N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物作為mTOR信號(hào)通 路抑制劑的應(yīng)用，以及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是威脅人類健康的重大疾病，目前使用的臨床治療藥物多為細(xì)胞毒藥物，靶 向性差，毒副作用大，治療效果并不理想。分子靶向藥物針對(duì)腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞差異表達(dá) 的特定基因或基因表達(dá)產(chǎn)物，對(duì)腫瘤形成靶向特異性殺傷，顯著改善了腫瘤的臨床治療效 果。
[0003] 哺乳動(dòng)物雷帕霉素革巴蛋白（mammalian target ofrapamycin，mTOR)是一個(gè)高度保 守的蛋白質(zhì)，屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶PIKK家族，它可以整合生長因子、氨基酸、能量等 所激發(fā)的信號(hào)，借以調(diào)控與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的多種病理生理過程如細(xì)胞生長增殖、迀移、 細(xì)胞周期調(diào)控等，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演重要的角色。mTOR在生物體以mTOR復(fù)合物1 (mTORCl)和mT0RC2兩種復(fù)合物的形式存在。S6K1和4E-BP1是兩個(gè)研究最廣泛的mTORCl的底 物，它們是蛋白翻譯過程中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。研究表明，mT0RC2復(fù)合物能夠作為Akt的上游 信號(hào)分子在Ser473位點(diǎn)對(duì)Akt產(chǎn)生磷酸化從而參與細(xì)胞骨架蛋白的構(gòu)建，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成、 細(xì)胞存活、增殖與代謝等諸多細(xì)胞活動(dòng)。mTOR的調(diào)節(jié)失常與很多癌癥，包括乳腺癌、腎癌、肺 癌和肝癌等的發(fā)生密切相關(guān)，是臨床已被確證的有效藥物靶點(diǎn)。
[0004] 雷帕霉素是最早被發(fā)現(xiàn)的mTORCl特異性抑制劑，其多個(gè)衍生物被美國FDA批準(zhǔn)用 于臨床腫瘤治療，例如惠氏制藥生產(chǎn)的Tems iro I imus (CCI-779)用于晚期腎細(xì)胞癌的治療， 而諾華生產(chǎn)的Everolimus(RADOOl)除了用于治療腎癌外，還用于惡性胰腺癌和HR+/HER2 一的 乳腺癌治療。然而到目前為止雷帕霉素衍生物最有前景的治療僅限于以上類型的腫瘤，在 另外一些主要實(shí)體瘤中，使用雷帕霉素衍生物其客觀有效反應(yīng)率都很低，這使得雷帕霉素 衍生物在腫瘤化療單一用藥中的應(yīng)用有很大的局限性。近年來，PI3K/mT0R雙重抑制劑或 mT0RCl/2選擇性抑制劑被證實(shí)可以抑制多種腫瘤生長，多個(gè)PI3K/mT0R雙重抑制劑以及 mT0RCl/2選擇性抑制劑已經(jīng)進(jìn)入臨床研究。然而，一些化合物仍然存在毒副作用大，藥動(dòng)學(xué) 性質(zhì)差的缺點(diǎn)，因此，發(fā)現(xiàn)新的mTOR抑制劑從而研發(fā)出新的抗腫瘤藥物十分必要。
[0005] 迄今為止，結(jié)構(gòu)新穎的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物用作為mTOR信號(hào)通路抑制 劑，以及具備抗腫瘤活性尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明目的是提供一種N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物用作為mTOR抑制劑的，以 及在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，含有該類化合物為活性成分的藥物組合物及其在制備抗腫 瘤藥物中的新用途。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：
[0008] 結(jié)構(gòu)式I所示的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備 mTOR信號(hào)通路抑制劑中的應(yīng)用，
[0010]其中，所述的化合物為N-羥基鄰苯二甲酰亞胺(NHPI)，或在苯環(huán)上有取代基或并 環(huán)結(jié)構(gòu)的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類衍生物;所述的藥學(xué)上可接受的鹽為N-羥基鄰苯二甲酰 亞胺類化合物與酸所成的鹽或酸性質(zhì)子被金屬離子所取代的鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽;所述 的與酸所成的鹽為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、三氟 甲磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽或蘋果酸鹽。
[0011]結(jié)構(gòu)式I所示的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗 腫瘤藥物中的應(yīng)用，
[0013] 其中，所述的化合物為N-羥基鄰苯二甲酰亞胺(NHPI)，或在苯環(huán)上有取代基或并 環(huán)結(jié)構(gòu)的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類衍生物;所述的藥學(xué)上可接受的鹽為N-羥基鄰苯二甲酰 亞胺類化合物與酸所成的鹽或酸性質(zhì)子被金屬離子所取代的鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽;所述 的與酸所成的鹽為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、三氟 甲磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽或蘋果酸鹽。
[0014] 如所述的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其中所述 化合物NHPI抗腫瘤作用是基于其能顯著抑制mTOR信號(hào)通路，顯著抑制mTORCl下游經(jīng)典蛋白 S6K和4E-BP1的磷酸化水平，以及mT0RC2下游蛋白Akt在S473位的磷酸化，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì) 胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡。
[0015] 如所述的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其中所述 化合物NHPI抗腫瘤作用是通過抑制BT-20細(xì)胞、Lovo細(xì)胞和HT-29細(xì)胞的增殖，阻滯人結(jié)腸 癌細(xì)胞周期于G 2/M期，誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞BT-20的細(xì)胞凋亡，抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長，并 具劑量依賴性。
[0016] 如所述的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其中所述 的腫瘤為頭頸部腫瘤、呼吸系統(tǒng)腫瘤、消化系統(tǒng)腫瘤、泌尿系統(tǒng)腫瘤、骨骼系統(tǒng)腫瘤、婦科腫 瘤、血液系統(tǒng)腫瘤、其他類型腫瘤。
[0017] 如所述的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其中所述 的頭頸部腫瘤為甲狀腺癌、鼻咽癌、腦膜癌、聽神經(jīng)瘤、垂體瘤、口腔癌、顏咽管瘤、丘腦和腦 干腫瘤、血管源性腫瘤或顱內(nèi)轉(zhuǎn)移瘤。
[0018] 如所述的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其中所述 的呼吸系統(tǒng)腫瘤為肺癌;所述的消化系統(tǒng)腫瘤為肝癌、胃癌、食管癌、大腸癌、直腸癌、結(jié)腸 癌或胰腺癌;所述的泌尿系統(tǒng)腫瘤為腎癌、膀胱癌、前列腺癌或睪丸癌;所述的骨骼系統(tǒng)腫 瘤為骨癌;所述的婦科腫瘤為乳腺癌、宮頸癌或卵巢癌;所述的血液系統(tǒng)腫瘤為白血病、惡 性淋巴瘤或多發(fā)性骨髓瘤。
[0019] 如所述的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其中所述 的其他類型腫瘤為惡性黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或皮膚癌。
[0020] 藥物組合物，包含治療腫瘤有效量的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物或藥學(xué)上可 接受的鹽和藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。
[0021] 如所述的藥物組合物，其中所述的藥物組合物為片劑、膠囊劑、水性混懸劑、油性 混懸劑、可分散的粉劑、顆粒劑、錠劑、乳劑、糖漿劑、乳膏劑、軟膏劑、栓劑或注射劑。
[0022]如所述的藥物組合物，其中所述的藥學(xué)上可接受的鹽為N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類 化合物與酸所成的鹽或酸性質(zhì)子被金屬離子所取代的鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽;所述的與酸 所成的鹽為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、三氟甲磺酸 鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽或蘋果酸鹽。
[0023]結(jié)構(gòu)式I所示的N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用作為 mTOR信號(hào)通路抑制劑或抗腫瘤抑制劑，
[0025] 本發(fā)明公開的化合物NHPI可顯著抑制mTOR信號(hào)通路，主要表現(xiàn)為顯著抑制mTORCl 下游經(jīng)典蛋白S6K和4E-BP1的磷酸化水平，以及mT0RC2下游蛋白Akt在S473位的磷酸化;進(jìn) 而有效地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡，具有顯著的抗腫瘤活性。
[0026] 本發(fā)明所述的藥物組合物能制成片劑、膠囊劑、水性混懸劑、油性混懸劑、可分散 的粉劑、顆粒劑、錠劑、乳劑、糖漿劑、乳膏劑、軟膏劑、栓劑或注射劑。本發(fā)明藥物組合物的 各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域中熟知的方法進(jìn)行制備。這些藥用制劑中可以含有與載體組合 的例如0.05 %~90 %重量活性成分，更常見約15 %~60 %之間的活性成分。本發(fā)明化合物 劑量可以是〇. 005~5000mg/kg/天，也可根據(jù)疾病嚴(yán)重程度或劑型的不同使用劑量超出此 劑量范圍。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所具備的優(yōu)益效果如下：
[0028]本發(fā)明結(jié)構(gòu)新穎的mTOR抑制劑N-羥基鄰苯二甲酰亞胺類化合物可用于制備不同 于現(xiàn)有臨床研究化合物特點(diǎn)的新穎的mTOR信號(hào)通路抑制劑和抗腫瘤藥物。本發(fā)明首次證明 NHPI能顯著抑制mTORC 1下游經(jīng)典蛋白S6K和4E-BP1的磷酸化水平以及mT0RC2下游Ak t蛋白 在S473位的磷酸化水平;能顯著抑制BT-20細(xì)胞、Lovo細(xì)胞和HT-29細(xì)胞的增殖，并呈現(xiàn)劑量 依賴性;能顯著阻滯人結(jié)腸癌細(xì)胞周期于G 2/M期，并呈現(xiàn)劑量依賴性;能顯著誘導(dǎo)人乳腺癌 細(xì)胞BT-20的細(xì)胞凋亡，并呈現(xiàn)劑量依賴性;能顯著抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長，在發(fā)揮抗腫 瘤作用的同時(shí)，對(duì)荷瘤小鼠的體重沒有明顯的影響。NHPI為腫瘤患者提供了新的治療藥物， 具有劑量適中，費(fèi)用適中，用藥方便，療效顯著，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說明】：
[0029] 圖1為實(shí)施例1中NHPI處理不同腫瘤細(xì)胞后對(duì)mTOR信號(hào)通路影響的Western Blot 圖；
[0030] 圖2為實(shí)施例2中NHPI對(duì)不同腫瘤細(xì)胞增殖的影響；
[0031]圖3為實(shí)施例3中NHPI對(duì)人結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞周期調(diào)控的影響；
[0032] 圖4為實(shí)施例4中NHPI對(duì)人乳腺癌BT-20細(xì)胞凋亡的影響；
[0033] 圖5為實(shí)施例5中裸鼠體重與給藥天數(shù)的關(guān)系圖；
[0034]圖6為實(shí)施例5中裸鼠腫瘤體積與給藥天數(shù)的關(guān)系圖。
【具體實(shí)施方式】：
[0035]下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以 此來限定本發(fā)明。
[0036] 實(shí)施例1:
[0037] NHPI顯著抑制不同腫瘤細(xì)胞mTORCl和mT0RC2信號(hào)通路。
[0038] 1.細(xì)胞株:人乳腺癌BT-20細(xì)胞、人結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞均購自中科院上海細(xì)胞庫。細(xì) 胞置于37°C、5 %⑶2的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10 %小牛血清、pH值7.4的MEM以及 F12-K。
[0039] 2.實(shí)驗(yàn)方法:取對(duì)數(shù)生長期BT-20以及Lovo細(xì)胞，以培養(yǎng)液制成3 XioVml細(xì)胞懸 液接種于6孔板。培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁后吸除原培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組每孔分別加入不同濃度的 NHPI (購自上海韶遠(yuǎn)科技有限公司），對(duì)照組加等量的不含NHPI的培養(yǎng)液。24h后，收集細(xì)胞， 提取細(xì)胞總蛋白，經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳，分別用特異性抗體檢測p-S6K、p-4E-BP 1、ρ-ΑΚΤ (S473)和β-actin等，圖1為NHPI處理細(xì)胞后的Western Blot圖。
[0040] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:NHPI顯著抑制mTORCl