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Fty720在制備治療干眼癥藥物中的用圖

文檔序號(hào):8450859閱讀:652來(lái)源:國(guó)知局
Fty720在制備治療干眼癥藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物應(yīng)用領(lǐng)域,涉及FTY720在制藥中的新用途,具體涉及FTY720在 制備治療干眼癥藥物中的用途,尤其是在制備治療眼表疾病Sj5greri綜合征藥物中的新用 途,所述的FTY720對(duì)以SjSgren綜合征為代表的眼表自身免疫性炎癥具有免疫調(diào)控和抑制 作用。
【背景技術(shù)】
[0002] 研究報(bào)道,干眼癥是主要的眼表疾病之一,該眼表疾病指多因素導(dǎo)致的淚 液異常和眼表炎癥,其主要癥狀表現(xiàn)為眼表不適、視力影響、淚膜不穩(wěn)定并眼表組織 的損害。其發(fā)病過(guò)程中同時(shí)合并淚膜滲透壓升高和眼表炎癥(Lemp,M.A. 2007.The definitionandclassificationofdryeyedisease:reportoftheDefinition andClassificationSubcommitteeoftheInternationalDryEyeWorkshop(2007). TheOcularSurface,5(2),75-92.)。最近越來(lái)越多的研究表明,干眼癥的發(fā)病機(jī)制非 簡(jiǎn)單的淚膜質(zhì)與量的異常以及眼表組織和外分泌腺受損,而是T細(xì)胞介導(dǎo)的眼表組織和 腺體自身免疫性炎癥(Schaumburg,C.S.,Siemasko,K.F.,DePaiva,C.S.,Wheeler,L. A. ,Niederkorn,J.Y. ,Pflugfelder,S.C. , &Stern,M.E. 2011.OcularsurfaceAPCsare necessaryforautoreactiveTcell-mediatedexperimentalautoimmunelacrimal keratoconjunctivitis.TheJournalofImmunology, 187 (7), 3653-3662. )〇Sjogren 綜合征是一種典型的干眼癥,病理上主要表現(xiàn)為淚腺和唾液腺等外分泌腺的自身免疫性 炎癥(Lemp,M.A. 1995.ReportoftheNationalEyeInstitute/Industryworkshopon ClinicalTrialsinDryEyes.CLAOJ21:221-232. )〇
[0003] 由于干眼癥的發(fā)生發(fā)展影響因素多,涉及面廣,已經(jīng)成為臨床上常見(jiàn)的眼表疾病。 研究顯示,誘發(fā)干眼癥的因素包括眼表炎癥,藥物濫用,長(zhǎng)期佩戴角膜接觸鏡、更年期、長(zhǎng)期 使用電腦以及其他免疫因素等。目前,干眼癥的主要治療方法包括人工淚液,皮質(zhì)類固醇激 素以及環(huán)保霉素A(CyclosporineA,CsA)等免疫抑制劑。但是,人工淚液僅是一種淚液替 代品,其本身無(wú)治療作用;皮質(zhì)類固醇激素及CsA等藥物長(zhǎng)期使用對(duì)眼表均有一定的毒副 作用,迄今為止,臨床實(shí)踐中尚無(wú)治療干眼癥的特效藥物。因此,研發(fā)療效好且長(zhǎng)期使用無(wú) 明顯局部及全身毒副作用的藥物成為當(dāng)下干眼癥治療中亟待解決的棘手問(wèn)題。
[0004] FTY720是日本學(xué)者從冬蟲(chóng)夏草子囊菌培養(yǎng)液中提取出抗生素成分ISP-1, 經(jīng)化學(xué)修飾后合成的一種新型的具有免疫調(diào)控作用的制劑,其分子量小于500道爾 (6)?(Fujita,T. ,K.Inoue,S.Yamamoto,T.Ikumoto,S.Sasaki,R.Toyama,K.Chiba,Y. Hoshino,andT.Okumoto. 1994.Fungalmetabolites.PartlLApotentimmunosuppressive activityfoundinIsariasinclairiimetabolite.JAntibiot(Tokyo)47:208-215. )〇 該制劑在結(jié)構(gòu)上不同于現(xiàn)有技術(shù)的免疫抑制劑如CsA、他克莫司以及雷帕霉素等真菌多肽。 國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果顯示,該制劑在治療多發(fā)性硬化,抗器官移植排斥,減輕缺血再灌注損傷以 及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和防止轉(zhuǎn)移等方面都顯示出其具有獨(dú)特的治療效果。研究還顯示該 制劑作為免疫調(diào)控劑具有如下優(yōu)勢(shì):只將淋巴細(xì)胞滯留于周圍淋巴器官,而對(duì)淋巴細(xì)胞正 常的增殖、遷徙和分化功能無(wú)影響,在緩解局部炎癥的同時(shí),不造成肌體全面的免疫抑制效 應(yīng)。
[0005] 目前為止,國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)FTY720用于干眼癥治療的研究報(bào)道。本申請(qǐng)的發(fā)明人擬 提供FTY720在制備治療干眼癥藥物中的新用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供FTY720在制藥中的新用途,具體涉及FTY720在制備治療干 眼癥藥物中的用途,尤其是在制備治療眼表疾病SjSgren綜合征藥物中的新用途,所述的 FTY720對(duì)以Sj5gren綜合征為代表的眼表自身免疫性炎癥具有免疫調(diào)控和抑制作用。
[0007] 本發(fā)明進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn),分別進(jìn)行活體觀察和組織檢測(cè),結(jié)果證實(shí),所述的FTY720 對(duì)以SjSgren綜合征為代表的眼表自身免疫性炎癥具有免疫調(diào)控和抑制作用。進(jìn)一步的, 所述的FTY720可制成治療SjSgren綜合征為代表的眼表疾病的藥物,尤其是制成特定使用 濃度范圍的眼部滴劑。
[0008] 本發(fā)明將FTY720稀釋后以眼用滴劑的方式小鼠眼部給藥,治療后的NOD小鼠 Sj5greri綜合征的炎癥表現(xiàn)明顯緩解,淚液質(zhì)與量明顯改善,淚膜破裂時(shí)間明顯延長(zhǎng),淚液 和眼表組織中的致炎因子及MMP水平顯著降低。本發(fā)明中,確定FTY720滴劑在小鼠眼表 組織的最佳使用濃度在〇. 〇〇5%-〇. 05%之間,與傳統(tǒng)免疫抑制劑相比,達(dá)到同等甚至更優(yōu)療 效,F(xiàn)TY720治療濃度明顯降低,該濃度FTY720給藥2月后未見(jiàn)小鼠眼部明顯毒副作用。
[0009] 本發(fā)明以業(yè)內(nèi)公認(rèn)的具有典型Sj5gren綜合征特點(diǎn)的非肥胖糖尿病小鼠 (non-obesediabetesMice,N0Dmice)為模型。選取10周齡雄性NOD小鼠168只,隨機(jī)分為 7 組,每組 24 只,分別為 0? 5%FTY720 組、0? 05%FTY720 組、0? 005%FTY720 組、0? 001%FTY720 組、0. 05%CsA組、生理鹽水組和陽(yáng)性對(duì)照組。使用生理鹽水將FTY720分別稀釋成0. 5%、 0. 05 %、0. 005 %、0. 001%的FTY720水溶液,CsA使用生理鹽水稀釋成0. 05%的水溶液,以 上藥物給藥方法均為小鼠雙眼點(diǎn)滴,設(shè)置生理鹽水組和陽(yáng)性對(duì)照組24只。FTY720各組、 0. 05%CsA組以及生理鹽水組均為每天3次給藥,給藥時(shí)間分別為上午8點(diǎn)± 1小時(shí),中午12 點(diǎn)±1小時(shí)和下午5點(diǎn)±1小時(shí),空白組不作任何干預(yù)。觀察時(shí)間窗分別為藥物干預(yù)后2 周,1個(gè)月和2個(gè)月?;铙w觀察指標(biāo)包括淚膜破裂時(shí)間(break-uptest,BUT),酚紅綿線試驗(yàn) (phenolredcottonthreadtest,PRCTT)檢查,同時(shí)收集小鼠淚液標(biāo)本,酶聯(lián)免疫吸附試 驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)檢測(cè)白介素I3 (interleukin-lbeta, IL-IP)水平。小鼠處死后,收集結(jié)膜和淚腺組織標(biāo)本,免疫組織化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞間粘附分子 I(intercellularadhesionmolecule-1,ICAM-1)和白細(xì)胞共同抗原(leucocytecommon antigen,LCA)在各組的表達(dá)水平,明膠酶譜法檢測(cè)各組角膜組織基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:FTY720各組與0? 05%CsA組的BUT和酚紅棉 線濕潤(rùn)長(zhǎng)度在2周、1個(gè)月和2個(gè)月的觀察窗逐漸提高,其中2周觀察窗上升最明顯,生理鹽 水組和陽(yáng)性對(duì)照組的BUT和酚紅棉線濕潤(rùn)長(zhǎng)度隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降。印跡細(xì)胞學(xué)檢查示 藥物干預(yù)各組的上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞的數(shù)目均較治療前有明顯提高,核漿比例改善,細(xì)胞 核深染,生理鹽水組和陽(yáng)性對(duì)照組未見(jiàn)改善。ELISA檢測(cè)顯示,各干預(yù)組中除了 0. 5%FTY720 組IL-13水平明顯上調(diào)之外,其余各組皆顯著下降,生理鹽水組和陽(yáng)性對(duì)照組IL-13水平 隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高。免疫組織化學(xué)檢查可見(jiàn)生理鹽水組和陽(yáng)性對(duì)照組的眼表組織中炎 癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯,ICAM-I表達(dá)持續(xù)升高,經(jīng)藥物干預(yù)后,炎癥細(xì)胞顯著減少,ICAM-I表達(dá)下 調(diào)。明膠酶譜法結(jié)果顯示,MMP-2和MMP-9在陽(yáng)性對(duì)照組、生理鹽水組和0. 5%FTY720表達(dá) 水平明顯上調(diào),與之相比,F(xiàn)TY720其余低濃度治療組和CsA組的MMP-2和MMP-9表達(dá)水平顯 著降低。以上各干預(yù)組中,0. 005%FTY720組的總體療效好于其他FTY720組以及0. 05%CSA 組(p〈0. 05)。
[0010] 本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示,〇. 5%FTY720組治療1周后可見(jiàn)小鼠眼表組織充血水腫, 0. 001%FTY720療效相對(duì)較弱,F(xiàn)TY720的治療濃度在0. 005%-0. 05%之間的療效最佳。結(jié)果 明確界定了FTY720在NOD小鼠SjSgren綜合征上的最佳濃度范圍,為該藥的進(jìn)一步臨床研 究打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
[0011] 本發(fā)明提供了FTY720治療以SjSgren綜合征為代表的干眼癥的新用途,為FTY720 治療以SjSgren綜合征為代表的干眼癥治療提供了有價(jià)值的藥物選擇,進(jìn)一步為眼表免疫 性炎癥治療提供了新的治療策略和治療思路。
【附圖說(shuō)明】:
[0012] 圖1是ELISA法比較各組淚液中IL-IP的水平,
[0013]其中,*:FTY720 低劑量治療組(0? 05%, 0? 005%and0. 001%)以及 0? 05%CsA與陽(yáng)性 對(duì)照和生理鹽水組比較:P〈〇. 01;
[0014] #:陽(yáng)性對(duì)照組和生理鹽水組與0? 5%FTY720組比較:P〈0. 01;F:FTY720。
[0015] 圖2是結(jié)膜組織免疫組化各組ICAM-I的表達(dá)水平比較,
[0016] 其中顯示:與陽(yáng)性對(duì)照組和生理鹽水組比較,ICAM-I的表達(dá)水平在FTY720各組及 0. 05%CsA均明顯下降。
[0017] 圖3是結(jié)膜組織免疫組化各組LCA表達(dá)水平比較。
[0018] 其中顯示:在陽(yáng)性對(duì)照組及生理鹽水組,結(jié)膜下可見(jiàn)大量白細(xì)胞浸潤(rùn),與之相比, FTY720及CsA治療后,LCA陽(yáng)性的白細(xì)胞數(shù)量明顯減少。
[0019] 圖4是明膠酶譜法檢測(cè)各組角膜MMP的水平變化,
[0020]
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