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一種治療產(chǎn)后惡露不行、少腹疼痛的中藥顆粒劑及其制備方法_2

文檔序號:9606132閱讀:來源:國知局
時,適當降低功率。提取的揮發(fā) 油以膠體磨法制備混合揮發(fā)油-β-環(huán)糊精包合物,,用膠體磨于55°C包合40min,研磨液冷 藏24h,抽濾后的濾渣于55°C干燥,粉碎即得混合揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物。提取揮發(fā)油 后的殘渣用10倍水煎煮兩次,合并水煎液,濾過,濾液冷藏,吸取上清液經(jīng)過管式離心機離 心2次,離心速度為3000r/min,時間lOmin,離心上清液經(jīng)過微孔濾膜(0. 45μm)過濾,然 后采用5-10萬分子量級的超濾膜進行梯度過濾分離,得到中藥純化液,減壓濃縮至相對密 度1. 10 (60°C)的清膏,取清膏加入β-環(huán)糊精包合物,混合均勻成混懸液,備用,臨用用 CMC-Na制成相應的濃度);八珍益母丸(云南白藥集團麗江藥業(yè)有限公司);Waters高 效液相色譜儀(Waters2695SeparationsModule,Waters2996DAD檢測器)含在線真空 脫氣機、自動進樣器、四元梯度泵、柱溫箱。促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)、黃體生成 素LH放射免疫分析測定盒。5 -羥色胺(5 -HT)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE) 標準品為美國Sigma公司產(chǎn)品。
[0012] 2實驗方法 2.1動物造模和給藥除正常對照組外,其它大鼠用戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻 醉,腹位固定,參照文獻的方法摘除雙側卵巢去勢造模,正常對照組大鼠進行手術暴露但卵 巢不予切除,然后雙層縫合手術傷口,術后連續(xù)3d注射青霉素以預防感染。術后第5天 進行陰道涂片,每日一次,連續(xù)5d,以確定卵巢完全切除。術后第9天開始灌胃給藥,新 生化顆粒高、中、低劑量組分別ig11.2g生藥·kg1 (相當于臨床劑量12. 5倍)、5.6g 生藥·kg1 (相當于臨床劑量6.25倍)、2. 8g生藥·kg1相當于臨床劑量3.12倍);陽 性藥八珍益母丸igl.25g·kg1 (相當于臨床劑量6.25倍),每日一次,連續(xù)給藥14d; 正常對照組和模型對照組分別灌胃等體積蒸餾水(10ml·kg4。
[0013] 2. 2指標檢測 2. 2.1E2、FSH、LH的測定末次給藥后24h,各組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉,腹主動脈取 血,離心分離血清,按藥盒說明書用放免法測定E2、FSH、LH; 2. 2. 2 5 -HT、NE、DA含量的測定將取血后的動物迅速斷頭取下丘腦,用化學熒光 法測定下丘腦神經(jīng)遞質5 -HT、NE、DA含量。
[0014] 2. 2. 3臟器系數(shù)的測定動物處死后解剖,取子宮和腎上腺稱重,計算臟器系數(shù)。
[0015] 2. 2. 4雌激素(E2)、脂質過氧化物(LP0)、超氧化物歧化酶(S0D)活性、谷胱甘肽 過氧化物酶(GSH-Px)活性測定雌激素(E2)水平測定采用免疫化學發(fā)光法。脂質過氧化 物(LP0)水平測定采用TBA比色法,結果以脂質過氧化物的穩(wěn)定終產(chǎn)物丙二醛(MDA)濃度 (nmol/ml)表示。超氧化物歧化酶(S0D)活性測定測定采用化學發(fā)光法。谷胱甘肽過氧化 物酶(GSH-Px)活性測定采用DTNB直接顯色法。
[0016] 2. 3統(tǒng)計方法所得實驗數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行方差分析,數(shù)據(jù)用 ?。和羢表示,兩組間比較采用LSD-t檢驗。
[0017] 3 結果 3. 1新生化顆粒對更年期大鼠血清E2、FSH、LH的影響與正常對照組比較,去卵巢模型 大鼠血清E2水平顯著降低、FSH、LH水平也顯著升高,新生化顆粒高、中、低劑量和陽性對照 組均能明顯升高去卵巢大鼠E2水平,新生化顆粒高、中劑量組能明顯降低去卵巢大鼠血清 FSH、LH水平。(見表2) 表2新生化顆粒對更年期模型大鼠血清E2、FSH、LH的影響(f. ±s,n=12)
注:與正常組比較,#P〈 0.05, ##P〈0.01,與模型組比較,*P〈0.05, #P〈 0.01 3. 2新生化顆粒對更年期大鼠下丘腦5-HT、NE、DA的影響與正常對照組比較,去卵巢 模型大鼠下丘腦5-HT含量顯著升高,NE、DA含量顯著降低(P〈0. 01),提示造模成功,新生化 顆粒高、中、低劑量組能明顯降低去卵巢大鼠下丘腦5-HT含量,其中高劑量組和中劑量組 可以顯著增加NE含量,高中低三個劑量組均能顯著增加DA的含量。(見表3) 表3新生化顆粒對更年期模型大鼠5-HT、NE、DA的影響(g±s,n=12)
注:與正常組比較,#P〈 0.05, ##P〈0.01,與模型組比較,*P〈0.05, #P〈 0.01 3. 3新生化顆粒對更年期大鼠臟器系數(shù)的影響與正常對照組比較,去卵巢模型大鼠子 宮系數(shù)和腎上腺系數(shù)明顯降低,新生化顆粒高劑量組和中劑量組能明顯增加去卵巢大鼠子 宮系數(shù);對腎上腺系數(shù)各給藥組較模型組有增加的趨勢,但結果沒有顯著差異(P>〇. 05)。 (見表4)。
[0018] 表4新生化顆粒對去卵巢更年期大鼠臟器系數(shù)的影響(i±s,n=12)
注:與正常組比較,#P〈 0.05, ##P〈0.01,與模型組比較,*P〈0.05, #P〈 0.01 3. 4新生化顆粒對更年期大鼠血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白濃度的影響與正常對照 組比較,去卵巢模型大鼠血清總蛋白明顯升高,與模型組比較,新生化顆粒高劑量組、中、低 劑量組能降低去卵巢大鼠血清中總蛋白,但結果沒有顯著差異(P>〇. 05),見表5。
[0019] 表5新生化顆粒對對更年期大鼠血清蛋白代謝的影響
注與模型組比較,*P〈0.05, #P〈 0.01 3. 5新生化顆粒對更年期大鼠免疫球蛋白的影響與正常對照組比較,去卵巢模型大鼠 子宮系數(shù)血清IgG明顯降低,與模型組比較,新生化顆粒高劑量組和中劑量組能明顯增加 去卵巢大鼠血清IgM;對血清IgA各給藥組較模型組有增加的趨勢,但結果沒有顯著差異 (Ρ>0·05)。(見表 6)。
[0020] 表6新生化顆粒對大鼠免疫球蛋白的影響(? 土s,n=12)
注與模型組比較,*P〈0.05, #P〈 0.01 3. 6新生化顆粒對更年期大鼠E2水平的影響更年鼠模型組與正常對照組比較,E2水 平明顯降低(P〈〇. 01)。各用藥組E2水平均有所提高(P〈0. 05),其中以新生化顆粒高中劑 量組效果較明顯。見表7。
[0021] 表7新生化顆粒對更年期大鼠E2水平的影響
與正常組比較,#P〈 0.05, ##P〈0.01,與模型組比較,*P〈0.05, #P〈 0.01 3. 7新生化顆粒對更年期大鼠SOD、GSH-Px及MDA的影響模型組大鼠MDA值較正常組 明顯增高(P〈〇. 05),SOD值顯著降低(P〈0. 01)、GSH-Px值明顯降低(P〈0. 05);而各給藥組 均具有可以提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA濃度作用(P〈0. 05或P〈0. 01),以新生化顆粒 高中劑量組作用最為顯著,見表8。
[0022] 表8新生化顆粒對更年期大鼠SOD、GSH-Px及MDA的影響
與正常組比較,#P〈 0.05, ##P〈0.01,與模型組比較,*P〈0.05, #P〈 0.01 4結論 新生化顆??梢跃徑飧昶诰C合征,其療效可能是通過調節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)和調節(jié)神經(jīng) 系統(tǒng)來實現(xiàn)的:使血清E2含量上升,同時使得血清FSH和LH含量下降,進而延緩下丘 腦-垂體-卵巢軸衰老,又可以明顯降低血中升高的5-HT,升高已經(jīng)降低的NE、DA水平, 以達到治療或緩解更年期綜合征的療效。新生化顆粒高中劑量組能顯著升高血清IgM,新生 化顆粒高劑量組組能顯著升高血清IgG,各劑量組均可以升高血清IgA,提示其具有免疫調 節(jié)的作用,表明新生化顆粒還可以提高更年期婦女免疫力。實驗表明模型組大鼠組脂質過 氧化物(LP0)的穩(wěn)定終產(chǎn)物丙二醛(MDA)濃度較對照組顯著上升,SOD、GSH-Px活性顯著 降低,說明更年期組因內(nèi)分泌改變、有關器官逐漸衰老、并進而出現(xiàn)脂質過氧化作用增加、 自由基清除酶類活性下降等變化。而新生化顆粒能使LP0降低(P〈0. 01或0. 05),
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