MG嵌 段。更具體而言，MG嵌段為至少三個由G和M殘基組成的連續(xù)殘基的序列，其中，在該連續(xù)序 列中每個非末端（內(nèi)部)G殘基與M殘基1-4和4-1連接，且該連續(xù)序列中每個非末端（內(nèi)部)M 殘基與G殘基1-4和4-1連接。所述MG嵌段優(yōu)選為至少5個或6個連續(xù)的殘基，更優(yōu)選為至少7 個或8個連續(xù)的殘基。
[0069] 在其他實施方式中，發(fā)現(xiàn)藻酸鹽低聚物中的少數(shù)糖醛酸鹽（即，甘露糖醛酸鹽或古 洛糖醛酸鹽)主要在MG嵌段中。在該實施方式中，MG嵌段藻酸鹽低聚物中優(yōu)選至少50%，更 優(yōu)選至少70 %或75 %，及最優(yōu)選至少80%、85%、90%或95 %的少數(shù)糖醛酸鹽出現(xiàn)在MG嵌段 中。在另一個實施方式中，藻酸鹽低聚物被排列為使得所述低聚物中至少50%、至少60%、 至少70 %、至少80 %、至少85 %、至少90%、至少95 %、至少99% (例如，100% )的G和M殘基排 列在MG嵌段內(nèi)。
[0070] 以最寬泛的形式而言，本發(fā)明延伸到下述實施方式:其中，低聚物的至少1%但小 于100%的單體殘基是G殘基（即古洛糖醛酸鹽或古洛糖醛酸），但更特別地是，如以下進一 步限定的，至少30%的單體殘基是G殘基。因此，包含MG嵌段的藻酸鹽低聚物的最廣泛的范 圍可包含至少1 %，但小于100 %的古洛糖醛酸鹽(或古洛糖醛酸)殘基，但通常所述包含MG 嵌段的藻酸鹽低聚物會包含至少30% (或至少35%、40%或45%或50%的G)但小于100%的 G。因此具體的實施方式包括具有1 %至30%的G(古洛糖醛酸鹽)殘基、30%至70%的G(古洛 糖醛酸鹽)殘基或70%至99%的G(古洛糖醛酸鹽）殘基的包含MG嵌段的藻酸鹽低聚物。因 此，根據(jù)本發(fā)明使用的代表性的包含MG嵌段的藻酸鹽低聚物可包含超過30%但小于70%的 G殘基（即，MG嵌段藻酸鹽低聚物中超過30%，但小于70%的單體殘基是G殘基）。
[0071] 包含MG嵌段的藻酸鹽低聚物中優(yōu)選超過30 %，更特別為超過35 %或40 %，甚至更 特別為超過45%、50%、55%、60%或65%，但在各種情況下都小于70 %的單體殘基是古洛 糖醛酸鹽。作為另一種選擇，包含MG嵌段的藻酸鹽低聚物中小于70%，更優(yōu)選小于65%或 60 %，甚至更優(yōu)選小于55%、50 %、45 %、40 %或35 %，但在每種情況下均超過30 %的單體殘 基是古洛糖醛酸鹽。可選擇由所述數(shù)值的任何組合形成的范圍。因此，例如包含MG嵌段的藻 酸鹽低聚物可具有例如35%至65%、40%至60%或45%至55%的G殘基。
[0072] 在另一個實施方式中，包含MG嵌段的藻酸鹽低聚物可具有近似相等量的G和M殘基 (例如，65 % G/35 至 35 % G/65 的比例，例如60 % G/40 至40 % G/60 的比例；55 % G/45%M 至 45%6/55%]?;53%6/47%]\1至47%6/53%]\1;51%6/49%]\1至49%6/51%]\1 ;例如約 50%G至約50%M)，而這些殘基主要、優(yōu)選全部、或盡可能完全地以交替的MG的模式排列（例 如，至少50%或至少60%、70%、80%、85%、90%或95%或100%的]?和6殘基為交替的]\?；序 列）。
[0073] 所實現(xiàn)的抗凝水平或量可根據(jù)精確環(huán)境情況而變化，例如使用藻酸鹽低聚物的方 式和環(huán)境，使用藻酸鹽低聚物的條件和所述藻酸鹽低聚物的組成。如實施例中所示，不同尺 寸、G和M的含量以及單體排列的藻酸鹽低聚物顯示不同水平的抗凝作用。因此，本發(fā)明為本 領域技術人員提供了根據(jù)本發(fā)明選擇藻酸鹽低聚物的手段，所選藻酸鹽低聚物的結(jié)構(gòu)所具 有的抗凝性質(zhì)（例如作用的強度和持續(xù)時間）可以在本領域技術人員的工作情境中（例如， 所關注的患者或者血液樣品的凝血性質(zhì))最好或較好地滿足其需求。因此，在給定的所關注 系統(tǒng)中可具有不同抗凝作用的不同藻酸鹽低聚物的可得性開啟了為所研究的系統(tǒng)定制藻 酸鹽低聚物抗凝劑性質(zhì)的可能性。不同尺寸、G和M的含量、和單體排列的藻酸鹽低聚物的組 合可一起使用，以產(chǎn)生甚至更精確定制的抗凝效果。在其它實施方式中，本發(fā)明藻酸鹽低聚 物可具有單體含量和結(jié)構(gòu)不同的區(qū)域，其共同導致了整體定制的抗凝效果。當然，可進一步 選擇所述低聚物的結(jié)構(gòu)或其部分，以有利于在材料和表面之上或其內(nèi)配制和/或固定。
[0074] 在某些實施方式中，本發(fā)明的低聚物的末端糖醛酸殘基不具有雙鍵，尤其是不具 有位于CjPC5原子之間的雙鍵。這種低聚物可被描述為具有飽和末端糖醛酸殘基。因此，在 其它實施方式中，本發(fā)明的藻酸鹽低聚物具有不飽和末端糖醛酸殘基。本領域技術人員將 能夠無需過度勞動而制備具有飽和末端糖醛酸殘基的低聚物。這可以通過使用產(chǎn)生這種低 聚物的生產(chǎn)技術，或通過轉(zhuǎn)化(飽和化）由產(chǎn)生具有不飽和末端糖醛酸殘基的低聚物的方法 產(chǎn)生的低聚物。
[0075] 所述藻酸鹽低聚物通常攜帶電荷，因此藻酸鹽低聚物的抗衡離子可以是任何生理 上可接受的離子，特別是那些通常用于帶電藥物基質(zhì)的離子，例如鈉、鉀、銨、氯、甲磺酸根、 葡甲胺等。也使用促進藻酸鹽凝膠化的離子(例如第2族金屬離子）。
[0076] 雖然藻酸鹽低聚物可以是由適當數(shù)量的古洛糖醛酸鹽和甘露糖醛酸鹽殘基的聚 合產(chǎn)生的合成材料，本發(fā)明中使用的藻酸鹽低聚物可從上述天然來源（即，天然藻酸鹽源材 料)中方便地獲得、產(chǎn)生或衍生。
[0077] 產(chǎn)生可根據(jù)本發(fā)明使用的藻酸鹽低聚物的多糖到寡糖的裂解可使用諸如酶消化 和酸水解等傳統(tǒng)的多糖裂解技術進行。在一個有利的實施方式中，使用酸水解來制備本發(fā) 明的藻酸鹽低聚物。在其它實施方式中，使用酶消化，并采用額外處理步驟將低聚物的末端 糖醛酸飽和化。
[0078] 然后可使用離子交換樹脂層析或通過分級沉淀或溶解或過濾將低聚物與多糖分 解產(chǎn)物分離。US 6,121，441和WO 2008/125828(此處通過援引以其整體明確并入本文)描述 了一種適用于制備本發(fā)明中使用的藻酸鹽低聚物的方法。其他信息和討論可參見例如 "Handbooks of Hydrocolloids"，Phillips和Williams編著，CRC，Boca Raton，F(xiàn)lorida， USA，2000，此處通過援引將該教科書內(nèi)容以其整體明確并入本文。
[0079] 所述藻酸鹽低聚物也可被化學改性，包括但不限于添加帶電基團（諸如羧基化或 羧甲基化的聚糖）的改性，以及改性藻酸鹽低聚物以改變其柔性（例如，通過高碘酸鹽氧 化)。
[0080] 適用于本發(fā)明的藻酸鹽低聚物(例如低聚古洛糖醛酸)可通過下述步驟方便地產(chǎn) 生：酸水解來自但不限于北方海帶（Laminaria hyperbora)和淡黑巨海藻（Lessonia nigrescens)的藻酸，在中性pH下溶解，加入無機酸使pH降低至3.4以沉淀所述藻酸鹽低聚 物(低聚古洛糖醛酸），用弱酸沖洗，在中性pH中重懸浮和冷凍干燥。
[0081] 用于產(chǎn)生本發(fā)明的藻酸鹽低聚物的藻酸鹽也可從適合的細菌來源(例如銅綠假單 胞菌或棕色固氮菌)直接獲得。
[0082] 在一級結(jié)構(gòu)要求大部分G殘基以G-嵌段排列而不是作為單個殘基的藻酸鹽低聚物 排列的實施方式中，海藻來源被視為是最適合的，因為事實上在這些生物體中產(chǎn)生的藻酸 鹽趨向于具有上述結(jié)構(gòu)。對獲得不同結(jié)構(gòu)的藻酸鹽低聚物，細菌來源可能更加適合。
[0083]涉及熒光假單胞菌和棕色固氮菌中藻酸鹽生物合成的分子器件已經(jīng)被克隆和表 征（WO 94/09124;Ertesviig，H·，等，Metabolic Engineering, 1999，Vol 1，262-269;W0 2004/011628 ;Gimmestad，Μ·等（同上）；Remminghorst和Rehm,Biotechnology Letters， 2006，V〇1 28，1701-1712;Gimmestad，M.等，Journal of Bacteriology，2006，Vol 188 (15) ,5551-5560)，且通過操作這些系統(tǒng)可容易獲得具有定制的一級結(jié)構(gòu)的藻酸鹽。
[0084] 可通過差向異構(gòu)化提高藻酸鹽(例如藻源材料）的G含量，例如用來自棕色固氮菌 的甘露糖醛酸C-5差向異構(gòu)酶或其它差向異構(gòu)酶來差向異構(gòu)化。因此，例如可使用來自假單 胞菌屬或固氮菌分離的差向異構(gòu)酶在體外進行差向異構(gòu)化，所述差向異構(gòu)酶例如來自熒光 假單胞菌或棕色固氮菌的AlgG或來自棕色固氮菌的AlgE酶(AlgEl至AlgE7)。也特別考慮使 用來自具有產(chǎn)生藻酸鹽能力的其它生物體、特別是藻類的差向異構(gòu)酶。以棕色固氮菌AlgE 差向異構(gòu)酶對低G藻酸鹽的體外差向異構(gòu)化詳細描述在Erteswig等（同上）和Strugala等 (Gums and Stabilisers for the Food Industry,2004,12,The Royal Society of Chemistry，84-94)中。
[0085] 為了獲得包含G-嵌段的藻酸鹽或藻酸鹽低聚物，優(yōu)選用除AlgE4之外的一種或多 種棕色固氮菌AlgE差向異構(gòu)酶作為可以產(chǎn)生G嵌段結(jié)構(gòu)的酶。另一方面，可以使用AlgE4差 向異構(gòu)酶產(chǎn)生具有Μ/G序列交替段的藻酸鹽或藻酸鹽低聚物，或一級結(jié)構(gòu)包含單個G殘基的 藻酸鹽或藻酸鹽低聚物，因為發(fā)現(xiàn)所述酶似乎優(yōu)選地差向異構(gòu)化單個M殘基以產(chǎn)生連接到M 殘基的單個G殘基而不是產(chǎn)生G嵌段。使用所述酶的不同組合可以獲得特殊的一級結(jié)構(gòu)。 [0086]還具體考慮使用這些酶的突變型或來自其它生物體的同源物。WO 94/09124描述 重組或修飾的甘露糖醛酸C-5差向異構(gòu)酶(AlgE酶），其例如由差向異構(gòu)酶序列編碼，所述差 向異構(gòu)酶序列中編碼差向異構(gòu)酶的不同結(jié)構(gòu)域或模塊的DNA序列被改組或缺失和重組。作 為另一種選擇，可以使用天然存在的差向異構(gòu)酶(AlgG或AlgE)的突變體，例如通過AlgG或 AlgE基因定點突變或隨機突變獲得的突變體。
[0087]另一種方法是產(chǎn)生某些或全部差向異構(gòu)酶基因發(fā)生突變的假單胞菌和固氮菌生 物體，從而使所述突變體產(chǎn)生用于后續(xù)藻酸鹽低聚物生產(chǎn)的所需結(jié)構(gòu)的藻酸鹽，或甚至所 需結(jié)構(gòu)和大小(或分子量)的藻酸鹽低聚物。具有突變AlgG基因的大量熒光假單胞菌生物體 的產(chǎn)生在WO 2004/011628和Gimmestad，M.等，2003(同上）中詳細描述。具有突變AlgE基因 的大量棕色固氮菌生物體的產(chǎn)生公開在Gimmestad，M.等，2006(同上）中。本領域技術人員 將無需過度勞動就能夠利用此教導產(chǎn)生新的突變體，所述突變體可用于產(chǎn)生本發(fā)明的藻酸 鹽低聚物。
[0088] 其他方法是使來自固氮菌或假單胞菌生物體的內(nèi)源性差向異構(gòu)酶基因缺失或失 活，然后引入一種或多種外源性差向異構(gòu)酶基因，所述外源性差向異構(gòu)酶基因可以具有或 不具有突變（即，可以是野生型或經(jīng)修飾)且其表達可受到控制，例如通過使用誘導型或其 它"可控啟動子"。通過選擇合適的基因組合，可產(chǎn)生預定一級結(jié)構(gòu)的藻酸鹽。
[0089] 另一種方法是將假單胞菌和/或固氮菌的某些或全部的藻酸鹽生物合成機構(gòu)引入 不產(chǎn)生藻酸鹽的生物體(例如E. Co I i)并且誘導所述基因修飾的生物體產(chǎn)生藻酸鹽。
[0090] 當使用這些基于培養(yǎng)物的系統(tǒng)時，藻酸鹽或藻酸鹽低聚物產(chǎn)物的一級結(jié)構(gòu)可受培 養(yǎng)條件影響。本領域技術人員完全有能力通過調(diào)整諸如溫度、滲透壓、營養(yǎng)水平/源和大氣 參數(shù)等培養(yǎng)參數(shù)來操控由特定生物體產(chǎn)生的藻酸鹽。
[0091 ]提到"G殘基/G"和"M殘基/M"或提到古洛糖醛酸或甘露糖醛酸，或古洛糖醛酸鹽或 甘露糖醛酸鹽，可互換地解讀為提到了古洛糖醛酸/古洛糖醛酸鹽和甘露糖醛酸/甘露糖醛 酸鹽(特別是α-L-古洛糖醛酸/古洛糖醛酸鹽和β-D-甘露糖醛酸/甘露糖醛酸鹽），并且還包 括它們的衍生物，所述衍生物中一個或多個可用的側(cè)鏈或基團被修飾，所述修飾不會導致 抑制或預防血液凝結(jié)的能力基本上低于未修飾的低聚物。常見的糖修飾基團包括乙酰基、 硫酸鹽基、氨基、脫氧基、醇、醛、酮、酯和酐基。除了硫酸鹽基之外，可使用所述基團中的任 意一個修飾根據(jù)本發(fā)明的藻酸鹽低聚物;根據(jù)本發(fā)明的藻酸鹽低聚物的特征是不攜帶硫酸 鹽基團。所述藻酸鹽低聚物也可進行化學修飾來添加帶電基團（如羧基化或羧甲基化聚 糖），及改變其柔性(例如，通過高碘酸氧化）。本領域技術人員知道可對低聚糖的單糖亞基 進行的其他化學修飾，且這些修飾可應用于本發(fā)明的藻酸鹽低聚物。
[0092] 本發(fā)明包括使用單個藻酸鹽低聚物或不同（多重/多個)藻酸鹽低聚物的混合物。 因此，例如可使用不同的藻酸鹽低聚物(例如，兩個以上）的組合。在這點上，如上所述，可選 擇共同提供抗凝血特性的有利特征的藻酸鹽低聚物的組合。其可以是不同低聚物尺寸、不 同G和M含量和/或不同單體排列的組合。
[0093] "血液凝集"是指從液體血液中形成纖維蛋白絲的不溶性基質(zhì)的自然過程。其包括 上述的組織因子通路和接觸通路。根據(jù)本發(fā)明，"血液凝集"外延至可在血漿（即，從全血中 移除血細胞后保留全部凝血因子而獲得的產(chǎn)物）中被觀察到的過程。同樣地，所述術語外延 為可在包含血液凝結(jié)因子的人工混合物中觀察到的過程，所述人工混合物包括足夠完整以 便能夠在誘導條件下形成纖維蛋白凝塊的凝血因子。
[0094] "血衆(zhòng)"是指全血的液體成分。該溶液含有大量的蛋白質(zhì)和其它大分子、電解質(zhì)和 糖。特別是，其包含參與凝血的全部凝血因子。
[0095]根據(jù)本發(fā)明，術語"包含血漿的組合物"不僅包括全血或已經(jīng)移除一種或多種血液 細胞類型（例如紅細胞或白細胞)的血，也包括化學組成與血漿基本等同的組合物和包括在 誘導條件下足以完成纖維蛋白凝塊形成的血液凝結(jié)因子的組合物(例如，包含因子χπ、χι、 父、以、￥111、￥、凝血酶原和纖維蛋白原和可選的因子乂111的組合物，或者包含因子￥11、111、 X、V、凝血酶原和纖維蛋白原和可選的因子XIII的組合物）。也可包含功能上等效的衍生物 和同系物。在某些實施方式中，所述組合物可以不是來源于全血，或者可以僅部分地來源于 全血。包含血漿的組合物可以是保留一些或全部血小板的血漿。
[0096] 因此術語"血液衍生產(chǎn)物"應當以類似的方式來解讀為是或者來源于血液，特別是 包括血液或血液產(chǎn)物的部分，特別是保留形成凝塊（即凝結(jié)）能力的部分或產(chǎn)物的任何產(chǎn) 物。因此血液衍生的產(chǎn)物可包括含有足以形成凝塊的凝血因子的任何產(chǎn)物，其包括血漿或 任何等效的產(chǎn)物或部分。
[0097] 所述組合物優(yōu)選為液體組合物。所述組合物優(yōu)選為無菌的組合物。所述血漿優(yōu)選 為人血漿或存在于包含人血漿的組合物中的凝血因子為人源的凝血因子，但是可以存在功 能上等效的非人源同系物。所述包含血漿的組合物優(yōu)選是全血或包含全血的組合物。在某 些實施方式中，全血可以包含或不包含對宿主生物體是異源的蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，所述全血是 新鮮收集的，例如在與藻酸鹽低聚物接觸前小于10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1分鐘內(nèi)收集。在 其它實施方式中，組合物是不完全凝集的，例如部分凝集或優(yōu)選為基本上未凝集。
[0098] 本文廣泛使用的"預防或抑制血液凝集"既包括絕對預防血液凝集，也包括對于血 液凝集發(fā)生的任何負面作用或包含血漿的組合物(例如受試者的循環(huán)血或循環(huán)系統(tǒng)）中預 先存在的凝塊或凝塊數(shù)量的任何負面作用。例如，其可以是延遲凝集過程開始，或減慢所述 過程的一個或多個步驟或整個過程。這也可以見于，血凝塊尺寸和/或密度的減少，或預先 存在的或生長中的凝塊尺寸和/或密度增加的速率的降低。還可以見于，預先存在的或生長 的凝塊的物理完整性降低，或任何類型的結(jié)構(gòu)破壞，不過在某些實施方式中，所述術語不包 括對已經(jīng)形成的或預先存在的凝塊的血栓溶解或溶栓作用。還可以見于，包含血漿的組合 物(例如受試者的循環(huán)血液或循環(huán)系統(tǒng)）中凝塊數(shù)量的減少，凝塊數(shù)量增長速率的降低。其 還可以被看作是凝塊對受試者健康或幸福造成損害的能力的下降。本文使用的"抗凝"應當 理解為與上文一致?？梢钥闯霰疚乃薅ǖ脑逅猁}低聚物的這些令人驚訝的效果可以因此 用于調(diào)節(jié)或控制的血液凝集。
[0099]凝集的任何延遲(例如凝集速率的降低)和/或凝集程度的下降可以作為根據(jù)本發(fā) 明的抗凝劑活性或效果的指示。因此，例如，抗凝劑的效果可以表示為：與沒有藻酸鹽低聚 物時的凝集相比，凝集減少至少10%、15%、20%、25%或30%。
[0100] 血液或包含血漿的組合物的凝集程度可以在簡單的體外測試(例如，如以下實施 例中所描述）中容易地確定。因此，血液樣品出現(xiàn)凝集所經(jīng)歷的時間可以用作抗凝劑效果的 量度，與對照（例如，沒有藻酸鹽低聚物時的凝集時間，例如未處理的對照，或陽性對照物 質(zhì))相比，在存在藻酸鹽低聚物時凝集時間的增加可作為抗凝劑效果的指示。
[0101] 作為另一種選擇，可以通過其它方法進行抗凝劑效果的測定，例如通過比較在存 在和不存在藻酸鹽低聚物時血凝塊形成的程度和/或速率，例如形成的凝塊尺寸和/或數(shù) 量，或者每單位時間內(nèi)形成的凝塊尺寸和/或數(shù)量。例如，這可在測試系統(tǒng)中進行，例如在存 在或不存在藻酸鹽低聚物時，測定與血液或者包含血漿的組合物接觸的人工表面或其上凝 塊形成的程度或速率。與不存在藻酸鹽低聚物時相比，存在藻酸鹽低聚物時凝塊形成的程 度和/或速率的降低可作為抗凝劑效果的指示。
[0102] 血凝塊的物理性質(zhì)可以通過任何方便的方法測量，例如超聲、血管造影術、CT、或 簡單的目視測量。在其它實施方式中，可以方便地使用血凝儀通過常規(guī)凝血測試(或血液凝 結(jié)測試)測量凝集，并因此測量對其的抑制或預防，例如凝血彈性描記法、凝血酶生成測試、 血栓動力學測試、局部促凝血酶原激酶時間（partial thromboplastin time，PTT)(或激活 的部分促凝血酶原激酶時間（activated partial thromboplastin timeaPTT或APTT))測 試或凝血酶原時間測試。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的方法將導致受試者血液凝集能力 或受試者血液凝集速率的臨床相關的降低。在另一個可選的實施方式中，實施例中描述的 過程可以用于測量凝血時間，在這種情況下，本發(fā)明的方法將導致受試者血液凝血時間的 臨床相關的增加。
[0103] 根據(jù)本發(fā)明，當在與血液凝集相關的醫(yī)學疾病或病況的治療中使用時，"治療"在 本文中廣泛用于包括任何治療效果，即對所述疾病或病況的任何有益作用。因此，其不僅包 括根除或消除所述疾病或病況，或治愈受試者的疾病或病況，也包括改善疾病或病況或受 試者的總體健康。因此，例如，包括疾病或病況任何病癥或跡象的改善，或疾病或病況任何 臨床公認的指標的改善(例如，降低循環(huán)血凝塊的數(shù)量或增加血栓形成的下游的氧合）。在 本發(fā)明要求保護的治療中，可以是預先存在的血凝塊得到不完全根除或新凝塊的形成不完 全停止，但所述治療足以抑制這些過程達到使靶標疾病或病況完全解決的程度，或至少一 定程度上得到解決，優(yōu)選為受試者可接受的程度。因此治療包括例如預先存在或診斷的疾 病或病癥的治愈和緩解性治療，即保守治療。
[0104] 根據(jù)本發(fā)明，當在與血液凝集相關的醫(yī)學疾病或病況的治療中使用時，"預防"在 本文中廣泛用于包括任何預防效果。因此，例如，相對于預防性治療之前所述疾病或病癥或 癥狀，它包括延緩、限制、減少或預防疾病或病癥或所述疾病或病癥的發(fā)作，或其一種或多 種癥狀或指征。因此，預防明確地包括絕對預防疾病或病癥或其癥狀或指征的發(fā)生或發(fā)展， 和延遲病癥或癥狀或指征的發(fā)作或發(fā)展，或減少或限制病癥或癥狀或指征的發(fā)展和進程。
[0105] 根據(jù)本發(fā)明，"抗凝治療"和"抗血栓(或抗血栓形成)治療"既包括預防性治療也包 括現(xiàn)有的或進行中的病癥的治療性治療，因此這些術語應該解釋為與前述一致。
[0106] 在本發(fā)明的方法中，更特別地是，包含血漿的組合物將與有效量的藻酸鹽低聚物 接觸，更特別的是，與提供血液凝集的可測量的抑制或預防的量的藻酸鹽低聚物接觸。藥學 上有效量的藻酸鹽低聚物為提供與血液凝集相關的疾病和病癥的可測量的治療或預防的 量的藻酸鹽低聚物?；诔Ｒ?guī)劑量響應策略及方便地基于評估上述血液凝集的常規(guī)技術， 本領域技術人員能夠輕易地確定藻酸鹽低聚物的有效/藥物有效量。本領域技術人員將能 在無過度負擔下優(yōu)化所述量并且能夠確保本發(fā)明的藻酸鹽低聚物的安全使用。
[0107] 在治療環(huán)境中，藻酸鹽低聚物合適的劑量將因受試者不同而變化，且可根據(jù)受試 者的重量、年齡和性別，病癥的嚴重程度，施用的模式和選擇的特定藻酸鹽低聚物(例如根 據(jù)其尺寸、G和M的含量和/或單體排布）由醫(yī)師或獸醫(yī)從業(yè)者決定。通常，本發(fā)明的藻酸鹽低 聚物將被施加到接受治療的位置，其局部濃度至少為0.05 %，優(yōu)選至少為0.1 %、0.2%、 0.5%、1%、2%、3%、4%或至少5%，更優(yōu)選為至少6%，最優(yōu)選為至少10% (重量/體積）。
[0108] 與血液凝集、更具體地是不需要的或不適當?shù)难耗嚓P的疾病和病癥包括但 不限于:靜脈血栓形成(例如深靜脈、門靜脈、腎靜脈、頸靜脈和腦靜脈竇血栓形成）、動脈血 栓形成(例如冠狀動脈、頸動脈和肝動脈血栓形成）、動脈粥樣硬化、靜脈移植物衰竭、動脈 移植物衰竭、卒中、心肌梗塞、肺栓塞、和血栓形成傾向（也稱為高凝集性或血栓前狀態(tài)）?？?使用本發(fā)明的藻酸鹽低聚物治療或預防任何和全部所述疾病和病癥。治療可涉及全身或局 部施用藻酸鹽低聚物。
[0109] 與血液凝集相關的另一主要臨床問題涉及由留置和可植入醫(yī)療、手術或假體裝置 誘導的血栓形成。血液和/或胞間液暴露于這些產(chǎn)品的人工（即非生物（例如，塑料、橡膠、 硅、金屬或玻璃））表面促進血栓形成。亦報道，組織移植可以引起所述血栓形成，并且如果 這些血栓形成引起栓塞，則在該移植組織部位或循環(huán)系統(tǒng)的遠端部分產(chǎn)生問題。
[0110] 因此，本發(fā)明的藻酸鹽低聚物可用于抑制或預防在所述裝置或移植組織上的血栓 形成。其可包括任何種類的管線(包含導管，例如中心靜脈和外周靜脈導管）、心臟瓣膜、血 管支架、人工關節(jié)、子宮內(nèi)裝置、起搏器、氣管造口術管、放射治療導線和軟組織植入物。這 些裝置包括在使用時可以部分留置的裝置。移植組織可包括心臟(例如心臟瓣膜）、肺、腎 臟、肝臟、胰腺、腸和角膜組織、動脈和靜脈移植物和皮膚。
[0111] 所述治療可包含給已經(jīng)或?qū)⒁踩肟芍踩胙b置或組織移植物的受試者局部或全 身性施用藻酸鹽低聚物。在其它實施方式中，所述可植入/留置裝置或組織移植物可在可與 血液接觸的表面上設置例如本發(fā)明的藻酸鹽低聚物的涂層(接受涂層處理)之后植入。所述 處理可以在植入之前或基本與植入同時應用于可植入的表面，例如通過用包含藻酸鹽低聚 物液體制劑噴涂可植入裝置或組織移植物的相關表面。在其它實施方式中，裝置的可植入 或留置表面可包含或攜帶(例如可以結(jié)合)或可浸漬或涂覆根據(jù)本發(fā)明的藻酸鹽低聚物。在 這些實施方式中，藻酸鹽低聚物可被涂覆到可植入/留置表面或作為表面涂層的部分。其可 以在可植入表面形成之前、期間或之后進行，且可以通過共價或非共價相互作用（例如離子 或靜電相互作用)進行固定。作為代表性實例，可在表面提供單體組成適合的藻酸鹽低聚物 作為陽離子引發(fā)的凝膠或其一部分。在其他實施方式中，所述藻酸鹽低聚物可被提供或包 括在血液相容性涂層中，該涂層包含一種或多種其他血液相容性的化合物，例如肝素、硫酸 乙酰肝素、透明質(zhì)酸、聚乙二醇或葡聚糖、或?qū)嶋H上具有抗凝血活性的任何其它生物活性 劑、或具有惰性血液相容性的化合物或試劑(例如血液相容性聚合物或塑料）。
[0112] 與血液凝集相關的另一主要臨床問題涉及在外科手術過程中引發(fā)的血栓形成。受 試者組織的切口可成為血栓形成位點，其又可導致栓塞并轉(zhuǎn)移到循環(huán)系統(tǒng)的另一部分，在 此處存留并引起上述的疾病和病癥。
[0113] 因此本發(fā)明的藻酸鹽低聚物在可以外科手術之前、期間和/或之后使用，以抑制或 預防在外科手術切口部位形成血栓。所述治療可包括對正在接受外科手術、將要接受外科 手術或從外科手術中恢復的受試者全身、或更方便地局部施用藻酸鹽低聚物。
[0114] 具體地，本發(fā)明的藻酸鹽低聚物可作為預防性治療，例如以預防、或至少最小化血 栓形成疾病(例如，上述的那些疾病)風險。一般說來，需要本發(fā)明治療或預防的受試者將被 診斷為患有或有風險具有與血液凝集相關的疾病或病癥(例如，上述的那些疾?。?。這些受 試者包括但不限于:將是或是長期不能移動的受試者，患有動脈纖維性纖顫的受試者，患有 動脈粥樣硬化斑塊的受試者，具有或接受可植入醫(yī)療、外科手術或假體裝置的受試者，正在 經(jīng)歷外科手術、將要經(jīng)歷外科手術或正在從外科手術恢復的受試者，具有先天性血栓形成 傾向的受試者（例如因子V Leiden、凝血酶原G2021OA、抗凝血酶III缺乏癥、蛋白C缺乏癥、 蛋白S缺乏癥、因子XIII突變、家族性血纖維蛋白原異常），具有獲取性血栓形成傾向的受試 者（例如具有抗磷脂綜合癥、肝素誘導的血小板減少癥（h e p a r i η - i n d u c e d thrombocytopenia，HIT)、睡眠性血紅蛋白尿癥（nocturnal hemoglobinuria，PNH)、血液不 暢相關血液病癥(例如鐮狀細胞病、真性紅細胞增多癥和原發(fā)性血小板增多癥(過量的血小 板））、癌癥(特別是轉(zhuǎn)移性腫瘤）、腎病綜合癥、炎癥性腸病(潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏?。?、 肥胖和妊娠的受試者。
[0115] 受試者可以是人或非人脊椎動物受試者，但更特別地可以是脊椎動物，例如選自 哺乳動物、鳥類、兩棲動物、魚類和爬行動物的脊椎動物。非人脊椎動物可以是家畜或家養(yǎng) 動物或具有商業(yè)價值的動物，其包括實驗室動物或動物園或游戲公園中的動物。因此，代表 性的動物包括狗、貓、兔、小鼠、豚鼠、倉鼠、馬、豬、綿羊、山羊、牛、雞、火雞、珍珠雞、鴨、鵝、 鸚鵡、虎皮鸚鵡、鴿子、鮭魚、鱒魚、鱈魚、黑線鱈、海鱸魚和鯉魚。因此本發(fā)明覆蓋獸醫(yī)應用。 受試者可以被視為患者。所述受試者優(yōu)選是人。
[0116] 在某些實施方式中，受試者不具有如細菌、真菌、原生動物、藻類或寄生蟲感染等 顯示病理指標的感染。更特別地是，在某些實施方式中的受試者不具有生物膜感染。在其它 實施方式中的受試者不具有高粘粘液或是需要降低粘液粘性。
[0117] 在本發(fā)明的一個實施方式中的藻酸鹽低聚物可結(jié)合或組合其他抗血凝劑（以下稱 "其他抗凝劑"）在本發(fā)明的方法或應用中使用。
[0118] 在治療性應用的環(huán)境下，這種抗微生物劑可以是任何臨床上有用的抗凝劑，例如 維生素 K拮抗劑(如華法林、苊香豆醇、苯丙香豆素、裂盒蕈色素和苯茚二酮）、肝素、低分子 量肝素、Xa因子的合成戊糖抑制劑(例如磺達肝癸鈉和艾卓肝素）、Xa因子的直接抑制劑(例 如利伐沙班和阿哌沙班）、直接的凝血酶抑制劑(例如水蛭素、來匹盧定、比伐盧定、阿加曲 班、達比加群、希美加群、抗凝血酶蛋白、巴曲酶和裂纖酶）。
[0119] 在本發(fā)明其他實施方式中的藻酸鹽低聚物可與溶栓劑結(jié)合或組合在本發(fā)明的方 法或應用中使用。溶栓劑消化或分解預先存在的血凝塊且包括組織纖溶酶原激活劑（t-PA)、阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、復合纖溶酶鏈激酶，鏈激酶和尿激酶。
[0120] 在本發(fā)明的其他實施方式中的藻酸鹽低聚物可與抗血小板劑結(jié)合或組合在本發(fā) 明的方法或應用中使用?？寡“鍎┮种蒲“寰奂ú豢赡娴沫h(huán)氧合酶抑制劑(例 如阿司匹林）、腺苷二磷酸(ADP)受體抑制劑(如氯吡格雷、普拉格雷、替卡格雷、噻氯匹啶）、 磷酸二酯酶抑制劑(例如西洛他唑）、糖蛋白ΠΒ/ΙΙΙΑ抑制劑(例如阿昔單抗、依替巴肽、替 羅非班）、腺苷重攝取抑制劑（例如雙嘧達莫）、血栓素抑制劑（例如特魯托班 (terutroban))〇
[0121] 可用于本發(fā)明的藻酸鹽低聚物和其他抗凝劑、溶栓劑或抗血小板劑可以例如在單 個藥物制劑或組合物中一起施用、或分開施用（即分開、連續(xù)或同時施用）。因此，本發(fā)明的 藻酸鹽低聚物和其他抗凝劑、溶栓劑或抗血小板劑可以組合，例如組合在藥物試劑盒中或 作為組合的（"組合"）產(chǎn)品。
[0122] 因此本發(fā)明也提供產(chǎn)品（例如藥物試劑盒或組合的（"組合"）產(chǎn)品）或組合物(例如 藥物組合物），其中，所述產(chǎn)品或組合物包含如本文所限定的藻酸鹽低聚物和其他抗凝劑、 溶栓劑和/或抗血小板劑。這樣的藥物產(chǎn)品和藥物組合物優(yōu)選適用于本發(fā)明的醫(yī)療方法。
[0123] 還包括本文所限定的藻酸鹽低聚物在制造用于本發(fā)明醫(yī)療方法的所述藥物產(chǎn)品 和藥物組合物中的應用。
[0124] 本發(fā)明的藻酸鹽低聚物可以以任何方便的形式或通過任何方便的手段給受試者 施用，例如通過局部、口服、胃腸外、腸內(nèi)、胃腸外途徑或通過吸入。所述藻酸鹽優(yōu)選將通過 局部、口服或腸胃外途徑或通過吸入施用。該藻酸鹽低聚物可以通過許多不同的途徑施用， 這比現(xiàn)有的抗凝劑更有優(yōu)勢。
[0125] 本領域技術人員將能夠?qū)⒈景l(fā)明的藻酸鹽低聚物配制為適于根據(jù)任何本領域已 知的和在文獻中廣泛描述的常規(guī)方法施用途徑的藥物組合物。
[0126] 因此，本發(fā)明也提供一種用于任何一種上述方法或應用的藥物組合物，其包括如 本文限定的藻酸鹽低聚物以及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。該組合物 也可以包含如上文所述的其它治療劑。
[0127] 更具體地，本發(fā)明的藻酸鹽低聚物可任選與其它活性劑、與一種或多種常規(guī)載體、 稀釋劑和/或賦形劑結(jié)合在一起，以產(chǎn)生常見的醫(yī)藥制劑諸如片劑、丸劑、粉末劑(例如可吸 入粉末）、錠劑、藥囊、扁囊劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液、糖漿、氣溶膠(在固體或在液體介質(zhì) 中）、噴霧劑(例如，鼻噴霧劑)等，用于噴霧器的組合物、軟膏劑、軟和硬明膠膠囊、栓劑、陰 道栓劑、無菌可注射溶液、無菌包裝的粉末劑等。無菌吸入和無菌注射組合物是特別值得注 意的。
[0128] 合適的載體、賦形劑和稀釋劑的實例為乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、 淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、惰性藻酸鹽聚合物、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡 咯烷酮、纖維素、水糖漿、水、水/乙醇、水/乙二醇、水/聚乙烯、高滲鹽水、乙二醇、丙二醇、甲 基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂、礦物油或脂肪物質(zhì)（如硬脂 肪)或其適合的混合物。值得注意的賦形劑和稀釋劑為甘露醇和高滲鹽水溶液(鹽水）。
[0129] 本發(fā)明的組合物還可包括潤滑劑、濕潤劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、甜味劑、和調(diào) 味劑等。在如上述與組合治療相關的藥物組合物中可以包括另外的治療活性劑。
[0130] 例如靜脈注射溶液等非腸道給藥的形式應該是無菌的且不含生理上不可接受的 試劑，并且應具有較低的摩爾滲透壓濃度以在施用時減少刺激或其它不良影響，因此溶液 應當優(yōu)選為等滲或稍微高滲的，例如高滲鹽水溶液(鹽水）。合適的載劑包括通常用于注射 非腸道溶液的水性載劑，例如無菌注射用水、氯化鈉注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡 萄糖和氯化鈉注射液、乳酸林格注射液和諸如Remington's Pharmaceutical Sciences(第 15版，Easton:Mack Publishing Co.，第 1405頁-第 1412頁和第 1461 頁-第 1487頁（1975))和 The National Formulary XIV(第14版，華盛頓:美國藥學協(xié)會（1975))等描述的其它溶液。 所述溶液可以含有通常用于非腸道溶液的防腐劑、抗微生物劑、緩沖劑和抗氧化劑、賦形劑 和其它添加劑與生物聚合物相容并且不會妨礙產(chǎn)品的制造、儲存或使用。
[0131] 對于局部給藥，所述藻酸鹽低聚物可以結(jié)合到乳膏、軟膏、凝膠、透皮貼劑等中。藻 酸鹽低聚物的簡單無菌溶液或包含藻酸鹽低聚物的簡單無菌液體組合物可以是在外科手 術過程中和用于處理可植入裝置時特別方便使用。所述藻酸鹽低聚物也可以結(jié)合到醫(yī)用敷 料中，例如傷□敷料(如紡織(例如織物)敷料或非紡織敷料(例如凝膠或具有凝膠成分的敷 料））。藻酸鹽聚合物在敷料中的使用是已知的，并且這種敷料(或?qū)嶋H上任何敷料)可以進 一步包括本發(fā)明的藻酸鹽低聚物。
[0132] 合適的其他局部系統(tǒng)是原位藥物遞送系統(tǒng)，例如凝膠，其中固體、半固體、無定形 或液晶凝膠基質(zhì)原位形成并且其可包含藻酸鹽低聚物(其可以是如本文所限定的任何藻酸 鹽低聚物）。這種基質(zhì)可方便地被設計成控制藻酸鹽低聚物從基質(zhì)中釋放，例如，可以延遲 釋放和/或在選擇的時間段內(nèi)持續(xù)釋放。這樣的系統(tǒng)可僅在與生物組織或流體接觸時形成 凝膠。通常所述凝膠是生物粘附的。可保持或適于保持預凝膠組合物的到任何身體部位的 遞送可通過這樣的遞送技術來實現(xiàn)。這樣的系統(tǒng)描述在W02005/023176中。
[0133] 本發(fā)明組合物中藻酸鹽低聚物的相對含量可根據(jù)所需的劑量和后續(xù)的劑量方案 而變化，且其將取決于被治療的受試者和血栓或可能的形成位點的位置和屬性。優(yōu)選地，所 述組合物將包含一定量的的藻酸鹽低聚物，該量可提供對血液凝集的可測量的抑制或預 防，和/或?qū)ρ耗嚓P的祀標疾病或病癥的可測量的、優(yōu)選臨床相關的預防或治療。
[0134] 所述組合物或產(chǎn)物將優(yōu)選包含足夠的藻酸鹽低聚物，在施用于受試者或應用到局 部位置時，低聚物在靶標位置處的局部濃度為至少〇 . 05 %，優(yōu)選為至少0.1 %、0.2 %、 0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%或8%，最優(yōu)選為至少10%(重量/體積）。本領域技術 人員會知曉，如果后續(xù)有多重給藥方案，則可減少藻酸鹽的量，或為了最小化施用或應用次 數(shù)而增加藻酸鹽的量。
[0135] 本發(fā)明的組合物或產(chǎn)物通常會包含1 %至99%、5%至95%、10%至90%或25%至 75%的藻酸鹽低聚物，余量為其它的組分。
[0136] 本發(fā)明的方法還可以在體外和離體環(huán)境中應用。血液和包括血漿的血液衍生產(chǎn)物 通常用于多種醫(yī)療程序。例如血液和血漿輸注在外科手術和創(chuàng)傷治療過程中是很普遍的。 更通常的是從供體中收集所述產(chǎn)物，而不是從給患者的施用中物理和臨時去除所述產(chǎn)物。 因此，這些產(chǎn)物必須在它們的使用壽命的某一階段進行體外處理。來源于血液的血液產(chǎn)物 顯然必須通過經(jīng)歷一定數(shù)量的體外處理。
[0137] 此外，通常從患者提取血液，以對其進行體外診斷和預后測試。
[0138] 在這些區(qū)域內(nèi)必須不發(fā)生血液/血液產(chǎn)物的凝集，并且標準做法是在血液收集時 或其后不久加入諸如EDTA、檸檬酸和草酸等抗凝劑以確保凝集延遲。如果所述血液經(jīng)歷任 何種類的處理，將維持抗凝劑的存在以便確保不在以后的時間發(fā)生凝集。
[0139] 因此，本發(fā)明的藻酸鹽低聚物可用于在體外組合物中抑制或預防凝集，所述組合 物包含血漿、優(yōu)選全血。藻酸鹽低聚物的低毒性使其在本發(fā)明的情況中特別有利，因為這種 處理過的組合物可施用于患者而沒有導致毒性的抗凝劑。優(yōu)選地，藻酸鹽低聚物與包含血 漿的組合物(例如，全血)基本上在收集時接觸，例如在收集的10、9、8、7、6、5、4、3、2或1分鐘 內(nèi)，優(yōu)選在收集的同時接觸。在其它實施方式中，藻酸鹽低聚物在儲存期間與包含血漿的組 合物(例如，全血)接觸。該接觸可在組合物的使用期限中多次發(fā)生。
[0140] 因此，可將藻酸鹽低聚物添加到所述包含血漿的組合物中。作為另外一種選擇或 作為補充，藻酸鹽低聚物可以被添加到或提供至將要引入組合物的容器中，或?qū)⒁娣爬?如血液收集管、儲存袋等的容器中。實際上，對于可接觸包含血漿的組合物的任何材料(例 如容器或?qū)Ч?線）或表面或裝置）（例如，測試設備以及收集或存儲設備，醫(yī)療或外科裝置 或設備，可植入醫(yī)療裝置等），均可提供有藻酸鹽低聚物。因此，將要或可能與包括血漿的組 合物接觸的任何材料可接觸根據(jù)本發(fā)明的應用和方法如本文限定的藻酸鹽低聚物。
[0141] 代表性的產(chǎn)物和裝置包括診斷和研究測試產(chǎn)物和例如包含傳感器的裝置，和用于 測試血液或血液成分的其它裝置，及產(chǎn)品，包括其所使用的耗材，例如測試條或棒、板、小瓶 或容器等。
[0142] 在所述組合物是全血或已經(jīng)來源于全血并在適當?shù)臅r候施用于患者的實施方式 中，所述組合物可以被認為是離體的。換句話說，如上所述的本發(fā)明方法在某些實施方式中 不在人或動物體內(nèi)或不對人或動物體實施或執(zhí)行(例如，其中，使用藻酸鹽低聚物的步驟不 會在人或動物身體內(nèi)發(fā)生或不對人或動物身體進行）。在本發(fā)明的環(huán)境中，任何不在人或動 物身體內(nèi)發(fā)生或不對人或動物身體進行的任何方法(例如通過治療或手術)可視為體外方 法，其可包括離體方法。然而，根據(jù)上文可明確的是，可以想到所述體外/離體方法仍然可以 通過臨床應用執(zhí)行。
[0143] 闡釋體外/離體方法的一個特殊實例為血液透析。血液透析過程中經(jīng)常使用抗凝 劑以確保在透析機內(nèi)不會形成有問題的血栓，并將透析血液轉(zhuǎn)移給患者。給患者施用抗凝 劑相當于體內(nèi)治療。另一方面，當血液位于患者體外及在透析設備和導管內(nèi)時，向血液施用 抗凝劑相當于離體/體外處理。
[0144] 與透析類似的是，如本文限定的藻酸鹽低聚物也作為本發(fā)明的抗凝劑任用于何方 法或涉及血漿置換的方法，所述方法中從身體中移除血液，移除或處理血漿或一種或多種 血漿成分，并將血細胞和/或血漿返回到體內(nèi)。更為通常地，本發(fā)明藻酸鹽低聚物的應用可 適用于任何體外血液處理方法。
[0145] 鑒于通常迫切需要在無菌條件下體外保存血液和血液產(chǎn)品，常規(guī)的是提供在其中 已經(jīng)存在有效量的抗凝劑的無菌收集容器和導管。所述藻酸鹽低聚物可通過與根據(jù)本發(fā)明 的相同方式使用。
[0146] 因此本發(fā)明提供包含如本文限定的藻酸鹽低聚物的無菌血液收集容器和導管。所 述藻酸鹽低聚物可以任何方便的形式提供，例如游離的(例如，作為溶液的一部分或作為固 體，例如凍干固體等)或固定的形式(例如作為容器和導管內(nèi)表面上的預處理劑(如涂層））。 血液收集容器包括但不限于輸血袋、試管或小瓶(優(yōu)選真空)和注射器。
[0147] 本發(fā)明還提供透析或血漿置換的耗材、設備和機器，包括一次性導管接受器和過 濾器，其包含本文所限定的藻酸鹽低聚物或表面經(jīng)本文所限定的藻酸鹽低聚物預處理，例 如涂覆。
[0148] "預處理"的意思是指在接觸包含血漿的組合物前，所述表面接觸藻酸鹽低聚物， 從而使所述藻酸鹽低聚物在表面上存留一段足夠長的時間以預防或抑制在處理過的表面 處或表面上的血液凝集。優(yōu)選地，藻酸鹽低聚物將存留基本上為表面的使用壽命的時間，例 如，所述預處理導致藻酸鹽低聚物的基本上永久的涂層。然而，永久的抗凝效果不是必需 的，可能有用的是提供抗凝作用持續(xù)時間更有限（例如，幾天、幾周或幾個月）的產(chǎn)物或裝 置。因此，預處理的表面/產(chǎn)品是其上施用并保持了藻酸鹽低聚物的表面/產(chǎn)品。這種產(chǎn)品/ 表面可以是經(jīng)涂覆和/或浸漬的產(chǎn)品/表面。在某些實施方式中，涂層將包括多個（即，至少 兩個)層的藻酸鹽低聚物。在其它實施方式中，藻酸鹽低聚物可提供為單個層，并且在另外 的其它實施方式中，藻酸鹽低聚物可以末端連接，使得所述藻酸鹽低聚物更自由地與含血 漿的組合物接觸。
[0149] 預處理可以通過任何方便的方式獲得，例如任何將藻酸鹽低聚物施加到所述表面 的形式，值得注意的是涂覆所述表面，例如用包含藻酸鹽低聚物的聚合物進行噴霧干燥、涂 覆聚合物。作為另一種方式，所述藻酸鹽低聚物可以結(jié)合或浸漬到材料中，利用所述材料可 制造物體或其敏感部件。這種方法適合于由諸如塑料和聚硅氧烷等聚合物制造的物體或組 成部分。因此包括的血液收集和儲存產(chǎn)品以及透析/血漿置換的產(chǎn)品具有:包含藻酸鹽低聚 物涂層或涂層組合物的，或結(jié)合或浸漬藻酸鹽低聚物的無生命表面。
[0150] 因此，本發(fā)明的體外/離體方法可包括制備促進血液凝集的能力降低的產(chǎn)物或設 備。術語"促進血液凝集的能力降低"可以與上文給出的"預防或抑制血液凝集"定義進行類 似解釋。如前所述，人工表面傾向于引起凝集，大多數(shù)合成塑料、聚合物和金屬表面引起血 栓形成。藻酸鹽低聚物可以根據(jù)本發(fā)明使用以減少所述傾向或能力。更特別地，所述藻酸鹽 低聚物在與包含血漿組合物(例如血液或血液衍生產(chǎn)物)接觸放置(包括當產(chǎn)品或裝置原位 放置在人或非人動物體內(nèi)）時降低由所述產(chǎn)物或裝置引起的凝集(或凝塊的形成)的程度。
[0151] 由醫(yī)療裝置引起的凝集代表了嚴重的問題，并且如上所述凝集速度和/或程度的 任何降低是有益的（即使其很小）（例如，至少5%或10%的降低）。
[0152] 人工表面可以是任何無生命的表面，特別是用于與包含血漿的組合物接觸的裝置 的產(chǎn)品表面。在一個特定的實施方式中，其為醫(yī)療裝置的表面或其中的表面。它可以是任何 合成的表面，例如聚合物、塑料、橡膠、硅樹脂、金屬或玻璃等。
[0153] 促進凝集的能力降低的產(chǎn)品或裝置的制備可以包括以下步驟:在所述產(chǎn)品或裝置 表面或其上、特別是在人工表面或其上提供藻酸鹽低聚物。如上所述，藻酸鹽低聚物可以結(jié) 合或浸漬到制造或形成表面的材料中，或可施加至表面，最值得注意的是通過涂覆。
[0154] 所述藻酸鹽低聚物可以以自身施涂(例如涂覆），或與一種或多種其它材料或組分 組合施涂(例如涂覆）。因此所述藻酸鹽低聚物可以被直接連接或固定到表面(通過共價或 非共價連接，例如吸附）或者它可以結(jié)合到或包含在(例如包埋在，或連接到)被施涂(例如， 涂覆)到產(chǎn)品或裝置上的材料中，其材料本身可以是共價或非共價連接的。因此，例如，所述 藻酸鹽低聚物可以被包埋在施加到表面的聚合物或涂層中，或者其可以共價連接到用于制 備聚合物涂層的基質(zhì)聚合物。所述聚合物涂層可被設計成提供藻酸鹽低聚物的延遲釋放， 例如通過將其結(jié)合(例如包埋)在不同的聚合物層中。該延遲釋放可以在不同的時間周期發(fā) 生，例如從幾天到幾個月。
[0155] 醫(yī)療裝置等的許多不同涂覆技術是已知的，例如來自SurModics的技術，并且可以 使用的任何這樣的技術。事實上，如上所述，已知可提供具有血液相容性涂層的醫(yī)療裝置和 產(chǎn)品以盡量減少凝集。本文限定的"血液相容性"表示所討論的表面/材料/產(chǎn)品/設備/涂層 或化合物等在與血液或包含血衆(zhòng)的組合物接觸放置時不引起任何負面反應，或任何這樣的 負面反應被降低或抑制(例如最小化）。負面反應可以是凝集、血小板激活等，特別是可以導 致或增加凝集的任何反應。
[0156] 血液相容性材料或涂層可以是"主動的"，即它可以包含抑制或預防凝集的生物活 性劑，例如通過抑制凝血酶生成(例如肝素），或者它可以是"被動的"，其可以提供抗凝劑或 血液相容性效果(通過例如將表面與血液屏蔽），或降低其引起凝集的能力（例如通過減少 血液中的蛋白質(zhì)在表面上的吸附），和/或降低血小板活化。被動涂層可以被視為"偽裝"或 "掩蓋"表面，使其不在血液中被識別為外來物。多種不同的主動的和被動的血液相容性涂 層是本領域已知的。藻酸鹽低聚物可以與這些涂層結(jié)合使用，并可以用來賦予主動和/或被 動效果。
[0157] 因此，可以將藻酸鹽低聚物提供作為血液相容性涂層的一部分或者包括在血液相 容性涂層中，并且可與上述的一種或多種血液相容性化合物組合使用，所述血液相容性化 合物包括具有抗凝劑作用的生物活性劑(例如肝素、透明質(zhì)酸、右旋糖酐等）以及具有被動 的血液相容性效果的聚合物和/或塑料。
[0158]血液相容性化合物的其他實例為可釋放一氧化氮(NO)的分子，已知其預防血小板 活化。NO-釋放性聚合物已被開發(fā)出來。
[0159]本發(fā)明將參照以下非限制性實施例進一步描述。 實施例
[0160] 實施例1 .G-嵌段藻酸鹽低聚物對人全血凝集時間的影響
[0161] 材料和方法
[0162] 測試材料和對照
[0163] 測試的藻酸鹽低聚物為OligoG CF-5/20,其為G-嵌段藻酸鹽低聚物(DP為5至20， 平均分子量2600，G殘基90 %-95% ) AligoG由AlgiPharma AS(挪威）提供。陽性對照為 Fuller's Earth，篩孔尺寸8-16(Sigma-Aldrich A/S)。
[0164] Olig0G 制劑
[0165] OligoG的稱重樣品以少量緩慢灑入電磁攪拌的無菌蒸餾水中（Fresenius Kabi AG，德國）。當樣品全部添加后再繼續(xù)攪拌50分鐘，并添加額外的無菌水以得到適當?shù)淖罱K 總體積。所述制劑迅速阻塞Sartorius MiniSart過濾器(0.2μηι孔徑），所以將其在室溫放置 過夜，然后再進行一小時的電磁攪拌。仍然無法過濾所述制劑，因此其在測試中不進行過濾 而使用。
[0166] 所述OligoG制劑的終濃度為200mg/ml，其以干物質(zhì)含量(在提供的OligoG樣品中 為 95.2%)計。
[0167] 凝集測試過程
[0168] 200mg/ml的等分試樣(53μ1和Ι??μL)的OligoG制劑放置在單獨的試管中。Fuller' s Earth(約IOOmg/管)放置在陽性對照管中。還準備了空管作為陰性(未處理)對照。
[0169] 通過對4名健康成年人進行靜脈穿刺獲得新鮮的血液樣品。使用Liquidraw管(普 通塑料)從每個供體中收集血液樣品。當收集了各血液樣品后，將收集幾秒鐘內(nèi)的等分試樣 (Iml)加入到各管中以覆蓋測試物和對照物。01 igoG制劑與血液以5%和10% (v/v)混合，因 此在混合物中OligoG的最終濃度為10mg/ml和20mg/ml (以OligoG干物質(zhì)含量計）。用來自每 個供體的血液對一個包含各濃度OligoG的管和一個具有各對照的管進行測試。所述管立即 放置在大約37°C的水浴中，并搖動直到發(fā)生凝集。對非凝集樣品連續(xù)進行約20-30分鐘的溫 和搖動，然后每約5-10分鐘溫和搖動，然后不那么頻繁地溫和搖動。記錄每個管中血液等份 的收集和完全凝集之間耗費的時間。
[0170] 結(jié)果
[0171 ] 表1:4種不同人血液樣品在存在10mg/ml或20mg/ml OligoG時的凝集時間
[0173] 表1注釋：
[0174] %對照 平均凝集時間占平均陰性對照時間的百分比
[0175] S.D. 標準差
[0176] 陰性對照未處理
[0177] 陽性對照用Fuller's Earth處理
[0178] OligoG 用OligoG CF-5/20處理
[0179] a 保持未凝集的混合物
[0180] b 在所述兩個觀察點之間的某個時間凝集的混合物
[0181] 用Fuller's Earth進行的陽性對照引起平均凝集時間大幅減少至平均陰性對照 值的38%，證明了所述測試的有效性和敏感性。
[0182] 4個未處理的血液樣品的平均凝集時間為546秒。用10mg/ml的OligoG處理使來自 一個供體的血液的凝集時間增加超過9.31倍。在3986和6671秒的觀察之間發(fā)生凝集。包含 I Omg/ml測試物的其它3個供體的混合物和包含20mg/ml測試物的全部4個供體的混合物在 制備后超過5個小時(>18000秒)保持未凝集，沒有再進行所述混合物的進一步觀察。
[0183] 結(jié)論
[0184] 由此得出結(jié)論為，OligoG CF-5/20、且一般性地外延至藻酸鹽低聚物能夠顯著抑 制(如果不是預防的話)人全血的凝集。這表明，可提出藻酸鹽低聚物在體外(例如在處理血 液和血液產(chǎn)物中）和體內(nèi)（例如在抗凝劑治療中）作為抗凝劑的應用。
[0185] 實施例2.M-嵌段和MG-嵌段藻酸鹽低聚物對人全血凝集時間的影響
[0186] 材料和方法
[0187] 測試材料和對照
[0188] 測試的藻酸鹽低聚物為M-嵌段藻酸鹽低聚物(DPnIO，100 %M殘基)和MG-嵌段藻酸 鹽低聚物(DPn15,基本上完全是交替的M和G殘基序列）。藻酸鹽低聚物由AlgiPharma AS(挪 威)提供。陽性對照為FulIer' s Earth，篩孔尺寸8-16(Sigma-Aldrich A/S)。參照物為肝素 (LEO 5000IE/ml,LE0 Pharma A/S)〇
[0189] 測試材料和對照的制劑
[0190] 每個低聚物稱重樣品（200mg的M-嵌段DPnIO和200 .Img的MG-嵌段DPn15)以少量緩 慢灑入電磁攪拌的無菌蒸餾水中（880μ1，F(xiàn)resenius Kabi AG，德國）。當每個測試物全部添 加后繼續(xù)再攪拌92分鐘-95分鐘，直至每個測試物溶解。每個測試物制劑的終濃度為200mg/ ml(以供應的測試物樣品計），假設測試物的溶脹為0.6ml/g。隨后所述測試物制劑保存在室 溫中，直至在第二天的凝集測試中使用。
[0191] 在進行凝集測試的當天在無菌蒸餾水中（Fresenius Kabi AG，德國）制備參照物 的稀釋液，使得肝素終濃度為200IU/ml、20IU/ml和2IU/ml。
[0192] 凝集測試過程
[0193] 200mg/ml的等分試樣(53μ1和Ι??μL)的每個藻酸鹽低聚物制劑放置在單獨的試管 中。200IU/ml、20IU/ml和2IU/ml的等分試樣（53μ1)的參照物制劑放置在單獨的試管中。 Ful Ier ' s Earth(約IOOmg/管)放置在陽性對照管中。還準備空管作為陰性(未處理)對照。
[0194] 通過對4名健康成年人進行靜脈穿刺獲得新鮮的血液樣品。使用Liquidraw管(普 通塑料)從每個供體中收集血液樣品。當收集了各血液樣品后，將收集幾秒鐘內(nèi)的等分試樣 (Iml)加入到各管中以覆蓋測試藻酸鹽低聚物、參照物和對照。藻酸鹽低聚物制劑與血液以 5%和10%(>八)混合，因此在混合物中每種藻酸鹽低聚物的最終濃度為1〇11^/1]11和2〇11^/1]11 (以接受的藻酸鹽低聚物樣品計）。參照物的每個稀釋樣與血液以5% v/v混合，因此在混合 物中參照物(肝素）的最終濃度為l〇IU/ml、llU/ml和O. llU/ml。用來自每個供體的血液對一 個包含各濃度的各測試低聚物的管、一個包含各濃度的參照物的管和一個具有各對照的管 進行測試。所述管立即放置在大約37°C的水浴中，定期搖動直到發(fā)生凝集。記錄每個管中收 集血液等分試樣到完全凝集之間耗費的時間。棄去在開始處理后超過6個或7個小時仍然保 持未凝集的樣品，并且不進行進一步觀察。
[0195] 結(jié)果
[0196] 表2-4種不同人血液樣品在存在10mg/ml或20mg/ml M-嵌段藻酸鹽低聚物(DPnIO) 和16-嵌段藻酸鹽低聚物(0?"15)、1011]/1111、111]/1111和0.111]/1111肝素和?11116,8 6&竹11時的 凝集時間"
[0198] 表2注釋：
[0199] %對照 平均凝集時間占平均陰性對照時間的百分比
[0200] S.D. 標準差
[0201] a 排除未凝集樣品的所有平均值+S.D.
[0202] b 保持未凝集的混合物
[0203] 陰性對照未處理
[0204] 陽性對照用Fuller's Earth處理
[0205] 測驗物A M-嵌段藻酸鹽低聚物DPnIO
[0206] 測驗物B MG-嵌段藻酸鹽低聚物DPn15
[0207] 用Fuller's Earth處理陽性對照引起平均凝集時間大幅減少至平均陰性對照值 的27%，證明了所述測試的有效性和靈敏性。
[0208]用M-嵌段藻酸鹽低聚物(DPnIO)處理在測試的濃度和來自4個受試者的血液樣品 中均延遲了凝集。在l〇mg/ml時，顯示平均凝集時間增加至平均陰性對照值的229%。在 20mg/ml時，顯示3個供體的平均凝集時間增加至平均陰性對照值的611 %，而來自第4個供 體的血液樣品在開始處理后超過6個小時仍然保持未凝集。
[0209]用MG-嵌段藻酸鹽低聚物(DPn15)處理在測試的濃度和全部4個受體的血液樣品中 均延遲了凝集。其效果大于M-嵌段藻酸鹽低聚物:在lOmg/ml時，MG嵌段藻酸鹽低聚物增加 平均凝集時間至平均陰性對照值的703%。在20mg/ml時，來自全部4個供體的血液樣品在開 始處理后超過6個或7個小時仍然保持未凝集。其效果小于G-嵌段藻酸鹽低聚物，其中在 10mg/ml或20mg/ml的G-嵌段藻酸鹽低聚物處理時，除了一個供體外的全部血液在5小時后 保持未凝集。
[0210]參照物肝素在全部3個測試的濃度和所有4個受體的血液樣品中延遲了凝集。在 0.1IU/ml時，平均凝集時間增加至平均陰性對照值的170%。在I IU/ml和10IU/ml時，來自全 部4個供體的血液樣品在開始處理后超過6個或7個小時仍然保持未凝集。因此，M-嵌段和 MG-嵌段藻酸鹽低聚物在10mg/ml時對凝集時間的效果與肝素在0.1IU/ml和llU/ml之間時 的效果相等。
[0211] 結(jié)論
[0212] 由此得出的結(jié)論為，M-嵌段藻酸鹽低聚物和MG-嵌段藻酸鹽低聚物均可以引起全 部4個供體的血液的凝集時間的顯著增加。M-嵌段藻酸鹽低聚物和MG-嵌段藻酸鹽低聚物在 10mg/ml時的效果與肝素在0.1IU/ml和llU/ml之間時的效果相等。
[0213] MG-嵌段藻酸鹽低聚物的效果大于M-嵌段藻酸鹽低聚物的效果，但是小于實施例1 中的G-嵌段藻酸鹽低聚物。因此，不同的糖醛酸單體序列和/或不同的低聚物長度可具有不 同程度的抗凝劑效果，因此適當?shù)脑逅猁}低聚物選擇可在特定情況下獲得特定程度的抗 凝。例如，可選擇更大量的G個殘基和/或更長的G嵌段長度，以得到更有效的抗凝效果。
【主權(quán)項】
1. 一種用于預防或抑制血液凝集的體外或離體方法，所述方法包括:使包含血漿的組 合物、或與所述組合物接觸或可接觸的材料接觸具有2至75個單體殘基的藻酸鹽低聚物，其 中，所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。2. 如權(quán)利要求1所述的體外或離體方法，其中，所述包含血漿的組合物是全血。3. 如權(quán)利要求1或2所述的體外或離體方法，其中，所述包含血漿的組合物是無菌的。4. 如權(quán)利要求1-3中任一項所述的體外或離體方法，其中，所述材料是使用時與血液或 血液衍生產(chǎn)物接觸的產(chǎn)品或裝置或者是該產(chǎn)品或裝置的一部分。5. 如權(quán)利要求1-4中任一項所述的體外或離體方法，其中，所述方法用于制備具有降低 的促進血液凝集能力的產(chǎn)品或裝置，所述方法包括在所述產(chǎn)品或裝置的表面處或表面上提 供所述藻酸鹽低聚物。6. 如權(quán)利要求1-5中任一項所述的體外或離體方法，其中，所述藻酸鹽低聚物結(jié)合或浸 漬到所述材料中，或施涂到與所述組合物接觸的材料的表面。7. 如權(quán)利要求1-6中任一項所述的體外或離體方法，其中，所述藻酸鹽低聚物涂覆到所 述材料的表面上，或者作為表面涂層的一部分提供。8. 如權(quán)利要求7所述的體外或離體方法，其中，所述藻酸鹽低聚物被設置或包含在含有 一種或多種其他血液相容性化合物的血液相容性涂層中，優(yōu)選其中所述其他血液相容性化 合物選自肝素、硫酸乙酰肝素、透明質(zhì)酸、聚乙二醇或葡聚糖。9. 如權(quán)利要求1-8中任一項所述的體外或離體方法，其中，所述材料選自： (i)無菌血液收集容器或?qū)Ч埽? (i i)透析或血漿置換耗材、或者透析或血漿置換設備或儀器的部件， (i i i)可植入的醫(yī)療、外科手術或假體裝置， (iv)移植組織，或 (V)診斷產(chǎn)品或裝置，或其一部分。10. -種用作治療性血液抗凝劑的藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物包含2至75 個單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。11. 如權(quán)利要求10所述的藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物用于治療或預防血栓 形成或者與血液凝集相關的疾病或病癥的方法。12. 如權(quán)利要求11所述的藻酸鹽低聚物，其中，所述疾病或病癥是靜脈血栓形成、動脈 血栓形成、動脈粥樣硬化、靜脈移植物衰竭、動脈移植物衰竭、卒中、心肌梗塞、肺栓塞或血 栓形成傾向。13. 如權(quán)利要求10-12中任一項所述的藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物施用于 選自下列受試者的受試者 (i) 即將長期無法移動或是長期無法移動， (ii) 患有心房纖顫， (i i i)具有動脈粥樣硬化斑塊， (iv)攜帶或正接受可植入醫(yī)療、外科手術或假體裝置， (V)正在經(jīng)歷外科手術、將要經(jīng)歷外科手術或正在從外科手術恢復， (vi)具有先天性或獲得性血栓形成傾向。14. 如權(quán)利要求10-13中任一項所述的藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物用于抑 制或預防在材料的表面上形成血栓的方法，所述材料選自：可植入或留置的醫(yī)療、外科手術 或假體裝置;移植組織;透析或血漿置換耗材或者透析或血漿置換設備或儀器的部件。15. 如權(quán)利要求9所述的體外或離體方法或如權(quán)利要求14所述的藻酸鹽低聚物，其中， (i) 所述可植入的醫(yī)療、外科手術或假體裝置為導管、心臟瓣膜、血管支架、人工關節(jié)、 子宮內(nèi)裝置、起搏器、氣管造口管、放射治療線或軟組織植入物， (ii) 所述移植組織為心臟、優(yōu)選心臟瓣膜、肺、腎臟、肝臟、胰腺、腸或角膜組織、動脈或 靜脈移植物、或皮膚，及 (iii) 所述透析或血漿置換耗材、或者透析或血漿置換設備或儀器的部件為透析或血 漿置換導管、容器或濾器。16. 如權(quán)利要求9或15所述的體外或離體方法或者如權(quán)利要求14或15所述的藻酸鹽低 聚物，其中，所述材料在可與包含血漿的組合物接觸的表面處或表面上包含或攜帶藻酸鹽 低聚物，可選其中所述表面還包含或攜帶一種或多種其他血液相容性化合物，優(yōu)選其中所 述其他血液相容性化合物選自肝素、硫酸乙酰肝素、透明質(zhì)酸、聚乙二醇或葡聚糖。17. 如權(quán)利要求10或11所述的藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物在外科手術程序 之前、期間和/或之后使用，以抑制或預防在外科手術切口部位的血栓形成。18. -種無菌血液收集容器或?qū)Ч?，其中，所述容器或?qū)Ч茉诳膳c血液接觸的表面處或 表面上包含或攜帶藻酸鹽低聚物，其中，所述藻酸鹽低聚物包含2至75個單體殘基，且所述 單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。19. 如權(quán)利要求18所述的無菌血液收集容器或?qū)Ч埽渲?，所述容器或?qū)Ч苁禽斞?血液收集管或小瓶、或注射器。20. -種透析或血漿置換耗材、或者透析或血漿置換設備或儀器的部件，其中，所述耗 材、設備或儀器的部件在可與血液接觸的表面處或表面上包含或攜帶藻酸鹽低聚物，其中， 所述藻酸鹽低聚物包含2至75個單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。21. 如權(quán)利要求20所述的透析或血漿置換耗材、或者透析或血漿置換設備或儀器的部 件，其中，所述耗材、設備或儀器為透析或血漿置換的導管、容器或者濾器。22. 如權(quán)利要求18-21中任一項所述的無菌血液收集容器或?qū)Ч?、或透析或血漿置換耗 材、或者透析或血漿置換設備或儀器的部件，其中，所述表面包含或攜帶其他血液相容性化 合物，所述其他血液相容性化合物優(yōu)選選自肝素、硫酸乙酰肝素、透明質(zhì)酸、聚乙二醇或葡 聚糖。23. 藻酸鹽低聚物作為離體或體外抗凝劑的應用，其中，所述藻酸鹽低聚物包含2至75 個單體殘基，且所述單體殘基不攜帶硫酸鹽基團。24. 如權(quán)利要求23所述的應用，其中，所述藻酸鹽低聚物設置在使用時與血液或血液衍 生產(chǎn)物接觸的裝置或產(chǎn)品的表面處或表面上。25. 如權(quán)利要求1-25中任一項所述的方法、藻酸鹽低聚物、無菌血液收集容器或?qū)Ч堋?透析或血漿置換耗材、或透析或血漿置換設備或儀器的部件、或應用，其中，所述藻酸鹽低 聚物的數(shù)均聚合度為2至50、2至35、2至30、2至25或2至20。26. 如權(quán)利要求1-25中任一項所述的方法、藻酸鹽低聚物、無菌血液收集容器或?qū)Ч堋?透析或血漿置換耗材、或透析或血漿置換設備或儀器的部件、或應用，其中，所述藻酸鹽低 聚物是 2_mer 至 35-mer、2_mer 至 3〇-mer、3-mer 至 35-mer、3_mer 至 28-mer、4_mer 至 25-mer、 5_mer至20-mer、6_mer至22-mer、8_mer至20-mer、I〇-mer至15_mer ο27. 如權(quán)利要求1-26中任一項所述的方法、藻酸鹽低聚物、無菌血液收集容器或?qū)Ч堋?透析或血漿置換耗材、或透析或血漿置換設備或儀器的部件、或應用，其中，所述藻酸鹽低 聚物具有至少70 %的G，至少80%、至少85 %或至少90 %的G殘基，優(yōu)選為至少95 %的G殘基。28. 如權(quán)利要求27所述的方法、藻酸鹽低聚物、無菌血液收集容器或?qū)Ч堋⑼肝龌蜓獫{ 置換耗材、或透析或血漿置換設備或儀器的部件、或應用，其中，所述G殘基中的至少80%排 列在G-嵌段內(nèi)。29. 如權(quán)利要求1-26中任一項所述的方法、藻酸鹽低聚物、無菌血液收集容器或?qū)Ч堋?透析或血漿置換耗材、或透析或血漿置換設備或儀器的部件、或應用，其中，所述藻酸鹽低 聚物具有至少70 %的M殘基，至少80%、至少85%、至少90 %或至少95 %的M殘基，優(yōu)選為 100 %的M殘基。30. 如權(quán)利要求29所述的方法、藻酸鹽低聚物、無菌血液收集容器或?qū)Ч?、透析或血漿 置換耗材、或透析或血漿置換設備或儀器的部件、或應用，其中，所述M殘基中的至少80%排 列在M-嵌段內(nèi)。31. 如權(quán)利要求1-26中任一項所述的方法、藻酸鹽低聚物、無菌血液收集容器或?qū)Ч堋?透析或血漿置換耗材、或透析或血漿置換設備或儀器的部件、或應用，其中，所述低聚物的G 和M殘基中的至少70 %、至少80%、至少85 %、至少90%、至少95 %、至少99%或100%排列在 MG嵌段內(nèi)。
【文檔編號】A61M1/02GK105960243SQ201480074815
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2014年12月19日
【發(fā)明人】A·戴森, P·賴伊
【申請人】阿爾吉法瑪公司