人參皂苷Rg5在制備預防急性腎損傷藥物中的用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明公開了人參皂苷Rg5在制備預防急性腎損傷藥物的新用途，屬于中藥中化 合物的新生物活性的醫(yī)藥技術領域。
【背景技術】
[0002] 順鉑（CDDP)對多種腫瘤具有良好的療效，是臨床使用的最有效和最常見的抗腫 瘤藥物之一。目前，順鉑作為一種重要的化療藥物在臨床廣泛應用。順鉑作為一種廣譜抗癌 藥物，療效與用藥量成正比，但同時隨著用量的增大，藥物毒性也增大，容易引起多種不良 反應，如胃腸道反應、骨髓抑制、耳毒性等，尤其是它在腎臟中高聚集、高排泄、高代謝。其中 腎毒作用尤為突出，這對順鉑的劑量使用造成了影響，在一定程度上限制了它的應用。統(tǒng)計 顯示，單用順鉑時，腎毒性發(fā)生率高達28- 36%，而臨床化療腎損害的發(fā)生率為25% - 35%。 這極大的限制了順鉑的用量和臨床的應用。如何預防順鉑的毒副作用成為了人們關注的問 題。
[0003] 氧化應激已被證實是順鉑腎毒性的重要機制之一，順鉑進入機體后，通過抑制細 胞還原和清除活性氧簇（ROS)的能力，使細胞中ROS水平升高，使機體發(fā)生氧化應激，最終 導致機體組織器官的損傷。生物體內存在兩類活性氧清除系統(tǒng)，一類是酶促防御系統(tǒng)，主要 包括超氧化物歧化酶（S0D)、過氧化氫酶（CAT)、谷胱甘肽氧過氧化物酶（GSH-Px)、谷胱甘 肽還原酶（GSH-R)等，另一類是非酶促反應系統(tǒng)，包括維生素A、C、E，半胱氨酸，輔酶Q、硒 等。在正常情況下，機體的活性氧代謝處于平衡狀態(tài)，順鉑可以通過三種方式影響活性氧簇 打破機體的這種平衡：其一，順鉑經過水解后產物的活性物質可以迅速與機體內含巰基的 谷胱甘肽（GSH)、超氧化物歧化酶（SOD)等抗氧劑反應，使它們降解或失活，從而引發(fā)氧化 應激反應。其二，順鉑在機體內代謝的過程中會產生大量的氧自由基，自由基可以引起線粒 體膜脂質過氧化反應導致線粒體功能抑制，還可以使膜蛋白功能的受損，破壞核酸及染色 體。其三，在機體長成ROS的過程中，鐵離子是重要的催化劑，而細胞內的鐵離子的主要來 源為細胞色素P450 (CYP)系統(tǒng)，順鉑可以通過影響CYP系統(tǒng)誘導ROS的產生，進而引發(fā)機 體氧化過激反應。
[0004] 目前，中草藥中獲得提取物及活性成分對急性腎損傷具有一定的保護作用，人參 皂苷類成分作為預防和治療腎損傷發(fā)揮了重要的作用（劉新文，等.三七總皂苷通過線粒 體途徑抑制順鉑誘導的大鼠腎細胞凋亡，中國藥理學通報，2015，31，216-21)，如單體人 參皂苷Rg3,Rh2,Rd等。但單純探討人參皂苷對順鉑腎損傷的保護作用的研宄為之甚少。
[0005] 人參皂苷Rg5是人參熱處理后產生的一個次級皂苷，是原有二醇型人參皂 苷在C-20位脫糖及脫水異構后而產生的熱裂解皂苷。研宄表明：Rg5具有廣泛的 藥理活性，如抗癌，抗炎，益智等（LeeKY,etal.，Ginsenoside_Rg5suppresses cyclinE-dependentproteinkinaseactivityviaup-regulatingp21Cip/WAFl anddown-regulatingcyclinEinSK-HEP-Icells.AnticancerRes. 1997， 17， 1067-1072.;LeeYYjetal.,Anti-InflammatoryEffectofGinsenosideRg5in Lipopolysaccharide-StimulatedBV2MicroglialCells.IntJMolSci. 2013， 14， 9820-9833;ChuS，etal. ,GinsenosideRg5improvescognitivedysfunctionand beta-amyloiddepositioninSTZ-inducedmemoryimpairedratsviaattenuating neuroinflammatoryresponses.IntInmunopharmacoL2014，19，317-326)〇
[0006] 到目前為止，未見有關該化合物對順鉑（CDDP)所致急性腎損傷保護作用的報道， 本發(fā)明創(chuàng)造性的提出并證明了該成分的急性腎損傷保護作用。人參皂苷Rg5可以通過高溫 處理廉價易得的人參莖葉皂苷而獲得，是一種非常有前途和開發(fā)價值的腎保護劑。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明提供了人參皂苷Rg5在制備預防順鉑（CDDP)誘導的急性腎損傷藥物中的 應用。
[0008] 本發(fā)明所述的人參皂苷Rg5在用于上述用途時，其口服或胃腸外給藥，均是安全 的，在口服情況下，其可以以任何常規(guī)的形式給藥，如片劑，膠囊劑，粉針劑，注射劑，丸劑， 軟膠囊，顆粒劑和貼劑等。
[0009] 本發(fā)明制備保護急性腎損傷藥物是由有效單體或有效成分與固體或液體的賦形 劑一起構成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領域是眾所周知的，下面舉幾個例子， 散劑是內服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖，淀粉，糊精，碳酸鈣，合成或天然硫酸鋁，氧化鎂， 硬脂酸鎂，碳酸氫鈉，干燥酵母等；溶液劑的賦形劑有水，甘油，1，2-丙二醇，單糖漿，乙醇， 乙二醇，聚乙二醇，山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、 蜂蠟、木蠟、液體石蠟等組合成的疏水劑或親水劑。本發(fā)明的藥物組合物可以按現(xiàn)有技術中 已知的方法如混合、制粒、壓片來制備。本發(fā)明藥物組合物還可以包括各種藥學使用的任何 組分，如香味劑、著色劑、甜味劑等。
[0010] 本發(fā)明的有益效果在于，人參皂苷Rg5來自人參的熱處理過程中，廣泛存在于紅 參（redginseng)，黑參（blackginseng)中，也可以利用富含人參阜苷的提取物熱裂解產 生，其容易獲得，工業(yè)化前景好，同時具有療效顯著和毒副作用小等優(yōu)點。
[0011] 本發(fā)明可以通過下面的實驗例進一步說明。
[0012] 實驗例.人參皂苷Rg5對順鉑（DDDP)誘導的急性腎損傷的保護作用 1材料和方法 I. 1材料、試劑及儀器 人參皂苷Rg5，純度 >98. 5% (HPLC);順鉑，（CDDP，純度 >99%，Pt, 65%，CASNO. 15663-27-1)，美國Sigma公司 超氧化物歧化酶（SOD)試劑盒、苦味肌酐（Cre)、尿素氮（BUN)、還原型谷胱甘肽（GSH) 等均購自南京建成生物工程研宄所；腫瘤壞死因子a(TNF-a)、白介素10 (IL-10)試 劑盒均購自美國R&D公司，國內分裝。
[0013] BP21ID電子天平，德國Sartorius公司；DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋，天津泰斯特 儀器有限公司；HC-2517高速離心機，安徽中科中佳公司；Epoch超微量微孔板分光光度計， 美國伯騰儀器有限公司；FSH-2A可調高速勻漿機，金壇市華城海龍實驗儀器廠。
[0014] 1.2 動物 雄性ICR小鼠，SPF級，18~22g，購自長春市億斯實驗動物技術有限責任公司。
[0015] 1.3 方法 I. 3. 1動物分組及給藥 將適應性飼養(yǎng)1周的小鼠隨機分為4組，每組8只，分別為正常對照組、模型組、RgdS劑量組（l〇mg/kg)和1^5高劑量組（20mg/kg)。
[0016] 給藥組按劑量每天灌胃給藥一次，連續(xù)7天，正常對照組和模型組灌胃等體積純 凈水。第7天末，在灌胃給藥Ih后，對模型組和給藥組小鼠一次性腹腔注射25mg/kg的順 鉑生理鹽水溶液，繼續(xù)觀察。給藥期間觀察并記錄各組小鼠攝食量，飲水量以及體重變化。 順鉑造模72h后依次對各組小鼠進行眼球取血，3000r/min離心IOmin分離血清，4°C保存?zhèn)?用；迅速解剖取腎臟，肝臟及脾臟。經4°C生理鹽水沖洗，濾紙吸干，稱重，取左腎于4%的甲 醛溶液中固定，待切片，右腎置于_80°C低溫冰箱中保存。
[0017] 1.3.2臟器指數計算 計算公式：臟器指數=臟器重量（g) /體重（g)X100% 1. 3. 3血清生化檢測 超氧化物歧化酶（S0D)，還原型谷胱甘肽（GSH)，尿素氮（BUN)和苦味肌酐（Cre)按試劑 盒說明書采用比色法測定，操作步驟按各自試劑盒給定說明書程序進行。
[0018] 1.3.4腎組織生化指標檢測 取右腎臟組織稱重，按照1:9的比例加入的生理鹽水稀釋，研磨成勻漿組織，4°C下 4200rpm離心10min，取上清液測定腎臟組織勻漿中TNF-a(腫瘤壞死因子）和IL-I0 (白介素-1 0 )含量，采用ELISA酶聯(lián)免疫檢測法，操作步驟按各自試劑盒給定說明書程序 進行。
[0019] 1.3.5腎組織病理學觀察 取左腎臟組織置于4%的中性甲醛溶液中固定，低濃度到高濃度酒精脫水，二甲苯中透 明，常規(guī)石蠟包埋，切片，脫蠟后用染色，于光學顯微鏡下觀察腎臟組織病理學變化。
[0020] 1. 3. 6數據處理 實驗數據均用均數土標準差（f±s)表示，用SPSS22. 0統(tǒng)計軟件進行分析，組間采 用單因素方差分析比較差異。K0. 05為有差異，K0. 01為有顯著性差異，K0. 001為極顯 著性差異。
[0021] 2 結果 2. 1實驗動物整體水平的變化 與正常對照組小鼠相比，順鉑模型組小鼠毛色稀疏，攝食量和飲水量均減少，體重明顯 減輕（#0. 05)，腎指數顯著升高（#0. 05)，腎臟有膨大現(xiàn)象，代謝器官受損嚴重；人參皂苷 Rg5給藥組，小鼠狀態(tài)明顯好轉，體重下降得到緩解，可以明顯改善順鉑所致的腎指數下降 (/X0. 05)，對肝和脾指數影響較小，結果如下表。
[0022] 表2-1人參皂苷1^5對順鉑致腎損傷小鼠體重、臟器指數的影響（n=8)
【主權項】
1. 人參阜苷Rg5 (ginsenoside Rg5)在制備預防急性腎損傷藥物中的應用。
2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的腎損傷疾病為順鉑（CDDP)所致的 氧化應激損傷。
3. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的人參皂苷Rg5純度為85~99. 99%。
4. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：將人參皂苷Rg5作為唯一活性成份或與 其它藥物組合，與制藥中可以接受的輔助和/或添加成份混合后，按常規(guī)的制藥方法和工 藝要求，制成用于治療或預防急性腎損傷的制藥中可接受的任何劑型，如片劑，膠囊劑，粉 針劑，注射劑，丸劑，軟膠囊，顆粒劑和貼劑等。
【專利摘要】本發(fā)明公開了人參皂苷Rg5（C42H70O12, CAS No. 186763-78-0）在制備保護順鉑（CDDP）誘導的急性腎損傷藥物中的應用，屬于醫(yī)藥產品研究開發(fā)領域。動物實驗研究表明：與模型組相比，人參皂苷Rg5可以有效降低血清中肌酐（Cre）和尿素氮（BUN）水平，提高腎臟組織SOD和GSH水平，此外，人參皂苷Rg5能夠顯著抑制腎組織中TNF-α和IL-1β等炎癥因子的升高。因此，可以把該化合物及含有該化合物的有效組分制備成預防急性腎損傷的藥物。其藥物形式可以是現(xiàn)有的任何劑型，如片劑，膠囊劑，粉針劑，注射劑，丸劑，軟膠囊，顆粒劑和貼劑等。
【IPC分類】A61P13-12, A61K31-704
【公開號】CN104800233
【申請?zhí)枴緾N201510172314
【發(fā)明人】李偉, 王梓, 關大朋, 韓燁, 張桂山, 楊樹寶, 王英平, 張瑞, 唐姍
【申請人】吉林農業(yè)大學
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2015年4月14日