黃連素在制備治療b細胞淋巴瘤的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及黃連素的一種新用途，具體地說，涉及黃連素在制備治療B細胞淋巴 瘤的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃連素（berberine，C2tlH18ClNO 4)是一種古老的中藥，能對抗多種病原微生物，臨床 上主要用于治療細菌性痢疾及腸胃炎?，F(xiàn)在越來越多的研宄表明，黃連素對免疫系統(tǒng)、心血 管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等方面的疾病可以起到不同程度的改善作用，例如，相關(guān)研宄報道黃連素 具有抗心律失常、降低血壓、正性肌力、保護缺血性腦損傷、降血糖、抗炎、抑制血小板聚集、 抗?jié)?、解熱等作用。由于黃連素還具備毒副作用輕、可長期使用的優(yōu)勢，提示其具有廣闊 的臨床應(yīng)用前景。
[0003] B細胞淋巴瘤是B細胞發(fā)生的實體腫瘤，其分型眾多，包含彌漫性大B細胞淋巴瘤 (diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)和 Burkitt 淋巴瘤。DLBCL 和 Burkitt 淋巴瘤 均屬于侵襲性淋巴瘤且易復(fù)發(fā)，其中DLBCL是最常見的多發(fā)淋巴瘤。
[0004] 目前關(guān)于黃連素在治療B細胞淋巴瘤，尤其是DLBCL和Burkitt淋巴瘤方面的作 用還未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供黃連素的新用途，以拓展黃連素的應(yīng)用范圍。
[0006] 本發(fā)明提供了黃連素在制備治療B細胞淋巴瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0007] 作為本發(fā)明的一個優(yōu)選例，所述的B細胞淋巴瘤是彌漫性大B細胞淋巴瘤或 Burkitt淋巴瘤。
[0008] 本發(fā)明提供了黃連素在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于抑制動物體內(nèi)B細胞 淋巴瘤的生長。
[0009] 本發(fā)明提供了黃連素在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于抑制動物體內(nèi)B細胞 淋巴瘤體積的增大。
[0010] 本發(fā)明還提供了黃連素在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物用于抑制B細胞淋巴瘤 細胞株的增殖。
[0011] 作為本發(fā)明的一個優(yōu)選例，所述的B細胞淋巴瘤細胞株是人Burkitt淋巴瘤細胞 株Raji、人Burkitt淋巴瘤細胞株Namalwa或DLBCL淋巴瘤細胞株SU-DHL-4。
[0012] 本發(fā)明優(yōu)點在于：
[0013] 1、提供了黃連素在制備治療B細胞淋巴瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過實驗證 實了黃連素有抑制B淋巴瘤細胞株增殖及荷瘤小鼠淋巴瘤生長的作用，且抑制作用十分顯 著，提示黃連素可作為治療B細胞淋巴瘤的有效藥物，且其藥物安全性已經(jīng)受到了長期的 驗證，因此本發(fā)明為臨床B細胞淋巴瘤的治療提供了一種新的方案。
[0014] 2、提供了黃連素用于制備抑制動物體內(nèi)B細胞淋巴瘤生長的藥物中的應(yīng)用，尤其 是抑制動物體內(nèi)B細胞淋巴瘤體積的增大。
[0015] 3、提供了黃連素在制備抑制B細胞淋巴瘤細胞株增殖的藥物中的應(yīng)用，可用于B 細胞淋巴瘤細胞株的篩選和耐藥性等研宄。
【附圖說明】
[0016] 圖I. Berberine抑制小鼠移植腫瘤的腫瘤生長曲線。
【具體實施方式】
[0017] 下面對本發(fā)明提供的【具體實施方式】作詳細說明。
[0018] 1、材料和方法
[0019] I. 1 試劑
[0020] Berberine 購自 Sigma-Aldrich 公司。
[0021] 1.2細胞培養(yǎng)
[0022] 人Burkitt淋巴瘤細胞株Raji和Namalwa，DLBCL淋巴瘤細胞株SU-DHL-4均購自 美國標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心（American Type Culture Collection)，以3X105/ml密度接種 于10 %熱滅火胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，置37 °C、5 % CO2，95 %濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 每48h換液，試驗采用對數(shù)生長期細胞。
[0023] L 3細胞增殖毒性檢測
[0024] 將密度為3 X IO5Ail的對數(shù)生長期細胞懸液接種于96孔板中。Berberine終濃 度分別設(shè)置為1，5,10,50,100 y M處理細胞，設(shè)置不加藥空白組，每個藥物濃度設(shè)置三組 復(fù)孔。48h后每孔加入20yl MTT(5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，2000rpm離心5min，棄上清。 每孔加入200 yl DMSO使結(jié)晶充分溶解。酶標(biāo)儀測定在490nm波長下吸光光度值。計算 Berberine處理細胞的增殖抑制率：生長抑制率=(1 一藥物處理組吸光度值/對照組吸光 度值）X 100%。
[0025] 1. 4淋巴瘤小鼠模型的建立
[0026] 4周齡雌性BALB/c裸鼠購買自上海實驗動物中心，飼養(yǎng)于屏障設(shè)施動物層流室， 飼養(yǎng)條件為：溫度24~26°C，相對濕度40~60%。室內(nèi)采用人工照明，自由采食，飼料和 水均經(jīng)高溫消毒處理。每只裸鼠的右側(cè)肩部皮下接種5X IO6Namalwa細胞，接種細胞后每兩 天觀察腫瘤生長情況，約10天左右在注射部位可見腫瘤形成。根據(jù)實驗設(shè)計將荷瘤小鼠進 行隨機分組，分為兩組即對照組和berberine治療組，其中對照組注射相同量的生理鹽水， berberine治療組腹腔注射相同量的berberine，劑量為10mg/kg/2day。所有小鼠均觀察 21天，腫瘤的體積計算公式為V = 0. 5ab2。
[0027] 2、結(jié)果
[0028] 2. I Berberine顯著抑制淋巴瘤細胞增殖
[0029] 用MTT法分別檢測不同濃度berberine (1，5,10, 50,100 y M)單藥對Burkitt淋巴 瘤細胞株Raji和Namalwa，DLBCL淋巴瘤細胞株SU-DHL-4的作用，結(jié)果提示隨著藥物濃度 增加，berberine對以上淋巴瘤細胞株增殖的抑制作用逐漸增強。
[0030]表1 Berberine對淋巴瘤細胞株的抑制率
[0031]
【主權(quán)項】
1. 黃連素在制備治療B細胞淋巴瘤的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的B細胞淋巴瘤是彌漫性大B細胞淋 巴瘤或Burkitt淋巴瘤。
3. 黃連素在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物用于抑制動物體內(nèi)B細胞淋 巴瘤的生長。
4. 黃連素在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物用于抑制動物體內(nèi)B細胞淋 巴瘤體積的增大。
5. 黃連素在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物用于抑制B細胞淋巴瘤細胞 株的增殖。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的B細胞淋巴瘤細胞株是人Burkitt 淋巴瘤細胞株Raji、人Burkitt淋巴瘤細胞株Namalwa或DLBCL淋巴瘤細胞株SU-DHL-4。
【專利摘要】本發(fā)明涉及黃連素在制備治療B細胞淋巴瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明應(yīng)用三種B細胞淋巴瘤細胞株進行體外實驗，另外建立了B細胞淋巴瘤小鼠模型并進行了體內(nèi)實驗，證實了黃連素有抑制B淋巴瘤細胞株增殖及荷瘤小鼠淋巴瘤生長的作用，且抑制作用十分顯著，提示黃連素可作為治療B細胞淋巴瘤的有效藥物，且其藥物安全性已經(jīng)受到了長期的驗證，因此本發(fā)明為臨床B細胞淋巴瘤的治療提供了一種新的方案。
【IPC分類】A61P35-00, A61K31-4375
【公開號】CN104739831
【申請?zhí)枴緾N201510167823
【發(fā)明人】趙維蒞, 王黎, 鄭重, 薛雯, 張翼飛, 寧光
【申請人】上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2015年4月10日