基于施用小rna片段的治療性治療的制作方法
【專利說明】基于施用小RNA片段的治療性治療
[0001] 本申請是申請日為2007年10月26日的中國專利申請200780039754. 6的分案申 請。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明通常涉及預(yù)防或改善血小板減少癥的治療性治療。更具體地，本發(fā)明提供 預(yù)防或改善由抗癌藥引發(fā)的骨髓抑制且特別是血小板減少癥的改良化療方案。本發(fā)明還提 供用于與免疫病癥相關(guān)的血小板減少癥的治療性治療，所述血小板減少癥稱為免疫性血小 板減少性紫癜。更特別地，本發(fā)明提供的治療性治療包括施用小RNA片段。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 化療是用于大部分癌癥的主要治療。盡管腫瘤學(xué)家已經(jīng)利用多種藥物組合和利用 具有減少的副作用的更新藥物改善了治療標(biāo)準(zhǔn)，但是仍然存在這樣的事實，即，化療通常與 最不舒適的和最壞破壞性的并發(fā)癥相關(guān)。在對治療存在耐受性的晚期癌癥、轉(zhuǎn)移、或腫瘤的 情形中，可以以特別侵入性形式使用化療，其通常導(dǎo)致骨髓抑制、降低的免疫性、低血小板 計數(shù)和因此發(fā)生的患者的死亡。許多輔助支持白血細(xì)胞計數(shù)的藥劑已經(jīng)與這些治療聯(lián)合使 用，但是這些藥劑不是總是有效的，并且在任何事件中，它們不刺激血小板的產(chǎn)生。由化療 引起的血小板水平的嚴(yán)重下降，即稱為血小板減少癥的病癥，通常是患者死亡的主要因素， 因為他們的血液不再能夠有效地凝結(jié)，所述患者易受不可控的內(nèi)出血以及外出血的影響。
[0005] 由化療引發(fā)的血小板減少癥也是目標(biāo)是縮小患者的腫瘤并且減緩癌癥進(jìn)展的臨 床腫瘤學(xué)家的主要障礙。因為患者的血小板計數(shù)如此關(guān)鍵，所以在化療治療的整個過程中 仔細(xì)監(jiān)測這一數(shù)字，并且當(dāng)所述數(shù)目下降至低于安全閾值時，減少劑量，或者暫停治療，直 到血小板計數(shù)有機(jī)會回升。在已經(jīng)經(jīng)歷了前幾輪化療且其骨髓已經(jīng)受到永久損傷的患者 中，血小板計數(shù)的恢復(fù)可能需要相當(dāng)長的時間，并且可能完全不會發(fā)生。結(jié)果，目前，由抗癌 藥引發(fā)的血小板喪失是化療中的限速步驟。當(dāng)達(dá)到血小板減少癥（3級，10, 000-50, 000個 血小板/毫升血液；4級，< 10, 000個血小板/毫升血液）時，致死性出血的危險是急性的， 并且許多癌癥患者已經(jīng)死于不可控的出血。另外，對于4級血小板減少癥患者，治療必須減 少或暫停，直到血小板水平升高至高于閾值。
[0006] 通常以持續(xù)數(shù)周的多個周期周期性給與化療。周期之間的間隔使得大部分處于治 療開始時的患者能夠在他們進(jìn)行下一個化療周期之前----通常以數(shù)天的形式----更新他 們的血小板群。隨著治療進(jìn)展，在化療之后的血小板數(shù)目的減少（最低點）變得更加嚴(yán)重， 并且更新的過程需要更長時間。典型地，患者恢復(fù)安全的血小板計數(shù)的能力逐漸減小，如在 圖1中所示。通常是血小板計數(shù)的減少和/或隨后的增殖延誤或失敗迫使腫瘤學(xué)家暫停治 療。這是血小板減少癥成為癌癥化療中的速度限制的時刻，并且是這種病癥為何突然停止 治療的最主要的原因，這意味著縮小或破壞患者的腫瘤的目標(biāo)沒有實現(xiàn)。
[0007] 這種基本的問題在化療的所有階段過程中都存在。癌癥治療可能需要多個化療周 期，并且許多腫瘤學(xué)家認(rèn)為血小板減少癥在早期治療階段以及后期階段具有重要的影響。 在早期階段，腫瘤學(xué)家通常選擇在患者中引發(fā)最佳響應(yīng)的藥物的最佳混合。當(dāng)治療由于血 小板減少癥而暫停時，這種使治療與個體癌癥相匹配從而獲得最佳治療效果的重要階段被 中斷。僅當(dāng)治療應(yīng)該是最佳的，并且癌癥可以促進(jìn)可能的轉(zhuǎn)移并且變得更難以受到進(jìn)一步 治療的控制時，腫瘤得到緩解。對于這些患者的成功治療需要保持血小板計數(shù)的新方案。
[0008] 如上文所述，在已經(jīng)經(jīng)歷了前幾輪化療的患有晚期階段癌癥的患者中，對骨髓中 干細(xì)胞的永久損傷危及到白血細(xì)胞且特別是血小板的再增加。這些患者的成功治療需要保 護(hù)骨髓干細(xì)胞并甚至在骨髓損傷的情形中能夠刺激血小板產(chǎn)生的新方案。本發(fā)明提供實現(xiàn) 這些重要的需要且因此具有改革癌癥化療潛力的化療方案。
[0009] 血小板減少癥也是患有與稱為免疫性血小板減少性紫癜（ITP)的疾病相關(guān)的血 小板產(chǎn)生和處理缺陷的個體的重要問題?；加羞@種疾病的個體兒童和成人都可能患 病一一由于血小板的加速破壞和不足的血小板產(chǎn)生而不能維持正常的血小板計數(shù)。在ITP 中，產(chǎn)生抗血小板抗體，其作為可能受遺傳因素影響的自體免疫響應(yīng)的一部分。盡管ITP的 詳細(xì)病因?qū)W仍是未知的，但是正是這些抗體的存在引起血小板的嚴(yán)重?fù)p失，并且還似乎是 減少骨髓中的血小板生產(chǎn)的因素。結(jié)果，這些個體面臨與患有由化療引發(fā)的骨髓抑制的患 者相同的臨床癥狀，包括增加的內(nèi)出血和外出血的危險，并且在極端情形中，包括威脅生命 的出血。據(jù)估計，在美國每年有大約200, 000個體被診斷患有這種病癥。與在經(jīng)歷骨髓抑 制治療的患者中發(fā)現(xiàn)的血小板減少癥的發(fā)生頻率相比，ITP相對罕見，并且歸類為罕見疾病 (orphan disease)。但是盡管原因不同，ITP的基礎(chǔ)病理學(xué)和臨床癥狀和藥物-引發(fā)的血 小板減少癥是一致的，并且本發(fā)明描述有效刺激血小板產(chǎn)生并且因此在兩種患者群體中成 功治療血小板減少癥的藥劑。
[0010] 發(fā)明概述
[0011] 本發(fā)明提供基于施用小RNA片段來預(yù)防或改善血小板減少癥的治療性治療。適用 于按照本發(fā)明的治療的血小板減少癥包括由化療方案中的抗癌藥引發(fā)的血小板減少癥和 先天性免疫性血小板減少性紫癜（ITP)。
[0012] 在一個實施方案中，對正在經(jīng)歷化療方案的癌癥患者應(yīng)用本發(fā)明的治療性治療， 以預(yù)防或改善骨髓抑制，和特別地，由抗癌藥引發(fā)的血小板減少癥。
[0013] 本發(fā)明提供由同步化抗癌藥的施用和小RNA片段制劑的施用限定的化療方案。據(jù) 信小RNA片段制劑通過刺激白血細(xì)胞和血小板的增殖而對骨髓具有保護(hù)作用。對骨髓的這 種保護(hù)作用能夠使患者維持他們的白血細(xì)胞計數(shù)和他們的血小板計數(shù)，因此防止感染和出 血?，F(xiàn)在，開出本發(fā)明所述方案的處方的腫瘤學(xué)家可以最優(yōu)化化療，所述化療在不中斷的條 件下完成，以獲得化療的全部益處。采用這種方案的患者免受骨髓抑制的影響，并且可以完 成治療且活得更久。
[0014] 在另一個實施方案中，本發(fā)明提供通過施用小RNA片段制劑用于患有ITP的患者 的治療。所述小RNA片段制劑刺激血小板產(chǎn)生，由此改善與該病相關(guān)的癥狀。施用RNA片 段的患有ITP的個體在他們的血小板計數(shù)中表現(xiàn)出顯著提高，不再處于流血的危險中，并 且經(jīng)歷更好的生活質(zhì)量。
[0015] 附圖簡述
[0016] 圖1舉例說明在不接受ReaLBuild?產(chǎn)品作為他們的治療成分的典型患者中血 小板恢復(fù)的發(fā)展性失敗。
[0017] 圖2顯示關(guān)于血小板受到施用ReaLBuild?產(chǎn)品保護(hù)的患者的結(jié)果。
[0018] 圖3顯示在已經(jīng)經(jīng)歷了 6次在先化療的患者中ReaLBuild?產(chǎn)品對血小板的保 護(hù)作用。
[0019] 圖4顯示關(guān)于經(jīng)歷包括施用ReaLBuild?產(chǎn)品的化療方案的患者的結(jié)果。
[0020] 圖5顯示關(guān)于經(jīng)歷包括施用ReaLBuild?產(chǎn)品的化療方案的患者的結(jié)果。
[0021] 圖6顯示關(guān)于經(jīng)歷包括施用ReaLBuild?產(chǎn)品的化療方案的患者的結(jié)果。
[0022] 圖7顯示關(guān)于使ReaLBuild?產(chǎn)品劑量與對血小板最低點和恢復(fù)水平的作用相 關(guān)聯(lián)的臨床試驗（實施例1所述）中的所有患者的結(jié)果總結(jié)。
[0023] 圖8顯示關(guān)于3名患有ITP的患者在施用ReaLBuild?產(chǎn)品之前和之后的結(jié)果。 [0024] 發(fā)明詳述
[0025] 本發(fā)明提供基于施用小RNA片段的治療性治療，其預(yù)防或改善血小板減少癥。
[0026] "血小板減少癥"意指以血小板產(chǎn)生和處理缺陷為特征的病癥，并且包括由抗癌藥 引發(fā)的血小板減少癥和先天性血小板減少癥如ITP。
[0027] "治療（treating) "或"治療（treatment) "意指預(yù)防或減少疾病或病癥發(fā)生的危 險，或抑制或改善疾病或病癥的癥狀，或加速疾病或病癥的恢復(fù)。
[0028] 已知化學(xué)治療通常引起大量的骨髓抑制和血小板減少癥。本發(fā)明提供一種新的化 療方案，其在施用抗癌藥之前、之中和/或之后引入小RNA片段的施用，其具有控制骨髓抑 制的結(jié)果，可以全效完成所述治療，并且延長患者的生命。在關(guān)于正在經(jīng)歷通常引起大量骨 髓抑制和血小板減少癥的化療的癌癥患者的人類臨床試驗中證實了該方案的成功。所有患 者在沒有藥物的任何劑量減少的條件下完成了治療的全過程。發(fā)現(xiàn)該方案甚至在已經(jīng)經(jīng)歷 了多次先前化療治療并經(jīng)受骨髓損傷的患者中有效預(yù)防血小板減少癥。本發(fā)明人首次證明 了施用小RNA片段在化療中具有廣泛的應(yīng)用，并且可以在患有一定范圍的癌癥和經(jīng)歷多種 抗癌藥或藥物組合治療的患者中有效控制和/或預(yù)防骨髓抑制和血小板減少癥。
[0029] 另外，本發(fā)明人已經(jīng)證明施用小RNA片段成功地增加了患有ITP的患者中的血小 板計數(shù)。
[0030] 不希望受到任何具體的理論的束縛，據(jù)信所述小RNA片段起到骨髓干細(xì)胞中DNA 合成引物的作用。通過這種作用，所述小RNA片段刺激多種白血細(xì)胞譜系的增殖，由此維持 和/或恢復(fù)淋巴細(xì)胞和血小板（凝血細(xì)胞）的正常水平。備選地或另外地，干細(xì)胞吸收的 RNAs可能被RNA酶降解，并且所得到的核糖核苷通過核糖核苷酸還原酶轉(zhuǎn)化為脫氧核糖核 苷，由此富集修復(fù)被抗癌藥損傷的基因組DNA的細(xì)胞資源。在對動物施用后關(guān)于RNA片段 的定位（localization)分析揭示所述片段在骨髓以及在肝臟、腎上腺、和其它幾種器官中 迅速濃縮。在骨髓中的定位與所述RNA片段刺激多種白血細(xì)胞譜系的增殖的觀點一致。此 外，所述RNAs在腎上腺中的定位表明所述RNAs保護(hù)和/或刺激這些腺體，其可以導(dǎo)致激素 (例如腎上腺素）釋放，所述激素增加活力并且還可以刺激免疫系統(tǒng)。這樣的刺激將解釋在 臨床試驗中許多患者所經(jīng)歷的生命力的增強(qiáng)。
[0031] 基于本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供基于施用小RNA片段預(yù)防或改善血小板減少癥的 治療性治療。
[0032] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種化療方案，其包括對癌癥患者施用小RNA片 段制劑和抗癌藥。
[0033] 在另一個實施方案中，本發(fā)明提供通過對癌癥患者施用小RNA片段制劑而在經(jīng)歷 使用抗癌藥的化療的癌癥患者中預(yù)防骨髓抑制或血小板減少癥的方法。
[0034] 在另一個實施方案中，本發(fā)明提供用于在經(jīng)歷使用抗癌藥的化療的癌癥患者中加 速血小板再生的方法，其通過向所述癌癥患者施用小RNA片段制劑而進(jìn)行。血小板，還稱為 凝血細(xì)胞，是在血液中循環(huán)并且能夠形成血液凝