后再將濕潤膨脹后的藥物樣品拌松弄散，然后用不銹鋼勺盛粉，均勻的裝入 滲漉筒，裝10-12厘米厚，用T型棒壓勾，再按上述操作，一層一層的裝入，適當(dāng)加壓，藥粉 填裝不得超過滲漉筒的2/3高處；藥粉面上蓋不銹鋼孔板壓牢，打開滲漉筒下面的放料閥， 并放一容器，然后緩緩加入70%乙醇液；待排出藥粉粉粒之間的空氣，并有乙醇流出約20L 左右，關(guān)閉放料閥，蓋上漉筒、浸漬24小時(shí)，然后開放料閥進(jìn)行滲漉，控制滲漉速度一般為 l〇〇〇g藥材每分鐘流出2~3ml，濾液放入貯液缸內(nèi)，并將排空時(shí)的乙醇液倒入貯液缸；將滲 濾液合并靜置。
[0084] 再取其他原料遠(yuǎn)志1500g，柴胡1500g，合歡皮1500g，香附1500g，玉竹1500g，益母 草1500g，白術(shù)1500g，百合1500g，生地1500g，當(dāng)歸1500g，梔子1500g，白芍1500g，珍珠母 1500g，茯神1500g，浮小麥1500g，郁金1500g，酸率仁1500g，柏子仁1500g，石菖蒲1500g， 夜交藤1500g，洗凈晾干，于70°C烘箱中，烘8-12h，取出置于干燥箱內(nèi)冷卻，用粉碎機(jī)粉碎 過80-100目篩；將過篩的顆粒物浸泡水中12小時(shí)，然后放入提取罐加熱煮沸1小時(shí)，過濾， 濾液備用；濾渣加水，第二次加熱，煮沸45分鐘，過濾，濾液備用；濾渣再加水，第三次加熱 煮沸半小時(shí)，過濾，加熱濃縮至膏狀，靜置備用。將膏狀提取物置于70-90 %乙醇中浸泡1-2 小時(shí)，在水浴鍋內(nèi)加熱到60°C -70°C，浸提2h，每lOmin攪拌一次，用紗布過濾，殘?jiān)屑尤?50-60%乙醇，60°C _70°C繼續(xù)浸提2h，每lOmin攪拌一次，紗布過濾，合并浸提液，濃縮成糊 狀濾液。
[0085] 將兩種提取液置入減壓濃縮罐內(nèi)，減壓回收乙醇，濃縮至藥液濃度為0. lg生藥/ mL，抽濾至濾液的相對(duì)密度為20°C時(shí)1. 06 ;上述濾液經(jīng)體積為10L的大孔吸附樹脂柱吸附 后，用10倍樹脂柱體積的去離子水或蒸餾水洗脫，再用5倍樹脂柱體積的95%乙醇洗脫，收 集乙醇洗脫液，去除溶劑，調(diào)和蜂蜜，紫外線消毒殺菌后裝瓶。
[0086] 具體實(shí)施例3 :
[0087] 6_8月中旬夏枯草果糖呈掠紅色時(shí)米收，除去雜質(zhì)，曬干，生用，大概4500g。用粉 碎機(jī)粉碎過80-100目篩；將過篩的顆粒物浸泡水中12小時(shí)，然后放入提取罐加熱煮沸1小 時(shí)，過濾，濾液備用；濾渣加水，第二次加熱，煮沸45分鐘，過濾，濾液備用；濾渣再加水，第 三次加熱煮沸半小時(shí)，過濾，加熱濃縮至膏狀，靜置備用。將膏狀提取物置于70-90 %乙醇 中浸泡1-2小時(shí)，在水浴鍋內(nèi)加熱到60°C -70°C，浸提2h，每lOmin攪拌一次，用紗布過濾， 殘?jiān)屑尤?0-60%乙醇，60°C -70°C繼續(xù)浸提2h，每lOmin攪拌一次，紗布過濾，合并浸提 液，濃縮成糊狀濾液，待用。
[0088] 再取其他原料遠(yuǎn)志1100g，柴胡1200g，合歡皮1100g，香附1100g，玉竹1100g，益母 草1100g，白術(shù)1200g，百合1100g，生地1100g，當(dāng)歸1100g，梔子1100g，白芍1200g，珍珠母 1100g，茯神1100g，浮小麥1200g，郁金1100g，酸率仁1100g，柏子仁1100g，石菖蒲1100g， 夜交藤1100g，取其他原料洗凈去雜，泡入5-10倍量的乙醇中，將藥粉置有蓋不銹鋼桶內(nèi)， 加70%乙醇液，質(zhì)量為粗粉的0. 8-1倍，攪拌均勻，濕潤密閉放置1小時(shí)以上，使充分膨脹； 將滲漉筒底部濾板用紗布袋包裹鋪平后再將濕潤膨脹后的藥物樣品拌松弄散，然后用不銹 鋼勺盛粉，均勻的裝入滲漉筒，裝10-12厘米厚，用T型棒壓勻，再按上述操作，一層一層的 裝入，適當(dāng)加壓，藥粉填裝不得超過滲漉筒的2/3高處；藥粉面上蓋不銹鋼孔板壓牢，打開 滲漉筒下面的放料閥，并放一容器，然后緩緩加入70%乙醇液；待排出藥粉粉粒之間的空 氣，并有乙醇流出約20L左右，關(guān)閉放料閥，蓋上漉筒、浸漬24小時(shí)，然后開放料閥進(jìn)行滲 漉，控制滲漉速度一般為l〇〇〇g藥材每分鐘流出2~3ml，濾液放入貯液缸內(nèi)，并將排空時(shí)的 乙醇液倒入貯液缸；將滲濾液合并靜置。
[0089] 將上述步驟得到的兩種置入雙效真空濃縮器中，濃縮至90°C時(shí)相對(duì)密度為1. 05 的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時(shí)；將冷藏液加0. 3%的助濾劑硅藻土，過濾，濾液再置 入雙效真空濃縮器中，濃縮至每lml含0. lg生藥量；然后加糊精，紫外線殺菌后裝瓶。
[0090] 試驗(yàn)例1 :本發(fā)明急性毒性試驗(yàn)
[0091] -、試驗(yàn)材料：
[0092] 動(dòng)物：昆明種小鼠，體重21_24g，雌雄各半，山東大學(xué)生物試驗(yàn)室育種。藥物：本發(fā) 明口服液（按實(shí)施方法2制備）。
[0093] 二、方法：
[0094] 1、LD50計(jì)算：采用改良寇氏法，將小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，將 栓劑溶解，配成最大濃度，按小鼠最大允許容量給藥，所給劑量按生藥量依次為18,14. 4， 11. 5,9. 2, 7. 4 (g. kg-Ι)，在動(dòng)物禁食（不禁水）18小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小 時(shí)），每次〇. 5ml，觀察動(dòng)物死亡情況。
[0095] 2、最大耐受劑量測(cè)定（MTD值）：取小鼠20只，雌雄各10只。將栓劑加蒸餾水溶解， 配成最高濃度，按動(dòng)物的最大耐受量，以注射灌喂器能抽動(dòng)為準(zhǔn)。在動(dòng)物禁食（不禁水）18 小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小時(shí)），每次〇. 5ml (每ml含生藥0. 36g)，總藥量為18g 生藥/kg. d，相當(dāng)臨床成人50Kg體重用量的300倍。給藥后連續(xù)觀察7天。
[0096] 三、試驗(yàn)結(jié)果：
[0097] 在LD50計(jì)算中當(dāng)用最大允許濃度和最大允許容量給予小鼠時(shí)（18g/Kg. d)，未見 小鼠死亡，即未測(cè)出LD50,只可求最大耐受劑量，在7天觀察期中，動(dòng)物其食欲、活動(dòng)、毛色、 精神狀態(tài)等皆正常，發(fā)育正常，未見有死亡。即選用相當(dāng)于臨床劑量的300倍藥量，并無不 良反應(yīng)發(fā)生，表明急性毒性極小，MTD > 18g/Kg. d。
[0098] 試驗(yàn)例2 :本發(fā)明急性皮膚刺激試驗(yàn)報(bào)告
[0099] 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簷z測(cè)本發(fā)明對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚的刺激/腐蝕作用和強(qiáng)度
[0100] 2、材料和方法：
[0101] 2. 1.受試物：本發(fā)明口服液（按實(shí)施例方法2制得）
[0102] 2. 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：壹級(jí)大耳白種家兔，10只，雌性，體重2. 1-2. 3kg;由青島大學(xué)醫(yī)學(xué) 院生物系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；
[0103] 2. 3.試驗(yàn)方法：
[0104] 選用皮膚完好的健康家兔10只，于試驗(yàn)前24小時(shí)將其背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去 毛面積左、右各約4cmX4cm。試驗(yàn)時(shí)取受試物0. 2ml涂于2. 5cmX2. 5cm的二層紗布上，敷 貼于一側(cè)去毛皮膚表面，油紙覆蓋，膠布固定。另一側(cè)皮膚作為空白對(duì)照。封閉4小時(shí)后， 去除覆蓋物，并用溫水清洗去殘留受試物，于去除受試物后的1、24和48小時(shí)觀察涂抹部位 皮膚反應(yīng)，并評(píng)分。
[0105] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚未出現(xiàn)任何紅斑，紅腫，發(fā)炎現(xiàn)象。
[0106] 4、小結(jié)：根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》（1999)中皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判定，本發(fā)明對(duì)動(dòng) 物皮膚刺激強(qiáng)度屬無刺激性。
[0107] 實(shí)施例3 :長期毒性實(shí)驗(yàn)資料
[0108] 1、實(shí)驗(yàn)方法
[0109] 將豚鼠隨機(jī)份成4組，每組15只。在豚鼠背部脊柱兩側(cè)將脫毛劑均勻涂上，使其 脫毛范圍約40平方厘米。洗凈脫毛劑，觀察24小時(shí)后每組豚鼠分別涂本發(fā)明口服液溶液 0. 2、0. 4和0. 8ml，分別含生藥92、184和368mg，另一組涂溶媒0. 8ml每日二次，連續(xù)30天， 觀察豚鼠的一般情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物進(jìn)行血液學(xué)、血液生化及病理學(xué)檢查。
[0110] 2、結(jié)果
[0111] 上述三組用藥豚鼠軀干去毛區(qū)，未見局部皮膚有水腫、充血、紅斑、出血點(diǎn)及潰瘍。 用藥組與對(duì)照組動(dòng)物毛發(fā)色澤、攝食、四肢活動(dòng)等對(duì)照組無明顯差異，血液生化檢查，用藥 組與對(duì)照組均在正常范圍。病理組織學(xué)檢查，實(shí)驗(yàn)各組心、肝、腎及局部皮膚均未見明顯病 變。提示，本發(fā)明中藥口服液長期用藥對(duì)局部皮膚及全身重要臟器均未見明顯的毒性作用。
[0112] 試驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明口服液實(shí)驗(yàn)安全。該藥對(duì)乙型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大 腸桿菌的最小抑制濃度為1 : 150,淋球菌為1 : 150,白色念珠菌為1 : 300,對(duì)1 : 20稀 釋度時(shí)的殺滅時(shí)間為5分鐘，1 : 50時(shí)為10分鐘，1 : 100時(shí)為20分鐘，1 : 200時(shí)為40 分鐘，1 : 400時(shí)為8小時(shí)。
[0113] 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)：
[0114] 本發(fā)明口服液是由口服液，具有健腦安神，生精補(bǔ)髓，清肝明目、清心除煩的功效， 用于神經(jīng)衰弱、失眠、健忘、頭暈等癥。本文觀察了本發(fā)明口服液對(duì)未成年小鼠學(xué)習(xí)記憶能 力及腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT，DA，NA，5-HIAA含量的影響。
[0115] 1試驗(yàn)材料
[0116] 1. 1藥物本發(fā)明口服液，由夏枯草、遠(yuǎn)志，柴胡，合歡皮，香附，玉竹，益母草，白術(shù)， 百合，生地，當(dāng)歸，梔子，白茍，珍珠母，茯神，浮小麥，郁金，酸率仁，柏子仁，石菖蒲，夜交藤 組成，由本院藥劑科按實(shí)施例2的方法制備；陽性對(duì)照藥，安神健腦液，北京同仁堂科技發(fā) 展股份有限公司制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)=4152850。
[0117] 1.2動(dòng)物昆明種小鼠11~15g，雌雄各半，購自長春生物制品研究所，許可證號(hào)： SCXK. 2002. 0001〇
[0118] 1. 3儀器Y.型水迷宮；ES. 180電子分析天平，沈陽龍騰公司生產(chǎn)；RF. 540型熒光 分光光度計(jì)，日本島津公司生產(chǎn)。
[0119] 1.4試劑5.羥色胺硫酸肌酐，中國醫(yī)藥公司上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站，批號(hào)： 65-02. 28,瑞士進(jìn)口分裝，純度99 % ;5.羥吲哚乙酸，Sigma產(chǎn)品，批號(hào)：60kl083,純度 98%~100%;重酒石酸鉀去甲腎上腺素