用于治療和/或護理皮膚、粘膜和/或指甲的外泌多糖的制作方法
【專利說明】用于治療和/或護理皮膚、粘膜和/或指甲的外泌多糖 發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及抑制神經(jīng)元胞吐作用且刺激成纖維細胞增殖的外泌多糖(EPS)。所述 外泌多糖由具有保藏號CNCM 1-4239的弧菌屬(Vibrio sp)的物種分泌。本發(fā)明還涉及這種 在化妝品或皮膚用藥物組合物中的外泌多糖在治療和/或護理皮膚、粘膜、毛發(fā)和/或指甲 中的用途。
[0002] 背景
[0003] 用于預(yù)防和減少皺紋、特別是面部皺紋的化妝品行業(yè)中的策略之一在于施用通過 抑制該區(qū)域中神經(jīng)元胞吐作用阻斷肌肉收縮的化合物。牽涉表情線的形狀的主要肌肉是圍 繞眼和睫毛的那些、額、唇、嘴、頰和頸肌上的那些。這些肌肉在面部的皮下連接額部中發(fā) 現(xiàn)，它們從其中升至皮膚并且使其插入表皮層的最深部。其收縮可以導(dǎo)致皮膚隆起、壓縮或 緩慢運動。早期皺紋的形狀是皮膚衰老和正在衰老的最具有特征性的征兆。
[0004] 自從上世紀九十年的10年以來，注入肌肉毒素肉毒梭菌（Cl ostridium botulinum)(作為B〇t〇X?^AlIergan銷售)在減少肌肉收縮和治療例如張力失調(diào)和/或疼 痛這樣的相關(guān)疾病的用途已經(jīng)廣泛傳播。神經(jīng)毒素注射也用于治療和/或護理皮膚，目的在 于減輕、延遲或預(yù)防衰老和/或光老化征兆，且特別是松弛面部表情并且減少皺紋形成或?qū)?其出現(xiàn)減少到最低限度。其作用機制基于阻斷神經(jīng)肌肉接點上的軸突的突觸前末梢中的乙 酰膽堿釋放，由此避免神經(jīng)傳導(dǎo)和肌肉收縮。該毒素結(jié)合突觸前膜中的受體、被胞質(zhì)攝入并 且通過胞質(zhì)。其活性負責(zé)打斷突觸泡蛋白、SNAP-25和突出融合蛋白的三分子SNARE復(fù)合物， 這避免了突觸小泡結(jié)合質(zhì)膜和乙酰膽堿釋放至神經(jīng)間隙。受控施用肉毒毒素已經(jīng)用于治療 廣泛的病癥、障礙和疾病，例如出汗和多汗(US 6974578 B2和US 6683049 B2)、不同的皮膚 障礙和疾病例如皮膚胼胝、疣、潰瘍和損害(US 8048423 B2、US 2011/206731)、銀肩病和皮 炎(US 5670484 A)、血管高反應(yīng)性和酒渣鼻(W0 2010/114828)、痤瘡(W0 03/011333)、毛發(fā) 生長和維持（US 6299893 B1)、面部皺紋（US 7255865B2)、眉毛和前額下垂（US 2011/ 280978)或下垂的口角（US 6358917 BI)以及不同類型的疼痛和炎癥（US 2010/266638、US 7811586 B2、US 7704524 B2、US 7704511 B2、US 7468189 B2、US 7255866 B2、US 7091176 B2、US 6887476 B2、US 6869610 B2、US 6838434 B2、US 6641820 B2，US 6623742B2、US 6565870 B1、US 6500436 B1、US 6458365 B1、US 6423319 B1、US 6113915 A、US 5714468 A和US 6063768 B2)等。
[0005] 然而，肉毒毒素中固有的毒性導(dǎo)致其以寬泛劑量施用造成不期望的副作用，例如 免疫源應(yīng)答、頭痛、惡性、麻痹或肌無力、呼吸衰竭，且在更極端的情況中甚至導(dǎo)致所治療的 受試者死亡[FDA News，2008年2月8 日，"FDA Notifies Public of Adverse Reactions Linked to Botox Use" ；Cote，T.R.等人"Botulinum toxin type A injections：Adverse events reported to the US Food and Drug Administration in therapeutic and cosmetic cases" J.Amer.Acad.Derm. 2005，53(3)，407-415]。這些嚴重的副作用與高治療 成本一起嚴重地制約了肉毒毒素以治療或美容為目的的應(yīng)用，這歸因于長期應(yīng)用和/或存 在不適合其治療的疾病。因此，迫切需求研發(fā)模擬肉毒毒素的麻痹效應(yīng)、而配有非常簡單和 更穩(wěn)定的分子結(jié)構(gòu)的分子，其不會誘導(dǎo)免疫反應(yīng)且其生產(chǎn)成本是可承受得起的。肽性質(zhì)的 分子滿足這些特性。
[0006] 皺紋與真皮中的多種生物學(xué)改變相關(guān)。在真皮中，存在真皮成纖維細胞數(shù)量減少， 它們產(chǎn)生胞外基質(zhì)的不同成分，其負責(zé)皮膚的堅實度和彈性和恢復(fù)皮膚的機械性能。
[0007] 在傷口愈合過程中，存在幾種另外的過程，它們有助于皮膚再生并且還可以用于 抗皺治療。在愈合過程中，存在細胞增殖和迀移的增加 [Grose等人，"A crucial role of β I integrins for keratinocyte migration in vitro and during cutaneous wound repair"，Development ·，2002,2303-2315]，這有助于表皮細胞再生，從而恢復(fù)(revertint) 與年齡相關(guān)的表皮厚度減少[Varani等人，"Vitamin A Antagonizes Decreased Cell Growth and Elevated Collagen-Degrading Matrix Metalloproteinases and Stimulates Collagen Accumulation in Natural Iy Aged Human Skin''， J· Invest .Dermatol ·，2000,114，480-486]，且更特別地在皺紋更頻繁出現(xiàn)的區(qū)域（眼、前 額、鼻頰(nasogenian)區(qū)等區(qū)域周圍）中觀察到。此后，在愈合過程中，存在成纖維細胞增殖 的增加，它負責(zé)進行胞外基質(zhì)的合成，也有助于減少皺紋。
[0008] 自從20世紀70年代以來，外泌多糖的存在是已知的，它們由生活在因其極端條件 而為人所知的生態(tài)系統(tǒng)中的細菌物種產(chǎn)生。由生活在這些生態(tài)系統(tǒng)中的細菌產(chǎn)生胞外多糖 主要與存活功能有關(guān)(Ragugngs 等人 J Appl Microbiol·，1997年4 月，82(4) :422-30)。
[0009] 在化妝品領(lǐng)域中，外泌多糖已經(jīng)廣泛應(yīng)用，主要作為膠凝劑和/或調(diào)質(zhì)劑 (texturizing agent)，添加到終產(chǎn)品中?，F(xiàn)有技術(shù)中已知一些外泌多糖類廣泛應(yīng)用于化妝 品和/或皮膚藥物目的，例如描述于專利EP0534855B1中的假單胞菌屬(Pseudomonas)細菌 菌株產(chǎn)生的外泌多糖，其用作增稠劑、膠凝劑和/或調(diào)質(zhì)劑。專利申請FR2871476A1描述了產(chǎn) 生已經(jīng)顯示用作愈合劑的用途的外泌多糖的互生平胞菌屬(Alteromonas)的熱液起源的 GY785菌株;專利EP0987010B1描述了改善皮膚防御系統(tǒng)的由熱液起源的嗜常溫菌產(chǎn)生的一 種外泌多糖，并且專利申請US2010/009931描述了用作繃緊劑(tensing agent)還改善皮膚 緊實度、彈性以及張力的由紫球藻屬(Porphyridium)微藻菌株產(chǎn)生的外泌多糖。類似地，專 利申請US2009/069213A1公開了產(chǎn)生一種顯示抗皺紋和水合特性的多糖的紫球藻屬物種微 藻菌株。此外，專利US6344346B1描述了具有由根瘤菌屬(Rhizobium)細菌分泌的天然多糖 引起的水合特性的化妝品組合物。
[0010]對皮膚具有很多優(yōu)點的另一種外泌多糖是已經(jīng)被證明描述于申請W02009/127057 中的、由表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis)或金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)的細菌物種的菌株產(chǎn)生的外泌多糖。在應(yīng)用這種外泌多糖的化 妝品組合物之后，角質(zhì)層提取物的水合作用和形態(tài)學(xué)得到改善，并且發(fā)生皮膚的脫皮。 [0011]此外，應(yīng)提及專利申請JP2003-313131，因為它描述了互生平胞菌屬物種的菌株 SN-1009(FERM BP-5747)產(chǎn)生的、具有抗皺紋特性的硫酸多糖。
[0012]最后，申請WO 20 1 2 /0 7 2 24 5描述具有水合特性的假交替單胞菌屬 (Pseudoal teromonas)物種的菌株產(chǎn)生的外泌多糖，且專利申請P2012-30432公開了弧菌屬 物種的菌株產(chǎn)生的外泌多糖，其刺激皮膚細胞中透明質(zhì)酸產(chǎn)生。
[0013]出人意料地，本發(fā)明申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由弧菌屬物種的非熱液細菌菌株分泌的一種 新的外泌多糖的活性，根據(jù)布達佩斯條約（Budapest Treaty)在編號CNCM 1-4239下保藏， 其抑制神經(jīng)元胞吐作用并且預(yù)防和/或減少皮膚皺紋，且還刺激成纖維細胞增殖和增加皮 膚堅實度。
[0014]發(fā)明詳述
[0015] 本發(fā)明涉及由具有保藏號CNCM 1-4239的弧菌屬物種的細菌菌株分泌的外泌多糖 的化妝品和/或皮膚藥物用途。出人意料地，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)上述外泌多糖抑制神 經(jīng)元胞吐作用且刺激成纖維細胞增殖。特別地，神經(jīng)元胞吐作用的抑制減少和/或預(yù)防皮膚 皺紋，且刺激成纖維細胞增殖、增加皮膚堅實度。
[0016]
[0017] 為了促進本發(fā)明的理解，一些術(shù)語和表述的含義，正如在本發(fā)明的上下文中所使 用的，被包括在內(nèi)。
[0018] 在本發(fā)明的上下文中，"皮膚"被理解為包括它的多個層，從最上層或角質(zhì)層至最 下層或皮下組織都包含在內(nèi)。這些層由不同類型的細胞如角質(zhì)形成細胞、成纖維細胞、黑色 素細胞和/或脂肪細胞等等組成。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語"皮膚"包括頭皮。
[0019] 本說明書上下文中使用的術(shù)語"治療"在未附帶限制"美容、非治療"時是指施用本 發(fā)明的化合物以緩解或消除疾病或障礙或與這種疾病或障礙相關(guān)的一種或多種癥狀。術(shù)語 "治療"還涵蓋緩解或消除疾病或障礙的生理學(xué)后果的能力。
[0020] 當(dāng)術(shù)語"治療"附帶限制"美容、非治療"時是指將所述化合物應(yīng)用于皮膚、毛發(fā)和/ 或粘膜，特別是目的在于改善皮膚、毛發(fā)和/或粘膜的美容質(zhì)量，例如、但不限于其水化水 平、彈性、堅實度、光澤、品質(zhì)或紋理等。本發(fā)明中的術(shù)語"護理"是指維持皮膚、毛發(fā)和/或粘 膜的質(zhì)量。這些質(zhì)量通過在健康受試者以及那些存在皮膚和/或粘膜疾病和/或障礙的那些 受試者中的化妝品處理和/或皮膚、毛發(fā)和/或粘膜護理得以改善或維持，所述疾病和/或障 礙例如、但不限于皮膚上的潰瘍和損害、銀肩病、皮炎、痤瘡或酒渣鼻等。
[0021] 本發(fā)明中使用的術(shù)語"預(yù)防"是指本發(fā)明化合物預(yù)防、延遲或阻止疾病或障礙在其 出現(xiàn)前的出現(xiàn)或發(fā)生的能力。
[0022]在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語"衰老"指隨著年齡(慢性衰老（chronoaging))或通過 暴露于陽光(光老化)或環(huán)境因素如煙草煙霧、冷、熱或風(fēng)的極端氣候條件、化學(xué)污染劑或污 染物所經(jīng)歷的皮膚變化，并且包括所有的外部可見和/或通過觸摸可察覺的變化，例如但不 限于皮膚不連續(xù)性的產(chǎn)生，如皺紋(wrinkle)、細紋(fine line)、溝紋(furrow)、不規(guī)則性 (irregularity)或粗糙(roughness)、毛孔尺寸增加、彈性喪失、緊實度喪失、平滑度喪失、 從變形中恢復(fù)的能力的喪失、皮膚下垂如臉頰下垂、眼下眼袋的出現(xiàn)或雙下巴的出現(xiàn)，等 等，皮膚顏色的改變，如斑點、發(fā)紅、眼下眼袋或色素沉著過度區(qū)域的出現(xiàn)(如老年斑或雀斑 等等），異常分化，角化過度，彈性組織變性，角化病，脫發(fā)，桔皮樣外觀（orange-peel skin)，真皮、表皮、血管系統(tǒng)或靠近皮膚的那些組織的、角質(zhì)層的、膠原蛋白結(jié)構(gòu)的喪失和 其他組織學(xué)改變(例如蜘蛛痣或毛細血管擴張的出現(xiàn)），等等。術(shù)語"光老化"將由于導(dǎo)致皮 膚的過早衰老并且出現(xiàn)與衰老相同的物理特征的延長的皮膚紫外輻射暴露的一系列過程 歸為一類，這些特征例如但不限于，肌肉松弛、下垂、顏色改變或色素沉著的不規(guī)則性、異常 和/或過度角化。
[0023]產(chǎn)生本發(fā)明中的胞外多糖的菌株依照布達佩斯條約于2009年9月4日保藏在國立 微生物保藏中心（"Collection Nationale de Culture de Microorganismes" [National Microorganism Culture Collection]) (CNCM)，巴斯德研究所（Pasteur Institute)， 28rue du Docteur Roux，75724巴黎，法國，在代碼CNCM 1-4239下。
[0024] 因此，本發(fā)明的第一方面涉及用于皮膚、粘膜、頭發(fā)和/或指甲的治療和/或護理的 具有保藏號CNCM 1-4239的弧菌屬(Vibrio sp.)物種的菌株的胞外多糖。特別地，治療涉及 治療和/或預(yù)防疼痛、炎癥、瘙癢或多汗，或使皮膚和/或粘膜的上皮再生和/或愈合治療。
[0025] 在一個優(yōu)選的實施方案中，疼痛選自與病癥、疾病和/或障礙相關(guān)的疼痛，例如、但 不限于接觸敏感性、對冷敏感、對熱敏感、皮膚刺激、毛發(fā)去除后皮膚刺激、剃毛后皮膚刺 激、銀肩病、敏感性皮膚、皮炎、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、尿布皮炎、脂溢性皮炎、濕疹、扁平 苔蘚、燒傷、曬傷、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、超敏反應(yīng)、術(shù)后、強脈 沖光線療法(IPL)后、用單色脈沖光(激光)處理后、用化學(xué)脫肩劑治療后或過度暴露于外部 攻擊性試劑治療后的皮膚疼痛或刺激等。
[0026] 在另一個優(yōu)選的實施方案中，炎癥選自，例如、但不限于銀肩病、敏感性皮膚、皮 炎、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、尿布皮炎、脂溢性皮炎、濕疹、酒渣鼻、痤瘡、過度增生性皮膚 病、燒傷、曬傷、爪間鬃、術(shù)后、強脈沖光線療法（IPL)后、用單色脈沖光(激光)處理后、用化 學(xué)脫肩劑治療后或過度暴露于外部攻擊性試劑治療后的皮膚炎癥、陰道粘膜炎癥、口腔粘 膜炎癥、牙齦炎、牙周炎、鼻炎、過敏性鼻炎等。