[0050] 用制備的10批次的裕民貝母提取物進行分析，進行色譜峰匹配，結果1~12號峰 在10批樣品色譜圖中均出現(xiàn)。因此標定12個峰為共有色譜峰，據(jù)此建立該提取物的HPLC 質量控制圖譜，結果見圖1。該10批次的裕民貝母提取物藥理活性相似。
[0051] 實施例7 :提取物藥理試驗
[0052] 一、材料與儀器
[0053] 1. 1實驗動物：清潔級雄性SD大鼠，體質量（220 ± 10)g，購于廣西醫(yī)科大學實驗動 物中心。生產許可證號：SCXK(桂）2009-0002。
[0054] 1. 2藥物和試劑：分別按照實施例1~5制備得到裕民貝母提取物①~⑤。陽性藥 復方丹參片（鄭州瑞龍制藥股份有限公司，批號：130603) ;0.9%氯化鈉注射液（A130724H、 貴州科倫藥業(yè)有限公司）；血液流變學指標由廣西玉林市婦幼保健院代測。
[0055] 1. 3主要儀器：MVIS-2035全自動血流變分析儀（重慶天海醫(yī)療設備有限公司）； 7180全自動生化分析儀（日本日立株式會社）；XE-5000血液分析儀（日本sysmex公司）； RE-2000A旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗（鞏義市予華 儀器有限責任公司）；電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）等。
[0056] 二、方法
[0057] 2. 1裕民貝母提取物的制備：見實施例1~5,使用時用生理鹽水配置成懸浮液。
[0058] 2. 2裕民貝母提取物的藥理活性
[0059] 2. 2. 1動物分組與給藥：將SD大鼠隨機分為18組：正常對照組和模型組（灌胃等 容生理鹽水）；丹參片陽性對照組（按l〇〇mg/kg灌胃復方丹參片溶液）；裕民貝母提取物 ①~⑤分別設低、中、高劑量組（分別灌胃給予半楓荷水部位l〇〇、200、300mg/kg)
[0060] 2. 2. 2血瘀模型的制作：根據(jù)中醫(yī)學理論"勞則氣耗"選擇游泳力竭法制備大鼠氣 虛血瘀模型。大鼠先適應性游泳訓練3d，然后每天力竭性游泳1次，持續(xù)21d。
[0061] 2. 2. 3舌象觀察：于手術前及取材前采集舌圖，比較兩組大鼠的舌色及舌下脈絡， 并采用自擬的舌象綜合評分標準進行評分。〇分（正常）：舌底色微青、舌下絡脈主干長度 不超過舌底長度的3/4 ;1分（輕微紫黯）：舌底色紫黯或舌下絡脈主干長度超過3/4 ;2分 (明顯紫黯）：舌底色紫黯且舌下絡脈主干長度超過3/4。
[0062] 2.2.4血液流變學指標的測定：于實驗第21天，各組大鼠以10%水合氯醛按 0. 35mg/kg腹腔注射麻醉后腹主動脈采血。檢測血液流變性、紅細胞流變性及凝血相關血液 學指標。包括全血黏度、血漿黏度、紅細胞聚集指數(shù)、血小板數(shù)、凝血時間（TT)、凝血酶原時 間（PT)、活化部分凝血活酶時間（APPT)、纖維蛋白原（FIB)含量。
[0063] 2. 3統(tǒng)計學處理：所有數(shù)據(jù)以i±s_表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS17. 0統(tǒng)計軟件進行分 析，實驗結果采用單因素方差分析法進行統(tǒng)計分析，組間比較用t檢驗。P< 0. 05為有統(tǒng)計 學意義。
[0064] 三、結果
[0065] 3. 1裕民貝母提取物對血瘀大鼠舌象評分的影響
[0066] 結果如表1所示，與模型組比較，裕民貝母提取物①~③低、中、高劑量組舌象評 分均顯著降低（P< 0. 05或P< 0. 01)，呈量效關系；裕民貝母提取物④~⑤各劑量組舌象 評分與模型組相比較無明顯差異（注：與正常對照組比較，**P< 〇. 〇1 ;與模型組比較，#P < 0· 05,腳 < 0· 01〇 ) 〇
[0067] 表1裕民貝母提取物對血瘀大鼠舌象評分的影響（X土s，η= 10)
[0068]

[0069] 3. 2裕氏W母提取物對血瘀大鼠全血黏度及血漿黏度的影啊
[0070] 結果如表2所示，與模型組比較，裕民貝母提取物①~③低、中、高劑量組全血黏 度及血漿黏度均顯著降低（P< 0. 01)，其作用呈現(xiàn)一定的量效關系；裕民貝母提取物④~ ⑤各劑量組全血黏度及血漿黏度與模型組相比較無明顯差異（注：與正常對照組比較， < 〇· 01 ;與模型組比較，##p< 〇· 01)。
[0071] 表2裕民貝母提取物對血瘀大鼠全血黏度及血漿黏度的影響（X土s，η=10)
[0072]
[0073] 3. 3裕民貝母提取物對血瘀大鼠紅細胞聚集指數(shù)的影響：
[0074] 結果如表3所示，與模型組比較，裕民貝母提取物①~③低、中、高劑量組紅細胞 聚集指數(shù)均顯著降低（P< 〇. 01)，其作用呈現(xiàn)一定的量效關系；裕民貝母提取物④~⑤各 劑量組紅細胞聚集指數(shù)與模型組相比較無明顯差異（注：與正常對照組比較，**P< 0. 01 ; 與模型組比較，##P< 0. 01)。
[0075] 表3裕民貝母提取物對血瘀大鼠紅細胞聚集指數(shù)的影響（X土s，η= 10)
[0076]
[0077] 3.4裕民貝母提取物對血瘀大鼠血小板計數(shù)的影響: '
[0078] 結果如表4所示，與模型組比較，裕民貝母提取物①~③低、中、高劑量組血小板 數(shù)計數(shù)均顯著降低（Ρ< 〇. 01)，其作用呈一定量效關系；裕民貝母提取物④~⑤各劑量組 血小板數(shù)計數(shù)與模型組相比較無明顯差異（注：與正常對照組比較，**Ρ< 〇. 01 ;與模型組 比較，##P< 〇· 01)。
[0079] 表4裕民貝母提取物對血瘀大鼠血小板計數(shù)的影響（x土s，η= 10)
[0080]
[0081] 3· 皿肌八沖w>c皿:
[0082] 結果如表5所示，與模型組比較，裕民貝母提取物①~③低、中、高劑量組PT、APTT 顯著升高，TT、FIB顯著降低（P< 0. 01)，其作用呈現(xiàn)一定的量效關系；裕民貝母提取物④~ ⑤各劑量組PT、APTT、TT、FIB與模型組相比較無明顯差異（注：與正常對照組比較，**P < 〇· 01 ;與模型組比較，##p< 〇· 01)。
[0083] 表5裕民貝母提取物對血瘀大鼠凝血四項的影響（x土s，η= 10)
[0084]
[0085] 結論：實驗采用持續(xù)力竭游泳法制作大鼠血瘀模型，并對不同裕民貝母提取物的 活血化瘀活性進行了測定，發(fā)現(xiàn)裕民貝母提取物①~③均有活血化瘀的作用，且呈現(xiàn)一定 的量效關系；而裕民貝母提取物④~⑤均沒有活血化瘀的作用。這說明裕民貝母提取物的 活血化瘀活性與裕民貝母和甘草的比例有重要關系。
[0086] 實施例8 :片劑的制備
[0087] 按實施例1方法制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:10的比例加入賦形劑，制 粒壓片。
[0088] 實施例9 : 口服液的制備
[0089] 按實施例1方法先制得提取物，按常規(guī)口服液制法制成口服液。
[0090] 實施例10 :膠囊劑或顆粒劑的制備
[0091] 按實施例1方法先制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:9的比例加入賦形劑制 成。
[0092] 實施例11 :注射液的制備
[0093] 按實施例1方法制得提取物，加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
[0094] 實施例12 :無菌粉針的制備
[0095] 按實施例1方法先制得提取物，溶于無菌注射用水中，攪拌使溶，用無菌抽濾漏斗 過濾，再無菌精濾，分裝于安瓿，低溫冷凍干燥后無菌熔封得粉針劑。
【主權項】
1. 一種裕民貝母提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制備：(a)以重量計，每 100份藥材包含干燥的裕民貝母80~90份和干燥的甘草10~20份，混合粉碎，用乙醇溶液 熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；(b)將步驟（a)所得乙醇提 取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到 石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用大 孔樹脂富集活性成分，先用5~15%乙醇沖洗7~9個柱體積除去大極性成分，再用65~ 75%乙醇洗脫11~13個柱體積，收集65~75%洗脫液，減壓濃縮即得。2. 根據(jù)權利要求1所述的提取物，其特征在于：步驟（a)所述用乙醇溶液熱回流提取 中乙醇溶液濃度為55~65 %。3. 根據(jù)權利要求2所述的提取物，其特征在于：步驟（a)所述用乙醇溶液熱回流提取 中乙醇溶液濃度為60%。4. 根據(jù)權利要求1所述的提取物，其特征在于：步驟（c)中所述大孔樹脂為AB-8型大 孔樹脂。5. 根據(jù)權利要求4所述的提取物，其特征在于步驟（c)為：正丁醇萃取物用水溶解，過 濾，用AB-8型大孔樹脂富集活性成分，先用10 %乙醇沖洗8個柱體積除去大極性成分，再用 70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮即得。6. 根據(jù)權利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法為： 色譜柱：Agilent Zorbax Extent_C18柱（4.6mmX250mm，5ym); 流動相：A為乙腈，B為0. 5%磷酸溶液； 梯度洗脫程序：〇.〇1 ~5min，A10%- 15%;5 ~10min，A15%-48%;10~25min，A48%- 78% ; 25 ~30min，A78%- 10% ; 流動相流速：1.OmL·minS 檢測波長：278nm; 柱溫：35°C; 進樣量：10μL。7. 藥物制劑，其特征在于：含有治療有效量的權利要求1所述的提取物和藥學上可接 受的載體。8. 權利要求1所述的提取物在制備治療血瘀疾病的藥物中的應用。9. 權利要求7所述的藥物制劑在制備治療血瘀疾病的藥物中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種裕民貝母提取物及其治療血瘀的醫(yī)藥用途，提取物制備方法包括：(a)以重量計，每100份藥材包含干燥的裕民貝母80～90份和干燥的甘草10～20份，混合粉碎，用乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；(b)將步驟(a)所得乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用大孔樹脂富集活性成分，先用5～15％乙醇沖洗7～9個柱體積除去大極性成分，再用65～75％乙醇洗脫11～13個柱體積，收集65～75％洗脫液，減壓濃縮即得。該提取物可以應用于血瘀疾病，開發(fā)成治療血瘀疾病的藥物。
【IPC分類】A61K36/8966, A61P7/02, G01N30/02
【公開號】CN105395815
【申請?zhí)枴緾N201511017316
【發(fā)明人】王賽波
【申請人】溫州統(tǒng)益生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年12月29日