治療肝癌的中藥制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療肝癌的中藥制劑，該制劑由以下重量份數(shù)的原料藥制成，瑞香狼毒60?80份，車前子5?10份，白茅根5?10份，冬凌草5?10份，黨參3?6份，甘草2?4份。通過對(duì)有毒中藥與解毒中藥合理配伍，以及兩次長(zhǎng)時(shí)間煮沸水提取與乙醇沉淀相結(jié)合的制備方法，減輕了藥物的毒性，提高了對(duì)腫瘤的治療效果。制劑對(duì)肝癌細(xì)胞具有殺傷作用，能夠抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)肝癌荷瘤動(dòng)物的生存時(shí)間。
【專利說明】
治療肝癌的中藥制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及中藥制劑，特別是一種治療肝癌的中藥制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝癌是諸多腫瘤中惡性程度最高的腫瘤之一，臨床上對(duì)早期肝癌多采用手術(shù)治 療，但術(shù)后復(fù)發(fā)率較高。對(duì)于晚期肝癌則在治療上采取介入或消融術(shù)治療為多。目前可用于 治療肝癌的藥物很少，而且治療效果較差，到目前為止還沒有一種對(duì)肝癌有特效的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種治療肝癌的中藥制劑，該制劑對(duì)肝癌細(xì)胞具 有殺傷作用，能夠抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)肝癌荷瘤動(dòng)物的生存時(shí)間。
[0004] 為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是： 一種治療肝癌的中藥制劑，所述制劑由以下重量份數(shù)的原料藥制成，瑞香狼毒60-80 份，車前子5-10份，白茅根5-10份，冬凌草5-10份，黨參3-6份，甘草2-4份。
[0005] 優(yōu)選地，所述的制劑由以下重量份數(shù)的原料藥制成，瑞香狼毒70份，車前子8份，白 茅根7份，冬凌草6份，黨參5份，甘草3份。
[0006] 本發(fā)明依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)以毒攻毒的理念，選用有毒中藥瑞香科植物瑞香狼毒 (Stellera chamaejasme L.)的根為主藥，配以具有清熱解毒，利尿通淋、涼血止血的中藥 車前子、白茅根，促進(jìn)毒性物質(zhì)通過尿液排出體外，以降低主藥瑞香狼毒的毒性作用。同時(shí) 在方中加入健脾益肺，養(yǎng)血生津的黨參和具有清熱解毒、活血止痛作用的冬凌草，以增強(qiáng)機(jī) 體的抵抗力，減輕毒性物質(zhì)對(duì)機(jī)體的傷害。方中還加入了具有清熱解毒、補(bǔ)脾益氣、緩解藥 物毒性的傳統(tǒng)中藥甘草，以緩解主藥狼毒的毒性和烈性，使藥物的作用更平和。
[0007] 此外，本發(fā)明還提供以上中藥制劑的制備方法。包括步驟，（1)按比例在所有原料 藥加原料藥總質(zhì)量6-8倍質(zhì)量的水加熱煮沸提取100-150分鐘，收集提取液;（2)殘?jiān)性偌?入原料藥總質(zhì)量5-6倍水，繼續(xù)加熱煮沸提取100-150分鐘，收集提取液；（3)合并兩次提取 液，濃縮至與原料藥總質(zhì)量相同的量；（4)濃縮液中加乙醇形成藥液；（5)靜置后過濾，濾液 濃縮干燥；（6)研磨干燥物成粉末，然后制成醫(yī)學(xué)上可接受的制劑。
[0008] 優(yōu)選地，步驟(1)和步驟(2)中水是去離子水。
[0009] 優(yōu)選地，步驟(1)和步驟(2)中加熱煮沸提取時(shí)間為120分鐘。
[0010]優(yōu)選地，步驟(1)加熱煮沸提取前，先浸泡30分鐘。
[0011] 優(yōu)選地，步驟(3)，在90°C水浴濃縮。
[0012]優(yōu)選地，步驟(4)中，乙醇的含量達(dá)到藥液質(zhì)量的60%。
[0013]優(yōu)選地，步驟(5)中，濾液在90°C水浴蒸干。
[0014] 優(yōu)選地，所述的醫(yī)學(xué)上可接收的制劑是片劑、膠囊劑或藥粉末加入滅菌注射用水， 60-80 °C水浴溶解后高溫滅菌制成的藥液。
[0015] 在制備過程中采用兩次長(zhǎng)時(shí)間的煮沸，使藥物的毒性得到有效的降解，同時(shí)采用 了乙醇沉淀的方法將大部分雜質(zhì)去掉，進(jìn)一步降低了藥物的毒性，使得其有效成分得以濃 縮保留。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)過處理后的藥物毒性得到了極大的降低，實(shí)驗(yàn)研究過程中沒有觀察 到因藥物毒性導(dǎo)致的動(dòng)物死亡，用藥的安全性得到了保障。
[0016] 服用方法:本藥物采用口服給藥，對(duì)腫瘤細(xì)胞有顯著的抑制作用。服用劑量按照體 重算，即0.033g/kg-0.067g/kg體重。連續(xù)服用1-2周后，停用1-2周，然后再按此方法服用。
[0017] 肝癌被稱為癌中之王，惡性程度高，病情進(jìn)展快，目前尚沒有有效的治療藥物，是 腫瘤臨床治療的一個(gè)難題。本發(fā)明所用的瑞香狼毒為瑞香科植物瑞香狼毒的干燥根，該藥 在民間主要作為殺蟲劑，用于除四害。雖然有過對(duì)其提取物抗腫瘤研究的報(bào)導(dǎo)，但因其毒性 較大，均未進(jìn)入實(shí)際臨床應(yīng)用。本發(fā)明根據(jù)中醫(yī)以毒攻毒的理論，以瑞香狼毒為主藥，加入 清熱解毒，利水通淋，補(bǔ)脾益氣，養(yǎng)血生津，緩解藥物毒性的多味中藥，組成復(fù)方中藥制劑， 在制備工藝方面采用高溫長(zhǎng)時(shí)間提取加乙醇沉淀的方法，去除了其毒性及無用的雜質(zhì)，只 應(yīng)用其中最為精華的有效部分，取得了對(duì)肝癌動(dòng)物模型的較好的療效。低劑量組動(dòng)物的平 均生存時(shí)間較模型組長(zhǎng)，生命延長(zhǎng)率達(dá)到了 34.98%，且統(tǒng)計(jì)學(xué)表明有顯著性差異，表明藥物 對(duì)腫瘤細(xì)胞起到了顯著的抑制作用，這在肝癌的治療上是一個(gè)有價(jià)值的進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 實(shí)施例1 瑞香狼毒60克，車前子5克，白茅根5克，冬凌草5克，黨參3克，甘草2克。根莖類藥材切成 l-2mm厚的薄片。
[0019] 稱取以上原料藥置于容器中，加入8倍質(zhì)量的水，浸泡30分鐘后，加熱煮沸提取 100分鐘，收集提取液;殘?jiān)性偌尤?倍水，繼續(xù)加熱煮沸提取150分鐘，收集提取液;合并 兩次收集的提取液于蒸發(fā)皿中，攪拌均勻，90°C水浴濃縮至與原料藥總質(zhì)量相同的量;在濃 縮液中加入95%乙醇形成藥液，乙醇的含量達(dá)到藥液質(zhì)量的60%，置于三角瓶中，攪拌均勻，4 °C靜置48小時(shí);過濾藥液，將濾液收集于蒸發(fā)皿中，90 °C水浴濃縮干燥;收集干燥物，用研缽 充分研磨成粉末，制成片劑。
[0020] 實(shí)施例2 瑞香狼毒80克，車前子10克，白茅根10克，冬凌草10克，黨參6克，甘草4克。根莖類藥材 切成l-2mm厚的薄片。
[0021] 稱取以上原料藥置于容器中，加入6倍質(zhì)量的水，浸泡30分鐘后，加熱煮沸提取 150分鐘，收集提取液;殘?jiān)性偌尤?倍水，繼續(xù)加熱煮沸提取100分鐘，收集提取液;合并 兩次收集的提取液于蒸發(fā)皿中，攪拌均勻，90°C水浴濃縮至與原料藥總質(zhì)量相同的量;在濃 縮液中加入95%乙醇形成藥液，乙醇的含量達(dá)到藥液質(zhì)量的60%，置于三角瓶中，攪拌均勻，4 °C靜置48小時(shí);過濾藥液，將濾液收集于蒸發(fā)皿中，90 °C水浴濃縮干燥;收集干燥物，用研缽 充分研磨成粉末，制成膠囊劑。
[0022] 實(shí)施例3 瑞香狼毒70克，車前子8克，白茅根7克，冬凌草6克，黨參5克，甘草3克。根莖類藥材切成 l-2mm厚的薄片。稱取以上原料藥置于容器中，加入7倍質(zhì)量的水，浸泡30分鐘后，加熱煮沸 提取120分鐘，收集提取液;殘?jiān)性偌尤?倍水，繼續(xù)加熱煮沸提取120分鐘，收集提取液； 合并兩次收集的提取液于蒸發(fā)皿中，攪拌均勻，90°C水浴濃縮至與原料藥總質(zhì)量相同的量； 在濃縮液中加入95%乙醇形成藥液，乙醇的含量達(dá)到藥液質(zhì)量的60%，置于三角瓶中，攪拌均 勻，4 °C靜置48小時(shí);過濾藥液，將濾液收集于蒸發(fā)皿中，90 °C水浴濃縮干燥;收集干燥物，用 研缽充分研磨成粉末，制成片劑。
[0023] 實(shí)施例4 瑞香狼毒60克，車前子10克，白茅根10克，冬凌草10克，黨參6克，甘草4克。根莖類藥材 切成l-2mm厚的薄片。
[0024] 稱取以上原料藥置于容器中，加入6倍質(zhì)量的水，浸泡30分鐘后，加熱煮沸提取 120分鐘，收集提取液； 殘?jiān)性偌尤?倍水，繼續(xù)加熱煮沸提取120分鐘，收集提取液； 合并兩次收集的提取液于蒸發(fā)皿中，攪拌均勻，90°C水浴濃縮至與原料藥總質(zhì)量相同 的量； 在濃縮液中加入95%乙醇形成藥液，乙醇的含量達(dá)到藥液質(zhì)量的60%，置于三角瓶中，攪 拌均勻，4°C靜置48小時(shí)； 過濾藥液，將濾液收集于蒸發(fā)皿中，90°C水浴濃縮干燥； 收集干燥物，用研缽充分研磨成粉末，加入滅菌注射用水，配制成與原料藥材總質(zhì)量相 同的藥液，60 °C水浴溶解，高壓滅菌，備用。
[0025] 實(shí)施例5 瑞香狼毒80克，車前子5克，白茅根5克，冬凌草5克，黨參3克，甘草2克。根莖類藥材切成 l-2mm厚的薄片。
[0026] 稱取以上原料藥置于容器中，加入8倍質(zhì)量的水，浸泡30分鐘后，加熱煮沸提取 120分鐘，收集提取液； 殘?jiān)性偌尤?倍水，繼續(xù)加熱煮沸提取120分鐘，收集提取液； 合并兩次收集的提取液于蒸發(fā)皿中，攪拌均勻，90°C水浴濃縮至與原料藥總質(zhì)量相同 的量； 在濃縮液中加入95%乙醇形成藥液，乙醇的含量達(dá)到藥液質(zhì)量的60%，置于三角瓶中，攪 拌均勻，4°C靜置48小時(shí)； 過濾藥液，將濾液收集于蒸發(fā)皿中，90°C水浴濃縮干燥； 收集干燥物，用研缽充分研磨成粉末，加入滅菌注射用水，配制成與原料藥材總質(zhì)量相 同的藥液，60 °C水浴溶解，高壓滅菌，備用。
[0027] 以實(shí)施例4得到的制劑給藥，觀察本發(fā)明復(fù)方中藥提取物對(duì)小鼠肝癌H22移植腫瘤 的抑瘤作用。
[0028] 實(shí)驗(yàn)材料： 動(dòng)物:清潔級(jí)KM小鼠。雌性，30只，體重20 ± 3g;細(xì)胞:小鼠肝癌H22細(xì)胞株，引自河北醫(yī) 科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;康萊特軟膠囊:浙江康萊特藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。瑞香狼毒采自山西省 交城縣柴錄溝村，其余中藥購(gòu)自山西雙鶴藥業(yè)有限公司。
[0029] 實(shí)驗(yàn)方法： 復(fù)蘇H22細(xì)胞，接種至昆明小鼠腹腔，7天后取腹水，調(diào)整細(xì)胞濃度至5 X 10%1，進(jìn)行右 腋皮下接種，每只接種量為〇. 2ml。接種后將動(dòng)物隨機(jī)分組，每組6只。
[0030] 接種后24小時(shí)開始給藥，連續(xù)給藥12天。實(shí)驗(yàn)期間每隔2天動(dòng)物稱重一次，于末次 給藥后24小時(shí)頸椎脫白法處死小鼠，剖取腫瘤，稱重，比較各組動(dòng)物腫瘤重量。
[0031]動(dòng)物分組及給藥情況如下： 1模型組:灌胃給予純凈水，0.4ml/只； 2陽(yáng)性對(duì)照組:灌胃給予康萊特軟膠囊，配制濃度0.07g/ml，灌胃體積0.2ml/10g; 3復(fù)方中藥提取物高劑量組（以下簡(jiǎn)稱高劑量組）:濃度lg(生藥)/ml，灌胃體積0.2ml/ l〇g； 4復(fù)方中藥提取物中劑量組（以下簡(jiǎn)稱中劑量組）：濃度0.5g(生藥）/ml，灌胃體積 0.2ml/10g； 5復(fù)方中藥提取物低劑量組（以下簡(jiǎn)稱低劑量組）：濃度0.25g(生藥）/ml，灌胃體積 0.2ml/10g； 觀察方法： 給藥前動(dòng)物稱重，給藥期間每隔兩天稱重并測(cè)量瘤體積，觀察實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物體重及瘤 體的變化;末次給藥后24小時(shí)，頸椎脫白法處死小鼠，剖取腫瘤，稱重，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0032] 瘤體積均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差（cm3):
瘤重均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差
與模型組比較，低劑量組P〈〇. 05，抑瘤率為62.29%。
[0033] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)中所有接種的小鼠均有腫瘤形成，表明腫瘤模型的建立是成功的。
[0034] 從腫瘤重量來看，各用藥組動(dòng)物的腫瘤重量均小于模型組。各組腫瘤重量大小順 序?yàn)?模型組 >康萊特組>高劑量組> 中劑量組>低劑量組。模型組腫瘤最大，造模成功； 陽(yáng)性對(duì)照藥未起到顯著的抗瘤作用;低劑量組腫瘤在各組間是最小，抑瘤率達(dá)到62.29%，經(jīng) 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果表明低劑量組與模型組比較，有顯著性差異，表明復(fù)方中藥提取物低劑量 給藥可以有效抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，起到抑制腫瘤的作用。
[0035] 從小鼠體重看，灌胃一次后，第二天康萊特組、高劑量組、中劑量組均出現(xiàn)體重小 幅度下降，隨后體重逐步回升，分析可能與藥物毒性有一定的相關(guān)性。但因本方中的主要成 分是一種有毒性的植物，所以在用藥劑量上必須嚴(yán)格按照規(guī)定的劑量使用，不可過量使用 或者延長(zhǎng)用藥時(shí)間。
[0036] 以實(shí)施例5得到的制劑給藥，觀察本發(fā)明復(fù)方中藥提取物對(duì)小鼠肝癌原位移植瘤 荷瘤小鼠的生命延長(zhǎng)作用。
[0037] 實(shí)驗(yàn)材料： 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:清潔級(jí)昆明小鼠，雄性，30只，體重20 ± 2g.細(xì)胞:小鼠肝癌H22細(xì)胞，購(gòu)自河 北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心康萊特軟膠囊:浙江康萊特藥液有限公司生產(chǎn)。瑞香狼毒于采自 山西省交城縣柴錄溝村，其余中藥購(gòu)自山西雙鶴藥業(yè)有限公司。
[0038]實(shí)驗(yàn)方法： 復(fù)蘇液氮中凍存的H22細(xì)胞，接種至小鼠腹腔內(nèi)，取接種后7天腹水，PBS洗兩次，離心， 調(diào)整細(xì)胞濃度為2 X107/ml，每只小鼠肝臟原位接種0.05ml(每只小鼠接種細(xì)胞量為IX 1〇6)。接種后將動(dòng)物隨機(jī)分為以下5組，于接種后24小時(shí)開始，分別灌胃給予相應(yīng)的藥液，連 續(xù)給藥10天。
[0039] 1模型組:給予純凈水，0.4ml/只； 2陽(yáng)性對(duì)照組:給予康萊特軟膠囊，配制濃度0.07g/ml，灌胃體積0.2ml/10g; 3復(fù)方中藥提取物高劑量組（以下簡(jiǎn)稱高劑量組）：濃度lg生藥/ml，灌胃體積0.2ml/ l〇g； 4復(fù)方中藥提取物中劑量組（以下簡(jiǎn)稱中劑量組）:濃度0.5g生藥/ml，灌胃體積0.2ml/ l〇g； 5復(fù)方中藥提取物低劑量組（以下簡(jiǎn)稱低劑量組）:濃度0.25g生藥/ml，灌胃體積0.2ml/ l〇g; 觀察方法： 給藥前動(dòng)物稱重，觀察期間每隔兩天稱重1次，記錄動(dòng)物生存時(shí)間。觀察期限為60天，生 存時(shí)間超過60天按60天計(jì)算，比較各組動(dòng)物平均生存天數(shù)。
[0040] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 經(jīng)肝臟原位接種H22細(xì)胞后，所有小鼠均存活，在實(shí)驗(yàn)第5天，所有小鼠均出現(xiàn)腹水，體 重顯著增加。隨后精神逐漸萎靡，被毛雜亂，身體發(fā)涼，直至死亡。各組小鼠死亡后解剖，所 有小鼠肝臟上均有腫瘤。
[0041 ] 各組小鼠平均生存時(shí)間（均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差）
經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，與模型組及對(duì)照組比較，給藥低劑量組有顯著性差異，生命延長(zhǎng)率為 34.98%，其余各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0042]從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，康萊特作為陽(yáng)性對(duì)照藥，對(duì)小鼠肝癌沒有產(chǎn)生抑制作用。低劑量 組小鼠生存時(shí)間最長(zhǎng)，高劑量組次之，用藥組均表現(xiàn)出一定的抑瘤作用，特別是低劑量組表 現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性，顯示藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞起到了抑制作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療肝癌的中藥制劑，其特征在于:所述制劑由以下重量份數(shù)的原料藥制成，瑞 香狼毒60-80份，車前子5-10份，白茅根5-10份，冬凌草5-10份，黨參3-6份，甘草2-4份。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥制劑，其特征在于:所述的制劑由以下重量份數(shù)的原料藥 制成，瑞香狼毒70份，車前子8份，白茅根7份，冬凌草6份，黨參5份，甘草3份。3. -種制備如權(quán)利要求1或2所述的治療肝癌的中藥制劑的方法，其特征在于:包括步 驟，（1)按比例在所有原料藥加原料藥總質(zhì)量6-8倍質(zhì)量的水加熱煮沸提取100-150分鐘，收 集提取液；（2)殘?jiān)性偌尤朐纤幙傎|(zhì)量5-6倍水，繼續(xù)加熱煮沸提取100-150分鐘，收集 提取液；（3)合并兩次提取液，濃縮至與原料藥總質(zhì)量相同的量；（4)濃縮液中加乙醇形成 藥液；（5)靜置后過濾，濾液濃縮干燥；（6)研磨干燥物成粉末，然后制成醫(yī)學(xué)上可接受的制 劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟(1)和步驟(2)中水是去離子水。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟（1)和步驟(2)中加熱煮沸提取時(shí)間為 120分鐘。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟(1)加熱煮沸提取前，先浸泡30分鐘。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟(3 )，在90°C水浴濃縮。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(4)中，乙醇的含量達(dá)到藥液質(zhì)量的 60% 〇9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(5)中，濾液在90°C水浴蒸干。10. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:所述的醫(yī)學(xué)上可接收的制劑是片劑、膠囊 劑或藥粉末加入滅菌注射用水，60-80°C水浴溶解后高溫滅菌制成的藥液。
【文檔編號(hào)】A61K36/899GK105902869SQ201610441080
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年6月20日
【發(fā)明人】楊喜花, 任連生, 張?zhí)O
【申請(qǐng)人】山西省腫瘤研究所