幾種中藥提取物在hiv潛伏再激活治療中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及幾種中藥活性成分的提取物及其制備方法，以及在制 備抗HIV潛伏治療藥物上的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 艾滋?。╝cquired immunodeficiency syndrome，AIDS)是由人免疫缺陷病毒 (human immunodeficiency virus，HIV)引起的一種逐步摧毀人體免疫系統(tǒng)、嚴(yán)重威脅人 類健康和生存的重大傳染性疾病。自1981年在美國首次發(fā)現(xiàn)以來，在世界范圍內(nèi)迅速蔓 延，2014年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球現(xiàn)有HIV/AIDS病人共3690萬人，2014年新發(fā)感染200萬 人，抗艾滋病相關(guān)治療150萬人，艾滋病相關(guān)死亡120萬人，[http://www. unaids, org/en/ resources/campaigns/HowAIDSchangedeverything/factsheet] 〇 目前藥物治療可以控制 病情發(fā)展，提高患者生存質(zhì)量，但并不能從根本上治愈艾滋病。
[0003] 目前最常用的艾滋病治療方法是高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（highly activeantiretroviral therapy，HAART)，該法能有效地抑制病毒的復(fù)制，能將血衆(zhòng)病毒載 量降至不可檢測的水平，延緩發(fā)病進(jìn)程，改善、提高患者的生活質(zhì)量和存活時(shí)間。但在停止 HAART治療后，病毒會(huì)大量復(fù)制，病毒載量將會(huì)迅速反彈，無法徹底清除體內(nèi)的HIV病毒。 此現(xiàn)象主要是由于病毒潛伏于細(xì)胞的病毒庫內(nèi)所造成[Jilek B L, Zarr M, Sampah M L，et al. A quantitative basis for antiretroviral therapy for HIV-linfection. Nature Med. 2012. 18(3) :446-51. ]。HIV-I感染機(jī)體后，宿主的免疫系統(tǒng)能夠識(shí)別感染的細(xì)胞和 病毒，將其大量殺死，但是有一部分病毒以原病毒的形式存在于靜息記憶CD4+T等細(xì)胞中， 這部分細(xì)胞不表達(dá)病毒蛋白，也不會(huì)被病毒所破壞，同時(shí)也不被宿主免疫系統(tǒng)識(shí)別，能夠存 活下來。在體內(nèi)環(huán)境變化或外界刺激的條件下，潛伏的病毒又能夠再次活化。潛伏的細(xì)胞 庫成為清除 HIV-1 的主要障礙[Chun TW, Fauci AS. HIV reservoirs:pathogenesis and obstacles to viral eradication and cure. AIDS. 2012,26(10):1261-8]〇
[0004] HIV-I潛伏感染存在著整合前和整合后兩種形式的潛伏[Hakre S，Chavez L, Shirakawa K, et al. HIV latency:experimental systems and molecular models. FEMS Microbiol Rev. 2012,36:706-716]。整合前潛伏源自病毒復(fù)制周期在原病毒整合到宿主 基因組之前被部分或完全阻斷，可能由于在代謝不活躍細(xì)胞中，dNTP不充足導(dǎo)致反轉(zhuǎn)錄不 完全所致。這些未整合的病毒在胞質(zhì)中存在數(shù)天，形成整合前復(fù)合體（pre integration complex，PIC)，不過隨著時(shí)間的進(jìn)展最終衰變，它對(duì)病毒持續(xù)感染的作用是有限的。整 合后潛伏則發(fā)生自原病毒雖成功整合到宿主基因組中，但不能活躍表達(dá)其基因組，使其 以轉(zhuǎn)錄無能狀態(tài)呈現(xiàn)。目前發(fā)現(xiàn)潛伏的分子機(jī)制與HIV-I原病毒整合的位點(diǎn)與方向、 HIV-ILTR啟動(dòng)子處宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的種類與數(shù)量、HIV-I原病毒整合位置的染色質(zhì)組成 與 LTR 啟動(dòng)子的表觀調(diào)控等方面有關(guān)[Abbas W, Herbein G. Molecular understanding of HIV-llatency. Advances in Virology. 2012, 574967.]。整合后潛伏是形成潛伏病毒庫的 主要原因。潛伏的病毒庫在體內(nèi)外環(huán)境發(fā)生變化時(shí)，如停止HAART治療或機(jī)體抵抗力低下 時(shí)，體內(nèi)的抗原、細(xì)胞因子、有絲分裂原或佛波酯等激活潛伏病毒，體內(nèi)可再次檢測到病毒。
[0005] 最近，一種稱為"shock and kill"的旨在根除HIV感染的治療理念受到國際間的 廣泛關(guān)注，成為了艾滋病治療中的一個(gè)熱點(diǎn)問題。這種方法通過"shock"治療階段藥物激活 潛伏的HIV前病毒。隨后利用"kill"階段藥物清除激活的HIV，從而達(dá)到清除HIV的目的 [Deeks SG. HIV:Shock and kill. Nature, 2012,487(7408) :439-440 ;Archin NM1, Liberty AL,Kashuba AD, et al.Administration of vorinostat disrupts HIV-Ilatency in patients on antiretroviral therapy.Nature.2012,487 (7408):482-485 ； Halper-Stromberg A, Lu CL, Klein F, et al. Broadly neutralizing antibodies and viral inducers decrease rebound from HIV-I latent reservoirs in humanized mice, Cell, 2014, 158(5) :989-99]。近年的研究顯示，組蛋白去乙?；福╤istone deacetylase， HDAC)抑制劑、BRD蛋白（Bromodomain，BRD)抑制劑、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)激 活劑和正轉(zhuǎn)錄延伸因子 b (positive transcription elongation factor b，P-TEFb)激活 劑及細(xì)胞因子等均可激活潛伏病毒的復(fù)制，它們與HIV轉(zhuǎn)錄階段不同步驟的細(xì)胞因子或調(diào) 芐基因相互作用，激活了 HIV的轉(zhuǎn)錄過程。這些藥物包括丙戊酸、伏立諾他（vorionstat)、 JQl、Prostratin、HMBA等[Archin NM, Espeseth A, Parker D, et al. Expression of latent HIV induced by the potent HDAC inhibitor suberoylanilide hydroxamic acid. AIDS Res Hum Retroviruses. 2009, 25 (2) : 207-212. ；ffightman F1Ellenberg P1Churchill M, et al. HDAC inhibitors in HIV. Immunol Cell Biol. 2012. 90 (I) :47-54.;吳潤東，劉光明， 龐偉.潛伏感染激活劑研究進(jìn)展.中國藥理學(xué)通報(bào).2014, 30 (I) : 1-6.]。但這些試劑或藥 物多是臨床上治療其他疾病的藥物，如丙戊酸用來治療癲癇和癌癥，JQl是非激素類男性避 孕藥，這些藥物作用特異性差，對(duì)機(jī)體有毒副作用，有些藥物仍處于臨床實(shí)驗(yàn)階段，甚至一 些藥物僅體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)有激活潛伏病毒的作用，目前未有正式批準(zhǔn)的上市的抗HIV潛伏藥 物。因此尋找新型HIV潛伏病毒激活劑，為徹底清除HIV/AIDS病人體內(nèi)的病毒，有重要意 義。
[0006] 我國具有豐富的天然植物及中藥資源，具有解表、清熱、瀉下、祛風(fēng)濕、利水滲濕、 理氣、活血化瘀、安神、平肝熄風(fēng)等功效；中草藥價(jià)格低廉；毒副作用少，適合長期服用；可 以保護(hù)和改善感染者的免疫功能，因此從天然產(chǎn)物中尋找可特異地激活潛伏HIV-I表達(dá)， 而不引起廣泛免疫活化的中草藥，適合我國艾滋病治療的國情，對(duì)中藥治療艾滋病有重要 意義。
[0007] 曾毅院士曾對(duì)1693種植物進(jìn)行了篩檢，發(fā)現(xiàn)其中52種具有誘導(dǎo)Raji細(xì)胞中潛伏 EB病毒早期抗原表達(dá)的作用[曾毅，葉樹清，苗學(xué)謙，等.誘導(dǎo)Epatein-Barr病毒早期 抗原表達(dá)的中草藥和植物的篩選.病毒學(xué)報(bào).1992, 8 (2) :158-163;倪芝瑜，黃長春，陸小 鴻，等.激活Raji細(xì)胞EB病毒早期抗原植物的研究.廣西植物.1988, 8 (3) : 291-296.]， 如巴豆、甘遂、烏桕、芫花、射干等，且其激活病毒表達(dá)的作用與其中含有的佛波酯類化合物 密切相關(guān)。另外，丁酸、精胺等與上述佛波酯類化合物具有協(xié)同作用，可以增強(qiáng)對(duì)病毒早期 抗原表達(dá)的誘導(dǎo)能力[趙健，曹澤