治療流感的聯(lián)合療法
【專利說明】治療流感的聯(lián)合療法
[0001] 本申請為分案申請，原申請的申請日為2009年5月7日，申請?zhí)枮?00980119926. X(PCT/CN2009/000493)，發(fā)明名稱為"治療流感的聯(lián)合療法"。
[0002] 相關(guān)申請的交叉引用
[0003] 本申請要求BojianZheng及Kwok-YungYuen在2008年5月23號提交的美國臨 時專利申請?zhí)?1/055, 573的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益，及該申請在允許情況下通過引用引入其全部 內(nèi)容。 發(fā)明領(lǐng)域
[0004] 本發(fā)明一般而言涉及治療病毒感染的組合物及方法，所述病毒感染特別是流感病 毒感染，尤其是禽流感。
[0005] 發(fā)明背景
[0006] 自1997年首次報道以來，患者患有因甲型流感H5N1病毒（influenzaA/ H5Nlvirus)引起的肺炎和牽涉多個器官的患者的死亡率在45 %至81 %間變化 (Yuen，K.Y.等人，Lancet351:467 - 471(1998);Beigel等人，NEnglJMed353:1374 -1385(2005))。隨后可用的神經(jīng)氨酸酶抑制劑奧賽米韋（Oseltamivir)并沒有減低其死亡 率。奧賽米韋是用于治療及預(yù)防甲型流感病毒和乙型流感病毒兩者的抗病毒藥。奧賽米 韋作為流感病毒神經(jīng)氨酸酶的過渡態(tài)類似物抑制劑而發(fā)揮作用，其防止病毒體后代從感 染的細胞脫出。奧賽米韋是第一種商業(yè)研發(fā)的口服活性神經(jīng)氨酸酶抑制劑。它是在肝臟 水解成活性代謝物的前藥，游離羧酸奧賽米韋（GS4071)。奧賽米韋目前以商標名特敏#鼻 ? (Tamiflu?)在市場上出售。
[0007] 患者使用奧賽米韋治療后出現(xiàn)的不良反應(yīng)歸結(jié)于抗病毒給藥的不足，或歸結(jié)于 病毒誘導(dǎo)細胞因子風(fēng)暴而導(dǎo)致過多的局部或全身性炎癥反應(yīng)及多個器官衰竭（Peiris，J. S.等人，Lancet363:第617 - 669頁（2004))。對抗病毒藥的不良反應(yīng)也可以是下列原 因?qū)е碌模呵萘鞲谐跗诜翘禺愋员憩F(xiàn)導(dǎo)致治療開始延遲、呈遞時初始病毒負載高、奧賽米 韋在重病患者體內(nèi)的口服生物利用度差、缺乏神經(jīng)氨酸酶抑制劑的靜脈注射制劑以及治療 中出現(xiàn)抗藥性（Wong,S.S.及Yuen,K.Y·，Chest129:156 - 168(2006);deJong,M.D.等 人，（2006) 12:1203 - 1207(2006))。使用抗炎性劑量皮質(zhì)類固醇來控制過度炎癥的嘗試 與諸如高血糖癥或醫(yī)院感染這樣的嚴重副作用有關(guān)，而這些嘗試對存活率沒有任何改善 (Carter，MJ.，JMedMicrobiol56:875 - 883(2007))。此外，病毒攻擊后，比起野生型小 鼠，TNF-a、IL-6或CC趨化因子配體2敲除小鼠或類固醇治療的野生型小鼠沒有顯著的存 活優(yōu)勢。（Salomon，R.等人ProcNatlAcadSciUSA104:12479 - 12481(2007))。如果高 病毒載量及其匹配程度的過多炎癥在這種高度致命性感染的發(fā)病機理和結(jié)果中都重要，那 么可以解釋這個自相矛盾的說法。
[0008] 當(dāng)前，如果患者在病發(fā)48小時內(nèi)給予治療，則抗病毒藥如奧賽米韋對于H5N1禽流 感患者是有效的。然而，如果患者在病發(fā)48小時后才接受該抗病毒治療，則患者的死亡率 超過70%。盡管奧賽米韋在小鼠模型中非常有效，但是人類的病例死亡率仍然很高，而治療 開始延遲看來對患者存活具有有害的影響。因此，由于高死亡率，迫切需要尋找對人類甲型 流感H5N1病毒感染有效的治療策略。
[0009]因此，本發(fā)明的一個目的是提供治療病毒感染的藥物組合物和方法，所述的病毒 感染特別是流感病毒感染。
[0010] 本發(fā)明的另一目的是提供提高感染了H5N1禽流感患者的存活率的藥物組合物和 方法。
[0011] 發(fā)明概述
[0012] 本申請?zhí)峁┲委熞环N或多種流感癥狀的藥物組合物和方法，所述流感優(yōu)選是由于 感染甲型禽流感（H5N1)所致的。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在感染后24、48或甚至72小時給藥時，與 單獨施用神經(jīng)氨酸酶抑制劑相比，施用神經(jīng)氨酸酶抑制劑和兩種免疫調(diào)節(jié)劑的組合提高受 治療者的存活率。一個實施方案提供一種藥物組合物，其包含用以抑制或減少流感病毒 從受治療者受感染細胞芽生的有效量的扎那米韋（zanamivir)、其藥學(xué)上可接受的鹽或前 藥，聯(lián)合用以抑制或減少一種或多種炎癥癥狀的有效量的塞來考昔（celecoxib)和美沙拉 秦（mesalazine)或它們藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。其它的神經(jīng)氨酸酶抑制劑包括（但 不限于）奧賽米韋、培拉米韋（peramivi)、或它們藥學(xué)上可接受的鹽或前藥?？墒褂闷渌?或另外的抗炎藥，例如過氧化物酶體增殖因子激活受體α和γ(PPARa或PPARy)的配 體及其它C0X-2抑制劑。代表性的PPARa激活劑包括（但不限于）：貝特類，諸如吉非 貝齊（gemgiborzil)(例如Lopid? )、米扎貝特（bezafirate)(例如Bezalip? )、環(huán)丙 貝特（ciprofibrate)(例如Modalim? )、氯貝丁酯（clofibrate)、renofibrate(例如 TriCor?)或以上激活劑的組合。
[0013] 另一實施方案提供如下治療流感（優(yōu)選由于感染禽流感甲型（H5N1)所致的流感） 的方法：通過向流感病毒感染的個體施用用以抑制或減少流感病毒從受治療者受感染細胞 芽生的有效量的神經(jīng)氨酸酶抑制劑，以及用以有效減少或抑制受治療者一種或多種炎癥癥 狀的有效量的至少兩種免疫調(diào)節(jié)，來治療流感。
[0014] 附圖簡述
[0015] 圖1A是攻擊后4小時用以下藥物或?qū)φ罩委熜∈螅?只小鼠/組）的存活率（百 分比）與攻擊后天數(shù)關(guān)系的線圖：扎那米韋（Z)(〇）、塞來考昔（C) (Λ)、美沙拉秦（M) (□)、吉非貝齊（G)(來）、塞來考昔/美沙拉秦（C+M) ( ▲)、塞來考昔/吉非貝齊（C+G) (魯）、或磷酸緩沖鹽水（"PBS"）（對照）（)。圖1B是攻擊后48小時用以下藥物或?qū)?照治療21天的小鼠（10-15只小鼠/組）的存活率（百分比）與攻擊后天數(shù)關(guān)系的線圖： 扎那米韋（Z)(〇）、扎那米韋/塞來考昔（Z+C) (Λ)、扎那米韋/美沙拉秦（Z+M) ( □)、扎 那米韋/塞來考昔/美沙拉秦（Z+C+M) ( )或PBS( ?)。圖1C是攻擊后48小時用以下 藥物或?qū)φ罩委?1天或直至死亡的小鼠的體重（克+/-SD)與攻擊后天數(shù)關(guān)系的線圖：扎 那米韋（Ζ)(〇）、扎那米韋/塞來考昔（Z+C) (Λ)、扎那米韋/美沙拉秦（Ζ+Μ) ( □)以及 扎那米韋/塞來考昔/美沙拉秦（Z+C+M) ( )和PBS( ?)。
[0016]圖2Α是在用單獨扎那米韋（Ζ)、扎那米韋/塞來考昔/美沙拉秦（Z+C+M)或PBS 治療的受感染小鼠中的病毒滴度與攻擊后天數(shù)關(guān)系的條線圖；其中治療在攻擊后48小時 開始，病毒滴度以TCID5。測量。檢測限（不可檢測）是1:20。圖2Β是圖2Α的小鼠的病毒 拷貝數(shù)/100β-肌動蛋白與攻擊后天數(shù)關(guān)系的條線圖。
[0017] 圖3Α-3Ρ是顯示氣管-肺灌洗液中促炎性細胞因子、趨化因子、前列腺素及白蛋白 的pg/ml的條線圖。在指定天數(shù)從用Z、Z+C+M治療的小鼠、未治療對照（PBS)或未感染（正 常）小鼠收集的氣管-肺灌洗液中的IL-1 (圖3A、3I)、IL-6(圖3B、3J)、IFN-y(圖3C、K)、 TNF-α(圖 3D、3L)、MIP-1 (圖 3E、3N)、PGE2(圖 3F、3M)、白細胞三烯（圖 3G、30)及白蛋白 (圖3H)的濃度通過ELISA測定并且在不同組間進行比較。也通過測量小鼠氣管-肺灌洗 液中彈性蛋白酶活性而評定肺損傷（圖3P)。
[0018]圖4A是在用單獨扎那米韋（Z)、扎那米韋/塞來考昔/美沙拉秦（Z+C+M)或PBS 治療的小鼠每10, 〇〇〇個血細胞中CD3+/CD4+T淋巴細胞數(shù)目與攻擊后天數(shù)關(guān)系的條線圖。 圖4B是在用單獨扎那米韋（Z)、扎那米韋/塞來考昔/美沙拉秦（Z+C+M)或PBS治療的小 鼠每10, 000個血細胞中⑶3+/⑶8+T淋巴細胞數(shù)目與攻擊后天數(shù)關(guān)系的條線圖。圖4C是 每100個β-肌動蛋白的病毒拷貝數(shù)與通過細胞病變TCID5(J|〗定測量的中和抗體效價關(guān)系 的條線圖。
[0019]發(fā)明詳述
[0020] I.定義
[0021] 除非另外指明，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技 術(shù)人員一般理解的含義具有。本文提及的所有出版物、專利申請、專利及其它參考文獻的全 部內(nèi)容都通過引用引作參考。在沖突情況下，以本申請說明書（包括定義）為準。此外，材 料、方法和實施例僅是例證性的，并不意欲為限制性的。
[0022] 術(shù)語"有效量"或"治療有效量"意指足以提供治療流感感染、特別是甲型禽流感 (H5N1)感染的劑量，或者足以提供所需藥理和/或生理作用（例如降低死亡率或降低一種 或多種癥狀的嚴重性）的劑量。確切的劑量會根據(jù)諸如受治療者依賴性變量（例如年齡、 免疫系統(tǒng)健康狀況等）以及給藥途徑的各種因素而變化。
[0023] 本文使用的"藥學(xué)上可接受的"意指在合理醫(yī)學(xué)判斷范疇里，適用于與人類或動物 組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應(yīng)或其它問題或與合理益險比匹配的并發(fā)癥的那些 化合物、材料、組合物和/或劑量形式。
[0024] 術(shù)語"前藥"意指化學(xué)轉(zhuǎn)化為本身無活性的衍生物的活性藥物；所述衍生物在到達 作用位置前或后，在機體內(nèi)通過化學(xué)或酶的攻擊而轉(zhuǎn)化為母藥。前藥在轉(zhuǎn)化為母藥前經(jīng)常 (盡管不一定）是藥理學(xué)上無活的。
[0025]II.藥物組合物
[0026] 本申請?zhí)峁┌环N或多種神經(jīng)氨酸酶抑制劑和聯(lián)合的一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑 的藥物組合物。優(yōu)選的藥物組合物具有用以抑制或減少流感病毒從受治療者受感染細胞芽 生的有效量的神經(jīng)氨酸酶抑制劑、和聯(lián)合的用以減少受治療者炎性反應(yīng)的有效量的一種或 多種（最好至少兩種）抗炎藥（最好是非留類抗炎藥）。
[0027]A.神經(jīng)氨酸酶抑制劑
[0028] 神經(jīng)氨酸酶抑制劑是一類以流感病毒為目標的抗病毒藥劑，它們的作用方式由阻 斷神經(jīng)氨酸酶蛋白的功能組成，從而防止病毒從寄主細胞芽生（繁殖）。流感神經(jīng)氨酸酶以 流感病毒表面的蘑菇形突起存在。它具有由四個共面的和大致球形的亞基、及嵌入病毒膜 內(nèi)部的疏水區(qū)域組成的頭部。該酶包含一條面向血細胞凝集素抗原反方向的多肽鏈。該多 肽鏈的組成為一條有六個保守氨基酸、后接親水性可變氨基酸的單鏈。
[0029] 神經(jīng)氨酸酶具有幫助提高病毒從細胞釋放的效率的功能。神經(jīng)氨酸酶在從受感染 細胞表面的糖部分剪切末端神經(jīng)氨酸（也稱做唾液酸）殘基。這促進子代病毒從受感染細 胞釋放。神經(jīng)氨酸酶也從病毒蛋白剪切唾液酸，防止病毒聚集。施用神經(jīng)氨酸酶的化學(xué)抑 制劑是限制病毒感染的嚴重程度和傳播的療法。
[0030] 神經(jīng)氨酸酶也通過從寄主糖蛋白剪切唾液酸及允許病毒進入寄主（T-噬菌體、巨 噬細胞等）而在流感發(fā)病的初始起作用。
[0031] 代表性的神經(jīng)氨酸酶抑制劑包括（但不限于）奧賽米韋、扎那米韋和培拉米韋。扎 那米韋是一種用于治療和預(yù)防甲型流感病毒和乙型流感病毒的神經(jīng)氨酸酶抑制劑。扎那米 韋是商業(yè)研發(fā)的第一種神經(jīng)氨酸酶抑制劑。奧賽米韋是商業(yè)研發(fā)的第一種口服活性神經(jīng)氨 酸酶抑制劑。奧賽米韋是一種前藥，它在肝臟水解為活性代謝物一奧賽米韋（GS4071)的游 離羧酸鹽。培拉米韋是一種仍在開發(fā)中的試驗性抗病毒劑。這些神經(jīng)氨酸酶抑制劑是商用 的。奧賽米韋以商標名Tamiflu?出售。扎那米韋以商標名Relenza?出售。培拉米韋可 以從BiocrystPharmaceuticals買到。
[0032] B.免疫調(diào)節(jié)劑
[0033] 對于流感治療的優(yōu)選組合物包括一種或多種免疫調(diào)節(jié)劑。免疫調(diào)節(jié)劑包括免疫抑 制劑或增強劑及抗炎藥。優(yōu)選的免疫調(diào)節(jié)劑是抗炎藥。所述抗炎藥可是非留類的、留類的、 或其中兩者的混合。
[0034] 1.非甾類抗炎藥
[0035] 優(yōu)選抗炎藥是非留類抗炎（NSAID)劑。非留類抗炎藥的典型實例包括（沒有限 制）：苯并噻嗪類（oxicams)，如啦羅昔康（piroxicam)、伊索昔康（isoxicam)、替諾昔康 (teoxicam)、舒多昔康（sudoxicam);水楊酸類（salicylates)，如阿斯匹林（aspirin)、雙 水楊酸酯（disalcid)、貝諾酯（benorylate)、痛炎寧（trilisate)、痛熱寧（safapryn)、 solprin、二氟尼柳（diflunisal)和芬度柳（fendosal);乙酸衍生物，如雙氯芬酸 (diclofenac)、芬氯酸（fenclofenac)、諱甲新（indomethacin)、舒林酸（sulindac)、托美 汀（tolmetin)、伊索克酸（isoxepac)、咲羅芬酸（furofenac)、硫平酸（tiopinac)、齊多美 辛（zidometacin)、阿西美辛（acematacin)、芬替酸（fentiazac)、佐美酸（zomepirac)、環(huán) 氣諱酸（c