一種治療血瘀的裕民貝母提取物及其醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取物領(lǐng)域，具體涉及一種治療血瘀的裕民貝母提取物及其制備 方法，該提取物可以應(yīng)用于制備治療血瘀疾病的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 裕民貝母為百合科植物裕民貝母FritillariayuminensisX.Z.Duan的鱗莖。又 名藍(lán)花貝母。
[0003] 植物原形態(tài)為多年生草本，高約30cm。鱗莖扁圓球形，直徑約1. 5cm。莖直立，無 毛，綠色，基部紫色。基部葉2枚對生，中部的輪生，上部的對生或互生，條狀披針形，長5~ 6. 5cm，先端卷曲，基部2枚先端急尖，不卷，寬2. 5~15mm?；?~6朵。苞片3枚，葉狀， 先端卷曲，花粉紅色或暗藍(lán)色；花被片6,外輪3枚矩圓形，長2~2. 2cm，寬7~8_，內(nèi)輪3 枚倒卵狀矩圓形，蜜腺窩在花被片背面凸出，雄蕊長約為花被片的一半，花藥基著；雌蕊稍 短于雄蕊，花柱向上部具微毛，柱頭幾不分裂。蒴果長1. 3cm，寬約2cm，具3~4mm寬翅?；?期4~5月，果期5~6月。生于海拔2200~2800m山中。主產(chǎn)新疆、以及蘇聯(lián)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種裕民貝母提取物，其制備方法和液相分析方法，含有 該提取物的藥物制劑及利用該提取物制備治療血瘀疾病的藥物的用途。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0006] -種裕民貝母提取物，該提取物由以下方法制備：(a)以重量計，每100份藥材包 含干燥的裕民貝母80~90份和干燥的甘草10~20份，混合粉碎，用乙醇溶液熱回流提取， 合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；(b)將步驟（a)所得乙醇提取濃縮液用水 稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用大孔樹脂富集活性 成分，先用5~15 %乙醇沖洗7~9個柱體積除去大極性成分，再用65~75 %乙醇洗脫 11~13個柱體積，收集65~75%洗脫液，減壓濃縮即得。
[0007] 進(jìn)一步地，步驟（a)所述用乙醇溶液熱回流提取中乙醇溶液濃度為55~65%。
[0008] 進(jìn)一步地，步驟（a)所述用乙醇溶液熱回流提取中乙醇溶液濃度為60%。
[0009] 進(jìn)一步地，步驟（C)中所述大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟（c)為：正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用AB-8型大孔樹脂富集活 性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積除去大極性成分，再用70 %乙醇洗脫12個柱體積， 收集70%洗脫液，減壓濃縮即得。
[0011] 為了能夠通過建立HPLC指紋圖譜的方法控制不同批次制備的提取物的批間差 異，所述提取物的液相分析方法為：
[0012] 色譜柱：AgilentZorbaxExtent_C18 柱（4. 6mmX250mm，5μm);
[0013] 流動相：A為乙腈，B為0. 5%磷酸溶液；
[0014] 梯度洗脫程序：0· 01 ~5min，A10%- 15% ;5 ~lOmin，A15%-48% ;10 ~ 25min，A48%- 78% ;25 ~30min，A78%- 10%;
[0015] 流動相流速：1.OmL·minS
[0016] 檢測波長：278nm;
[0017] 柱溫：35°C;
[0018] 進(jìn)樣量：10μL。
[0019] 藥物制劑，含有治療有效量的所述提取物和藥學(xué)上可接受的載體。
[0020] 所述的提取物在制備治療血瘀疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0021] 所述的藥物制劑在制備治療血瘀疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明提取物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物制劑的形式使用。
[0023] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明裕民貝母提取物，其余為藥物學(xué)上可接受 的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0024] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0025] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明通過對干燥的裕民貝母和甘草進(jìn)行提取、除雜、富集處理， 能得到具有治療血瘀疾病的提取物；本發(fā)明提供的液相分析方法可以用于建立該提取物的 指紋圖譜，用于控制不同批次制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0026] 圖1為裕民貝母提取物HPLC液相圖譜。
【具體實施方式】
[0027] 下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0028] 實施例1 :裕民貝母提取物①制備（85份裕民貝母，15份甘草）
[0029] 藥材來源：裕民貝母和甘草購自安徽亳州中藥材市場。
[0030] 主要試劑：食品級乙醇購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；醫(yī)藥級AB-8大孔樹脂購 自天津波鴻樹脂有限公司；乙腈為HPLC級，購于TEDIA;85 %磷酸為HPLC級，購于TEDIA; 色譜用純凈水為哇哈哈純凈水。
[0031] 制備方法：將8. 5kg干燥裕民貝母和1. 5kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 熱回流提取（25LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得裕民貝母提取物約150g。
[0032] 實施例2:裕民貝母提取物②制備（80份裕民貝母，20份甘草）
[0033] 制備方法：將8. 0kg干燥裕民貝母和2. 0kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 熱回流提取（25LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得裕民貝母提取物約150g。
[0034] 實施例3:裕民貝母提取物③制備（90份裕民貝母，10份甘草）
[0035] 制備方法：將9. 0kg干燥裕民貝母和1. 0kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 熱回流提?。?5LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得裕民貝母提取物約150g。
[0036] 實施例4:裕民貝母提取物④制備（75份裕民貝母，25份甘草）
[0037] 制備方法：將7. 5kg干燥裕民貝母和2. 5kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 熱回流提取（25LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得裕民貝母提取物約150g。
[0038] 實施例5:裕民貝母提取物⑤制備（95份裕民貝母，5份甘草）
[0039] 制備方法：將9. 5kg干燥裕民貝母和0. 5kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 熱回流提取（25LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙 醇提取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的 正丁醇（3LX3次）萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體 積1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70% 乙醇洗脫12個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得裕民貝母提取物約150g。
[0040] 實施例6 :液相色譜分析
[0041] 供試品溶液配制：取實施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL10 %乙腈水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續(xù)加10 %乙腈水溶液定容。分析方法如 下：
[0042] 高效液相色譜儀：Agilent1260,二元栗；
[0043] 色譜柱：AgilentZorbaxExtent_C18柱（4. 6mmX250mm，5μm);
[0044] 流動相：A為乙腈，B為0· 5%磷酸溶液；
[0045] 梯度洗脫程序：0· 01 ~5min，A10% - 15% ;5 ~lOmin，A15% - 48% ;10 ~ 25min，A48%- 78% ;25 ~30min，A78%- 10% ;
[0046] 流動相流速：1.OmL·minS
[0047]檢測波長：278nm;
[0048] 柱溫：35°C;
[0049] 進(jìn)樣量：10μL。