一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法
【專利摘要】一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，通過手術(shù)放置材料堵塞其房水流出通道，造成眼壓升高視神經(jīng)損害的青光眼動(dòng)物模型，使升高的眼壓維持穩(wěn)定，更加易于獲得和操作，得到的模型眼壓升高穩(wěn)定、波動(dòng)小，高眼壓持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，目標(biāo)眼壓可控等優(yōu)點(diǎn)。通過這種方法制作出的慢性高眼壓動(dòng)物模型，其眼壓可根據(jù)堵塞Schlemm的范圍不同進(jìn)行調(diào)控。并且可以根據(jù)不同動(dòng)物種類Schlemm管徑而選擇不同規(guī)格尺寸的纖維導(dǎo)管，完成Schlemm管堵塞，從而產(chǎn)生多種動(dòng)物類型的慢性高眼壓模型。在慢性高眼壓青光眼機(jī)制研究中更好地構(gòu)建與臨床相契合的造模動(dòng)物及造模方法，為進(jìn)行慢性青光眼視神經(jīng)損傷機(jī)制提供基礎(chǔ)。
【專利說明】
一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)用動(dòng)物模型領(lǐng)域，具體涉及一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002]青光眼是一種不可逆性視神經(jīng)退行性病變，為全球第二位致盲眼病。其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制目前尚不十分明確，雖然高眼壓并不是青光眼視損害的唯一因素，但高眼壓卻是青光眼視神經(jīng)損害發(fā)生和發(fā)展機(jī)理中最危險(xiǎn)的因素之一。在青光眼研究領(lǐng)域，動(dòng)物模型已成為重要的研究工具。青光眼動(dòng)物模型對(duì)于更好的理解青光眼性視神經(jīng)病變的損傷機(jī)制及治療措施有著重要的作用。高眼壓是青光眼視神經(jīng)損害最主要的危險(xiǎn)因素，所以大多數(shù)青光眼研究的動(dòng)物模型仍然是誘導(dǎo)動(dòng)物高眼壓，進(jìn)而對(duì)青光眼的生理、病理、藥理等方面進(jìn)行研究。理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型要求:其構(gòu)建方法簡(jiǎn)單，成本低廉，易于飼養(yǎng)和控制，升高的眼壓維持穩(wěn)定，發(fā)生視網(wǎng)膜視神經(jīng)特征性的病理改變。
[0003]目前用于制作青光眼模型的動(dòng)物為低等哺乳動(dòng)物，主要有兔、鼠、猴。雖然鼠易于用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造和繁殖，且鼠眼的構(gòu)造在很多方面和人眼類似，如小梁、Schlemm管、睫狀體、視網(wǎng)膜血管等，但是鼠眼相對(duì)較小，不利于進(jìn)行手術(shù)操作。激光誘導(dǎo)的猴的高眼壓模型是目前公認(rèn)的最理想的高眼壓動(dòng)物模型，但因造價(jià)昂貴，操作較復(fù)雜，國(guó)內(nèi)應(yīng)用不多。雖然兔眼與人眼的房角結(jié)構(gòu)有形態(tài)學(xué)差異，但房水外流通道相同，都有連續(xù)的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)襯。并且家兔價(jià)格價(jià)廉、性格溫順、易于獲得和操作，因此兔是最常用于制作青光眼模型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
[0004]根據(jù)高眼壓形成機(jī)制及藥物作用部位分為作用于前房角(及小梁)型，如前房注射透明質(zhì)酸、甲基纖維素、血細(xì)胞、復(fù)方卡波姆液，后房注射伍.糜蛋白酶，激光光凝小梁網(wǎng)，眼睛外用皮質(zhì)醇激素等方法;作用于鞏膜房水回流靜脈型如常用的鞏膜表面靜脈注射高滲鹽水法(Morre-Morr i son模型)、燒灼鞏膜表層的房水引流靜脈法(Shareef-Sharma模型)及改良方法;此外，亦有一些特殊種系的自發(fā)性小鼠及轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建青光眼模型，如DBA/2J和AKXD-28/Ty的純系小鼠，利用基因打靶技術(shù)構(gòu)建的自然青光眼模型等。同時(shí)分別對(duì)各種模型在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)、視神經(jīng)、視網(wǎng)膜功能方面的病理性改變進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)估各種模型的利與弊，在慢性高眼壓青光眼機(jī)制研究中更好地構(gòu)建與臨床相契合的造模動(dòng)物及造模方法提供依據(jù)，更加深入的研究慢性高眼壓青光眼的機(jī)制，為其治療提供新的思維。
[0005]雖然制作高眼壓動(dòng)物模型的方法有很多，但是目前的青光眼動(dòng)物模型大多數(shù)都是急性高眼壓模型，眼壓雖然升高，但是其高眼壓維持時(shí)間短，并且波動(dòng)大，難以模擬出青光眼的特征性視神經(jīng)損害。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供了一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法。
[0007]本發(fā)明采用的技術(shù)解決方案是:一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，包括以下步驟:(I)將模型動(dòng)物綁縛仰臥于手術(shù)臺(tái)，術(shù)眼消毒鋪巾，置開瞼器，沖洗結(jié)膜囊，術(shù)眼結(jié)膜下局部潤(rùn)麻醉后，做上直肌牽引縫線固定；
(2)按鐘表表盤方向計(jì)，于11點(diǎn)位至I點(diǎn)位邊緣環(huán)球結(jié)膜切開，以12點(diǎn)位為中心處作以角膜緣為基底的大小4*4mm的1/3鞏膜厚度的淺層鞏膜瓣，在淺層鞏膜瓣下方再做一個(gè)大小3*3mm，厚度2/3鞏膜厚度的深層鞏膜瓣，并向角膜方向剝離，找到Schlemm管并切開Schlemm管外壁；
(3)向Schlemm管兩端內(nèi)注入高分子透明質(zhì)酸，將纖維導(dǎo)管導(dǎo)管通過開口，于9或3點(diǎn)鐘方位角膜緣內(nèi)1.0 mm處，平虹膜方向行前房穿刺，輕壓穿刺口后緣，放出水降低眼壓，前房減壓穿刺后將纖維導(dǎo)管插入Schlemm管的斷端，順著Schlemm管繞行360度或270度或180度或90度，剪斷導(dǎo)管，將其置于Schlemm中堵塞Schlemm管，阻止房水外流，縫合鞏膜瓣，，前房穿刺口注入平衡鹽溶液，縫合結(jié)膜瓣，給予抗炎藥物，最終建立眼壓升高的動(dòng)物模型。
[0008]所述的步驟(I)中采用稀釋碘伏溶液沖洗結(jié)膜囊。
[0009]所述的步驟(I)中采用0.4ml2%的利多卡因進(jìn)行術(shù)眼結(jié)膜下局部潤(rùn)麻醉。
[00? O ] 所述的步驟(I)中采用30G針頭向Schl emm管兩端內(nèi)注入高分子透明質(zhì)酸。
[0011]所述的步驟(3)中纖維導(dǎo)管包括一個(gè)圓柱形的實(shí)心的導(dǎo)管，所述的導(dǎo)管一端為球形結(jié)構(gòu)。
[0012]所述的纖維導(dǎo)管長(zhǎng)10cm，直徑200μπι，所述的導(dǎo)管一端的球形直徑為250μπι。
[0013]所述的纖維導(dǎo)管采用聚丙烯材料制成。
[0014]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供了一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，通過手術(shù)放置材料堵塞其房水流出通道，造成眼壓升高視神經(jīng)損害的慢性青光眼動(dòng)物模型，通過這種方法制作出的慢性高眼壓動(dòng)物模型，其眼壓可根據(jù)堵塞Schlemm的范圍不同進(jìn)行調(diào)控。并且可以根據(jù)不同動(dòng)物種類Schlemm管徑而選擇不同規(guī)格尺寸的纖維導(dǎo)管，完成Schlemm管堵塞，從而產(chǎn)生多種動(dòng)物類型的慢性高眼壓模型。在慢性高眼壓青光眼機(jī)制研究中更好地構(gòu)建與臨床相契合的造模動(dòng)物及造模方法，為進(jìn)行慢性青光眼視神經(jīng)損傷機(jī)制提供基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0015]圖1為本發(fā)明纖維導(dǎo)管結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]現(xiàn)結(jié)合圖1對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明:操作步驟:手術(shù)需要一根由聚丙烯材料制作而成的長(zhǎng)1cm直徑200μπι實(shí)心纖維導(dǎo)管，導(dǎo)管頭端直徑為250μπι局部膨大的球形，防止插管時(shí)損傷Schlemm管壁組織。
[0017]將模型動(dòng)物四肢綁縛仰臥于手術(shù)臺(tái)，術(shù)眼常規(guī)消毒鋪巾，置開瞼器，稀釋碘伏溶液沖洗結(jié)膜囊，取0.4ml 2%利多卡因于術(shù)眼結(jié)膜下局部潤(rùn)麻醉后，做上直肌牽引縫線固定，按鐘表表盤方向計(jì)，于11點(diǎn)位至I點(diǎn)位邊緣環(huán)球結(jié)膜切開，以12點(diǎn)位為中心處作以角膜緣為基底的大小約4 * 4 mm的I / 3鞏膜厚度的淺層鞏膜瓣，在淺層鞏膜瓣下方再做一個(gè)大小約3 *3mm，厚度約2/3鞏膜厚度的深層鞏膜瓣。并向角膜方向剝離，找到Schl emm管并切開Schl emm管外壁，用30G針頭向Sch I emm管兩端內(nèi)注入高分子透明質(zhì)酸(Healon GV)，使導(dǎo)管能夠容易通過開口。于9或3點(diǎn)鐘方位角膜緣內(nèi)1.0 mm處，平虹膜方向行前房穿刺，輕壓穿刺口后緣，放出適量房水降低眼壓，前房減壓穿刺后將微導(dǎo)管插入Schlemm管的斷端，根據(jù)所需靶眼壓的不同，分別順著Schlemm管繞行360度或270度或180度或90度，剪斷導(dǎo)管，將其置于Schlemm中堵塞Schlemm管，阻止房水外流，造成其眼壓升高的模型。最后用10-0聚丙稀線緊密縫合鞏膜瓣4-6針，前房穿刺口注入平衡鹽溶液觀察，以不滲漏視為水密縫合，再用10-0聚丙烯線縫合結(jié)膜瓣2針。術(shù)后給予抗炎藥物，監(jiān)測(cè)眼壓，前節(jié)反應(yīng)情況。
[0018]本發(fā)明通過手術(shù)放置材料堵塞其房水流出通道，造成眼壓升高視神經(jīng)損害的青光眼動(dòng)物模型，通過這種方法制作出的慢性高眼壓動(dòng)物模型，其眼壓可根據(jù)堵塞Schlemm的范圍不同進(jìn)行調(diào)控。并且可以根據(jù)不同動(dòng)物種類Schlemm管徑而選擇不同規(guī)格尺寸的纖維導(dǎo)管，完成Schlemm管堵塞，從而產(chǎn)生多種動(dòng)物類型的慢性高眼壓模型。。兔眼、猴眼的動(dòng)物模型使用的纖維導(dǎo)管規(guī)格可采用長(zhǎng)1cm直徑200μπι，導(dǎo)管頭端球形直徑為250μπι，其他動(dòng)物可選擇與其Schlemm管徑相匹配的導(dǎo)管規(guī)格。在慢性高眼壓青光眼機(jī)制研究中更好地構(gòu)建與臨床相契合的造模動(dòng)物及造模方法，為進(jìn)行慢性青光眼視神經(jīng)損傷機(jī)制提供基礎(chǔ)。
[0019]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅局限于上述實(shí)施例，凡屬于本發(fā)明思路下的技術(shù)方案均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理前提下的若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)將模型動(dòng)物綁縛仰臥，術(shù)眼消毒鋪巾，置開瞼器，沖洗結(jié)膜囊，術(shù)眼結(jié)膜下局部潤(rùn)麻醉后，做上直肌牽引縫線固定； (2)按鐘表表盤方向計(jì)，于11點(diǎn)位至I點(diǎn)位邊緣環(huán)球結(jié)膜切開，以12點(diǎn)位為中心處作以角膜緣為基底的大小4*4mm的1/3鞏膜厚度的淺層鞏膜瓣，在淺層鞏膜瓣下方再做一個(gè)大小3*3mm，厚度2/3鞏膜厚度的深層鞏膜瓣，并向角膜方向剝離，找到Schlemm管并切開Schlemm管外壁； (3)向Schlemm管兩端內(nèi)注入高分子透明質(zhì)酸，將纖維導(dǎo)管導(dǎo)管通過開口，于9或3點(diǎn)鐘方位角膜緣內(nèi)1.0 mm處，平虹膜方向行前房穿刺，輕壓穿刺口后緣，放出水降低眼壓，前房減壓穿刺后將纖維導(dǎo)管插入Schlemm管的斷端，順著Schlemm管繞行360度或270度或180度或90度，剪斷導(dǎo)管，將其置于Schlemm中堵塞Schlemm管，阻止房水外流，縫合鞏膜瓣，，前房穿刺口注入平衡鹽溶液，縫合結(jié)膜瓣，給予抗炎藥物，最終建立眼壓升高的動(dòng)物模型。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，所述的步驟(I)中采用稀釋碘伏溶液沖洗結(jié)膜囊。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，所述的步驟(I)中采用0.4ml 2%的利多卡因進(jìn)行術(shù)眼結(jié)膜下局部潤(rùn)麻醉。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，所述的步驟(I)中采用30G針頭向Schlemm管兩端內(nèi)注入高分子透明質(zhì)酸。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，所述的步驟(3)中纖維導(dǎo)管包括一個(gè)圓柱形的實(shí)心的導(dǎo)管，所述的導(dǎo)管一端為球形結(jié)構(gòu)。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，所述的纖維導(dǎo)管長(zhǎng)10cm，直徑200μπι，所述的導(dǎo)管一端的球形直徑為250μπι。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種慢性高眼壓動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，所述的纖維導(dǎo)管采用聚丙烯材料制成。
【文檔編號(hào)】A61D1/00GK105943186SQ201610249471
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年4月21日
【發(fā)明人】梁遠(yuǎn)波, 胡城, 廖娜, 徐晶
【申請(qǐng)人】溫州眼視光發(fā)展有限公司