一種曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)和納米醫(yī)藥領(lǐng)域的藥品及其制備方法，具體是一種曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物的制備及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，并且發(fā)病年齡有下降的趨勢，嚴重危及婦女的身心健康甚至生命。乳腺癌的治療一般通過手術(shù)、化療及放療等治療手段，然而這些治療有些病人是沒有明顯的效果的，部分癌癥仍會復發(fā)、轉(zhuǎn)移。尋求更好的治療方案仍是迫切需要解決的問題。
[0003]隨著醫(yī)學科學的發(fā)展，人們對惡性腫瘤的發(fā)病原因進行了深入的研宄，基因致癌的機理慢慢清晰起來，針對致癌基因的高端生物技術(shù)不斷被應(yīng)用于醫(yī)學臨床，一種新的治療方法逐漸興起，這就是分子靶向治療。靶向治療通過作用于腫瘤細胞特有的靶點特異性地殺傷腫瘤細胞，毒副反應(yīng)相對較小，因此受到越來越多的關(guān)注。
[0004]乳腺癌靶向治療通過對細胞增殖、細胞凋亡、信號傳導通路和新生血管形成等多個靶點作用于腫瘤細胞，其中信號傳導通路又以EGFR通路為常見。研宄發(fā)現(xiàn)，有20%至30%的乳腺癌患者HER2蛋白表達增加，HER2陽性乳腺癌患者的腫瘤細胞有編碼HER2的基因擴增，導致細胞表面HER2蛋白過度表達，刺激癌細胞瘋狂增殖。因此抑制HER2就能抑制乳腺癌細胞的生長，HER2成為乳腺癌特異性治療的重要靶分子之一。
[0005]曲妥珠單抗(赫賽汀)是第I個以HER2為靶點的分子靶向治療藥物，它能特異性地與腫瘤細胞表面表達的HER2受體結(jié)合，引發(fā)細胞內(nèi)多種生物效應(yīng)，從而抑制腫瘤細胞的增殖。大量臨床研宄數(shù)據(jù)顯示，無論是復發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌一線治療、可手術(shù)乳腺癌的輔助治療，還是近年來的新輔助治療，曲妥珠單抗與多種藥物聯(lián)合均顯示可改變HER2陽性乳腺癌患者的預后。曲妥珠單抗因療效和安全性俱佳，已成為HER2陽性乳腺癌治療的“金標準”藥物。曲妥珠單抗聯(lián)合化療能為早期乳腺癌患者爭取最佳治愈機會，使晚期乳腺癌患者獲得最優(yōu)生存。
[0006]化療是乳腺癌綜合治療的重要組成部分。由于化療藥物細胞毒性作用沒有選擇性，所以這些藥物往往毒副作用比較大，耐受性差。順鉑是目前臨床最常用的廣譜抗腫瘤藥物之一，但是順鉑具有多種副作用，包括腎毒性、消化道毒性、骨髓抑制等。為了能夠使順鉑更好的發(fā)揮療效并降低毒性，出現(xiàn)了一些新的鉑藥給藥系統(tǒng)，如順鉑-白蛋白微球、脂質(zhì)體、順鉑-PLGA微球等。在眾多的藥物載體中，高分子納米載體可以顯著改變藥物的分布和代謝，提高療效、降低毒性，特別是可降解的安全無毒的天然高分子材料。例如:景遐斌等人報道了生物降解高分子鍵合Pt (IV)類抗癌藥物納米膠束及其制備方法(CN 102120036A)；馬光輝等人報道了一種裝載難溶性抗腫瘤藥物的殼聚糖-羧化殼聚糖納米球、制備方法及其應(yīng)用(CN 102389572A)。這些方法制備的藥物可以有效的降低毒副作用，增加藥物體內(nèi)循環(huán)的時間，但是仍存在靶向性不強的問題。
[0007]本發(fā)明曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物可以有效的解決這些問題。本發(fā)明采用生物相容性好、生物可降解的mPEG-PGA作為藥物載體，將順鉑包裹在納米粒內(nèi)部，用曲妥珠單抗修飾納米球表面。曲妥珠單抗本身是一種乳腺癌靶向治療藥物，能夠特異性識別EGFR靶標，將負載順鉑的偶聯(lián)物直接運輸?shù)侥[瘤部位。可降解的高分子偶聯(lián)物在在腫瘤部位逐步釋放化療藥物，延長了藥物作用時間，提高了藥效，并大大降低了順鉑的全身毒副作用，同時實施了曲妥珠單抗對HER2陽性乳腺癌患者的靶向治療?？梢灶A期多種新輔助化療方案聯(lián)合曲妥珠單抗治療可用本發(fā)明的制備方法獲得高效低毒的雙靶向偶聯(lián)藥物，達到了減毒增效的目的，并最大化影響HER2陽性乳腺癌的病程。這種給藥方式展現(xiàn)的聯(lián)合新輔助治療的療效更具優(yōu)勢。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]技術(shù)問題:本發(fā)明的目的是提供一種曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物及制備方法，以提高曲妥珠單抗聯(lián)合化療HER2陽性乳腺癌的治療效果和降低化療藥物的毒性。
[0009]技術(shù)方案:本發(fā)明是一種曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物具體是一種曲妥珠單抗修飾的載順鉑高分子納米球，所述的高分子納米球是以甲氧基聚乙二醇-聚谷氨酸(mPEG-PGA)為基材；所述的曲妥珠單抗對負載順鉑高分子納米球的修飾，是通過與高分子載藥納米粒表面的羧基進行偶聯(lián)，納米球中載有順鉑；所述的mPEG-PGA、順鉑、曲妥珠單抗的摩爾比為1: (I?50): (0.01?0.05) ο
[0010]所述的高分子納米球的粒徑在35?300nm。
[0011]所述的高分子納米球的粒徑多分散指數(shù)PDI在0.25?I之間。
[0012]本發(fā)明的曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物的制備方法包括以下幾個步驟:
[0013]步驟一:室溫下，將甲氧基-聚乙二醇-氨基(mPEG-NH2)的四氫呋喃(THF)溶液滴加到谷氨酸5-芐酯N-羧基環(huán)內(nèi)酸酐(L-Glu-NCA)的THF溶液中，在氮氣保護下反應(yīng)3?4天，然后將反應(yīng)液倒入到大量冰乙醚中，冰箱靜置過夜，過濾，得到聚乙二醇-聚谷氨酸(mPEG-PGA)；
[0014]步驟二:將mPEG-PGA溶解在二甲基甲酰胺(DMF)中，再加入少量去離子水，在攪拌下滴入順鉑的DMF溶液，攪拌0.5?5小時，然后裝入透析袋透析，經(jīng)冷凍干燥得到負載順鉬的高分子納米球；
[0015]步驟三:冰浴條件下，用去離子水溶解負載順鉑的聚乙二醇-聚谷氨酸納米球，加入催化劑1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，再加入曲妥珠單抗水溶液反應(yīng)一段時間，直接透析3?4天，冷凍干燥，制得曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物。
[0016]其中:
[0017]步驟一中所用的溶劑THF是DCM或DMF中的一種。
[0018]步驟一中所用的mPEG-NH2*子量為1000?20000。
[0019]步驟一中L-Glu-NCA 與 mPEG-PGA 摩爾比為(5:1)?(100:1)。
[0020]步驟二中溶劑DMF是DMSO或THF中的一種。
[0021]步驟二中，順鉑是其它抗腫瘤藥物，如卡鉑、洛鉑、奧沙利鉑、多西紫杉醇、阿霉素或長春瑞濱。
[0022]本發(fā)明的一種曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物的用途在于制備抗乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
[0023]有益效果:本發(fā)明制備的曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物的制備工藝簡單，穩(wěn)定性好，可以用于制備靶向抗腫瘤藥物。
[0024]本發(fā)明的一種曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物，既可以使化療藥物靶向富集在腫瘤部位，直接殺死腫瘤細胞，減低傳統(tǒng)抗腫瘤藥物的毒副作用，同時又實施了曲妥珠單抗對HER2陽性乳腺癌患者的靶向治療。本發(fā)明巧妙實現(xiàn)了曲妥珠單抗和順鉑聯(lián)合靶向給藥方式，在曲妥珠單抗聯(lián)合化療乳腺癌方面有很好的應(yīng)用前景。
【具體實施方式】
[0025]一種曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物的制備
[0026]步驟一:室溫下，將甲氧基-聚乙二醇-氨基(mPEG-NH2)的四氫呋喃(THF)溶液滴加到谷氨酸5-芐酯N-羧基環(huán)內(nèi)酸酐(L-Glu-NCA)的THF溶液中，在氮氣保護下反應(yīng)3天，然后將反應(yīng)液倒入到大量冰乙醚中，冰箱靜置過夜，過濾，制得聚乙二醇-聚谷氨酸mPEG-PGAο
[0027]步驟二:將mPEG-PGA溶解在二甲基甲酰胺(DMF)中，再加入少量去離子水，在攪拌下滴入順鉑的DMF溶液，然后裝入透析袋透析3天，過濾，濾液經(jīng)冷凍干燥得到負載順鉑的高分子納米球。
[0028]步驟三:冰浴條件下，用去離子水溶解負載順鉑的mPEG-PGA納米粒，加入催化劑EDAC/NHS，再加入曲妥珠單抗水溶液反應(yīng)一段時間，直接透析3天，然后經(jīng)冷凍干燥制得曲妥珠單抗介導的順鉑靶向偶聯(lián)物。
[0029]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做更進一步地解釋。下列實施例僅用于說明本發(fā)明，但并不用來限定本發(fā)明的實施范圍。
[0030]實例I
[0031]甲氧基-聚乙二醇-聚谷氨酸(mPEG-PGA)的制備
[0032]將mPEG-NH2 (5000Da，1.00g，0.2mmol)用 1ml 無水 THF 溶劑溶解后，轉(zhuǎn)入 50ml 三口燒瓶，用5ml無水THF溶解Glu-NCA(1.08g，4mmol)置于恒壓滴定漏斗中。氮氣保護下，緩慢滴入Glu-NCA的THF溶液，室溫下反應(yīng)3d，TLC跟蹤(MeOH:DCM -NH3.H2O = 10:89:I ；Rf = 0.3)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液緩慢傾入150ml冰乙醚中，并劇烈攪拌。冷凍過夜，過濾，濾餅用冰乙醚洗滌3次，得到白色沉淀1.83g，產(chǎn)率88.0%。1H NMR(300HMz，⑶Cl3